米氏海參皂苷a及制備和用途
【專利摘要】本發(fā)明提供一種米氏海參皂苷A，從海洋無脊椎動物米氏海參中提供滲漉、萃取、反相硅膠(ODS)柱層析分離得到米氏海參總皂苷，再經(jīng)反相硅膠柱層析分離，減壓濃縮得到米氏海參皂苷A。本發(fā)明的米氏海參皂苷A顯著抑制大鼠腦膠質瘤C6、人腦膠質瘤U87-MG、U251和SHG-44多種細胞的增殖，誘導腫瘤細胞凋亡，降低腫瘤細胞特征代謝過程中多個關鍵酶的蛋白水平表達，具有獨特的多靶點抗膠質瘤的作用特性。因此，可在制備治療腦膠質瘤藥物中應用。米氏海參皂苷A的化學結構式為：。
【專利說明】米氏海參皂苷A及制備和用途

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬醫(yī)藥領域，涉及米氏海參皂苷A(M〇ebi〇Side A)，以及從海洋無脊椎動物 米氏海參ffiodii)中制備該抗腫瘤活性化合物米氏海參阜苷A (Moebioside A)的方法和在制備治療腦膠質瘤藥物方面的應用。

【背景技術】
[0002] 腦膠質瘤（腦膠質細胞瘤）是腦顱內最常見和最惡性的腦腫瘤，約占顱內腫瘤的 46%，占所有惡性腦腫瘤的70%。世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明：惡性膠質瘤是34歲以下腫瘤 患者的第2位死亡原因，是35?54歲患者的第3位死亡原因，嚴重危害人類的健康及生命。 手術后結合放療和替莫唑胺化療是目前治療惡性膠質瘤最普遍方法。對新診斷的患者，替 莫唑胺目前是唯一可選擇的單一治療的化療藥。但是，包括替莫唑胺在內的現(xiàn)有治療膠質 瘤藥物的療效有限，多有嚴重不足，突出表現(xiàn)為：（1)多為化學品，毒副作用大；（2)腫 瘤細胞對藥物的嚴重耐藥性；（3)血腦屏障阻礙了藥物到達腦內發(fā)揮其療效。因此，臨床 上需要克服以上缺陷，療效更好、安全性更高和作用機制獨特的新型抗膠質瘤藥物。
[0003] 研究證明，膠質瘤細胞表現(xiàn)出與正常細胞不同的代謝特征。膠質瘤細胞從微環(huán)境 中攝取大量葡萄糖在糖酵解環(huán)節(jié)由膠質瘤細胞高表達的多個關鍵酶包括己糖激酶2 (HK2)、 磷酸果糖激酶/果糖2, 6-二磷酸酶（PFKFB3)、丙酮酸激酶M2(PKM2)和乳酸脫氫酶5(LDH5) 等共同參與產(chǎn)生大量中間產(chǎn)物和終產(chǎn)物乳酸。這些中間產(chǎn)物是腫瘤細胞合成生物大分子的 起始原料，而乳酸分泌至細胞外可抑制機體免疫細胞對腫瘤細胞的清除能力，可促進腫 瘤細胞擴散，高表達的糖酵解關鍵酶HK2還可提高腫瘤細胞對放療和替莫唑胺化療的抗 性。此外，谷氨酰胺酶（GLS)主導的旺盛的谷氨酰胺分解（供給氮源和碳源）、膠質瘤細胞 高表達脂肪酸合成酶（FASN)和活躍的脂類合成利于大量生物分子和細胞膜的生成，抑制 FASN活性具有抗腫瘤作用。不難理解，正是腫瘤細胞高度利用其代謝中間產(chǎn)物合成生物大 分子DNA、RNA、蛋白質和生物膜的能力促使其快速無限制地增殖，調控腫瘤代謝不同環(huán)節(jié) 的關鍵酶可有效抑制腫瘤細胞的增殖。因此，靶向膠質瘤代謝不同環(huán)節(jié)關鍵酶的多靶點作 用的藥物具有更好的抗腫瘤療效。


【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種具有抗膠質瘤活性的化合物米氏海參皂苷A (Moebioside A,化合物1)，所述的米氏海參阜苷A的化學結構式為：

【權利要求】
1. 一種米氏海參皂苷A，其特征在于，具有以下化學結構式：
〇
2. 根據(jù)權利要求1所述的米氏海參皂苷A的制備方法，其特征在于，通過以下步驟實 現(xiàn)： (1) 米氏海參總皂苷提取 將冷凍的米氏海參切塊，用甲醇滲漉提取，甲醇滲漉液合并后經(jīng)減壓濃縮得到濃縮 的甲醇提取液，濃縮的甲醇提取液先后用環(huán)己烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取，合并正丁醇萃 取液并經(jīng)減壓濃縮得到正丁醇萃取物浸膏，正丁醇萃取物浸膏溶于水中，水溶解物經(jīng)大孔 樹脂柱層析分離，分別用10%甲醇水和80%甲醇水依次洗脫，合并80%甲醇洗脫液并經(jīng)減 壓濃縮得到粗總皂苷組分，粗總皂苷溶于水中經(jīng)反相硅膠柱層析分離，先用30%甲醇水洗 脫，再用70%甲醇水洗脫，每300毫升1份，分段收集70%甲醇洗脫液，各收集組分中所 含有的皂苷用反相硅膠薄層層析檢測，甲醇/水，70:30,10%硫酸105 °C加熱顯色，將顯紫 紅色斑點的組分合并，減壓濃縮得到米氏海參總皂苷； (2) 米氏海參皂苷A的提取分離純化 米氏海參總皂苷溶于水中經(jīng)反相硅膠柱層析分離，先用30%甲醇水洗脫，再用65%甲 醇水洗脫，每100毫升1份，分段收集65%甲醇洗脫液，各收集組分中所含有的米氏海參 皂苷A用反相硅膠薄層層析檢測，甲醇/水，70:30, 10%硫酸105 °C加熱顯色，將顯紫紅色 斑點的相同組分合并，減壓濃縮得到米氏海參皂苷A ; (3) 米氏海參皂苷A的理化性質和結構鑒定 根據(jù)米氏海參皂苷A的1Η譜，13C譜，COSY譜，HMQC譜，HMBC譜和高分辨質譜鑒定，米氏 海參皂苷A為無色粉末，分子式C43H65Na019S，溶于甲醇、乙醇、吡啶，不溶于氯仿、乙酸乙酯， Rf 值為 〇. 56。
3. 根據(jù)權利要求2所述的米氏海參皂苷A的制備方法，其特征在于，所述的滲漉提取 用的溶媒為甲醇、或乙醇，所述大孔樹脂柱層析大孔樹脂用量與樣品量的比例是10-30毫 升：1克，所述反相硅膠柱層析0DS用量與樣品量的比例是30-60克：1克。
4. 根據(jù)權利要求1所述的米氏海參皂苷A在制備治療膠質瘤藥物中的應用。
5. 根據(jù)權利要求4所述的應用，其特征在于，所述藥物為米氏海參皂苷A活性物質單獨 或與其他藥物或有效成分一起，與藥學上可接受的賦形劑制成。
6. 根據(jù)權利要求5所述的應用，其特征在于，所述藥物的制劑形式為液體制劑、固體制 劑。
【文檔編號】A61K31/7048GK104045682SQ201410210807
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2014年5月19日 優(yōu)先權日:2014年5月19日
【發(fā)明者】張治針, 虞斯然, 陳璐, 連曉媛 申請人:浙江大學