專利名稱：陰道上皮界面潤滑的治療調(diào)節(jié)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及陰道健康的管理。具體地，本發(fā)明涉及藥物組合物及其使用方法，包括用于治療與陰道表面(例如，上皮)處受損的界面潤滑有關(guān)的疾病。
背景技術(shù)：
蛋白聚糖4 iprg4)基因編碼稱作巨核細(xì)胞刺激因子(MSF)、潤滑素(Iubricin) 和表面區(qū)蛋白(SZP)的高度糖基化的蛋白。潤滑素最先從滑液分離出，并在體外表現(xiàn)出與在軟骨-玻璃界面處的滑液類似的潤滑能力。后來將潤滑素鑒別為滑液成纖維細(xì)胞的產(chǎn)物。還已經(jīng)描述了在由外顯子6編碼的大粘蛋白(如940個(gè)氨基酸的結(jié)構(gòu)域)內(nèi)的0-連接的β (l-3)Gal-GalNAC寡糖。SZP最早定位在來自表面區(qū)的外植塊軟骨的表面處，并從條件培養(yǎng)基中分離出。這些分子(以及它們的0-連接的蛋白聚糖)在本文中共同地稱作PRG4。 已經(jīng)證實(shí)，PRG4存在于滑膜、腱和半月板的表面處，但是尚未描述使用PRG4作為陰道潤滑劑。

發(fā)明內(nèi)容
在不同的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了藥物組合物及其使用方法，它們用于管理陰道潤滑，包括界面潤滑劑分子在陰道上皮處的治療性補(bǔ)充和富集。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中描述了下述觀察結(jié)果，即PRG4 mRNA在小鼠陰道和子宮頸上皮細(xì)胞中表達(dá)，指示PRG4 蛋白由這些組織分泌到陰道上皮上。圖1解釋了人PRG4 mRNA表達(dá)，如在陰道和子宮頸組織中擴(kuò)增以后進(jìn)行的瓊脂糖電泳所證實(shí)的。通過測序，證實(shí)了 mRNA。圖2解釋了在各種小鼠上皮細(xì)胞中的PRG4 mRNA表達(dá)。使用瓊脂糖凝膠電泳，篩選擴(kuò)增的樣品中PRG4產(chǎn)物的存在。垂直泳道6-8含有擴(kuò)增的、驗(yàn)證過的來自3個(gè)不同小鼠的陰道組織的PRG4 mRNA。在本發(fā)明的某些實(shí)例中描述了下述觀察結(jié)果，即PRG4蛋白對陰道上皮發(fā)揮的作用是，保護(hù)陰道腔免于在性交、分娩和其它不希望的情況下產(chǎn)生的大剪切力。此外，在本發(fā)明的某些實(shí)例中描述了下述觀察結(jié)果，即當(dāng)用于潤滑陰道上皮時(shí)，在軟骨中發(fā)現(xiàn)的界面潤滑的分子機(jī)理(包括分泌的組分在動態(tài)負(fù)載存在下介導(dǎo)剪應(yīng)力的能力)可能是有用的。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了藥物組合物，其適合將制劑局部施用于患者的陰道表面，所述制劑含有治療量的治療上有效濃度的PRG4蛋白(包括例如，PRG4 0-連接的蛋白聚糖)，所述PRG4蛋白懸浮于凝膠、滲透平衡的鹽水溶液、多相乳化系(multiphasic emuslification)中，或被包裹在緩釋裝置內(nèi)。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物另外包含治療上有效濃度的一種或更多種額外的治療劑，例如，當(dāng)在陰道中施用時(shí)提供陰道益處和/或具有效能的藥劑。在某些實(shí)施方案中，額外的藥劑包括、但不限于雄激素或雄激素類似物(其中所述雄激素或雄激素類似物是17 α -甲基-17 β -羥基-2-氧雜-5 α -雄烷_3_酮衍生物)、雌激素或雌激素類似物、氮-取代的雄激素、氮-取代的雌激素、睪酮衍生物、雌激素衍生物、4，5 α - 二氫睪酮衍生物、19-去甲睪酮衍生物、含有環(huán)A不飽和的17 β -羥基-5 α -雄烷衍生物，或來自包含具有罕見結(jié)構(gòu)特征的雄激素化合物的雄激素結(jié)構(gòu)亞類。或者，所述制劑含有選擇性的雄激素受體調(diào)節(jié)劑(SARM)化合物，它們是具有雄激素受體的非類固醇類配體的體內(nèi)雄激素和合成代謝活性的芳基-丙酰胺(例如S-3- (4-乙?；被?苯氧基)-2-羥基-2-甲基-N- (4-硝基-3-三氟甲基-苯基)-丙酰胺[S-4]，或S-3- (4-氟苯氧基)_2_羥基-2-甲基-Ν-(4-硝基-3-三氟甲基-苯基)_丙酰胺[S-1])，雙環(huán)乙內(nèi)酰脲、喹啉和四氫喹啉類似物，選擇性的雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERM)化合物(它們是雌激素受體的非類固醇類配體， 它們能誘導(dǎo)所述受體的許多構(gòu)象變化，并從而引起多種不同的生物學(xué)特性)，具有不同受體親和力的雌激素拮抗劑(類固醇類、非類固醇類)，芳香酶抑制劑，抗蛋白酶，促炎細(xì)胞因子拮抗劑(例如抗-TNF α抗體、可溶的TNF α受體、IL-I受體拮抗劑)，細(xì)胞因子釋放抑制劑，NF- κΒ抑制劑，抗炎細(xì)胞因子(例如TGF-β)，其它抗炎劑(例如環(huán)孢菌素Α、ω 3和 6脂肪酸)或蛋白酶體抑制劑。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物另外包含治療上有效濃度的一種或更多種額外的治療劑，包括但不限于，透明質(zhì)酸鈉、透明質(zhì)酸和磷脂。示例性的磷脂包括、但不限于，L- α - 二棕櫚酰磷脂酰膽堿、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺和鞘磷脂。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物另外包含治療上有效濃度的促進(jìn)上皮生長和適當(dāng)形態(tài)學(xué)的化合物，包括雌激素、孕酮、濾泡刺激激素、黃體化激素或促進(jìn)上皮生長的其它分子。本發(fā)明提供了治療陰道潤滑缺乏或與其有關(guān)的癥狀的方法。這樣的方法包括，將本發(fā)明的藥物組合物局部地施用于有需要的患者的陰道表面。陰道潤滑缺乏的癥狀包括， 陰道干燥、陰道瘙癢或灼熱感、性交疼痛和性交后輕微陰道出血。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明另外提供了用于解決和治療與不利的或缺乏的陰道潤滑有關(guān)的病癥的方法。示例性的病癥包括但不限于陰道萎縮、性交困難、舍格倫綜合征、絕經(jīng)、雄激素缺乏、雌激素缺乏、雌激素替代治療、變態(tài)反應(yīng)、慢性炎癥、絕經(jīng)、過早絕經(jīng)、化療、 人乳喂養(yǎng)、絕經(jīng)前手術(shù)切除卵巢、生殖器硬化性苔蘚(genital lichen sclerosis)、外陰痛、細(xì)菌性陰道病、皰疹、念珠菌病(Candida)、銀屑病、接觸性皮炎、濕疣、用藥和老化的副作用。本發(fā)明提供了增加性交過程中的界面潤滑的方法，所述方法包括，使界面潤滑劑分子附著在避孕用具表面上和/或在可植入的洗脫裝置內(nèi)，使用補(bǔ)充來補(bǔ)充在摩損過程中界面潤滑；例如，在存在PRG4-包被的避孕用具表面的情況下，補(bǔ)充PRG4和/或透明質(zhì)酸。在有些實(shí)施方案中，所述治療性組合物包含磷酸鹽緩沖的鹽水、透明質(zhì)酸、透明質(zhì)酸鈉或它們的組合。本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)從下面的其優(yōu)選實(shí)施方案的描述和權(quán)利要求書中顯而易見。通過引用并入
在本申請中提及的所有出版物和專利申請都為了引用的目的通過引用并入。


在所附權(quán)利要求書中詳細(xì)闡述了本發(fā)明的新穎的特征。參考下面的詳細(xì)描述和其附圖，可以更好地理解本發(fā)明的特征和優(yōu)點(diǎn)，所述詳細(xì)描述闡述了在其中使用本發(fā)明的原理的例證性實(shí)施方案，在附圖中
圖1解釋了人PRG4 mRNA表達(dá)，如在陰道和子宮頸組織中擴(kuò)增以后進(jìn)行的瓊脂糖電泳所證實(shí)的。通過測序，證實(shí)了 mRNA。圖2解釋了在各種小鼠上皮細(xì)胞中的PRG4 mRNA表達(dá)。使用瓊脂糖凝膠電泳，篩選擴(kuò)增的樣品中PRG4產(chǎn)物的存在。垂直泳道6-8含有擴(kuò)增的、驗(yàn)證過的來自3個(gè)不同小鼠的陰道組織的PRG4 mRNA。圖3解釋了 PRG4的氨基酸序列以及用于PRG4 mRNA的PCR擴(kuò)增的核酸弓丨物序列。
具體實(shí)施例方式盡管本文已經(jīng)證實(shí)和描述了本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方案，本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見，這樣的實(shí)施方案僅作為實(shí)施例而提供。本領(lǐng)域技術(shù)人員現(xiàn)在可以做出許多變體、變化和置換，而不脫離本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)理解，本文所述的本發(fā)明的實(shí)施方案的各種替代方案可以用于實(shí)踐本發(fā)明。下面的權(quán)利要求意在限定本發(fā)明的范圍，并覆蓋在這些權(quán)利要求范圍內(nèi)的方法和結(jié)構(gòu)以及它們的等同方案。通過在人體中造成指屈曲-關(guān)節(jié)病-髖內(nèi)翻-心包炎(CACP)疾病綜合征的突變， 證實(shí)了/ttW的功能重要性。CACP的癥狀是指屈曲、非炎性的關(guān)節(jié)病和肥大性滑膜炎，并伴有髖內(nèi)翻畸形、心包炎和胸腔積液。另外，在沒有PRG4的小鼠中，觀察到軟骨衰退和隨后的關(guān)節(jié)故障。因此，PRG4表達(dá)是健康的滑膜關(guān)節(jié)的必要組分。PRG4是粘蛋白家族的一個(gè)成員，所述粘蛋白通常富集在上皮襯里中，并提供許多功能，包括潤滑和保護(hù)免于微生物侵入。粘蛋白的功能性質(zhì)通常由專門的糖基化模式和它們通過分子間二硫鍵形成多聚體的能力決定，這二者在慢性疾病(例如囊性纖維化病、哮喘)中變化。從滑液分離出的PRG4的生化表征表現(xiàn)出0-糖基化的分子異質(zhì)性，這似乎介導(dǎo)潤滑性質(zhì)。來自?；旱腜RG4的初步數(shù)據(jù)已經(jīng)揭示除了單體形式以外二硫鍵連接的二聚體的存在，這從在N-和C-端處的保守的半胱氨酸-富集的結(jié)構(gòu)域以及在C-端處的未配對的半胱氨酸預(yù)測出。已經(jīng)將潤滑的物理化學(xué)模式分類為液膜或界面。有效的潤滑模式取決于在關(guān)節(jié)組織上的法向力和切向力、這些表面之間的切向移動的相對速率、和加載和移動的時(shí)間關(guān)系曲線(time history)。摩擦系數(shù)μ提供了一種定量度量，且被定義為切向摩擦力與法向力之比。一類流體-介導(dǎo)的潤滑模式是流體靜力學(xué)。在加載開始時(shí)，且通常持續(xù)延長的時(shí)段， 由于組織的兩相性質(zhì)，間隙液變得受壓；通過漏液機(jī)理，流體也被迫進(jìn)入關(guān)節(jié)表面之間的凹凸體。因此，受壓的間隙液和收集的潤滑劑池可以對承載法向載荷做出巨大貢獻(xiàn)，對剪切力幾乎沒有阻力，促成非常低的μ。另外，加載和/或移動開始時(shí)，擠壓膜，發(fā)生流體動力和彈性流體動力類型的液膜潤滑，并伴有擠壓、移動和變形作用，以驅(qū)動粘性的潤滑劑在相對運(yùn)動的2個(gè)表面之間的間隙中往復(fù)。在有些情況下，液壓/膜與界面潤滑的相關(guān)程度取決于許多因素。當(dāng)潤滑劑膜可以在構(gòu)成的滑動表面(其可以彈性地變形)之間流動時(shí)，發(fā)生彈性流體動力潤滑。壓力、表面粗糙度和相對滑動速率決定了何時(shí)完整的液體潤滑開始破壞，潤滑進(jìn)入新的方式 (regime)。隨著速率進(jìn)一步降低，附著在關(guān)節(jié)表面上的潤滑劑膜開始起作用，并開始混合的潤滑方式。如果速率再進(jìn)一步降低，且僅保留由少數(shù)分子組成的超薄潤滑劑層，發(fā)生界面潤滑。在某些情況下，因此，在影響液膜形成的因素(諸如相對滑動速率和軸向載荷)保持不變的穩(wěn)定滑動的過程中，界面潤滑模式由摩擦系數(shù)(測得的2個(gè)相對運(yùn)動的接觸表面之間的磨擦力與施加的法向力之比)指示。對于體內(nèi)的某些組織，諸如關(guān)節(jié)軟骨，已經(jīng)得出結(jié)論， 即發(fā)生界面潤滑，且得到流體加壓和其它機(jī)理的補(bǔ)充。但是，以前沒有報(bào)道用于陰道內(nèi)界面潤滑的藥劑的應(yīng)用，這是因?yàn)槔?，已?jīng)假定陰道內(nèi)潤滑的主要模式是流體動力和彈性流體動力潤滑。此外，受損的陰道潤滑能力的治療在傳統(tǒng)上集中于粘性流體相潤滑或長鏈聚合物(諸如聚卡波非、聚乙二醇和甘油)的水合作用。在界面潤滑中，載荷由表面-至-表面接觸支撐，且有關(guān)的摩擦性質(zhì)由潤滑劑表面分子決定。在某些情況下，該模式可能是重要的，因?yàn)橄鄬Φ慕M織表面在超過約10%的總面積處接觸，這可能是發(fā)生大多數(shù)摩擦的情況。此外，在有些情況下，隨著加載時(shí)間增加和流體靜力壓分散，與加壓的流體相比，潤滑劑-包被的表面承擔(dān)逐漸增多的載荷部分，結(jié)果， 該模式逐漸變得主要。在某些情況下，界面潤滑會減輕粘著滑動，因此隨著對穩(wěn)定移動和開始移動的阻力的降低而顯現(xiàn)。在有些情況下，后一種情形與在延長的壓迫性負(fù)荷(例如，體內(nèi)坐或站)以后承擔(dān)載荷的表面有關(guān)。關(guān)節(jié)表面的典型磨損型(諸如在軟骨中)也證實(shí)，在有些情況下，界面潤滑對于保護(hù)和維持組織結(jié)構(gòu)而言是重要的。在有些情況下，陰道上皮的載荷受到剪切力(例如，由其控制)，性交對表面細(xì)胞產(chǎn)生較大壓力。此外，在下調(diào)節(jié)陰道內(nèi)潤滑劑的產(chǎn)生或起萎縮上皮細(xì)胞作用的疾病狀態(tài)，常規(guī)的非性交衍生的剪應(yīng)力也可能產(chǎn)生強(qiáng)烈的惡化性的(degradatory)和炎性的風(fēng)險(xiǎn)。嚴(yán)重的萎縮或來自癌癥治療(諸如他莫昔芬，抗組胺)、泌尿道感染的治療、抗抑郁藥或高血壓藥物治療的醫(yī)源性地造成的干燥，也可能造成疼痛的法向水平的剪應(yīng)力，其與性交無關(guān)。在有些情況下，PRG4在關(guān)節(jié)表面之間的流體內(nèi)的積累以及它的自發(fā)地結(jié)合組織基質(zhì)的傾向，促成PRG4的界面潤滑能力。在本文所述的某些實(shí)施方案中，我們披露了蛋白聚糖4 (PRG4)作為界面潤滑劑沿著陰道腔壁作用。在有些實(shí)施方案中，該糖蛋白(PRG4)保護(hù)陰道表面免于摩擦力、細(xì)胞粘附和/或蛋白沉積。各種天然的和重組的潤滑素蛋白和同種型中的任意一種或更多種被用于本文所述的不同實(shí)施方案中。例如，美國專利號5，326，558,6, 433，142,7, 030223 和7，361，738公開了人巨核細(xì)胞刺激因子(MSFs)家族，它們各自并入本文，用于所述公開。美國專利號6，960，562和6，743，774也公開了包含基本上純的MSF片段的潤滑多肽 tribonectin，它們各自并入本文，用于所述公開。在本文的某些實(shí)施方案中提供了用于在有此需要的個(gè)體中治療陰道潤滑缺乏 (例如，陰道界面潤滑缺乏)(或改善陰道潤滑)或與其有關(guān)的癥狀的方法，所述方法包括， 將包含治療有效量的PRG4蛋白的藥物組合物局部地施用于所述個(gè)體的陰道表面。在本文的某些實(shí)施方案中還提供了藥物組合物，其包含在陰道可接受的制劑(陰道可接受的定義為不會造成不適當(dāng)?shù)牟贿m、疼痛、變態(tài)反應(yīng)、炎癥或熱的制劑)中的PRG4蛋白，所述藥物組合物例如用于治療陰道潤滑缺乏(例如，陰道界面潤滑缺乏)(或改善陰道潤滑)。在有些
7實(shí)施方案中，陰道可接受的制劑包含緩和劑、收斂劑、軟化劑或它們的組合。在有些實(shí)施方案中，所述組合物被用于處理或涂布避孕裝置，或經(jīng)由洗脫植入裝置(例如洗脫環(huán))施用。 在有些實(shí)施方案中，如下實(shí)現(xiàn)這樣的施用通過施用洗脫植入裝置，所述植入裝置然后洗脫治療有效量的PRG4。在某些實(shí)施方案中，使用洗脫植入裝置來提供延長的治療。在本文的某些實(shí)施方案中提供了藥物組合物及其使用方法，其用于治療在陰道上皮處的陰道潤滑缺乏(例如陰道界面潤滑缺乏，諸如降低的或不希望的陰道界面潤滑)。本發(fā)明的某些實(shí)施方案的藥物組合物包含與一種或更多種選自下述的藥劑相組合的分離的或純化的PRG4蛋白(例如，懸浮于陰道可接受的平衡鹽溶液中)緩和劑、賦形劑、收斂齊U、 血管收縮劑和軟化劑。在有些實(shí)施方案中，本文提供的任意藥物組合物另外包含在用于局部施用的藥學(xué)上可接受的載體中的一種或更多種選自下述的額外治療劑透明質(zhì)酸鈉、表面活性的磷脂和電解質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了管理陰道潤滑的新方案，其包括，在陰道表面處治療性地補(bǔ)充和富集界面潤滑劑分子。本發(fā)明提供了，PRG4由陰道上皮細(xì)胞合成，然后分泌到陰道表面上。此外，本發(fā)明提供了，PRG4在陰道表面上起類似的作用，并保護(hù)陰道上皮表面免于在性交過程中或在疾病狀態(tài)中產(chǎn)生的較大剪切力，或免于損害它的界面潤滑能力的其它醫(yī)源性因素。需要管理陰道潤滑和保護(hù)陰道上皮免于由本文所述的不希望的病癥產(chǎn)生的剪切力(包括較大剪切力)和不適，作為非限制性實(shí)例，所述病癥包括陰道萎縮、性交困難、 舍格倫綜合征、雄激素缺乏、雌激素缺乏、雌激素替代治療、變態(tài)反應(yīng)、慢性炎癥、絕經(jīng)、過早絕經(jīng)、化療、人乳喂養(yǎng)、絕經(jīng)前手術(shù)切除卵巢、生殖器硬化性苔蘚、外陰痛、細(xì)菌性陰道病、皰疹、念珠菌病、銀屑病、接觸性皮炎、濕疣、用藥和老化的副作用。作為非限制性實(shí)例，陰道潤滑缺乏的癥狀或適應(yīng)癥包括，陰道干燥、陰道瘙癢或灼熱感、性交疼痛和性交后輕微陰道出血。通過任意合適的方法，可以確定陰道潤滑缺乏和與其有關(guān)的癥狀。在有些情況下， 定性地(例如，低潤滑感、不適、陰道干燥、陰道瘙癢或灼熱感、性交疼痛和性交后輕微陰道出血等)或定量地(例如，通過機(jī)械的、生化的、電學(xué)的、光學(xué)的或其它定量測定方法來測量)定義陰道潤滑缺乏和與其有關(guān)的癥狀。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了組合物和方法，它們用于調(diào)整PRG4在陰道表面上的調(diào)節(jié)，以促進(jìn)有利于適當(dāng)界面潤滑的條件。本發(fā)明的某些實(shí)施方案的藥物組合物包含與一種或更多種下述藥劑相組合的分離的或純化的PRG4蛋白以及用于局部施用的藥學(xué)上可接受的載體，所述藥劑包括治療有效量的雄激素或雄激素類似物、雌激素或雌激素類似物、留二醇、選擇性的雄激素受體調(diào)節(jié)劑、選擇性的雌激素受體調(diào)節(jié)劑、雌激素拮抗劑、芳香酶抑制劑、抗蛋白酶、促炎細(xì)胞因子拮抗劑、細(xì)胞因子釋放抑制劑、抗炎細(xì)胞因子(例如 TGF-β)、抗炎藥(例如環(huán)孢菌素Α、ω 3和6脂肪酸)、NF-κΒ抑制劑或蛋白酶體抑制劑、 透明質(zhì)酸、中性或極性脂質(zhì)、脂肪酸、孕酮、濾泡刺激激素、黃體化激素或促進(jìn)上皮生長的其它分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述雄激素或雄激素類似物選自17α-甲基-17β_輕基-2-氧雜-5 α -雄烷-3-酮衍生物、氮-取代的雄激素、睪酮衍生物(即，具有修飾的側(cè)鏈的睪酮中心環(huán)分子，諸如添加或去除氨基、羥基、氫、甲基、氧或其它基團(tuán)以影響穩(wěn)定性或溶解度，以及添加或去除環(huán)結(jié)構(gòu)內(nèi)的飽和度以修飾穩(wěn)定性或溶解度)，是4，5 α - 二氫睪酮衍生物、19-去甲睪酮衍生物、含有環(huán)A不飽和的17 β -羥基-5 α -雄烷衍生物、和包含具有罕見結(jié)構(gòu)特征的雄激素化合物的雄激素結(jié)構(gòu)亞類、和磷酸鹽緩沖的鹽水或載體物質(zhì)諸如用于局部施用的透明質(zhì)酸鹽。適合局部施用的任意藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑都在本發(fā)明的范圍內(nèi)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述選擇性的雄激素受體調(diào)節(jié)劑(SARM)選自具有雄激素受體的非類固醇類配體的體內(nèi)雄激素和合成代謝活性的芳基-丙酰胺(資/i/7S-3-(4-乙?；被?苯氧基)-2-羥基-2-甲基-N- (4-硝基-3-三氟甲基-苯基)-丙酰胺[S-4]或 S-3- (4-氟苯氧基)-2-羥基-2-甲基-N- (4-硝基-3-三氟甲基-苯基)-丙酰胺[S_l])、 雙環(huán)乙內(nèi)酰脲、喹啉和四氫喹啉類似物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，選擇性的雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERM)是雌激素受體的非類固醇類配體，它們能誘導(dǎo)所述受體的許多構(gòu)象變化，并從而引起多種不同的生物學(xué)特性。優(yōu)選地，所述SERM是預(yù)防雌激素-誘發(fā)的陰道表面組織中的炎癥的那些。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述雌激素拮抗劑是具有不同受體親和力的類固醇類或非類固醇類化合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述促炎細(xì)胞因子拮抗劑選自抗-TNF α抗體、可溶的TNF α 受體和IL-I受體拮抗劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述雌激素或孕酮包括可商業(yè)得到的激素替代治療，包括， Estrace、倍美力(Premarin)禾口 Estring0在有些實(shí)施方案中，使用例如陰道可接受的賦形劑，將分離的或純化的PRG4配制成用于陰道施用。在某些實(shí)施方案中，將本文所述的組合物配制成，將有效量的PRG4遞送到有此需要的個(gè)體的陰道。在有些實(shí)施方案中，將所述組合物配制成局部制劑，諸如乳膏劑、油膏劑、溶液、混懸液、糊劑、軟膏劑等。通過任意合適的方式，可以施用這樣的組合物， 諸如通過灌腸劑、灌注法、手、噴霧、栓劑、浸漬裝置、涂藥器等。在不同的實(shí)施方案中，根據(jù)需要，施用于區(qū)域，例如，陰道外表面、陰道內(nèi)表面、或一部分和/或它們的組合。在有些實(shí)施方案中，將PRG4配制成用于長期的或延長的釋放，諸如栓劑，或埋入了延長釋放制劑的塞子ο涂布的避孕用具
在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，提供了包含PRG4或任意PRG4藥物組合物的避孕用具。 另外，本文描述了處理避孕用具的方法，所述方法包括，將PRG4或本文所述的任意PRG4藥物組合物沉積(例如，附著、涂布等)在避孕用具的表面上。用任意合適的方式，將PRG4沉積在避孕用具上，諸如涂布(例如，在合適的組合物中)、通過共價(jià)鍵連接、通過疏水或離子相互作用結(jié)合等。本文還提供了其上面沉積了 PRG4的其它陰道裝置(例如，塞子)。在有些實(shí)施方案中，PRG4在所述裝置上的沉積會降低由這樣的裝置造成的刺激，尤其是在遭受降低的陰道潤滑(例如，降低的陰道界面潤滑)的個(gè)體中。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法另外包括，給避孕用具補(bǔ)充性地局部施用有效量的PRG4或本文所述的任意藥物組合物。在性交過程中提供潤滑的方法包括，向陰道表面、陰莖表面局部施用有效量的 PRG4或本文所述的任意藥物組合物。以任意合適的方式施用PRG4 諸如通過局部施用，用乳膏劑、凝膠、溶液或任意其它可涂抹的組合物來施用。在有些實(shí)施方案中，用可植入裝置，諸如浸漬了 PRG 4或PRG4 組合物的塞子，進(jìn)行施用。在有些實(shí)施方案中，將PRG4與另一種私人潤滑劑或私人潤滑劑組合物(例如，基于石油的潤滑劑，諸如K-Y膠狀物)相組合。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，提供了私人潤滑劑，其通過維持或增加與其接觸的精子的活動能力來增加受孕機(jī)會，包括施用于需要的患者的陰道有效量的PRG4或本文所述的任意藥物組合物。許多可商業(yè)得到的含有諸如甘油等成分的潤滑劑是殺精子的，且阻礙精子活動能力。在有些情況下，PRG4 (陰道液的正常組分)可能在維持精子活動能力和促進(jìn)受孕中起作用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，私人潤滑劑或本文所述的任意其它組合物包含添加劑，例如，釋放一氧化氮的添加劑，諸如天然的一氧化氮前體，諸如氨基酸，例如L-精氨酸、瓜氨酸和天冬氨酸。在將潤滑劑施用于陰道以后，這樣的添加劑可以誘導(dǎo)溫?zé)嵝?yīng)，從而增加陰道感覺。另外，一氧化氮的釋放可以具有維持或增加精子活動能力的效應(yīng)。這樣， 包含釋放一氧化氮的化合物，可以增加受孕機(jī)會或使受孕機(jī)會最大化。在一個(gè)實(shí)施方案中，本文所述的藥物組合物具有2. 4-7. 8,5. 8-7. 4或6. 5-7. 4的 pH。本文使用的術(shù)語“避孕用具(prophylactic) ”表示用于防止懷孕的裝置，包括男用和女用避孕套。本文使用的術(shù)語“PRG4”、“PRG4蛋白”或“蛋白聚糖4”蛋白與術(shù)語“潤滑素”蛋白互換地使用。PRG4在本文中也用于包括術(shù)語巨核細(xì)胞刺激因子(MSF)(其已經(jīng)UCL/HGNC/ HUGO人基因命名法數(shù)據(jù)庫接受)和表面區(qū)蛋白(SZP)。本文使用的PRG4或潤滑素蛋白 (在本文中與潤滑素蛋白聚糖互換地使用)表示任意分離的或純化的天然的或重組的潤滑素蛋白、它們的同系物、功能片段或基序、同種型和/或突變體。在某些實(shí)施方案中，分離的或純化的PRG4蛋白包含人天然的或重組的潤滑素蛋白的氨基酸序列。在其它實(shí)施方案中， 分離的或純化的PRG4蛋白包含由prg4基因外顯子編碼的氨基酸序列，所述外顯子編碼全長PRG4蛋白或同種型的一級結(jié)構(gòu)。蛋白聚糖4 (prg4)基因含有12個(gè)外顯子。本文使用的PRG4蛋白包含由prg4基因外顯子1_12 (更優(yōu)選外顯子6_12，最優(yōu)選外顯子9_12)編碼的氨基酸序列。本文使用的PRG4蛋白包括現(xiàn)在已知的或以后描述的任意PRG4蛋白。在某些實(shí)施方案中，在SEQ ID N0:1中提供了優(yōu)選的PRG4蛋白氨基酸序列。PRG4蛋白的一級氨基酸結(jié)構(gòu)與任意已知的的PRG4蛋白或同種型具有至少60%同源性、優(yōu)選75%同源性、更優(yōu)選85%、 90%、95%、96%、97%、98%、99%或更多的同源性。在某些實(shí)施方案中，優(yōu)選的PRG4蛋白具有50 kDa至400 kDa的平均摩爾質(zhì)量，包含PRG4蛋白的一個(gè)或更多個(gè)生物活性部分或功能片段 (諸如潤滑片段)或其同系物。本文使用的PRG4蛋白包含該蛋白的生物活性部分。本文使用的PRG4蛋白的“生物活性部分”包括蛋白的功能片段，所述功能片段包含與所述蛋白的氨基酸序列充分同源或由其衍生出的氨基酸序列，其包含比全長蛋白更少的氨基酸，并表現(xiàn)出全長蛋白的至少一種活性。通常，生物活性部分包含具有所述蛋白的至少一種活性的功能域或基序。蛋白的生物活性部分可以是多肽，其長度為例如10、25、50、100、200或更多個(gè)氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，PRG4蛋白的生物活性部分可以用作治療劑，其單獨(dú)地或與其它治療劑組合地用于治療不希望的或降低的陰道界面潤滑。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，將PRG4的功能片段、多聚體(例如，二聚體、三聚體、四聚體等)、同系物或直系同源物用于口腔護(hù)理組合物中。PRG4的功能片段和同系物包括在中心的粘蛋白-樣KEPAPTT-重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域內(nèi)具有更少重復(fù)序列的那些、蛋白的糖基化和未糖基化形式、剪接變體、重組形式等。PRG4的潤滑片段表現(xiàn)出人PRG4的潤滑作用的至少20%、 30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或95%，這定性地、機(jī)械地、光學(xué)地、電學(xué)地或通過生化試驗(yàn)來測量。幾種天然的和重組的PRG4或潤滑素蛋白的核酸和氨基酸序列以及PRG4蛋白和各種同種型的表征，公開在例如=Turner等人的美國專利號5，326，558、6，433，142、 7，030，223,7, 361，738 禾口 Jay 等人的美國專利號 6，743，774 和 6，960，562 中。Flannery 等人的美國公開號2007019U68也公開了可用于本發(fā)明中的重組的PRG4或潤滑素分子。用于分離、純化和重組表達(dá)PRG4蛋白的方法是本領(lǐng)域眾所周知的。在某些實(shí)施方案中，所述方法的起點(diǎn)是，使用標(biāo)準(zhǔn)的分子生物學(xué)技術(shù)(諸如PCR或RT-PCR)，克隆和分離編碼PRG4蛋白或同種型的mRNA和cDNA。然后將分離的編碼PRG4蛋白或同種型的cDNA克隆進(jìn)表達(dá)載體中，并在宿主細(xì)胞中進(jìn)一步轉(zhuǎn)化和表達(dá)，用于生產(chǎn)重組PRG4蛋白。本文使用的“重組的”表示在體外合成的或以其它方式操縱的多核苷酸(例如，“重組多核苷酸”)，使用重組多核苷酸在細(xì)胞或其它生物系統(tǒng)中生產(chǎn)基因產(chǎn)物的方法，或由重組多核苷酸編碼的多肽(“重組蛋白”)。“重組的”也包括將具有來自不同來源的不同編碼區(qū)或結(jié)構(gòu)域或啟動子序列的核酸連接進(jìn)表達(dá)盒或載體中，所述表達(dá)盒或載體用于融合蛋白的表達(dá)(例如，誘導(dǎo)型或組成型表達(dá))，所述融合蛋白包含PRG4基因和使用本發(fā)明的引物擴(kuò)增的核酸序列的活性結(jié)構(gòu)域。在某些實(shí)施方案中，編碼PRG4蛋白的核酸可以含有一種或更多種突變、刪除或插入。在這樣的實(shí)施方案中，編碼PRG4蛋白的核酸與編碼野生型PRG4蛋白的核酸具有至少 60%同源性、優(yōu)選75%同源性、更優(yōu)選85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的同源性。本文使用的術(shù)語“cDNA”包括與在細(xì)胞中存在的mRNA分子或可以被諸如逆轉(zhuǎn)錄酶等酶轉(zhuǎn)化成cDNA的或生物體mRNA互補(bǔ)的DNA。在某些實(shí)施方案中，使用本領(lǐng)域眾所周知的RT-PCR方法，從在人角膜或結(jié)膜上皮細(xì)胞中表達(dá)的PRG4 mRNA分離出編碼PRG4蛋白的 cDNA。本文使用的術(shù)語“多核苷酸”、“核酸/核苷酸”和“寡核苷酸”互換地使用，包括任意長度的核苷酸(脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其類似物)的聚合形式。多核苷酸可以具有任意的三維結(jié)構(gòu)，且可以執(zhí)行已知的或未知的任何功能。下面是多核苷酸的非限制性實(shí)例基因或基因片段、外顯子、內(nèi)含子、信使RNA(mRNA)、轉(zhuǎn)移RNA、核糖體RNA、核酶、DNA、 cDNA、基因組DNA、重組多核苷酸、分支的多核苷酸、質(zhì)粒、載體、分離的任意序列的DNA、分離的任意序列的RNA、核酸探針和引物。多核苷酸可以是天然存在的、合成的、重組的或它們的任意組合。多核苷酸可以包含修飾的核苷酸(諸如甲基化的核苷酸)和核苷酸類似物。如果存在的話，可以在聚合物裝配之前或之后，對核苷酸結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾。核苷酸序列中可以夾雜非核苷酸組分。在聚合以后，可以進(jìn)一步修飾多核苷酸，諸如通過綴合標(biāo)記組分。該術(shù)語也包括雙鏈和單鏈分子。除非另外指出或要求，作為多核苷酸的本發(fā)明的任意實(shí)施方案包括雙鏈形式和已知或預(yù)測會組成雙鏈形式的2個(gè)互補(bǔ)單鏈形式中的每一個(gè)。
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本文使用的術(shù)語“多核苷酸序列”是多核苷酸分子的字母表示。多核苷酸由4種核苷酸堿基的特定序列組成腺嘌呤(A)；胞嘧啶(C)；鳥嘌呤(G)；胸腺嘧啶(T)；并在多核苷酸是RNA (而不是DNA)時(shí)，用尿嘧啶(U)替代胸腺嘧啶。該字母表示可以輸入到計(jì)算機(jī)的數(shù)據(jù)庫中，并用于生物信息學(xué)應(yīng)用，例如，功能基因組學(xué)和同源性檢索。本文使用的術(shù)語“分離的多核苷酸/cDNA”包括這樣的多核苷酸分子，它們與在所述多核苷酸的天然來源中存在的其它多核苷酸分子分離。例如，關(guān)于基因組DNA，術(shù)語“分離的”包括這樣的多核苷酸分子，它們與基因組DNA天然有關(guān)的染色體分離。優(yōu)選地，“分離的”多核苷酸不含有這樣的序列，該序列天然地側(cè)接在所述多核苷酸的來源生物體的基因組DNA中的多核苷酸(即，位于目標(biāo)多核苷酸的5’和3’末端的序列)。例如，在不同的實(shí)施方案中，編碼在本發(fā)明中使用的PRG4蛋白的分離的多核苷酸分子可以含有小于約5 kb, 4 kb、3 kb,2 kbU kb,0. 5 kb或0. 1 1Λ的核苷酸序列，該序列天然地側(cè)接在所述多核苷酸的來源細(xì)胞的基因組DNA中的多核苷酸分子。此外，“分離的”多核苷酸分子(諸如cDNA分子)可以基本上不含有其它細(xì)胞物質(zhì)或培養(yǎng)基(當(dāng)通過重組技術(shù)生產(chǎn)時(shí))或基本上不含有化學(xué)前體或其它化學(xué)試劑(當(dāng)化學(xué)合成時(shí))。本文使用的“基因”包括含有至少一個(gè)開放讀碼框的多核苷酸，其在被轉(zhuǎn)錄和翻譯以后，能夠編碼特定的多肽或蛋白。本文所述的任一種多核苷酸序列也可以用于鑒別它們有關(guān)的基因的更大片段或全長編碼序列。分離更大的片段序列的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。本文使用的“天然的或天然存在的”多核苷酸分子包括，例如，具有在自然界中存在的核苷酸序列的RNA或DNA分子(例如，編碼天然蛋白)。本文使用的術(shù)語“多肽”或“蛋白”是可互換的，包括2個(gè)或更多個(gè)亞基氨基酸、氨基酸類似物或肽模擬物的化合物。所述亞基可以通過肽鍵相連。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述亞基可以通過其它鍵(例如，酯、醚等)相連。本文使用的術(shù)語“氨基酸”包括天然的和/ 或非天然的或合成的氨基酸，包括甘氨酸和D或L旋光異構(gòu)體和氨基酸類似物和肽擬似物。 3個(gè)或更多個(gè)氨基酸的肽通常稱作寡肽。大于3個(gè)或更多個(gè)氨基酸的肽鏈稱作多肽或蛋白。在某些實(shí)施方案中，本文使用的PRG4蛋白表示人或其它宿主細(xì)胞中天然地或重組地表達(dá)的PRG4蛋白或其各種同系物或同種型。本文使用的“表達(dá)”包括將多核苷酸轉(zhuǎn)錄成RNA和/或翻譯成多肽的過程。如果多核苷酸源自基因組DNA，表達(dá)可以包括剪接RNA (如果選擇適當(dāng)?shù)恼婧怂拗?。表達(dá)所需的調(diào)控元件包括用于結(jié)合RNA聚合酶的啟動子序列和用于核糖體結(jié)合的轉(zhuǎn)錄起始序列。例如，細(xì)菌表達(dá)載體包括啟動子(諸如Iac啟動子)和用于轉(zhuǎn)錄起始的Siine-Dalgarno序列和起始密碼子AUG。類似地，真核表達(dá)載體包括RNA 聚合酶II的異源或同源啟動子、下游聚腺苷酸化信號、起始密碼子AUG和用于脫離核糖體的終止密碼子。這樣的載體可以商業(yè)上得到，或由在本領(lǐng)域眾所周知的方法(例如，下面描述的構(gòu)建一般載體的方法)中描述的序列裝配而成。本文使用的術(shù)語“載體”包括自主復(fù)制的核酸分子，其將插入的多核苷酸轉(zhuǎn)移進(jìn)宿主細(xì)胞中，和/或在宿主細(xì)胞之間轉(zhuǎn)移。該術(shù)語意在包括主要功能是將核酸分子插入細(xì)胞中的載體，主要功能是復(fù)制核酸的復(fù)制載體，和功能在于轉(zhuǎn)錄和/或翻譯DNA或RNA的表達(dá)載體。也包括提供超過一種上述功能的載體。本文使用的“宿主細(xì)胞”意在包括任何單個(gè)的細(xì)胞或細(xì)胞培養(yǎng)物，其可以是或已經(jīng)成為載體的受體，或用于整合外源性的多核苷酸和/或多肽。還意在包括單個(gè)細(xì)胞的后代。由于天然的、意外的或故意的突變，所述后代不一定與起源母代細(xì)胞完全相同(在形態(tài)學(xué)上，或在基因組或總DNA互補(bǔ)性上)。所述細(xì)胞可以是原核細(xì)胞或真核細(xì)胞，包括、但不限于，細(xì)菌細(xì)胞、酵母細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞、動物細(xì)胞和哺乳動物細(xì)胞，包括但不限于鼠、大鼠、猴或人細(xì)胞。本文使用的“宿主細(xì)胞”也包括遺傳修飾的細(xì)胞。術(shù)語“遺傳修飾的細(xì)胞”包括含有和/或表達(dá)外來的或外源性的基因或多核苷酸序列的細(xì)胞，所述序列又修飾細(xì)胞或它的后代的基因型或表型?！斑z傳修飾的”也包括含有或表達(dá)已經(jīng)導(dǎo)入該細(xì)胞中的基因或多核苷酸序列的細(xì)胞。例如，在該實(shí)施方案中，遺傳修飾的細(xì)胞具有導(dǎo)入的基因，該基因?qū)τ谒黾?xì)胞也是內(nèi)源的。術(shù)語“遺傳修飾的”也包括對細(xì)胞的內(nèi)源核苷酸的任何添加、刪除或破壞。本文使用的“宿主細(xì)胞”可以是表達(dá)人PRG4蛋白的任意細(xì)胞。本文使用的“同系物”在本文中被定義為分別具有類似的或基本上相同的核酸或氨基酸序列的2個(gè)核酸或肽。術(shù)語“同系物”另外包括這樣的核酸分子，其由于遺傳密碼的簡并性而不同于核苷酸序列之一，且因此編碼相同的氨基酸序列。在優(yōu)選實(shí)施方案之一中， 同系物包括編碼PRG4蛋白的核酸(例如，SEQ ID NO: 1，參見，例如，圖3)的等位基因變體、 直系同源物、旁系同源物、激動劑和拮抗劑。本文使用的術(shù)語“直系同源物”表示來自不同物種、但是已經(jīng)通過物種形成從共同的祖先基因進(jìn)化而來的2個(gè)核酸。通常，直系同源物編碼具有相同或類似功能的肽。具體地，本發(fā)明的直系同源物通常表現(xiàn)出與任意已知PRG4蛋白(例如，SEQ ID N0:1)、其同種型或類似物的全部或一部分氨基酸序列的至少80-85%、更優(yōu)選85-90%或90-95%和最優(yōu)選 95%、96%、97%、98%或甚至99%同一性或100%序列同一性，并表現(xiàn)出與這些肽類似的功能。 也如本文使用的，術(shù)語“旁系同源物”表示通過在基因組內(nèi)的復(fù)制而相關(guān)聯(lián)的2個(gè)核酸。旁系同源物通常具有不同的功能，但是這些功能可能是相關(guān)的。為了測定2個(gè)氨基酸序列的序列同一性百分比，為了最佳對比目的而比對序列 (例如，為了與其它多肽或核酸的最佳比對，可以在一個(gè)多肽的序列中導(dǎo)入間隙)。然后對比在對應(yīng)的氨基酸位置處的氨基酸殘基。當(dāng)在一個(gè)序列中的位置被與在其它序列中的對應(yīng)位置相同的氨基酸殘基占據(jù)時(shí)，則所述分子在該位置是相同的。在2個(gè)核酸序列之間可以進(jìn)行同類對比。2個(gè)序列之間的序列同一性百分比隨著所述序列共有的相同位置的數(shù)目而變化(即，序列同一性百分比=相同位置的數(shù)目/位置總數(shù)χ 100)。優(yōu)選地，在本發(fā)明中包括的分離的氨基酸同系物與任意已知PRG4蛋白的整個(gè)氨基酸序列(例如，SEQ ID N0:1) 具有至少約50-60%、優(yōu)選至少約60-70%和更優(yōu)選至少約70-75%、75-80%、80-85%、85-90%或 90-95%和最優(yōu)選至少約96%、97%、98%、99%或更多的同一性。在某些實(shí)施方案中，編碼PRG4蛋白的分離的核酸同系物包含這樣的核苷酸序列， 其與編碼這樣的PRG4蛋白的氨基酸序列(例如，SEQ ID N0:1)的核苷酸序列具有至少約 40-60%、優(yōu)選至少約 60-70%、更優(yōu)選至少約 70-75%、75-80%、80-85%、85-90% 或 90-95% 和甚至更優(yōu)選至少約95%、96%、97%、98%、99%或更多的同一性。2個(gè)核酸或肽序列之間的序列同一性百分比的測定是本領(lǐng)域眾所周知的。例如，可以使用Vector NTI 6. 0 (PC)軟件包(InforMax, Bethesda, MD)來測定2個(gè)核酸或肽序列之間的序列同一性百分比。在該方法中，使用15的間隙開放罰分和6. 66的間隙延伸罰分來測定2個(gè)核酸的同一性百分比。使用10的間隙開放罰分和0. 1的間隙延伸罰分來測定2 個(gè)多肽的同一性百分比。所有其它參數(shù)都設(shè)定為缺省設(shè)置。為了多重比對的目的(Clustal W算法)，間隙開放罰分是10，間隙延伸罰分是0.05，使用bloSum62矩陣。應(yīng)當(dāng)理解，為了測定序列同一性的目的，當(dāng)對比DNA序列和RNA序列時(shí)，胸苷核苷酸相當(dāng)于尿嘧啶核苷酸。此外，本文使用的PRG4蛋白包括由多核苷酸編碼的PRG4蛋白，所述多核苷酸在嚴(yán)謹(jǐn)條件下與編碼PRG4蛋白的多核苷酸雜交。本文使用的“雜交”包括這樣的反應(yīng)，其中一種或更多種多核苷酸發(fā)生反應(yīng)，形成復(fù)合物，該復(fù)合物通過核苷酸殘基的堿基之間的氫鍵合而穩(wěn)定化。氫鍵合可以通過Watson-Crick堿基配對、Hoogstein結(jié)合或以任何其它序列特異性的方式而發(fā)生。所述復(fù)合物可以包含2條鏈(形成雙鏈體結(jié)構(gòu))、3條或更多條鏈(形成多鏈復(fù)合物)、單條自雜交的鏈或它們的任意組合。雜交反應(yīng)可以構(gòu)成更寬泛的過程(諸如PCR反應(yīng)的開始，或核酶對多核苷酸的酶切割)中的一個(gè)步驟。雜交反應(yīng)可以在不同的嚴(yán)謹(jǐn)條件下進(jìn)行。本發(fā)明包括這樣的多核苷酸，其能夠在低嚴(yán)謹(jǐn)性條件、更優(yōu)選嚴(yán)謹(jǐn)條件和最優(yōu)選非常嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臈l件下與本文所述的編碼PRG4蛋白的多核苷酸雜交。本文使用的術(shù)語“嚴(yán)謹(jǐn)條件”表示在IOx Denhart氏溶液、6xSSC、 0. 5%SDS和100 mg/ml變性的鮭魚精DNA中在60° C雜交過夜。連續(xù)在3xSSC/0. 1%SDS、 lxSSC/0. 1%SDS和最后的0. lxSSC/0. 1%SDS中在62° C洗滌印跡，每次30分鐘。也如本文使用的，在某些實(shí)施方案中，短語“嚴(yán)謹(jǐn)條件”表示在6xSSC溶液中在65° C雜交。在其它實(shí)施方案中，“非常嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臈l件”表示在IOx Denhart氏溶液、6xSSC、0. 5%SDS和100 mg/ml 變性的鮭魚精DNA中在65° C雜交過夜。連續(xù)在3xSSC/0. 1%SDS、lxSSC/0. 1%SDS和最后的0. lxSSC/0. P/oSDS中在65° C洗滌印跡，每次30分鐘。核酸雜交的方法是本領(lǐng)域眾所周知的。因此，本文使用的編碼PRG4蛋白的核酸包括這樣的核酸，其與編碼人PRG4蛋白(例如，SEQ ID NO: 1)的多核苷酸序列或其特定同種型或同系物具有至少60%同源性、優(yōu)選75% 同源性、更優(yōu)選85%、更優(yōu)選90%、最優(yōu)選95%、96%、97%、98%、99%同源性。此外，本文使用的PRG4蛋白也可以是嵌合蛋白或融合蛋白。本文使用的“嵌合蛋白”或“融合蛋白”包含與第二種多肽可操作地相連的第一種多肽。嵌合蛋白可以任選地包含與第一種或第二種多肽可操作地相連的第三種、第四種或第五種或其它多肽。嵌合蛋白可以包含2種或更多種不同的多肽。嵌合蛋白可以包含相同多肽的多個(gè)拷貝。嵌合蛋白也可以包含在一種或更多種多肽中的一個(gè)或更多個(gè)突變。制備嵌合蛋白的方法是本領(lǐng)域眾所周知的。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，所述嵌合蛋白是PRG4蛋白與其它PRG4蛋白同種型的嵌合體。本文使用的“分離的”或“純化的”蛋白、多核苷酸或分子是指從它們天然存在的環(huán)境中取出，或基本上不含有來自所述蛋白多核苷酸或分子的來源細(xì)胞或組織源的細(xì)胞物質(zhì)(諸如其它污染蛋白)，或基本上不含有化學(xué)前體或其它化學(xué)試劑(當(dāng)化學(xué)合成時(shí))。語言 “基本上不含有細(xì)胞物質(zhì)”包括從細(xì)胞的細(xì)胞組分分離出的制品，所述細(xì)胞用于分離或重組地生產(chǎn)或合成它。在某些實(shí)施方案中，語言“基本上不含有細(xì)胞物質(zhì)”包括這樣的PRG4蛋白制品，其具有小于約30%(按干重計(jì)算)的其它蛋白(在本文中也稱作“污染蛋白”)、更優(yōu)選小于約20%、更優(yōu)選小于約10%和最優(yōu)選小于約5%的其它蛋白。當(dāng)重組地生產(chǎn)蛋白或多核苷酸時(shí)，也優(yōu)選地基本上不含有培養(yǎng)基，即，培養(yǎng)基占目標(biāo)蛋白制品的體積的小于約20%、 更優(yōu)選小于約10%和最優(yōu)選小于約5%。
實(shí)施例實(shí)施例1陰道界面潤滑缺乏的體內(nèi)治療
65歲的經(jīng)絕后患者主訴陰道表面刺激、排尿過程中有灼熱感、性交困難、性交后間歇性輕微出血，并定期檢查陰道排出物，排除了具有活躍的感染，并確診具有萎縮性陰道炎。具體地，骨盆檢查揭示出薄的、蒼白的陰道壁的外觀。每周給該患者施用陰道內(nèi)的PRG4/17fi_甾二醇栓劑，其提供100 Pg/mL PRG4和1 17Β-甾二醇的劑量，盡管它們的總濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于典型的甾二醇治療，但是通過PRG4協(xié)
同轉(zhuǎn)運(yùn)直接遞送至陰道壁。在某些情況下，每年隨訪期間的子宮內(nèi)膜組織病理學(xué)揭示改善的陰唇和外陰豐滿度、潮紅的尿道和陰道上皮和/或癥狀(例如，其中不再存在癥狀)。實(shí)施例2
癌癥患者的陰道界面潤滑缺乏的治療
60歲絕經(jīng)的乳腺癌患者(最近結(jié)束了他莫昔芬化療療程)呈現(xiàn)炎癥的陰道上皮、斑塊狀紅斑、瘀點(diǎn)和增加的脆性以及小外陰損害。另外，陰道超聲揭示出寬約4 mm的薄子宮內(nèi)膜。 沒有發(fā)現(xiàn)毛滴蟲屬、念珠菌屬或其它細(xì)菌的跡象。巴氏(Papanicolaou)涂片揭示出未成熟的具有膨大細(xì)胞核的副基鱗狀上皮細(xì)胞，其在無定形的嗜堿顆粒狀碎片和炎性滲出物的背景中。給該患者的陰道施用日劑量為200 Pg/mL的緩沖的PRG4凝膠。在6個(gè)月隨訪時(shí)， 制備巴氏涂片，以觀察來自陰道上皮的表層和中間層的鱗狀細(xì)胞。在有些情況下，不同于初次就診時(shí)，許多細(xì)胞表現(xiàn)出豐富的細(xì)胞質(zhì)，具有低核質(zhì)比。在某些情況下，大多數(shù)細(xì)胞核是濃縮的，且存在適當(dāng)角質(zhì)化的、粉紅色的細(xì)胞質(zhì)的跡象。在有些情況下，患者表現(xiàn)出改善的組織彈性和更少的炎癥。在某些情況下，癥狀完全緩解，或從嚴(yán)重改善至可耐受。
權(quán)利要求
1.一種用于改善陰道界面潤滑的藥物組合物，其包含有效量和濃度的分離的或純化的 PRG4，所述PRG4配制在凝膠、滲透平衡的鹽水溶液、多相乳化系或緩釋或延長釋放裝置中； 其中所述有效量和濃度的分離的或純化的PRG4足以改善陰道界面潤滑。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，另外包含選自下述的治療劑雄激素或雄激素類似物、選擇性的雄激素受體調(diào)節(jié)劑、選擇性的雌激素受體調(diào)節(jié)劑、雌激素拮抗劑、芳香酶抑制劑、抗蛋白酶、促炎細(xì)胞因子拮抗劑、細(xì)胞因子釋放抑制劑、抗炎細(xì)胞因子、抗炎劑、 NF-KB抑制劑或蛋白酶體抑制劑、透明質(zhì)酸、中性或極性脂質(zhì)、脂肪酸、雌激素或雌激素類似物、留二醇、孕酮、濾泡刺激激素或黃體化激素。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其中所述治療劑是雄激素或其類似物、17α-甲基-17 β -羥基-2-氧雜-5 α -雄烷-3-酮衍生物、睪酮衍生物、4，5 α - 二氫睪酮衍生物、含有環(huán)A不飽和的17 β-羥基-5 α-雄烷衍生物、19-去甲睪酮衍生物、氮-取代的雄激素、包含具有罕見結(jié)構(gòu)特征的雄激素化合物的雄激素結(jié)構(gòu)亞類、或它們的組合。
4.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述選擇性的雄激素受體調(diào)節(jié)劑是芳基-丙酰胺化合物。
5.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其中所述選擇性的雄激素受體調(diào)節(jié)劑是雙環(huán)乙內(nèi)酰脲類似物、喹啉類似物或四氫喹啉類似物。
6.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其中所述治療劑是選擇性的雌激素受體調(diào)節(jié)劑。
7.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其中所述治療劑是雌激素拮抗劑。
8.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其中所述治療劑是芳香酶抑制劑。
9.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其中所述治療劑是抗蛋白酶。
10.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其中所述治療劑是促炎細(xì)胞因子拮抗劑。
11.如權(quán)利要求10所述的藥物組合物，其中所述促炎細(xì)胞因子拮抗劑選自抗-TNFa 抗體，可溶的TNFa受體，和IL-I受體拮抗劑。
12.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其中所述治療劑是細(xì)胞因子釋放抑制劑。
13.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其中所述治療劑是NF-κB抑制劑。
14.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其中所述治療劑是抗炎細(xì)胞因子。
15.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其中所述治療劑是抗炎劑。
16.如權(quán)利要求15所述的藥物組合物，其中所述抗炎劑選自環(huán)孢菌素A和《3和6脂肪酸。
17.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其中所述治療劑是蛋白酶體抑制劑。
18.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其中所述治療劑是中性或極性脂質(zhì)、以及這樣的成分的組合。
19.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其中所述治療劑是透明質(zhì)酸鈉或透明質(zhì)酸。
20.如權(quán)利要求19所述的藥物組合物，其中所述組合物包含濃度為10-100，000Pg/mL 的透明質(zhì)酸鈉或透明質(zhì)酸。
21.如權(quán)利要求19所述的藥物組合物，其中所述組合物包含濃度為500-5，000Pg/mL 的透明質(zhì)酸鈉或透明質(zhì)酸。
22.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述組合物包含濃度為10-10,000Pg/mL 的 PRG4。
23.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述PRG4具有50kDa至400 kDa的平均摩爾質(zhì)量。
24.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述PRG4包含其潤滑片段、多聚體或同系物。
25.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述PRG4是重組PRG4蛋白或其功能片段。
26.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述PRG4是純化的天然存在的PRG4蛋白。
27.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，另外包含一氧化氮，諸如天然的一氧化氮前體， 諸如氨基酸，例如L-精氨酸、瓜氨酸和天冬氨酸。
28.一種治療降低的陰道界面潤滑或改善陰道界面潤滑的方法，所述方法包括，將治療有效量的分離的或純化的PRG4局部地施用于有此需要的受試者的陰道表面。
29.如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述分離的或純化的PRG4存在于如權(quán)利要求 1-27中任一項(xiàng)所述的藥物組合物中。
30.一種治療疾病的方法，所述疾病具有與降低的陰道界面潤滑有關(guān)的癥狀，包括陰道萎縮、性交困難、舍格倫綜合征、絕經(jīng)、雄激素缺乏、雌激素缺乏、雌激素替代治療、變態(tài)反應(yīng)、慢性炎癥、絕經(jīng)、過早絕經(jīng)、化療、人乳喂養(yǎng)、絕經(jīng)前手術(shù)切除卵巢、生殖器硬化性苔蘚、 外陰痛、細(xì)菌性陰道病、皰疹、念珠菌病、銀屑病、接觸性皮炎、濕疣、用藥和老化的副作用， 所述方法包括，將治療有效量的如權(quán)利要求1-27中任一項(xiàng)所述的藥物組合物局部地施用于有此需要的受試者的陰道表面。
31.一種避孕用具，其包含附著到該避孕用具上的有效量的分離的或純化的PRG4。
32.一種補(bǔ)充避孕用具的方法，其中局部施用有效量的分離的或純化的PRG4。
33.一種提供在性交過程中的潤滑的方法，所述方法包括，向陰道表面、陰莖表面或其組合局部施用有效量的分離的或純化的PRG4。
34.如權(quán)利要求31-33中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述分離的或純化的PRG4存在于如權(quán)利要求1-27中任一項(xiàng)所述的藥物組合物中。
35.一種促進(jìn)受孕的方法，所述方法包括，給有此需要的患者的陰道施用如權(quán)利要求 1-27中任一項(xiàng)所述的藥物組合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及陰道健康的管理。具體地，本發(fā)明涉及藥物組合物及其使用方法，它們用于治療與陰道上皮處受損的界面潤滑有關(guān)的疾病。
文檔編號A61P17/00GK102438645SQ201080011254
公開日2012年5月2日 申請日期2010年1月13日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月13日
發(fā)明者薩利文 B., 薩利文 D., R. 特瑞特三世 E. 申請人:盧布里斯有限責(zé)任公司, 謝彭斯眼科研究所