專利名稱：穿破石總黃酮在制備保護肝臟藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及穿破石提取物的醫(yī)藥用途，具體涉及一種以穿破石根為原料提取純化出穿破石總黃酮及其在保護肝臟藥物中的應用。
背景技術：
穿破石為桑科柘屬植物構(gòu)棘[MacIuracochinchinensis ( Lour. ) Corner ]或柘樹[tri-cusp idata Carr .]的根,又名柘根、川破石、地棉根、拉牛入石、柘藤根等。其味淡、微苦，性涼；具有祛風通絡，清熱除濕，解毒消腫等功效；主治風濕痹痛、跌打損傷、黃疸、腮腺炎、肺結(jié)核、胃和十二指腸潰瘍、淋濁、蠱脹、閉經(jīng)、勞傷咳血、療瘡癰腫。穿破石資源豐富，主要分布在湖南、安徽、浙江、福建、廣東、廣西等地，為西南地區(qū)民間常用藥材。穿破石含黃酮苷、酚類、氨基酸、有機酸、糖類、揮發(fā)油等成分，其活性成分以黃酮類為主。已從穿破石中分離出的成分有根含柘樹異黃酮(cudraisoflavone) A, 3' -O-甲基香豌豆式兀(3，-0-methylorobol),去氫木香內(nèi)酯(dehydrocostuslactone),亞油酸甲酯(methyllinoIeate), β -谷留醇(β -sitoste-rol)等。在近代臨床方面的報道中，穿破石常用于急慢性肝炎的治療，并有良效。民間用其治療肝臟疾病的歷史悠久，長期經(jīng)驗與用藥表明，其藥用價值高。近年來對穿破石的研究與開發(fā)不足，僅有少數(shù)的化學、藥理與臨床方面的報道，尚未見穿破石總黃酮在急性肝損傷、保肝藥物應用方面的研究報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種穿破石總黃酮在制備保護肝臟藥物中的應用。本發(fā)明提供穿破石總黃酮的一種新用途，用于制備保護肝臟的藥物。通過提取其總黃酮部位，制成片劑、膠囊、緩釋片、滴丸、沖劑、微粒劑和針劑等。穿破石總黃酮臨床推薦 劑量(成人計)0. l-ο. 3g/天，口服，一日三次。并通過動物實驗證明其有顯著的抗急性肝損傷的作用，可應用于制備保護肝臟的藥物。實現(xiàn)本發(fā)明目的的技術方案是
穿破石總黃酮在制備保護肝臟藥物中的應用，穿破石總黃酮通過如下方法制得
(1)取穿破石干藥材，粉碎成粗粉；
(2)取穿破石粗粉，加50%-95%乙醇回流1-3次，過濾，濾液回收乙醇得總浸膏；
(3)浸膏加蒸餾水充分溶解，過濾；
(4)取濾液，調(diào)pH4 5，選用DlOl大孔吸附樹脂純化，收集50%_95%醇洗脫液，洗脫液經(jīng)測定總黃酮純度達到60. 84%-79. 85%，回收乙醇，減壓濃縮，干燥后即得穿破石總黃酮。在穿破石總黃酮提取物中加入相應輔料，可制成片劑、膠囊、緩釋片、滴丸、沖劑、微粒劑等，并可進一步純化制成針劑。本發(fā)明的優(yōu)點是發(fā)掘了穿破石總黃酮的藥用前景，開拓了新的藥用領域。穿破石總黃酮含有多種藥用成分，對急性肝損傷具有預防和治療的作用，療效確切。


圖I為空白組(A)小鼠的病理切片圖(X200)；
圖2為陽性組(B)小鼠的病理切片圖(X200)；
圖3為模型組(C)小鼠的病理切片圖(X200)；
圖4為高劑量組(D)小鼠的病理切片圖(X200)；
圖5為中劑量組(E)小鼠的病理切片圖(X200)；
圖6為低劑量組(F)小鼠的病理切片圖(X200)。
具體實施例方式下面通過具體實施例對本發(fā)明內(nèi)容作進一步的說明，但不是對本發(fā)明的限定。實施例
提取穿破石總黃酮，取干燥穿破石10kg，粉碎成粗粉，加75%乙醇100 L回流2次，每次
I.5h，合并提取液，過濾，濾液回收乙醇，減壓濃縮得總浸膏。浸膏加蒸餾水充分溶解，過濾。取濾液，調(diào)PH5，選用DlOl型大孔吸附樹脂純化，上樣流速4mL/min，上樣后靜止12h，先用3倍樹脂體積的30%乙醇洗脫，再用4倍樹脂體積的70%乙醇洗脫，流速3mL/min，收集70%乙醇洗脫液。70%乙醇洗脫液經(jīng)硝酸鋁絡合分光光度法測定總黃酮純度達到78. 54% ;濃縮洗脫液減壓濃縮，干燥后得穿破石總黃酮。在穿破石總黃酮提取物中加入相應輔料，制成片劑、膠囊、緩釋片、滴丸、沖劑、微粒劑等，還可進一步純化制成針劑。穿破石總黃酮臨床推薦劑量(成人計)0. 1-0. 3g/天，口服，一日三次。為了驗證穿破石總黃酮的藥理實驗及結(jié)果，發(fā)明人進行了一系列的動物實驗，說明穿破石在防治急性肝損傷中的作用。I.實驗材料與試劑
穿破石總黃酮；0. 12% CCl4 ;聯(lián)苯雙酯；AST、ALT、MDA和SOD試劑盒(均來自南京建成生物工程研究所)；昆明種小鼠，普通級，體重(20±2)g，早 兼用，廣西醫(yī)科大學實驗動物中心提供。2.實驗方法
將60只健康小鼠隨機分成6組，每組10只，分別為正常對照組，模型組，聯(lián)苯雙酯陽性組和受試藥品高、中、低劑量組。正常對照組和模型組每天灌胃給予注射用水，聯(lián)苯雙酯陽性對照組和受試藥的小鼠每天按劑量灌胃給藥。在給藥的第7天，除正常對照組外，其余各組小鼠均腹腔注射O. 12% CCl4,0. 8ml/100g，禁食不禁水，18h后從眼球取血，離心，分離血清。參照試劑盒的說明測定ALT、AST、MDA和SOD生化指標；取肝組織做病理檢查。3.實驗結(jié)果
模型組與正常對照組比較，ALT、AST、MDA和SOD差異有極顯著性(P < O. 01)，說明本實驗造模成功。與模型組比較，小鼠口服陽性對照藥能非常明顯的抑制ALT、AST和MDA活性，顯著升高SOD活性{P <0.01, ^ < 0.05)。小鼠口服穿破石總黃酮各劑量組能顯著降低小鼠血清中ALT、AST和MDA活性，顯著升高SOD活性(P <0.01, ^ < O. 05)，且成量效關系。因此初步判斷穿破石總黃酮為保肝護肝的藥效活性成分。
表I穿破石總黃酮對CCl4致急性肝損傷小鼠ALT、AST、MDA, SOD的影響廣X 土 S，/7 = 10)
組別 I劑量/g.kg-1 lALT/U · L-1lAST/U · Γ1 |MDA/nm · mL-1|S0D/U · mL-1
空白32. 17±13· 99**64.75±20· 12** 一12·30±2·41**_ 79.24± 15.41**
模型287·21±23·42279·65±22·15 一25·23±11·22_27·64±14·52
陽性 _ O. 2089. 23±45· 15**97. 55±20· 32** 一16·23±13·23*_ 83. 45± 19. 33**
高劑 f 0.5117·00±21·31*112.35±28· 30** 一16·36±1·33*_ 83.45±36· 55**
中劑f 0.3181.25±42.21林213.55±35· 44* 一17·58±5·61*_ 58.25±33· 14* 低劑量 |θ·2丨221· 19±30·23*丨217· 42±34· 61* | 7·60±3·58*|51·54±32·54*
與模型組比較ι*Ρ<Λ· 05，林/XO. 01。肝組織病理變化光鏡下觀察，模型組肝組織損傷嚴重，鏡下見肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，小葉內(nèi)肝細胞出現(xiàn)水腫，部分區(qū)域出現(xiàn)明顯點灶狀壞死和淤血；病變以環(huán)中央靜脈分布為主。而穿破石總黃酮用藥組的肝細胞壞死程度較模型組都有明顯改善，肝小葉結(jié)構(gòu)基本正常，細胞索狀排列較整齊，肝內(nèi)淤血及細胞腫脹明顯減輕，可見少量點灶狀壞死。4.實驗總結(jié)
通過實驗結(jié)果表明小鼠口服穿破石總黃酮的各劑量組能顯著降低小鼠血清中ALT和AST ( Ρ〈0.01，Ρ〈0.05)。因此表明穿破石總黃酮有保肝降酶的作用；能顯著降低MDA含量、提高SOD活性(Ρ〈0.01，Ρ〈0. 05)，說明總黃酮保肝作用機理是通過調(diào)節(jié)機體的免疫而實現(xiàn)。穿破石總黃酮可成為具有保肝降酶的中藥制劑。
權(quán)利要求
1.穿破石總黃酮在制備保護肝臟藥物中的應用，其特征在于所述穿破石總黃酮是通過如下方法制得 (1)取穿破石干藥材，粉碎成粗粉； (2)取穿破石粗粉，加50%-95%乙醇回流1-3次，過濾，濾液回收乙醇得總浸膏； (3)浸膏加蒸餾水充分溶解，過濾； (4)取濾液，調(diào)pH4 5，選用DlOl大孔吸附樹脂純化，收集50%_95%醇洗脫液，洗脫液經(jīng)測定總黃酮純度達到60. 84%-79. 85%，回收乙醇，減壓濃縮，干燥后即得穿破石總黃酮。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應用，其特征在于制得的藥物為片劑、膠囊、緩釋片、滴丸、沖劑、微粒劑和針劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種穿破石總黃酮在制備保護肝臟藥物中的應用，穿破石總黃酮通過如下方法制得取穿破石干藥材，粉碎成粗粉；取粗粉，加50%-95%乙醇回流1-3次，過濾，濾液回收乙醇得總浸膏；浸膏加蒸餾水充分溶解，過濾；取濾液，調(diào)pH4~5，選用D101大孔吸附樹脂純化，收集50%-95%醇洗脫液，洗脫液經(jīng)測定總黃酮純度達到60.84%-79.85%，回收乙醇，減壓濃縮，干燥后即得穿破石總黃酮，制成片劑、膠囊、緩釋片、滴丸、沖劑、微粒劑和針劑等。本發(fā)明的優(yōu)點是發(fā)掘了穿破石總黃酮的藥用前景，開拓了新的藥用領域。穿破石總黃酮含有多種藥用成分，對急性肝損傷具有預防和治療的作用，療效確切。
文檔編號A61P1/16GK102920784SQ201210477940
公開日2013年2月13日 申請日期2012年11月22日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月22日
發(fā)明者段小群, 張可鋒, 陳毅飛, 李明 申請人:桂林醫(yī)學院