專利名稱：追風傘有效部位在制備保肝護肝藥物方面的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于制藥領域，涉及一種追風傘有效部位及其提取方法，該追風傘有效部位具有保肝護肝作用。
背景技術：
肝損傷是多種因素如毒物(CC14、AP、IC)的中間產物與大分子物質共價結合、缺氧、脂質過氧化、細胞內鈣穩(wěn)態(tài)失調和內毒素相互作用的結果，而非單一的作用。肝損傷引發(fā)的肝臟疾病已成為常見病、多發(fā)病，更為嚴重的是其引發(fā)的肝功能衰竭和肝性腦病等，發(fā)病率和死亡率高，極大地威脅著人類健康。很多因素都可引起肝損傷。體內模型特別是化學性肝損傷模型在形態(tài)學、病理生理學的某些方面與人慢性肝病較為相似。腹腔注射CCl4 植物油溶液是目前常用的肝炎模型。CCl4引起肝損傷的機制是CCl4在肝微粒體細胞色素 P450激活下生成自由基CCI3·及Cl·，這些自由基可與肝細胞內大分子發(fā)生共價結合，也可攻擊膜下不飽和脂質，引起脂質過氧化，從而使肝細胞損傷，細胞質內GPT、GOT滲入血液， 表現(xiàn)為血清中GPT、G0T活性升高。SOD活性及MDA含量?？煞从丑w內脂質過氧化反應程度， 間接反映機體組織、細胞損傷的程度。通過檢測小鼠肝勻漿中的SOD活性及MDA含量可反映出藥物對肝細胞的保護作用。因此，以血清GPT、G0T、肝組織SOD活性及MDA含量作為指標來探討藥物對肝臟的保護作用是非常有意義的。目前，肝損傷的治療方法有很多，雖然均有一定的療效，但也存在著明顯的不足。 首先，西藥具有較大的毒副作用，且療效并不確切。其次，實驗和臨床研究證實，中藥在抗菌抗病毒、改善肝功能、抗氧化、改善微循環(huán)、調節(jié)免疫功能以及抗肝纖維化等方面顯示出良好的療效，安全、可靠、有效，進一步顯示出中醫(yī)辨證論治的合理性，突顯了中藥在治療肝損傷，尤其是內毒素性急性肝損傷方面的良好前景。鬼風命{Lysimachia paridiformis Franch. var. stenophylla Franch.)另Ij 名。原風傘、一把傘、公接骨丹、破涼傘、背花草、燈臺草、傘葉排草，是報春花科植物狹葉落地梅的全草或根，分布于貴州、湖北、湖南、廣東、廣西、四川、云南等地。其味辛、辣、苦、性熱。入冷經。主要功效為祛風通絡，活血止痛；主治風濕痹通，四肢拘攣，半身不遂，小兒驚風，跌仆， 骨折等癥。植物追風傘含有豐富的化學成分，但是國內外有關該植物藥理學研究和臨床應用方面的報道卻很少，僅見齊柳規(guī)等人提出追風傘總黃酮具有顯著的鎮(zhèn)痛抗炎作用。目前國內外尚未見關于追風傘有效部位對急性肝損傷有保護作用的報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明目的在于提供一種追風傘有效部位，該提取物具有保肝護肝作用，可用來制備保護急性肝損傷的藥物。本發(fā)明還提供了該提取物的提取方法。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取如下技術方案
一種追風傘有效部位，其選自追風傘醇提物的石油醚部位、乙酸乙酯部位或正丁醇部位中的一種或任意組合；該提取物經下述方法提取獲得取干燥的追風傘粉末用60 - 80V%的甲醇或乙醇水溶液進行浸提，浸提液濃縮得浸膏；將浸膏分散于蒸餾水中，然后依次用溶劑石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進行萃取，各萃取三次；揮干溶劑后即分別得到石油醚部位、 乙酸乙酯部位和正丁醇部位。具體的，所述干燥的追風傘粉末用60 - 80V%的甲醇或乙醇水溶液在室溫下浸泡 2 - 4次，每次3天，合并所得浸提液并濃縮成浸膏。上述追風傘有效部位在制備保肝護肝藥物方面的應用，尤其是在制備具有保護急性肝損傷藥物方面的應用。為證實上述提取物的保肝護肝作用，本發(fā)明以聯(lián)苯雙酯為陽性對照，分別考察了追風傘石油醚部位(LPFPE)、乙酸乙酯部位(LPFEA)和正丁醇部位(LPFBU)三種不同部位的提取物對四氯化碳誘導的急性肝損傷小鼠的治療作用。實驗結果表明，追風傘三種不同部位的提取物均能夠顯著降低急性肝損傷小鼠血清中的G0T、GPT及小鼠肝組織中的MDA含量，升高SOD活力。由此說明，本發(fā)明追風傘三種不同部位的提取物對急性肝損傷具有很好的保護作用。
具體實施例方式以下通過實施例對本發(fā)明作進一步說明，但本發(fā)明的保護范圍不限于此。實施例1
一種追風傘有效部位，其選自追風傘醇提物的石油醚部位、乙酸乙酯部位或正丁醇部位中的一種或任意組合；該有效部位經下述方法提取獲得追風傘全草陰干、粉碎，取1000 g干燥的追風傘粉末，用體積分數(shù)70%的甲醇水溶液(甲醇水溶液的添加量為追風傘粉末重量的3 — 5倍)，室溫下浸泡3次，每次3天，合并3次所得浸提液并濃縮成浸膏；將浸膏分散于IOOOml蒸餾水中，然后依次用溶劑石油醚(3000ml)、乙酸乙酯(3000ml)和正丁醇 (3000ml)進行萃取，各萃取三次；揮干溶劑后即分別得到固態(tài)的石油醚部位(LPFPE)、乙酸乙酯部位(LPFEA)和正丁醇部位(LPFBU)，提取率分別為1. 8%、6.洲和2. 4%。具體的萃取過程為先用石油醚萃取三次，萃取液分層，取上層石油醚部分(揮干后即為石油醚部位)，下層為水層；水層再用乙酸乙酯萃取三次，萃取液分層，取上層乙酸乙酯部分(揮干后即為乙酸乙酯部位)，下層為水層；水層最后用正丁醇萃取三次，萃取液分層，取上層正丁醇部分(揮干后即為正丁醇部位)。這樣操作的目的在于將浸膏中的有效成分按極性從小到大的順序依次萃取出來，因溶劑石油醚、乙酸乙酯和正丁醇的極性是遞增的。實施例2
用體積分數(shù)70%的乙醇水溶液替換70%甲醇水溶液，其它同實施例1，得到固態(tài)的石油醚部位(LPFPE)、乙酸乙酯部位(LPFEA)和正丁醇部位(LPFBU)，提取率分別為1. 5%、5. 8% 和 2. 2%ο效果試驗
因甲醇和乙醇極性相近，在植物提取領域都是很常用的醇提溶劑，故而以下效果試驗僅以實施例1選用70%甲醇水溶液醇提最后得到的石油醚部位(LPFPE)、乙酸乙酯部位 (LPFEA)和正丁醇部位(LPFBU)為例進行小鼠急性肝損傷保肝實驗，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此。
(一)主要試劑與儀器
四氯化碳(分析純)購自開封化學試劑總廠；橄欖油購自上海衛(wèi)輝化學試劑廠；聯(lián)苯雙酯滴丸購自浙江萬邦藥業(yè)有限公司；考馬斯亮藍G250購自上?；瘜W試劑公司分裝廠；牛清蛋白購自北京奧博星生物技術有限責任公司；其它試劑均為分析純。谷草轉氨酶(GOT)試劑盒、谷丙轉氨酶(GPT)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)測定試劑盒均購于南京建成生物工程研究所。0. 4V%CC14油溶液取四氯化碳分散到橄欖油中，用磁力攪拌器強力攪拌2 h ；現(xiàn)用現(xiàn)配。UV 2000型紫外可見分光光度計(尤尼可上海儀器有限公司)；Multiskan MK3酶標儀(Thermo Electron) ；LRH-150恒溫培養(yǎng)箱(上海一恒科技有限公司)。(二)實驗方法
取健康的成年雄性昆明小鼠(4 6周齡，體重20 士 2 g)120只，隨機分為12組，每組 10只。分別為空白組、模型組、聯(lián)苯雙酯陽性對照組(70mg/kg)、石油醚部位(LPFPE)高、中、 低劑量組(1000、500、250mg/kg)、乙酸乙酯部位(LPFEA)高、中、低劑量組(800、400、200mg/ kg)和正丁醇(LPFBU)高、中、低劑量組(600、300、150mg/kg)。除模型組外，空白組用0.5% 的羥甲基纖維素鈉水溶液(CMC-Na)灌胃，其它試驗組用0. 5%CMC-Na分別配制成相應濃度灌胃給藥，1次/天，連續(xù)給藥8天。于末次給藥2 h后對小鼠進行造模(即按照0.1 mL/10g 小鼠體重腹腔注射0.斬％四氯化碳油溶液，空白組除外)。禁食不禁水12 h后，摘除小鼠眼球取血并分離出血清，檢測GOT和GPT?？焖俜蛛x肝臟，制備10%和1%的肝臟組織勻漿液。 并用考馬斯亮藍法測定10%和1%組織勻漿液的蛋白含量。(三)實驗結果
權利要求
1.一種追風傘有效部位，其特征在于，選自追風傘醇提物的石油醚部位、乙酸乙酯部位或正丁醇部位中的一種或任意組合；該提取物經下述方法提取獲得取干燥的追風傘粉末用60 — 80V%的甲醇或乙醇水溶液進行浸提，浸提液濃縮得浸膏；將浸膏分散于蒸餾水中， 然后依次用溶劑石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進行萃取，各萃取三次；揮干溶劑后即分別得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
2.如權利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述干燥的追風傘粉末用60- 80V%的甲醇或乙醇水溶液在室溫下浸泡2 - 4次，每次3天，合并所得浸提液并濃縮成浸膏。
3.權利要求1所述追風傘有效部位在制備保肝護肝藥物方面的應用。
4.權利要求1所述追風傘有效部位在制備具有保護急性肝損傷藥物方面的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種追風傘有效部位，其選自追風傘醇提物的石油醚部位、乙酸乙酯部位或正丁醇部位中的一種或任意組合；具體的提取方法為取干燥的追風傘粉末用60－80V%的甲醇或乙醇水溶液進行浸提，浸提液濃縮得浸膏；將浸膏分散于蒸餾水中，然后依次用溶劑石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進行萃取，各萃取三次；揮干溶劑后即分別得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。實驗證明，追風傘三種不同部位提取物均能顯著降低急性肝損傷小鼠血清中的GOT、GPT含量及小鼠肝組織中的MDA含量，并能顯著升高SOD活力，可用來制備保肝護肝藥物，尤其是制備具有保護急性肝損傷的藥物。
文檔編號A61P1/16GK102357107SQ20111032295
公開日2012年2月22日 申請日期2011年10月21日 優(yōu)先權日2011年10月21日
發(fā)明者尹震花, 鞏芳, 康文藝, 李園園, 魏金鳳 申請人:河南大學