具有腫瘤導向性治療作用的多肽-藥物綴合物及其應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及提供具有腫瘤導向性治療作用的多肽-藥物綴合物，多肽-藥物綴合物的制備方法及其應用。本發(fā)明多肽-藥物綴合物可以特異性的將PD0325901類似物輸送到整合素αvβ3過量表達的癌細胞內，進而起到對腫瘤導向性治療的作用。
【專利說明】具有腫瘤導向性治療作用的多肽-藥物綴合物及其應用

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及具有腫瘤導向性治療作用的多肽-藥物綴合物及其應用。本發(fā)明屬于 生物醫(yī)藥【技術領域】。

【背景技術】
[0002] 信號傳導通路是機體細胞與外界傳遞信息、轉運物質的重要方式，是細胞賴以生 存的重要生命活動。腫瘤細胞利用各種信號通路的過度激活加速腫瘤細胞的增殖、分化、侵 襲、遷移，以及抑制細胞凋亡等，導致癌癥的發(fā)生和發(fā)展進程。包括PI3K/mT0R/AKT通路、 JAK/STAT通路和MAPK通路在內，各種信號傳導通路都或多或少參與腫瘤發(fā)展進程，是目前 抗腫瘤藥物研究的熱分子靶點。ERK信號傳導通路在細胞信號傳導網(wǎng)絡中處于樞紐地位，主 要與細胞的增殖和分化密切相關。ERK通路過度活化大大會促進腫瘤細胞增殖、新血管生 成、抑制細胞凋亡、影響它們分化，這涉及到大約25%的人類惡性腫瘤。近期的研究還發(fā)現(xiàn)， 此通道同時參與了腫瘤侵蝕和轉移等多階段過程。因此，直接抑制ERK通道活性是治療許 多惡性腫瘤的高效方法。
[0003] MEK1和MEK2是雙特異性激酶，它能夠對絲氨酸、蘇氨酸和色氨酸殘基進行磷酸 化。由于在它們的激酶結構域具有較高的同源性，因此這兩種亞型在生物學過程中具有相 同的活化機理。這就導致了這兩種激酶的抑制劑具有相似的抑制活性和精致的選擇性。 PD98059和U0126是第一代抑制劑，但是由于它們的藥理性質不好，導致其不適合在臨床 上應用。CI-1040(PD184352)是第一個被設計出來的非-ATP競爭的，具有較高特異性的 MEK1/2抑制劑，它已經(jīng)被用于臨床上多種腫瘤細胞的研究。但是，考慮到這些腫瘤細胞治療 的安全性和不足的臨床活性，這種抑制劑也被迫放棄。
[0004] PD0325901是一種可以口服的，細胞穿透力強的第二代非ATP競爭的MEK抑制 齊IJ。其MEK1/2酶的抑制活性是CI-1040的50倍以上，增加了其藥理學和藥代動力學性能。 PD0325901對于治療晚期的惡性腫瘤細胞具有非常好的療效，例如：黑色素瘤，乳腺癌，非 小細胞肺癌（NSCLC)和結腸癌。但是，研究表明，與CI-1040相比，PD0325901具有非常嚴 重的眼部和神經(jīng)的毒副作用，因此停止在二期臨床應用。另外，分布廣泛的MEK1/2在細胞 生長、發(fā)育和肝臟再生中發(fā)揮著重要的作用。因此，靶向輸送Η)0325901到腫瘤細胞以減少 對正常組織的傷害作用就成了它在晚期癌癥治療由于BRAF或NRAS突變導致癌癥的先決條 件。
[0005] 多肽-藥物綴合物對于抗癌藥物的靶向性輸送是一種有前途的策略。這種多肽能 夠識別并鍵合到只對腫瘤細胞表達或者過量表達的特異性受體上。通過隨后的配體-受體 的內化作用（受體參與的內吞作用），鍵合到多肽配體上的藥物分子能夠順利地到達靶向 腫瘤細胞并發(fā)揮其治療作用。與抗體-藥物綴合物相比，多肽-藥物綴合物分子小，使其具 有很好的細胞穿透性。而且多肽-藥物綴合物載藥性比較高，這就降低了其對正常組織的 傷害性。另外，與蛋白-藥物綴合物、抗體-藥物綴合物相比，多肽-藥物綴合物具有較低 的免疫原性。
[0006] 隨著分子腫瘤生物學的發(fā)展，越來越多的腫瘤受體和能對它們特異性表達的多肽 被發(fā)現(xiàn)。例如：整合素受體，生長激素抑制素受體（SST)，胃泌素釋放肽受體（GRP)，R-黑色 素細胞刺激激素受體（R-MSH)，這些受體被用于腫瘤靶向作用。能夠特異性識別這些受體 的多肽分子在肽鏈藥物輸送體系的發(fā)展中受到了極大的重視。整合素 ανβ 3受體為一跨 膜異二聚體糖蛋白復合物，它在血管的形成，生長和成熟的過程中發(fā)揮著重要的作用。這種 受體還能對腫瘤分級和組織類型進行特異性表達，而且它在黑素瘤，惡性膠質瘤，卵巢癌細 胞，乳腺癌細胞和前列腺癌細胞中過量表達。


【發(fā)明內容】

[0007] 本發(fā)明的目的之一是提供具有腫瘤導向性治療作用的多肽-藥物綴合物；本發(fā)明 多肽-藥物綴合物可以特異性的將Η)0325901類似物輸送到整合素 α ν β 3過量表達的癌 細胞內，進而起到對腫瘤導向性治療的作用。
[0008] 本發(fā)明的目的之二是提供制備上述的多肽-藥物綴合物的合成方法；
[0009] 本發(fā)明的目的之三是本發(fā)明提供的多肽-藥物綴合物在腫瘤導向性治療中的應 用；
[0010] 本發(fā)明的目的之四是本發(fā)明提供的多肽-藥物綴合物在制備腫瘤導向性治療制 劑中的應用。
[0011] 本發(fā)明通過以下技術方案達到上述目：
[0012] 具有腫瘤導向性治療作用的多肽-藥物綴合物Α，其結構通式如下：
[0013]

【權利要求】
1. 具有腫瘤導向性治療作用的多肽-藥物綴合物A，其結構通式如下：
其中，X為〇、S或沒有；Y為0或S原子；m為0或1 ;n選自0-10中任意數(shù)值；η'選自 1-10中任意數(shù)值；Ρ為含RGD序列的環(huán)狀多肽化合物。
2. 根據(jù)權利要求1所述的多肽-藥物綴合物Α，其特征在于，所述的Ρ為含有多聚甘氨 酸、多聚絲氨酸及多聚乙二醇鏈接臂的含R⑶序列的環(huán)狀多肽化合物。
3. 根據(jù)權利要求1所述的多肽-藥物綴合物Α，其特征在于，所述的Ρ選自c (RGDyK)、 c (RGDfK)或 c (RGDfE)，或 c (RGDyK)、c (RGDfK)、c (RGDfE)相應的二聚體、四聚體、八聚體等多 聚體；其中， c (RGDyK) :cyclo(Arg-Gly-Asp-d-Tyr-Lys)，結構式如下： c (RGDyK) :cyclo(Arg-Gly-Asp-d-Phe_Lys)，
結構式如下：
c (RGDfE) :cyclo(Arg-Gly-Asp-d-Phe_Glu)，結構式為：
4.制備權利要求1-3所述的多肽-藥物綴合物A的方法，包括以下步驟： (1) 合成帶有側鏈的Η)0325901類似物 ① 用（Boc)2與化合物1反應得到化合物2
② 步驟①獲得的化合物2通過Mi tsunobu反應獲得化合物3
③ 步驟②獲得的化合物3在一水合肼的作用下發(fā)生肼解還原反應得到化合物4
④ 步驟③獲得的化合物4與化合物5縮合，獲得含有側鏈的Η)0325901的類似物6
⑤ 步驟④獲得的化合物6在TFA的條件下，脫去Boc保護基，得到化合物7
(2) 在化合物7上添加丁二酸類的連接臂得到化合物8
(3) P與化合物8偶聯(lián)反應，即得多肽-藥物綴合物A，優(yōu)選的， 當P為c (RGDyK)時，在DIPEA和PyBOP的條件下直接縮合得到多肽-藥物綴合物9-1
當P為PEG-c(RGDyK)、E[c(RGDyK)]2或連接三聚或五聚甘氨酸、絲氨酸鏈接臂的 c (RGDyK)時，在NHS，DCC的條件下將Η)0325901類似物轉化成活化酯10,再在DIPEA的作 用下與相應的多肽進行縮合，得到多肽-藥物綴合物9-2
5.具有腫瘤導向性治療作用的多肽-藥物綴合物B，其結構通式如下：
其中，P為含RGD序列的環(huán)狀多肽化合物； 優(yōu)選的，P為含有多聚甘氨酸、多聚絲氨酸及多聚乙二醇鏈接臂的含R⑶序列的環(huán)狀多 肽化合物； 更優(yōu)選的，P選自c (RGDyK)、c (RGDfK)、c (RGDfE)以及它們分別的二聚體、四聚體、八聚 體等多聚體；其中， c (RGDyK) :cyclo(Arg-Gly-Asp-d-Tyr-Lys)，結構式如下：
c (RGDyK) :cyclo(Arg-Gly-Asp-d-Phe_Lys)，結構式如下：
c(RGDfE) :cyclo(Arg-Gly-Asp-d-Phe_Glu)，結構式為：
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6. 制備權利要求5所述的多肽-藥物綴合物B的方法，包括以下步驟： (1) 在Η)0325901上添加丁二酸酐連接臂得到化合物11
(2) 將得到的化合物11在NHS，DCC的條件下轉化成活化酯12
(3) 將得到的活化酯在DIPEA的作用下與P進行縮合，得到多肽-藥物綴合物13,即多 肽-藥物綴合物B :
7. 權利要求1-3中任一項所述的多肽-藥物綴合物A在腫瘤導向性治療作用中的應 用。
8. 權利要求5所述的多肽-藥物綴合物B在腫瘤導向性治療作用中的應用。
9. 權利要求1-3中任一項所述的多肽-藥物綴合物A在制備腫瘤導向性治療制劑中的 應用。
10. 權利要求5所述的多肽-藥物綴合物B在制備腫瘤導向性治療制劑中的應用。
【文檔編號】A61P35/00GK104248770SQ201310259826
【公開日】2014年12月31日 申請日期:2013年6月26日 優(yōu)先權日:2013年6月26日
【發(fā)明者】武蕓, 陳自立, 候建軍, 李肖肖 申請人:北京大學