專利名稱：一種楊梅葉提取物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種楊梅葉提取物的制備方法，屬于植物提取技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
楊梅(Myrica rubra)是楊梅科常綠喬木植物,主產(chǎn)于我國(guó)浙江、江蘇、福建、江西、湖南及廣東，資源十分豐富。楊梅為藥食兩用的芳香植物，在《本草綱目》中記載，楊梅的果實(shí)、核、根、樹皮均可入藥，有止血、療燙傷、治癰腫、止腹瀉等功效，民間有用楊梅葉治燙傷、臃腫、腹痛等疾病的習(xí)俗(中藥大辭典1979)。已有的研究結(jié)果表明，楊梅葉中存在較高含量的總黃酮，總黃酮主要為楊梅素、槲皮素等，具有收斂劑，興奮劑和催吐劑的作用，可治療腹瀉、黃膽肝炎、淋巴結(jié)核、慢性咽喉炎等疾病。從楊梅葉中提取出的黃酮醇甙、黃酮醇等黃酮類化合物均具有保肝降酶、調(diào)血脂、抗血小板活化因子、抗氧化、抗病毒、抑制惡性腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和生長(zhǎng)、以及增強(qiáng)機(jī)體免疫功能等多種藥理活性[夏其樂等，“食品科學(xué)”2004， 25(1) :55 57]。楊梅葉中分離得到的總黃酮具有降血糖、降血壓的作用[李國(guó)成等，“中草藥”2011，42 (5) :863 865]。鑒于楊梅葉具有上述等功效，近年來國(guó)內(nèi)外對(duì)楊梅葉提取方法進(jìn)行了大量的研究，取得了較大進(jìn)展，具有代表性的是有機(jī)溶劑萃取法，將干楊梅葉粉碎用こ醇提取，提取液過濾，濾液過樹脂吸附柱，用低級(jí)醇洗脫，洗脫液濃縮，干燥得到楊梅葉提取物。這ー方法的提取溶劑使用不充分，造成提取溶劑使用量大，料液濃縮量大，導(dǎo)致溶劑殘留多，所得產(chǎn)品收率低，生產(chǎn)成本高，エ藝步驟較多也較為復(fù)雜，且安全性較差[胡靜麗等，“楊梅葉黃酮類化合物最佳提取エ藝研究”《食品科學(xué)》2003年第01期]，以干楊梅葉為原料，利用超聲波振動(dòng)增加溶劑進(jìn)入楊梅葉細(xì)胞的滲透性，獲得自身的巨大加速度和動(dòng)能，產(chǎn)生空化氣泡，氣泡劇烈運(yùn)動(dòng)對(duì)細(xì)胞形成強(qiáng)大的剪切力，有效地破碎楊梅葉的細(xì)胞壁，加速胞內(nèi)物質(zhì)向介質(zhì)釋放、擴(kuò)散和溶解，將楊梅葉中的總黃酮提取出來。而申請(qǐng)人通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)楊梅葉在干燥過程中會(huì)喪失大量的生物活性物質(zhì)，其有效成分的破壞程度也很大，對(duì)后續(xù)的總黃酮精制影響較大。另外，楊梅葉干燥后，細(xì)胞壁木質(zhì)化，細(xì)胞液系統(tǒng)環(huán)境發(fā)生改變，水難以進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，只能用有こ醇等機(jī)溶劑提取，其雜質(zhì)多、提取率低，相應(yīng)的生產(chǎn)成本也較高，不利于エ業(yè)化生產(chǎn)。又因楊梅葉質(zhì)量受天氣、產(chǎn)地、采集時(shí)間、存期等因素影響，導(dǎo)致楊梅葉的有效成分含量不穩(wěn)定，較難得到高質(zhì)量的產(chǎn)品。因此，申請(qǐng)人從新鮮狀態(tài)的楊梅葉中制備提取物的想法應(yīng)運(yùn)而生，而國(guó)內(nèi)外尚沒有文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種楊梅葉提取物的制備方法，可最大限度保存楊梅葉中的天然生物活性物質(zhì)，有利于提高產(chǎn)品得率以及后續(xù)的總黃酮高純度制備，且エ藝簡(jiǎn)單、生產(chǎn)成本低。本發(fā)明中提取物的制備是通過下述步驟實(shí)現(xiàn)的(I)取新鮮狀態(tài)的楊梅葉洗浄，粉碎，得粉碎葉；
(2)將粉碎葉放入榨汁機(jī)中，加入粉碎葉3 8倍重量的水打漿，壓榨，得榨汁液及原料渣；(3)取榨汁液過濾，濾液過AB-8大孔樹脂吸附，先用水，后用含水こ醇洗脫，收集洗脫液經(jīng)濃縮、干燥后得榨汁液粗提物；(4)取原料渣，加入原料渣2 6倍重量的水提取，將提取液過濾，濾液過AB-8大孔樹脂吸附，先用水，后用含水こ醇洗脫，收集洗脫液經(jīng)濃縮、干燥后得原料渣粗提物；(5)將榨汁液粗提物和原料渣粗提物合并用90%以上こ醇提取精制得楊梅葉提取物。 所述步驟(I)中，新鮮狀態(tài)的楊梅葉是樹齡為5年以上，于3月至4月和6月至11月從樹上采摘下之后不超過48小時(shí)的鮮楊梅葉。所述步驟(3)和(4)中，含水こ醇為35% 75%こ醇，最佳70%こ醇。所述步驟(4)中，提取方法為在35°C 65°C下浸提2 4次，每次O. 5 2小時(shí)。本發(fā)明中，以新鮮狀態(tài)的楊梅葉為原料，進(jìn)行壓榨處理，使楊梅葉的有效成分得以最大程度的保留。經(jīng)研究顯示，新鮮狀態(tài)的楊梅葉體內(nèi)生物活性成分為均態(tài)存在，細(xì)胞液系統(tǒng)穩(wěn)定，而其細(xì)胞壁比較脆弱，此時(shí)進(jìn)行勻漿壓榨，可使細(xì)胞壁破壞，活性成分被快速提取出來，經(jīng)過壓榨所得的榨汁液直接提取分離，就可得到具有大部分生物活性成分的楊梅葉提取物。而壓榨后的原料渣中還有一小部分生物活性成分，申請(qǐng)人對(duì)原料渣部分用熱水再次進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部進(jìn)行提取，在綜合利用鮮楊梅葉原料的同時(shí)又進(jìn)一步提高了提取率和收率。結(jié)果證實(shí)，本發(fā)明所得到的楊梅葉總黃酮提取率超過4%，在楊梅葉提取物中，總黃酮達(dá)58%以上，該總黃酮的含量測(cè)定參見文獻(xiàn)《山西中醫(yī)》，2008，24 (2) 55 57。申請(qǐng)人:在楊梅葉的原料考察中，發(fā)現(xiàn)鮮楊梅葉中總黃酮的含量比干楊梅葉(烘干或曬干)高出許多。對(duì)干、鮮楊梅葉總黃酮的含量分析方法參見《分析化學(xué)》，1998年05期，“反相高效液相色譜分析楊梅葉中抗氧化成分黃酮類化合物”，具體數(shù)據(jù)見下表I :表I為干楊梅葉(烘干或曬干)、新鮮楊梅葉的總黃酮含量
—總麵
干楊梅葉(烘干)2. 13 2. 27 浙江— 干楊梅葉(曬干)2· 06 2. 19
慈溪--
—__鮮楊梅葉_ _2. 91 3. 01 _由上表I可以看出烘干或曬干的楊梅葉中總黃酮的含量與鮮楊梅葉相比，兩者差距十分明顯，因?yàn)闂蠲啡~在干燥過程中造成楊梅葉的生物活性成分的喪失，又因從樹上采、摘下之后超過48小時(shí)的鮮楊梅葉未經(jīng)處理，其含有的總黃酮將會(huì)大量分解，導(dǎo)致提取物中含量顯著降低。為此，本發(fā)明中采用楊梅樹上采摘下的鮮楊梅葉立刻用于楊梅葉提取物的制備，以盡可能地減少總黃酮的降解，無疑提高了所得產(chǎn)品的收率和提取率，有利于后續(xù)エ序的提純。經(jīng)檢索，在以前的エ業(yè)化生產(chǎn)中從未使用過新鮮狀態(tài)的楊梅葉作為原料，這是本發(fā)明的重大創(chuàng)新。楊梅葉常年緑色，全年均可采收。一般地，楊梅樹5月為花蕾期，12 2月為休眠期，以此階段采摘的鮮楊梅葉受生長(zhǎng)周期的影響，總黃酮的含量最低。因此，依據(jù)本發(fā)明，為了不便最終提取物中總黃酮含量受到過大影響，所使用的鮮楊梅葉不在5月、12月、I月和2月這四個(gè)月份中進(jìn)行采摘。 另外，在一年的其它時(shí)間中，雖然因生長(zhǎng)周期影響，鮮楊梅葉中總黃酮含量也會(huì)有波動(dòng)，但是對(duì)得到的楊梅葉提取物中的總黃酮的最低含量無太大影響。申請(qǐng)人:之所以沒有選用樹齡為5年以下的鮮楊梅葉，一方面因?yàn)闂蠲窐涠ㄖ埠? 4年處于始果期，5年后進(jìn)入盛果期，始果期的楊梅葉生物總量不多，會(huì)影響提取率和收率；另一方面，在始果期大量采摘楊梅葉不利于楊梅樹的生長(zhǎng)。因而在本發(fā)明中，確立最佳采摘樹齡為5年以上。本發(fā)明通過對(duì)新鮮狀態(tài)的楊梅葉壓榨直接提取分離，既解決了在エ業(yè)化生產(chǎn)中難以大量得到高純度低成本提取楊梅葉總黃酮產(chǎn)品的問題，又實(shí)現(xiàn)了最大限度的從鮮楊梅葉中提取出有效物質(zhì)總黃酮，有利于后續(xù)的高純度提取物制備。且エ藝流程簡(jiǎn)單，無需大量有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，緑色、環(huán)保、生產(chǎn)成本低。
具體實(shí)施例方式下面的實(shí)施例，用于進(jìn)ー步說明和描述本發(fā)明，但并不意味著本發(fā)明僅限于此。實(shí)施例一選取樹齡15年，于8月份從樹上采摘下之后不超過48小時(shí)、無黃萎、無腐壞的鮮楊梅葉100kg，用清水洗凈浙干后，用粉碎機(jī)粉碎至30 60目，使鮮楊梅葉細(xì)胞破壁，得破碎葉；將粉碎葉放入榨汁機(jī)中，再加入300kg的水后，榨汁機(jī)按每分鐘60轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速攪拌打漿25分鐘，壓榨分離，得榨汁液及原料渣。榨汁液用濾紙抽濾后過AB-8大孔樹脂吸附，流速O. 5BV/h，先用水洗脫，后用醇度70%こ醇水溶液解吸，解吸液回收こ醇后真空濃縮，濃縮至10° Β ，噴霧干燥，獲得楊梅葉提取物14. 6kg，收率(原料折干計(jì))4. 87%，總黃酮含量 61. 4%。實(shí)施例ニ 選取樹齡8年，于9月份從樹上采摘下之后不超過48小時(shí)、無黃萎、無腐壞的鮮楊梅葉100kg，用清水洗凈浙干后，用粉碎機(jī)粉碎至35 70目，使鮮楊梅葉細(xì)胞破壁，得破碎葉；將粉碎葉放入榨汁機(jī)中，再加入320kg的水后，榨汁機(jī)按每分鐘45轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速攪拌打漿35分鐘，壓榨分離，得榨汁液及原料渣。榨汁液用濾紙抽濾后過AB-8大孔樹脂吸附，流速O. 5BV/h，先用水洗脫，后用醇度70%こ醇水溶液解吸，解吸液回收こ醇后真空濃縮，濃縮至10° Β ，噴霧干燥，獲得楊梅葉提取物10. 7kg，總黃酮含量59. 6%。取原料渣，加入原料渣3倍重量50°C的熱水，提取2次，每次I. 5小吋，過濾，濾液過AB-8大孔樹脂吸附，流速O. 5BV/h,先用水洗脫，后用醇度70%こ醇水溶液解吸，解吸液回收こ醇后真空濃縮，濃縮至10° Β ，噴霧干燥，獲得楊梅葉提取物4. 6kg，總黃酮含量
52.7%。榨汁液和原料渣合并提取后的楊梅葉提取物的總收率(原料折干計(jì))為5. I %。實(shí)施例三選取樹齡20年，于3月份從樹上采摘下之后不超過48小時(shí)、無黃萎、無腐壞的鮮楊梅葉100kg，用清水洗凈浙干后，用粉碎機(jī)粉碎至40 75目，使鮮楊梅葉細(xì)胞破壁，得破碎葉；將粉碎葉放入榨汁機(jī)中，再加入380kg的水后，榨汁機(jī)按每分鐘50轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速攪拌打漿30分鐘，壓榨分離，得榨汁液及原料渣。榨汁液用濾紙抽濾后過AB-8大孔樹脂吸附，流速O. 5BV/h，先用水洗脫，后用醇度70%こ醇水溶液解吸，解吸液回收こ醇后真空濃縮，濃縮至10° Β ，噴霧干燥，獲得楊梅葉提取物11. 9kg，總黃酮含量60. 3 %。取原料渣，加入原料渣3倍重量60°C的熱水，提取3次，每次I小時(shí)，過濾，濾液過AB-8大孔樹脂吸附，流速O. 5BV/h ,先用水洗脫，后用醇度70%こ醇水溶液解吸，解吸液回收こ醇后真空濃縮，濃縮至10° Β ，噴霧干燥，獲得楊梅葉提取物3. 8kg，總黃酮含量51. 7%。榨汁液和原料渣合并提取后的楊梅葉提取物的總收率(原料折干計(jì))為5. 23%。實(shí)施例四選取樹齡25年，于4月份從樹上采摘下之后不超過48小時(shí)、無黃萎、無腐壞的鮮楊梅葉100kg，用清水洗凈浙干后，用粉碎機(jī)粉碎至30 65目，使鮮楊梅葉細(xì)胞破壁，得破碎葉；將粉碎葉放入榨汁機(jī)中，再加入430kg的水后，榨汁機(jī)按每分鐘55轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速攪拌打漿35分鐘，壓榨分離，得榨汁液及原料渣。榨汁液用濾紙抽濾后過AB-8大孔樹脂吸附，流速O. 5BV/h，先用水洗脫，后用醇度70%こ醇水溶液解吸，解吸液回收こ醇后真空濃縮，濃縮至10° Β ，噴霧干燥，獲得楊梅葉提取物13. 3kg，總黃酮含量61. 3%。取原料渣，加入原料渣4倍重量60°C的熱水，提取4次，每次O. 5小吋，過濾，濾液過AB-8大孔樹脂吸附，流速O. 5BV/h,先用水洗脫，后用醇度70%こ醇水溶液解吸，解吸液回收こ醇后真空濃縮，濃縮至10° Β ，噴霧干燥，獲得楊梅葉提取物3. 9kg，總黃酮含量
53.4%。榨汁液和原料渣合并提取后的楊梅葉提取物的總收率(原料折干計(jì))為5. 73%。實(shí)施例五選取樹齡25年，于10月份從樹上采摘下之后不超過48小時(shí)、無黃萎、無腐壞的鮮楊梅葉100kg，用清水洗凈浙干后，用粉碎機(jī)粉碎至25 45目，使鮮楊梅葉細(xì)胞破壁，得破碎葉；將粉碎葉放入榨汁機(jī)中，再加入500kg的水后，榨汁機(jī)按每分鐘35轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速攪拌打漿60分鐘，壓榨分離，得榨汁液及原料渣。榨汁液用濾紙抽濾后過AB-8大孔樹脂吸附，流速
O.5BV/h，先用水洗脫，后用醇度70%こ醇水溶液解吸，解吸液回收こ醇后真空濃縮，濃縮至10° Β ，噴霧干燥，獲得楊梅葉提取物13. 9kg，總黃酮含量61.7%。取原料渣，加入原料渣5倍重量60°C的熱水，提取I次，提取時(shí)間為2小吋，過濾，濾液過AB-8大孔樹脂吸附，流速O. 5BV/h,先用水洗脫，后用醇度70%こ醇水溶液解吸，解吸液回收こ醇后真空濃縮，濃縮至10° Β ，噴霧干燥，獲得楊梅葉提取物3. 7kg，總黃酮含量 55. 4%o榨汁液和原料渣合并提取后的楊梅葉提取物的總收率(原料折干計(jì))為5. 87%。
權(quán)利要求
1.一種楊梅葉提取物的制備方法，其特征在于依次包括下述步驟 (1)取新鮮狀態(tài)的楊梅葉洗凈，粉碎，得粉碎葉； (2)將粉碎葉放入榨汁機(jī)中，加入粉碎葉3 8倍重量的水打漿，壓榨，得榨汁液及原料渣； (3)取榨汁液過濾，濾液過AB-8大孔樹脂吸附，先用水，后用含水乙醇洗脫，收集洗脫液經(jīng)濃縮、干燥后得榨汁液粗提物； (4)取原料渣，加入原料渣2 6倍重量的水提取，將提取液過濾，濾液過AB-8大孔樹脂吸附，先用水，后用含水乙醇洗脫，收集洗脫液經(jīng)濃縮、干燥后得原料渣粗提物； (5)將榨汁液粗提物和原料渣粗提物合并用90%以上乙醇提取精制得楊梅葉提取物。
2.如權(quán)利要求I所述的一種楊梅葉提取物的制備方法，其特征在于， 所述步驟(I)中，新鮮狀態(tài)的楊梅葉是樹齡為5年以上，于3月至4月和6月至11月從樹上采摘下之后不超過48小時(shí)的鮮楊梅葉。
3.如權(quán)利要求I所述的一種楊梅葉提取物的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)和(4)中，含水乙醇為35% 75%乙醇。
4.如權(quán)利要求I所述的一種楊梅葉提取物的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)中，提取方法為在35°C 65°C下浸提2 4次，每次0. 5 2小時(shí)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種楊梅葉提取物的制備方法，原料采用新鮮狀態(tài)的楊梅葉，經(jīng)過洗凈、粉碎、加水打漿，壓榨后得榨汁液和原料渣，將榨汁液提取分離，得到榨汁液粗提物；然后繼而對(duì)原料渣提取分離，得到原料渣粗提物，再將榨汁液粗提物和原料渣粗提物合并用90％以上乙醇提取精制得楊梅葉提取物。本發(fā)明既解決了在工業(yè)化生產(chǎn)中難以大量得到高純度低成本提取楊梅葉總黃酮產(chǎn)品的問題，又實(shí)現(xiàn)了最大限度的從新鮮楊梅葉中提取出有效物質(zhì)總黃酮，有利于后續(xù)的高純度提取物制備。且工藝流程簡(jiǎn)單，無需大量有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，綠色、環(huán)保、生產(chǎn)成本低。
文檔編號(hào)A61P9/12GK102727540SQ201210234858
公開日2012年10月17日 申請(qǐng)日期2012年6月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月25日
發(fā)明者陸建益 申請(qǐng)人:陸建益