相關(guān)申請(qǐng)根據(jù)35u.s.c.§119(e)，本申請(qǐng)要求于2012年8月29日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)第61/694,679號(hào)的優(yōu)先權(quán)，所述臨時(shí)申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容以引用的方式明確納入本文。本申請(qǐng)涉及藥物化學(xué)、生物化學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。一方面涉及使用降氨療法治療和/或預(yù)防與肝星狀細(xì)胞(hsc)激活相關(guān)的疾病。
背景技術(shù)：
：：肝星狀細(xì)胞(hsc)是肝的竇周間隙中存在的周細(xì)胞。在肝內(nèi)，星狀細(xì)胞在維持肝的結(jié)構(gòu)完整性方面發(fā)揮重要作用并且參與纖維化和肝癌發(fā)展。在正常肝中，肝星狀細(xì)胞處于休眠狀態(tài)。當(dāng)肝受到損傷時(shí)，hsc可變?yōu)榧せ顮顟B(tài)。激活的星狀細(xì)胞以增殖、收縮性和趨化性為特征。hsc的激活可導(dǎo)致多種疾病，例如非酒精性脂肪肝病(nafld)、纖維化病癥和肝癌。根據(jù)癥狀的嚴(yán)重性，目前可獲得多種用于與hsc激活相關(guān)的疾病的預(yù)防、治療和管理策略。需要用于治療或預(yù)防那些疾病的其他療法。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本文公開的一些實(shí)施方案提供了治療與肝星狀細(xì)胞(hsc)激活相關(guān)的疾病的方法，其中所述方法包括對(duì)需要其的受試者進(jìn)行降氨療法。還公開了延遲與hsc激活相關(guān)的疾病的發(fā)生或進(jìn)展的方法，其中所述方法包括對(duì)需要其的受試者進(jìn)行降氨療法。在一些實(shí)施方案中，進(jìn)行降氨療法包括將降氨劑給予受試者。在一些實(shí)施方案中，所述與hsc激活相關(guān)的疾病是非酒精性脂肪肝病(nafld)。例如，nafld可以是非酒精性脂肪性肝炎(nash)或脂肪變性。在一些實(shí)施方案中，所述與hsc激活相關(guān)的疾病是肝癌。在一些實(shí)施方案中，所述與hsc激活相關(guān)的疾病是纖維化病癥。例如，所述纖維化病癥可以是肝纖維化。在一些實(shí)施方案中，所述受試者患有非酒精性脂肪肝病(nafld)。一些實(shí)施方案提供了預(yù)防非酒精性脂肪肝病(nafld)的方法，其中所述方法包括對(duì)需要其的受試者進(jìn)行降氨療法。例如，nafld可以是非酒精性脂肪性肝炎(nash)或脂肪變性。在一些實(shí)施方案中，進(jìn)行降氨療法包括將降氨劑給予受試者。在一些實(shí)施方案中，所述降氨劑是或包括磷酸鎂產(chǎn)品(mgp)、苯丁酸甘油酯(gpb)、苯乙酸鈉、苯丁酸鈉(napba)、谷氨酰胺、苯甲酸鈉、l-阿拉伯糖、輕瀉藥、抗生素、鳥氨酸與苯乙酸鹽和苯丁酸鹽中至少一種的組合，或它們的任何組合。在一些實(shí)施方案中，所述降氨劑是或包括鳥氨酸與苯乙酸鹽和苯丁酸鹽中至少一種的組合。在本文公開的方法中，在一些實(shí)施方案中，將單獨(dú)的鳥氨酸的藥學(xué)上可接受的鹽與苯乙酸鹽和苯丁酸鹽中的至少一種給予受試者。在一些實(shí)施方案中，將苯乙酸鹽和苯丁酸鹽中的至少一種作為苯乙酸鈉或苯丁酸鈉而給藥。在一些實(shí)施方案中，將鳥氨酸作為游離單體氨基酸或其生理學(xué)上可接受的鹽而給藥。在一些實(shí)施方案中，將鳥氨酸和苯乙酸鹽作為鳥氨酸苯乙酸鹽而給藥。在一些實(shí)施方案中，所述給藥是口服、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、胃內(nèi)或血管內(nèi)給藥。在一些實(shí)施方案中，所述給藥是靜脈內(nèi)給藥。在一些實(shí)施方案中，所述給藥是口服給藥。附圖說(shuō)明圖1a-c示出了氨以劑量依賴的方式降低體外原代人肝星狀細(xì)胞的細(xì)胞增殖和代謝。圖1a示出了氨抑制dna合成(brdu)和代謝活性(mts)，圖1b顯示實(shí)現(xiàn)了抑制，而不會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。圖1c示出了氨以劑量依賴的方式誘導(dǎo)明顯的形態(tài)學(xué)改變，即從肌成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞變?yōu)榧忓N狀成纖維細(xì)胞，如通過(guò)光學(xué)顯微鏡和通過(guò)中性紅細(xì)胞活力測(cè)試(20×，40×)觀察到的。柱狀圖示出了三個(gè)獨(dú)立值的平均值±sd。相對(duì)于無(wú)血清培養(yǎng)基(sfm)的對(duì)應(yīng)值，＊p＜0.05、＊＊p＜0.01和＊＊＊p＜0.001。圖2a-f示出了氨誘導(dǎo)細(xì)胞質(zhì)應(yīng)激的改變，這與細(xì)胞代謝/功能、收縮和肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)的改變一致。圖2a是透射電子顯微鏡(tem)圖像，顯示氨以劑量依賴的方式引起了的明顯的形態(tài)學(xué)改變，出現(xiàn)了細(xì)胞質(zhì)液泡(v＝液泡；n＝核)。圖2b示出了富含氨的培養(yǎng)基耗盡之后細(xì)胞增殖的恢復(fù)。柱狀圖示出了三個(gè)獨(dú)立值的平均值±sd。相對(duì)于sfm，＊p＜0.05和＊＊＊p＜0.001。圖2c和2d描繪了膠原凝膠收縮試驗(yàn)的結(jié)果，表明氨誘導(dǎo)hhsc收縮。柱狀圖示出了2個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值(值±sd)。相對(duì)于sfm的對(duì)應(yīng)值，＊p＜0.05和＊＊p＜0.01。圖2e示出了氨誘導(dǎo)的hsc收縮與形態(tài)學(xué)的改變一致。圖2f示出了氨的長(zhǎng)時(shí)間處理(72h)以劑量依賴的方式誘導(dǎo)絲狀肌動(dòng)蛋白的再組織(re-organization)(tritc-鬼筆環(huán)肽染色)。圖3a-c示出了氨誘導(dǎo)ros產(chǎn)生。圖3a示出了采用氨長(zhǎng)時(shí)間處理hhsc72小時(shí)在hhsc內(nèi)誘導(dǎo)ros產(chǎn)生。使用image-ittmlive綠色活性氧檢測(cè)試劑盒測(cè)量活性氧(ros)的形成。在圖3b中，根據(jù)細(xì)胞數(shù)目，對(duì)ros信號(hào)的平均熒光強(qiáng)度(mfi)進(jìn)行歸一化(hoechst33342)，并以對(duì)照的百分比表示。柱狀圖示出了三個(gè)獨(dú)立值的平均值±sd。相對(duì)于sfm的對(duì)應(yīng)值，＊＊＊p＜0.001。圖3c示出了高血氨在3和24小時(shí)時(shí)增加ros標(biāo)記物sod2的mrna的表達(dá)水平。柱狀圖示出了2個(gè)獨(dú)立值的平均值±sd。相對(duì)于sfm的對(duì)應(yīng)值，＊＊＊p＜0.001。圖3d示出了nac誘導(dǎo)的ros清除劑在24小時(shí)時(shí)降低氨誘導(dǎo)的sod2mrna表達(dá)。柱狀圖示出了2個(gè)獨(dú)立值的平均值±sd。相對(duì)于sfm的對(duì)應(yīng)值，＊p＜0.05、＊＊p＜0.01。圖4a-c示出了氨改變?nèi)舾煞N促炎標(biāo)記物和hsc激活標(biāo)記物的mrna表達(dá)和蛋白水平。圖4a示出了氨影響α-sma、波形蛋白、pdgf-rβ、肌球蛋白iia和iib、及p-38mapk的蛋白表達(dá)。圖4b示出了氨誘導(dǎo)mmp2mrna的上調(diào)，而timp1mrna被下調(diào)。圖4c示出了白介素1β和白介素il6的mrna表達(dá)被上調(diào)。柱狀圖示出了三個(gè)獨(dú)立值的平均值±sd。相對(duì)于sfm的對(duì)應(yīng)值，＊p＜0.05、＊＊p＜0.01和＊＊＊p＜0.001。圖5a-b示出了高血氨處理在體內(nèi)進(jìn)一步增加bdl誘導(dǎo)的hsc標(biāo)記物。圖5a示出了相比于假手術(shù)的大鼠，bdl動(dòng)物和aa飼喂的bdl動(dòng)物中氨的血漿水平顯著上調(diào)(相對(duì)于假手術(shù)的大鼠，＊p＜0.05和＊＊p＜0.01)。與bdl動(dòng)物相比，op處理在bdl-aa飼喂的動(dòng)物中顯著降低氨(＊＊p＜0.01)。圖5b示出了與bdl誘導(dǎo)的纖維化相比，對(duì)bdl誘導(dǎo)的纖維化進(jìn)行高血氨處理顯示肌球蛋白iib、i型膠原蛋白和pdgf-rβ蛋白表達(dá)的額外的顯著增加(＊＊p＜0.01和＊＊＊p＜0.001)。相反，采用op的處理消除了aa-飼喂的bdl對(duì)所有hsc相關(guān)的激活標(biāo)記物的強(qiáng)烈作用(＊p＜0.05、＊＊p＜0.01和＊＊＊p＜0.001)。圖6示出了用正常及高脂肪高膽固醇飲食飼喂10個(gè)月并恢復(fù)2個(gè)月的大鼠中的鳥氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶(otc)蛋白和基因的表達(dá)。圖7示出了采用缺乏甲硫氨酸-膽堿的飲食(mcd)飼喂4周并用或不用碳處理的小鼠中的otc基因表達(dá)。圖8示出了減肥手術(shù)期間患有單純的脂肪變性或nash+纖維化的nafld人患者中的otc基因表達(dá)。具體實(shí)施方式在以下詳細(xì)描述中，參考形成本文的一部分的附圖。在詳細(xì)描述中所描述的示例性實(shí)施方案、圖及權(quán)利要求并不意圖進(jìn)行限制?？墒褂闷渌麑?shí)施方案，并作出其他改變，而不脫離本文所呈現(xiàn)的主題的精神或范圍。易于理解的是，本公開內(nèi)容的方面，如本文通常所述的，可在廣泛的各種不同配置中被排列、替換、合并及設(shè)計(jì)，所有這些均被明確地考慮并構(gòu)成本公開內(nèi)容的一部分。定義本文使用的“受試者”是指作為治療、觀察或?qū)嶒?yàn)的目標(biāo)的動(dòng)物。“動(dòng)物”包括冷血和溫血脊椎動(dòng)物及無(wú)脊椎動(dòng)物如魚、貝、爬行動(dòng)物，特別是哺乳動(dòng)物。“哺乳動(dòng)物”包括但不限于小鼠；大鼠；兔；豚鼠；犬；貓；綿羊；山羊；牛；馬；靈長(zhǎng)類，如猴子、黑猩猩和猿，特別是人。本文使用的“患者”是指由醫(yī)學(xué)專業(yè)人員如醫(yī)師(即對(duì)抗醫(yī)學(xué)的醫(yī)生或骨科醫(yī)學(xué)的醫(yī)生)或獸醫(yī)學(xué)的醫(yī)生對(duì)其進(jìn)行治療以試圖治愈或至少減輕特定疾病或病癥的影響或首先預(yù)防所述疾病或病癥發(fā)生的受試者。本文使用的“給藥”或“給予”是指向脊椎動(dòng)物給予一定劑量的藥物活性成分的方法。本文使用的“單位劑量”是指以單一劑量給予患者的治療劑的量。本文使用的“日劑量”是指一天中給予患者的治療劑的總量。本文使用的“治療有效量”或“藥學(xué)有效量”是指具有治療作用的治療劑的量。在治療中有用的藥物活性成分的劑量是治療有效量。因此，本文使用的治療有效量意指通過(guò)臨床試驗(yàn)結(jié)果和/或模型動(dòng)物研究所判斷的產(chǎn)生所需治療作用的治療劑的那些量。本文使用的“治療作用”在一定程度上減輕疾病或病癥的一種或更多種癥狀。例如，治療作用可通過(guò)受試者告知的主觀不適減輕(例如在自填的患者調(diào)查問(wèn)卷中記載的減輕的不適)而觀察到。本文使用的“治療”是指以預(yù)防和/或治療為目的而給予受試者化合物或藥物組合物。術(shù)語(yǔ)“預(yù)防性治療”是指治療尚未顯示出疾病或病癥的癥狀但易患或處于患特定疾病或病癥的風(fēng)險(xiǎn)中的受試者，由此所述治療降低患者發(fā)展所述疾病或病癥的可能性。術(shù)語(yǔ)“治療性治療”是指向已經(jīng)患有疾病或病癥的受試者給予治療。縮寫bdl＝膽管結(jié)扎op＝鳥氨酸、苯乙酸鹽otc＝鳥氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶gs＝谷氨酰胺合成酶hsc＝肝星狀細(xì)胞降氨療法本文公開了可用于降低受試者中的氨水平的各種降氨療法。例如，可在所述療法中使用一種或更多種降氨劑來(lái)降低受試者中的氨水平。本文使用的術(shù)語(yǔ)“降氨劑”是指可用于降低受試者中的氨水平的物質(zhì)。降氨劑降低氨水平的機(jī)制可有多種。例如，降氨劑可通過(guò)降低受試者中氨的產(chǎn)生、或通過(guò)吸收受試者中的氨、或?qū)币虢Y(jié)腸并通過(guò)輕瀉作用去除氨，或它們的任何組合來(lái)降低受試者中的氨水平。在一些實(shí)施方案中，受試者中的氨水平可以是受試者的血液(例如血漿)中的氨的水平。在一些實(shí)施方案中，所述降氨療法包括給予受試者一種或更多種降氨劑。降氨劑的非限制性實(shí)例包括磷酸鎂產(chǎn)品(mgp)、苯丁酸甘油酯(gpb)、苯乙酸鈉、苯丁酸鈉(napba)、谷氨酰胺、苯甲酸鈉、葉綠素、l-阿拉伯糖、輕瀉藥、抗生素、鳥氨酸與苯乙酸鹽和苯丁酸鹽中至少一種的組合，或它們的任何組合。降氨劑可存在于例如藥物組合物、營(yíng)養(yǎng)組合物、益生素組合物，或它們的任何組合物中。輕瀉藥是能夠使糞便通暢并增進(jìn)腸蠕動(dòng)的物質(zhì)。輕瀉藥可用于降低受試者胃腸道中的氨水平，例如通過(guò)改變受試者胃腸道中的細(xì)菌群落并使得幾乎不存在產(chǎn)生氨的生物體。輕瀉藥的實(shí)例包括但不限于乳果糖。降氨劑可以是或包括一種或更多種抗生素。例如，降氨劑可通過(guò)口服途徑給藥以允許抗生素在胃腸道中發(fā)揮作用。不受任何特定理論的束縛，認(rèn)為抗生素能夠減少腸內(nèi)的產(chǎn)氨細(xì)菌以降低受試者中的氨水平?？股氐姆窍拗菩詫?shí)例包括新霉素、萬(wàn)古霉素和利福昔明(xifaxan)。在一些實(shí)施方案中，組合使用不同的降氨劑以降低受試者中的氨水平。例如，可將一種或更多種輕瀉藥及一種或更多種抗生素給予患者以降低受試者中的氨水平。作為另一個(gè)非限制性實(shí)例，降氨療法可以是或包括調(diào)節(jié)受試者中的腸道菌群的組成。在一些實(shí)施方案中，調(diào)節(jié)受試者的腸道菌群的組成包括細(xì)菌移植，例如排泄物移植。在一些實(shí)施方案中，調(diào)節(jié)受試者中的腸道菌群的組成包括增加受試者的腸道菌群中缺乏或具有低脲酶活性的一種或更多種細(xì)菌菌種的水平。在一些實(shí)施方案中，調(diào)節(jié)受試者中的腸道菌群的組成包括采用具有高水平的一種或更多種缺乏或具有低脲酶活性的細(xì)菌菌種的組合物替代受試者的天然腸道菌群。在一些實(shí)施方案中，調(diào)節(jié)受試者中的腸道菌群的組成包括給予受試者一種包含一種或更多種缺乏或具有低脲酶活性的細(xì)菌菌種的組合物。缺乏或具有低脲酶活性的細(xì)菌的實(shí)例包括但不限于parabacteroides、毛螺菌科(lachnospiraceae)、瘤胃菌科(ruminococcaceae)、真細(xì)菌屬(eubacterium)、mucispirillum、乳桿菌屬(lactobacillus)和梭菌屬(clostridium)。在一些實(shí)施方案中，缺乏或具有較低脲酶活性的細(xì)菌是梭狀芽胞桿菌(clostridia)、mucispirillumschaedleri、parabacteroides、乳酸桿菌，或它們的任何組合。在一些實(shí)施方案中，降氨療法包括將schaedlerflora(asf)——由8種于20世紀(jì)70年代被組裝并于1978年被美國(guó)國(guó)家癌癥研究所標(biāo)準(zhǔn)化的鼠科腸道共生細(xì)菌菌株(dewhirstetal.，appl.environmicrobiol.1999；65(8)：3287-3292)組成——移植到受試者中。不受任何特定理論的限制，認(rèn)為細(xì)菌的脲酶將來(lái)自宿主的尿素轉(zhuǎn)化為氨和二氧化碳，造成高血氨癥，沒有脲酶活性或具有降低的脲酶活性的腸道菌群能夠降低氨產(chǎn)生并因此降低受試者中的氨水平。此外，降氨療法可以是或包括基因療法，以糾正造成受試者中的高血氨癥的基因缺陷。例如，高血氨癥可由編碼參與尿素循環(huán)的酶的基因中的缺陷引起，所述基因包括但不限于鳥氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶(otc)基因、氨甲酰磷酸合成酶(cps1)基因、精氨琥珀酸合成酶(aas)、精氨琥珀酸裂解酶(asl)和精氨酸酶(ag)。高血氨癥也可由胱硫醚β-合成酶(cbs)基因和谷氨酰胺合成酶基因中的缺陷引起。基因療法可通過(guò)本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行。例如，重組病毒載體(例如腺相關(guān)病毒載體和桿狀病毒載體)可用于將丟失的基因遞送(例如靶向遞送至干細(xì)胞)至受試者以降低受試者中的氨水平。例如參見torres-vegaetal.genetherapy(2015)22，58-64(其全部?jī)?nèi)容以引用的方式納入本文)。在一些實(shí)施方案中，將包含完整的otc基因的aav載體給予需要其的受試者以降低受試者中的氨水平。在一些實(shí)施方案中，將包含完整的谷氨酰胺合成酶基因的aav載體給予需要其的受試者以降低受試者中的氨水平。與hsc激活相關(guān)的疾病的治療和預(yù)防肝星狀細(xì)胞(hsc)是肝特有的間充質(zhì)細(xì)胞，其在肝生理機(jī)能和纖維發(fā)生中以及在維持肝的結(jié)構(gòu)完整性方面發(fā)揮重要作用。hsc通常位于竇周間隙內(nèi)并維持與肝竇內(nèi)皮細(xì)胞和肝上皮細(xì)胞的緊密相互作用。hsc在肝中協(xié)調(diào)許多重要功能并且它們的功能紊亂與多種病理病癥相關(guān)。hsc可以在肝發(fā)育和再生過(guò)程中影響其他肝細(xì)胞類型的分化、增殖和形態(tài)發(fā)生。在正常肝中，hsc處于休眠狀態(tài)。當(dāng)肝受到損傷時(shí)，hsc可變?yōu)榧せ顮顟B(tài)。例如，隨著急性或慢性肝損傷，hsc經(jīng)歷從“休眠的”(非增殖性及非收縮性)向“激活的”(促有絲分裂型、促纖維發(fā)生性和促炎性肌成纖維細(xì)胞樣)細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)變。此外，在激活的過(guò)程中，hsc變得高度收縮并具有必要的機(jī)制來(lái)收縮或松弛以響應(yīng)許多血管活性物質(zhì)/刺激物。激活的hsc可產(chǎn)生多種細(xì)胞因子和趨化因子，它們可直接增強(qiáng)肝祖細(xì)胞和肝細(xì)胞的增殖。hsc參與例如纖維化和肝癌發(fā)展。hsc激活可導(dǎo)致多種疾病、病癥和癥狀，包括但不限于非酒精性脂肪肝病(nafld)、纖維化病癥(例如肝纖維化)、肝癌，及它們的任何組合。肝癌的非限制性實(shí)例包括肝細(xì)胞性肝癌(hcc)和肝母細(xì)胞瘤。在一些實(shí)施方案中，治療和/或預(yù)防與hsc激活相關(guān)的疾病的方法包括鑒定患有或有發(fā)展為與hsc激活相關(guān)的疾病的風(fēng)險(xiǎn)的受試者。在一些實(shí)施方案中，所述與hsc激活相關(guān)的疾病可以是nafld、肝纖維化、肝癌，或它們的任何組合。nafld是指一組病癥，其中在很少飲酒或不飲酒的人的肝中有過(guò)量脂肪的積累。nfald是發(fā)達(dá)國(guó)家中常見的肝病。nafld的最常見形式是稱為脂肪肝的非嚴(yán)重的病癥。當(dāng)脂肪在肝中沉積(脂肪變性)時(shí)，發(fā)生nafld。盡管肝中存在脂肪不是正常的，但其本身可能不會(huì)損害肝。nafld是纖維化的常見原因。有時(shí)懷疑在血常規(guī)測(cè)試過(guò)程中發(fā)現(xiàn)或在放射學(xué)檢查如腹部超聲或ct掃描上偶然檢測(cè)到在肝測(cè)試中有輕微的升高的超重或肥胖的人患有nafld。非酒精性脂肪性肝炎(nash)是nafld的更嚴(yán)重的形式。在nash中，脂肪積累與肝細(xì)胞炎癥和不同程度的瘢痕形成有關(guān)。nash是潛在的嚴(yán)重病癥，它可導(dǎo)致嚴(yán)重的肝瘢痕形成和肝硬化。不受任何特定理論的束縛，認(rèn)為nash與人和嚙齒動(dòng)物中降低的鳥氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶(otc，也稱為鳥氨酸氨甲?；D(zhuǎn)移酶)的表達(dá)和功能有關(guān)。例如，在實(shí)驗(yàn)性nash中，線粒體尿素循環(huán)酶鳥氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶(otc)的基因和蛋白表達(dá)被顯著降低，導(dǎo)致體內(nèi)尿素生成能力的功能降低，這導(dǎo)致高血氨癥。在經(jīng)活組織檢查證明患有nash的患者中，血漿氨水平比在患有單純的脂肪變性的患者中增加得更加顯著。在哺乳動(dòng)物中，otc酶是尿素循環(huán)的一部分。在缺乏otc的哺乳動(dòng)物中，氨水平會(huì)升高，這可導(dǎo)致高血氨癥和隨后的神經(jīng)問(wèn)題。本公開內(nèi)容首次公開了在人hsc中以及在結(jié)扎了膽管的大鼠體內(nèi)，氨產(chǎn)生顯著的形態(tài)學(xué)和功能改變(例如氧化應(yīng)激、增加的細(xì)胞因子、激活標(biāo)記物的表達(dá)、基質(zhì)蛋白分泌的改變及嚴(yán)重的形態(tài)學(xué)破壞)。不受任何特定理論的束縛，認(rèn)為高血氨可在體內(nèi)和體外激活hsc，這可能有利于nafld(例如nash)和纖維化的進(jìn)展。如本文所述的，受試者中氨水平的降低能夠防止受試者中hsc的激活并減輕例如與hsc激活相關(guān)的疾病。本文所述的一些實(shí)施方案提供了通過(guò)對(duì)有需要的受試者進(jìn)行降氨療法來(lái)治療所述受試者中與hsc激活相關(guān)的疾病的方法。本文所述的一些實(shí)施方案提供了通過(guò)對(duì)有需要的受試者進(jìn)行降氨療法來(lái)延遲受試者中與hsc激活相關(guān)的疾病的發(fā)生或進(jìn)展的方法。在一些實(shí)施方案中，進(jìn)行降氨療法包括給予受試者降氨劑。在一些實(shí)施方案中，降氨劑是或包括磷酸鎂產(chǎn)品(mgp)、苯丁酸甘油酯(gpb)、苯乙酸鈉、苯丁酸鈉(napba)、谷氨酰胺、苯甲酸鈉、l-阿拉伯糖、輕瀉藥、抗生素、鳥氨酸與苯乙酸鹽和苯丁酸鹽中至少一種的組合，或它們的任何組合。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括將鳥氨酸與苯乙酸鹽和/或苯丁酸鹽的組合共同給予受試者。在一些實(shí)施方案中，與hsc激活相關(guān)的疾病是nafld，例如nash或脂肪變性。在一些實(shí)施方案中，與hsc激活相關(guān)的疾病是肝癌，例如hcc或肝母細(xì)胞瘤。在一些實(shí)施方案中，與hsc激活相關(guān)的疾病是纖維化病癥，例如肝纖維化。在一些實(shí)施方案中，患有肝癌和/或纖維化病癥的患者也可能患有nafld。在一些實(shí)施方案中，將兩種或更多種降氨劑共同給予受試者。在一些實(shí)施方案中，將一種或更多種降氨劑與另一種藥物活性成分共同給予受試者。在一些實(shí)施方案中，調(diào)節(jié)受試者中腸道菌群的組成以治療與hsc激活相關(guān)的疾病。在一些實(shí)施方案中，基因療法被用作降氨療法以治療與hsc激活相關(guān)的疾病。本文還公開了通過(guò)對(duì)需要其的受試者進(jìn)行降氨療法來(lái)預(yù)防nafld的方法。在一些實(shí)施方案中，進(jìn)行降氨療法包括給予受試者降氨劑。本文所公開的任何降氨劑均可用于所述方法中，所述降氨劑包括但不限于磷酸鎂產(chǎn)品(mgp)、苯丁酸甘油酯(gpb)、苯乙酸鈉、苯丁酸鈉(napba)、谷氨酰胺、苯甲酸鈉、l-阿拉伯糖、輕瀉藥、抗生素、鳥氨酸與苯乙酸鹽和苯丁酸鹽中至少一種的組合，或它們的任何組合。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括將鳥氨酸與苯乙酸鹽和/或苯丁酸鹽的組合共同給予受試者。在一些實(shí)施方案中，調(diào)節(jié)受試者中腸道菌群的組成以預(yù)防nafld。在一些實(shí)施方案中，基因療法被用作降氨療法以預(yù)防nafld。本文所述的一些實(shí)施方案提供了通過(guò)對(duì)需要其的受試者進(jìn)行降氨療法來(lái)治療纖維化病癥的方法。在一些實(shí)施方案中，降氨療法可包括將降氨劑如鳥氨酸與苯乙酸鹽和/或苯丁酸鹽的組合共同給予需要其的受試者。一些這樣的實(shí)施方案包括治療性治療。其他實(shí)施方案包括預(yù)防性治療。本文使用的“纖維化病癥”是指具有以下特征的病癥、疾病或障礙：成纖維細(xì)胞的失調(diào)性增殖或活性和/或纖連蛋白的異常累積和/或膠原組織的病理性累積或過(guò)量累積。通常，任何這樣的疾病、障礙或病癥都可通過(guò)給予具有抗纖維化活性的化合物來(lái)治療。纖維化障礙包括但不限于肝纖維化(例如與慢性活動(dòng)性肝炎相關(guān)的肝纖維化)。因此，一些實(shí)施方案包括通過(guò)將鳥氨酸與苯乙酸鹽和/或苯丁酸鹽的組合共同給予需要其的受試者來(lái)治療肝纖維化的方法。一些實(shí)施方案包括在給予鳥氨酸與苯乙酸鹽和/或苯丁酸鹽的組合之前，鑒定受試者患有或有發(fā)展為纖維化病癥(例如肝纖維化)的風(fēng)險(xiǎn)?！肮餐o藥”意指兩種或更多種藥劑可在同時(shí)存在于患者的血流中，而不管它們實(shí)際上是何時(shí)給予或如何給予的。在一些實(shí)施方案中，同時(shí)給予所述藥劑。在一個(gè)這樣的實(shí)施方案中，通過(guò)將所述藥劑組合在單一劑型中來(lái)實(shí)現(xiàn)聯(lián)合給藥。在一些實(shí)施方案中，依序給予所述藥劑。在一些實(shí)施方案中，將所述藥劑通過(guò)相同的途徑如口服而給予。在一些實(shí)施方案中，將所述藥劑通過(guò)不同的途徑而給予，如一種通過(guò)口服給藥而另一種通過(guò)靜脈注射給藥。如本文所述，nash與人和嚙齒動(dòng)物中尿素循環(huán)酶——鳥氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶的降低的表達(dá)和功能水平——這導(dǎo)致高血氨癥——相關(guān)。不受任何特定理論的束縛，認(rèn)為在nafld中氨升高并且參與nafld和肝癌的進(jìn)展。此外，降氨劑(例如op)可用于在患有高血氨癥(例如與nash相關(guān)的高血氨癥)的受試者中降低血氨水平，并因此防止、限制或減緩nafld的進(jìn)展、nash中的纖維化進(jìn)展以及肝癌(例如hcc)的發(fā)展。在一些實(shí)施方案中，降氨劑可用于降低血氨水平，這治療并延遲nash的發(fā)生或進(jìn)展。一些實(shí)施方案包括通過(guò)對(duì)有需要的受試者進(jìn)行降氨療法來(lái)治療纖維化病癥(例如肝纖維化)。例如，降氨療法可包括向有需要的受試者給予降氨劑，例如鳥氨酸與苯乙酸鹽和/或苯丁酸鹽的組合。一些這樣的實(shí)施方案包括治療性治療。一些實(shí)施方案包括預(yù)防性治療。一些實(shí)施方案包括在給予降氨劑之前，鑒定受試者患有或有發(fā)展為纖維化病癥(例如肝纖維化)的風(fēng)險(xiǎn)。一些實(shí)施方案包括通過(guò)對(duì)有需要的受試者進(jìn)行降氨療法來(lái)治療肝癌的方法。例如，降氨療法可包括將降氨劑(例如鳥氨酸與苯乙酸鹽和/或苯丁酸鹽的組合)共同給予需要其的受試者。一些這樣的實(shí)施方案包括治療性治療。一些實(shí)施方案包括預(yù)防性治療。一些實(shí)施方案包括在給予降氨劑之前，鑒定受試者患有或有發(fā)展為肝癌的風(fēng)險(xiǎn)。一些實(shí)施方案包括通過(guò)將鳥氨酸與苯乙酸鹽和/或苯丁酸鹽的組合(例如鳥氨酸苯乙酸鹽)給予受試者來(lái)治療肝癌。肝癌可以是例如hcc或肝母細(xì)胞瘤。受試者中的氨水平可通過(guò)多種常規(guī)方法來(lái)測(cè)定。例如，在來(lái)自靜脈(或動(dòng)脈)血液樣品的血漿中常規(guī)地測(cè)量氨。也可在全血、紅細(xì)胞、唾液、汗液和尿液中測(cè)量氨。氨測(cè)量可用于診斷高血氨癥?？赏ㄟ^(guò)間接或直接的方法測(cè)量氨。例如，可通過(guò)氨指示劑的顏色改變來(lái)測(cè)量氨，例如利用溴酚藍(lán)的(orthodiagnosticltd.)氨測(cè)量法。又例如，通?；诳股?zé)o活菌素(nonatin)和單活菌素(monoactin)的混合物的nh4+-選擇性膜也可用于測(cè)量氨水平。在一些實(shí)施方案中，本文所公開的方法包括在給予降氨劑之前和/或之后，測(cè)定受試者中的氨水平。在一些實(shí)施方案中，在受試者接受降氨劑治療的整個(gè)期間監(jiān)測(cè)受試者中的氨水平。體內(nèi)氨水平的下降可減少炎癥(nfκb)、氧化應(yīng)激和αsma表達(dá)，并增加一氧化氮合酶(enos)活性和功能。鹽在一些實(shí)施方案中，將降氨劑(如鳥氨酸與苯乙酸鹽和/或苯丁酸鹽的組合)作為藥學(xué)上可接受的鹽而給藥。術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”是指保持化合物的生物學(xué)功效和特性的鹽，其不是生物學(xué)上或原本不期望用于藥物中的鹽。在許多情況下，由于存在氨基和/或羧基或類似基團(tuán)，本文所公開的降氨劑能夠形成酸式鹽和/或堿式鹽?？膳c無(wú)機(jī)酸和有機(jī)酸形成藥學(xué)上可接受的酸加成鹽?？尚纬甥}的無(wú)機(jī)酸包括例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等?？尚纬甥}的有機(jī)酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、馬來(lái)酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對(duì)甲苯磺酸、水楊酸等。也可使用無(wú)機(jī)和有機(jī)堿形成藥學(xué)上可接受的鹽?？尚纬甥}的無(wú)機(jī)堿包括例如含有鈉、鉀、鋰、銨、鈣、鎂、鐵、鋅、銅、錳、鋁等的堿；特別優(yōu)選的是氨鹽、鉀鹽、鈉鹽、鈣鹽和鎂鹽。在一些實(shí)施方案中，采用無(wú)機(jī)堿處理本文所公開的化合物導(dǎo)致化合物失去不穩(wěn)定的氫以形成含有如li+、na+、k+、mg2+和ca2+等的無(wú)機(jī)陽(yáng)離子的鹽?？尚纬甥}的有機(jī)堿包括例如伯胺、仲胺和叔胺；取代的胺，包括天然存在的取代的胺；環(huán)胺；堿性離子交換樹脂等；特別地例如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺和乙醇胺。本領(lǐng)域已知許多這樣的鹽，如johnston等人在wo87/05297(公開于1987年9月11日，以引用的方式全文納入本文)中所述。在一些實(shí)施方案中，鳥氨酸作為鳥氨酸鹽酸鹽而給藥。在一些實(shí)施方案中，苯乙酸鹽或苯丁酸鹽作為它們的鈉鹽而給藥。在一些實(shí)施方案中，鳥氨酸和苯乙酸鹽或苯丁酸鹽作為彼此的鹽而給藥(例如鳥氨酸苯乙酸鹽)。藥物組合物及給藥途徑可將降氨劑(如鳥氨酸與苯乙酸鹽和/或苯丁酸鹽的組合)與藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑一起配制以便于給藥。在一些實(shí)施方案中，可將降氨劑與藥學(xué)領(lǐng)域中常規(guī)的標(biāo)準(zhǔn)的藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑一起配制為藥物。制劑的確切性質(zhì)將取決于若干因素，包括所需的給藥途徑。例如，可將降氨劑(例如鳥氨酸和苯乙酸鹽和/或苯丁酸鹽)配制為用于口服、靜脈內(nèi)、胃內(nèi)、血管內(nèi)或腹膜內(nèi)給藥?？墒褂脴?biāo)準(zhǔn)的藥物制劑技術(shù)，如remington′sthescienceandpracticeofpharmacy，第21版，lippincottwilliams&wilkins(2005)(以引用的方式全文納入本文)中公開的那些?？蓪ⅧB氨酸(例如l-鳥氨酸)和苯乙酸鹽或苯丁酸鹽單獨(dú)給藥或在單一劑型中給藥。在一些實(shí)施方案中，將組合作為鳥氨酸苯乙酸鹽或作為鳥氨酸苯乙酸鹽的溶液而給藥。鳥氨酸與苯乙酸鹽(或乙酸苯酯鹽)和苯丁酸鹽中至少一種的組合物的不同形式記載于美國(guó)專利公開第us2008/0119554和us2010/0280119號(hào)(在此以引用的方式全文納入)中。在一些實(shí)施方案中，鳥氨酸和苯乙酸鹽作為鳥氨酸乙酸苯酯或其生理學(xué)上可接受的鹽而存在和/或給藥。在一些實(shí)施方案中，鳥氨酸作為游離單體氨基酸或其生理學(xué)上可接受的鹽而存在和/或給藥。在一些實(shí)施方案中，苯乙酸鹽和苯丁酸鹽中的至少一種作為苯乙酸鈉或苯丁酸鈉而存在和/或給藥。在一些實(shí)施方案中，將鳥氨酸的生理學(xué)上可接受的鹽以及苯乙酸鹽和苯丁酸鹽中的至少一種的生理學(xué)上可接受的鹽給予受試者。如本文所述，可將鳥氨酸和苯乙酸鹽和/或苯丁酸鹽配制在藥物組合物中以用于給藥，所述藥物組合物包括生理學(xué)上可接受的表面活性劑、載體、稀釋劑、賦形劑、潤(rùn)滑劑、懸浮劑、成膜物質(zhì)、包衣助劑，或它們的組合。在一些實(shí)施方案中，可將鳥氨酸和苯乙酸鹽和/或苯丁酸鹽與藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑一起配制以用于給藥?？蓪ⅧB氨酸和苯乙酸鹽和/或苯丁酸鹽與藥學(xué)領(lǐng)域中常規(guī)的標(biāo)準(zhǔn)的藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑一起配制為藥物。制劑的確切性質(zhì)將取決于若干因素，包括所需的給藥途徑。通常，可將鳥氨酸和苯乙酸鹽和/或苯丁酸鹽配制為用于口服、靜脈內(nèi)、胃內(nèi)、血管內(nèi)或腹膜內(nèi)給藥?？墒褂脴?biāo)準(zhǔn)的藥物制劑技術(shù)，例如remington′sthescienceandpracticeofpharmacy，第21版，lippincottwilliams&wilkins(2005)(以引用的方式全文納入本文)中公開的那些。術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的載體”或“藥學(xué)上可接受的賦形劑”包括任何及所有溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗細(xì)菌劑、抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等。這類用于藥物活性物質(zhì)的介質(zhì)和試劑的用途是本領(lǐng)域公知的。除非任何常規(guī)介質(zhì)或試劑與活性成分不相容，否則考慮將其用于治療組合物中。此外，可包括多種助劑，例如本領(lǐng)域中常規(guī)使用的助劑。在藥物組合物中包含多種成分的注意事項(xiàng)記載于例如gilman等人(編者)(1990)；goodmanandgilman’s：thepharmacologicalbasisoftherapeutics，第8版，pergamonpress(以引用的方式全文納入本文)中。可充當(dāng)藥學(xué)上可接受的載體的物質(zhì)或其組分的一些實(shí)例是糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；纖維素及其衍生物，例如羧甲基纖維素鈉；粉末狀的黃芪膠；麥芽；明膠；滑石；固體潤(rùn)滑劑，例如硬脂酸和硬脂酸鎂；硫酸鈣；植物油，例如花生油、棉花籽油、芝麻油、橄欖油、玉米油和可可屬的油；多元醇，例如丙二醇、丙三醇、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；藻酸；乳化劑，例如吐溫；潤(rùn)濕劑，例如十二烷基硫酸鈉；著色劑；調(diào)味劑；壓片劑；穩(wěn)定劑；抗氧化劑；防腐劑；無(wú)熱原的水；等滲鹽水；及磷酸鹽緩沖溶液。與主題化合物一起使用的藥學(xué)上可接受的載體的選擇主要取決于化合物的給藥方式。本文所述的組合物優(yōu)選在單位劑型中提供。本文使用的“單位劑型”是含有一定量化合物的組合物，所述量根據(jù)醫(yī)療管理規(guī)范適合以單一劑量而給予動(dòng)物，優(yōu)選哺乳動(dòng)物受試者。但是，單一或單位劑型的制備并不表示所述劑型是每天給藥一次或每個(gè)療程給藥一次?？紤]將這樣的劑型每天給藥一次、兩次、三次或更多次，并可作為輸液劑在一段時(shí)間(例如約30分鐘至約2-6小時(shí))內(nèi)給藥、或持續(xù)輸注給藥，并且可在一個(gè)療程期間給予多于一次，盡管不特別排除單次給藥。技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，制劑并不特別地試圖用于整個(gè)治療過(guò)程，這樣的決定權(quán)在于治療領(lǐng)域的人員而非制劑領(lǐng)域的技術(shù)人員。如上所述的可用的組合物可以是多種合適形式中的任一種以用于多種給藥途徑，例如用于口服、經(jīng)鼻、經(jīng)直腸、局部(包括透皮)、經(jīng)眼、腦內(nèi)、顱內(nèi)、囊內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、或其他腸胃外給藥途徑。技術(shù)人員將了解，口服和經(jīng)鼻組合物包括通過(guò)吸入給藥并利用可獲得的方法而制備的組合物。根據(jù)所需的具體給藥途徑，可使用本領(lǐng)域公知的多種藥學(xué)上可接受的載體。藥學(xué)上可接受的載體包括例如固體或液體填充劑、稀釋劑、助溶劑、表面活性劑和包封物質(zhì)?？砂ɑ静桓蓴_化合物的抑制活性的任選的藥物活性材料。與化合物一起使用的載體的量足以提供實(shí)際量的材料用于每單位劑量的化合物的給藥。用于制備可用于本文所述方法的劑型的技術(shù)和組合物記載于以下文獻(xiàn)(全部都以引用的方式納入本文)中：modernpharmaceutics，第4版，第9和10章(banker&rhodes，editors，2002)；liebermanetal.，pharmaceuticaldosageforms：tablets(1989)；和ansel，introductiontopharmaceuticaldosageforms第8版(2004)?？墒褂枚喾N口服劑型，包括固體形式如片劑、膠囊劑和顆粒劑。片劑可以是壓制的、模印片、腸溶包衣的、糖包衣的、涂膜的、或多層壓制的，包含合適的粘合劑、潤(rùn)滑劑、稀釋劑、崩解劑、著色劑、調(diào)味劑、引流劑和熔化劑。液體口服劑型包括水溶液、乳劑、懸浮劑、由非泡騰顆粒復(fù)原的溶液劑和/或懸浮劑以及由泡騰顆粒復(fù)原的泡騰制劑，包含合適的溶劑、防腐劑、乳化劑、懸浮劑、稀釋劑、甜味劑、熔化劑、著色劑和調(diào)味劑。適于制備經(jīng)口給藥的單位劑型的藥學(xué)上可接受的載體是本領(lǐng)域公知的。片劑通常包含常規(guī)的藥學(xué)上相容的助劑如惰性稀釋劑，例如碳酸鈣、碳酸鈉、甘露醇、乳糖和纖維素；粘合劑例如淀粉、明膠和蔗糖；崩解劑例如淀粉、藻酸和交聯(lián)羧甲基纖維素；潤(rùn)滑劑例如硬脂酸鎂、硬脂酸和滑石。助流劑例如二氧化硅可用于改善粉末混合物的流動(dòng)特性。為了改善外觀可添加著色劑，例如fd&c染料。對(duì)于咀嚼片，甜味劑和調(diào)味劑例如阿斯巴甜、糖精、薄荷醇、薄荷和水果香料是有用的助劑。膠囊劑通常包含上文所公開的一種或更多種固體稀釋劑。載體成分的選擇取決于次要的考慮例如味道、成本和貨架穩(wěn)定性，這些不是關(guān)鍵的，并且可由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地決定。經(jīng)口組合物還包括液體溶液、乳劑、懸浮劑等。適合用于制備這類組合物的藥學(xué)上可接受的載體是本領(lǐng)域公知的。用于糖漿劑、酏劑、乳劑和懸浮劑的載體的典型成分包括乙醇、丙三醇、丙二醇、聚乙二醇、液體蔗糖、山梨醇和水。對(duì)于懸浮液，典型的助懸劑包括羧甲基纖維素鈉、avicelrc-591、黃芪膠和海藻酸鈉；典型的潤(rùn)濕劑包括卵磷脂和聚山梨醇酯80；典型的防腐劑包括苯甲酸甲酯和苯甲酸鈉。經(jīng)口液體組合物也可包含上文公開的一種或更多種成分例如甜味劑、調(diào)味劑和著色劑?？捎糜趯?shí)現(xiàn)主題化合物的全身遞送的其他組合物包括經(jīng)舌下、經(jīng)口腔和經(jīng)鼻劑型。這樣的組合物通常包含一種或更多種可溶性填充物質(zhì)例如蔗糖、山梨醇和甘露醇；以及粘合劑例如阿拉伯樹膠、微晶纖維素、羧甲基纖維素和羥丙基甲基纖維素。也可包括上文公開的助流劑、潤(rùn)滑劑、甜味劑、著色劑、抗氧化劑和調(diào)味劑。對(duì)于局部使用，使用含有本文所公開的化合物的乳膏劑、軟膏劑、凝膠劑、溶液劑或懸浮劑等。局部制劑通?？捎伤幬镙d體、共溶劑、乳化劑、滲透促進(jìn)劑、防腐劑體系及潤(rùn)膚劑組成。對(duì)于靜脈內(nèi)給藥，可將本文所述的化合物和組合物溶解或分散于藥學(xué)上可接受的稀釋劑例如鹽溶液或右旋糖溶液中?？砂线m的賦形劑以達(dá)到所需的ph，所述賦形劑包括但不限于naoh、碳酸鈉、乙酸鈉、hcl和檸檬酸。在多個(gè)實(shí)施方案中，最終組合物的ph為2至8，或優(yōu)選4至7。抗氧化劑賦形劑可包括亞硫酸氫鈉、丙酮合亞硫酸氫鈉、甲醛合次硫酸氫鈉、硫脲和edta。最終靜脈內(nèi)組合物中存在的合適的賦形劑的其他非限制性實(shí)例可包括磷酸鈉或磷酸鉀、檸檬酸、酒石酸、明膠和碳水化合物例如右旋糖、甘露醇和右旋糖酐。其他可接受的賦形劑記載于powell，etal.，compendiumofexcipientsforparenteralformulations，pdajpharmsciandtech1998，52238-311和nemaetal.，excipientsandtheirroleinapprovedinjectableproducts：currentusageandfuturedirections，pdajpharmsciandtech2011，65287-332中，它們以引用的方式全文納入本文。也可包含抗微生物劑以得到抗細(xì)菌溶液或抗真菌溶液，所述抗微生物劑包括但不限于硝酸苯汞、硫柳汞、芐索氯銨、苯扎氯銨、苯酚、甲酚和三氯叔丁醇?？上蜥t(yī)護(hù)人員以一種或更多種固體的形式提供用于靜脈內(nèi)給藥的組合物，其在即將給藥前用合適的稀釋劑如無(wú)菌水、鹽水或右旋糖水復(fù)原。在其他實(shí)施方案中，以已準(zhǔn)備好經(jīng)腸胃外給藥的溶液的形式提供組合物。在其他實(shí)施方案中，以給藥前進(jìn)一步稀釋的溶液的形式提供組合物。在包括給予本文所述的化合物與另一種藥劑的組合的實(shí)施方案中，可將所述組合作為混合物而提供給醫(yī)護(hù)人員，或醫(yī)護(hù)人員可在給藥前將所述兩種藥劑混合，或可將兩種藥劑分開給藥。在非人動(dòng)物的研究中，潛在產(chǎn)品的施用以較高的劑量水平開始，劑量逐漸降低直至不再實(shí)現(xiàn)所需效果或不良副作用消失。劑量可在較寬的范圍內(nèi)變化，這取決于所需效果和治療適應(yīng)癥。通常，劑量可在約0.1mg/kg體重和4000mg/kg體重之間，例如約1mg/kg體重和1600mg/kg體重之間?；蛘撸瑒┝靠苫诨颊叩捏w表面積來(lái)計(jì)算，如本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解的。根據(jù)待治療的病癥的嚴(yán)重性和響應(yīng)性，劑量也可以是緩釋組合物的單次給藥，使療程從數(shù)天持續(xù)至數(shù)周或直至實(shí)現(xiàn)治愈或?qū)崿F(xiàn)疾病狀態(tài)的減輕。當(dāng)然，待給予的組合物的量將取決于許多因素，包括被治療的受試者、病痛的嚴(yán)重性、給藥的方式、開處方的醫(yī)師的判斷。本文公開的化合物或化合物的組合可以以每天0.1mg/kg至4000mg/kg患者體重的劑量經(jīng)口服或注射給藥。成人的劑量范圍通常為1g至100g/天。在獨(dú)立單位中提供的片劑或其他給藥形式可便利地包含一定量的本文公開的化合物或化合物的組合，其在所述劑量或多倍所述劑量下是有效的，例如含有1g至60g(例如約5g至20g、約10g至50g、約20g至40g、或約25g至35g)的單位。給予患者的化合物的精確的量由隨診醫(yī)師負(fù)責(zé)。然而，所用的劑量將取決于許多因素，包括患者的年齡和性別、被治療的確切病癥及其嚴(yán)重性。同樣地，給藥途徑可隨病癥及其嚴(yán)重性的不同而變化。根據(jù)這樣的參數(shù)，降氨劑(例如，鳥氨酸、或苯乙酸鹽或苯丁酸鹽)的典型劑量可以是0.02g至1.25g/kg體重，例如0.1g至0.5g/kg體重。在一些實(shí)施方案中，降氨劑的劑量可以是1g至100g，例如10g至80g、15g至60g、20g至40g、或25g至35g。在一些實(shí)施方案中，鳥氨酸和苯乙酸鹽/苯丁酸鹽可以以10∶1至1∶10，例如5∶1至1∶5、4∶1至1∶4、3∶1至1∶3、2∶1至1∶2、或約1∶1的重量比給藥。對(duì)于任何特定的受試者，醫(yī)師將能夠決定所需要的降氨劑(例如鳥氨酸以及苯乙酸鹽或苯丁酸鹽)的劑量。本文公開的化合物的藥物組合物或化合物組合的藥物組合物的確切配方、給藥途徑和劑量可由各個(gè)醫(yī)師根據(jù)患者的情況來(lái)選擇(例如參見fingletal.1975，″thepharmacologicalbasisoftherapeutics，″在此以引用的方式將其納入本文，特別引用第1章)。通常，給予患者的組合物的劑量范圍可以是約0.1至約4000mg/kg患者體重。根據(jù)患者的需要，劑量可以是在一天或多天的過(guò)程中給予的單次劑量或連續(xù)的兩次或更多次劑量。在已對(duì)至少一些病癥確定了化合物的人用劑量的情況中，本公開內(nèi)容將使用那些相同的劑量，或?yàn)橐汛_定的人用劑量的約0.1％至約5000％、更優(yōu)選約25％至約1000％的劑量。如果沒有確定人用劑量，如在新發(fā)現(xiàn)的藥物化合物的情況下，可從ed50或id50值或從體外或體內(nèi)研究得出的其他合適的值(如通過(guò)動(dòng)物中的毒性研究或藥效研究證實(shí)的)推導(dǎo)出合適的人用劑量。應(yīng)注意，主治醫(yī)師知曉如何及何時(shí)根據(jù)毒性或器官功能紊亂來(lái)終止、中斷或調(diào)整治療。相反地，主治醫(yī)師還知曉如果臨床響應(yīng)不足(排除毒性)應(yīng)將治療調(diào)整至較高水平。在目標(biāo)病癥的管理中，給藥劑量的大小隨待治療病癥的嚴(yán)重性及給藥途徑的不同而變化。病癥的嚴(yán)重性可例如部分地通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)預(yù)后評(píng)估方法來(lái)評(píng)估。此外，劑量以及也許給藥頻率還將根據(jù)個(gè)體患者的年齡、體重和響應(yīng)而變化。與上文討論的方案相當(dāng)?shù)姆桨缚捎糜讷F醫(yī)學(xué)。盡管確切的劑量將基于具體藥物而確定，在大多數(shù)情況下，可對(duì)劑量進(jìn)行一些概括。在給予藥學(xué)上可接受的鹽的情況下，可以以游離堿計(jì)算劑量。在一些實(shí)施方案中，組合物每天給藥1至4次?；蛘?，可通過(guò)持續(xù)的靜脈輸注而給予本文公開的化合物的組合物或化合物組合的組合物，優(yōu)選以每種活性成分最多達(dá)100g/天的劑量給藥。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，在某些情況下，有必要將本文公開的化合物以超過(guò)、或遠(yuǎn)超過(guò)以上所述的優(yōu)選劑量范圍的量來(lái)給藥，以有效地且積極地治療特別有攻擊性的疾病或感染。在一些實(shí)施方案中，可將本文公開的化合物或化合物的組合在持續(xù)治療的期間給藥，例如一周或更長(zhǎng)、或數(shù)月或數(shù)年。在一些實(shí)施方案中，本文公開的化合物或化合物的組合的給藥方案是在一段時(shí)間內(nèi)給藥，所述時(shí)間段可以是例如至少約1周至至少約4周、至少約4周至至少約8周、至少約4周至至少約12周、至少約4周至至少約16周、或更長(zhǎng)。本文公開的化合物或化合物的組合的給藥方案可以是每天給藥三次、每天兩次、每天一次、隔天一次、每周三次、隔周一次、每月三次、每月一次，基本連續(xù)地或連續(xù)地給藥。實(shí)施例在以下實(shí)施例中更詳細(xì)地公開本申請(qǐng)的實(shí)施方案的一些方面，所述實(shí)施例不意圖以任何方式限制本公開內(nèi)容的范圍。實(shí)施例1對(duì)原代人hsc的體外作用培養(yǎng)原代人肝星狀細(xì)胞(hhsc)。研究了nh4cl攻擊(challenge)(0.1-10mm，24-72小時(shí))對(duì)hhsc增殖(brdu)、代謝活性(mts測(cè)定)、活力(中性紅)、超微結(jié)構(gòu)改變(te-m)和基因/蛋白表達(dá)(q-pcr/蛋白印跡法)的作用。為測(cè)試恢復(fù)，在經(jīng)氨處理的細(xì)胞中添加谷氨酰胺并在單獨(dú)的實(shí)驗(yàn)中，采用l-甲硫氨酸亞砜亞胺(mso-gs抑制劑)預(yù)處理以測(cè)定谷氨酰胺合成酶(gs)的重要性。原代hhsc中的高血氨誘導(dǎo)增殖和代謝活性以時(shí)間依賴的方式減少，同時(shí)甚至在50-100μmol/l的濃度下誘導(dǎo)細(xì)胞腫脹和肌成纖維細(xì)胞樣表型。在超微結(jié)構(gòu)上，經(jīng)氨處理的hhsc具有劑量依賴的細(xì)胞內(nèi)er增大，并且這可通過(guò)向培養(yǎng)物中添加l-谷氨酰胺而逆轉(zhuǎn)。hhsc增殖的nh3抑制取決于gs活性，因?yàn)閙so和高血氨誘導(dǎo)細(xì)胞脫離并防止恢復(fù)，這表明谷氨酰胺對(duì)hhsc的存活很重要。這些結(jié)果表明，高血氨改變hhsc并賦予腫脹的肌成纖維細(xì)胞表型，這隨氨降低而逆轉(zhuǎn)。因此，預(yù)期所述降低氨的療法能夠令人驚奇地預(yù)防和逆轉(zhuǎn)肝纖維化。實(shí)施例2在bdl大鼠中的體內(nèi)作用將結(jié)扎了膽管(bdl)28天的大鼠用鹽水或鳥氨酸苯乙酸鹽處理5天。終止時(shí)測(cè)量門脈壓力并收集組織用于研究?；加懈哐卑Y的bdl大鼠具有增加的促纖維發(fā)生的hhsc相關(guān)基因(α-sma、pdgfb-r、myosiniia/iib和coll1)的肝表達(dá)、低的enos活性和ddah-1、及高的門脈壓力，所有這些都通過(guò)用鳥氨酸苯乙酸鹽治療而得到糾正。這些結(jié)果證明，在體內(nèi)采用鳥氨酸苯乙酸鹽進(jìn)行的降氨療法降低了促纖維發(fā)生的和激活的hsc基因和蛋白的表達(dá)。該數(shù)據(jù)支持鳥氨酸苯乙酸鹽在肝纖維化和肝癌(星狀細(xì)胞激活可導(dǎo)致肝癌)的治療(包括預(yù)防)中的用途。實(shí)施例3氨調(diào)節(jié)人hsc激活本實(shí)施例證明，氨對(duì)hsc產(chǎn)生有害的形態(tài)學(xué)和功能影響，使用降氨劑op可逆轉(zhuǎn)氨誘導(dǎo)的hsc功能紊亂。方法在本實(shí)施例中，分離并培養(yǎng)原代人hsc(hhsc)。評(píng)估增殖(brdu)、代謝活性(mts)、形態(tài)學(xué)(tem，光和免疫熒光顯微術(shù))、hsc激活標(biāo)記物、收縮能力、和氧化狀態(tài)的改變(ros)以鑒定氨攻擊(50μm、100μm、300μm)在24-72小時(shí)內(nèi)的影響。在高血氨的bdl動(dòng)物中，在op處理之后，對(duì)血漿氨水平、hsc激活標(biāo)記物、門脈壓力和肝enos活性的改變進(jìn)行定量。人hsc中的體外研究在得到在royalfree醫(yī)院接受手術(shù)的患者的知情同意(ec01.14-rf)后，從獲自患者的肝組織的楔形部分中分離原代hhsc。根據(jù)mederacke等人(natureprotocols2015，10：305-315)分離細(xì)胞，如romboutsk，carloniv.determinationandcharacterizationoftetraspanin-associatedphosphoinositide-4kinasesinprimaryandneoplasticlivercells中所述對(duì)人肝臟進(jìn)行改性。在waughmg，編者，lipidsignalingprotocols，第2版，紐約：springerscience+businessmedia；2015，203-212頁(yè)中。簡(jiǎn)言之，采用0.01％膠原酶、0.05％鏈霉蛋白酶和0.001％dna酶i消化10g總?cè)烁谓M織而不進(jìn)行灌注。通過(guò)100μm細(xì)胞過(guò)濾器過(guò)濾勻漿，并將流出物在4℃下以50×g離心2分鐘。洗滌上清后，使用11.5％optiprep梯度在4℃下以1400×g進(jìn)行梯度離心17分鐘。最后，收集分界面并洗滌。通過(guò)檢測(cè)cd140b(pdgfrbeta)、cd29(整合素β1)和細(xì)胞球蛋白(cygb)來(lái)確定hhsc的純度。將所獲得的hsc在補(bǔ)充有20％胎牛血清(fbs)、glutamax、非必需氨基酸1x、1.0mm丙酮酸鈉、1x抗生素-抗真菌劑(均來(lái)自lifetechnologies)的rpmi(下文稱為完全hsc培養(yǎng)基)中培養(yǎng)。本研究中所描述的實(shí)驗(yàn)在第3代至第8代之間的至少三份獨(dú)立的細(xì)胞制劑的hhsc上進(jìn)行。將細(xì)胞在富含基礎(chǔ)血清的條件(cm完全培養(yǎng)基)下接種(密度26×103/cm2)24小時(shí)，然后在缺乏血清的條件下再培養(yǎng)24小時(shí)(sfm)。從培養(yǎng)基中除去外源的谷氨酰胺以避免不可控的氨生成。在實(shí)驗(yàn)期間每天采用nh4cl處理替換特定處理。動(dòng)物模型所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)都是經(jīng)倫敦大學(xué)學(xué)院動(dòng)物護(hù)理倫理委員會(huì)批準(zhǔn)的，并根據(jù)英國(guó)1986年動(dòng)物科學(xué)程序法中的內(nèi)政部指導(dǎo)方針進(jìn)行。本研究在體重為220-250g雄性sprague-dawley大鼠(charlesriveruk，margate，英國(guó))中進(jìn)行。在一個(gè)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?，給予大鼠高蛋白/氨生成飲食(aa)5天。此外，所有大鼠經(jīng)歷bdl以誘導(dǎo)肝硬化或假手術(shù)，如之前所述。研究設(shè)計(jì)。(i)在第一組方案中，進(jìn)一步在體內(nèi)研究對(duì)hsc細(xì)胞生物學(xué)的氨誘導(dǎo)作用的先前體外觀察。在本實(shí)驗(yàn)方案中，對(duì)動(dòng)物進(jìn)行bdl手術(shù)并給予其4周時(shí)間以發(fā)展肝損傷。在第4周期間，將bdl動(dòng)物隨機(jī)分為3組：一組包含bdl大鼠，它們接受富含氨基酸(aa)的飲食，此外腹膜內(nèi)(i.p.)注射鹽溶液(n＝4)；第二組接受aa飲食，并每天兩次(共5天)采用腹膜內(nèi)注射降氨劑鳥氨酸苯乙酸鹽(op)0.3g/kg來(lái)治療(n＝4)；第三組由bdl大鼠組成，它們接受鹽溶液(i.p.)(n＝4)。除bdl動(dòng)物外，另一組假手術(shù)大鼠也接受鹽溶液(i.p.)(n＝4)。在治療的第5天處死動(dòng)物。(ii)在第二個(gè)方案中，研究降氨劑op對(duì)氨誘導(dǎo)的門靜脈高壓的影響。bdl或假手術(shù)后四周，將大鼠隨機(jī)分為三組：假手術(shù)大鼠在5天的實(shí)驗(yàn)期中每天兩次接受鹽水(i.p.)(n＝18)；bdl大鼠(n＝20)每天兩次(共5天)腹膜內(nèi)給予鹽水；另一組bdl大鼠(n＝11)每天兩次(共5天)接受腹膜內(nèi)注射op0.3g/kg。在第4周和第5周之間，麻醉(2％異氟醚)后，通過(guò)分離右頸動(dòng)脈并插管而評(píng)估各組大鼠的平均動(dòng)脈壓。此外，通過(guò)對(duì)門靜脈主干的直接插管來(lái)測(cè)量門靜脈壓。將所有測(cè)量轉(zhuǎn)換為連接至chartv5.0.1軟件的powerlab(4sp)。記錄每隔一分鐘采集的三次讀數(shù)的平均值。收集肝組織并迅速冷凍，儲(chǔ)存在-80℃下直至分析。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果表示為平均值±sem，并使用單因素方差分析和隨后的dunnet或tukey多重比較事后檢驗(yàn)(如果合適)進(jìn)行比較。p值≤0.05被認(rèn)為是顯著的。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)通過(guò)t檢驗(yàn)和mann-whitneyu檢驗(yàn)(如果合適)進(jìn)行分析；p＜0.05被認(rèn)為是統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的。使用graphpadprism軟件(graphpad，lajolla，加拿大)將結(jié)果表示為平均值±sem。結(jié)果氨以劑量依賴的方式降低體外人肝星狀細(xì)胞(hhsc)中的細(xì)胞增殖和代謝。采用不同濃度的氨處理72小時(shí)的hhsc顯示出細(xì)胞增殖(brdu測(cè)定)和代謝活性(mts測(cè)定)的顯著抑制(圖1a)。此外，采用氨長(zhǎng)時(shí)間地處理細(xì)胞沒有導(dǎo)致hhsc中的細(xì)胞死亡，如通過(guò)進(jìn)行細(xì)胞死亡檢測(cè)elisa而評(píng)估的(圖1b)。此外，這些氨誘導(dǎo)的作用以劑量依賴的方式與細(xì)胞形態(tài)方面的顯著變化一致，如通過(guò)光學(xué)顯微鏡所觀察到的(圖1c)。hhsc，被稱為肌成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞的，如在完全培養(yǎng)基和缺乏血清的培養(yǎng)基中所顯示的，顯著地將它們的形態(tài)改變?yōu)榧忓N狀成纖維細(xì)胞表型，當(dāng)采用氨處理時(shí)出現(xiàn)內(nèi)溶酶體區(qū)室的失調(diào)跡象，如通過(guò)中性紅(被溶酶體滯留的染料)所評(píng)估的(圖1c)。發(fā)現(xiàn)hhsc在mrna和蛋白水平上表達(dá)谷氨酰胺合成酶(gs)。采用l-甲硫氨酸亞砜亞胺(mso，gs的生物化學(xué)抑制劑)預(yù)處理細(xì)胞，然后暴露于氨，與僅采用mso的治療相比，不進(jìn)一步抑制增殖和代謝活性。氨誘導(dǎo)細(xì)胞質(zhì)應(yīng)激的改變，這與細(xì)胞代謝/功能和肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)的變化一致。通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察到的形態(tài)學(xué)變化通過(guò)進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)研究而進(jìn)一步表征。氨引起細(xì)胞溶膠中顯著的劑量依賴性變化，并表明存在透明液泡。未觀察到線粒體改變和自噬結(jié)構(gòu)(由雙層膜表征)的存在(圖2a)。注意到，當(dāng)除去富含氨的培養(yǎng)基并采用完全培養(yǎng)基補(bǔ)充細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞增殖和代謝活性恢復(fù)(圖2b)，從而支持所觀察到的氨的作用是短暫的。此外，與對(duì)照相比，在膠原凝膠上培養(yǎng)的經(jīng)氨處理的hhsc顯示出顯著的收縮能力(圖2c、2d)，并且這在3小時(shí)后發(fā)生并在氨處理24小時(shí)后持續(xù)，這與先前觀察到的形態(tài)學(xué)變化一致(圖2e)。此外，當(dāng)使用trict-鬼筆環(huán)肽染色時(shí)，氨的長(zhǎng)時(shí)間處理(72小時(shí))誘導(dǎo)細(xì)胞骨架中絲狀肌動(dòng)蛋白的劑量依賴性破壞。f-肌動(dòng)蛋白網(wǎng)絡(luò)的再組織與以劑量依賴的方式而存在的透明液泡一致(圖2f)。高血氨導(dǎo)致hhsc中的ros產(chǎn)生。采用氨長(zhǎng)時(shí)間處理細(xì)胞最長(zhǎng)達(dá)72小時(shí)顯示ros的持續(xù)發(fā)展，如通過(guò)細(xì)胞溶膠羧基-dcf的存在所檢測(cè)到的(圖3a)。如mookerjee等人(gastroenterology，2007，132：2533-2541)所描述的，進(jìn)一步定量測(cè)量氨誘導(dǎo)的ros產(chǎn)生的發(fā)展，并證實(shí)采用氨處理的原代hhsc產(chǎn)生顯著的活性氧(ros)(圖3b)。接下來(lái)，不同時(shí)間點(diǎn)的采用氨處理的細(xì)胞在3小時(shí)后顯示出超氧化物歧化酶2(sod2)的mrna表達(dá)的明顯增加，這持續(xù)到氨處理24小時(shí)時(shí)(圖3c)。此外，采用n-乙酰半胱氨酸(nac)——一種已知的ros清除劑——進(jìn)行預(yù)處理對(duì)先前所觀察到的氨處理3小時(shí)后sod2mrna表達(dá)的增加沒有顯示出影響。相比之下，采用nac預(yù)處理，然后氨處理24小時(shí)，幾乎完全消除了氨誘導(dǎo)的sod2mrna表達(dá)。氨改變hhsc中的促纖維發(fā)生/促炎性能。如圖4a所示，表明氨顯著增加α-sma蛋白表達(dá)。在300μm的氨下，波形蛋白(一種重要的中間絲狀體)合成增加。通過(guò)增加氨的濃度而使肌球蛋白iia(在hsc收縮中起重要作用)和肌球蛋白iib(參與hsc激活)都被顯著地調(diào)節(jié)。在p-38mapk表達(dá)中也觀察到對(duì)氨的劑量依賴性響應(yīng)。此外，pdgfr-β——其在hsc細(xì)胞增殖中的重要的——在氨的影響下顯示出顯著的上調(diào)，而i型膠原蛋白顯示出被氨增加的趨勢(shì)，盡管這些作用不是統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的(圖4a)。此外，氨誘導(dǎo)mmp2mrna表達(dá)的強(qiáng)烈和顯著的上調(diào)，而timp1的mrna表達(dá)下調(diào)(圖4b)。此外，當(dāng)hhsc采用氨300μm處理72小時(shí)(圖4c)時(shí)，促炎白細(xì)胞介素-1βmrna表達(dá)被顯著誘導(dǎo)，而50μm和100μm劑量的氨顯著上調(diào)白細(xì)胞介素6mrna的表達(dá)水平。相比之下，氨不改變hsc中白細(xì)胞介素8mrna的表達(dá)(圖4c)。這些數(shù)據(jù)顯示，氨誘導(dǎo)的ros形成導(dǎo)致hsc相關(guān)的激活標(biāo)記物和促炎基因的改變。膽管結(jié)扎和氨治療在體內(nèi)改變hsc細(xì)胞生物學(xué)。研究了高氨血癥對(duì)整個(gè)肝組織中hsc相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響。與假手術(shù)大鼠相比，在bdl大鼠血漿中氨濃度顯著升高(149.3μmol/l±51.1對(duì)107.4μmol/l±23.2，p＜0.05)。當(dāng)飼喂動(dòng)物富含氨基酸(aa)的飲食并結(jié)合bdl手術(shù)時(shí)，血漿氨水平進(jìn)一步增加(199.1μmol/l±43.6對(duì)149.3μmol/l±51.1，p＜0.05)(圖5a)。更重要的是，當(dāng)采用op治療bdl-aa飼喂的動(dòng)物時(shí)，血漿氨水平顯著降低(123.9μmol/l±16.1對(duì)199.1μmol/lμm±43.6，p＜0.001)(圖5a)。發(fā)現(xiàn)op治療導(dǎo)致hsc相關(guān)的激活標(biāo)記物的蛋白表達(dá)顯著降低(圖5b)。更具體地，與bdl相比，bdl結(jié)合高血氨(aa飲食)顯示出肌球蛋白iib、i型膠原蛋白和pdgf-rβ蛋白表達(dá)的顯著增加。相比之下，采用op的治療消除了高血氨對(duì)與所測(cè)試的所有hsc相關(guān)的激活標(biāo)記物相關(guān)的bdl大鼠肝臟的強(qiáng)烈作用(圖5b)。該實(shí)施例顯示，病理生理學(xué)氨濃度在體外引起細(xì)胞增殖、代謝活性和hhsc激活標(biāo)記物的顯著的且可逆的變化。氨還誘導(dǎo)細(xì)胞形態(tài)學(xué)的顯著改變，其特征在于細(xì)胞質(zhì)液泡化、ros產(chǎn)生、hhsc收縮和促炎基因表達(dá)的變化以及hsc相關(guān)的激活標(biāo)記物如α-sma、肌球蛋白iia、iib和pdgf-rβ的變化。采用氨還原劑op治療顯著降低血漿氨(bdl199.1μmol/l±43.65對(duì)bdl+op149.27μmol/l±51.1，p＜0.05)，這與增加的enos活性和hsc激活標(biāo)記物的消除相關(guān)。實(shí)施例4otc基因表達(dá)和肝尿素氮處理在nafld動(dòng)物中降低，并通過(guò)飲食調(diào)節(jié)和減少細(xì)菌移位而得以恢復(fù)本實(shí)施例顯示，在nash的動(dòng)物模型中鳥氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶(otc)的基因和蛋白表達(dá)改變，并且這種改變隨著動(dòng)物的恢復(fù)(通過(guò)恢復(fù)飲食和減少細(xì)菌移位)而逆轉(zhuǎn)。本實(shí)施例還顯示，在nafld患者中otc的基因表達(dá)改變。研究了nash的兩種動(dòng)物模型：a)給wistar大鼠飼喂高脂肪、高膽固醇飲食(hfhc)10個(gè)月，然后以標(biāo)準(zhǔn)飲食恢復(fù)2個(gè)月，b)給小鼠飼喂缺乏甲硫氨酸-膽堿的飲食(mcd)4周，并采用yaq-001(yaqritltd.)(一種已證明可減少細(xì)菌移位的納米多孔碳)處理。此外，在減肥手術(shù)中獲得來(lái)自16名nafld人患者的肝活檢組織，并測(cè)量那些肝活檢組織中otc基因的表達(dá)。在兩種nash動(dòng)物模型中，otc的基因和蛋白表達(dá)顯著降低，并且這種降低通過(guò)膳食調(diào)節(jié)或細(xì)菌移位的減少而得以恢復(fù)。例如，在hfhc大鼠中，通過(guò)將飲食改變?yōu)檎Ｊ澄飦?lái)逆轉(zhuǎn)nash，這恢復(fù)了otc基因表達(dá)(0.53(ci0.41-0.68)對(duì)0.32(ci0.28-0.37)，p＜0.05；對(duì)照1.00(ci0.85-1.17))和otc蛋白表達(dá)(5.33±0.21對(duì)3.06±0.20，p＜0.01；對(duì)照7.41±0.68)(圖6)。在mcd小鼠中，細(xì)菌移位的減少阻止nash的發(fā)展，恢復(fù)otc基因的表達(dá)(0.89(ci0.13-0.16)對(duì)0.35(ci0.08-0.09)，p＜0.01；對(duì)照1.00(ci0.12-0.17))，表明nash中的炎癥有助于otc基因表達(dá)(圖7)。在nafld患者中，nash和纖維化患者比單純的脂肪變性患者具有顯著更低的otc基因表達(dá)(0.82±0.37對(duì)1.15±0.24，p＝0.05)(圖8)。如本實(shí)施例所示，實(shí)驗(yàn)的和人的nash導(dǎo)致尿素循環(huán)酶otc的基因表達(dá)降低，從而危害氮體內(nèi)平衡。在nash的動(dòng)物模型中，隨著飲食干預(yù)以及通過(guò)減少細(xì)菌移位，可以將這些變化逆轉(zhuǎn)。本文所示的結(jié)果表明nash、基因表達(dá)減少和otc的功能以及細(xì)菌移位之間的聯(lián)系。此外，氨引起hsc的形態(tài)學(xué)變化和激活，并且otc減少可導(dǎo)致高氨血癥以及肝損傷和纖維化的進(jìn)展。本實(shí)施例支持將氨和細(xì)菌移位用作針對(duì)nash的治療。實(shí)施例5高氨血癥導(dǎo)致疾病進(jìn)展，并且給予降氨劑可降低nash和纖維化的進(jìn)展本實(shí)施例中研究?jī)煞N動(dòng)物模型：(i)spraguedawley大鼠被進(jìn)一步分組，并飼喂富含高脂肪和高膽固醇的飲食(hfhc飲食)或不含高脂肪和膽固醇含量的標(biāo)準(zhǔn)飲食(標(biāo)準(zhǔn)飲食)，最長(zhǎng)達(dá)16周；和(ii)給大鼠飼喂補(bǔ)充有果糖的高脂肪飲食(hfd+f飲食)，最長(zhǎng)達(dá)16周。干預(yù)研究：(i)預(yù)防治療——同時(shí)給予大鼠op和補(bǔ)充有脂肪的飲食；(ii)在飲食誘導(dǎo)的nash后8周開始干預(yù)療法，以模擬已建立的nash大鼠模型的治療性干預(yù)。亞組給予op(0.3g/kg，每天兩次，口服)或安慰劑。總共研究了6個(gè)實(shí)驗(yàn)組：1)標(biāo)準(zhǔn)飲食+鹽水；2)標(biāo)準(zhǔn)飲食+op(1-16周)；3)標(biāo)準(zhǔn)飲食+op(8-16周)；4)hfhc飲食+鹽水；5)hfhc飲食+op(1-16周)——預(yù)防性治療；和6)hfhc飲食+op(8-16周)——干預(yù)療法。(iii)過(guò)高的高血氨：另外一組接受富含氨基酸(aa)飲食以誘導(dǎo)高氨血癥的大鼠組作為陽(yáng)性對(duì)照。處死所有動(dòng)物，并收集組織以研究聯(lián)系otc功能紊亂與nash發(fā)展的機(jī)制以及高氨血癥的藥理學(xué)調(diào)節(jié)。這些實(shí)驗(yàn)的主要終點(diǎn)是確定所研究的各組中nash和纖維化的嚴(yán)重程度。對(duì)于nash和纖維化評(píng)分，由不知道動(dòng)物接受的治療類型的有經(jīng)驗(yàn)的肝病理學(xué)家來(lái)進(jìn)行組織學(xué)研究并使用nashcrn評(píng)分系統(tǒng)(tvl；apd)。在蘇木精-伊紅染色切片中分析nash中常見的變量：1)大/小囊泡脂肪變性，2)小葉炎癥，3)肝細(xì)胞氣脹，4)凋亡小體。使用經(jīng)siriusred染色的切片評(píng)估纖維化/膠原蛋白累積。此外，進(jìn)行油紅o染色以研究脂質(zhì)累積的變化并進(jìn)行filipin染色以觀察膽固醇的變化。對(duì)于次要終點(diǎn)：1)血液樣品：使用配有適當(dāng)試劑盒的cobasintegra400多重分析儀(rochediagnostics，burgesshill，westsussex，英國(guó))進(jìn)行血漿生物化學(xué)分析(血清alt、ast、尿素、氨、白蛋白、膽固醇-ldl、膽固醇-hdl膽固醇和甘油三酯)。2)使用qpcr和蛋白印跡分析進(jìn)行otc酶活性的測(cè)量和otc(以及其他尿素循環(huán)相關(guān)酶)的評(píng)估。使用免疫組織化學(xué)評(píng)估otc定位/分區(qū)的變化。3)檢測(cè)促纖維發(fā)生、激活相關(guān)的hsc標(biāo)記物。4)檢測(cè)促炎細(xì)胞因子/趨化因子和巨噬細(xì)胞標(biāo)記物。5)檢測(cè)細(xì)胞凋亡相關(guān)標(biāo)記物。對(duì)于功效(power)計(jì)算和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以證明在研究的不同條件之間存在顯著差異，功效為80％、p值＜0.05(對(duì)選定的組間比較進(jìn)行anova)。以前的研究表明，各組中n＝12只動(dòng)物足以證明顯著變化。預(yù)期(1)模擬卡路里和脂肪密集型西方飲食的nash的動(dòng)物模型具有高氨血癥和降低的otc表達(dá)和功能；和(2)采用降氨劑(如op)治療可降低肝損傷的生物化學(xué)、炎癥和組織學(xué)指標(biāo)，并逆轉(zhuǎn)otc功能紊亂和高氨血癥。實(shí)施例6降氨劑治療肝癌在本實(shí)施例中，使用大鼠纖維化/hcc模型來(lái)確定降氨劑op是否可以降低hcc發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)。研究動(dòng)物最長(zhǎng)達(dá)16周，并檢查hcc的發(fā)展。將動(dòng)物(6-8只/組)用二乙基亞硝胺(den)/亞硝基嗎啉(nmor)處理以誘導(dǎo)纖維化/hcc，如之前所述(mohamedetal.，liverinternational2015，35(3)：1063-1076)。用于研究的六個(gè)動(dòng)物組列于表1中。表1.動(dòng)物組1.假手術(shù)+鹽水4.den+鹽水2.假手術(shù)+op(1-14周)——預(yù)防5.den+op(1-14周)——預(yù)防3.假手術(shù)+op(7-14周)——治療6.den+op(7-14周)——治療實(shí)施例7氨水平的降低減緩nafld的進(jìn)展通過(guò)采用液體高脂肪飲食(hfd)(71％的kcal脂肪)飼喂雄性大鼠最長(zhǎng)達(dá)16周而在大鼠中誘導(dǎo)nafld。提供了肥胖zucker大鼠——大鼠中最常用的nafld模型之一。將鳥氨酸與苯乙酸鹽和苯丁酸鹽中至少一種的組合(例如op)給予hfd大鼠和肥胖zucker大鼠。預(yù)期給予鳥氨酸與苯乙酸鹽和苯丁酸鹽中至少一種的組合(其降低hfd大鼠和肥胖zucker大鼠中的氨濃度)可有效減少飲食誘導(dǎo)的nafld大鼠模型以及遺傳的nafld大鼠模型中nafld的進(jìn)展。實(shí)施例8高血氨使nafld和纖維化的進(jìn)展惡化通過(guò)采用液體高脂肪飲食(hfd)(71％的kcal脂肪)飼喂雄性大鼠三周而在大鼠中誘導(dǎo)nafld。提供了肥胖zucker大鼠——大鼠中最常用的nafld模型之一。通過(guò)使大鼠缺乏鳥氨酸轉(zhuǎn)氨基甲酰酶(otc缺陷)，而在飲食誘導(dǎo)的和遺傳的nafld大鼠模型中產(chǎn)生自發(fā)性高血氨。通過(guò)在大鼠中突變或刪除otc基因來(lái)制備otc缺陷型大鼠。通過(guò)給大鼠飼喂高蛋白飲食，在飲食誘導(dǎo)的和遺傳的nafld大鼠模型中均產(chǎn)生誘導(dǎo)的高血氨。預(yù)期自發(fā)性和誘導(dǎo)型高血氨都會(huì)使nafld和纖維化的進(jìn)展惡化。實(shí)施例9重量減輕減緩nafld的進(jìn)展通過(guò)采用液體高脂肪飲食(hfd)(71％的kcal脂肪)飼喂雄性大鼠三周而在大鼠中誘導(dǎo)nafld。提供了肥胖zucker大鼠——大鼠中最常用的nafld模型之一。對(duì)hfd大鼠和肥胖大鼠進(jìn)行減重手術(shù)。預(yù)期減重手術(shù)可減緩飲食誘導(dǎo)的nafld大鼠模型以及遺傳的nafld大鼠模型中nafld的進(jìn)展。還預(yù)期重量減輕可改善nafld大鼠模型中的肝臟氮處理、otc基因/蛋白表達(dá)和功能。盡管已經(jīng)參考實(shí)施方案和實(shí)施例描述了本公開內(nèi)容，但應(yīng)理解，在不脫離本公開內(nèi)容的精神的情況下，可以進(jìn)行許多和各種修改。因此，本公開內(nèi)容僅受以下權(quán)利要求的限制。本文所引用的所有參考文獻(xiàn)，包括專利、專利申請(qǐng)、論文、教科書等，以及本文引用的參考文獻(xiàn)在其尚未被引用的程度上，以引用的方式全文納入本文。如果一篇或多篇納入的文獻(xiàn)和類似的材料與本申請(qǐng)(包括但不限于所定義的術(shù)語(yǔ)，術(shù)語(yǔ)用法，所描述的技術(shù)等)不同或相矛盾，以本申請(qǐng)為準(zhǔn)。在至少一些先前描述的實(shí)施方案中，一個(gè)實(shí)施方案中使用的一個(gè)或更多個(gè)要素可互換地用在另一個(gè)實(shí)施方案中，除非這種替換在技術(shù)上不可行。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，在不脫離所要求保護(hù)的主題的范圍的情況下，可以對(duì)上述方法和結(jié)構(gòu)進(jìn)行各種其他的省略、添加和修改。所有這些修改和改變都旨在落入由所附權(quán)利要求所限定的主題的范圍內(nèi)。對(duì)于本文中所使用的大體上任何復(fù)數(shù)和/或單數(shù)術(shù)語(yǔ)，如果適用于上下文和/或本申請(qǐng)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以從復(fù)數(shù)轉(zhuǎn)換為單數(shù)和/或從單數(shù)轉(zhuǎn)換為復(fù)數(shù)。為清楚起見，本文可以明確地闡述各種單數(shù)/復(fù)數(shù)排列。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，一般而言，本文使用的術(shù)語(yǔ)，特別是在所附權(quán)利要求書(例如，所附權(quán)利要求書的主體)中使用的術(shù)語(yǔ)通常旨在作為“開放式”術(shù)語(yǔ)(例如，術(shù)語(yǔ)“包括”應(yīng)當(dāng)解釋為“包括但不限于”，術(shù)語(yǔ)“具有”應(yīng)被解釋為“至少具有”，術(shù)語(yǔ)“包括”應(yīng)解釋為“包括但不限于”等)。本領(lǐng)域技術(shù)人員將進(jìn)一步理解，如果所引入的權(quán)利要求敘述中的具體數(shù)目是有意圖的，則在權(quán)利要求中將明確地?cái)⑹鲞@種意圖，在沒有這種敘述時(shí)，則不存在這樣的意圖。例如，為了幫助理解，以下所附的權(quán)利要求可包含引導(dǎo)性短語(yǔ)“至少一個(gè)”和“一個(gè)或更多個(gè)”的使用來(lái)引入權(quán)利要求敘述。然而，這種短語(yǔ)的使用不應(yīng)解釋為意味著通過(guò)不定冠詞“一”或“一個(gè)”而引入的權(quán)利要求敘述將含有這種引入的權(quán)利要求敘述的特定權(quán)利要求限定為僅包含一個(gè)這種敘述的實(shí)施方案，即使同一權(quán)利要求包括引導(dǎo)性短語(yǔ)“一個(gè)或更多個(gè)”或“至少一個(gè)”和不定冠詞如“一”或“一個(gè)”(例如，“一”和/或“一個(gè)”應(yīng)解釋為“至少一個(gè)”或“一個(gè)或更多個(gè)”)；對(duì)于用于引入權(quán)利要求敘述的定冠詞的使用也是如此。此外，即使明確地?cái)⑹隽怂氲臋?quán)利要求敘述的特定數(shù)目，本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，這種敘述應(yīng)該解釋為意指至少所述的數(shù)目(例如，僅敘述“兩個(gè)敘述”而無(wú)其他修飾語(yǔ)，意指至少兩個(gè)敘述，或兩個(gè)或更多個(gè)敘述)。此外，在使用類似于“a、b和c等中的至少一個(gè)”的慣用法的情況下，通常這種解釋意指本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解的意義上的慣用法(例如，“具有a、b和c中至少一個(gè)的系統(tǒng)”將包括但不限于僅具有a、僅具有b、僅具有c、具有a和b、具有a和c、具有b和c和/或具有a、b和c等)。在使用類似于“a、b或c等中的至少一個(gè)”的慣用法的情況下，通常這種解釋意指本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解的意義上的慣用法(例如，“具有a、b或c中至少一個(gè)的系統(tǒng)”將包括但不限于僅具有a、僅具有b、僅具有c、具有a和b、具有a和c、具有b和c和/或具有a、b和c等)。本領(lǐng)域技術(shù)人員將進(jìn)一步理解，實(shí)際上，任何呈現(xiàn)兩個(gè)或更多個(gè)替代術(shù)語(yǔ)的分離的單詞和/或短語(yǔ)(不論在說(shuō)明書、權(quán)利要求書或附圖中)都應(yīng)理解為考慮到包括術(shù)語(yǔ)之一、任何一個(gè)術(shù)語(yǔ)、或兩個(gè)術(shù)語(yǔ)的可能性。例如，短語(yǔ)“a或b”將被理解為包括“a”或“b”或“a和b”的可能性。此外，在本公開內(nèi)容的特征或方面以馬庫(kù)什組的方式進(jìn)行描述時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，本公開內(nèi)容也因此以馬庫(kù)什組成員的任何個(gè)體成員或亞組的方式進(jìn)行描述。如本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解的，對(duì)于任何和所有目的，例如在提供書面說(shuō)明書方面，本文公開的所有范圍還包括任何和所有子范圍及其子范圍的組合。任何列出的范圍都可容易地被認(rèn)為充分地描述并使同一范圍被分成至少相等的兩份，三份，四份，五份，十份等。作為非限制性實(shí)例，本文討論的每個(gè)范圍可容易地被分為下三分之一，中間三分之一和上三分之一等。本領(lǐng)域技術(shù)人員還將理解所有用語(yǔ)，例如“最長(zhǎng)達(dá)”、“至少”、“大于”、“小于”等包括所述的數(shù)字，并且是指可以隨后被分為如上所述的子范圍的范圍。最后，如本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解的，范圍包括每個(gè)單獨(dú)的成員。因此，例如，具有1-3個(gè)物品的組是指具有1、2或3個(gè)制品的組。類似地，具有1-5個(gè)物品的組是指具有1、2、3、4或5個(gè)物品的組，諸如此類。本文已經(jīng)公開了多個(gè)方面和實(shí)施方案，而其他方面和實(shí)施方案對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員將是顯而易見的。本文公開的多個(gè)方面和實(shí)施例是為了說(shuō)明的目的，而不是限制性的，其真實(shí)范圍和精神由以下權(quán)利要求書指出。本文所引用的所有參考文獻(xiàn)，包括專利、專利申請(qǐng)、論文、教科書等，以及本文引用的參考文獻(xiàn)在其尚未被引用的程度上，以引用的方式全文納入本文。如果一篇或多篇納入的文獻(xiàn)和類似的材料與本申請(qǐng)(包括但不限于所定義的術(shù)語(yǔ)，術(shù)語(yǔ)用法，所描述的技術(shù)等)不同或相矛盾，以本申請(qǐng)為準(zhǔn)。當(dāng)前第1頁(yè)12當(dāng)前第1頁(yè)12