米諾環(huán)素在制備治療慢性缺血性血管性癡呆藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了米諾環(huán)素在制備治療慢性缺血性血管性癡呆藥物中的應(yīng)用，本發(fā)明利用小鼠單側(cè)頸總動脈結(jié)扎模型模擬慢性血管性癡呆，在手術(shù)造模后給予不同劑量的米諾環(huán)素，探索藥物對慢性缺血性血管性癡呆的治療作用。本發(fā)明通過新事物識別和Morris水迷宮實驗評價藥物對慢性缺血后小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的作用，并通過白質(zhì)染色、髓鞘標(biāo)志性蛋白MBP免疫組化和免疫印跡實驗、電鏡實驗、NF200免疫組化染色、少突膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)前體免疫組化染色計數(shù)等實驗評價藥物對慢性缺血引起的小鼠腦白質(zhì)髓鞘損傷的作用，從而探討米諾環(huán)素對慢性缺血性血管性癡呆的治療作用。本發(fā)明對慢性缺血性血管性癡呆的治療具有重要意義。
【專利說明】米諾環(huán)素在制備治療慢性缺血性血管性癡呆藥物中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及米諾環(huán)素的藥物用途，尤其涉及米諾環(huán)素在制備 治療慢性缺血性血管性癡呆藥物中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 血管性癡呆是目前繼老年性癡呆（阿爾茲海默病）之后，臨床發(fā)病率排在第二位 的認知障礙性疾病。其中由慢性缺血再灌導(dǎo)致小血管疾病而引起的缺血性血管性癡呆是其 主要類型之一。導(dǎo)致慢性缺血性血管性癡呆的危險因素眾多，如高血壓、高血脂、糖尿病、心 臟病等。針對此類病變，目前臨床上主要以控制危險因素等防范措施為主，藥物治療（如膽 堿酯酶抑制劑、血管擴張藥等）的療效有限，且不能有效逆轉(zhuǎn)已經(jīng)發(fā)生的損傷、減緩疾病的 進程，到目前為止還沒有針對慢性缺血性血管性癡呆的特效藥物，這也成為臨床慢性缺血 性血管性癡呆治療的重大難題，所以尋找新的防治藥物迫在眉睫。
[0003] 米諾環(huán)素是一個半合成的第二代四環(huán)素，被用來治療多種感染性疾病，具有較小 的不良反應(yīng)。但是由于四環(huán)素的抗菌耐藥性和其他新的抗生素的產(chǎn)生，米諾環(huán)素作為抗生 素的使用在臨床上有所下降。近期除了抗菌作用外，米諾環(huán)素還被發(fā)現(xiàn)有新的功能，如抗 炎、抗凋亡等。由于米諾環(huán)素具有較高的脂溶性，所以容易通過血腦屏障。因此，米諾環(huán)素 可以用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。但迄今，尚未見有關(guān)米諾環(huán)素在慢性血管性癡呆中應(yīng)用 的報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明采用右側(cè)頸總動脈永久結(jié)扎（right unilateral common carotid occlusion，rUCCAO)造成慢性缺血模擬慢性血管性癡呆，考察米諾環(huán)素對慢性血管性癡呆 的治療作用。本發(fā)明通過新事物識別和Morris水迷宮實驗評價藥物對慢性缺血的小鼠空 間學(xué)習(xí)記憶能力的作用，并通過白質(zhì)染色（Kliiver-Barrera染色）、髓鞘標(biāo)志性蛋白MBP免 疫組化染色和免疫印跡實驗、電鏡觀察髓鞘損傷情況、NF-200染色考察軸突損傷情況、少突 膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)前體免疫組化染色計數(shù)等實驗評價藥物對慢性缺血引起的小鼠腦白 質(zhì)損傷的作用，探討米諾環(huán)素對慢性缺血性血管性癡呆的治療作用。
[0005] 結(jié)果顯示給予米諾環(huán)素不同劑量能逆轉(zhuǎn)慢性缺血誘導(dǎo)的小鼠新事物識別分數(shù)的 下降，并逆轉(zhuǎn)慢性缺血誘導(dǎo)的小鼠尋找平臺潛伏期的延長。并且，給予米諾環(huán)素能顯著逆轉(zhuǎn) 慢性缺血誘導(dǎo)的白質(zhì)神經(jīng)纖維損傷、MBP蛋白表達的減少、髓鞘損傷和軸突損傷。進一步研 究發(fā)現(xiàn)米諾環(huán)素可以減少少突膠質(zhì)細胞的死亡、促進少突膠質(zhì)前體細胞的增殖，由此減輕 白質(zhì)髓鞘損傷、促進髓鞘再生。以上結(jié)果表明米諾環(huán)素可用于慢性缺血性血管性癡呆疾病 的治療。
[0006] 本發(fā)明的有益效果是，米諾環(huán)素可以改善學(xué)習(xí)記憶能力，減輕缺血后的白質(zhì)損傷， 因此可以用于治療慢性缺血性血管性癡呆，在制備治療慢性缺血性血管性癡呆藥物中具有 廣闊的應(yīng)用前景。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0007] 圖1米諾環(huán)素對慢性缺血小鼠新事物識別測試的影響，其中:與假手術(shù)組相比 P〈0. 01 :和慢性缺血組相比P〈0. 01 :和慢性缺血組相比P〈0. 001 ;
[0008] 圖2米諾環(huán)素對慢性缺血小鼠 Morris水迷宮測試的影響，其中:與sham組相 比P〈0. 01 :和慢性缺血組相比P〈0. 05 :和慢性缺血組相比P〈0. 01 ;
[0009] 圖3米諾環(huán)素對慢性缺血小鼠白質(zhì)纖維損傷的影響，其中:與假手術(shù)組相比 P〈0. 01 :和慢性缺血組相比P〈0. 05 :和慢性缺血組相比P〈0. 001 ;標(biāo)尺為50 μ m ;
[0010] 圖4米諾環(huán)素對慢性缺血小鼠髓鞘蛋白MBP表達的影響，其中A為免疫組化結(jié)果； B為免疫印跡結(jié)果；:與假手術(shù)組相比P〈0. 01 ;### :與假手術(shù)組相比P〈0. 001 :和慢 性缺血組相比P〈〇. 001 ;標(biāo)尺為50 μ m ;
[0011] 圖5米諾環(huán)素對慢性缺血后小鼠髓鞘的影響，A-C :假手術(shù)組；D-F :慢性缺血組； G-K :米諾環(huán)素組；其中:與假手術(shù)組相比P〈0. 01 ;### :與假手術(shù)組相比P〈0. 001 :與 慢性缺血組相比P〈〇. 01，:與慢性缺血組相比P〈〇. 001 ;A，D，G :放大倍數(shù)為8900,標(biāo)尺 為1μπι;Β，Ε，Η(為A，D，G虛線框內(nèi)部分放大圖）：放大倍數(shù)為39000,標(biāo)尺為200nm;C，F(xiàn)， 1(為B，E，H虛線框內(nèi)部分放大圖）：放大倍數(shù)為135000,標(biāo)尺為50nm;
[0012] 圖6米諾環(huán)素對慢性缺血后小鼠胼胝體部位軸突的影響，其中:與假手術(shù)組相 比P〈0. 01 :與慢性缺血組相比P〈0. 01 ;標(biāo)尺為50 μ m ;
[0013] 圖7米諾環(huán)素對慢性缺血后小鼠胼胝體部位少突膠質(zhì)細胞數(shù)量的影響，其中### : 與假手術(shù)組相比P〈〇. 〇〇1 :與慢性缺血組相比P〈〇. 01 ;標(biāo)尺為50 μ m ;
[0014] 圖8米諾環(huán)素對慢性缺血后小鼠胼胝體部位少突膠質(zhì)前體細胞數(shù)量的影響，其中 :與假手術(shù)組相比P〈〇. 01 :與慢性缺血組相比P〈〇. 001 ;標(biāo)尺為50 μ m ;
[0015] 圖9米諾環(huán)素對慢性缺血后小鼠側(cè)腦室下區(qū)增殖的少突膠質(zhì)前體細胞數(shù)量的影 響，A :側(cè)腦室下區(qū)增殖的細胞（BrdU陽性）數(shù)目；B :側(cè)腦室下區(qū)增殖的少突膠質(zhì)前體細胞 計數(shù)，其中:與假手術(shù)組相比P〈〇. 01 :與慢性缺血組相比P〈〇. 05 ;標(biāo)尺為50 μ m。

【具體實施方式】
[0016] 下面結(jié)合附圖和具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明，但并不因此將本發(fā)明限制 在所述的實施例范圍之內(nèi)。
[0017] 實施例一米諾環(huán)素對慢性缺血后小鼠新事物識別測試的影響
[0018] 1.動物設(shè)組：雄性C57/6J小鼠，隨機分組，實驗開始前適應(yīng)環(huán)境一周。分組如表 1. 1
[0019] 表1. 1實驗一所需動物及設(shè)組情況
[0020]

【權(quán)利要求】
1. 米諾環(huán)素在制備治療慢性缺血性血管性癡呆藥物中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述米諾環(huán)素在制備治療慢性缺血性血管性癡呆藥物中的應(yīng)用，其 特征在于，米諾環(huán)素通過減少少突膠質(zhì)細胞的死亡、促進少突膠質(zhì)前體細胞的增殖，來減輕 白質(zhì)髓鞘損傷、促進髓鞘再生，從而減輕白質(zhì)神經(jīng)纖維的損傷，最終改善學(xué)習(xí)記憶能力。
【文檔編號】A61P25/28GK104055783SQ201410300272
【公開日】2014年9月24日 申請日期:2014年6月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月26日
【發(fā)明者】陳忠, 胡薇薇, 馬婧, 張翔南, 張菁 申請人:浙江大學(xué)