專利名稱：：10-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種醫(yī)藥類抗腫瘤藥物新制劑，特別是涉及一種防止惡性腫瘤生長和復(fù)發(fā)的10-羥基喜樹堿(以下簡稱10-羥基喜樹堿)隱形納米粒緩釋制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
：10-羥基喜樹堿(⑶-4，9-二羥基-4-乙基-IH-吡喃[3，，4，:6，7]氮茚[1,2b]喹啉-3，14-0Η，12Η)_二酮)是一種拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑，具有抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶I的酶活性作用，抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶參與DNA的復(fù)制、修復(fù)、遺傳重組和轉(zhuǎn)錄[1]。10-羥基喜樹堿主要作用于DNA合成期，對期細(xì)胞沒有作用，對G1W2、與M期細(xì)胞有輕微殺傷力。其抗腫瘤譜較廣，與常用抗腫瘤藥物無交叉耐藥性。臨床主要用于治療肝癌、大腸癌、肺癌和白血病[2]。但此藥毒副反應(yīng)較大，主要表現(xiàn)為骨髓抑制，白細(xì)胞減少，胃腸道反應(yīng)、泌尿道刺激等。同時，10-羥基喜樹堿不溶于水，臨床所用水溶性制劑系其鈉鹽制劑，破壞了其抗拓?fù)洚悩?gòu)酶I活性結(jié)構(gòu)α-羥基內(nèi)酯環(huán)，降低了抗腫瘤活性ω。針對10-羥基喜樹堿在臨床應(yīng)用中的缺陷和局限性，可以納米微粒作為藥物傳遞和控制釋放系統(tǒng)。納米粒子是10IOOOnm的固態(tài)粒子，具有比一般粒子更小的體積，因此具有很多大粒子不具備的優(yōu)點。納米粒子作為藥物載體進(jìn)入體內(nèi)，可以有效地減少人體網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)巨噬細(xì)胞的吞噬，作為納米級的粒子能穿越細(xì)胞間隙，可通過人體最小的毛細(xì)血管及血腦屏障(BBB)并被細(xì)胞組織吸收，納米粒子藥物載體可以控制藥物在靶向部位控制釋放、減少藥物用量、增強藥物療效并降低藥物毒性。同時，粒子系統(tǒng)可以避免藥物活性喪失，有利于藥物的貯藏和運輸[5]。因為納米粒子的諸多優(yōu)點，使其成為一種很有前途的藥物新劑型。目前，可降解聚合物緩釋納米顆粒的制備方法主要有相分離法、乳化溶劑揮發(fā)法、噴霧法等[6]。但這些方法均存在一定的局限性。如應(yīng)用最為廣泛的乳化溶劑揮發(fā)法，此類方法在乳化過程中要用到大量表面活性劑，如聚乙烯醇，而此類表面活性劑通常會粘附在顆粒表面，導(dǎo)致顆粒的生物降解性能、體內(nèi)分布、藥物釋放特性及生物相容性等的改變。采用透析法制備可降解聚合物納米顆粒，其制備過程為將聚合物溶解在溶劑中，然后將其置于非溶劑中透析(一般為水)，其制備方法操作簡單，可以避免表面活性劑的使用，成球性好，產(chǎn)率高[7]。納米顆粒經(jīng)靜脈注射進(jìn)入人體內(nèi)經(jīng)過調(diào)理過程(Opsoinzation)后被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)的高吞噬性單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)(MPS)攝取，并迅速從血液循環(huán)中被清除te]。如何躲避MPS的識別和避免隨后的結(jié)合、吞噬作用，成為近年來納米顆粒研究的熱點，隱形(或長循環(huán))納米顆粒研制應(yīng)運而生。以前曾用MPS抑制劑等方法來避免納米顆粒被MPS快速清除，但此類方法易導(dǎo)致MPS的自身損傷，抑制宿主的免疫機能，還會增加機體對疾病的敏感性。而比較理想的解決途徑是通過表面修飾調(diào)整微粒的表面性質(zhì)M。研究表明，影響納米顆粒體內(nèi)循環(huán)時間的因素包括免疫生理調(diào)節(jié)、納米顆粒的特性(如親水親油性、表面電荷和粒徑等)、納米顆粒的空間特性(如納米顆粒表面修飾長鏈的柔韌性、長度和鏈間距離等)及化學(xué)結(jié)構(gòu)等[1°]。因為納米顆粒表面親脂性越大則其對調(diào)理蛋白的結(jié)合能力越強，吞噬細(xì)胞的吞噬作用也就越強。所以高分子材料表面進(jìn)行親水性修飾，從而改變納米顆粒的空間特性，進(jìn)一步影響機體對納米顆粒的識別[11]。參考文獻(xiàn)[1]YYZhou，YZDu,LWang,etal.Preparationandpharmacodynamicsofstearicacidandpoly(lactic-co-glycolicacid)graftedchitosanoligosaccharidemicellesfor10-hydroxycamptothecin.InternationalJournalofPharmaceutics，2010，393(1)；144-152。[2]XiaohuiPu，JinSun，etal.Developmentofachemicallystable10_hydroxycamptothecinnanosuspensions.InternationalJournalofPharmaceutics,2009,379(1)；167-173。[3]WeiHu,ChaoZhang，YunFangandChenghuaLou.Anticancerpropertiesof10-hydroxycamptothecininamurinemelanomapulmonarymetastasismodelinvitroandinvivo.ToxicologyinVitro，2011，25(2)；513-520。[5]RupeiTang,WeihangJi,DavidPanus,R.NoellePalumbo，ChunWang.Blockcopolymermicelieswithacid-labileorthoesterside-chains:Synthesis，characterization，andenhanceddrugdeliverytohumangliomacells.JournalofControlledRelease，2011，151(1)；18-27。[6]MorinRyu,ToruNakazawa,etal.Suppressionofphagocyticcellsinretinaldisordersusingamphiphilicpoly(γ-glutamicacid)nanoparticlescontainingdexamethasone.JournalofControlledRelease,2011,151(1)；65_730[7]AnxunWangandSuLi，Hydroxycamptothecin-Ioadednanoparticlesenhancetargetdrugdeliveryandanticancereffect.BMCBiotechnology2008,8(46)；35-41。[8]X.Dong,C.A.Mattingly,Μ.T.Tseng,M.J.Choo，Y.Liu,V.R.Adams,R.J.Mumper.Doxorubicinandpaclitaxel-loadedlipid—basednanoparticlesovercomemultidrugresistancebyinhibitingP-glycoproteinanddepletingATP.CancerReseach，2009，69(10)；3918-3926。[9]X.Dong，R.J.Mumper.Nanomedicinalstrategiestotreatmultidrug-resistanttumors.currentprogress，NanomedicineLond，2010，5(1)；597-615。[10]Abraham,Ginu，McCarrol1,etal.BlockCo-polymerNanoparticleswithDegradableCross-LinkedCoreandLow-Molecular~WeightPEGCoronaforAnti-tumourDrugDelivery，2011，22(8)；1001-1022。[ll]HanjieWang,PeiqiZhao，etal.Folate-PEGcoatedcationicmodifiedchitosan-ChoIesterolliposomesfortumor-targeteddrugdelivery.Biomaterials，2010,31(9)；4129-4138。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種持續(xù)釋藥時間長，藥物釋放穩(wěn)定，生物利用率高的10-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明所述10-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑由10-羥基喜樹堿和藥物載體組成，10-羥基喜樹堿與藥物載體的質(zhì)量比為1020)。所述藥物載體為生物可降解性聚合物，所述生物可降解性聚合物選自聚乙二醇單甲醚(mPEG)接枝的聚乳酸(PLA)或mPEG接枝的聚(乳酸-羥基乙酸)共聚物(PLGA)等，其中PLA的分子量為500050000道爾頓；PLGA分子量為500050000道爾頓；mPEG的分子量為500010000道爾頓。所述10-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑的制備方法包括以下步驟1)將10-羥基喜樹堿與藥物載體按1O20)的質(zhì)量比在有機溶劑中溶解，得溶液A；2)將溶液A轉(zhuǎn)移到透析袋內(nèi)進(jìn)行透析；3)將所得懸浮液凍干得10-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑。在步驟1)中，所述有機溶劑可選自N-N二甲基甲酰胺(DMF)、丙酮(acetone)、四氫呋喃(THF)、二甲基亞砜(DMSO)、二氯甲烷或二甲基乙基酰胺(DMAC)等中的一種。在步驟幻中，所述透析袋的截留分子量可為100015000道爾頓；所述透析采用的外界溶液可為超純水或去離子水等。本發(fā)明采用mPEG接枝的PLA(或PLGA)，親水性聚合物修飾鏈的柔韌性可以使納米顆粒的空間結(jié)構(gòu)時刻發(fā)生變化，能躲避免疫系統(tǒng)對其產(chǎn)生有效的識別，從而有效地減少體內(nèi)調(diào)理蛋白對納米顆粒的吸附，實現(xiàn)納米顆粒的隱形。其有益效果表現(xiàn)在10-羥基喜樹堿保留抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶I活性基團(tuán)，性質(zhì)穩(wěn)定；納米顆粒在體內(nèi)具有隱形長效作用；體外釋放恒速穩(wěn)定；載藥率高，毒副作用低；方法簡單，條件溫和，重復(fù)可控性好等。以注射方式給藥，可降低全身毒副作用，防治腫瘤的生長和復(fù)發(fā)。圖1為實施例1制備的10-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑的掃描電鏡圖。在圖1中，標(biāo)尺為5μπι。圖2為實施例1制備的10-羥基喜樹堿堿隱形納米粒緩釋制劑的激光共聚焦顯微鏡斷層掃描照片。在圖2中，標(biāo)尺為1μm。圖3為實施例1制備的10-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑體外釋藥曲線，圖中橫坐標(biāo)為釋藥時間(h)，縱坐標(biāo)為在pH7.4磷酸鹽緩沖液中藥物的累積釋藥百分?jǐn)?shù)(％)，其中·為開環(huán)的酸式羥基喜樹堿釋藥曲線；為未開環(huán)的酮式羥基喜樹堿釋藥曲線；▲為酸式和酮式羥基喜樹堿之和。圖4為實施例2制備的10-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑的掃描電鏡圖。在圖4中,標(biāo)尺為5μπι。圖5為實施例3制備的10-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑的掃描電鏡圖。在圖5中,標(biāo)尺為1μm。具體實施例方式下面通過實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。實施例1:10-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑的制備秤取10-羥基喜樹堿原料5藥40mg，分子量為10000道爾頓的聚乙二醇單甲醚接枝的聚乳酸(mPEG-PLA)400mg，置燒杯中以IOmlDMF(N,N-二甲基甲酰胺)溶解；將上述溶液轉(zhuǎn)移到最小通透8000道爾頓的透析袋內(nèi)，置水浴缸內(nèi)，每隔1、4、他重新置換浴缸內(nèi)水相以透析完全；將所得懸浮液凍干得10-羥基喜樹堿隱形納米載藥微球，滅菌分裝。利用本法制備微球過程基本不造成載體材料損失；同時10-羥基喜樹堿本身不溶于水，損失少；從圖ι的掃描電鏡圖可看到載藥微球粒徑圓整，平均粒徑為210nm，載藥量7.1%，圖2的激光共聚焦顯微鏡斷層掃描照片說明藥物以無定形狀態(tài)均勻地分散在粒子中，未出現(xiàn)殼核結(jié)構(gòu)。對所制備的10-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑進(jìn)行體外釋藥檢測，結(jié)果表示其體外釋藥時間平均可達(dá)30天以上(圖幻。細(xì)胞毒性試驗表明10-羥基喜樹堿隱形納米粒具有較強的抑瘤作用，且抑瘤效果優(yōu)于10-羥基喜樹堿水針劑。實施例210-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑的制備秤取10-羥基喜樹堿原料藥40mg，用分子量為35000道爾頓聚乙二醇單甲醚接枝的聚乳酸(mPEG-PLA)400mg，置燒杯中以IOmlDMF(N，N-二甲基甲酰胺)溶解；將上述溶液轉(zhuǎn)移到最小通透8000道爾頓的透析袋內(nèi)，置水浴缸內(nèi)，每隔1、4、他重新置換浴缸內(nèi)水相以透析完全；將所得懸浮液凍干，滅菌分裝。載藥微球粒徑圓整(圖4)，平均粒徑為230nm，載藥量7.6%，體外釋藥時間平均可達(dá)30天以上。實施例310-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑的制備秤取10-羥基喜樹堿原料藥40mg，用分子量為10000道爾頓聚乙二醇單甲醚接枝的聚(乳酸-羥基乙酸)共聚物(mPEG-PLGA)400mg,置燒杯中以IOmlDMF(N,N-二甲基甲酰胺)溶解；將上述溶液轉(zhuǎn)移到最小通透8000道爾頓的透析袋內(nèi)，置水浴缸內(nèi)，每隔1、4、他重新置換浴缸內(nèi)水相以透析完全；將所得懸浮液凍干，滅菌分裝。載藥微球粒徑圓整(圖幻，平均粒徑為2Mnm，載藥量7.3%，體外釋藥時間平均可達(dá)30天以上。實施例410-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑的制備秤取10-羥基喜樹堿原料藥80mg，分子量為10000道爾頓聚乙二醇單甲醚接枝的聚(乳酸-羥基乙酸)共聚物(mPEG-PLGA)400mg，置燒杯中以IOmlDMF(N,N-二甲基甲酰胺)溶解；將上述溶液轉(zhuǎn)移到最小通透8000道爾頓的透析袋內(nèi)，置水浴缸內(nèi)，每隔1、4、》!重新置換浴缸內(nèi)水相以透析完全；將所得懸浮液凍干，滅菌分裝。載藥微球粒徑圓整，平均粒徑為250nm，載藥量7.9%，體外釋藥時間平均可達(dá)30天以上。權(quán)利要求1.10-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑，其特征在于由10-羥基喜樹堿和藥物載體組成，10-羥基喜樹堿與藥物載體的質(zhì)量比為1220。2.如權(quán)利要求1所述的10-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑，其特征在于所述藥物載體為生物可降解性聚合物。3.如權(quán)利要求2所述的10-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑，其特征在于所述生物可降解性聚合物選自聚乙二醇單甲醚(mPEG)接枝的聚乳酸(PLA)或mPEG接枝的聚(乳酸-羥基乙酸)共聚物(PLGA)，其中PLA的分子量為500050000道爾頓；PLGA分子量為500050000道爾頓；mPEG的分子量為500010000道爾頓。4.如權(quán)利要求1所述的10-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟1)將10-羥基喜樹堿與藥物載體按1220的質(zhì)量比在有機溶劑中溶解，得溶液A；2)將溶液A轉(zhuǎn)移到透析袋內(nèi)進(jìn)行透析；3)將所得懸浮液凍干得10-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑。5.如權(quán)利要求4所述的10-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述有機溶劑選自N-N二甲基甲酰胺、丙酮、四氫呋喃、二甲基亞砜、二氯甲烷、二甲基乙基酰胺中的一種。6.如權(quán)利要求4所述的10-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑的制備方法，其特征在于在步驟幻中，所述透析袋的截留分子量為100015000道爾頓。7.如權(quán)利要求4所述的10-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑的制備方法，其特征在于在步驟2~)中，所述透析采用的外界溶液為超純水或去離子水。全文摘要10-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑及其制備方法，涉及一種醫(yī)藥類抗腫瘤藥物新制劑。提供一種持續(xù)釋藥時間長，藥物釋放穩(wěn)定，生物利用率高的10-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑及其制備方法。所述10-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑由10-羥基喜樹堿和藥物載體組成，10-羥基喜樹堿與藥物載體的質(zhì)量比為1∶2～20。制備方法為將10-羥基喜樹堿與藥物載體按1∶(2～20)的質(zhì)量比在有機溶劑中溶解，得溶液A；將溶液A轉(zhuǎn)移到透析袋內(nèi)進(jìn)行透析；將所得懸浮液凍干得10-羥基喜樹堿隱形納米粒緩釋制劑。文檔編號A61K31/4745GK102198101SQ20111013572公開日2011年9月28日申請日期2011年5月24日優(yōu)先權(quán)日2011年5月24日發(fā)明者侯振清,常迪,張其清,李樂,王衍戈,羅穎,蔣琦瑋申請人:廈門大學(xué)