專利名稱：積雪草總苷及其相關(guān)成分在預防和/或治療白癜風藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及積雪草總苷及其相關(guān)成分在制藥領(lǐng)域中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
白癜風(vitiligo)是一種常見的原發(fā)性、局限性或泛發(fā)性色素脫失性皮膚病，是由于皮膚和毛囊的黑素細胞內(nèi)酪氨酸酶系統(tǒng)的功能減退、喪失引起的，病理上則主要表現(xiàn)為黑素細胞的減少或消失。白癜風的發(fā)病率隨地區(qū)和人種膚色而有不同，一般膚色越淺的人發(fā)病率越高，如丹麥人為O. 38%，美國白人約為I %，黃種人的發(fā)病率介于白種人與黑種人之間，國內(nèi)患病率為O. 09%-2. 7%?；疾∪巳荷锨f。受遺傳因素影響，大部分患者發(fā)病年齡小于30歲，且男女沒有顯著性差異。白癜風的損害可發(fā)生于全身任何部位的皮膚、粘膜，包括口腔粘膜、鼻腔粘膜、生殖器及肛門部位的粘膜以及視網(wǎng)膜等，生長于白斑區(qū)的毛發(fā)通常也呈現(xiàn)為灰白色。由于白癜風的皮損，特別是位于體表暴露部位的白斑，往往會影響到患者的容貌、形象及自我評價，進而在很大程度上改變了患者正常的精神狀態(tài)、社會交往以及生活和學習。因此，開展對白癜·風的研究，尋求有價值的治療手段和藥物，是醫(yī)學的一大難題。白癜風發(fā)病原因復雜，目前存在幾種假說認為主要與自身免疫有關(guān)，神經(jīng)化學因子作用，黑素細胞自身破壞，黑素細胞生長因子缺乏，遺傳因素等，但其真正的病因尚不清楚，治療方法多種多樣，療效亦不確切。而祖國醫(yī)學對此病有獨特認識多數(shù)學者認為白癜風的發(fā)生是由于七情內(nèi)傷，肝氣郁結(jié)，氣血不暢，復感風寒，風邪搏于肌膚，氣血失和，血不養(yǎng)膚所致。近幾年采用中醫(yī)中藥治療也取得了一定進展，但是機理不清，基礎(chǔ)研究的薄弱已成為制約中醫(yī)藥治療白癜風研究發(fā)展的"瓶頸"，只有"瓶頸"突破，療效才能提高。同時，一些能夠有效治療白癜風的單味中藥及有效單體方面的開發(fā)，也成為一條有價值的途徑，得到醫(yī)藥工作者的重視。白癜風在臨床上分進展期白癜風和成熟期白癜風兩大類來治療。進展期白癜風分為尋常型和節(jié)段型；其臨床治療也是按照不同的分型，采取不同的治療方法。尋常型①局限型主要是外用糖皮質(zhì)激素或其他免疫抑制劑，免疫調(diào)節(jié)劑(轉(zhuǎn)移因子，胸腺肽等)或者局部光療窄譜中波紫外線、準分子激光、準分子光等，中醫(yī)中藥。②散在型、泛發(fā)型和肢端型則主要采用中醫(yī)中藥，免疫調(diào)節(jié)劑(轉(zhuǎn)移因子，胸腺肽等)，系統(tǒng)用糖皮質(zhì)激素，光療窄譜中波紫外線、準分子激光、準分子光等，局部外用藥治療(參考進展期局限型)。節(jié)段型白癜風的治療方法也主要參考進展期局限型治療。成熟期白癜風也是按照尋常型和節(jié)段型來治療的，尋常型①局限型主要是外用補骨脂素類藥物、糖皮質(zhì)激素、氮芥等，自體表皮移植，局部光療或光化學療法窄譜中波紫外線、準分子激光及準分子光等，中醫(yī)中藥。②散在型、泛發(fā)型和肢端型中醫(yī)中藥，光療或光化學療法窄譜中波紫外線，準分子激光、準分子光、PUVA等.自體表皮移植(暴露部位或患者要求的部位)，局部外用藥治療(參考穩(wěn)定期局限型)。節(jié)段型自體表皮移植；其他參考穩(wěn)定期局限型治療。目前白癜風的臨床治療方法雖很多，但臨床療效由于個體的不同存在很大的差異。西藥治療方法雖然簡單，多采用手術(shù)療法，但是由于不良反應(yīng)多見或者難于完全康復等；有些患者采用傳統(tǒng)療法，時間雖然長，但是藥物的不良反應(yīng)少。本專利所說的積雪草總苷或其相關(guān)各單體成分，如積雪草苷、羥基積雪草苷及積雪草苷B等為積雪草提取物，采用制藥領(lǐng)域中提取工藝方法制備。所說的積雪草，拉丁名Centella asiatica(L. )Urban,別名崩大碗、缺碗草、馬蹄草、連線草、地線草、崩口碗等，藥用部位干燥全草或帶根全草。積雪草總苷、積雪草苷、羥基積雪草苷、積雪草苷B在現(xiàn)有的文獻資料中，有記載其具有較好的抗氧化、創(chuàng)傷愈合功效。積雪草總苷有用作外科用藥，用于治療瘢痕及硬皮病。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就在于提供一種積雪草總苷或其相關(guān)各單體成分的新用途，同時克服了現(xiàn)有預防或治療白癜風藥物的不足之處。積雪草總苷、積雪草苷、羥基積雪草苷或積雪草苷B在制備預防或治療白癜風藥物中的應(yīng)用。在制備預防和/或治療白癜風的藥物時加入積雪草總苷或者積雪草苷、羥基積雪草苷、積雪草苷B或其任意混合物，對于治療尋常型白癜風效果明顯。在制備預防和/或治療白癜風的藥物時，積雪草總苷、積雪草苷、羥基積雪草苷、積雪草苷B或其任意的組合物可與藥學上可接受的任何載體，以任意的重量比混合，制成任何一種藥學上可接受的 劑型。所述的載體包括藥學領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、粘合劑、崩解劑、濕潤劑、潤滑劑、表面活性劑等，如淀粉、蔗糖、糊精、乳糖、硬脂酸鎂、纖維素類及其衍生物、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆等。所述制劑，如乳膏、軟膏劑、乳液、凝膠、片劑、顆粒劑、丸劑、膠囊、注射液、口服液等。也可制成注射劑，如水針、凍干粉針、無菌粉針、輸液等。本發(fā)明的有益效果積雪草總苷或者積雪草苷、羥基積雪草苷和積雪草苷B，在現(xiàn)有的文獻資料中，有記載其具有較好的抗氧化、創(chuàng)傷愈合功效。本申請人在實際研究中發(fā)現(xiàn)，積雪草總苷或者積雪草苷、羥基積雪草苷、積雪草苷B對于白癜風也有著獨特的功效，其有著良好的免疫抑制作用及促進黑色素細胞修復、增殖、移行，對黑色素代謝調(diào)控系統(tǒng)如黑色素細胞刺激素、角朊細胞等細胞因子等作用有關(guān)。通過實際應(yīng)用，本申請人利用積雪草總苷、積雪草苷、羥基積雪草苷或者積雪草苷B制作的積雪苷霜軟膏對白癜風的治療中療效獨特，對白癜風患者病情能夠得到控制或痊愈。本發(fā)明為日后的市場產(chǎn)品開發(fā)、制劑開發(fā)、臨床研究等奠定了基礎(chǔ)。突破了中醫(yī)藥治療白癜風機理不清，基礎(chǔ)研究薄弱的“瓶頸”。
具體實施方式
為了更好證明本發(fā)明對預防和/或治療白癜風的作用，下面通過體內(nèi)、體外藥效試驗及臨床觀察實施例解釋和驗證本發(fā)明的藥效機理及臨床治療作用。實施例1按照藥學常用方法，制備積雪苷霜軟膏劑(以積雪草總苷計，IOg O. 25g)和積雪苷凝膠(以積雪草總苷計，IOg O. 25g)。(一 )化學脫色劑制備豚鼠白癜風模型制備白癜風動物模型取黑色或黑花毛(黑色皮膚)豚鼠70只，用硫化鈉脫去背部黑毛約4 X 4cm2。隨機分成7組，(I)正常對照組賦形劑(2)模型對照組賦形劑(3)陽性藥對照組(4)藥物高I劑量組(中劑量組的I倍)(5)藥物高2劑量組(中劑量組的1/2倍)

(6)藥物中劑量組(7)藥物低劑量組用8%的硫化鈉脫毛，每4天I次，除正常組涂蒸餾水外，其余各組在脫毛區(qū)每天涂5%的氫醌O. 5ml兩次，第Ild開始各組分別每天在涂抹氫醌過后I小時按劑量分別涂藥，其中(I)、⑵組涂相同劑量的賦形劑，每天一次，連續(xù)40d，共50d。末次藥后2h，取血，測酪氨酸酶、單胺氧化酶、膽堿酯酶。并采用組織病理學觀察，表皮基底細胞黑素分布及黑色素毛囊數(shù)等。試驗結(jié)果本發(fā)明藥物對于白癜風豚鼠表皮損傷區(qū)黑素細胞有明顯的修復作用，同時本發(fā)明藥物兩個高劑量組和中劑量組可使白癜風豚鼠血液中酪氨酸酶含量增加，單胺氧化酶活力降低，與正常組豚鼠相比無顯著性差別。實施例2準備積雪草總苷、積雪草苷、羥基積雪草苷和積雪草苷B溶液。(一 )本發(fā)明藥物對于體外表皮黑色素細胞的遷移和粘附作用將傳代(第二代)人表皮黑色素細胞計數(shù)接種于培養(yǎng)瓶中，確保每瓶細胞數(shù)相同，藥物試驗濃度分別為10、50、100、150、200μ g/ml、及空白對照組，培養(yǎng)3d。采用氫氧化鈉裂解法，測定黑素含量，黑素細胞增值率，微孔濾膜法測定細胞遷移情況，黑素細胞遷移率。試驗結(jié)果表明，本發(fā)明藥物對于黑素細胞增殖沒有太大影響，但是其對于黑素細胞遷移率相對于對照組存在一定差異。藥物濃度在10、50μ g/ml時,無顯著性差異,其余各組濃度下檢驗，有顯著性差異。積雪草總苷、積雪草苷、羥基積雪草苷和積雪草苷B在150 μ g/ml與200 μ g/ml組相比較，均有明顯的作用，但是也存在顯著性差異，表明藥物濃度越高對黑素細胞遷移促進作用越明顯，有量效關(guān)系。(二)本發(fā)明藥物對角質(zhì)形成細胞的作用購買人永生化角質(zhì)形成細胞株，復蘇后用含有10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基在37V,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)、傳代，選擇對數(shù)生長期的細胞進行實驗。用不同濃度藥物作用后的角質(zhì)形成細胞的培養(yǎng)上清液，檢測角質(zhì)形成細胞的培養(yǎng)上清液中細胞因子SCF、bFGF的分泌量，并檢測角質(zhì)形成細胞的增殖情況。試驗結(jié)果=ELISA法檢測不同濃度的本發(fā)明藥物對于角質(zhì)細胞增殖存在一定的劑量效應(yīng)關(guān)系，且隨著劑量增加，角質(zhì)細胞增殖率也增加，同時相應(yīng)的細胞因子也增加，也說明本發(fā)明藥物對于角質(zhì)細胞分泌細胞因子功能有明顯的促進作用，可改善白癜風患者皮膚微環(huán)境，從而間接改善黑素細胞的增殖和增加其黑素的轉(zhuǎn)運功能。實施例3按照藥學常用方法，本發(fā)明藥物制備成常用外用制劑軟膏。本實施例中的軟膏分別采用積雪草總苷、積雪草苷、羥基積雪草苷和積雪草苷B作為藥用成分。篩選泛發(fā)型進行期白癜風病例，隨機選取三部位(同時選取曝光或非曝光部位)，采用隨機、對照、雙盲法進行60例的臨床觀察，分別使用本發(fā)明藥物積雪草總苷軟膏、積雪草苷軟膏、羥基積雪草苷軟膏和積雪草苷B軟膏、激素及基質(zhì)對照，平均2周觀察一次，每次照相，共觀察3個月。療效標準痊愈皮損完全消退。顯效白斑部分消退或縮小，恢復正常膚色的面積是原皮損面積的50%以上，含50%。好轉(zhuǎn)白斑部分消退或縮小。無效白斑元色素再生或范圍擴大。統(tǒng)計方法有效率計算痊愈數(shù)+顯效數(shù)/治療數(shù)X 100%。治療效果本發(fā)明藥物積雪草總苷軟膏、積雪草苷軟膏、羥基積雪草苷軟膏、積雪草苷B軟膏激素顯示出較明顯的治療效果，無不良反應(yīng)出現(xiàn)。但激素對照組4例于皮損涂藥區(qū)出現(xiàn)輕度刺激癥狀，停藥后刺 激癥狀逐漸消失。3個月后隨訪無異常。本發(fā)明藥物對于損傷性黑素細胞存在一定的修復作用，另外其可增加角質(zhì)細胞的增殖和相關(guān)細胞因子的作用，說明其對于白癜風患者體內(nèi)微環(huán)境等也有一定的調(diào)節(jié)作用。本發(fā)明藥物能有效減輕白癜風患者的痛苦甚至達到治愈的效果，對于傳統(tǒng)中醫(yī)藥的發(fā)展及頑癥白癜風的治愈都是一大突破。
權(quán)利要求
1.積雪草總苷、積雪草苷、羥基積雪草苷或積雪草苷B在制備預防或治療白癜風藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及積雪草提取物的應(yīng)用領(lǐng)域。本發(fā)明所說的積雪草總苷或者積雪草苷、羥基積雪草苷、積雪草苷B對于白癜風的治療有著獨特的功效，其有著良好的免疫抑制作用及促進黑色素細胞修復、增殖、移行，對黑色素代謝調(diào)控系統(tǒng)如黑色素細胞刺激素、角朊細胞等細胞因子等作用有關(guān)。本發(fā)明提供的新的白癜風藥對白癜風的治療療效獨特，使白癜風患者病情能夠得到控制或痊愈。
文檔編號A61P17/00GK103040884SQ20111030690
公開日2013年4月17日 申請日期2011年10月11日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月11日
發(fā)明者楊國紅, 王曙光, 楊婷婷, 陳解春, 林夢感 申請人:上海現(xiàn)代制藥股份有限公司