專利名稱：大米草總生物堿的超聲微波提取法及其抑菌性能應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及大米草提取物的制備方法及應用，特別是涉及大米草總生物堿的提取方法及以所述方法制備的大米草總生物堿在抑菌方面的應用。
背景技術：
大米草屬禾本科米草屬，為多年生濕生草本宿根植物。大米草含有多種生物活性物質，如生物堿、氨基酸、維生素等，粗蛋白的含量較高，是一種營養(yǎng)成分比較齊全的植物。生物堿是自然界中廣泛存在的一大類堿性含氮有機化合物，一些生物堿因其具有抗腫瘤、抗炎、抑菌、抗血小板凝集、抗心律失常以及抗高血壓等心血管疾病的作用，使它在衛(wèi)生、醫(yī)藥等方面有著巨大的應用潛力，近年來成為人們研究的熱點。大米草生物堿可作為研制多糖類藥物、保健飲品、食品添加劑等多種物質的原料。文獻檢索中尚未見有大米草中總生物堿的提取以及其生物堿的應用報道。劉樹興等(劉樹興，郭瑞霞，趙芳，食品科學，2009，30 (16):52-55)采用超聲波法提取荷葉中的生物堿，優(yōu)化條件后生物堿的得率為0.17%。近年來，超聲波提取以其特有的滲透細胞能力，可縮短提取時間，提高有效成分和藥材的利用率，并且可以避免高溫對提取成分的影響，成為提取中藥領域的 一種優(yōu)良方法。申請?zhí)枮?01010289195.8的中國發(fā)明專利采用乙醇浸提的方法，在超聲輔助作用下提取昆明山海棠總生物堿，該方法特征在于提取過程包含以下步驟:(1)昆明山海棠去皮根粉碎后過5-15目篩；(2)加昆明山海棠去皮根10-40倍量61-69%乙醇在超聲條件下多次提取；(3)合并提取液，濃縮后加入30-45%的濃鹽酸調節(jié)PH值至酸性，充分混合后過濾；(4)濾液用氯仿萃取3-5次，所得萃余相用Na2CO3調節(jié)pH值至9-11，再用氯仿萃取3-5次，合并萃取相；(5)40-50°C條件下，旋轉蒸發(fā)萃取相回收氯仿后得總生物堿；或將上述所說的步驟(4)、(5)改為將濾液用氯仿萃取3-5次，所得萃余相用Na2CO3調節(jié)pH值至9-11,將該萃余相通過含C18的固相萃取(Solid-Phase-Extraction,SPE)裝置，先用蒸餾水沖洗30分鐘，再用30-45%乙醇沖洗，收集該沖洗液經旋轉蒸發(fā)回收乙醇后得總生物堿。但由于不同植物在地理生長環(huán)境、科屬種類間的差異，導致不同植物活性成份組成及含量方面存在差異，實際進行超聲波操作條件不同，按照上述文獻和發(fā)明專利對大米草總生物堿進行提取很難有效實施并獲得滿意效果。

發(fā)明內容
本發(fā)明的一個目的是提供一種高效提取大米草總生物堿的方法，利用該方法提取的大米草總生物堿產率高，適合工業(yè)化生產。該方法包括以下步驟:(I)新鮮大米草植株洗凈，烘干，粉碎，得到大米草粉末；(2)收集步驟(I)的粉末，加入到高濃度乙醇中，在超聲波中浸提，抽濾；(3)收集步驟(2)的濾液，將濾液轉移到旋轉蒸發(fā)儀中，旋轉蒸發(fā)至浸膏；(4)用檸檬酸溶解步驟(3)的浸膏，調節(jié)pH至酸性，再用無水碳酸鈉調節(jié)pH至堿性，析出所需的大米草總生物堿沉淀物。
根據本發(fā)明方法的一個優(yōu)選實施方案，其中步驟(1)所述的大米草粉末為20-80目。根據本發(fā)明方法的一個優(yōu)選實施方案，其中步驟(2)所述的大米草粉末和乙醇的料液比(w/v)為 1: 10-1: 30。根據本發(fā)明方法的一個優(yōu)選實施方案，其中步驟(2)所述的高濃度乙醇為60-80%的乙醇。根據本發(fā)明方法的一個優(yōu)選實施方案，其中步驟(2)所述的超聲浸提的時間為40_60min。根據本發(fā)明方法的一個優(yōu)選實施方案，其中步驟(3)所述的旋轉蒸發(fā)的溫度為30-40℃根據本發(fā)明方法的一個優(yōu)選實施方案，其中步驟(4)所述的酸性條件是pHl-3，堿性條件是pH 9-11。與現有技術相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于，采用超聲波法提取，無污染，無毒害，操作條件溫和，提取的總生物堿產率高。根據本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，其中大米草總生物堿產率為1.32%。本發(fā)明的另一個目的是提供按上述方法提取的大米草生物堿在抑菌性方面的應用。在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，用濾紙片法測定總生物堿提取液對大腸桿菌、銅綠假單胞菌、淀粉液化芽孢桿菌的抑菌性能。同時，用阿莫西林溶液做陽性對照，無水乙醇做陰性對照。
具體實施例方式以下實施例旨在進一步舉例說明，但不限制本發(fā)明。實施例1:大米草總生物堿的提取將采來的新鮮大米草經過預處理:自來水清洗，真空干燥，粉碎，過篩。取40目粉末40g，按料液比(w/v)l: 10溶于70%乙醇400mL，超聲波浸提50min。抽濾得提取液，35°C旋轉蒸發(fā)提取液至浸膏，用檸檬酸溶解浸膏調pH值至2.5，無水似20)3調pH值至10.5，產生粗生物堿沉淀。離心分離，棄上清液得沉淀，收集沉淀并烘干，稱量得到0.5286g粗生物堿。計算可得，提取率為1.32%。實施例2:大米草總生物堿的提取將采來的新鮮大米草經過預處理:自來水清洗，真空干燥，粉碎，過篩。取80目粉末40g，按料液比(w/v)l: 30溶于80%乙醇400mL，超聲波浸提60min。抽濾得提取液，40°C旋轉蒸發(fā)提取液至浸膏，用檸檬酸溶解浸膏調pH值至3，無水Na2CO3調pH值至10，產生粗生物堿沉淀。離心分離，棄上清液得沉淀，收集沉淀并烘干，稱量得到0.4729g粗生物堿。計算可得，提取率為1.18%。實施例3:大米草總生物堿的提取將采來的新鮮大米草經過預處理:自來水清洗，真空干燥，粉碎，過篩。取20目粉末40g，按料液比(w/v)l: 20溶于60%乙醇400mL，超聲波浸提40min。抽濾得提取液，30°C旋轉蒸發(fā)提取液至浸膏，用檸檬酸溶解浸膏調pH值至1，無水Na2CCUf pH值至11，產生粗生物堿沉淀。離心分離，棄上清液得沉淀，收集沉淀并烘干，稱量得到0.4963g粗生物堿。計算可得，提取率為1.24%。
實施例4:大米草總生物堿的抑菌作用將實施例1提取到的總生物堿溶于IOmL乙醇即得到52.86mg.ml/1生物堿提取液原液。將6_滅菌并烘干的紙片分別放入大米草生物堿提取液、阿莫西提取液原液。將6mm滅菌并烘干的紙片分別放入大米草生物堿提取液、阿莫西林、無水乙醇中浸泡2h，取出自然晾干，除去多余濾液，無菌保存。移取大腸桿菌、銅綠假單胞菌和淀粉液化芽孢桿菌菌懸液各200 μ L至LB平板，用滅菌的涂布棒分別均勻涂布于平板上，制成含菌平板，待平板稍干，用無菌鑷子將制備好的藥敏紙片均勻間隔貼于含菌平板表面，同時以阿莫西林為陽性對照，以無水乙醇為陰性對照，用提取液浸泡的藥敏紙片放三個，陽性陰性對照各一個。靜置Ih后將貼好的平板倒置于37°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24h，取出，觀察抑菌圈大小，用游標卡尺測定并記錄結果，試驗重復三次，取其平均值。抑菌率(％)=(試驗組抑菌圈平均直徑-空白濾紙片直徑)/空白濾紙片直徑X 100 %表I總生物堿提取液對大腸桿菌的抑菌圈大小
權利要求
1.一種超聲波提取大米草總生物堿方法及其抑菌性應用，其特征在于:所述提取方法包括以下步驟: (1)新鮮大米草植株洗凈，烘干，粉碎，得到大米草粉末。
(2)收集步驟(I)的粉末，加入到高濃度乙醇中，在超聲波中浸提，抽濾。
(3)收集步驟(2)的濾液，將濾液轉移到旋轉蒸發(fā)儀中，旋轉蒸發(fā)至浸膏。
(4)用檸檬酸溶解步驟(3)的浸膏，調節(jié)pH至酸性，再用無水碳酸鈉調節(jié)pH至堿性，析出所需的大米草總生物堿沉淀物。
2.根據權利要求1的方法，其中步驟(I)所述的大米草粉末為20-80目。
3.根據權利要求1的方法，其中步驟(2)所述的大米草粉末和乙醇的料液比(w/v)為I: 10-1: 30。
4.根據權利要求1的方法，其中步驟(2)所述的高濃度乙醇為60-80%的乙醇。
5.根據權利要求1的方法，其中步驟(2)所述的超聲浸提的時間為40-60min。
6.根據權利要求1的方法，其中步驟(3)所述的旋轉蒸發(fā)的溫度為30-40°C。
7.根據權利要求1的方法，其中步驟(4)所述的酸性條件是pH1-3，堿性條件是pH9-11。
8.按照權利要求1至7中任何一項的方法提取的大米草總生物堿在抑菌性方面的應 用。
全文摘要
本發(fā)明涉及大米草總生物堿的超聲微波提取方法及其抑菌性應用，特別是涉及提取大米草總生物堿的方法及按所述方法提取的大米草總生物堿的抑菌性應用。提取方法包括大米草干燥，粉碎過篩；將粉末加入到乙醇中，超聲浸提；抽濾得提取液，旋轉蒸發(fā)至浸膏；用檸檬酸溶解浸膏調pH值至酸性，無水Na2CO3調pH值至堿性，總生物堿沉淀；離心，棄上清液得沉淀，收集沉淀并烘干，得大米草總生物堿。此生物堿對大腸桿菌、銅綠假單胞菌和淀粉液化芽孢桿菌的生長具有一定的抑制性。
文檔編號A61K36/899GK103191316SQ20121055231
公開日2013年7月10日 申請日期2012年12月19日 優(yōu)先權日2012年12月19日
發(fā)明者許偉, 邵榮, 丁建飛, 顏秀花 申請人:鹽城工學院