核因子-kb多肽抑制劑5及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】核因子-KB多肽抑制劑5及其應(yīng)用，本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及具有抑制核因子－KB，能預(yù)防和治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的多肽。其序列為SHGGLPCQNS是全新的序列，本發(fā)明的有益效益是可用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，具有潛在的新藥開發(fā)價(jià)值。
【專利說明】核因子-KB多肽抑制劑5及其應(yīng)用
[0001]【技術(shù)領(lǐng)域】:
本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及用于預(yù)防和治療或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的核因子一 KB多肽抑制劑。
[0002]【背景技術(shù)】: 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是臨床最常見的炎性關(guān)節(jié)病和主要致殘因素之一。在全世界約為0.5%-1.0%，RA的發(fā)病在我國約為0.4%。RA可發(fā)生于任何年齡，隨著年齡的增長，發(fā)病率也隨之增高。女性高發(fā)年齡為45-55歲，性別與RA發(fā)病關(guān)系密切，男女之比約1:3。RA是一種病因尚未明了的慢性全身性炎癥性疾病，以慢性、對稱性、多滑膜關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)外病變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)，屬于自身免疫炎性疾病?；颊叱Ｒ允植炕蛲蟛刻弁醇澳[脹(特別是腕背部的腫脹)為首發(fā)癥狀，癥狀持續(xù)不緩解，普通的對癥治療雖可以緩解癥狀，但常常由于用藥不規(guī)則或不足量而導(dǎo)致癥狀反復(fù)。病情進(jìn)展時(shí)可以出現(xiàn)明顯的晨僵，通?？蛇_(dá)I小時(shí)以上，并不斷加重；同時(shí)出現(xiàn)一定的關(guān)節(jié)功能障礙。
[0003]類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全明了，其基本病理特點(diǎn)是血管炎和滑膜炎。關(guān)節(jié)內(nèi)滑膜血管增生，形成血管翳，導(dǎo)致滑膜增厚，滲出增多，分泌多種細(xì)胞因子，侵犯軟骨并引起骨質(zhì)損害。對其周圍的肌腔、韌帶、腱鞘以及肌肉等組織也均可侵蝕，從而影響關(guān)節(jié)的穩(wěn)定，容易發(fā)生關(guān)節(jié)畸形而出現(xiàn)功能障礙。血管炎亦可侵犯周身各臟器組織，形成系統(tǒng)性疾病。
[0004]目前治療RA的藥物分為兩大類:控制癥狀藥和控制疾病藥。由于RA病因不明，故當(dāng)今并無堪稱控制疾病的藥?？刂瓢Y狀的抗風(fēng)濕藥分為四類:一、非留體類抗炎藥，通常稱為一線藥，這類藥物種類繁多，國內(nèi)市場已多達(dá)數(shù)十種。二、類固醇激素，激素是一個(gè)非常好的止痛抗炎藥，但長期單獨(dú)使用不能改善病情，反而帶來許多副作用，激素作為二線慢作用藥起效前的過渡性用是可以的，但用量要小，時(shí)間不宜過長。在病情較重，伴有關(guān)節(jié)外表現(xiàn)的患者，短期治療沖擊，并聯(lián)合二線藥治療時(shí)必須的。三、慢作用抗風(fēng)濕藥，通常稱為二線藥，所謂慢作用藥包括抗瘧藥、金鹽、青霉胺和柳氮碘胺吡啶，它們治療RA起效慢，長期作用對RA病情有一定緩解作用，故也稱病情改善藥。四、免疫抑制劑:常用有甲氨喋呤、環(huán)磷酰胺、硫唑嘌呤、雷公藤、青風(fēng)藤等。
[0005]核因子-KB是一種廣泛存在于細(xì)胞內(nèi)的核轉(zhuǎn)錄因子，與關(guān)節(jié)炎中炎癥的發(fā)生，軟骨損傷，細(xì)胞遷移以及血管翳的形成都有重要的關(guān)系。以核因子-KB為作用靶點(diǎn)，可能成為治療關(guān)節(jié)炎等疾病的新途徑。非留體類抗炎藥，糖皮質(zhì)激素、糖胺聚糖以及新型蛋白酶體抑制劑等發(fā)現(xiàn)都可抑制核因子-KB的激活。另外，核因子-KB誘騙性寡脫氧核苷酸和SiRNA干擾治療也取得了可喜的成就。盡管如此，并沒有成熟開發(fā)的核因子一 KB多肽抑制劑問世，用于治療RA。
[0006]
【發(fā)明內(nèi)容】
:
本發(fā)明目的是針對現(xiàn)有核因子-KB拮抗劑的特點(diǎn)，設(shè)計(jì)一種分子量小的核因子-KB多肽拮抗劑，可以避免產(chǎn)生抗原反應(yīng)，更加適用于臨床的應(yīng)用。
[0007]本發(fā)明技術(shù)方案是提供一種核因子一 KB多肽抑制劑5，其序列為SHGGLPCQNS，及在制備治療或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。
[0008]有益結(jié)果:
本發(fā)明中的核因子一 KB多肽抑制劑5序列SHGGLPCQNS，可以靶向抑制核因子一 KB，抑制核因子一 KB受體產(chǎn)生的生理或病理的效應(yīng)，達(dá)到預(yù)防或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的效果。
[0009]發(fā)明人經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)獲知核因子一 KB多肽抑制劑5能夠抑制佐劑型大鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和DBA/1小鼠膠原型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)展，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明具有顯著的治療類風(fēng)濕型關(guān)節(jié)炎的效果，并且副作用少，用量少成本降低。說明本發(fā)明設(shè)計(jì)的核因子一 KB多肽抑制劑5科學(xué)、合理、可行有效，能作為治療或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0010]實(shí)施例1
核因子一 KB多肽抑制劑5在膠原誘導(dǎo)小鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型體內(nèi)免疫保護(hù)作用構(gòu)建膠原型小鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型，研究核因子一 KB多肽抑制劑5對小鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(collagen induced arthritis, CIA)的治療作用。采用小鼠作為受試動(dòng)物，SPF級DBA/1小鼠90只(由上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司(Sino-British SIPPR Lab.Animal Ltd)提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號碼:SCXK (滬)2008-0016)，雄性，7-8周齡，體重為18-22 g，隨機(jī)分成6組，分別是正常對照組，模型對照組，多肽抑制劑5低中高3個(gè)劑量組(0.4,0.8,1.6 mg/kg)和陽性藥對照組(甲氨蝶呤2 mg/kg)。除正常組外，第O天各實(shí)驗(yàn)組建立小鼠CIA模型，方法是雞軟骨II型膠原(c II )用0.1 mol/1醋酸溶解成4 mg/ml的溶液，于4°C冰箱過夜。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天用II型膠原與含4 mg/ml Myeobaeterium tuberculosisstrain H37Rv的完全弗氏佐劑(CFA)等體積充分乳化，待DBA/1小鼠麻醉后，于其尾部皮內(nèi)每只注射乳化劑50 μ?進(jìn)行致敏，21 d后用4 mg/ml的II型膠原(c II )與不完全弗氏佐劑(IFA)等體積充分乳化 后以相同劑量的乳化劑于尾部進(jìn)行再次免疫。造模第30 d起皮下注射給藥:多肽5的3個(gè)劑量組(0.4,0.8,1.6 mg/kg ):每日兩次,連續(xù)10天；陽性藥對照組(甲氨蝶呤2 mg/kg ):每五天一次，連續(xù)3次；正常對照組和模型對照組(生理鹽水):連續(xù)10天。分別于造模后第21天至第70天每3天稱量體重、關(guān)節(jié)評分、分別檢測左右后足足踝直徑來觀察藥物對小鼠膠原型關(guān)節(jié)炎的影響。
[0011]結(jié)果:造模后小鼠與正常小鼠相比較，免疫后第27天，CIA小鼠足爪紅腫，關(guān)節(jié)炎指數(shù)評分增高，模型組第45-60天為腫脹高峰，模型組自第35天開始體重幾乎不增加，后期還略微有下降。核因子一 KB多肽抑制劑5在膠原誘導(dǎo)小鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型體內(nèi)免疫保護(hù)作用具體結(jié)果如下:
核因子一 KB多肽抑制劑5對小鼠膠原型關(guān)節(jié)炎左足足爪腫脹度的影響，陽性對照組、核因子一 KB多肽抑制劑5高、中、低劑量組左后足踝直徑與模型組比較，均有極顯著性差異(P〈0.01)實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。核因子一 KB多肽抑制劑5對小鼠膠原型關(guān)節(jié)炎右足足爪腫脹度的影響，陽性對照組、核因子一 KB多肽抑制劑5高、中、低劑量組右后足踝直徑與模型組比較，均有極顯著性差異(P〈0.01)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。核因子一 KB多肽抑制劑5對膠原型關(guān)節(jié)炎小鼠臨床評分的影響，多肽5低、中、高劑量組四肢評分顯著低于模型對照組(P <0.01)，與模型對照組比較極顯著性差異，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。核因子一 KB多肽抑制劑5對膠原型關(guān)節(jié)炎小鼠體重影響，多肽5高、中、低劑量組體重顯著高于模型對照組(P < 0.01)，與模型對照組比較極顯著性差異，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0012]結(jié)論:核因子一 KB多肽抑制劑5對小鼠膠原型關(guān)節(jié)炎具有治療作用。
[0013]實(shí)施例2
核因子一 KB多肽抑制劑5對佐劑型大鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型體內(nèi)免疫保護(hù)作用構(gòu)建佐劑型大鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型，研究核因子一 KB多肽抑制劑5對佐劑性關(guān)節(jié)炎(Adjuvant arthritis, Μ)大鼠的治療作用。采用大鼠作為受試動(dòng)物，SPF級SD大鼠90只(由上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司(Sino-British SIPPR Lab.Animal Ltd)提供,動(dòng)物生產(chǎn)許可證號碼:SCXK (滬)2008-0016)，雄性，體重為140 g-160 g，隨機(jī)分成6組，分別是正常對照組，模型對照組，核因子一 KB多肽抑制劑5低中高3個(gè)劑量組(0.2,0.4,0.8 mg/kg)和陽性藥對照組(甲氨蝶呤1 mg/kg)。除正常組外，第O天各實(shí)驗(yàn)組建立大鼠M模型，方法是在大鼠的左側(cè)后足足跎注射含滅活的結(jié)核分枝桿菌(H37RA，10 mg/ml)完全弗氏佐劑0.08ml造成大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型。造模第10天起皮下注射給藥:多肽5的3個(gè)劑量組(0.2，0.4, 0.8 mg/kg ):每日兩次,連續(xù)10天；陽性藥對照組(甲氨蝶呤I mg/kg ):每五天一次，連續(xù)3次；正常對照組和模型對照組(生理鹽水):連續(xù)10天。分別于造模后第8，11，14，17，20，23和26天，稱量體重、關(guān)節(jié)評分、分別檢測左右后足足踝直徑來觀察藥物對大鼠佐劑型關(guān)節(jié)炎的影響。
[0014]結(jié)果:造模后大鼠與正常大鼠相比較，AA大鼠左后足會(huì)迅速產(chǎn)生原發(fā)性關(guān)節(jié)炎，出現(xiàn)明顯的腫脹，并伴有潰爛；右后足大約10 d后開始出現(xiàn)繼發(fā)性關(guān)節(jié)炎，評分的分值逐漸增大；同時(shí)耳部血管增生明顯，紅腫明顯；尾部關(guān)節(jié)出現(xiàn)腫脹。核因子一 KB多肽抑制劑5在佐劑性大鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型體內(nèi)免疫保護(hù)作用，具體結(jié)果如下:
核因子一 KB多肽抑制劑5對大鼠原發(fā)性關(guān)節(jié)炎足爪腫脹度的影響，大鼠陽性對照組、核因子一KB多肽抑制劑5的低、中、高劑量組左后足踝直徑與模型組比較，有極顯著性差異(P〈0.01);核因子一 KB多肽抑制劑5低、中、高劑量組左后足踝直徑與模型組比較，均有顯著性差異(P〈0.05)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。核因子一 KB多肽抑制劑5對大鼠繼發(fā)性關(guān)節(jié)炎足爪腫脹度的影響，大鼠陽性對照組、核因子一 KB多肽抑制劑5低、中、高劑量組右后足踝直徑與模型組比較，有顯著性差異(P〈0.05)。核因子一 KB多肽抑制劑5對佐劑型關(guān)節(jié)炎大鼠臨床評分的影響，多肽5低、中、高劑量組四肢評分顯著低于模型對照組(P < 0.05)，與模型對照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。核因子一 KB多肽抑制劑5對佐劑型關(guān)節(jié)炎大鼠體重影響，多肽5高、中、低劑量組體重顯著高于模型對照組(P < 0.05)，與模型對照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0015]結(jié)論:核因子一 KB多肽抑制劑5對AA大鼠關(guān)節(jié)炎具有治療作用。
【權(quán)利要求】
1.核因子一KB多肽抑制劑5，其特征在于其序列為SHGGLPCQNS。
2.核因子一KB多肽抑 制劑5，在治療或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P19/02GK103772489SQ201410024745
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2014年1月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月21日
【發(fā)明者】邢將軍, 許劉華, 彭立軍, 任世闊, 華俊國, 曹銘, 劉加根, 劉明明, 汪士金, 施新華, 劉偉峰, 嚴(yán)明 申請人:南通誠信氨基酸有限公司