一種基因與藥物共輸送的plga超聲納米泡及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種集超聲成像、藥物輸送、基因治療于一體的PLGA納米泡及其制備方法。本發(fā)明采用生物相容性良好和可生物降解的PLGA為膜材料，通過(guò)雙乳化-溶劑揮發(fā)法首先制備裝載化療藥物DOX的載藥納米泡，通過(guò)PEI進(jìn)一步修飾PLGA納米泡，吸附MDR-1的shRNA質(zhì)粒形成復(fù)合納米泡。該納米泡具有良好的載藥量和包封率，釋藥具有pH響應(yīng)性，能保護(hù)所載基因，并有效沉默耐藥基因MDR-1的表達(dá)，不僅能發(fā)揮其超聲成像能力，還能同時(shí)把藥物和基因高效地運(yùn)輸?shù)侥[瘤部位協(xié)同發(fā)揮作用。
【專利說(shuō)明】—種基因與藥物共輸送的PLGA超聲納米泡及其制備方法和應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于納米材料制備領(lǐng)域，具體涉及一種基因與藥物共輸送的PLGA超聲納米泡及其制備方法和應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]超聲成像由于具有實(shí)時(shí)無(wú)創(chuàng)、靈敏度高、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)被大量應(yīng)用于疾病的臨床診斷，成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)成像的主要檢測(cè)方法之一。超聲造影劑的出現(xiàn)和不斷發(fā)展大大增強(qiáng)了超聲成像分辨率，提高了對(duì)比度。近年來(lái)研究表明超聲造影劑不僅在分子成像、血栓治療等方面具有很好的應(yīng)用價(jià)值，同時(shí)在藥物或基因體外靶向運(yùn)輸及定點(diǎn)釋放方面也取得了較大成功，這提示我們可以通過(guò)結(jié)合超聲造影劑的分子成像及藥物或基因的靶向運(yùn)輸能力來(lái)建立一種新的腫瘤治療方法。
[0003]臨床常用的微泡級(jí)超聲造影劑粒徑大，不能跨越“內(nèi)膜屏障”，且所攜帶的藥物在血管內(nèi)釋放后僅有少量進(jìn)入到腫瘤細(xì)胞內(nèi)，導(dǎo)致許多血管外疾病的診斷受到限制。隨著納米技術(shù)的發(fā)展，超聲造影劑從微米級(jí)已發(fā)展到了納米級(jí)。研究表明，腫瘤組織生長(zhǎng)迅速，血管新生快速，容易導(dǎo)致血管外膜細(xì)胞缺乏，而且腫瘤組織的淋巴回流不完善，因此納米級(jí)造影劑能穿越血管內(nèi)皮進(jìn)入組織間隙進(jìn)入并蓄積在腫瘤組織部位，從而實(shí)現(xiàn)血管外組織顯像及診斷治療。這就是腫瘤細(xì)胞的增強(qiáng)滲透與滯留效應(yīng)(Enhanced permeat1n retent1neffect, EPR)。因此，通過(guò)改性使納米級(jí)超聲造影劑作為抗癌藥物或基因的運(yùn)輸載體，不僅具有超聲成像能力，還能定點(diǎn)靶向運(yùn)輸及釋放出藥物或基因，使其成為治療診斷一體化的多功能造影劑，為腫瘤等重大疾病的早期診斷和治療提供更可靠的信息。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于:①開(kāi)發(fā)一種集超聲成像、藥物輸送、基因治療于一體的治療診斷一體化的多功能納米泡；②開(kāi)發(fā)多功能納米泡的制備方法；③以及這種多功能納米泡在腫瘤診斷和治療中的應(yīng)用，即不僅能發(fā)揮其超聲成像的能力，同時(shí)還能把藥物和基因高效地運(yùn)輸?shù)侥[瘤部位協(xié)同發(fā)揮療效作用。
[0005]本發(fā)明主要以可生物降解的PLGA(Poly (lactic-co-glycolid acid))作為載體材料，采用雙乳化溶劑揮發(fā)法來(lái)制備PLGA超聲納米泡，其內(nèi)部裝載抗癌藥物阿霉素(DOX)，并且在該納米泡表面通過(guò)聚乙酰亞胺(PEI)的修飾，從而通過(guò)靜電吸附作用連接上能逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞多藥耐藥MDR-1基因的shRNA質(zhì)粒，通過(guò)控制該納米泡的粒徑大小200_500nm左右，使其能通過(guò)EPR效應(yīng)被動(dòng)靶向腫瘤部位。該納米泡不僅能用于腫瘤的實(shí)質(zhì)成像，同時(shí)在胞內(nèi)酸性條件下首先釋放出所攜帶的基因，在細(xì)胞內(nèi)被切割成siRNA、沉默耐藥基因MDR-1的表達(dá)，逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥性，并釋放出所攜帶的藥物DOX去協(xié)同發(fā)揮療效，達(dá)到高效、快速殺死腫瘤細(xì)胞的目的。
[0006]本發(fā)明還提供上述PLGA納米泡的制備方法。其制備方法包括以下步驟:
[0007](I)按質(zhì)量比1:10-30的比例將PLGA完全溶解在CH2Cl2中，再加入藥物溶液，超聲乳化形成初乳液；再將初乳液導(dǎo)入PVA溶液中，超聲乳化，形成復(fù)乳液；在該復(fù)乳液里逐滴加入異丙醇溶液，磁力攪拌數(shù)小時(shí)，待CH2Cl2揮發(fā)完全。收集沉淀物并洗滌三次，得到載藥的納米泡。
[0008](2)上述藥物溶液的加入量為總體積的1% -10% ；PVA溶液的體積為初始體積的10-30倍；異丙醇的量為總體積的2^-10?^
[0009](3)上述載藥的PLGA納米泡冷凍干燥成凍干粉低溫保存。
[0010](4)按5-10g/L的比例將上述凍干粉載藥PLGA納米泡溶于雙蒸水中，加入EDC溶液反應(yīng)I小時(shí)；再加入PEI溶液，置于恒溫?fù)u床反應(yīng)I天；收集沉淀物，洗滌數(shù)次，冷凍干燥得到載藥PLGA/PEI凍干粉，低溫保存。
[0011](5)上述EDC溶液的加入量為反應(yīng)體積的10% -30%；PEI按納米泡與PEI的質(zhì)量比在20-100:1的量加入。
[0012](6)將上述載藥PLGA/PEI凍干粉按5_10g/L的比例溶解于雙蒸水中，混合一定量的質(zhì)粒DNA，室溫反應(yīng)I小時(shí)，得到攜載基因和藥物的PLGA納米泡。
[0013](7)上述質(zhì)粒按納米泡與質(zhì)粒質(zhì)量比10-120:1的比例加入反應(yīng)體系。
[0014](8)上述攜載基因和藥物的PLGA納米泡冷凍干燥成凍干粉可長(zhǎng)期低溫保存。
[0015]本制備方法具有操作簡(jiǎn)單、條件溫和，對(duì)設(shè)備要求低、沒(méi)有污染等優(yōu)點(diǎn)。該納米泡保存時(shí)間長(zhǎng)，便于在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用。
[0016]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果:
[0017](I)合成的DOX-PLGA NBs具有很好的穩(wěn)定性，適合長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存，有良好的載藥量和包封率。
[0018](2)納米泡所載藥物DOX釋放具有pH響應(yīng)性，都是先突釋、后緩釋的過(guò)程。
[0019](3)空載的納米泡對(duì)細(xì)胞沒(méi)有毒性，PLGA作為膜材料有安全性。
[0020](4)載藥納米泡對(duì)所載基因有保護(hù)作用，進(jìn)入腫瘤細(xì)胞后能有效轉(zhuǎn)錄，沉默目的基因MDR-1基因表達(dá)。
[0021](5)D0X-PLGA-PEI/pDNA被耐藥細(xì)胞高效內(nèi)吞后能沉默腫瘤多藥耐藥基因MDR-1基因表達(dá)，同時(shí)還可以釋放出裝載的DOX進(jìn)入到細(xì)胞核去發(fā)揮抗腫瘤作用，最終逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥性。
[0022](6)合成的復(fù)合納米泡不僅能作為藥物和基因共輸送的載體，而且還能作為超聲成像的造影劑用于超聲成像。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0023]圖1多功能PLGA納米泡的合成示意圖(A)及其立體結(jié)構(gòu)圖(B)
[0024]圖2裝載藥物和基因的PLGA納米泡(DOX-PLGA_PEI/pDNA NBs)的掃描電鏡圖(SEM 圖)
[0025]圖3裝載藥物的PLGA納米泡的藥物釋放規(guī)律曲線
[0026]圖4裝載藥物和基因的PLGA納米泡(DOX-PLGA-PEI/pDNA)沉默MDR-1基因后的反轉(zhuǎn)錄PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳圖
[0027]圖5裝載藥物和基因的PLGA納米泡(DOX-PLGA-PEI/pDNA)沉默MDR-1基因后的Real-time PCR定量檢測(cè)MDR-1基因表達(dá)圖
[0028]圖6多種PLGA納米泡作用多藥耐藥細(xì)胞株(MCF-7/ADR) 72h后的細(xì)胞存活率結(jié)果比對(duì)圖具體實(shí)施例
[0029]【具體實(shí)施方式】是對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明，并不用來(lái)限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0030]實(shí)施例1:基因與藥物共輸送的PLGA納米泡的合成
[0031]①納米泡膜由PLGA材料構(gòu)成，內(nèi)部裝載抗腫瘤藥物DOX和空氣，納米泡表面聯(lián)接PEI，并吸附逆轉(zhuǎn)多藥耐藥基因(MDR-1)的質(zhì)粒shRNA。合成示意圖和立體結(jié)構(gòu)圖如圖1所
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[0032]②控制納米泡粒徑大小，在200_500nm范圍內(nèi)，呈均一球形，在水溶液狀態(tài)下分散良好。
[0033]③通過(guò)控制納米泡粒徑大小，使其通過(guò)EPR效應(yīng)被動(dòng)靶向腫瘤部位，不僅能用于腫瘤成像；同時(shí)在胞內(nèi)酸性條件下首先釋放出所攜載基因，沉默多藥耐藥基因MDR-1的表達(dá)，逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥性；同時(shí)釋放出攜載的藥物DOX殺死腫瘤細(xì)胞，協(xié)同發(fā)揮相應(yīng)療效。
[0034]實(shí)施例2:載藥PLGA超聲納米泡的制備
[0035]①電子分析天平稱量0.2g PLGA，置于裝有5ml 二氯甲烷(CH2Cl2)玻璃瓶中，完全溶解。
[0036]②往溶解好的PLGA 二氯甲烷溶液里加入1.0ml的DOX溶液，用超聲破碎儀在20%超聲振幅下超聲乳化2min后形成W/0初乳液。
[0037]③迅速將W/0初乳液倒入30ml 1% PVA溶液中，繼續(xù)超聲乳化Imin后即可形成W/0/W復(fù)乳液。
[0038]④在該復(fù)乳液里逐滴加入1.5ml異丙醇溶液后，室溫下磁力攪拌器攪拌4h。
[0039]⑤將上述液體均勻分裝在離心管中，離心lOmin，棄上清，收集沉淀物。重新加入適量雙蒸水，離心，棄上清，重復(fù)清洗3次。
[0040]⑥將清洗好的沉淀物加入0.4ml雙蒸水混勻，置于真空冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥約24h后即可得到PLGA納米泡的凍干粉。
[0041]⑦把凍干粉置于4°C冰箱中保存?zhèn)溆谩?br> [0042]本實(shí)例所得納米泡為大小均勻的球形，表面光滑、分散性較好，大小為270nm左右。載藥量和包封率達(dá)到3.6%和70.9%。
[0043]實(shí)施例3:—種基因與藥物共輸送的PLGA超聲納米泡的制備
[0044]①按實(shí)施例2方法先制備得到DOX-PLGA NBs0
[0045]②稱取15mg DOX-PLGA NBs溶于1.5ml雙蒸水溶液里，加入400 μ I EDC溶液，反應(yīng)Ih0
[0046]③按納米泡與PEI在20:1質(zhì)量比下加入PEI溶液，置于恒溫?fù)u床中，37°C反應(yīng)12h。
[0047]④將上述反應(yīng)液置于離心管中，離心，棄上清，加入雙蒸水洗滌，離心、棄上清。共重復(fù)5次。
[0048]⑤最后冷凍干燥后即得DOX-PLGA-PEI NBs凍干粉，4°C儲(chǔ)存?zhèn)洹?br> [0049]⑥實(shí)驗(yàn)前按50:1質(zhì)量比把合成好的DOX-PLGA-PEI NBs與pDNA混合，室溫靜置30min以上即可使用。
[0050]本實(shí)例所得產(chǎn)品的電鏡圖如圖2所示，納米泡為大小均勻的球形、分散性較好，大小為300nm。
[0051]實(shí)施例4:攜載基因和藥物的納米泡(DOX-PLGA-PEI NBs)體外釋放DOX實(shí)驗(yàn)
[0052]載藥納米泡進(jìn)入到細(xì)胞后能釋放裝載的藥物是其發(fā)揮療效的前提，因此我們分別對(duì)比研究了 DOX-PLGA NBs與DOX-PLGA-PEI NBs在不同pH值條件下的藥物釋放規(guī)律，對(duì)實(shí)施例2、3制備得到的納米泡進(jìn)行體外藥物釋放試驗(yàn)。具體步驟如下:取12個(gè)小玻璃瓶，分為2組，每組各6個(gè)瓶子，分別稱取5mg DOX-PLGA NBs粉末和DOX-PLGA-PEI NBs置于其中，其中3個(gè)瓶中加入2ml pH值為7.4的PBS溶液，另外3個(gè)瓶子加入2ml pH值為4.4的PBS溶液。置于恒溫?fù)u床中(37°C, 10rpm)振蕩，分別間隔0.5、1、4、8、12、24、48、72、84、104、128、140h后離心取上清，用紫外分光光度計(jì)在486nm處測(cè)OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的DOX釋放量，再計(jì)算出累積釋放量。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。結(jié)果如圖3所示，不管載藥納米泡是否被PEI所修飾，在酸性條件下的藥物釋放速率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于中性條件下的釋放，而且都是呈兩級(jí)釋放。而在同一PH條件下，PEI修飾的納米泡其藥物釋放速率要低于沒(méi)有PEI修飾的粒子，例如pH 4.4條件下，DOX-PLGA-PEI NBs在140h后藥物釋放了 85%左右，而相同條件下的DOX-PLGA NBs的藥物釋放為70%，說(shuō)明了 PEI的修飾會(huì)阻滯部分藥物的快速釋放，但仍然緩慢能釋放出所載藥物去發(fā)揮相應(yīng)療效，且藥物釋放具有PH響應(yīng)性。
[0053]實(shí)施例5:攜載基因和藥物的納米泡(DOX-PLGA-PEI/pDNA NBs)靶基因沉默效率實(shí)驗(yàn)
[0054]為了評(píng)估DOX-PLGA-PEI NBs作為MDR-1 shRNA基因載體的有效性，把DOX-PLGA-PEI NBs與連有MDR-1 shRNA的質(zhì)粒載體(pDNA)分別驗(yàn)證它們對(duì)其靶基因MDR-1的沉默效率，接下來(lái)我們用連有基因的復(fù)合納米泡轉(zhuǎn)染多藥耐藥細(xì)胞株(MCF-7/ADR細(xì)胞)，通過(guò)PCR來(lái)檢查MDR-1基因水平的表達(dá)。具體步驟如下:
[0055]①將MCF-7/ADR細(xì)胞消化后，按細(xì)胞密度為3 X 15個(gè)/孔接種到培養(yǎng)板里，孵育24h待細(xì)胞貼壁。
[0056]②分別按以下分組對(duì)細(xì)胞進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染。每組使用的pDNA量為4yg。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，
[0057]每個(gè)濃度分組設(shè)置5個(gè)復(fù)孔。
[0058]第一組:空白對(duì)照，不加納米泡及pDNA
[0059]第二組:Lipo2000( μ I):pDNA( μ g) =2:1
[0060]第三組:Lipo2000( μ I):SC pDNA ( μ g)(亂序質(zhì)粒)=2:1
[0061]第四組:PLGA_PEINBs ( μ g):pDNA( μ g) = 100:1
[0062]第五組:D0X-PLGA_PLGANBs ( μ g):pDNA (μ g) = 100:1
[0063]③分別轉(zhuǎn)染細(xì)胞72h后，提取細(xì)胞總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA后，分別通過(guò)普通PCR和Real time PCR對(duì)MDR-1的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。
[0064]結(jié)果如圖4所示，當(dāng)用轉(zhuǎn)染試劑Lipo 2000來(lái)轉(zhuǎn)染MDR-1 shRNA質(zhì)粒時(shí)，發(fā)現(xiàn)MDR-1的基因表達(dá)水平明顯下調(diào)，而用PLGA-PEI/shRNA NBs和D0X_PLGA_PEI/shRNA NBs來(lái)轉(zhuǎn)染pDNA，也能明顯下調(diào)MDR-1基因的表達(dá)，且轉(zhuǎn)染及沉默效率與轉(zhuǎn)染試劑Lipo 2000的效率相當(dāng)，通過(guò)Real-time PCR進(jìn)一步對(duì)基因表達(dá)定量分析也得到相同的結(jié)果，如圖5所示。這個(gè)結(jié)果就說(shuō)明DOX-PLGA-PEI/shRNA NBs不僅能作為基因的有效遞送載體，而且還具有很好的基因沉默效應(yīng)，能夠協(xié)同藥物共同發(fā)揮抗腫瘤的作用。
[0065]實(shí)施例6:攜載基因和藥物的納米泡(DOX-PLGA-PEI/pDNA NBs)的抗腫瘤作用實(shí)驗(yàn)
[0066]①將多藥耐藥的細(xì)胞(MCF-7/ADR細(xì)胞)培養(yǎng)、消化后，按細(xì)胞密度為7X 13個(gè)/孔接種到96孔板中，孵育24h待細(xì)胞貼壁。
[0067]②棄去舊的培養(yǎng)基，分別加入含有藥物濃度為3.5、14.0,28.0μ g/ml的游離D0X、DOX-PLGA NBs,DOX-PLGA-PEI NBs 以及 DOX-PLGA-PEI/pDNA NBs 的培養(yǎng)基。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，每個(gè)濃度分組設(shè)置5個(gè)復(fù)孔。同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照和陰性對(duì)照孔。
[0068]③繼續(xù)與細(xì)胞孵育72h后，棄去舊培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞3次以上。
[0069]④在每孔內(nèi)加入含有10 μ I CCK-8的培養(yǎng)基孵育lh，用酶標(biāo)儀檢測(cè)在450nm處的光吸收值。按以下公式計(jì)算細(xì)胞存活率，細(xì)胞存活率=(A^ms-Asm)/(Aws-Asm),每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。
[0070]圖6表示的是各種載藥納米泡與多藥耐藥的細(xì)胞(MCF-7/ADR)作用72h后的腫瘤細(xì)胞存活率結(jié)果，可以看到:細(xì)胞毒性與藥物濃度呈正關(guān)，比起其他處理組，DOX-PLGA-PEI/pDNA處理的細(xì)胞組，細(xì)胞存活率被抑制的最為明顯，特別在DOX濃度為28 μ g/ml時(shí)，90%細(xì)胞的存活率都被抑制。比起游離的DOX組，空載的納米泡PLGA NBs處理的細(xì)胞組細(xì)胞存活率沒(méi)有改變，再次證明了載體本身具有很好的生物相容性，而細(xì)胞毒性是由DOX所導(dǎo)致。該實(shí)驗(yàn)說(shuō)明了 DOX-PLGA-PEI/pDNA被耐藥腫瘤細(xì)胞高效內(nèi)吞后，釋放出裝載的DOX進(jìn)入到細(xì)胞核去發(fā)揮抗腫瘤作用，同時(shí)還能沉默腫瘤多藥耐藥基因表達(dá)，逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥性，最終達(dá)到殺死腫瘤細(xì)胞、治療腫瘤的作用。
[0071]以上所述為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，但本發(fā)明不應(yīng)該局限于該實(shí)施例所公開(kāi)內(nèi)容。所以凡是不脫離本發(fā)明所公開(kāi)的原理下完成的等效或修改，都落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種基因與藥物共輸送的PLGA納米泡，其特征在于:所述納米泡膜由PLGA材料構(gòu)成，內(nèi)部裝載抗腫瘤藥物和空氣，納米泡表面聯(lián)接PEI并吸附基因。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述PLGA納米泡，其特征在于:納米泡粒徑200-500nm，呈均一球形，在水溶液狀態(tài)下分散良好。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述PLGA納米泡，其特征在于:內(nèi)部裝載的抗腫瘤藥物是DOX，吸附的基因是腫瘤多藥耐藥基因MDR-1的shRNA質(zhì)粒。
4.一種制備方法如權(quán)利要求1-3所述PLGA納米泡，其特征在于，包括下述步驟: A.將PLGA溶解在CH2Cl2中，再加入DOX水溶液，超聲乳化形成初乳液； B.再將初乳液導(dǎo)入PVA溶液中，超聲乳化，形成復(fù)乳液； C.在該復(fù)乳液里逐滴加入異丙醇溶液，磁力攪拌； D.收集沉淀物并洗滌，得到載藥的納米泡； E.上述載藥DOX的PLGA納米泡冷凍干燥成凍干粉低溫保存； F.將上述凍干粉載藥PLGA納米泡溶于雙蒸水中，加入EDC溶液反應(yīng)； G.再加入PEI溶液反應(yīng)； H.收集沉淀物，洗滌數(shù)次，冷凍干燥得到載藥PLGA/PEI凍干粉，低溫保存； 1.將上述載藥PLGA/PEI凍干粉溶解于雙蒸水中，混合質(zhì)粒DNA，室溫反應(yīng)，得到攜載基因和藥物的PLGA納米泡； J.上述攜載基因和藥物的PLGA納米泡冷凍干燥成凍干粉，長(zhǎng)期低溫保存。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基因與藥物共輸送的PLGA納米泡的制備方法，其特征在于，步驟A中所述PLGA和CH2Cl2的質(zhì)量比為1:10-30 ;步驟A所述DOX溶液的加入量為總體積的 1% -10%。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基因與藥物共輸送的PLGA納米泡的制備方法，其特征在于，步驟B所述PVA溶液的濃度為1-3%，其體積為初始體積的10-30倍；步驟B所述超聲振幅為15% -45% ;步驟C所述異丙醇的量為總體積的2% -10%。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基因與藥物共輸送的PLGA納米泡的制備方法，其特征在于，步驟F所述凍干粉載藥PLGA按5-10g/L的比例溶解于雙蒸水中；步驟F所述EDC溶液的加入量為反應(yīng)總體積的10% -30%。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基因與藥物共輸送的PLGA納米泡的制備方法，其特征在于，步驟G所述PEI按納米泡與PEI的質(zhì)量比20-100:1的量加入。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基因與藥物共輸送的PLGA納米泡的制備方法，其特征在于，步驟I所述載藥D0X-PLGA/PEI凍干粉按按5_10g/L的比例溶于雙蒸水中；步驟I所述質(zhì)粒按納米泡與質(zhì)粒質(zhì)量比10-120:1的比例加入反應(yīng)體系。
10.一種如權(quán)利要求1或4所述PLGA納米泡，在腫瘤診斷和治療中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K49/22GK104225633SQ201410450227
【公開(kāi)日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2014年9月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月5日
【發(fā)明者】劉貽堯, 楊紅, 鄧力蔚 申請(qǐng)人:電子科技大學(xué)