糖類固定化病毒去除用高分子基材、及病毒的去除方法
【專利摘要】本發(fā)明提供高效地去除液體中的肝炎病毒等的固定有糖類的病毒去除用高分子基材及病毒的去除方法，特別是提供在應(yīng)用于生物體的血液時(shí)取出到體外的血液量、血中有用成分的去除量少、并且低侵襲性且可縮短治療周期的、去除肝炎病毒等的固定有糖類的病毒去除用高分子基材及病毒的去除方法。本發(fā)明的中空纖維膜可以用作具有高病毒去除功能和不去除有用的血漿成分的功能的組件。
【專利說明】糖類固定化病毒去除用高分子基材、及病毒的去除方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及糖類固定化病毒去除用高分子基材、及病毒的去除方法。
【背景技術(shù)】
[0002]C型肝炎是由C型肝炎病毒(HCV)的慢性感染造成的，作為利用藥物的治療法，通常有聚乙二醇干擾素、三唑核苷的聯(lián)合療法。對(duì)于基因型Ib且血液中的病毒量多的患者，治療效果為50%左右，向肝硬化、肝癌轉(zhuǎn)變的比率高，因此期望更有效的治療法、藥物的開發(fā)(非專利文獻(xiàn)I)。已有如下的報(bào)道(非專利文獻(xiàn)2):已知通常利用藥物的治療在血中的病毒量低時(shí)治療效果高，將血中的HCV用多孔性的過濾器去除，進(jìn)行與藥物的聯(lián)合療法時(shí)，治療效果提高。即，可以推測(cè)，通過降低體內(nèi)的病毒量，治療效果提高。[0003]另外，專利文獻(xiàn)I中記載了如下的血液處理裝置:其中，血液入口、上游側(cè)血液回路、血漿分離單元、下游側(cè)血液回路依次連接，進(jìn)而血漿分離單元的血漿出口、上游側(cè)血漿回路、血漿凈化單元、下游側(cè)血漿回路依次連接，下游側(cè)血漿回路的末端與設(shè)置于下游側(cè)血液回路途中的血液血漿混合單元連接，該裝置中，下游側(cè)血液回路的血液血漿混合單元的下游側(cè)設(shè)有至少包含用于去除病毒和病毒感染細(xì)胞的水不溶性載體的血球處理單元，血漿凈化單元包含最大孔徑20nm以上且50nm以下的多孔性過濾膜。
[0004]然而，利用上述過濾器去除的方法是在暫時(shí)將血球與血漿分離后從血漿成分去除病毒，因此，回路結(jié)構(gòu)復(fù)雜，期望更簡(jiǎn)便地從血中去除病毒的方法。
[0005]關(guān)于固定有配體等的C型肝炎病毒用的血液凈化用吸附材料，專利文獻(xiàn)2中報(bào)道了將與免疫球蛋白等具有親合性的肽固定于水不溶性凝膠來有效地去除免疫復(fù)合物型C型肝炎病毒的方法。
[0006]另一方面，作為與HCV結(jié)合的配體，已知肝素是有效的(非專利文獻(xiàn)3)。因此，只要是能夠不將血球與血漿分離地使全血通過的中空纖維等高分子支撐體上固定有肝素的基材、血球血漿分離膜的細(xì)孔內(nèi)等固定有肝素的基材，就有能夠簡(jiǎn)便地去除HCV的可能性，期待能夠提供對(duì)患者的負(fù)擔(dān)少的HCV去除組件等。
[0007]固定有肝素的基材的形態(tài)可列舉出微珠、多孔中空纖維。使用多孔中空纖維的內(nèi)部循環(huán)型、過濾型的體外循環(huán)組件由于與填充有顆粒狀肝素固定化基材的體外循環(huán)組件相比血液的滯留部分少，因此在結(jié)構(gòu)上具有血栓的形成少的優(yōu)點(diǎn)。在多孔中空纖維上固定肝素時(shí)，表面官能團(tuán)的種類、固定密度根據(jù)基材材質(zhì)而不同，需要根據(jù)各基材找出最佳的方法。
[0008]另一方面，作為具有糖類的病毒吸附劑，報(bào)道過對(duì)人類免疫缺陷病毒(以下HIV)具有吸附作用的基材。例如，專利文獻(xiàn)3中記載了一種具有糖鏈的HIV吸附用高分子基材，其是如下得到的:使主鏈具有亞甲基的高分子基材與具有烯屬不飽和鍵和糖鏈的聚合性化合物或包含該聚合性化合物的聚合性組合物接觸，照射電離性輻射線，或者，在對(duì)前述高分子基材照射電離輻射線后，使其與前述聚合性化合物或包含該聚合性化合物的聚合性組合物接觸，從而得到。[0009]現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0010]專利文獻(xiàn)
[0011]專利文獻(xiàn)1:日本特開2005-230165
[0012]專利文獻(xiàn)2:日本特開平10-323387
[0013]專利文獻(xiàn)3:日本特開2010-68910
[0014]非專利文獻(xiàn)
[0015]非專利文獻(xiàn)1:病毒性肝炎-基礎(chǔ).臨床研究的進(jìn)展-日本臨床69卷增刊號(hào)4(2011)
[0016]非專利文獻(xiàn)2:Α.K.Fujiwara et al.Hepatol.Res., 37, 701 (2007)
[0017]非專利文獻(xiàn)3:Zahn, J.P.Allain, J.Gen.Virol., 86, 677 (2005)

【發(fā)明內(nèi)容】

[0018]發(fā)明要解決的問題
[0019]鑒于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的課題在于，提供能夠使血液等體液流動(dòng)而不產(chǎn)生由血栓等的生成導(dǎo)致的堵塞、且可高效地去除體液中的病毒的基材、器具。
[0020]用于解決問題的方案
[0021]為了解決上述課題，本發(fā)明人等對(duì)高分子支撐體(A)的選擇、具有去除病毒的功能的糖類向高分子支撐體(A)的固定方法進(jìn)行了詳細(xì)的研究，結(jié)果完成了本發(fā)明。
[0022]即，本發(fā)明涉及一種病毒去除用高分子基材，其為固定有糖類的病毒去除用高分子基材，其中，用具有羥基的高分子材料進(jìn)行了表面處理的高分子支撐體(A)與具有能與羥基反應(yīng)形成共價(jià)鍵的基團(tuán)的化合物(B)結(jié)合，進(jìn)而介由具有氨基的化合物(C)固定有糖類。另外，涉及一種病毒去除用高分子基材，其特征在于，即使不介由化合物(C)也介由化合物(B)固定有糖類。
[0023]發(fā)明的效果
[0024]根據(jù)本發(fā)明，可以提供具有能夠選擇性地去除病毒而不會(huì)將不優(yōu)選去除的血液成分吸附/去除的功能的高分子基材、及使用其的醫(yī)療器具。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0025]圖1是示出具有本發(fā)明的高分子基材的醫(yī)療器具的一個(gè)例子的截面示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0026]SP，本發(fā)明為:
[0027]1.一種病毒去除用高分子基材，其特征在于，其為固定有糖類的病毒去除用高分子基材，
[0028]其中，用具有羥基的高分子材料進(jìn)行了表面處理的高分子支撐體(A)與具有能與羥基反應(yīng)形成共價(jià)鍵的基團(tuán)的化合物(B)結(jié)合，進(jìn)而介由具有氨基的化合物(C)固定有糖類；
[0029]2.根據(jù)1.所述的病毒去除用高分子基材，其中，用具有羥基的高分子材料進(jìn)行了表面處理的高分子支撐體(A)為用乙烯-乙烯醇共聚物、乙烯-乙烯醇-乙酸乙烯酯共聚物、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物的部分皂化物、乙烯醇-乙酸乙烯酯共聚物、羥基甲基丙烯酸酯共聚物、醋酸纖維素的部分皂化物或甘油衍生物進(jìn)行了表面處理的中空纖維；
[0030]3.根據(jù)2.所述的病毒去除用高分子基材，其中，中空纖維為多孔性中空纖維；
[0031]4.根據(jù)2.或3.所述的病毒去除用高分子基材，其中，中空纖維以聚乙烯、聚丙烯或聚4-甲基戊烯作為基質(zhì)；
[0032]5.根據(jù)3.或4.所述的病毒去除用高分子基材，其中，多孔性中空纖維的平均流量孔徑為50~500nm的范圍；
[0033]6.根據(jù)3.~5.中任一項(xiàng)所述的病毒去除用高分子基材，其中，多孔性中空纖維的內(nèi)徑為150~500 μ m的范圍；
[0034]7.根據(jù)3.~6.中任一項(xiàng)所述的病毒去除用高分子基材，其中，多孔性中空纖維的膜厚為30~IOOym的范圍；
[0035]8.根據(jù)3.~7.中任一項(xiàng)所述的病毒去除用高分子基材，其中，多孔性中空纖維的糖類的固定量為I~100 μ g/cm2的范圍；
[0036]9.根據(jù)1.~8.中任一項(xiàng)所述的病毒去除用高分子基材，其中，具有能與羥基反應(yīng)形成共價(jià)鍵的基團(tuán)的化合物(B)為表氯醇、羧酸酐、二羧酸化合物、二酰氯、二異氰酸酯、二環(huán)氧化合物、(甲基)丙烯酸、(甲基)丙烯酸縮水甘油酯或(甲基)丙烯酰氧基烷基異氰酸酯；
[0037]10.根據(jù)1.~9.中任一項(xiàng)所述的病毒去除用高分子基材，其中，具有氨基的化合物(C)為聚烯丙胺、氨、2-氨基乙醇、乙二胺、丁二胺、1，6_己二胺、1，2_雙(2-氨基乙氧基)乙烷、3，3’ - 二氨基二丙基胺、二亞乙基三胺、苯二胺、或聚乙烯亞胺；
[0038]11.根據(jù)1.~10.中任一項(xiàng)所`述的病毒去除用高分子基材，其中，糖類為肝素、將肝素的伯羥基或仲羥基硫酸酯化而成的肝素衍生物、將肝素的N-乙?；囊阴；x去體N-硫酸酯化而成的肝素衍生物、將肝素的N-硫酸基的硫酸基離去體N-乙?；傻母嗡匮苌铩⒌头肿恿扛嗡?、硫酸葡聚糖、硫酸葡聚糖、巖藻依聚糖、硫酸軟骨素A、硫酸軟骨素C、硫酸皮膚素、類肝素物質(zhì)、硫酸乙酰肝素、硫酸鼠李聚糖、硫酸角質(zhì)素、褐藻酸、透明質(zhì)酸、或羧甲基纖維素；
[0039]12.根據(jù)1.~11.中任一項(xiàng)所述的病毒去除用高分子基材，其中，病毒為B型肝炎病毒或C型肝炎病毒；
[0040]13.一種病毒的去除方法，其使用1.~12.中任一項(xiàng)所述的病毒去除用高分子基材；
[0041]14.根據(jù)13.所述的病毒的去除方法，其特征在于，具有如下的工序:使包含病毒的液體通過多孔性中空纖維，從而將通過了中空纖維所具有的孔的液體與未通過孔的液體混合；
[0042]15.根據(jù)14.所述的病毒的去除方法，其中，包含病毒的液體為包含病毒的血液。
[0043]以下，詳細(xì)說明本發(fā)明。
[0044].高分子支撐體(A)
[0045]本發(fā)明中使用的高分子支撐體(A)只要是用具有羥基的高分子材料進(jìn)行了表面處理的高分子支撐體就沒有特別限制。作為這種高分子支撐體(A)，只要血液兼容性高就可以使用各種物質(zhì)，例如可列舉出烯烴系樹脂、苯乙烯系樹脂、砜系樹脂、丙烯酸系樹脂、氨基甲酸酯系樹脂、酯系樹脂、醚系樹脂或纖維素混合酯等，更具體而言，可例示出將由聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚砜、聚醚砜、聚丙烯腈、聚乙烯、聚丙烯或聚4-甲基戊烯等構(gòu)成的物質(zhì)通過公知的方法用具有羥基的高分子材料進(jìn)行表面處理而得到的物質(zhì)、將含有羥基的樹脂通過公知的方法預(yù)先混煉而成的樹脂。
[0046]對(duì)高分子支撐體(A)的形狀沒有特別限定，可以以中空纖維、微珠等各種形態(tài)來使用。適用于體外循環(huán)時(shí)，雖然也可以以微珠的形態(tài)使用，但是，由于微珠會(huì)使滯留部中血栓的產(chǎn)生變多，因此以這種用途為目的時(shí)使用中空纖維是理想的。另外，中空纖維的形態(tài)可以適當(dāng)選擇。
[0047]多孔性中空纖維根據(jù)使用目的通過公知常用的方法制造即可。聚烯烴中空纖維的情況下，可以通過對(duì)紡出纖維(spinning fiber)進(jìn)行退火處理、冷拉伸、熱拉伸、熱固定來制備具有各種細(xì)孔直徑、孔徑分布的中空纖維。
[0048]使用多孔性中空纖維時(shí)，使包含病毒的液體通過中空纖維所具有的孔內(nèi)，從而能夠高效地去除病毒。若考慮在體外循環(huán)時(shí)處理血液的情況，則能夠在孔內(nèi)處理全血是簡(jiǎn)便且理想的，但可列舉出如下的問題:由于滯留的問題、血球直接與細(xì)孔內(nèi)接觸，需要高生物體兼容性。
[0049]另一方面，可列舉出將血球與血漿成分分離，僅使血漿成分通過孔內(nèi)，從血漿去除病毒的方法。此時(shí)，生成通過了中空纖維所具有的孔的液體和未通過孔的液體。根據(jù)包含病毒的液體中的病毒的去除率的研究明顯可知，通過了中空纖維的孔的液體中的病毒的去除率具有好效果，并且，沒有去除作為血液中有用的成分的白蛋白。另外，未通過中空纖維的孔的液體即僅與內(nèi)表面、內(nèi)表面附近的細(xì)孔接觸過的液體中的病毒去除率低于通過了中空纖維的孔的液體中的病毒去除率，得到如下的啟示:病毒去除大部分在通過多孔性中空纖維的孔時(shí)發(fā)生。
[0050]此處，通過孔是指 ，液體從中空纖維的內(nèi)表面穿過到外表面?zhèn)然蛘邚耐獗砻娲┻^到內(nèi)表面?zhèn)鹊臓顟B(tài)。
[0051]所使用的多孔性中空纖維的細(xì)孔直徑只要是可高效地去除上述病毒的孔徑就沒有特別限制。例如，利用體外循環(huán)從血漿中高效地去除病毒時(shí)，需要如下設(shè)計(jì)。在將血球與血漿分離而從血漿中去除病毒時(shí)，需要具有作為血漿分離膜的功能。因此，理想的是，以血球成分、血小板不進(jìn)入細(xì)孔內(nèi)的方式、以平均流量孔徑計(jì)為500nm以下。進(jìn)而，需要以血漿中的蛋白質(zhì)成分的透過性不會(huì)降低的方式進(jìn)行設(shè)計(jì)，因此以平均流量孔徑計(jì)為50nm以上是理想的。
[0052]因此，為了具有作為血漿分離膜的功能，以平均流量孔徑計(jì)需要設(shè)計(jì)為50~500nm。本發(fā)明具有從由血液分離出的血漿中高效地去除病毒的特征，因此，假定要去除病毒時(shí)，根據(jù)病毒的尺寸，最佳的細(xì)孔直徑不同。以C型肝炎病毒的情況為例，優(yōu)選的細(xì)孔直徑為80~250nm、進(jìn)一步優(yōu)選為100~180nm。另外，對(duì)于較大的人類免疫缺陷病毒的情況等，優(yōu)選的細(xì)孔直徑為100~250nm、進(jìn)一步優(yōu)選為120~200nm。
[0053]所使用的多孔性中空纖維的內(nèi)徑只要是可高效地去除上述病毒的內(nèi)徑就沒有特別限制。例如，在體外循環(huán)中使用中空纖維時(shí)，需要如下設(shè)計(jì)。
[0054]從人體取出并進(jìn)行循環(huán)的血液量有限，因此循環(huán)組件等的尺寸不能過大。內(nèi)徑大時(shí)，裝入組件的纖維的根數(shù)減少，因此存在接觸面積減少、線速度差而血液滯留的擔(dān)心。[0055]另一方面，內(nèi)徑過小時(shí)，可以認(rèn)為血球成分變得容易堵塞?？紤]到這些方面時(shí)，內(nèi)徑優(yōu)選為150~500 μ m、進(jìn)一步優(yōu)選為160~400 μ m、進(jìn)一步優(yōu)選為170~350 μ m。
[0056]所使用的多孔性中空纖維的膜厚只要是可高效地去除上述病毒的膜厚就沒有特別限制。例如，對(duì)于利用體外循環(huán)從血漿中高效地去除病毒的情況等，考慮到血漿分離性能、接觸面積、中空纖維的機(jī)械強(qiáng)度等，優(yōu)選為30~100 μ m、進(jìn)一步優(yōu)選為35~80 μ m、進(jìn)一步優(yōu)選為40~60 μ m。
[0057]進(jìn)而，通過在中空纖維外部組合具有捕獲病毒并將其去除的功能的其它基材，也能夠?qū)崿F(xiàn)病毒的去除率的提高。作為這種其它基材，只要具有捕獲病毒并將其去除的功能就沒有特別限制，例如可列舉出糖鏈固定化凝膠、糖鏈固定化無紡布等。
[0058].高分子支撐體(A)中所含的具有羥基的高分子材料
[0059]作為本發(fā)明中可使用的具有羥基的高分子材料，例如可列舉出包含乙烯-乙烯醇共聚物、乙烯-乙烯醇-乙酸乙烯酯共聚物、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物的部分皂化物、乙烯醇-乙酸乙烯酯共聚物等乙烯醇共聚物的物質(zhì)、包含羥基甲基丙烯酸酯共聚物的物質(zhì)、醋酸纖維素的部分皂化物或甘油衍生物。但是，除了例示的物質(zhì)之外，只要是具有羥基的樹脂就沒有特別限制。
[0060]利用具有羥基的高分子材料的表面處理可以通過公知常用的方法來進(jìn)行，例如可列舉出將多孔化了的聚烯烴浸潰于溶解有具有羥基的高分子材料的溶液中，拉起后干燥等作為優(yōu)選的方法。其中，乙烯-乙烯醇共聚物如日本特開昭61-271003等所示從能夠簡(jiǎn)便地使聚烯烴多孔中空纖維親水化的觀點(diǎn)出發(fā)是優(yōu)選的?；蛘?，也可以使用使預(yù)先將聚烯烴等與具有羥基的高分子材料混合而成的物質(zhì)多孔化的手法。
[0061].具有能與羥基反應(yīng)形成共價(jià)鍵的基團(tuán)的化合物(B)
[0062]本發(fā)明中使用的具有能與羥基反應(yīng)形`成共價(jià)鍵的基團(tuán)的化合物(B)只要具有能與進(jìn)行了表面處理的高分子支撐體(A)的表面上存在的羥基反應(yīng)的基團(tuán)、在固定后具有可與氨基容易地反應(yīng)的官能團(tuán)等，就沒有特別限制。例如可列舉出表氯醇、羧酸酐、二羧酸、二酰氯、二異氰酸酯、二環(huán)氧化合物等化合物。作為能夠與基材接枝聚合的化合物，可列舉出(甲基)丙烯酸、(甲基)丙烯酸縮水甘油酯、(甲基)丙烯酰氧基烷基異氰酸酯、馬來酸酐
坐寸ο
[0063]使具有能與羥基反應(yīng)形成共價(jià)鍵的基團(tuán)的化合物(B)與高分子支撐體(A)的表面上存在的羥基反應(yīng)而固定化時(shí)，例如可以在公知常用的羥基與環(huán)氧基的反應(yīng)、羥基與羧基的反應(yīng)、羥基與羧酸酐的反應(yīng)、羥基與異氰酸酯的反應(yīng)所使用的條件等下進(jìn)行。
[0064]另外，將具有烯屬不飽和基團(tuán)的化合物接枝聚合時(shí)，可以通過利用生成自由基來進(jìn)行的接枝聚合反應(yīng)將(甲基)丙烯酸、(甲基)丙烯酸縮水甘油酯、(甲基)丙烯酰氧基烷基異氰酸酯、或馬來酸酐等固定于具有羥基的高分子材料。
[0065]作為生成自由基的方法，可列舉出使用廣泛用于纖維素、聚乙烯醇等具有羥基的高分子材料的自由基聚合引發(fā)劑的硝酸二銨鈰等試劑的方法。
[0066]需要說明的是，高分子支撐體(A)的形狀為中空纖維，向該中空纖維固定具有能與羥基反應(yīng)形成共價(jià)鍵的基團(tuán)的化合物(B)時(shí)，可以根據(jù)實(shí)施方式固定于纖維的內(nèi)表面、外表面中的任一者或兩者。例如在使血液灌注于中空纖維內(nèi)表面時(shí)，使具有能與羥基反應(yīng)形成共價(jià)鍵的基團(tuán)的化合物(B)與中空纖維內(nèi)表面接觸而進(jìn)行固定即可，與此相反，外部灌注時(shí)，使具有能與羥基反應(yīng)形成共價(jià)鍵的基團(tuán)的化合物(B)與中空纖維外表面接觸即可。在希望也包括纖維的細(xì)孔內(nèi)在內(nèi)地固定于內(nèi)外表面時(shí)，也可以將纖維捆扎并浸潰于反應(yīng)溶液，可列舉出作為組件組裝后使反應(yīng)溶液循環(huán)的方法等。
[0067].具有氨基的化合物(C)
[0068]本發(fā)明中使用的具有氨基的化合物(C)只要可以與具有能與羥基反應(yīng)形成共價(jià)鍵的基團(tuán)的化合物(B)反應(yīng)并殘留有能簡(jiǎn)便地將糖類固定的氨基，就沒有特別限制。作為這種化合物(C)，例如可列舉出聚烯丙胺、氨、2-氨基乙醇、乙二胺、丁二胺、1,6-己二胺、1，2_雙(2-氨基乙氧基)乙烷、3，3’ - 二氨基二丙基胺、二亞乙基三胺、苯二胺或聚乙烯亞胺等胺類?；衔?C)的氨基也可以根據(jù)需要具有用于氨基的公知常用的保護(hù)基。作為使用的保護(hù)基，例如可列舉出氨基甲酸叔丁酯(Boc基)、氨基甲酸芐酯等。脫保護(hù)也使用公知常用的方法即可。
[0069]化合物(C)與具有能與羥基反應(yīng)形成共價(jià)鍵的基團(tuán)的化合物⑶的反應(yīng)可以在公知常用的氨基與環(huán)氧基的反應(yīng)、氨基與羧基的反應(yīng)、氨基與羧酸酐的反應(yīng)、氨基與異氰酸酯的反應(yīng)所使用的條件下適宜地進(jìn)行。
[0070].糖類
[0071]本發(fā)明中使用的糖類只要能夠通過吸附等作用高效地捕獲病毒并將病毒從包含病毒的液體中去除，就沒有特別限制。作為這種糖類，例如可列舉出肝素、將肝素的伯羥基或仲羥基硫酸酯化而成的肝素衍生物、將肝素的N-乙酰基的乙?；x去體N-硫酸酯化而成的肝素衍生物、將肝素的N-硫酸基的硫酸基離去體N-乙?；傻母嗡匮苌?、低分子量肝素、硫酸葡聚糖(優(yōu)選硫含量3~6%)、硫酸葡聚糖(優(yōu)選硫含量15~20%)、巖藻依聚糖、硫酸軟骨素A、硫酸軟骨素C、硫酸皮膚素、類肝素物質(zhì)、硫酸乙酰肝素、硫酸鼠李聚糖、硫酸角質(zhì)素、褐藻酸、透明質(zhì)酸、羧甲基纖維素等。
[0072]肝素可以沒有特別限制地使用通常公知的肝素。肝素具有如下的特征:其在小腸、肌肉、肺、脾、肥大細(xì)胞等體內(nèi)廣泛存在，在化學(xué)上為作為粘多糖的硫酸乙酰肝素的一種，為β -D-葡萄糖醛酸、或a -L-艾杜糖醛酸和D-葡萄糖胺通過1，4-鍵聚合而成的高分子，與硫酸乙酰肝素相比，硫酸化的程度特別高。
[0073]另外，對(duì)肝素的平均分子量也沒有特別限制，平均分子量大時(shí)，與化合物(C)的反應(yīng)性降低，因此可以認(rèn)為肝素的固定的效率差。因此，肝素的分子量大致為500~500000道爾頓(dalton)、更優(yōu)選為1200~50000道爾頓、進(jìn)一步優(yōu)選為5000~30000道爾頓。
[0074]作為本發(fā)明中使用的肝素衍生物，可以優(yōu)選使用將上述肝素的伯羥基或仲羥基硫酸酯化而成的肝素衍生物、將上述肝素的N-乙?；囊阴；x去體N-硫酸酯化而成的肝素衍生物、或?qū)⒏嗡氐腘-硫酸基的硫酸基離去體N-乙?；傻母嗡匮苌?。
[0075]合成將肝素的伯羥基或仲羥基硫酸酯化而成的肝素衍生物時(shí)，例如，使上述肝素的堿鹽類通過離子交換換樹脂(H+ )等，與胺類進(jìn)行處理，從而制備肝素胺鹽。然后，用硫酸化劑處理，可以制成目標(biāo)肝素衍生物。作為硫酸化劑，優(yōu)選公知常用的S03.吡啶等。
[0076]合成將肝素的N-乙?；囊阴；x去體N-硫酸酯化而成的肝素衍生物時(shí)，例如，在將肝素的N-乙?；秒碌让撘阴；?，用硫酸化劑處理，可以制成目標(biāo)肝素衍生物。作為硫酸化劑，優(yōu)選公知常用的SO3.^e3等。
[0077]合成將肝素的N-硫酸基的硫酸基離去體N-乙?；傻母嗡匮苌飼r(shí)，例如，在制備肝素的吡啶鎗鹽后，僅將氮原子上的硫酸基脫硫酸化，利用公知常用的方法進(jìn)行N-乙?；纯?。
[0078]另外，低分子量肝素、硫酸葡聚糖(硫含量3~6%)、硫酸葡聚糖(硫含量15~20%)、巖藻依聚糖、硫酸軟骨素A、硫酸軟骨素C、硫酸皮膚素、類肝素物質(zhì)、硫酸乙酰肝素、硫酸鼠李聚糖、硫酸角質(zhì)素、褐藻酸、透明質(zhì)酸、或羧甲基纖維素可以使用公知常用的化合物。
[0079]硫酸葡聚糖的硫酸化度可以為高硫酸化度(硫含量15~20%)，也可以為低硫酸化度(硫含量3~6%)，只要是利用公知常用的方法得到的硫酸葡聚糖，就對(duì)硫酸化度沒有特另IJ限制。
[0080]類肝素物質(zhì)通常是指收錄于日本藥局方外醫(yī)藥品成分規(guī)格等的硫酸化多糖類。但是，只要是通過公知常用的提取方法、制備方法得到的類肝素物質(zhì)，就不限定于日本藥局方外醫(yī)藥品成分規(guī)格所收錄的類肝素物質(zhì)。
[0081]為了介由具有氨基的化合物(C)固定糖類，需要化合物(C)與糖類通過共價(jià)鍵結(jié)合。這種結(jié)合可以通過適當(dāng)進(jìn)行公知常用的反應(yīng)來形成。
[0082]作為對(duì)于糖類的固定而言優(yōu)選的反應(yīng)，可列舉出酰胺化反應(yīng)或還原氨基化反應(yīng)。酰胺化方法例如適宜地進(jìn)行利用活性酯的酰胺化、利用縮合劑的酰胺化、它們的組合使用、混合酸酐法、疊氮化物法、氧化還原法、DPPA法、Woodward法等在肽合成等中使用的公知常用的酰胺化反應(yīng)即可。還原氨基化反應(yīng)使用使化合物(C)的氨基與糖類的還原末端反應(yīng)的公知常用的方法即可。
[0083]作為利用活性酯的酰 胺化，例如可列舉:先使用NHS (N-羥基丁二酰亞胺)、硝基苯酚、五氟苯酚、DMAP (4-二甲基氨基吡啶)、HOBT (1-羥基苯并三唑)、HOAT (羥基氮雜苯并三唑)等形成離去能高的基團(tuán)與羧基暫時(shí)縮合而成的活性酯，再使其與氨基反應(yīng)的方法。利用縮合劑的酰胺化可以單獨(dú)使用，也可以與上述活性酯組合使用。作為縮合劑，可列舉出EDC (1-(3-二甲基氨基丙基-3-乙基-碳二亞胺鹽酸鹽)、HONB (內(nèi)-N-羥基-5-降冰片烯-2，3- 二甲酰胺)、DCC (二環(huán)己基碳二亞胺)、BOP (苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鱗六氟憐酸鹽)、HBTU (O-苯并二唑-1-基-N, N, N’，N’ -四甲基服鐵六氟憐酸鹽)、TBTU (O-苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’ -四甲基脲鎗四氟硼酸鹽)、HOBt (1-羥基苯并三唑)、HOOBt (3，4- 二氫-3-羥基-4-氧代_1，2，3-苯并三嗪)、二對(duì)甲基苯甲酰基碳二亞胺、DIC ( 二異丙基碳二亞胺)、BDP (1-苯并三唑二乙基磷酸酯-1-環(huán)己基-3- (2-嗎啉基乙基)碳二亞胺)、三聚氟氰、三聚氯氰、TFFH(四甲基氟甲脒鎗六氟磷酸鹽)、DPPA(疊氮磷酸二苯酯)、TSTU (O-(N-丁二酰亞胺基)-N，N，N’，N’ -四甲基脲鎗四氟硼酸鹽)、HATU (N-[(二甲基氨基)-l_H-l，2，3-三唑[4，5，6]_吡啶-1-基亞甲基]-N-甲基甲烷銨.六氟磷酸鹽.N-氧化物)、B0P-C1 (雙(2-氧代-3-噁唑烷基)氯化膦)、PyB0P ((l-H-l，2，3-苯并三唑-1-基氧基)-三(吡咯烷代)鱗.四氟磷酸鹽)、BrOP (溴代三(二甲基氨基)鱗?六氟磷酸鹽)、DEPBT (3- ( 二乙氧基磷酰氧基)-1, 2，3-苯并三嗪_4 (3H)-酮)、PyBrOP (溴代三(吡咯烷代)鱗.六氟磷酸鹽)等。
[0084]作為這些酰胺化方法中可以利用的溶劑，可以使用水和用于肽合成的有機(jī)溶劑，例如可列舉出二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亞砜(DMSO)、六磷酰胺、二噁烷、四氫呋喃(THF)、乙酸乙酯等、以及它們的混合溶劑、包含它們的水溶液。[0085]糖類除了介由具有氨基的化合物(C)固定之外，也可以介由具有能與羥基反應(yīng)形成共價(jià)鍵的基團(tuán)的化合物(B)固定。根據(jù)使用目的、反應(yīng)條件、設(shè)備等適當(dāng)選擇即可。
[0086]另外，糖類的固定量只要可高效地去除病毒就沒有特別限制。但是，體外循環(huán)時(shí)，生物體兼容性變得重要，因此，需要以不發(fā)生血漿蛋白質(zhì)的吸附、補(bǔ)體的活性化等的方式進(jìn)行調(diào)整。此時(shí)，可以通過調(diào)整具有氨基的化合物(C)的導(dǎo)入量的方法、改變固定糖類的反應(yīng)條件的方法等來調(diào)整固定量。作為研究結(jié)果，設(shè)為1~100 μ g/cm2、優(yōu)選設(shè)為2~80 μ g/cm2、進(jìn)一步優(yōu)選設(shè)為3~70 μ g/cm2即可。
[0087].包含病毒的液體
[0088]本發(fā)明中作為對(duì)象的包含病毒的液體只要是包含病毒的液體就沒有特別限制。更具體而言，例如可列舉出人的體內(nèi)液體成分即體液、包含病毒的培養(yǎng)液等。作為體液的更具體的例子,可列舉出血液、唾液、汗、尿、鼻水、精液、血漿、淋巴液、組織液等。
[0089]作為具有本發(fā)明的高分子基材的醫(yī)療器具的形態(tài)，只要是可應(yīng)用于前述用途的形狀就沒有特別限定，例如可列舉出中空纖維組件、過濾柱、過濾器等。關(guān)于中空纖維組件、過濾柱，對(duì)容器的形狀和材質(zhì)沒有特別限定，但用于體液(血液)的體外循環(huán)時(shí)，優(yōu)選設(shè)為內(nèi)部容量為10~400mL且外徑為2~1Ocm左右的筒狀容器，更優(yōu)選設(shè)為內(nèi)部容量為20~300mL且外徑為2.5~7cm左右的筒狀容器。圖1中列舉出其一個(gè)例子。
[0090]作為本發(fā)明的醫(yī)療器具的使用方法，只要能夠與上述包含病毒的液體接觸而將該液體中的病毒去除、分離，則可以使用任何方法。
[0091]實(shí)施例
[0092]通過以下的實(shí)施例更詳細(xì)地說明本發(fā)明。
[0093]<多孔性高分子基材的孔徑>
[0094]根據(jù)ASTM F316-86 和 ASTM E1294-89，使用 Porous Materials, Inc.制造的“八一 Λ $ 口 ^ 一夕CFp-200AEX”通過半干法測(cè)定平均流量孔徑(從膜的一邊向另一邊貫通的孔的窄部分的平均孔徑)。試驗(yàn)溶液使用全氟聚酯(商品名“Galwick”)。
[0095]細(xì)孔不需要必須以直狀的管的形式貫通膜，也可以在膜的內(nèi)部彎曲。另外，也可以若干個(gè)孔在膜內(nèi)部融合或者相反地一個(gè)孔支化，也可以它們混合存在。
[0096]<糖類的固定量>
[0097]固定于中空纖維的糖類的量由1，9-二甲基亞甲基藍(lán)的色素吸附量算出。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:制備色素水溶液，添加規(guī)定量的糖類，形成糖類與色素的復(fù)合體。向其中加入己烷使色素與糖類的復(fù)合體從水相分離，利用吸光度(650nm)測(cè)定殘留的水溶液中的色素量，使用糖類的添加量和吸光度制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品測(cè)定:在色素溶液中放入規(guī)定的長(zhǎng)度的中空纖維，由色素的吸附量換算，算出糖類的固定量。
[0098]< HCV去除試驗(yàn)>
[0099]制作膜面積1.Scm2的中空纖維組件，使HCV患者血漿(原液)0.6mL通過，得到通過了孔的液體(濾液)0.3mL、未通過孔的液體(內(nèi)液)0.3mL。對(duì)被檢測(cè)體用強(qiáng)生制造的HCV抗原ELISA試劑盒進(jìn)行測(cè)定，求出:
[0100]HCV去除率(%) = (1-濾液中的HCV量/原液中的HCV量)X 100。
[0101]< ELISA >
[0102]對(duì)被檢測(cè)體用預(yù)處理液(SDS)進(jìn)行預(yù)處理，使HCV核心抗原游離并使共存的HCV抗體失活，制成測(cè)定試樣。將測(cè)定試樣添加到HCV核心抗原抗體固定盤，進(jìn)行孵育。反應(yīng)規(guī)定時(shí)間后，清洗，添加辣根來源的過氧化物酶標(biāo)記HCV核心抗原抗體，進(jìn)行孵育。反應(yīng)規(guī)定時(shí)間后，清洗，添加鄰苯二胺試劑，進(jìn)行孵育。反應(yīng)規(guī)定時(shí)間后，添加反應(yīng)停止液。在492nm的波長(zhǎng)下測(cè)定發(fā)色。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度算出濃度。
[0103]<血漿中白蛋白透過量>
[0104]在被檢測(cè)體中添加溴甲酚綠試劑，在630nm的波長(zhǎng)下測(cè)定發(fā)色。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度算出濃度。
[0105]白蛋白透過率(%) =(濾液中的白蛋白量/原液中的白蛋白量)XlOO
[0106]高分子支撐體(A)的制備例
[0107]使用噴出口徑16mm、環(huán)形狹縫寬度為2.5mm、噴出截面積為1.06cm2的中空纖維賦形用噴絲頭，對(duì)密度0.968g/cm3、熔融指數(shù)5.5的高密度聚乙烯(三井石油化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社制造的HIZEX2200J)在紡絲溫度160°C下進(jìn)行紡絲，以噴絲頭拉伸倍數(shù)(spinningdraft) 1427卷取。得到的未拉伸中空纖維的尺寸是:內(nèi)徑為308 μ m、膜厚為64 μ m。
[0108]將該未拉伸中空纖維在115°C下、以固定長(zhǎng)度進(jìn)行熱處理24小時(shí)。接著，在室溫下以21400%/min的變形速度拉伸1.8倍后，在100°C的加熱爐中以變形速度為330%/min的方式進(jìn)行熱拉伸直至總拉伸倍率成為4.8倍，進(jìn)而，在125°C的加熱爐中連續(xù)地進(jìn)行熱收縮直至總拉伸倍率成為2.8倍，得到拉伸纖維。接著，將乙烯含有率為44%的乙烯-乙烯醇共聚物(EVOH)加熱溶解于75%乙醇水溶液，得到濃度2.5重量％的溶液。在保溫為50°C的該溶液中將拉伸纖維浸潰100秒，在50°C的乙醇飽和蒸汽下保溫80秒，然后再用80秒將溶劑干燥。得到的EVOH親水化處理多孔性中空纖維膜的內(nèi)徑為287 μ m、膜厚為52 μ m。
[0109](實(shí)施例1)
[0110]根據(jù)日本特開平2-029260，在試驗(yàn)`管中放入26mL丙酮、21mL表氯醇、5mL40%Na0H水溶液，在其中浸潰內(nèi)徑287 μ m、膜厚52 μ m、平均孔徑102nm的EVOH親水化處理多孔性中空纖維膜。一邊施加超聲波一邊在30~40°C下使其反應(yīng)5小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后,用丙酮和水清洗，得到導(dǎo)入了環(huán)氧基的中空纖維。導(dǎo)入的環(huán)氧基量使用Na2S2O3溶液、用NaOH進(jìn)行滴定，結(jié)果可知導(dǎo)入了約0.01 μ mol/cm2。
[0111]接著，在28%氨水溶液中浸潰導(dǎo)入了環(huán)氧基的中空纖維，在室溫下反應(yīng)一整夜。反應(yīng)結(jié)束后用水清洗，得到導(dǎo)入了伯氨基的中空纖維。對(duì)于導(dǎo)入的氨基量，用HCl進(jìn)行滴定，可知導(dǎo)入了約0.03 μ mol/cm2。
[0112]接著，在試驗(yàn)管中放入400mg肝素和50mg氰基硼氫化鈉，溶解于50mLPBS，浸潰導(dǎo)入了氨基的中空纖維，在40°C下反應(yīng)3天。反應(yīng)結(jié)束后,用飽和食鹽水和水清洗。為了使殘留的氨基乙?；?，將中空纖維放入到36mL含50%甲醇的AcONa水溶液(0.2mol/L)中，進(jìn)行冰冷。一邊冰冷一邊滴加18mL乙酸酐，直接利用超聲波反應(yīng)30分鐘。
[0113]進(jìn)而，在水浴(10~25°C)中反應(yīng)30分鐘。反應(yīng)結(jié)束后，用水進(jìn)行清洗，再次進(jìn)行同樣的乙酰化處理。反應(yīng)結(jié)束后，用飽和食鹽水、水和PBS進(jìn)行清洗，得到肝素固定化中空纖維。利用亞甲基藍(lán)的吸附量測(cè)定固定量，結(jié)果固定了 17yg/cm2(內(nèi)表面積換算)。
[0114]利用使用上述肝素固定化中空纖維膜得到的組件過濾HCV患者的血漿，結(jié)果去除了 76%的HCV。此時(shí)，白蛋白的透過率為99%以上。
[0115](比較例I)[0116]使用實(shí)施例1中使用的未固定糖類的EVOH親水化處理中空纖維膜進(jìn)行同樣的評(píng)價(jià)，結(jié)果，HCV的去除率為64%。因此可知，固定有肝素的中空纖維可提高HCV的去除率，而不會(huì)去除白蛋白那樣的生物體成分。
[0117](實(shí)施例2)
[0118]除了將實(shí)施例1的EVOH親水化處理膜改變?yōu)閮?nèi)徑267μπι、膜厚54μπι、平均孔徑246nm之外，通過與實(shí)施例1同樣的手法使肝素固定。測(cè)定固定量，結(jié)果固定了 17 μ g/cm2(內(nèi)表面積換算)。
[0119]利用使用上述肝素固定化中空纖維膜得到的組件過濾HCV患者的血漿，結(jié)果去除了 48%的HCV。此時(shí)，白蛋白的透過率為98%。
[0120](比較例2)
[0121]使用實(shí)施例2中使用的未固定糖類的EVOH親水化處理中空纖維膜進(jìn)行同樣的評(píng)價(jià)，結(jié)果HCV的去除率為33%。
[0122](實(shí)施例3)[0123]除了將實(shí)施例1的EVOH親水化處理膜改變?yōu)閮?nèi)徑300 μ m、膜厚40 μ m、平均孔徑226nm之外，通過與實(shí)施例1同樣的手法使肝素固定。測(cè)定固定量，結(jié)果固定了 15 μ g/cm2(內(nèi)表面積換算)。
[0124]利用使用上述肝素固定化中空纖維膜得到的組件過濾HCV患者的血漿，結(jié)果去除了 59%的HCV。此時(shí)，白蛋白的透過率為99%以上。
[0125](比較例3)
[0126]使用實(shí)施例3中使用的未固定糖類的EVOH親水化處理中空纖維膜進(jìn)行同樣的評(píng)價(jià)，結(jié)果HCV的去除率為37%。
[0127](實(shí)施例4)
[0128]除了將實(shí)施例1的EVOH親水化處理膜改變?yōu)閮?nèi)徑257μπι、膜厚54μπι、平均孔徑183nm之外，通過與實(shí)施例1同樣的手法使肝素固定。測(cè)定固定量，結(jié)果固定了 18 μ g/cm2(內(nèi)表面積換算)。
[0129]利用使用上述肝素固定化中空纖維膜得到的組件過濾HCV患者的血漿，結(jié)果去除了 69%的HCV。此時(shí)，白蛋白的透過率為99%以上。
[0130](比較例4)
[0131]使用實(shí)施例4中使用的未固定糖類的EVOH親水化處理中空纖維膜進(jìn)行同樣的評(píng)價(jià)，結(jié)果HCV的去除率為35%。
[0132](實(shí)施例5)
[0133]除了將實(shí)施例1的EVOH親水化處理膜改變?yōu)閮?nèi)徑176 μ m、膜厚40 μ m、平均孔徑153nm之外，通過與實(shí)施例1同樣的手法使肝素固定。測(cè)定固定量，結(jié)果固定了 16 μ g/cm2(內(nèi)表面積換算)。利用使用上述肝素固定化中空纖維膜得到的組件過濾HCV患者的血漿，結(jié)果去除了 59%的HCV。此時(shí)，白蛋白的透過率為99%以上。
[0134](比較例5)
[0135]使用實(shí)施例5中使用的未固定糖類的EVOH親水化處理中空纖維膜進(jìn)行同樣的評(píng)價(jià)，結(jié)果HCV的去除率為31%。
[0136](實(shí)施例6)[0137]除了將實(shí)施例1的EVOH親水化處理膜改變?yōu)閮?nèi)徑168 μ m、膜厚63 μ m、平均孔徑IlSnm之外，通過與實(shí)施例1同樣的手法使肝素固定。測(cè)定固定量，結(jié)果固定了 17 μ g/cm2(內(nèi)表面積換算)。
[0138]利用使用上述肝素固定化中空纖維膜得到的組件過濾HCV患者的血漿，結(jié)果去除了 67%的HCV。此時(shí)，白蛋白的透過率為96%。
[0139](比較例6)
[0140]使用實(shí)施例6中使用的未固定糖類的EVOH親水化處理中空纖維膜進(jìn)行同樣的評(píng)價(jià)，結(jié)果HCV的去除率為45%。
[0141](實(shí)施例7)
[0142]除了將實(shí)施例1的EVOH親水化處理膜改變?yōu)閮?nèi)徑170 μ m、膜厚54 μ m、平均孔徑117nm之外，通過與實(shí)施例1同樣的手法使肝素固定。測(cè)定固定量，結(jié)果固定了 20 μ g/cm2(內(nèi)表面積換算)。
[0143]利用使用上述肝素固定化中空纖維膜得到的組件過濾HCV患者的血漿，結(jié)果去除了 67%的HCV。此時(shí)，白蛋白的透過率為97%。
[0144](比較例7)
[0145]使用實(shí)施例7中使用的未固定糖類的EVOH親水化處理中空纖維膜進(jìn)行同樣的評(píng)價(jià)，結(jié)果HCV的去除率為55%。
[0146](實(shí)施例8)
[0147]除了將實(shí)施例4的肝素改變?yōu)榈头肿恿扛嗡刂?，通過與實(shí)施例4同樣的手法固定低分子量肝素。測(cè)定固定量，結(jié)果固定了 21yg/cm2(內(nèi)表面積換算)。
[0148]利用使用上述低分子量肝素固定化中空纖維膜得到的組件過濾HCV患者的血漿，結(jié)果去除了 51%的HCV。此時(shí)，白蛋白的透過率為99%以上。
[0149](比較例8)
[0150]使用實(shí)施例8中使用的未固定糖類的EVOH親水化處理中空纖維膜進(jìn)行同樣的評(píng)價(jià)，結(jié)果HCV的去除率為35%。因此可知，固定有低分子量肝素的中空纖維可提高HCV的去除率，而不會(huì)去除白蛋白那樣的生物體成分。
[0151](實(shí)施例9)
[0152]除了將實(shí)施例4的肝素改變?yōu)榉肿恿?000的硫酸葡聚糖(硫酸化度15~20%)之外，通過與實(shí)施例4同樣的手法固定硫酸葡聚糖。測(cè)定固定量，結(jié)果固定了 8μ g/cm2(內(nèi)表面積換算)。
[0153]利用使用上述硫酸葡聚糖固定中空纖維膜得到的組件過濾HCV患者的血漿，結(jié)果去除了 49%的HCV。此時(shí)，白蛋白的透過率為99%以上。
[0154](比較例9)
[0155]使用實(shí)施例9中使用的未固定糖類的EVOH親水化處理中空纖維膜進(jìn)行同樣的評(píng)價(jià)，結(jié)果HCV的去除率為35%。因此可知，固定有分子量5000的硫酸葡聚糖(硫酸化度15~20%)的中空纖維可提高HCV的去除率，而不會(huì)去除白蛋白那樣的生物體成分。
[0156](實(shí)施例10)
[0157]除了將實(shí)施例4的肝素改變?yōu)榉肿恿?0000的硫酸葡聚糖(硫酸化度15~20%)之外，通過與實(shí)施例4同樣的手法固定硫酸葡聚糖。測(cè)定固定量，結(jié)果固定了 10μ g/cm2 (內(nèi)表面積換算)。
[0158]利用使用上述硫酸葡聚糖固定中空纖維膜得到的組件過濾HCV患者的血漿，結(jié)果去除了 49%的HCV。此時(shí)，白蛋白的透過率為99%以上。
[0159](比較例10)
[0160]使用實(shí)施例10中使用的未固定糖類的EVOH親水化處理中空纖維膜進(jìn)行同樣的評(píng)價(jià)，結(jié)果HCV的去除率為35%。因此可知，固定有分子量20000的硫酸葡聚糖(硫酸化度15~20%)的中空纖維可提高HCV的去除率，而不會(huì)去除白蛋白那樣的生物體成分。
[0161](實(shí)施例11)
[0162]除了將實(shí)施例2的28%氨水改變?yōu)?%聚烯丙胺水溶液之外，通過與實(shí)施例2同樣的手法固定肝素。測(cè)定固定量，結(jié)果固定了 43 μ g/cm2 (內(nèi)表面積換算)。
[0163]利用使用上述肝素固定化中空纖維膜得到的組件過濾HCV患者的血漿，結(jié)果去除了 59%的HCV。此時(shí)，白蛋白的透過率為99%。
[0164](比較例11)
[0165]利用實(shí)施例11中使用的未固定糖類的EVOH親水化處理中空纖維膜進(jìn)行同樣的評(píng)價(jià)，結(jié)果HCV的去除率為33%。
[0166](實(shí)施例12)
[0167]除了將實(shí)施例11的 E VOH親水化處理膜改變?yōu)閮?nèi)徑257 μ m、膜厚54 μ m、平均孔徑183nm之外，通過與實(shí)施例11同樣的手法固定肝素。測(cè)定固定量，結(jié)果固定了 46 μ g/cm2 (內(nèi)表面積換算)。
[0168]利用使用上述肝素固定化中空纖維膜得到的組件過濾HCV患者的血漿，結(jié)果去除了 59%的HCV。此時(shí)，白蛋白的透過率為98%。
[0169](比較例12)
[0170]利用實(shí)施例12中使用的未固定糖類的EVOH親水化處理中空纖維膜進(jìn)行同樣的評(píng)價(jià)，結(jié)果HCV的去除率為35%。
[0171](實(shí)施例13)
[0172]除了將實(shí)施例12的肝素改變?yōu)榈头肿恿扛嗡刂?，通過與實(shí)施例12同樣的手法固定低分子量肝素。測(cè)定固定量，結(jié)果固定了 70 μ g/cm2 (內(nèi)表面積換算)。
[0173]利用使用上述低分子量肝素固定化中空纖維膜得到的組件過濾HCV患者的血漿，結(jié)果去除了 59%的HCV。此時(shí)，白蛋白的透過率為99%以上。
[0174](實(shí)施例14)
[0175]除了將實(shí)施例12的肝素改變?yōu)榉肿恿?000的硫酸葡聚糖(硫含量15~20%)之外，通過與實(shí)施例12同樣的手法固定硫酸葡聚糖。測(cè)定固定量，結(jié)果固定了 30 μ g/cm2 (內(nèi)表面積換算)。
[0176]利用使用上述硫酸葡聚糖固定中空纖維膜得到的組件過濾HCV患者的血漿，結(jié)果去除了 58%的HCV。此時(shí)，白蛋白的透過率為99%以上。
[0177](實(shí)施例15)
[0178]除了將實(shí)施例12的肝素改變?yōu)榉肿恿?0000的硫酸葡聚糖(硫含量15~20%)之外，通過與實(shí)施例12同樣的手法固定硫酸葡聚糖。測(cè)定固定量，結(jié)果固定了 34 μ g/cm2 (內(nèi)表面積換算)。[0179]利用使用上述硫酸葡聚糖固定中空纖維膜得到的組件過濾HCV患者的血漿，結(jié)果去除了 67%的HCV。此時(shí)，白蛋白的透過率為99%。
[0180](實(shí)施例16)
[0181]在試驗(yàn)管中放入3.5g琥珀酸酐、350 μ L三乙胺，溶解于30mL丙酮。在其中浸潰實(shí)施例4中使用的EVOH親水化處理中空纖維膜，在室溫下反應(yīng)24小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，用丙酮和水清洗。真空干燥，得到導(dǎo)入了羧基的中空纖維。
[0182]在試驗(yàn)管中放入19mg(0.lmmol)EDC 和 12mg(0.lmmol) NHS，溶解于 30mL PBS，然后浸潰導(dǎo)入了羧基的中空纖維，反應(yīng)5小時(shí)。向其中滴加ImL的聚烯丙胺的20%水溶液，在室溫下反應(yīng)4小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，用水清洗，得到導(dǎo)入了伯氨基的中空纖維。然后，與實(shí)施例1同樣地固定肝素，進(jìn)行氨基的乙酰化處理，得到肝素固定化中空纖維。測(cè)定固定量，結(jié)果固定了 66 μ g/cm2 (內(nèi)表面積換算)。
[0183]利用使用上述肝素固定化中空纖維膜得到的組件過濾HCV患者的血漿，結(jié)果去除了 64%的HCV。此時(shí)，白蛋白的透過率為98%。
[0184](實(shí)施例17)
[0185]除了將實(shí)施例16的肝素改變?yōu)榈头肿恿扛嗡刂?，通過與實(shí)施例16同樣的手法固定低分子量肝素。測(cè)定固定量，結(jié)果固定了 68 μ g/cm2 (內(nèi)表面積換算)。
[0186]利用使用上述肝素固定化中空纖維膜得到的組件過濾HCV患者的血漿，結(jié)果去除了 53%的HCV。此時(shí)，白蛋白的透過率為99%。
[0187](實(shí)施例18)
[0188]除了將實(shí)施例4中實(shí)施的在氨基上固定肝素的反應(yīng)改變?yōu)槔檬褂肊DC的活性酯化而非還原氨基化的縮合反應(yīng)之外，通過同樣的操作固定肝素。測(cè)定固定量，結(jié)果固定了30 μ g/cm2 (內(nèi)表面積換算)。
[0189]利用使用上述肝素固定化中空纖維膜得到的組件過濾HCV患者的血漿，結(jié)果去除了 56%的HCV。此時(shí)，白蛋白的透過率為94%。
[0190](實(shí)施例19)
[0191]對(duì)實(shí)施例4中使用的EVOH親水化中空纖維膜通過與實(shí)施例1同樣的方法導(dǎo)入環(huán)氧基之后，浸潰于10%的肝素水溶液，在40°C下使其反應(yīng)。測(cè)定固定量，結(jié)果固定了 Iiyg/cm2(內(nèi)表面積換算)。
[0192]利用使用上述肝素固定化中空纖維膜得到的組件過濾HCV患者的血漿，結(jié)果去除了 41%的HCV。此時(shí)，白蛋白的透過率為99%。
[0193](實(shí)施例20)
[0194]除了將實(shí)施例4的肝素改變?yōu)榱蛩崞暇厶?硫含量3~6%)之外，通過與實(shí)施例4同樣的手法固定低硫酸化度的硫酸葡聚糖。測(cè)定固定量，結(jié)果固定了 41 μ g/cm2 (內(nèi)表面積換算)。
[0195]利用使用上述低硫酸化度的硫酸葡聚糖得到的組件過濾HCV患者的血漿，結(jié)果去除了 40%的HCV。此時(shí)，白蛋白的透過率為99%以上。
[0196](比較例13)
[0197]使用實(shí)施例20中使用的 未固定糖類的EVOH親水化處理中空纖維膜進(jìn)行同樣的評(píng)價(jià)，結(jié)果HCV的去除率為30%。因此可知，固定有低硫酸化度的硫酸葡聚糖的中空纖維可提高HCV的去除率，而不會(huì)去除白蛋白那樣的生物體成分。
[0198](實(shí)施例21)
[0199]除了將實(shí)施例4的肝素改變?yōu)轭惛嗡匚镔|(zhì)之外，通過與實(shí)施例4同樣的手法固定類肝素物質(zhì)。測(cè)定固定量，結(jié)果固定了 18 μ g/cm2 (內(nèi)表面積換算)。
[0200]利用使用上述類肝素物質(zhì)固定中空纖維膜得到的組件過濾HCV患者的血漿，結(jié)果去除了 62%的HCV。此時(shí)，白蛋白的透過率為99%以上。
[0201](比較例14)
[0202]利用實(shí)施例21中使用的未固定糖類的EVOH親水化處理中空纖維膜進(jìn)行同樣的評(píng)價(jià)，結(jié)果HCV的去除率為30%。因此可知，固定有類肝素物質(zhì)的中空纖維可提高HCV的去除率，而不會(huì)去除白蛋白那樣的生物體成分。
[0203](實(shí)施例22)血球血漿分離試驗(yàn)
[0204]在中空纖維組件用外殼管(housing pipe)(內(nèi)徑3mmX外徑5mm,總長(zhǎng)度225mm)的兩端側(cè)面安裝血衆(zhòng)取出用的針頭(15gauge雙螺紋塑料針頭,Musashi Engineering Inc.制造)，插入37根由實(shí)施例1制備的多孔中空纖維膜，使用5分鐘型環(huán)氧樹脂系粘接劑(Bond Quick Set, Konishi C0.，Ltd.)將兩端部固定于外殼管。進(jìn)而,在兩端部安裝血液流入流出用接頭(> 7 — 7 4 r ^ >夕''，ISIS C0.，Ltd.制造)，得到有效長(zhǎng)度15cm、有效過濾面積50cm2的中空纖維組件。從健康的志愿者采血，混合血液保存液((PD液，檸檬酸磷酸葡萄糖溶液)，制備抗凝固的血液，在其中添加HCV患者血漿，作為病毒去除能力評(píng)價(jià)用的血液。將含HCV的血液16mL放入儲(chǔ)液器，加溫至37°C，以血液流量0.33mL/分鐘使血液流入到中空纖維組件，以血漿過濾流量0.1mL/分鐘進(jìn)行血漿分離。30分鐘后，測(cè)定分離出的血漿側(cè)的病毒量,結(jié)果去除了 80%。此時(shí)，白蛋白透過99%以上，LDL透過89%，可知能夠高效地去除病毒而不會(huì)去除有用的血漿成分。試驗(yàn)中，也未發(fā)現(xiàn)由堵塞導(dǎo)致的TMP等的上升、明顯的溶血。由此明顯可知，通過使用固定有配體的中空纖維膜組件，能夠簡(jiǎn)便且連續(xù)地進(jìn)行血漿分離并且去除病毒。
[0205]產(chǎn)業(yè)h的可利用件
[0206]本發(fā)明的高分子基材可以在病毒去除器具中利用，該器具可以用于病毒的去除。
[0207]附圖標(biāo)記說明
[0208].1:病毒液體流入口
[0209].2:未通過孔的液體的流出口
[0210].3:中空纖維膜
[0211].4:通過了孔的病毒液體的流出口
[0212].5:容器
[0213].6:間壁
【權(quán)利要求】
1.一種病毒去除用高分子基材，其特征在于，其為固定有糖類的病毒去除用高分子基材，其中，用具有羥基的高分子材料進(jìn)行了表面處理的高分子支撐體(A)與具有能與羥基反應(yīng)形成共價(jià)鍵的基團(tuán)的化合物(B)結(jié)合，進(jìn)而介由具有氨基的化合物(C)固定有糖類。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的病毒去除用高分子基材，其中，用具有羥基的高分子材料進(jìn)行了表面處理的高分子支撐體(A)為用乙烯-乙烯醇共聚物、乙烯-乙烯醇-乙酸乙烯酯共聚物、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物的部分皂化物、乙烯醇-乙酸乙烯酯共聚物、羥基甲基丙烯酸酯共聚物、醋酸纖維素的部分皂化物或甘油衍生物進(jìn)行了表面處理的中空纖維。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的病毒去除用高分子基材，其中，中空纖維為多孔性中空纖維。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的病毒去除用高分子基材，其中，中空纖維以聚乙烯、聚丙烯或聚4-甲基戊烯作為基質(zhì)。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的病毒去除用高分子基材，其中，多孔性中空纖維的平均流量孔徑為50~500nm的范圍。
6.根據(jù)權(quán)利要求3~5中任一項(xiàng)所述的病毒去除用高分子基材，其中，多孔性中空纖維的內(nèi)徑為150~500 μ m的范圍。
7.根據(jù)權(quán)利要求3~6中任一項(xiàng)所述的病毒去除用高分子基材，其中，多孔性中空纖維的膜厚為30~IOOym的范圍。
8.根據(jù)權(quán)利要求3~7中任一項(xiàng)所述的病毒去除用高分子基材，其中，多孔性中空纖維的糖類的固定量為I~100μ g/cm2的范圍。`
9.根據(jù)權(quán)利要求1~8中任一項(xiàng)所述的病毒去除用高分子基材，其中，具有能與羥基反應(yīng)形成共價(jià)鍵的基團(tuán)的化合物(B)為表氯醇、羧酸酐、二羧酸化合物、二酰氯、二異氰酸酯、二環(huán)氧化合物、(甲基)丙烯酸、(甲基)丙烯酸縮水甘油酯或(甲基)丙烯酰氧基烷基異氰酸酯。
10.根據(jù)權(quán)利要求1~9中任一項(xiàng)所述的病毒去除用高分子基材，其中，具有氨基的化合物(C)為聚烯丙胺、氨、2-氨基乙醇、乙二胺、丁二胺、1,6-己二胺、1,2-雙(2-氨基乙氧基)乙烷、3，3’ - 二氨基二丙基胺、二亞乙基三胺、苯二胺、或聚乙烯亞胺。
11.根據(jù)權(quán)利要求1~10中任一項(xiàng)所述的病毒去除用高分子基材，其中，糖類為肝素、將肝素的伯羥基或仲羥基硫酸酯化而成的肝素衍生物、將肝素的N-乙?；囊阴；x去體N-硫酸酯化而成的肝素衍生物、將肝素的N-硫酸基的硫酸基離去體N-乙?；傻母嗡匮苌铩⒌头肿恿扛嗡?、硫酸葡聚糖、硫酸葡聚糖、巖藻依聚糖、硫酸軟骨素A、硫酸軟骨素C、硫酸皮膚素、類肝素物質(zhì)、硫酸乙酰肝素、硫酸鼠李聚糖、硫酸角質(zhì)素、褐藻酸、透明質(zhì)酸、或羧甲基纖維素。
12.根據(jù)權(quán)利要求1~11中任一項(xiàng)所述的病毒去除用高分子基材，其中，病毒為B型肝炎病毒或C型肝炎病毒。
13.一種病毒的去除方法，其使用權(quán)利要求1~12中任一項(xiàng)所述的病毒去除用高分子基材O
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的病毒的去除方法，其特征在于，具有如下的工序:使包含病毒的液體通過多孔性中空纖維，從而將通過了中空纖維所具有的孔的液體與未通過孔的液體混合。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的病毒的去除方法，其中，包含病毒的液體為包含病毒的血 液。`
【文檔編號(hào)】A61M1/34GK103517725SQ201280021737
【公開日】2014年1月15日 申請(qǐng)日期:2012年2月29日 優(yōu)先權(quán)日:2011年3月4日
【發(fā)明者】櫻井直人, 生島直也, 鈴木哲朗 申請(qǐng)人:Dic株式會(huì)社, 國(guó)立大學(xué)法人浜松醫(yī)科大學(xué)