專利名稱：靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物及其制備方法，具體說是一種分子中含有抗人膀胱癌單克隆抗體、白蛋白和絲裂霉素的藥物及其制備方法。
背景技術(shù)：
膀胱癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著人們的生命和健康，其中90%以上是尿路上皮癌(移行)細(xì)胞癌(transitional cell carcinoma, TCC),其中約10%最終發(fā)展為肌層浸潤性或轉(zhuǎn)移性膀胱癌，遠(yuǎn)期療效不佳，由于其較高的發(fā)病率及復(fù)發(fā)率，膀胱灌注化療對(duì)于非肌層浸潤性膀胱是主要治療方法之一。目前膀胱灌注化療藥物有絲裂霉素(簡稱MMC)、喜樹堿、吡柔吡星、表柔比星及柔紅霉素等多種。膀胱癌高復(fù)發(fā)率原因之一是對(duì)抗癌藥物耐藥性的產(chǎn)生，體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)這些藥物對(duì)癌細(xì)胞有明顯殺傷作用，但由于其選擇性太差，在殺傷癌細(xì)胞的同時(shí)也殺傷大量的正常細(xì)胞，且其有效劑量與毒性劑量往往很接近，容易出現(xiàn)并發(fā)癥，影響病人的生活質(zhì)量，如何實(shí)現(xiàn)化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的特異性殺傷成為提高藥物治療效果的可能途徑。靶向藥物的出現(xiàn)，大大降低了藥物的副作用。所謂靶向藥物治療就是使藥物瞄準(zhǔn)腫瘤部位，在局部保存相對(duì)高的濃度，延長藥物的時(shí)間，提高對(duì)腫瘤的殺傷力，而對(duì)正常組織細(xì)胞作用較小。絲裂霉素是從頭狀鏈霉菌培養(yǎng)液中分離提取的一種廣譜抗腫瘤抗生素，對(duì)多種癌癥有抗癌作用，其作用原理可使細(xì)胞的DNA解聚，同時(shí)阻礙DNA的復(fù)制，從而抑制腫瘤細(xì)胞分裂。絲裂霉素為細(xì)胞周期非特異性藥物，其抗腫瘤譜較廣，作用迅速，但治療指數(shù)不高，毒性較大。因此通過對(duì)絲裂霉素進(jìn)行改性，制成靶向藥物來降低它的副作用，成為研究的熱點(diǎn)
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物及其制備方法，通過乳化熱固化法用戊二醛為交聯(lián)固化劑，把絲裂霉素分子載在白蛋白分子上，制備成280 350nm白蛋白載絲裂霉素(MMC-NS)納米微球，然后用異型雙功能連接劑N-琥珀酰亞胺基-3- (2-毗啶基二琉)丙酸酯(STOP)使白蛋白載絲裂霉素分子連接上吡啶二硫基基團(tuán)，得到MMC-NS-PDP分子，最后MMC-NS-PDP與BD1-1-SH分子反應(yīng)，得到具有靶向性和緩釋功能的抗膀胱癌藥物，本發(fā)明的抗膀胱癌藥物對(duì)膀胱癌有特異靶向性，降低了絲裂霉素的副作用，藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷力強(qiáng)，藥效持久，且對(duì)正常組織細(xì)胞作用小。本發(fā)明的技術(shù)方案如下
靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物及其制備方法，其特征是藥物分子中含有白蛋白分子、抗人膀胱癌單克隆抗體(BD1-1)和絲裂霉素(MMC)，合成方法是用戊二醛為交聯(lián)固化劑，把絲裂霉素分子與牛血白蛋白分子結(jié)合，制成粒徑為280 350納米的白蛋白載絲裂霉素(MMC-NS)納米微球，然后用異型雙功能連接劑N-琥珀酰亞胺基-3- (2-毗啶基二琉)丙酸酯使白蛋白載絲裂霉素分子連接上吡啶二硫基基團(tuán)，得到MMC-NS-PDP分子，最后MMC-NS-PDP與BD1-1-SH分子反應(yīng)，得到分子中含有抗人膀胱癌單克隆抗體、白蛋白分子和絲裂霉素的藥物，即靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物，英文縮寫為BD1-1-MMC-NS。所述的白蛋白載絲裂霉素(MMC-NS)納米微球的制備方法為
(al)用生理鹽水溶解牛血白蛋白，配置成每毫升含O. 15 O. 25g的牛血白蛋白溶液，用牛血白蛋白溶液溶解絲裂霉素，配置成每毫升含O. 06 O.1OmgMMC的MMC牛血白蛋白溶液；
(a2 )按照體積比，環(huán)己烷乳化劑MMC牛血白蛋白溶液為100:3. O 4. O: O. 5，把物料放入反應(yīng)器中，用攪拌器攪拌均勻；用功率為200 400W的超聲波乳化15min，加入戊二醛飽和甲苯溶液，加入量按照環(huán)己烷的體積計(jì)算，環(huán)己烷戊二醛飽和甲苯溶液為100:2，在20 40°C下攪拌反應(yīng)2h，反應(yīng)完成后把反應(yīng)器內(nèi)的所有物料放入離心機(jī)，在2000 4000r/min的轉(zhuǎn)速下離心2min,棄去沉積的大微球,然后在500 800r/min轉(zhuǎn)速下離心3min，得到所需要的納米微球，用環(huán)己烷洗滌納米微球，洗滌后的納米微球加入丙酮和乙醇胺，常溫?cái)嚢鑜h，過濾，所得固體用異丙醇洗滌，再用丙酮洗滌，最后用凍干機(jī)凍干，得到MMC-NS凍干粉，粒徑為280 350nm。所述的MMC-NS-PDP的制備方法為
(bl)用O.Olmol/L的無菌PBS緩沖溶液(即磷酸鹽緩沖溶液)溶解MMC-NS，使每毫升含MMC-NS 2 3mg，與SPDP無水乙醇溶液混合，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)30min，投料摩爾比為SPDP:MMC-NS=20:1 ;用離心機(jī)離心，得到沉淀；
(b2)用O. 01mol/L的無菌PBS緩沖溶液與沉淀混合均勻，用離心機(jī)離心，得到沉淀；(b3)重復(fù)步驟(b2)三次，以除去多余的SPDP，得到純凈的MMC-NS-PDP，用0. 02 mo I /L無菌PBS緩沖液溶解，配置成2. 5mg/ml的MMC-NS-PDP溶液。
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所述的BD1-1-SH為BD1-1與SPDP反應(yīng)，BD1-1分子引入吡啶二硫基(PDP)，得到BD1-1-PDP，然后用二硫蘇糖醇(DTT)還原得到巰基，即為BD1-1-SH。所述的靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物(BD1-1-MMC-NS)的其制備方法，步驟為用0. 02 mo I / L無菌PBS緩沖液溶解BD1-1-SH，配置成每毫升含Img的BD1-1-SH，等體積加入b3步驟得到的2. 5mg/ml的MMC-NS-PDP溶液，在4 10°C下攪拌16 20h，然后在10000 15000r/min下離心30s 15min,取沉淀用0. 02 mo I / L無菌PBS離心洗漆3 4次，得到的沉淀物即為BD1-1-MMC-NS。所述的乳化劑為span40、span60、span80、span83和span85中的一種或它們的組合物。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是1.本發(fā)明采用乳化熱好固化法，同時(shí)使用超聲乳化技術(shù)，得到的白蛋白載絲裂霉素粒徑為280 350nm，納米微球大小均勻，分散性好，表面光滑，對(duì)藥物的靶向特異性有非常積極的作用。2.本發(fā)明通過絲裂霉素與白蛋白偶聯(lián)固化，把絲裂霉素載在白蛋白上，使絲裂霉素緩慢釋放，使藥物的作用時(shí)間延長，減少副作用。3.本發(fā)明用抗人膀胱癌單克隆抗體(BD1-1)與白蛋白載絲裂霉素偶聯(lián)制成靶向藥物，使制成的藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇性更強(qiáng)，絕大部分藥物只靶向結(jié)合膀胱癌細(xì)胞，釋放出絲裂霉素，殺死癌細(xì)胞，而不損害正常的膀胱粘膜細(xì)胞。


圖1為單個(gè)MMC-NS藥物放大20萬倍的掃描電鏡 圖2為形狀規(guī)則、分散性良好的MMC-NS藥物放大15萬倍掃描電鏡 圖3為MMC-NS藥物的粒徑分布圖，納米微球的粒徑測試結(jié)果粒徑=314. 18±31· 093nm ；
圖4為MMC-NS納米微球與EJ人膀胱癌細(xì)胞圖，從圖中看出，MMC-NS很少與EJ人膀胱癌細(xì)胞結(jié)合，掃描電鏡可見腫瘤細(xì)胞表面有豐富的突起和微絨毛；
圖5為靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物(BD1-1-MMC-NS)與EJ人膀胱癌細(xì)胞結(jié)合圖，從圖中看出，BD1-1-MMC-NS與EJ人膀胱癌細(xì)胞結(jié)合得很好，BD1-1-MMC-NS把腫瘤細(xì)胞大部分覆蓋了，掃描電鏡可見腫瘤細(xì)胞表面突起和微絨毛明顯減少，說明BD1-1-MMC-NS對(duì)腫瘤細(xì)胞有非常好的殺傷力。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 本發(fā)明的靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物的制備包括如下步驟
a.白蛋白載絲裂霉素(MMC-NS)納米微球的制備
(al)用生理鹽水溶解牛血白蛋白，配置成每毫升含O. 15g的牛血白蛋白溶液，用牛血白蛋白溶液溶解絲裂霉素，配置成每毫升含O. 06mgMMC的MMC牛血白蛋白溶液；
(a2) IOOml環(huán)己烷、3. 0mlspan40和O. 5mlMMC牛血白蛋白溶液放入三口燒瓶中，用攪拌器攪拌均勻；用功率為200W的超聲波乳化15min，加入2ml戊二醛飽和甲苯溶液，20°C下攪拌反應(yīng)2h,把物料放入離心機(jī),在2000r/min的轉(zhuǎn)速下離心2min,棄去沉積的大微球,然后在500r/min轉(zhuǎn)速下離心3min，得到所需要的納米微球，用環(huán)己烷洗滌納米微球，加入丙酮，加入適量乙醇胺，常溫?cái)嚢鑜h，過濾，固體用異丙醇洗滌，再用丙酮洗滌，最后用凍干機(jī)凍干，得到MMC-NS凍干粉，粒徑為280 350納米；
b.MMC-NS-PDP 的制備
(bl)用O. 01mol/L的無菌PBS緩沖溶液溶解MMC-NS，使每毫升含MMC-NS 2mg,與SPDP無水乙醇溶液混合，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)30min，投料摩爾比為SPDP:MMC-NS=20:1 ;離心，得到沉淀；
(b2)用O. 01mol/L的無菌PBS緩沖溶液與沉淀混合均勻，用離心機(jī)離心，得到沉淀；(b3)重復(fù)步驟(b2)三次，以除去多余的SPDP，得到純凈的MMC-NS-PDP，用O. 02 mo I /L無菌PBS緩沖液溶解，配置成2. 5mg/ml的MMC-NS-PDP溶液；
c.BD1-1-MMC-NS 的制備
用0.02 mo I / L無菌PBS緩沖液溶解BD1-1-SH，配置成每毫升含Img的BD1-1-SH，等體積加入b3步驟得到的2. 5mg/ml的MMC-NS-PDP溶液，在4°C下攪拌20h，然后在15000r/min下離心30s,取沉淀用0. 02 mo I / L無菌PBS離心洗漆3_4次，得到的沉淀物即為BD1-1-MMC-NSo實(shí)施例2
步驟與實(shí)施例1相同，只是把(al)步驟的生理鹽水配置成的蛋白質(zhì)濃度為0. 20g/ml,配置成每毫升含O. 07mgMMC的MMC牛血白蛋白溶液；(a2)步驟的乳化劑改為3.6ml span80，超聲波的功率為300W, 3000r/min下去大微球,600r/min下得到要求的納米微球；(bl)步驟每毫升含MMC-NS 2. 5mg ；c步驟改為6°C下攪拌18h，離心轉(zhuǎn)速為12000r/min，時(shí)間為IOmin,得到大小均勻，分散性好，二聯(lián)體藥物BD1-1-MMC-NS。實(shí)施例3
步驟與實(shí)施例1相同，只是把(al)步驟的生理鹽水配置成的蛋白質(zhì)濃度為O. 30g/ml,配置成每毫升含O. 08mgMMC的MMC牛血白蛋白溶液；(a2)步驟的乳化劑改為4. Oml span83，超聲波的功率為400W, 2000r/min下去大微球,600r/min下得到要求的納米微球；(bl)步驟每毫升含MMC-NS 2. 5mg ；c步驟改為6°C下攪拌18h，離心轉(zhuǎn)速為10000r/min，時(shí)間為15min,得到大小均勻，分散性好，二聯(lián)體藥物BD1-1-MMC-NS。實(shí)施例4
步驟與實(shí)施例1相同，只是把(al)步驟的生理鹽水配置成的蛋白質(zhì)濃度為O. 30g/ml,配置成每毫升含O.1OmgMMC的MMC牛血白蛋白溶液；(a2)步驟的乳化劑改為3.8ml span85，超聲波的功率為400W,4000r/min下去大微球,800r/min下得到要求的納米微球；(bl)步驟每毫升含MMC-NS 3mg ；c步驟改為10°C下攪拌16h，離心轉(zhuǎn)速為14000r/min，時(shí)間為60s，得到大小均勻，分散性好，二聯(lián)體藥物BD1-1-MMC-NS。應(yīng)用實(shí)施例1
本發(fā)明的靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物治療裸小鼠皮下EJ人膀胱癌細(xì)胞移植瘤的研究，試驗(yàn)方法如下1.裸小鼠膀胱癌皮下瘤模型的建立取已傳代3 4代的EJ人膀胱癌細(xì)胞以PBS液配置成細(xì)胞懸液進(jìn)行接種，接種細(xì)胞濃度為I X 10 Vml每只裸小鼠接種量為O. 2ml。接種前以碘伏消毒裸小鼠皮膚，應(yīng)用I ml注射器抽取細(xì)胞懸液，接種于裸小鼠左前腋部皮下，觀察接種部位有無溢出、腫瘤生長及荷瘤裸小鼠的一般狀況。待2周后可明顯觸及皮下瘤，無菌操作切下，同上方法在裸小鼠皮下傳代兩次。成瘤后，再分組治療。取下皮下瘤，切成厚度O. 2cm薄片，再用自制的內(nèi)直徑O. 12cm的不銹鋼管,統(tǒng)一規(guī)格下壓切成面積約O. 045cm2的腫塊，確保每只小鼠接種部位的腫瘤細(xì)胞數(shù)量一致，用自制套管針傳送接種于實(shí)驗(yàn)用裸小鼠左側(cè)肩部，連續(xù)觀察腫瘤的生長情況。待腫瘤平均直徑達(dá)到O. 8cm時(shí)，將裸小鼠隨機(jī)分組，給予化療藥物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。持續(xù)觀察，稱量體重，用游標(biāo)卡尺測量皮下瘤腫瘤體積大小。SPF級(jí)飼養(yǎng)室飼養(yǎng)，裸小鼠飲用的滅菌蒸餾水及輻照飼料均由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。操作均遵守動(dòng)物倫理學(xué)條例。2.皮下瘤實(shí)驗(yàn)為組隨機(jī)將20只4 6周齡，體重相近，雌性裸小鼠分成4組。于左前肩背部皮下種植體積相同大小的瘤塊，種植10天后可達(dá)到直徑8_皮下瘤，分組實(shí)驗(yàn)。其中以含MMC有效劑量2. 5mg / kg給予瘤內(nèi)注射，為了使藥液完全滲透腫瘤組織，一半劑量被注入腫瘤中央，另一半則在瘤周。分組如下①.空白對(duì)照組(5只):瘤內(nèi)注射無菌PBS O. 15ml/ 次；@ . MMC 組(5 只):瘤內(nèi)注射 O. 2mg/ml 絲裂霉素 O. 15ml/ 次. MMC-NS組(5只)瘤內(nèi)注射O. 2mg/ml絲裂霉素白蛋白微球O. 15ml/次；④· BD1-1-MMC-NS組(5只):瘤內(nèi)注射O. 2mg/ml膀胱癌單克隆抗體 與絲裂霉素白蛋白微球的二聯(lián)體O. 15ml/次；以上操作均每3天一次，共治療30天，實(shí)驗(yàn)結(jié)束。3.腫瘤體積測定每周測量腫瘤直徑，計(jì)算體積，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，將裸小鼠用頸椎脫臼法處死，切取瘤體稱濕重，統(tǒng)計(jì)各組腫瘤體積、重量的差異，計(jì)算腫瘤抑制率。繪制裸小鼠皮下移植瘤生長曲線圖分組治療后每周用游標(biāo)卡尺檢測各組小鼠腫瘤的最長徑a值和最短徑b值，根據(jù)公式計(jì)算出小鼠腫瘤體積。第I次用藥時(shí)間記為O天，以時(shí)間(d)為橫坐標(biāo)，每組動(dòng)物腫瘤體積的均數(shù)為縱坐標(biāo),繪制腫瘤生長曲線。v=l/2ab2
(注V-體積；a_腫瘤長徑；b_腫瘤短徑；式中體積為平均體積)
抑瘤率=(對(duì)照組腫瘤體積-實(shí)驗(yàn)組腫瘤體積)/對(duì)照組腫瘤體積*100 %
4.裸小鼠皮下瘤的給藥方法及裸小鼠皮下瘤模型的觀測用Iml注射器在皮下瘤的遠(yuǎn)端正常皮膚進(jìn)針，在皮下潛行一段后，刺入瘤體，緩慢注射給藥。腋下接種I周后裸小鼠皮下出現(xiàn)米粒大小結(jié)節(jié)，2周后裸小鼠皮下出現(xiàn)綠豆大小的白色結(jié)節(jié)，質(zhì)硬，活動(dòng)度差，即為皮下種植瘤。
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5.標(biāo)本的收集手術(shù)開始時(shí)，即對(duì)各組小鼠進(jìn)行精神狀態(tài)、飲食、大小便、腹部情況等嚴(yán)密觀察。于荷瘤裸小鼠皮下瘤模型治療后一月，頸椎脫白法處死裸小鼠，切取皮下腫瘤觀察其大體形態(tài)，浸入等滲鹽水漂洗干凈，測量各組腫瘤體積。將瘤塊浸泡到10%的福爾馬林溶液中。6.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:計(jì)量資料以￡ ±s表示，采用SPSS 13. O統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)結(jié)果單因素方差分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α =0. 05，以Ρ〈0. 05作為有顯著性差異的標(biāo)準(zhǔn)；P<0. 01認(rèn)為差異有非常顯著性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.皮下瘤組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果
分組治療后對(duì)照組裸小鼠皮下瘤腫瘤生長迅速，BD1-1-MMC-NS組腫瘤生長明顯減慢，部分腫瘤停止生長，少數(shù)腫瘤縮小，但未出現(xiàn)腫瘤消退。BD1-1-MMC-NS組抑瘤顯著，腫瘤體積明顯小于其他三組(見表1，圖1)。表I實(shí)驗(yàn)期間每周測量皮下瘤計(jì)算瘤體積(土s，η=5)
權(quán)利要求
1.靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物的制備方法，其特征是藥物分子中含有白蛋白分子、抗人膀胱癌單克隆抗體(BD1-1)和絲裂霉素(MMC)，合成方法是用戊二醛為交聯(lián)固化劑，把絲裂霉素分子與牛血白蛋白分子結(jié)合，制成粒徑為280 350納米的白蛋白載絲裂霉素(MMC-NS)納米微球，然后用異型雙功能連接劑N-琥珀酰亞胺基-3- (2-毗啶基二琉)丙酸酯使白蛋白載絲裂霉素分子連接上吡啶二硫基基團(tuán)，得到MMC-NS-PDP分子，最后MMC-NS-PDP與BD1-1-SH分子反應(yīng)，得到分子中含有抗人膀胱癌單克隆抗體、白蛋白分子和絲裂霉素的藥物，即靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物，英文縮寫為BD1-1-MMC-NS。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物的制備方法，其特征在所述的白蛋白載絲裂霉素(MMC-NS)納米微球的制備方法為(1)用生理鹽水溶解牛血白蛋白，配置成每毫升含O.15 O. 25g的牛血白蛋白溶液，用牛血白蛋白溶液溶解絲裂霉素，配置成每毫升含O. 06 O.1OmgMMC的MMC牛血白蛋白溶液；(2)按照體積比，環(huán)己烷乳化劑MMC牛血白蛋白溶液為100:3.O 4.0:0. 5，放入反應(yīng)器中，用攪拌器攪拌均勻；用功率為200 400W的超聲波乳化15min，加入戊二醛飽和甲苯溶液，加入量按環(huán)己烷的體積比計(jì)算，環(huán)己烷戊二醛飽和甲苯溶液100:2，在20 40°C下攪拌反應(yīng)2h，反應(yīng)完成后的所有物料放入離心機(jī)，在2000 4000r/min的轉(zhuǎn)速下離心2min,棄去沉積的大微球,然后在500 800r/min轉(zhuǎn)速下離心3min,得到所需要的納米微球，用環(huán)己烷洗滌納米微球，洗滌后的納米微球加入丙酮和乙醇胺，常溫?cái)嚢鑜h，過濾，所得固體用異丙醇洗滌，再用丙酮洗滌，最后用凍干機(jī)凍干，得到MMC-NS凍干粉，粒徑為280 350nmo
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物的制備方法，其特征是所述的MMC-NS-PDP的制備方法為(1)用O.01mol/L的無菌PBS緩沖溶液溶解MMC-NS，使每毫升含MMC-NS 2 3mg，與SPDP無水乙醇溶液混合，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)30min，投料摩爾比為SPDP:MMC_NS=20:1 ;用離心機(jī)離心，得到沉淀；(2)用O.01mol/L的無菌PBS緩沖溶液與沉淀混合均勻，用離心機(jī)離心，得到沉淀；(3)重復(fù)步驟(2)三次，以除去多余的SPDP，得到純凈的MMC-NS-PDP，用O.02 mo I / L無菌PBS緩沖液溶解，配置成2. 5mg/ml的MMC-NS-PDP溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物的制備方法，其特征在于所述的BD1-1-SH為BD1-1與SPDP反應(yīng)，BD1-1分子引入吡啶二硫基(PDP)，得到BD1-1-PDP，然后用二硫蘇糖醇(DTT)還原得到巰基，即為BD1-1-SH。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物的制備方法，其特征是用0.02 mo I / L無菌PBS緩沖液溶解BD1-1-SH，配置成每毫升含Img的BD1-1-SH，等體積加入b3步驟得到的2. 5mg/ml的MMC-NS-PDP溶液，在4 10°C下攪拌16 20h，然后在10000 15000r/min下離心30s 15min,取沉淀用0. 02 mo I / L無菌PBS離心洗漆3 4次，得到的沉淀物即為BD1-1-MMC-NS。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物的制備方法，其特征在于所述的乳化劑為span40、span60、span80、span83和span85中的一種或它們的組合物。
7.權(quán)利要求書所述的靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物的制備方法得到的產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物及其制備方法，其特征是藥物分子中含有白蛋白分子、抗人膀胱癌單克隆抗體(BDI-1)和絲裂霉素(MMC)，其合成方法是用戊二醛為交聯(lián)固化劑，把絲裂霉素分子與牛血白蛋白分子結(jié)合，制成粒徑為280～350納米的白蛋白載絲裂霉素(MMC-NS)納米微球，然后用異型雙功能連接劑N-琥珀酰亞胺基-3-(2-毗啶基二琉)丙酸酯(SPDP)使白蛋白載絲裂霉素分子連接上吡啶二硫基基團(tuán)(PDP)，得到MMC-NS-PDP分子，最后MMC-NS-PDP與BDI-1-SH分子反應(yīng)，得到分子中含有抗人膀胱癌抗體、白蛋白分子和絲裂霉素的藥物，即靶向抗膀胱癌白蛋白載絲裂霉素藥物，英文縮寫為BDI-1-MMC-NS。本發(fā)明的藥物對(duì)膀胱癌有很強(qiáng)的靶向性，對(duì)膀胱癌的殺傷力強(qiáng)，而對(duì)正常組織細(xì)胞作用較小。
文檔編號(hào)A61K47/42GK103041401SQ201210550539
公開日2013年4月17日 申請(qǐng)日期2012年12月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月18日
發(fā)明者李云龍, 周紅華 申請(qǐng)人:李云龍, 周紅華