專利名稱：含有葉黃素的組合物在改善記憶的某些方面的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含有葉黃素和/或玉米黃質(zhì)的新穎的營(yíng)養(yǎng)藥物組合物或食品組合物，其用于改善某些選擇性記憶功能，例如聯(lián)想學(xué)習(xí)、聯(lián)想記憶、壓力下的學(xué)習(xí)和記憶、以及空間(方位)學(xué)習(xí)。
背景技術(shù)：
人們對(duì)可用于改善老年人和年輕人的學(xué)習(xí)、記憶和警覺(jué)性的營(yíng)養(yǎng)藥物組合物的開發(fā)越來(lái)越感興趣。葉黃素已被描述為具有改善認(rèn)知能力下降的能力。參見(jiàn)例如 US2006/0205826 (Romero等人)，其中提出，由于葉黃素充當(dāng)抗氧化劑，所以其可以保護(hù)糖尿病小鼠的海馬體。WO 2006/116755 (Trustees of Tufts College)報(bào)道了在長(zhǎng)期治療(4 個(gè)月)后二十二碳六烯酸(DHA)對(duì)葉黃素吸收及轉(zhuǎn)運(yùn)至腦部的協(xié)同效應(yīng)。這種組合可用于預(yù)防或治療認(rèn)知功能障礙或癡呆，用于預(yù)防如通過(guò)語(yǔ)言流暢性、詞匯表和MIR(現(xiàn)實(shí)記憶)Apartment 測(cè)試所測(cè)的記憶喪失。葉黃素的單獨(dú)施用僅使得語(yǔ)言流暢性測(cè)試明顯改善，沒(méi)有使得所實(shí)施的其他認(rèn)知能力測(cè)試或情緒評(píng)估測(cè)試中的任意一項(xiàng)得到改善。對(duì)于類胡蘿卜素或作為潛在的認(rèn)知增強(qiáng)劑的其他天然產(chǎn)物的大部分研究涉及防止已經(jīng)至少具有癡呆的第一階段(例如短期記憶障礙)或更后階段(例如阿爾茨海默病 Alzheimer' s Disease)的人的認(rèn)知功能降低。有關(guān)葉黃素或葉黃素與玉米黃質(zhì)的組合在增強(qiáng)健康人群的記憶的一些選擇性方面的能力知道的很少。

發(fā)明內(nèi)容
業(yè)已發(fā)現(xiàn)，根據(jù)本發(fā)明，不管是作為唯一的活性成分施用還是與玉米黃質(zhì)組合施用的葉黃素都可以促進(jìn)記憶的某些方面，例如聯(lián)想學(xué)習(xí)和記憶、壓力下的學(xué)習(xí)和記憶、以及空間學(xué)習(xí)和記憶。因而，本發(fā)明的一個(gè)方面是一種增強(qiáng)健康個(gè)體的記憶的方面的方法，其中所述記憶的方面選自由聯(lián)想記憶、空間記憶和壓力下的記憶組成的組，所述方法包括施用由a)有效量的葉黃素或葉黃素與玉米黃質(zhì)的組合和b)適當(dāng)?shù)妮d體組成的組合物；以及觀察增強(qiáng)的聯(lián)想記憶、空間記憶或壓力下的記憶。本發(fā)明的另一方面是一種增強(qiáng)壓力下的學(xué)習(xí)和記憶的方法，所述方法包括施用由a)增強(qiáng)與壓力有關(guān)的學(xué)習(xí)和記憶的有效量的葉黃素或葉黃素與玉米黃質(zhì)的組合和b)適當(dāng)?shù)妮d體組成的組合物；以及觀察增強(qiáng)的壓力下的學(xué)習(xí)和記憶。本發(fā)明的另一方面是一種增強(qiáng)空間學(xué)習(xí)和記憶的方法，所述方法包括施用由a)增強(qiáng)與空間有關(guān)的學(xué)習(xí)和記憶的有效量的葉黃素或葉黃素與玉米黃質(zhì)的組合和b)適當(dāng)?shù)妮d體組成的組合物；以及觀察增強(qiáng)的空間學(xué)習(xí)和記憶。本發(fā)明的另一方面是葉黃素或葉黃素與玉米黃質(zhì)的組合作為唯一的活性化合物在增強(qiáng)a)聯(lián)想學(xué)習(xí)和記憶、b)壓力下的學(xué)習(xí)和記憶、或c)空間學(xué)習(xí)和記憶中的用途。本發(fā)明的另一方面是葉黃素或葉黃素與玉米黃質(zhì)的組合作為唯一的活性化合物(在增強(qiáng)記憶方面是活性的)在制備用于增強(qiáng)a)聯(lián)想學(xué)習(xí)和記憶、b)壓力下的學(xué)習(xí)和記憶和/或c) 空間學(xué)習(xí)和記憶的營(yíng)養(yǎng)藥物或功能性食品中的用途。本發(fā)明的另一方面是由期望增強(qiáng)其聯(lián)想學(xué)習(xí)或記憶、其在壓力下的學(xué)習(xí)或記憶、 或其空間學(xué)習(xí)或記憶的人使用的試劑盒。該試劑盒包含葉黃素或葉黃素與玉米黃質(zhì)的組合的劑型以及任選的使用說(shuō)明。此外任選地，可以存在其他活性成分的單獨(dú)劑型。


圖I是說(shuō)明葉黃素在谷氨酸神經(jīng)毒性模式中的神經(jīng)保護(hù)作用的圖表。圖2是IntelliCage及其功能特征的示意圖。圖3示出了位置錯(cuò)誤率(訪問(wèn)錯(cuò)誤角落的百分比)。從模塊的開始觀察該效應(yīng)并在第一個(gè)12小時(shí)(活躍期)中保持觀察，結(jié)果證明，用葉黃素處治產(chǎn)生較高的注意力水平和改善的記憶表現(xiàn)。圖4示出了側(cè)面錯(cuò)誤率(在正確角落的錯(cuò)誤側(cè)面上探鼻的百分比)。與賦形劑對(duì)照組相比，葉黃素產(chǎn)生明顯較低的百分比錯(cuò)誤率。圖5示出了與對(duì)照組的小鼠的相比用葉黃素處治的小鼠在有壓力的條件下解決尋找獲取水的正確位置的任務(wù)時(shí)表現(xiàn)明顯較好。圖6示出了向動(dòng)物飼料中補(bǔ)充葉黃素使得小鼠通過(guò)使用空間提示來(lái)學(xué)習(xí)尋找并記住水的位置的能力顯著改善。定義葉黃素表示任何可攝取形式的葉黃素，例如植物提取物或油性樹脂 (oleoresin)。其包括全-E和Z異構(gòu)體。優(yōu)選的是FloraGLO Lutein,這是一種包含約98% 的葉黃素(全-E和Z異構(gòu)體)和約2%的其他類胡蘿卜素(其中約O. 5-1. 5%的玉米黃質(zhì))的金盞花(Marigold)提取物。葉黃素可以作為在各種油(紅花油、玉米油)中的懸浮液使用，或者可以被配制成生物利用度高的珠粒形式，例如Actilease FloraGLO Lutein。玉米黃質(zhì)表示玉米黃質(zhì)和/或其異構(gòu)體，包括全-E和Z異構(gòu)體以及SS’、SR(內(nèi)消旋玉米黃質(zhì))和RR’立體異構(gòu)體。玉米黃質(zhì)可以作為在各種油(紅花油、玉米油)中的懸浮液使用，或者可以被配制成生物利用度高的珠粒形式，例如Actilease formulated Optisharp ο玉米黃質(zhì)表示玉米黃質(zhì)和/或通常所用的玉米黃質(zhì)的衍生物(例如內(nèi)消旋玉米黃質(zhì))?！案纳?增強(qiáng)聯(lián)想學(xué)習(xí)”表示在訓(xùn)練環(huán)境下學(xué)習(xí)信號(hào)、符號(hào)、規(guī)則的意義以及如何對(duì)刺激作出反應(yīng)的能力得到改善。“改善/增強(qiáng)壓力下的學(xué)習(xí)”表示當(dāng)新任務(wù)發(fā)生在壓力條件(例如作為日常生活 /工作壓力的一部分所經(jīng)歷的壓力條件)下時(shí)，受試者學(xué)習(xí)新本領(lǐng)或新信息的能力得到改業(yè)
口 O“改善/增強(qiáng)壓力下的記憶”表示當(dāng)經(jīng)歷有壓力的環(huán)境或日常生活時(shí)，受試者回憶信息的能力得到改善。一個(gè)實(shí)例是在考試情況下回憶答案?！案纳?增強(qiáng)空間學(xué)習(xí)或記憶”表示受試者學(xué)習(xí)目標(biāo)相對(duì)于環(huán)境的其他部分在何處的能力得到增強(qiáng)。例如，一個(gè)人可能更容易地學(xué)會(huì)購(gòu)物中心周圍的路。另一個(gè)實(shí)例是一個(gè)人能更好地記住其停車或放鑰匙的位置?！拔ㄒ坏脑鰪?qiáng)學(xué)習(xí)的化合物”表示該組合物中不包含有助于認(rèn)知的其他成分。具體排除的成分的實(shí)例包括銀杏(提取物或單獨(dú)的活性成分)、乙酰左旋肉堿、維生素C和 E、維生素B、胞磷膽堿、CoQlO (輔酶-Q10)、人參、石杉?jí)A甲Α、Ω -3脂肪酸(例如DHA/EPA)、 磷脂酰絲氨酸、松樹樹皮提取物(Pycnogenol碧蘿]E )或Bacopa monieri植物提取物。“觀察”增強(qiáng)的認(rèn)知方面能力表示觀察者注意到受試者有改善或受試者本身注意到其有改善。這些改善可以通過(guò)使用標(biāo)準(zhǔn)化的測(cè)量方法來(lái)量化，但不需要這樣做，可以僅根據(jù)主觀感受或經(jīng)驗(yàn)。“處治”包括共處治和預(yù)防。“預(yù)防”并不限于未來(lái)完全不存在這些癥狀，而是意指包括減少個(gè)體或群體表現(xiàn)癥狀的風(fēng)險(xiǎn)，減輕與特定病癥有關(guān)的癥狀，減少特定病癥的發(fā)病時(shí)間，減輕病癥的嚴(yán)重性，減少無(wú)癥狀的個(gè)體在未來(lái)顯示出病癥的可能性。為了實(shí)現(xiàn)這些改善，建議連續(xù)幾天施用(例如至少6天或10天)，通常優(yōu)選在數(shù)周內(nèi)每天施用。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，葉黃素或葉黃素和玉米黃質(zhì)被健康的受試者攝取?！敖】档摹北硎臼茉囌邲](méi)有遭受任何危害其心理健康的病癥的影響，即，沒(méi)有遭受特征為記憶惡化 (例如癡呆、阿爾茨海默病等)、抑郁的病癥或影響記憶和學(xué)習(xí)的其他精神病癥(例如精神分裂癥)的影響。因而，本發(fā)明的另一方面將涉及葉黃素或葉黃素和玉米黃質(zhì)在改善聯(lián)想記憶中的用途。本發(fā)明的另一方面將涉及葉黃素或葉黃素和玉米黃質(zhì)在改善受試者處于壓力下時(shí)的記憶的用途。具有改善的處于壓力下的記憶的受試者將觀察到下列中的至少一項(xiàng) 在工作中不會(huì)忘記執(zhí)行分配的任務(wù)(當(dāng)幾項(xiàng)任務(wù)待解決時(shí))； 在演講中記住事實(shí)等； 在考試條件或需要快速回憶的條件下表現(xiàn)更好。本發(fā)明的另一方面將涉及葉黃素或葉黃素和玉米黃質(zhì)在改善空間記憶中的用途。 具有改善的空間記憶的受試者將觀察到下列中的至少一項(xiàng) 較少“放錯(cuò)的”項(xiàng)，例如某人的鑰匙、眼鏡、移動(dòng)電話或電視遙控器； 在周圍環(huán)境(例如在房子里)中和駕駛時(shí)容易確定自己的方向的能力，或者能夠簡(jiǎn)單地記住某人將汽車停放在大的停車場(chǎng)的何處。除了可用于人類之外，本發(fā)明的組合物在獸醫(yī)界具有額外的用途。動(dòng)物將受益的狀況具體為特定目的的訓(xùn)練過(guò)程和培養(yǎng)，例如對(duì)于獵犬、導(dǎo)盲犬、警犬、或電影業(yè)中所用的動(dòng)物?？梢詮脑鰪?qiáng)的認(rèn)知功能中受益的動(dòng)物包括那些經(jīng)受壓力條件的動(dòng)物。這些條件出現(xiàn)在例如捕獲或運(yùn)輸之后，或者可能是由于居住條件(例如住所或主人的改變)，當(dāng)動(dòng)物產(chǎn)生類似的失調(diào)或變得痛苦或具有攻擊性時(shí)，或者表現(xiàn)出刻板行為(stereotypic behaviou)、或焦慮和強(qiáng)迫行為時(shí)。經(jīng)受壓力的動(dòng)物也包括那些賽跑的動(dòng)物(例如狗、馬、駱駝)或各種運(yùn)動(dòng)中所用的動(dòng)物、表演動(dòng)物(例如馬戲團(tuán)的動(dòng)物以及舞臺(tái)、電視或電影中出現(xiàn)的那些動(dòng)物)和表演盛裝舞步和其他高度紀(jì)律性成套動(dòng)作的馬。優(yōu)選的“動(dòng)物”是寵物或伴侶動(dòng)物(companion animals)以及農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物。寵物的例子為狗、貓、鳥、觀賞魚、豚鼠(guinea pigs)、(長(zhǎng)腿)兔((jack) rabbit)、野兔和雪貂、 農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物的例子為水產(chǎn)養(yǎng)殖的魚、豬、馬、反芻動(dòng)物(牛、綿羊和山羊)和家禽。營(yíng)養(yǎng)藥物的用途/制劑/劑暈在本文中使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)“營(yíng)養(yǎng)藥物”表示在營(yíng)養(yǎng)和醫(yī)藥應(yīng)用領(lǐng)域均可用。因而，新穎的營(yíng)養(yǎng)藥物組合物可用作食品/飼料和飲料的補(bǔ)充物，和可以作為腸內(nèi)或腸胃外應(yīng)用的藥物制劑，其可以為固體制劑，例如膠囊或藥片，或者為液體制劑，例如溶液或懸浮液。根據(jù)本發(fā)明的營(yíng)養(yǎng)藥物組合物可以進(jìn)一步包含保護(hù)性水膠體(例如樹膠、蛋白質(zhì)、改性淀粉)、粘結(jié)劑、成膜劑、成膠囊劑/材料、壁/殼材料、基質(zhì)化合物、包衣、乳化劑、 表面活性劑、增溶劑(油、脂肪、臘、卵磷脂等)、吸附劑、載體、填料、復(fù)合物(co-compound)、 分散劑、潤(rùn)濕劑、加工助劑(溶劑)、流動(dòng)改性劑、掩味劑、增重劑、凝結(jié)劑(jeI Iyfying agent)、凝膠劑、抗氧化劑和抗微生物劑。此外，多維生素和礦物質(zhì)補(bǔ)充劑可以被添加到本發(fā)明的營(yíng)養(yǎng)藥物組合物中以得到足夠量的某些膳食中缺少的必需營(yíng)養(yǎng)。多維生素和礦物質(zhì)補(bǔ)充劑還可以用于疾病預(yù)防和保護(hù)免受因生活方式而導(dǎo)致的營(yíng)養(yǎng)損失和缺乏的影響。根據(jù)本發(fā)明的營(yíng)養(yǎng)藥物組合物可以是含有常規(guī)載體材料的、適于施用至身體的任何蓋侖形式(galenic form)，特別是常用于口服施用的任何形式，例如固體形式，諸如食品或飼料(用于食品或飼料的添加劑/或補(bǔ)充劑)、食品或飼料預(yù)混料、強(qiáng)化食品或飼料、藥片、藥丸、顆粒、糖衣丸、膠囊和泡騰片劑型(例如粉末和片劑)；或者液體形式，例如溶液、 乳液或懸浮液，諸如飲料、糊和油懸浮液。所述糊可以包在硬殼或軟殼膠囊中，其中該膠囊具有例如(魚、豬、家禽、奶牛)明膠、植物蛋白或木素磺酸鹽的基質(zhì)。其他應(yīng)用形式的例子是用于經(jīng)皮施用、腸胃外施用或注射施用的那些。膳食和藥物組合物可以是受控(延緩) 釋放制劑的形式。食品的例子為乳制品，包括例如人造奶油、涂抹醬(spread)、黃油、芝士、酸奶或奶飲料。強(qiáng)化食品的例子為面包、谷物棒、烘烤食品(例如蛋糕和曲奇餅干)以及薯?xiàng)l或油炸馬鈴薯片。寵物食品的例子為濕的罐頭食品、零食和壓縮飼料(pellets)。飲料包括非酒精飲料和酒精性飲料以及添加到飲用水和液體食品中的液體制劑。 非酒精飲料為例如軟飲料、運(yùn)動(dòng)飲料、果汁、檸檬飲料、茶和奶飲料。液體食品為例如湯和乳制品。含有葉黃素或葉黃素和玉米黃質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)藥物組合物可以被添加到軟飲料、能量棒或糖果中，從而使成年人消耗每天每kg體重至多2mg。如果營(yíng)養(yǎng)藥物組合物是藥物制劑，該組合物進(jìn)一步包含藥物可接受的賦形劑、稀釋劑或佐劑。其配制可以使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，如例如Remington' sPharmaceutical Sciences, 20th edition Williams&Wilkins,PA,USA中公開的。對(duì)于口服施用來(lái)說(shuō),優(yōu)選使用藥片和膠囊，其含有適當(dāng)?shù)恼辰Y(jié)劑(例如明膠或聚乙烯基吡咯烷酮)、適當(dāng)?shù)奶盍?例如乳糖或淀粉)、適當(dāng)?shù)臐?rùn)滑劑(例如硬脂酸鎂)以及任選的其他添加劑。為了本發(fā)明的目的，對(duì)于動(dòng)物(包括人類)來(lái)說(shuō)，葉黃素或葉黃素和玉米黃質(zhì)的合適的每日劑量可以在每天每kg體重0. 15mg到約每天每kg體重IOmg的范圍內(nèi)。下面所示的非限制性實(shí)施例將更好地說(shuō)明本發(fā)明。實(shí)施例I
_0] 葉黃素在體外神經(jīng)毒性模型中的作用谷氨酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中一種主要的興奮性氨基酸，并且在正常的生理機(jī)能中起到關(guān)鍵作用。谷氨酸功能的正常調(diào)節(jié)機(jī)制中的擾動(dòng)可能導(dǎo)致大腦中的谷氨酸受體過(guò)度的神經(jīng)毒性活化，這可能不利于正常腦和老化的腦中的學(xué)習(xí)和記憶表現(xiàn)。使用神經(jīng)元的原代培養(yǎng)物，可以通過(guò)谷氨酸中毒再現(xiàn)這些狀態(tài)。對(duì)培養(yǎng)的神經(jīng)元的影響通過(guò)神經(jīng)元的神經(jīng)絲細(xì)胞骨架網(wǎng)絡(luò)的形態(tài)變化來(lái)示明。單一化合物或化合物的組合的神經(jīng)保護(hù)作用通過(guò)使用特異于成熟神經(jīng)元神經(jīng)突的抗神經(jīng)絲抗體(重鏈200kD)標(biāo)記來(lái)分析網(wǎng)絡(luò)密度而評(píng)估。利魯唑(Riluzole，一種藥物神經(jīng)保護(hù)劑)和MK801被用作抵消谷氨酸的神經(jīng)毒性作用(導(dǎo)致神經(jīng)突過(guò)生長(zhǎng))的抑制化合物。抑制性的MK801(對(duì)NMDA型谷氨酸受體完全阻滯)很有效，導(dǎo)致中毒之后的100%恢復(fù)。使用下面所示的時(shí)間安排來(lái)測(cè)試葉黃素的神經(jīng)保護(hù)功能
第0天細(xì)胞播種第I天添加介質(zhì)第2天更換介質(zhì)第5天更換介質(zhì)并添加化合物第7天更換介質(zhì)并添加化合物第9天更換介質(zhì)并添加化合物第12天谷氨酸中毒第12天+6小時(shí)分析在第5天，用對(duì)照的培養(yǎng)介質(zhì)或含葉黃素的介質(zhì)(在生理范圍中的3個(gè)濃度，每個(gè)濃度下n = 6)來(lái)替換培養(yǎng)介質(zhì)。每2-3天更換一半的介質(zhì)。在第12天，用250 PM的谷氨酸使細(xì)胞中毒6小時(shí)。對(duì)照培養(yǎng)物(谷氨酸中毒且沒(méi)有任何附加的化合物)的神經(jīng)突長(zhǎng)度被設(shè)定為 100%。這些實(shí)驗(yàn)表明，用葉黃素預(yù)處治(所有使用的濃度，P <0.05且<0.01)明顯保護(hù)了神經(jīng)元，使其免受興奮毒性的谷氨酸神經(jīng)毒性(參見(jiàn)圖I)。實(shí)施例2葉黃素和/玉米黃質(zhì)在新的、完全自動(dòng)的、嚙齒動(dòng)物學(xué)習(xí)和記憶的模型中的作用
在IntelliCage 中，用葉黃素和/或玉米黃質(zhì)處治的小鼠的認(rèn)知表現(xiàn)與用賦形劑處治的、年齡相當(dāng)?shù)膶?duì)照組相比較，所述IntelliCage 是一個(gè)能在與籠屋(homecage) 類似的環(huán)境下自動(dòng)監(jiān)測(cè)小鼠的自發(fā)的學(xué)習(xí)行為的系統(tǒng)(NewBehavior AG, Ziirich, Switzerland, www. newbehavior. com ；Galsworthy et al. 2005, Behav Brain Res 157 211-217 ；Onishchenko et al. 2007, Toxicol Sci97 :428-437 ；Mechan et al. 2009， J. Neurosci. Methods, 180 :43-51)。各小鼠通過(guò)IntelliCage角落內(nèi)的傳感器讀取轉(zhuǎn)發(fā)器 (參考識(shí)別標(biāo)簽)來(lái)識(shí)別，其中，所述轉(zhuǎn)發(fā)器植入小鼠的頸部的頸背中。每個(gè)IntelliCage 基本上是一個(gè)大的籠子(37. 5X55X20. 5cm)，其中放置了包含四個(gè)記錄(操作)室的金屬框。記錄室安放在籠子的四個(gè)角落中，每一個(gè)均占據(jù) 15x15x21cm的直角三角形的占地面積?；\中天線能自動(dòng)監(jiān)測(cè)每一只老鼠的角落訪問(wèn)；每一個(gè)角落內(nèi)的照片光束能自動(dòng)記錄每一次探鼻和水瓶噴頭舔舐。4個(gè)三角形的老鼠躲避處被放置在籠子的中間，其上有食物漏斗，使小鼠能隨意獲取食物。每一個(gè)記錄室均包括(I) 一個(gè)塑料環(huán)(內(nèi)徑為30mm),其充當(dāng)進(jìn)入記錄室的入口并容納登記角落訪問(wèn)的環(huán)形天線；(2)格子地板，小鼠一旦進(jìn)入記錄室內(nèi)便坐在其上；(3) 兩個(gè)圓形開口(直徑為13_)，其能接近水瓶噴頭；各開口均被登記探鼻的照片光束橫穿；
(4)兩個(gè)監(jiān)測(cè)門，其允許(門打開)或禁止(門關(guān)閉)接近水瓶噴頭；(5)兩個(gè)水瓶；(6)管子，通過(guò)該管子可以輸送空氣噴氣作為厭惡性刺激；(7)不同顏色的發(fā)光二極管，其可用于條件反射實(shí)驗(yàn)(Mechan 等人，2009 J Neurosci Methods 180 :43-51) 參見(jiàn)圖 2。實(shí)驗(yàn)階段:本研究包括兩個(gè)測(cè)試組(每一個(gè)組n = 12-14):賦形劑(對(duì)照)、葉黃素(9mg/kg Bff) ( BP FloraGLO Lutein，包含約98%的葉黃素(全-E和Z異構(gòu)體)和約2%的其他類胡蘿卜素(其中約0.5-1. 5%的玉米黃質(zhì))的金盞花提取物)。葉黃素包含在正常的動(dòng)物飼料中。在IntelliCage研究之前的12天以及貫穿4 周的研究期間將測(cè)試物質(zhì)或空白對(duì)照劑以飼料(50mg/kg飼料)施用給所有的小鼠。在最初的適應(yīng)階段(9天)，小鼠能自由接近所有的角落、水和飼料，并且能自由地探索籠子。隨后，小鼠必須學(xué)習(xí)使用探鼻(探鼻適應(yīng)模塊，2天)；所有的門最初都是關(guān)閉的 (禁止接近水)，小鼠為了打開門并夠到水瓶噴頭必須執(zhí)行探鼻。所采集的數(shù)據(jù)包括幾個(gè)參數(shù)，例如每個(gè)個(gè)體小鼠最不偏好的角落，其被記下用于編程下一個(gè)模塊。在探鼻適應(yīng)之后，執(zhí)行下列任務(wù)-側(cè)面辨別力模式聯(lián)想學(xué)習(xí)和記憶以及記憶和注意力的測(cè)試；-聯(lián)想記憶模式利用負(fù)強(qiáng)化(壓力)的聯(lián)想學(xué)習(xí)和記憶的測(cè)試；-方位學(xué)習(xí)模式空間學(xué)習(xí)和記憶以及方向性的測(cè)試。側(cè)面辨別力模式該模塊被設(shè)計(jì)用于測(cè)試注意力和聯(lián)想記憶。為每只老鼠指定一個(gè)正確的角落。在該角落中只有一個(gè)側(cè)面(兩個(gè)側(cè)面中的一個(gè))被指定為正確的，并通過(guò)綠色LED向動(dòng)物指示。動(dòng)物可以在正確的側(cè)面上探鼻，隨后從水瓶中喝水。在該模塊中，記錄位置錯(cuò)誤率(訪問(wèn)錯(cuò)誤角落的百分比)和側(cè)面錯(cuò)誤率(在正確角落的錯(cuò)誤側(cè)面上探鼻的百分比)。這些數(shù)據(jù)表明，用葉黃素長(zhǎng)期處治之后，注意力得到改善，因?yàn)樵跍y(cè)試活躍期期間，其位置錯(cuò)誤率(圖3)和側(cè)面錯(cuò)誤率(圖4)明顯低于賦形劑對(duì)照組。
概括地說(shuō)，自動(dòng)IntelliCage 研究的結(jié)果表明，與用賦形劑處治的同窩出生者相比，用葉黃素處治使得小鼠為了獲得水而將短時(shí)間(2秒)存在的光信號(hào)與正確角落和正確的角落側(cè)面聯(lián)系在一起的學(xué)習(xí)和記憶得到明顯改善。聯(lián)想記憶樽式在該模塊中，為每只老鼠指定一個(gè)正確的角落，并通過(guò)3秒的燈光顯示來(lái)指示。因而，在正確角落的探鼻將打開門，小鼠在該特定的角落中能夠獲得水，而每一次訪問(wèn)任何錯(cuò)誤的角落均將導(dǎo)致空氣噴氣的懲罰(壓力)。結(jié)果顯示在圖5中，表明與用賦形劑處治的同窩出生者相比，用葉黃素處治的小鼠學(xué)習(xí)和記憶得到水(因而避免懲罰)的位置的表現(xiàn)明顯較好。方位學(xué)習(xí)樽式在這個(gè)學(xué)習(xí)任務(wù)中，小鼠必須進(jìn)入正確的角落，并且為了得到水必須在角落的任一側(cè)面上進(jìn)行探鼻。根據(jù)之前的探鼻適應(yīng)模塊中動(dòng)物的訪問(wèn)行為來(lái)指定角落，如果合適的話，最不偏好的角落被指定為各老鼠的正確角落。不提供額外的信號(hào)(例如燈光)，從而指導(dǎo)小鼠基于其環(huán)境和/或籠子的空間提示來(lái)嘗試學(xué)習(xí)并記住能獲取水的角落的位置。圖6 總結(jié)出，該測(cè)試的結(jié)果表明，與用空白對(duì)照劑喂養(yǎng)的同窩出生者相比，用葉黃素處治的小鼠的表現(xiàn)明顯較好。概括地說(shuō)，自動(dòng)IntelliCage 研究的結(jié)果證實(shí)，與用賦形劑處治的同窩出生者相比，用葉黃素處治數(shù)周使得小鼠各種學(xué)習(xí)和記憶得到明顯改善。在第二組實(shí)驗(yàn)中，在上述學(xué)習(xí)和記憶模式中測(cè)試不同劑量的葉黃素(8mg/kg/d、 16mg/kg/d和30mg/kg/d)或葉黃素與玉米黃質(zhì)的組合(分別為15和16mg/kg/d)。與對(duì)照組相比，用中間的葉黃素劑量補(bǔ)充的動(dòng)物在聯(lián)想記憶任務(wù)中在位置錯(cuò)誤率和側(cè)面錯(cuò)誤率方面的表現(xiàn)顯示出明顯的改善。此外，用葉黃素和玉米黃質(zhì)喂養(yǎng)的動(dòng)物在側(cè)面錯(cuò)誤率方面的表現(xiàn)更優(yōu)異。在比第一組實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物小2-3個(gè)月的動(dòng)物中進(jìn)行這些實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，根據(jù)所使用的年齡和認(rèn)知模式，葉黃素的有利效果可能不同。實(shí)施例3軟明膠膠囊的制備可以制備包含下列成分的軟明膠膠囊
權(quán)利要求
1.一種增強(qiáng)健康個(gè)體的記憶方面的方法，其中所述記憶方面選自由下列組成的組聯(lián)想記憶、空間記憶和壓力下的記憶，所述方法包括施用由a)有效量的葉黃素或葉黃素與玉米黃質(zhì)的組合和b)適當(dāng)?shù)妮d體組成的組合物；以及觀察所述增強(qiáng)的聯(lián)想記憶、空間記憶或壓力下的記憶。
2.一種增強(qiáng)壓力下的學(xué)習(xí)和記憶的方法，所述方法包括施用由a)增強(qiáng)與壓力有關(guān)的學(xué)習(xí)和記憶的有效量的葉黃素或葉黃素與玉米黃質(zhì)的組合和b)適當(dāng)?shù)妮d體組成的組合物；以及觀察所述增強(qiáng)的壓力下的學(xué)習(xí)和記憶。
3.一種增強(qiáng)空間學(xué)習(xí)和記憶的方法，所述方法包括施用由a)增強(qiáng)與空間有關(guān)的學(xué)習(xí)和記憶的有效量的葉黃素或葉黃素與玉米黃質(zhì)的組合和b)適當(dāng)?shù)妮d體組成的組合物；以及觀察所述增強(qiáng)的空間學(xué)習(xí)和記憶。
4.葉黃素或葉黃素與玉米黃質(zhì)的組合作為唯一的活性化合物用于增強(qiáng)a)聯(lián)想學(xué)習(xí)和記憶、b)壓力下的學(xué)習(xí)和記憶、或c)空間學(xué)習(xí)和記憶中的用途。
5.葉黃素或葉黃素與玉米黃質(zhì)的組合作為對(duì)于增強(qiáng)記憶起作用的唯一的活性化合物在制備用于增強(qiáng)a)聯(lián)想學(xué)習(xí)和記憶、b)壓力下的學(xué)習(xí)和記憶和/或c)空間學(xué)習(xí)和記憶的營(yíng)養(yǎng)藥物或功能性食品中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種增強(qiáng)健康個(gè)體的記憶方面的方法，其中所述記憶方面選自由下列組成的組聯(lián)想記憶、空間記憶和壓力下的記憶，所述方法包括將由a)有效量的葉黃素或葉黃素與玉米黃質(zhì)的組合和b)適當(dāng)?shù)妮d體組成的組合物給藥；并且觀察增強(qiáng)的聯(lián)想記憶、空間記憶或壓力下的記憶。
文檔編號(hào)A61K31/07GK102612364SQ201080050833
公開日2012年7月25日 申請(qǐng)日期2010年11月5日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月9日
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