專利名稱：含有益生微生物的干全乳制品的制作方法
含有益生微生物的干全乳制品本發(fā)明涉及幼孩營養(yǎng)領(lǐng)域。特別地，本發(fā)明涉及包含益生微生物以施用至年齡大于12個月幼孩的干全乳制品。這些益生微生物可以是非復(fù)制型益生微生物，例如有生物活性的熱處理的益生微生物。母乳是嬰兒健康生長和發(fā)育的理想食物。在2001年，世界衛(wèi)生組織(WHO)將其推薦的純粹母乳喂養(yǎng)持續(xù)期從4至6個月變成6個月，因此應(yīng)當(dāng)相應(yīng)地鼓勵和促進(jìn)母乳喂養(yǎng)。從第六個月伊始往后，嬰兒的行為改變。它們第一次坐起或僅用一只手握住玩具。隨著嬰兒發(fā)育，嬰兒的營養(yǎng)要求改變。營養(yǎng)物如鐵和鈣變得甚至更重要。年齡從一歲以上，基于牛乳的飲料變成嬰兒膳食中的重要項。但是牛乳本身不適應(yīng)于幼孩的營養(yǎng)要求。具體而言，牛乳含有太多的蛋白質(zhì)，太多的礦物質(zhì)、太少的鐵、太多飽和脂肪酸和不足的不飽和脂肪。
開發(fā)了全乳制品以輔助確保這個年齡上的兒童的最佳發(fā)育。幼孩早期營養(yǎng)的一項重要功能是產(chǎn)生健康的腸道菌群并形成強(qiáng)的免疫系統(tǒng)。健康腸道菌群將有助于有功能的胃腸道，這轉(zhuǎn)而會幫助恰當(dāng)?shù)叵瘮z入的食物并會減少嬰兒和幼孩中的胃痛。幼孩一般每年患有約10次感冒。這類感冒是不舒服的，并且甚至可能造成更嚴(yán)重的后果。因而希望進(jìn)一步改善全乳制品的免疫增強(qiáng)作用。也希望進(jìn)一步改善全乳制品的抗炎作用。因而，本領(lǐng)域需要針對年齡至少12月的幼孩的需要確保最佳營養(yǎng)支持的全乳制品。這種全乳制品應(yīng)當(dāng)具有改善的免疫增強(qiáng)作用、抗炎作用和/或應(yīng)當(dāng)促進(jìn)消化。如果通過使用現(xiàn)有工業(yè)技術(shù)，利用施用安全而無副作用并且容易摻入成長型乳組合物的天然成分實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)，這將是優(yōu)選的。本發(fā)明人已經(jīng)解決這種需要。因此本發(fā)明的目的是改善現(xiàn)有技術(shù)并提供滿足上述需要的全乳制品。本發(fā)明人出人意料地看到他們能夠通過獨(dú)立權(quán)利要求的主題實(shí)現(xiàn)該目的。從屬權(quán)利要求進(jìn)一步發(fā)展本發(fā)明的構(gòu)思。因此，本發(fā)明人提出來提供包含益生元(prebiotics)和益生菌的全乳制品。全乳制品是營養(yǎng)組合物。本發(fā)明的全乳制品是設(shè)計旨在幼孩持續(xù)發(fā)育期間最佳支持幼孩的特定的營養(yǎng)組合物。隨著兒童發(fā)育期間的營養(yǎng)要求變化，可以通過提供多于一種特定的全乳制品實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)，每種特定的全乳制品理想地適合特定的年齡范圍。例如，一種全乳制品可以在年齡12個月時開始施用，并且第二種全乳制品可以在年齡36個月時開始施用。發(fā)現(xiàn)益生菌能夠在全乳制品的環(huán)境下提供它們的健康益處。另外，例如，雙歧桿菌存在于母乳中并且是賦予母乳天然保護(hù)性特征的一部分。因而，添加益生微生物至幼孩用全乳制品將使得這些全乳制品與母乳更相似。然而，由于尤其待用水重構(gòu)的粉末配方食品(formula)的貨架壽命通常超過例如包含益生菌的酸乳飲品的貨架壽命，故益生菌通常不添加至此類配方食品，例如，原因是在延長的貨架壽命期間確保益生菌活力的不確定性。本發(fā)明人現(xiàn)在能夠顯示甚至非復(fù)制型益生菌可以提供益生菌的健康益處并且甚至可以具有改善的益處。因而，本發(fā)明涉及干全乳組合物，其包含益生微生物和選自豌豆殼纖維、果寡醣(Oligofructose)、菊粉及其組合中的益生元以施用至年齡從12個月開始的幼孩。全乳組合物提供正確量的具有平衡脂肪酸組成的脂質(zhì)。脂質(zhì)是最好的能量提供者(9kcal/g)，為學(xué)步幼兒增加的活動所需要。但是，也需要脂肪酸以構(gòu)成細(xì)胞膜，并且它們是一些生理活性因子(例如激素、凝血因子等)的重要前體。本發(fā)明的全乳組合物包含平衡的蛋白質(zhì)含量。
一方面，需要蛋白質(zhì)以例如構(gòu)成身體組織如肌肉，尤其在發(fā)育時間期間。另一方面，高量的蛋白質(zhì)加重學(xué)步幼兒仍不成熟的腎功能的負(fù)擔(dān)。如果腎功能未成熟，則高蛋白質(zhì)攝入可以損害腎功能。研究提出，年齡超過I歲的兒童傾向于具有高于兒科醫(yī)生建議的蛋白質(zhì)攝入。聞蛋白質(zhì)攝入也涉及后期生活中的肥胖癥。在本發(fā)明的全乳組合物中存在的益生元組合物可以例如是豌豆殼纖維、果寡醣和菊粉的混合物。例如，它可以備選地是果寡醣和菊粉的混合物。這種益生元組合物幫助支持健康的消化系統(tǒng)。例如，本發(fā)明的組合物可以含有每克干重2_4g果寡醣。本發(fā)明的全乳組合物可以進(jìn)一步用對于生長重要的維生素和礦物質(zhì)強(qiáng)化。例如，一份次本發(fā)明的全乳組合物可以含有對I和3歲年齡之間的兒童每日所推薦的35%鈣和15%維生素A。本發(fā)明的全乳組合物也可以含有每份次I. 5克用于兒童生長和發(fā)育的必需脂肪酸。本發(fā)明的組合物可以進(jìn)一步用天然蜂蜜滋味豐富，旨在確保兒童很喜歡該全乳組合物。本發(fā)明的組合物可以含有20_27g/100g干重的量的蛋白質(zhì)源、49_52g/100g干重的量的碳水化合物源和19-24g/100g干重的量的脂質(zhì)源。如果該組合物待施用至年齡12-36月的兒童，它可以含有25_27g/100g干重的量的蛋白質(zhì)源、50-52g/100g干重的量的碳水化合物源和19-21g/100g干重的量的脂質(zhì)源。如果該組合物待施用至年齡超過36個月的兒童，它可以含有20_20g/100g干重的量的蛋白質(zhì)源、49-51g/100g干重的量的碳水化合物源和23-24g/100g干重的量的脂質(zhì)源。牛乳具有對幼孩營養(yǎng)次優(yōu)的脂肪酸組成。飽和脂肪酸高和不飽和脂肪酸低，牛乳未提供最佳和最健康的脂肪酸組成。不飽和脂肪酸是生長需要的，例如用于構(gòu)成神經(jīng)系統(tǒng)中的細(xì)胞，并且研究顯示許多學(xué)步幼兒沒有接受推薦的水平。例如，腦非常富含DHA(n-3不飽和脂肪酸)。因此，本發(fā)明的組合物具有兩類必需脂肪酸之間的良好平衡，亞油酸和a -亞油酸的大致含量為10 : I至6 : I范圍內(nèi)的比率。如果作為干燥的組合物提供，優(yōu)選該組合物具有0. 2以下、優(yōu)選0. 15以下的水活度以進(jìn)一步增加貨架穩(wěn)定性。例如，大部分細(xì)菌在低于0.91的水活度下不生長，并且大部分霉菌在低于0. 80的水活度下停止生長。
水活度(aw)是某體系中水的能量狀態(tài)的量度。其定義為水的蒸汽壓除以純水的蒸汽壓。因而，蒸餾水具有水活度I。本發(fā)明的全乳組合物也可以含有每IOOmL配方食品I. 5-2. 5mg核苷酸。核苷酸及其堿基不視為‘必需’，因為它們可以由嬰兒身體從更簡單的化合物合成。然而，在某些時候，合成過程可能不能夠滿足需要，例如，在細(xì)胞快速周轉(zhuǎn)期間，如在正常生長或腸道疾病中。在這些時候，身體更倚重于膳食核苷酸源。為了最佳營養(yǎng)支持，可以按一日至少兩份次提供本發(fā)明的組合物。例如，包含約30_36g干組合物和200至250mL水的一份次可以對早餐施用一次并且當(dāng)日期間施用第二次。該組合物可以部分地或僅包含非復(fù)制型益生微生物。
本發(fā)明人出人意料地看到，例如，就免疫增強(qiáng)作用而言和/或就抗炎作用而言，非復(fù)制型益生微生物甚至可以比復(fù)制型益生微生物更有效。這是出人意料的，因為益生菌經(jīng)常被定義為“當(dāng)足量施用時賦予宿主健康益處的活微生物”(FA0/WH0指南)。絕大多數(shù)的公開的文獻(xiàn)涉及活的益生菌。此外，幾項研究調(diào)查了由不復(fù)制型細(xì)菌遞送的健康益處，并且這些研究中的大部分表明益生菌的滅活(例如通過熱處理)導(dǎo)致所聲稱的健康益處喪失(Rachmilewitz, D.等人，2004, Gastroenterology 126 :520-528 ；Castagliuolo 等人，2005, FEMS TmmunoI. Med.Microbiol. 43 :197-204 ；Gill, H. S.和 K.J. Rutherfurd,2001, Br. J. Nutr. 86 :285-289 ；Kaila，M.等人，1995，Arch. Dis. Child 72:51-53.)。一些研究顯示死的益生菌可以保留一些健康作用(Rachmilewitz,D.等人，2004,Gastroenterology 126 :520-528 ；Gill,H. S.和K. J. Rutherfurd，2001，Br. J. Nutr. 86 :285-289)，但是顯然，本領(lǐng)域迄今認(rèn)為活的益生菌表現(xiàn)得更好。本發(fā)明的組合物可以以任意的有效量(例如以對應(yīng)于約IO6至1012CfU/g干重的量)包含益生微生物。所述益生微生物可以是非復(fù)制型益生微生物。“非復(fù)制型”益生微生物包括已經(jīng)熱處理過的益生細(xì)菌。這包括滅活的、死的、無活力和/或作為片段如DNA、代謝物、細(xì)胞質(zhì)復(fù)合物和/或細(xì)胞壁物質(zhì)存在的微生物。“非復(fù)制型”意指不能通過常規(guī)平板方法檢測到活細(xì)胞和/或菌落形成單位。此類常規(guī)平板方法在微生物學(xué)書籍James Monroe Jay, Martin J. Loessner, DavidA.Golden. 2005. Modern food microbiology.第七版，Springer Science, New York,N. Y.第790頁中概述。一般而言，可以如下顯示活細(xì)胞的不存在在不同濃度的細(xì)菌制備物(‘非復(fù)制型’樣品)并且在適宜條件(有氧和/或厭氧氣氛持續(xù)至少24小時)下培養(yǎng)后，瓊脂平板上無可見到的菌落或液體生長培養(yǎng)基中濁度不增加。為本發(fā)明的目的，將益生菌定義為“有益影響宿主健康或福利的微生物細(xì)胞制品或微生物細(xì)胞組分”(Salminen S, Ouwehand A. Benno Y.等人,“益生菌應(yīng)當(dāng)如何定義它們(Probiotics :how should they be defined)，，Trends Food Sci. Technol. 1999 10107-10)。使用非復(fù)制型益生微生物的可能性提供了幾種優(yōu)勢。在免疫嚴(yán)重受損的兒童中，活益生菌的使用可能在異常情況下因發(fā)生菌血癥的潛在風(fēng)險而受限?？梢院翢o問題地使用非復(fù)制型益生菌。另外，非復(fù)制型益生微生物的提供允許熱重構(gòu)(hot reconstitution),同時保留健康益處。本發(fā)明的組合物以足夠至少部分地產(chǎn)生健康益處的量包含益生微生物和/或非復(fù)制型益生微生物。將足夠?qū)崿F(xiàn)這一點(diǎn)的量定義為“治療有效量”。有效用于此目的的量將取決于本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的多種因素，如此兒童的重量和總體健康狀況，并且取決于食物基質(zhì)的作用。在預(yù)防性應(yīng)用中，將本發(fā)明的組合物以這樣的量施用至易患某病癥或具有該病癥風(fēng)險的消費(fèi)者，所述的量足夠至少部分地降低發(fā)生 該病癥的風(fēng)險。將這種量定義為“預(yù)防有效量”。再次地，精確的量取決于多種因素，如所述兒童的健康狀況和重量，并且取決于食物基質(zhì)的作用。本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠適宜地調(diào)節(jié)治療有效量和/或預(yù)防有效量。本發(fā)明的組合物以治療有效量和/或以預(yù)防有效量含有益生微生物和/或非復(fù)制型益生微生物。一般而言，治療有效量和/或預(yù)防有效量處于每日劑量約0. 005mg-1000mg益生微生物和/或非復(fù)制型益生微生物的范圍內(nèi)。就數(shù)字量而言，“短時高溫”處理的非復(fù)制型微生物可以在該組合物中以與IO4和IO12等價cfu/g的干組合物之間相對應(yīng)的量存在。明顯地，非復(fù)制型微生物不形成菌落，因而，該術(shù)語應(yīng)理解從IO4和1012cfu/g復(fù)制型細(xì)菌中獲得非復(fù)制型微生物的量。這包括滅活的、無活力的或死的或作為片段如DNA或者細(xì)胞壁物質(zhì)或細(xì)胞質(zhì)復(fù)合物存在的微生物。換而言之，組合物含有的微生物的量就這個量的微生物的菌落形成能力(cfu)而言進(jìn)行表述，如同全部微生物是活的那樣，而無論它們實(shí)際上是否不復(fù)制，如是滅活的或死的、片段化的或這些狀態(tài)中任意者或全部的混合體。優(yōu)選地，非復(fù)制型微生物以等同于IO4至109cfu/g干組合物之間的量、甚至更優(yōu)選地以等同于IO5至109cfu/g干組合物之間的量存在。可以通過本領(lǐng)域已知的任意方法使得益生菌不復(fù)制?，F(xiàn)在可用的使益生菌株不復(fù)制的技術(shù)通常是熱處理、Y-輻射、UV線或使用化學(xué)試劑(福爾馬林、多聚甲醛)。將優(yōu)選使用在食品工業(yè)中工業(yè)條件下相對容易應(yīng)用的技術(shù)來使益生菌不復(fù)制。如今市場上含有益生菌的大部分產(chǎn)品在其生產(chǎn)期間經(jīng)熱處理。因此，將便利的是，能夠隨同產(chǎn)生的產(chǎn)品一起或至少以相似方式熱處理益生菌，同時益生菌保留或改善其對消費(fèi)者而言的有益特征或甚至獲得新的有益特征。然而，通過熱處理滅活益生微生物通常在文獻(xiàn)中與至少部分喪失益生活性有關(guān)。本發(fā)明人現(xiàn)在已經(jīng)出人意料地發(fā)現(xiàn)，使得益生微生物不復(fù)制，例如通過熱處理，沒有導(dǎo)致益生性健康益處喪失，而相反，可以增強(qiáng)現(xiàn)有的健康益處并且甚至產(chǎn)生新的健康益處。因而，本發(fā)明的一個實(shí)施方案是組合物，其中通過熱處理使得非復(fù)制型益生微生物不復(fù)制。這種熱處理可以在至少71. 5°C實(shí)施至少I秒。
可以使用長時熱處理或短時熱處理。如今在工業(yè)規(guī)模，通常優(yōu)選短時熱處理，如UHT樣熱處理。這個類型的熱處理降低細(xì)菌載量，并且減少加工時間，因而減少養(yǎng)分的破壞。本發(fā)明人首次展示，在高溫短時熱處理的益生微生物顯示出抗炎免疫譜，無論其初始特征是什么。具體地，通過這種熱處理，發(fā)展了新的抗炎譜(anti-inflammatoryprofile)或增強(qiáng)現(xiàn)有的抗炎譜。因此，現(xiàn)在可以通過使用與可工業(yè)應(yīng)用的常見熱處理相對應(yīng)的具體參數(shù)產(chǎn)生具有抗炎免疫譜的非復(fù)制型益生微生物，即便活的對應(yīng)菌株不是抗炎菌株。
因而，例如，熱處理可以是在約71. 5_150°C高溫處理約1-120秒。該高溫處理可以是高溫/短時(HTST)處理或超高溫(UHT)處理。益生微生物可以經(jīng)歷在約71. 5_150°C持續(xù)約1-120秒短時的高溫處理。更優(yōu)選地，益生微生物可以經(jīng)歷在約90_140°C (例如90_120°C )持續(xù)約1_30秒短時的高溫處理。這種高溫處理使得微生物至少部分地不復(fù)制。該高溫處理可以在常壓實(shí)施，但是也可以在高壓下實(shí)施。常見的壓力范圍是從I至50巴，優(yōu)選地從1-10巴，至更優(yōu)選從2至5巴。顯然，當(dāng)熱施加時，如果益生菌在呈液態(tài)或固態(tài)的培養(yǎng)基中進(jìn)行熱處理，則這是優(yōu)選。待施加的理想壓力因此將取決于其中提供所述微生物的組合物的性質(zhì)并且取決于所用的溫度。高溫處理可以在約71. 5_150°C、優(yōu)選地約90_120°C、甚至更優(yōu)選約120_140°C的溫度范圍內(nèi)實(shí)施。高溫處理可以實(shí)施持續(xù)約1-120秒、優(yōu)選地約1-30秒、甚至更優(yōu)選約5-15秒的短時。這個給定的時間框指益生微生物經(jīng)歷給定溫度的時間。注意，取決于其中提供所述微生物的組合物的性質(zhì)和量并且取決于所用加熱裝置的架構(gòu)，熱施加的時間可以不同。然而一般而言，通過高溫短時(HTST)處理法、瞬間巴氏殺菌法或超高溫(UHT)處理法處理本發(fā)明的組合物和/或所述微生物。UHT處理法是涉及通過在超過135°C (275 °F )的溫度將某組合物加熱持續(xù)短時約
1-10秒來至少部分滅菌該組合物的超高溫加工或超高熱處理法(二者均縮寫為UHT)，其中所述的溫度是殺死乳內(nèi)細(xì)菌孢子所需要的溫度。例如，以這種方式使用超過135°C的溫度加工乳，導(dǎo)致細(xì)菌載量在能進(jìn)行連續(xù)流操作的必需持續(xù)時間(至2-5秒)內(nèi)降低。存在兩種主要類型的UHT系統(tǒng)直接系統(tǒng)和間接系統(tǒng)。在直接系統(tǒng)中，通過蒸汽注射或蒸汽浸入法處理產(chǎn)品，而在間接系統(tǒng)中，使用板式換熱器、管式換熱器或刮面式換熱器對產(chǎn)品熱處理?？梢栽诋a(chǎn)品制備過程中的任意步驟或多個步驟使用UHT系統(tǒng)的組合。HTST處理法定義如下(高溫/短時)設(shè)計旨在實(shí)現(xiàn)乳中活微生物數(shù)目下降5個對數(shù)或殺死乳中99. 9999%活微生物的巴氏殺菌法。認(rèn)為這足以摧毀幾乎全部酵母、霉菌和常見的腐敗細(xì)菌并且還確保充分摧毀常見的致病性耐熱生物。在HTST法中，將乳加熱至71. 70C (161 0F )持續(xù) 15-20 秒。瞬間巴氏殺菌是對易腐飲料如果汁和菜汁、啤酒和乳產(chǎn)品進(jìn)行熱巴氏殺菌的方法。該方法在灌裝至容器之前進(jìn)行，目的是殺死腐敗微生物，以使產(chǎn)品更安全并延長它們的貨架壽命。液體以受控的連續(xù)流運(yùn)動，同時經(jīng)歷71. 5°C (160 T )至74°C (165 T )的溫度約15至30秒。為本發(fā)明的目的，例如，術(shù)語“短時高溫處理”應(yīng)當(dāng)包括高溫短時(HTST)處理、UHT處理和瞬間巴氏殺菌。由于這種熱處理提供具有改善抗炎譜的非復(fù)制型益生菌，故本發(fā)明的組合物可以用于炎性病癥的預(yù)防或治療中。不特別地限制可以由本發(fā)明的組合物治療或預(yù)防的炎性病癥。例如，這些炎性病癥可以選自由急性炎癥如膿毒病；灼傷；和慢性炎癥，例如炎性腸病，例如，節(jié)段性回腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、隱窩炎(pouchitis);壞死性小腸結(jié)腸炎；皮膚炎癥，如UV或化學(xué)品誘導(dǎo)的皮膚炎癥、濕疹、反應(yīng)性皮膚；腸激惹綜合征；眼部炎癥；變態(tài)反應(yīng)、哮喘及其組合組成的組。
如果使用長時熱處理使益生微生物不復(fù)制，這種熱處理可以是在約70_150°C的溫度范圍實(shí)施約3分鐘-2小時，優(yōu)選地在80-140°C的范圍實(shí)施約5分鐘-40分鐘。盡管現(xiàn)有技術(shù)一般教導(dǎo)就顯現(xiàn)其益生特征而言，因長時熱處理而變得不復(fù)制的細(xì)菌通常比活細(xì)胞更低效，然而，本發(fā)明人能夠顯示，熱處理的益生菌與它們的活對應(yīng)物相比在刺激免疫系統(tǒng)方面是優(yōu)越的。本發(fā)明也涉及包含益生微生物的組合物，其中通過在至少約70°C持續(xù)至少約3分鐘的熱處理使得所述益生微生物不復(fù)制。通過體外免疫譜法證實(shí)非復(fù)制型益生菌的免疫增強(qiáng)作用。所用的體外模型使用來自人外周血單核細(xì)胞(PBMC)的細(xì)胞因子譜并且在本領(lǐng)域被充分接受作為檢驗免疫調(diào)節(jié)復(fù)合物的標(biāo)準(zhǔn)模型(Schultz 等人,2003, Journal of Dairy Research 70,165-173 ;Taylor 等人，2006, Clinical andExperimental Allergy, 36,1227-1235 ;Kekkonen等人，2008, WorldJournalof Gastroenterology,14,1192-1203)。體外PBMC測定法已經(jīng)由幾位作者/幾個研究小組使用來例如根據(jù)益生菌的免疫譜，即根據(jù)它們的抗炎或促炎特征對其分類(Kekkonen等人,2008, World Journal ofGastroenterology, 14,1192-1203)。例如，已經(jīng)顯示這種測定法允許預(yù)測益生候選物在小腸結(jié)腸炎小鼠模型中的抗炎作用(Foligne, B.等人,2007, World J. Gastroenterol. 13 236-243)。另外，常規(guī)地使用該測定法作為臨床試驗中的讀出并且證明它導(dǎo)致與臨床結(jié)果相符的結(jié)果(Schultz 等人，2003, Journal of Dairy Research 70,165-173 ;Taylor 等人，2006, Clinical and Experimental Allergy,36,1227-1235)。變態(tài)反應(yīng)性疾病具有在過去數(shù)十年期間穩(wěn)定上升，并且它們目前被WHO視為流行病。在一般情況下，認(rèn)為變態(tài)反應(yīng)因免疫系統(tǒng)的Thl和Th2應(yīng)答之間不平衡，從而引起強(qiáng)烈偏向Th2介質(zhì)產(chǎn)生所致。因此，可以通過恢復(fù)免疫系統(tǒng)的Thl和Th2群之間的適宜平衡來減輕、下調(diào)或預(yù)防變態(tài)反應(yīng)。這暗示降低Th2應(yīng)答或增強(qiáng)(至少短暫)Thl應(yīng)答的必要性。后者是免疫增強(qiáng)應(yīng)答的特征，經(jīng)常例如伴以較高水平的IFNy、TNF-a和IL-12。(Kekkonen等人，2008, World Journal of Gastroenterology, 14,1192-1203 ；Viljanen M.等人，2005，Allergy,60,494-500)。本發(fā)明的組合物因而允許治療或預(yù)防與受損的免疫防御有關(guān)的病癥。因而，不特別地限制可以由本發(fā)明的組合物治療或預(yù)防的與受損免疫防御關(guān)聯(lián)的炎性病癥。例如，這些病癥可以選自由感染、尤其細(xì)菌性、病毒性、真菌性和/或寄生蟲感染；吞噬細(xì)胞缺損癥；低至重度免疫抑制水平，如受應(yīng)激或免疫抑制藥物、化療法或放療法誘導(dǎo)的那些免疫抑制水平；具有較低免疫活力的免疫系統(tǒng)的天然狀態(tài)如新生兒的那些天然狀態(tài)；變態(tài)反應(yīng)；及其組合組成的組。本發(fā)明中所述的組合物還允許增強(qiáng)兒童對疫苗、尤其對口服疫苗的應(yīng)答。任何量的非復(fù)制型微生物會是有效的。然而，如果至少90%、優(yōu)選地至少95%、更優(yōu)選地至少98%、最優(yōu)選地至少99%、理想地至少99. 9%、最理想地全部益生菌是不復(fù)制的，這通常是優(yōu)選的。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，全部微生物均是不復(fù)制的。因此，在本發(fā)明的組合物中，至少90%、優(yōu)選地至少95%、更優(yōu)選地至少98%、最 優(yōu)選地至少99%、理想地至少99. 9%、最理想地全部的益生菌可以是不復(fù)制的。全部益生微生物可以為本發(fā)明的目的使用。例如，益生微生物可選自雙歧桿菌屬(bifidobacteria)、乳桿菌屬(Iactobacilli)、丙酸桿菌屬(propionibacteria)，或其組合，例如長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)、乳雙歧桿菌(Bifidobacterium lactis)、動物雙歧桿菌(Bifidobacterium animalis)、短雙歧桿菌(Bifidobacterium breve)、嬰兒雙歧桿菌(Bifidobacterium infantis)、青春雙歧桿菌(Bifidobacterium adolescentis)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、干釀乳桿菌(Lactobacillus casei)、類干釀乳桿菌(Lactobacillus paracasei)、唾液乳桿菌(Lactobacillus salivarius)、路氏乳桿菌(Lactobacillus reuteri)、鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)、約漢遜氏乳桿菌(Lactobacillus johnsonii)、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、雙乙酸乳酸乳球菌(Lactococcus diacetylactis)、乳脂乳球菌(Lactococcus cremoris)、保加利亞乳桿菌(Lactobacillus bulgaricus)、瑞士乳桿菌(Lactobacillus helveticus)、德氏乳桿菌(Lactobacillus delbrueckii)、大腸桿菌(Escherichia coli)和 / 或它們的混合物。本發(fā)明的組合物可以，例如，包含選自由長雙歧桿菌NCC 3001、長雙歧桿菌NCC2705、短雙歧桿菌NCC 2950、乳雙歧桿菌NCC 2818、約漢遜氏乳桿菌LaU類干酪乳桿菌NCC2461、鼠李糖乳桿菌NCC 4007、路氏乳桿菌DSM17983、路氏乳桿菌ATCC55730、嗜熱鏈球菌NCC 2019、嗜熱鏈球菌NCC 2059、干酪乳桿菌NCC 4006、嗜酸乳桿菌NCC 3009、干酪乳桿菌ACA-DC 6002 (NCC 1825)、大腸桿菌Nissle、保加利亞乳桿菌NCC 15、乳酸乳球菌NCC 2287或其組合組成的組中的益生微生物。全部這些菌株是在布達(dá)佩斯條約下保藏和/或是市售的。以下菌株已經(jīng)在布達(dá)佩斯條約下保藏長雙歧桿菌NCC 3001 ATCC BAA-999長雙歧桿菌NCC 2705 :CNCM 1-2618短雙歧桿菌NCC 2950 :CNCM 1-3865乳雙歧桿菌NCC 2818 :CNCM 1-3446
類干酪乳桿菌NCC 2461 : CNCM 1-2116鼠李糖乳桿菌NCC 4007 : CGMCC I. 3724嗜熱鏈球菌NCC 2019 :CNCM 1-1422嗜熱鏈球菌NCC 2059 :CNCM 1-4153乳酸乳球菌NCC 2287 : CNCM 1-4154干酪乳桿菌NCC 4006 :CNCM 1-1518干酪乳桿菌NCC 1825 :ACA-DC 6002 嗜酸乳桿菌NCC 3009 :ATCC 700396保加利亞乳桿菌NCC 15 : CNCM 1-1198約漢遜氏乳桿菌LalCNCM 1-1225路氏乳桿菌DSM17983DSM17983路氏乳桿菌ATCC55730ATCC55730大腸桿菌Nissle 1917 : DSM 6601本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解他們可以自由地組合本文中所述發(fā)明的全部特征，而不脫離所公開的本發(fā)明的范圍。本發(fā)明的其他優(yōu)勢和特點(diǎn)從以下實(shí)施例和附圖中顯而易見。圖IA和B顯示以"短時高溫"處理的益生菌的抗炎免疫譜的增強(qiáng)。圖2顯示變得抗炎的非抗炎益生菌株，即以"短時高溫"處理后顯示明顯的體外抗炎免疫譜的非抗炎益生菌株。圖3A和B顯示市售產(chǎn)品中使用的益生菌株，其以"短時高溫"處理后顯示增強(qiáng)的或新的體外抗炎免疫譜。圖4A和B顯示在高溫?zé)崽幚頃r顯示增強(qiáng)的或新的體外抗炎免疫譜的乳品起子菌株(即Lcl起子菌株)。圖5顯示以HTST處理法處理后顯示體外抗炎免疫譜的非抗炎益生菌株。圖6 :對用活形式和熱處理形式(140°C持續(xù)15秒)下的益生菌株和乳品起子菌株產(chǎn)生PBMC數(shù)據(jù)(IL-12p40、IFN-y、TNF-a、IL-10)的主要組分分析。每個點(diǎn)代表由其NCC編號或名稱標(biāo)識的一種活的或熱處理的菌株。圖7顯示活菌株和熱處理菌株(85°C，20分鐘)的IL-12p40/IL_10比。總體而言，與本發(fā)明的"短時高溫"處理(

圖1、2、3、4和5)相反，在85°C持續(xù)20分鐘的熱處理導(dǎo)致IL-12p40/IL-10 比的增加。圖8顯示來自用熱處理細(xì)菌刺激的人PBMC的體外細(xì)胞因子分泌的增強(qiáng)。圖9顯示以鹽水攻擊的OVA致敏小鼠(陰性對照)、以O(shè)VA攻擊的OVA致敏小鼠(陽性對照)和以O(shè)VA攻擊并用熱處理的或活的短雙歧桿菌NCC2950治療的OVA致敏小鼠中觀察到的腹瀉強(qiáng)度百分?jǐn)?shù)。結(jié)果顯示為腹瀉強(qiáng)度百分?jǐn)?shù)(從4個獨(dú)立實(shí)驗計算的均數(shù)土SEM)，而100%腹瀉強(qiáng)度對應(yīng)于(致敏和被過敏原攻擊的)陽性對照組中出現(xiàn)的癥狀。實(shí)施例I :方法學(xué)細(xì)菌制備物由活益生菌對宿主免疫系統(tǒng)遞送的健康益處通常視為具有菌株特異性。在體外誘導(dǎo)高水平IL-IO和/或誘導(dǎo)低水平促炎細(xì)胞因子(PBMC測定法)的益生菌已經(jīng)顯示在體內(nèi)是強(qiáng)力抗炎菌株(Foligne, B.等人，2007, World J. Gastroenterol. 13 :236-243)。使用幾種益生菌株來研究熱處理的益生菌的抗炎特征。這些菌株是長雙歧桿菌NCC 3001、長雙歧桿菌NCC 2705、短雙歧桿菌NCC 2950、乳雙歧桿菌NCC 2818、類干酪乳桿菌NCC 2461、鼠李糖乳桿菌NCC 4007、干酪乳桿菌NCC 4006、嗜酸乳桿菌NCC 3009、干酪乳桿菌ACA-DC 6002 (NCC 1825)和大腸桿菌Nissle。也試驗了包括商業(yè)上用來產(chǎn)生NestleLcl發(fā)酵產(chǎn)品的一些菌株在內(nèi)的幾種起子培養(yǎng)菌株嗜熱鏈球菌NCC 2019、嗜熱鏈球菌NCC 2059、保加利亞乳桿菌NCC 15和乳酸乳球菌NCC 2287。在5至15L生物反應(yīng)器中為每種菌株優(yōu)化的條件下培養(yǎng)細(xì)菌細(xì)胞。全部常見的細(xì)菌生長培養(yǎng)基是可用的。此類培養(yǎng)基是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。當(dāng)調(diào)節(jié)pH至5. 5時，連續(xù)地添加30%堿溶液(NaOH或Ca(OH)2)。當(dāng)充分時，通過用CO2頂空充氣維持厭氧條件。大腸桿菌在標(biāo)準(zhǔn)的有氧條件下培養(yǎng)。
將細(xì)菌細(xì)胞通過離心(5000x g，4°C )收集并且重懸于足夠體積的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中，旨在達(dá)到約109-101(lCfu/ml終濃度。將部分的制備物以15%甘油冷凍在-80°C。另外部分的細(xì)胞通過以下方式作熱處理-超高溫140°C持續(xù)15秒；通過間接蒸汽注射。-高溫短時(HTST):74°C、90°C和120°C持續(xù)15秒，通過間接蒸汽注射-水浴中長時間低溫(85°C，20分鐘)熱處理后，將樣品保持在_80°C冷凍直至使用。細(xì)菌制備物的體外免疫譜評估了活的和熱處理的細(xì)菌制備物的免疫譜(即體外誘導(dǎo)特定細(xì)胞因子從人血細(xì)胞分泌的能力)。人外周血單核細(xì)胞(PBMC)從血液濾器分離。在通過細(xì)胞密度梯度分開后，將單核細(xì)胞收集并且用Hank平衡鹽溶液洗滌兩次。細(xì)胞隨后重懸于補(bǔ)充有10%胎牛血清(Bioconcept,巴黎,法國)、1% L-谷氨酰胺(Sigma)、I %青霉素/鏈霉素(Sigma)和
0.1%慶大霉素(Sigma)的 Iscove 改良 Dulbecco 培養(yǎng)基(MDM5Sigma)中。PBMC(7xl05 個細(xì)胞/孔)隨后與活的和熱處理的細(xì)菌(等同于7xl06cfU/孔)在48孔平板培養(yǎng)36小時。檢驗活細(xì)菌和熱處理細(xì)菌對PBMC的影響，其中所述的PBMC來自分配至2個分別實(shí)驗中的8位個體。在36小時孵育后，將培養(yǎng)平板冷凍并且保存在-20°C直至細(xì)胞因子測量。對活細(xì)菌及其熱處理的對應(yīng)物平行地(即在相同的實(shí)驗中對相同批次的PBMC)實(shí)施細(xì)胞因子譜分析。通過ELISA (R&D DuoSet 人 IL-10，BD OptEIA 人 IL12p40，BDOptEIA 人 TNF a，BDOptEIA人IFN- y )，按照制造商的說明書測定36小時孵育后細(xì)胞因子(IFN- y、IL_12p40、TNF-a和IL-10)在細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的水平。IFN-Y、IL_12p40和TNF-a是促炎細(xì)胞因子，而IL-10是強(qiáng)力抗炎介質(zhì)。結(jié)果表述為4位獨(dú)立供體的均值(pg/ml)+/-SEM并且是各自用4位供體進(jìn)行的2個獨(dú)立實(shí)驗的代表。對每種菌株，將IL-12p40/IL-10比率算作體內(nèi)抗炎作用的預(yù)測值(Foligne, B.等人,2007, World J. Gastroenterol. 13 :236-243)。通過ELISA對每種菌株測定(見上文)的細(xì)胞因子數(shù)字值(pg/ml)轉(zhuǎn)移入BioNumerics v5. 10 軟件(Applied Maths, Sint-Martens-Latem,比利時)。對這組數(shù)據(jù)開展主要組分分析法(PCA，量度技術(shù))。此分析包括從數(shù)值減去平均值和數(shù)值除以方差。
結(jié)果通過超高溫(UHT)/高溫短時(HTST)樣處理法產(chǎn)生的抗炎譜處于研究下的益生菌株經(jīng)歷一系列熱處理(超高溫(UHT)、高溫短時(HTST)和85°C持續(xù)20分鐘)，并且將它們的免疫譜與體外活細(xì)胞的免疫譜比較。與人PBMC —起培養(yǎng)時，活微生物(益生菌和/或乳品起子培養(yǎng)物)誘導(dǎo)不同水平的細(xì)胞因子產(chǎn)生(圖1、2、3、4和5)。對這些微生物的熱處理以溫度依賴性方式改變了由PBMC產(chǎn)生的細(xì)胞因子的水平。“短時高溫”處理(120°C或140°C持續(xù)15秒)產(chǎn)生具有抗炎免疫譜的非復(fù)制型細(xì)菌(圖I、
2、3和4)。實(shí)際上，UHT樣處理的菌株(140°C，15秒)誘導(dǎo)較少的促炎細(xì)胞因子(TNF-a、IFN- y、IL-12p40)，同時維持或誘導(dǎo)額外的IL-10產(chǎn)生(與活的對應(yīng)物相比)。與活細(xì)胞相t匕，得到的IL-12p40/IL-10比對于任何UHT樣處理的菌株是較低的(圖1、2、3和4)。這個觀察結(jié)果也對經(jīng)HTST樣處理(即經(jīng)歷120°C持續(xù)15秒(圖1、2、3和4)或74°C和90°C持 續(xù)15秒(圖5))的細(xì)菌有效。熱處理(UHT樣或HTST樣處理)對益生菌株(圖1、2、3和5)和乳品起子培養(yǎng)物(圖4)的體外免疫譜產(chǎn)生相似的影響。針對用活的和熱處理(140°C，15秒)的益生菌株及乳品起子菌株產(chǎn)生的PBMC數(shù)據(jù)的主要組分分析揭示，活菌株均沿X軸展開，這說明菌株顯示非常不同的體外免疫譜，從促炎細(xì)胞因子的低級(左側(cè))至高級(右偵U誘導(dǎo)物。熱處理的菌株群集在該圖的左側(cè)，從而表明熱處理的菌株誘導(dǎo)的促炎細(xì)胞因子少得多(圖6)。相反，在85°C熱處理20分鐘的細(xì)菌比活細(xì)胞誘導(dǎo)更多的促炎細(xì)胞因子和更少的IL-10，從而產(chǎn)生較高的IL-12p40/IL-10比(圖7)。通過UHT樣和HTST樣處理法增強(qiáng)或產(chǎn)生抗炎譜UHT和HTST處理的菌株顯示抗炎譜，無論它們各自的初始免疫譜(活細(xì)胞)是什么。已知在體內(nèi)抗炎并且顯示體外抗炎譜的益生菌株(長雙歧桿菌NCC 3001、長雙歧桿菌NCC 2705、短雙歧桿菌NCC 2950、乳雙歧桿菌NCC 2818)在“短時高溫”處理后顯示增強(qiáng)的體外抗炎譜。如圖I中所示，UHT樣處理的雙歧桿菌菌株的IL-12p40/IL-10比低于來自活對應(yīng)物的IL-12p40/IL-10比，因而顯示UHT樣處理的樣品的改善抗炎譜。更令人震驚地，還證實(shí)非抗炎性活菌株因UHT樣和HTST樣處理產(chǎn)生抗炎譜?；畹氖罄钐侨闂U菌NCC 4007和類干酪乳桿菌NCC 2461均顯示高的體外IL-12p40/IL-10比(圖2和5)。這兩種活菌株顯示對小鼠中TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎無保護(hù)性。由鼠李糖乳桿菌NCC 4007和類干酪乳桿菌NCC2461誘導(dǎo)的IL-12p40/IL-10比在“短時高溫”處理(UHT或HTST)后大幅度下降，達(dá)到與用雙歧桿菌菌株獲得的那些水平一樣低的水平。這些低IL-12p40/IL-10比歸因于低水平的IL-12p40產(chǎn)生，連同IL-10分泌無變化(鼠李糖乳桿菌NCC 4007)或大幅度誘導(dǎo)IL-10分泌(類干酪乳桿菌NCC2461)(圖2)。作為結(jié)果-可以通過UHT樣和HTST樣熱處理增強(qiáng)活微生物的抗炎譜(例如長雙歧桿菌NCC2705、長雙歧桿菌NCC 3001、短雙歧桿菌NCC 2950、乳雙歧桿菌NCC 2818)。-可以通過UHT樣和HTST樣熱處理從非抗炎性活微生物(例如鼠李糖乳桿菌NCC4007、類干酪乳桿菌NCC 2461、乳品起子嗜熱鏈球菌NCC2019)產(chǎn)生抗炎譜。-也展示了從市售產(chǎn)品分離的菌株(包括益生性大腸桿菌菌株)的抗炎譜(圖3A和B)。UHT/HTST樣處理對全部受檢益生菌和乳品起子(例如乳桿菌屬、雙歧桿菌屬和鏈球菌屬)的影響是相似的。將UHT/HTST樣處理應(yīng)用于顯示不同體外免疫譜的幾種乳桿菌屬、雙歧桿菌屬和鏈球菌屬的菌株。全部菌株在UHT/HTST樣處理后比其活的對應(yīng)物誘導(dǎo)更少的促炎細(xì)胞因子(圖1，2，3，4，5和6)，表明UHT/HTST樣處理對得到的非復(fù)制細(xì)菌的免疫特征的影響可以推廣至全部益生菌，特別地至乳桿菌屬和雙歧桿菌屬和特定大腸桿菌菌株，并且推廣至全部乳品起子培養(yǎng)物，特別地至鏈球菌屬、乳球菌屬和乳桿菌屬。實(shí)施例2:方法學(xué)細(xì)菌制備物使用5種益生菌株來研究非復(fù)制型益生菌的免疫增強(qiáng)特征3種雙歧桿菌(長雙歧桿菌NCC3001、乳雙歧桿菌NCC2818、短雙歧桿菌NCC2950)和2種乳桿菌(類干酪乳桿菌 NCC2461、鼠李糖乳桿菌NCC4007)。細(xì)菌細(xì)胞以分批發(fā)酵法在37°C于MRS上培育16-18小時，同時不調(diào)控pH。將細(xì)菌細(xì)胞離心下來(5000x g，4°C)并且重懸于磷酸鹽緩沖鹽水中，隨后稀釋于鹽水中，以達(dá)到約10E10Cfu/ml的終濃度。將長雙歧桿菌NCC3001、乳雙歧桿菌NCC2818、類干酪乳桿菌NCC2461、鼠李糖乳桿菌NCC4007在85°C于水浴中熱處理20分鐘。短雙歧桿菌NCC2950在90°C于水浴中熱處理30分鐘。將熱處理的細(xì)菌懸液分裝并且保持冷凍在_80°C直至使用。將活細(xì)菌在PBS-甘油15%中貯存在_80°C直至使用。細(xì)菌制備物的體外免疫譜評估了活的和熱處理的細(xì)菌制備物的免疫譜(即體外誘導(dǎo)特定細(xì)胞因子從人血細(xì)胞分泌的能力)。人外周血單核細(xì)胞(PBMC)從血液濾器分離。在通過細(xì)胞密度梯度分開后，將單核細(xì)胞收集并且用Hank平衡鹽溶液洗滌兩次。細(xì)胞隨后重懸于補(bǔ)充有10%胎牛血清(Bioconcept,巴黎,法國)、1% L-谷氨酰胺(Sigma)、I %青霉素/鏈霉素(Sigma)和
0.1%慶大霉素(Sigma)的 Iscove 改良 Dulbecco 培養(yǎng)基(MDM5Sigma)中。PBMC(7xl05 個細(xì)胞/孔)隨后與活的和熱處理的細(xì)菌(等同于7xl06cfU/孔)在48孔平板培養(yǎng)36小時。檢驗活細(xì)菌和熱處理細(xì)菌對PBMC的影響，其中所述的PBMC來自分配至2個獨(dú)立實(shí)驗中的8位個體。在36小時孵育后，將培養(yǎng)平板冷凍并且保存在-20°C直至細(xì)胞因子測量。對活細(xì)菌及其熱處理的對應(yīng)物平行地(即在相同的實(shí)驗中對相同批次的PBMC)實(shí)施細(xì)胞因子譜分析。通過ELISA (R&D DuoSet 人 IL-10，BD OptEIA 人 IL12p40，BDOptEIA 人 TNF，BDOptEIA人IFN- y )，按照制造商的說明書測定36小時孵育后細(xì)胞因子(IFN- y、IL_12p40、TNF-a和IL-10)在細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的水平。IFN-Y、IL_12p40和TNF-a是促炎細(xì)胞因子，而IL-IO是強(qiáng)力抗炎介質(zhì)。結(jié)果表述為4位獨(dú)立供體的均值(pg/ml)+/-SEM并且是各自用4位供體進(jìn)行的2個獨(dú)立實(shí)驗的代表。活的和熱處理的短雙歧桿菌NCC2950在預(yù)防變態(tài)反應(yīng)性腹瀉中的體內(nèi)作用。使用變態(tài)反應(yīng)性腹瀉小鼠模型來檢驗短雙歧桿菌NCC2950的Thl促進(jìn)作用(Brandt E. B等人.JCI 2003 ；112(11) =1666-1667)。致敏(間隔14日2次腹膜內(nèi)注射卵清蛋白(OVA)和硫酸鋁鉀；第0和第14日)后，雄性Balb/c小鼠以口服方式用OVA攻擊6次(第27、29、32、34、36、39日)，導(dǎo)致臨時臨床癥狀(腹瀉)和免疫參數(shù)(總IgE血漿濃度、OVA特異性IgE、小鼠肥大細(xì)胞蛋白酶I即MMCP-1)的變化。通過管飼法在OVA致敏之前4日(第-3、-2、-1、0日和第11、12、13和14日)和攻擊期間(第23至39日)施用活短雙歧桿菌NCC2950或在90°C熱處理30分鐘的短雙歧桿菌NCC2950。使用約IO9菌落形成單位(Cfu)或等價cfu/小鼠的日細(xì)菌劑量。益果熱處理后‘促炎’細(xì)胞因子分泌的誘導(dǎo)體外評估了熱處理的細(xì)菌菌株刺激人外周血單核細(xì)胞(PBMC)分泌細(xì)胞因子的能力。將基于熱處理細(xì)菌刺激PBMC時的4種細(xì)胞因子的免疫譜與相同體外測定法中由活細(xì)菌細(xì)胞誘導(dǎo)的4種細(xì)胞因子的免疫譜比較。將熱處理的制備物鋪板并且評估任何活計數(shù)的不存在。鋪板后，熱處理的細(xì)菌制備物不產(chǎn)生菌落。 與人PBMC—起培養(yǎng)時，活益生菌誘導(dǎo)不同且菌株依賴性水平的細(xì)胞因子產(chǎn)生(圖8)。與其活的對應(yīng)物相比，對益生菌的熱處理改變了由PBMC產(chǎn)生的細(xì)胞因子的水平。熱處理的細(xì)菌比其活的對應(yīng)物誘導(dǎo)更多的促炎細(xì)胞因子(TNF-a、IFN-Y、IL-12p40)。相反，與活細(xì)胞相比，熱處理的細(xì)菌誘導(dǎo)相似或更低的量的IL-10 (圖8)。這些數(shù)據(jù)顯示熱處理的細(xì)菌比其活的對應(yīng)物更能夠刺激免疫系統(tǒng)并且因此更能夠增強(qiáng)削弱的免疫防御。換而言之，體外數(shù)據(jù)顯示細(xì)菌菌株在熱處理后增強(qiáng)的免疫增強(qiáng)作用。為了展示熱處理的短雙歧桿菌NCC2950 (與活細(xì)胞相比)對免疫系統(tǒng)的增強(qiáng)作用，在變態(tài)反應(yīng)性腹瀉動物模型中測試活的和熱處理的短雙歧桿菌NCC2950 (菌株A)。與陽性對照組相比，腹瀉的強(qiáng)度在用熱處理的短雙歧桿菌NCC2950治療后顯著且一致地減低(41.1% ±4. 8)，而腹瀉的強(qiáng)度在用活短雙歧桿菌NCC2950治療后僅降低20±28. 3%。這些結(jié)果表明熱處理的短雙歧桿菌NCC2950比其活的對應(yīng)物顯示出增強(qiáng)的抗變態(tài)反應(yīng)性腹瀉保護(hù)作用(圖9)。因此，顯示在熱處理后改善了益生菌增強(qiáng)免疫防御的能力。其他實(shí)施例可以制備以下的全乳組合物將144g的干組合物與900mL水混合以獲得即飲型制品。
權(quán)利要求
1.干全乳組合物，其包含益生微生物以及選自豌豆殼纖維、果寡醣、菊粉和它們的組合的益生元以施用至年齡從12個月開始的幼孩。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物，其包含20-27g/100g干重的量的蛋白質(zhì)源、49-52g/100g干重的量的碳水化合物源和19-24g/100g干重的量的脂質(zhì)源。
3.根據(jù)前述權(quán)利要求之一的組合物，其包含比率在10: I至6 : I范圍內(nèi)的亞油酸和a -亞油酸。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求之一的組合物，其中包含約30-36g干組合物和200至250mL水的一份次早餐施用一次，并且當(dāng)日期間施用第二次。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求之一的組合物，其中益生微生物包含非復(fù)制型益生微生物。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求之一的組合物，其以對應(yīng)于每份次約IO6至IO12Cfu的量包含益生微生物。
7.根據(jù)權(quán)利要求5-6任一項所述的組合物，其中通過熱處理、優(yōu)選地通過在至少71. 5°C高溫處理至少I秒使得非復(fù)制型益生微生物不復(fù)制。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的組合物，其中熱處理是在約71.5-150°C高溫處理約1-120秒，并且優(yōu)選地是高溫/短時(HTST)處理或超高溫(UHT)處理。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，用于預(yù)防或治療炎性病癥。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的組合物，其中熱處理是在約70-150°C的溫度范圍實(shí)施約3分鐘-2小時，優(yōu)選地在80-140°C的范圍實(shí)施約5分鐘-40分鐘。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的組合物，用于預(yù)防或治療與受損的免疫防御有關(guān)的病癥。
12.根據(jù)前述權(quán)利要求之一的組合物，其中至少90%、優(yōu)選地至少95%、更優(yōu)選地至少98%、最優(yōu)選地至少99%、理想地至少99. 9%、最理想地全部益生菌是不復(fù)制的。
13.根據(jù)前述權(quán)利要求之一的組合物，其中益生微生物選自雙歧桿菌屬(bifidobacteria)、乳桿菌屬(Iactobacilli)、丙酸桿菌屬(propionibacteria)，或它們的組合，例如長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)、乳雙歧桿菌(Bifidobacteriumlactis)、動物雙歧桿菌(Bifidobacterium animalis)、短雙歧桿菌(Bifidobacteriumbreve)、嬰兒雙歧桿菌(Bifidobacterium infantis)、青春雙歧桿菌(Bifidobacteriumadolescentis)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、干酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)、類干釀乳桿菌(Lactobacillus paracasei)、唾液乳桿菌(Lactobacillussalivarius)、路氏乳桿菌(Lactobacillus reuteri)、鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)、約漢遜氏乳桿菌(Lactobacillus johnsonii)、植物乳桿菌(Lactobacillusp I ant arum)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)、嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)、乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)、雙乙酸乳酸乳球菌(Lactococcus diacetylactis)、乳脂乳球菌(Lactococcuscremoris)、保加利亞乳桿菌(Lactobacillus bulgaricus)、瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)、德氏乳桿菌(Lactobacillus delbrueckii)、大腸桿菌(Escherichia coli)和/或它們的混合物。
14.根據(jù)前述權(quán)利要求之一的組合物，其中益生微生物選自長雙歧桿菌NCC3001、長雙歧桿菌NCC 2705、短雙歧桿菌NCC 2950、乳雙歧桿菌NCC 2818、約漢遜氏乳桿菌LaU類干酪乳桿菌NCC 2461、鼠李糖乳桿菌NCC 4007、路氏乳桿菌DSM17983、路氏乳桿菌ATCC55730、嗜熱鏈球菌NCC 2019、嗜熱鏈球菌NCC 2059、干酪乳桿菌NCC 4006、嗜酸乳桿菌NCC 3009、干酪乳桿菌ACA-DC 6002 (NCC 1825)、大腸桿菌Nissle、保加利亞乳桿菌NCC15、乳酸乳球菌NCC 2287或它們的組合。
15.根據(jù)前述權(quán)利要求之一的組合物，其日劑量含有約0. 005mg-1000mg非復(fù)制型微生物。
全文摘要
本發(fā)明涉及幼孩營養(yǎng)領(lǐng)域。特別地，本發(fā)明涉及包含益生微生物以施用至年齡大于12個月幼孩的干全乳制品。這些益生微生物可以是非復(fù)制型益生微生物，例如有生物活性的熱處理的益生微生物。
文檔編號A61P37/04GK102811725SQ201080031170
公開日2012年12月5日 申請日期2010年5月11日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月11日
發(fā)明者A·梅賽尼爾, S·努特恩, G·普里烏特 申請人:雀巢產(chǎn)品技術(shù)援助有限公司