一種可自產(chǎn)氧氣的蛋白復(fù)合支架及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種可自產(chǎn)氧氣的蛋白復(fù)合支架組成材料包括生物蛋白、明膠和自產(chǎn)氧物，其中，所述明膠和生物蛋白的質(zhì)量比為（0.5-5）:10，所述自產(chǎn)氧物和生物蛋白的質(zhì)量比為（1-50）:10。本發(fā)明提供的可自產(chǎn)氧氣的蛋白復(fù)合支架復(fù)合了生物蛋白、明膠和自產(chǎn)氧物，物理強(qiáng)度要優(yōu)于利用單純蛋白組合溶液所構(gòu)建的膜結(jié)構(gòu)材料，同時(shí)明膠成份對(duì)自產(chǎn)氧物構(gòu)成一定的包裹作用，使得本發(fā)明提供的蛋白復(fù)合支架能夠恒速且高水平的釋放氧氣，從而可令復(fù)合其上的種子細(xì)胞長(zhǎng)期存活并促進(jìn)材料植入后微血管的長(zhǎng)入，更適合于實(shí)際手術(shù)操作的需要，最終提高尿道修復(fù)重建的成功率。
【專利說(shuō)明】一種可自產(chǎn)氧氣的蛋白復(fù)合支架及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種一種蛋白復(fù)合支架，尤其涉及一種可以用于尿道修復(fù)重建的可自產(chǎn)氧氣的蛋白復(fù)合支架及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002]由于各種原因所導(dǎo)致的復(fù)雜性尿道疾病歷來(lái)是泌尿外科臨床治療中的一個(gè)難題。雖然多種自體組織作為替代材料已經(jīng)在尿道修復(fù)重建中獲得理想的效果，但相比而言組織工程技術(shù)沒(méi)有前者“犧牲正常組織為代價(jià)，以手術(shù)創(chuàng)傷修復(fù)組織缺損”的固有缺陷，因而更可作為未來(lái)尿道重建發(fā)展的主要方向?，F(xiàn)有國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道中對(duì)于各種組織工程材料或者材料-種子細(xì)胞復(fù)合體在尿道修復(fù)重建中的研究已逐漸從實(shí)驗(yàn)室向臨床拓展。其中不乏有小范圍實(shí)際尿道疾病臨床治療的案例，并且獲得另人滿意的初步療效。
[0003]但是相對(duì)于種子細(xì)胞研究的日趨完善，在尿道組織工程修復(fù)重建中選擇何種支架材料最為理想?yún)s始終未能達(dá)成共識(shí)。目前在尿道的組織工程研究中主要采用兩大類支架:天然脫細(xì)胞膠原基質(zhì)(SIS、BAMG、脫細(xì)胞真皮基質(zhì)等)和人工合成材料(聚乙醇酸、聚乳酸/聚乙醇酸共聚物)。前者雖然制備方便，適合商品化的生產(chǎn)，但由于多取材于異種乃至異體生物組織，因而在生物安全性方面一直受到部分學(xué)者質(zhì)疑，很難被所有患者所接受。同時(shí)其在空間結(jié)構(gòu)，生物力學(xué)特性以及促進(jìn)微血管和細(xì)胞滲透方面也同時(shí)存在著固有缺陷。后者雖然將生物安全性方面的風(fēng)險(xiǎn)降到了最低，但支架在降解過(guò)程中的代謝產(chǎn)物對(duì)周圍的細(xì)胞以及微環(huán)境會(huì)造成不可避免的負(fù)面影響，另外人工合成類支架因缺乏相應(yīng)的生長(zhǎng)因子，在促進(jìn)種子細(xì)胞黏附，增殖方面也有著先天的不足。
[0004]基于上述背景，目前在該研究領(lǐng)域，利用蛋白質(zhì)進(jìn)行相關(guān)生物支架材料的構(gòu)建正受到越來(lái)越多的研究者的關(guān)注?，F(xiàn)有報(bào)道中，利用絲素蛋白、人發(fā)角蛋白進(jìn)行生物蛋白支架構(gòu)建的報(bào)道已經(jīng)有成功的案例。但制備完成的Keratieine-絲素蛋白復(fù)合支架如同其它合成的尿道組織工程修復(fù)材料一樣會(huì)擁有一定的厚度，而支架材料的厚度勢(shì)必會(huì)對(duì)微血管的長(zhǎng)入、氧氣以及營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)給起到限制作用。而這一問(wèn)題也是導(dǎo)致利用組織工程材料進(jìn)行尿道重建術(shù)后出現(xiàn)狹窄復(fù)發(fā)的主要原因之一。因而在利用制備的材料進(jìn)行種子細(xì)胞復(fù)合和個(gè)體回植之前還需要對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步的修飾加工。以往的研究報(bào)道中多將支架材料與血管源性生長(zhǎng)因子(VEGF)或者血管生發(fā)相關(guān)細(xì)胞(內(nèi)皮細(xì)胞、內(nèi)皮祖細(xì)胞)相結(jié)合，以促進(jìn)支架材料的血管化，保證其上的種子細(xì)胞的增殖，乃至復(fù)合材料回植體內(nèi)后的長(zhǎng)期存活。但是該類方法操作相對(duì)復(fù)雜，成本較高，不適合大面積組織材料的修飾，因而在距離臨床應(yīng)用方面還有很長(zhǎng)的距離。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于克服上述不足，提供一種可自產(chǎn)氧氣的蛋白復(fù)合支架，隨著支架材料的降解逐步且接近恒速的從內(nèi)部向外釋放氧氣，從而可令復(fù)合其上的種子細(xì)胞長(zhǎng)期存活并促進(jìn)材料植入后微血管的長(zhǎng)入。
[0006]本發(fā)明的第一個(gè)方面是提供一種可自產(chǎn)氧氣的蛋白復(fù)合支架，所述蛋白復(fù)合支架的組成材料包括生物蛋白、明膠和自產(chǎn)氧物。
[0007]優(yōu)選地，所述明膠和和生物蛋白的質(zhì)量比為(0.5-5): 10，更優(yōu)選為(0.7-4.5):10,更優(yōu)選為(0.85-4):10，更優(yōu)選為(1-3):10，例如 1.5:10、2:10、2.2:10 或 2.5:10。
[0008]優(yōu)選地，所述自產(chǎn)氧物和生物蛋白的質(zhì)量比為(1-50): 10，更優(yōu)選為(2-40):10,更優(yōu)選為(4-30): 10，更優(yōu)選為(5-25):10，例如 5.5:10、10:10、12:10、15:10 或 20:10。
[0009]其中，所述自產(chǎn)氧物優(yōu)選為過(guò)氧化鈣、過(guò)碳酸鈉、過(guò)碳酸鉀、過(guò)氧化硫脲等中的一種或幾種的混合物，更優(yōu)選為過(guò)氧化鈣。
[0010]其中，所述生物蛋白選自角蛋白和絲素蛋白中的一種或兩種。
[0011 ] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述角蛋白為還原型人發(fā)角蛋白。
[0012]本發(fā)明的第二個(gè)方面是提供一種上述可自產(chǎn)氧氣的蛋白復(fù)合支架的制備方法，包括以下步驟:
[0013]步驟I，制備生物蛋白溶液，控制生物蛋白溶液中生物蛋白的濃度為0.05-0.2g/mL ；
[0014]步驟2，將明膠加入到生物蛋白溶液中，待明膠完全溶解后，加入自產(chǎn)氧物，溶解完全，其中，所述明膠和生物蛋白的質(zhì)量比為(0.5-5): 10，所述自產(chǎn)氧物和生物蛋白的質(zhì)量比為(1-50):10 ；
[0015]步驟3，將步驟2得到的混合溶液密封靜置，直至凝膠化，敞口自蒸發(fā)，得到蛋白復(fù)合支架。
[0016]步驟I中，生物蛋白溶液中生物蛋白的濃度優(yōu)選為0.06-0.17g/mL,更優(yōu)選為0.07-0.15g/mL,更優(yōu)選為 0.08-0.13g/mL,更優(yōu)選為 0.09-0.llg/mL,例如 0.lg/mL 或0.105g/mL。
[0017]步驟I中，所述生物蛋白優(yōu)選地選自角蛋白和絲素蛋白中的一種或兩種。
[0018]進(jìn)一步優(yōu)選地，所述角蛋白為還原型人發(fā)角蛋白，制備方法如下:將人頭發(fā)置于提取液中，50-150°C (優(yōu)選為70-130°C，更優(yōu)選為80-120°C，更優(yōu)選為100-110°C )下浸泡10-60min (優(yōu)選為15_50min,更優(yōu)選為25_35min),過(guò)濾,將濾液透析,濃縮,得到還原型人發(fā)角蛋白，其中，人頭發(fā)的質(zhì)量與提取液的體積的比為(0.5-4g): (5-20mL)。
[0019]進(jìn)一步優(yōu)選地，人頭發(fā)的質(zhì)量與提取液的體積的比為(l_3g): (8_15mL)，更優(yōu)選為(1.5-2g): (10-12mL)。
[0020]優(yōu)選地，所述提取液為尿素、十二烷基硫酸鈉、Na2S2O5的混合水溶液。
[0021]進(jìn)一步優(yōu)選地，所述提取液中，每10mL水中，含有30_70g(優(yōu)選為35_60g，更優(yōu)選為45-50g)尿素、40-80g (優(yōu)選為45-70g，更優(yōu)選為50_60g)十二烷基硫酸鈉、80_120g (優(yōu)選為 88-110g，更優(yōu)選為 92-100g) Na2S205。
[0022]所述絲素蛋白的制備方法如下:將脫膠蠶絲溶于MX溶液中，過(guò)濾，將濾液透析，濃縮，得到純化的絲素蛋白，其中，M為堿金屬(例如L1、Na、K等)，X為鹵素(例如F、Cl、Br、I
O
[0023]步驟2中，所述明膠和和生物蛋白的質(zhì)量比優(yōu)選為(0.7-4.5): 10，更優(yōu)選為(0.85-4):10，更優(yōu)選為(1-3):10，例如 1.5:10,2:10,2.2:10 或 2.5:10。
[0024]步驟2中，所述自產(chǎn)氧物和生物蛋白的質(zhì)量比優(yōu)選為(1-50):10,更優(yōu)選為(2-40): 10，更優(yōu)選為(4-30): 10，更優(yōu)選為(5-25):10，例如 5.5:10、10:10、12:10、15:10或 20:10。
[0025]步驟2中，所述自產(chǎn)氧物優(yōu)選為過(guò)氧化鈣、過(guò)碳酸鈉、過(guò)碳酸鉀、過(guò)氧化硫脲等中的一種或幾種的混合物，更優(yōu)選為過(guò)氧化鈣。
[0026]優(yōu)選地，步驟3中，凝膠化后，敞口自蒸發(fā)8_16h(優(yōu)選為10_14h，更優(yōu)選為ll_12h)后，倒入無(wú)水酒精0.5-2h (優(yōu)選為0.8-1.5h，更優(yōu)選為1-1.2h)后取出得到蛋白復(fù)合支架。
[0027]本發(fā)明提供的可自產(chǎn)氧氣的蛋白復(fù)合支架復(fù)合了生物蛋白、明膠和自產(chǎn)氧物，物理強(qiáng)度要優(yōu)于利用單純蛋白組合溶液所構(gòu)建的膜結(jié)構(gòu)材料，同時(shí)明膠成份對(duì)自產(chǎn)氧物構(gòu)成一定的包裹作用，使得本發(fā)明提供的蛋白復(fù)合支架能夠恒速且高水平的釋放氧氣，從而可令復(fù)合其上的種子細(xì)胞長(zhǎng)期存活并促進(jìn)材料植入后微血管的長(zhǎng)入，更適合于實(shí)際手術(shù)操作的需要，最終提高尿道修復(fù)重建的成功率。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0028]圖1為本發(fā)明提供的可自產(chǎn)氧氣的蛋白復(fù)合支架的HE染色圖；
[0029]圖2為本發(fā)明提供的可自產(chǎn)氧氣的蛋白復(fù)合支架的掃描電鏡圖:可見(jiàn)明膠包被自產(chǎn)氧物；
[0030]圖3為本發(fā)明提供的可自產(chǎn)氧氣的蛋白復(fù)合支架的掃描電鏡圖:可見(jiàn)支架表面呈現(xiàn)多孔樣結(jié)構(gòu)。

【具體實(shí)施方式】
[0031]下面參照附圖，結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述，以更好地理解本發(fā)明。
[0032]實(shí)施例1
[0033]1、自理發(fā)店中獲取無(wú)染色的正常黑發(fā)，常規(guī)洗發(fā)精清洗1-2次，置放于常規(guī)室溫中進(jìn)行干燥。
[0034]2、將干燥處理后的頭發(fā)浸泡于乙酸乙酯與甲醇的混合溶液中24小時(shí)，其中乙酸乙酯與甲醇的體積比為3:1。
[0035]3、頭發(fā)再次干燥后，充分剪碎，將其按1.5g/10ml比例加入提取液(每100ml水中，溶解480.4g尿素、57.676g十二烷基硫酸鈉SDS、95.045gNa2S205)中，浸沒(méi)后在100°C油浴加熱30min。
[0036]4、真空抽濾，將黑色提取液置于透析袋中，透析5d，透析袋周圍水溶液中含有0.lwt% 的 Na2S2O5。
[0037]5、完成透析后將透析帶置于20wt%PEG(分子量10000)水溶液中，濃縮6小時(shí)，調(diào)節(jié)還原型人發(fā)角蛋白的的濃度為0.lg/mL后，行SDS蛋白電泳檢測(cè)提示蛋白電泳帶在45-60kD左右，說(shuō)明得到還原型人發(fā)角蛋白。
[0038]6、將得到的還原型人發(fā)角蛋白溶液在4°C環(huán)境下予以保存。
[0039]7、取上述得到的還原型人發(fā)角蛋白溶液15ml，將其融合攪拌并加熱至37°C，加入明膠，控制混合液中明膠的濃度為0.02g/mL。待明膠完全溶解后，加入過(guò)氧化鈣，控制混合液中過(guò)氧化鈣的濃度為0.2g/mL,高速攪拌30s后置入方型模具中。
[0040]8、混合溶液在方型模具中，模具加蓋，室溫下放置12h小時(shí)，帶凝膠化后，開(kāi)蓋，自然蒸發(fā)12h，倒入酒精I(xiàn)h后取出，得到蛋白復(fù)合支架。
[0041]最終獲取材料大體外觀為褐色半透明膜狀材料。其HE染色提示該材料一肅木素染色陽(yáng)性膜狀物，表面富有多孔樣結(jié)構(gòu)(圖1所示)。掃描電鏡顯示材料表面可見(jiàn)明膠包被過(guò)氧化鈣(圖2所示)，并可見(jiàn)支架材料呈現(xiàn)多孔樣結(jié)構(gòu)(圖3所示)。
[0042]經(jīng)釋氧能力檢測(cè)，該材料可在體外持續(xù)釋氧時(shí)間超過(guò)兩周，其中每平方厘米該類材料能夠使8ml中性溶液的氧含量在兩周內(nèi)保證在10mmHg以上。
[0043]實(shí)施例2
[0044]1、自理發(fā)店中獲取無(wú)染色的正常黑發(fā)，常規(guī)洗發(fā)精清洗1-2次，置放于常規(guī)室溫中進(jìn)行干燥。
[0045]2、將干燥處理后的頭發(fā)浸泡于乙酸乙酯與甲醇的混合溶液中24小時(shí)，其中乙酸乙酯與甲醇的體積比為3:1。
[0046]3、頭發(fā)再次干燥后，充分剪碎，將其按1.5g/10ml比例加入提取液(每100ml水中，溶解480.4g尿素、57.676g十二烷基硫酸鈉SDS、95.045gNa2S205)中，浸沒(méi)后在100°C油浴加熱30min。
[0047]4、真空抽濾，將黑色提取液置于透析袋中，透析5d，透析袋周圍水溶液中含有0.lwt% 的 Na2S2O5。
[0048]5、完成透析后將透析帶置于20wt%PEG(分子量10000)水溶液中，濃縮6小時(shí)，調(diào)節(jié)還原型人發(fā)角蛋白的的濃度為0.lg/mL后，行SDS蛋白電泳檢測(cè)提示蛋白電泳帶在45-60kD左右，說(shuō)明得到還原型人發(fā)角蛋白。
[0049]6、將得到的還原型人發(fā)角蛋白溶液在4°C環(huán)境下予以保存。
[0050]7、將10g溴化鋰溶于60ml水中，配制成溴化鋰水溶液，攪拌溶液同時(shí)加熱至60。。。
[0051]8、將自市場(chǎng)上購(gòu)置的脫膠蠶絲1g溶液溴化鋰水溶液中，5h后，多層紗布過(guò)濾，過(guò)濾后溶液置于透析袋中。
[0052]9、透析5d，透析袋周圍水溶液中含有0.lwt%的Na2S2O5，每天換水一次。
[0053]10、完成透析后將透析帶置于20wt%PEG (分子量20000)水溶液中，濃縮6h，調(diào)節(jié)至絲素蛋白的濃度為0.lg/mL，行SDS蛋白電泳檢測(cè)提示蛋白電泳帶在25-30kD左右，說(shuō)明得到絲素蛋白。
[0054]11、將得到的絲素蛋白溶液在4°C環(huán)境下予以保存。
[0055]12、將得到的還原型人發(fā)角蛋白溶液和絲素蛋白溶液按體積比4:6進(jìn)行混合。
[0056]13、取步驟12得到的混合液15ml，將其融合攪拌并加熱至37°C，加入明膠，控制混合液中明膠的濃度為0.02g/mL。待明膠完全溶解后，加入過(guò)氧化鈣，控制混合液中過(guò)氧化鈣的濃度為0.2g/mL,高速攪拌30s后置入方型模具中。
[0057]14、混合溶液在方型模具中，模具加蓋，室溫下放置12h小時(shí)，帶凝膠化后，開(kāi)蓋，自然蒸發(fā)12h，倒入酒精I(xiàn)h后取出，得到蛋白復(fù)合支架。
[0058]最終獲取材料大體外觀為褐色半透明膜狀材料。其HE染色提示該材料一肅木素染色陽(yáng)性膜狀物，表面富有多孔樣結(jié)構(gòu)。掃描電鏡顯示材料表面可見(jiàn)明膠包被過(guò)氧化鈣，并可見(jiàn)支架材料呈現(xiàn)多孔樣結(jié)構(gòu)。
[0059]經(jīng)釋氧能力檢測(cè)，該材料可在體外持續(xù)釋氧時(shí)間超過(guò)兩周，其中每平方厘米該類材料能夠使8ml中性溶液的氧含量在兩周內(nèi)保證在10mmHg以上。
[0060]實(shí)施例3
[0061]1、自理發(fā)店中獲取無(wú)染色的正常黑發(fā)，常規(guī)洗發(fā)精清洗1-2次，置放于常規(guī)室溫中進(jìn)行干燥。
[0062]2、將干燥處理后的頭發(fā)浸泡于乙酸乙酯與甲醇的混合溶液中24小時(shí)，其中乙酸乙酯與甲醇的體積比為3:1。
[0063]3、頭發(fā)再次干燥后，充分剪碎，將其按1.5g/10ml比例加入提取液(每100ml水中，溶解480.4g尿素、57.676g十二烷基硫酸鈉SDS、95.045gNa2S205)中，浸沒(méi)后在100°C油浴加熱30min。
[0064]4、真空抽濾，將黑色提取液置于透析袋中，透析5d，透析袋周圍水溶液中含有0.lwt% 的 Na2S2O5。
[0065]5、完成透析后將透析帶置于20wt%PEG(分子量10000)水溶液中，濃縮6小時(shí)，調(diào)節(jié)還原型人發(fā)角蛋白的的濃度為0.lg/mL后，行SDS蛋白電泳檢測(cè)提示蛋白電泳帶在45-60kD左右，說(shuō)明得到還原型人發(fā)角蛋白。
[0066]6、將得到的還原型人發(fā)角蛋白溶液在4°C環(huán)境下予以保存。
[0067]7、將10g溴化鋰溶于60ml水中，配制成溴化鋰水溶液，攪拌溶液同時(shí)加熱至60。。。
[0068]8、將自市場(chǎng)上購(gòu)置的脫膠蠶絲1g溶液溴化鋰水溶液中，5h后，多層紗布過(guò)濾，過(guò)濾后溶液置于透析袋中。
[0069]9、透析5d，透析袋周圍水溶液中含有0.lwt%的Na2S2O5，每天換水一次。
[0070]10、完成透析后將透析帶置于20wt%PEG (分子量20000)水溶液中，濃縮6h，調(diào)節(jié)至絲素蛋白的濃度為0.lg/mL，行SDS蛋白電泳檢測(cè)提示蛋白電泳帶在25-30kD左右，說(shuō)明得到絲素蛋白。
[0071]11、將得到的絲素蛋白溶液在4°C環(huán)境下予以保存。
[0072]12、將得到的還原型人發(fā)角蛋白溶液和絲素蛋白溶液按體積比4:6進(jìn)行混合。
[0073]13、取步驟12得到的混合液15ml，將其融合攪拌并加熱至37°C，加入明膠，控制混合液中明膠的濃度為0.02g/mL。待明膠完全溶解后，加入過(guò)氧化鈣，控制混合液中過(guò)氧化鈣的濃度為0.05g/mL，高速攪拌30s后置入方型模具中。
[0074]14、混合溶液在方型模具中，模具加蓋，室溫下放置12h小時(shí)，帶凝膠化后，開(kāi)蓋，自然蒸發(fā)12h，倒入酒精I(xiàn)h后取出，得到蛋白復(fù)合支架。
[0075]最終獲取材料大體外觀為褐色半透明膜狀材料。其HE染色提示該材料一肅木素染色陽(yáng)性膜狀物，表面富有多孔樣結(jié)構(gòu)。掃描電鏡顯示材料表面可見(jiàn)明膠包被過(guò)氧化鈣，并可見(jiàn)支架材料呈現(xiàn)多孔樣結(jié)構(gòu)。
[0076]經(jīng)釋氧能力檢測(cè)，該材料可在體外持續(xù)釋氧時(shí)間維持在一周左右，其中每平方厘米該類材料能夠使8ml中性溶液的氧含量在一周內(nèi)保證在10mmHg以上。
[0077]以上對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)描述，但其只是作為范例，本發(fā)明并不限制于以上描述的具體實(shí)施例。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，任何對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的等同修改和替代也都在本發(fā)明的范疇之中。因此，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍下所作的均等變換和修改，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種可自產(chǎn)氧氣的蛋白復(fù)合支架，其特征在于，組成材料包括生物蛋白、明膠和自產(chǎn)氧物，其中，所述明膠和生物蛋白的質(zhì)量比為(0.5-5): 10，所述自產(chǎn)氧物和生物蛋白的質(zhì)量比為(1-50):10ο
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白復(fù)合支架，其特征在于，所述明膠和生物蛋白的質(zhì)量比為(1-3):10ο
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白復(fù)合支架，其特征在于，所述自產(chǎn)氧物和生物蛋白的質(zhì)量比為(5-25):10ο
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白復(fù)合支架，其特征在于，所述自產(chǎn)氧物為過(guò)氧化鈣、過(guò)碳酸鈉、過(guò)碳酸鉀、過(guò)氧化硫脲中的一種或幾種的混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白復(fù)合支架，其特征在于，所述生物蛋白選自角蛋白和絲素蛋白中的一種或兩種。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白復(fù)合支架，其特征在于，所述角蛋白為還原型人發(fā)角蛋白。
7.—種如權(quán)利要求1所述的用于尿道修復(fù)重建的蛋白復(fù)合支架的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟1，制備生物蛋白溶液，控制生物蛋白溶液中生物蛋白的濃度為0.05-0.2g/mL ；步驟2，將明膠加入到生物蛋白溶液中，待明膠完全溶解后，加入自產(chǎn)氧物，溶解完全，其中，所述明膠和生物蛋白的質(zhì)量比為(0.5-5):10，所述自產(chǎn)氧物和生物蛋白的質(zhì)量比為(1-50):10 ； 步驟3，將步驟2得到的混合溶液密封靜置，直至凝膠化，敞口自蒸發(fā)，得到蛋白復(fù)合支架。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述生物蛋白選自角蛋白和絲素蛋白中的一種或兩種。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述角蛋白為還原型人發(fā)角蛋白，制備方法如下: 將人頭發(fā)置于提取液中，50-150°C下浸泡10-60min，過(guò)濾，將濾液透析，濃縮，得到還原型人發(fā)角蛋白，其中，人頭發(fā)的質(zhì)量與提取液的體積的比為(0.5-4g): (5-20mL)，所述提取液為尿素、十二烷基硫酸鈉、Na2S2O5的混合水溶液，其中，每10mL水中，含有30_70g尿素、40-80g 十二烷基硫酸鈉、80-120gNa2S205。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述絲素蛋白的制備方法如下: 將脫膠蠶絲溶于MX溶液中，過(guò)濾，將濾液透析，濃縮，得到純化的絲素蛋白，其中，M為堿金屬，X為鹵素。
【文檔編號(hào)】A61L27/22GK104288834SQ201310476340
【公開(kāi)日】2015年1月21日 申請(qǐng)日期:2013年10月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月12日
【發(fā)明者】馮超, 李喆, 徐月敏, 呂向國(guó) 申請(qǐng)人:上海市第六人民醫(yī)院