專利名稱：柴胡總多糖在治療急性肺損傷藥物中的用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬中藥領域，涉及中藥柴胡總多糖新的藥用用途。具體涉及柴胡總多糖在治療急性肺損傷藥物中的用途。
背景技術：
急性肺損傷(acute lung injury，ALI)為由心源性以外的各種肺內(nèi)外致病因素導致的急性、進行性加重的呼吸困難、難治性低氧血癥和肺水腫。是一種以肺血管內(nèi)皮細胞及肺泡上皮細胞損傷為病理特征的臨床上常見非特異性免疫反應疾病，即為全身炎癥導致系統(tǒng)性功能障礙綜合征的肺部表現(xiàn)(章卓，萬敬員，羅福玲等.中草藥雜志，2008，39: 1196-1199.)。研究發(fā)現(xiàn)，誘發(fā)ALI模型的因素可分為細菌性的和非細菌性的。嚴重感染敗血癥、創(chuàng)傷、中毒、大量輸血、體外循環(huán)和彌漫性血管內(nèi)凝血(DIC)等均可導致ALI，而以嚴重感染最為常見，嚴重階段ALI的病死率高達40% (Mclntyre RC,Pulido EJ,Bensard DD, et al.Crit Care Med 2000，28 :3314-3331.)。內(nèi)毒素是經(jīng)典的誘發(fā)ALI模型的細菌性誘因之一，LPS進入體內(nèi)后很容易被免疫防御系統(tǒng)識別，通過傳遞炎癥反應的一些細胞介質來引起肺部組織損傷。臨床研究表明，ALI主要癥狀表現(xiàn)為局部募集反應、肺中性粒細胞聚集和促炎因子和介質的大量釋放、肺內(nèi)皮及上皮細胞受損引起的彌漫性肺間質及肺泡水腫、 蛋白的大量滲出和髓過氧化物酶(MPO)活性的增強等。研究表明由中性粒細胞為主介導的肺局部炎癥反應，是形成肺毛細血管通透性增高及肺水腫的病理基礎。柴胡為傘形科柴胡屬(Bupleurum)植物。是我國的傳統(tǒng)中藥和常用中藥，臨床應用十分廣泛。其性味苦涼，有疏散退熱、疏肝解郁、升陽舉氣之功效(中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會。中國藥典。一部。北京中國醫(yī)藥科技出版社，2010:263)，用于治療寒熱往來，胸滿脅痛，口苦耳聾，頭痛目眩等。早期的研究認為，北柴胡的主要有效成分為柴胡皂苷和揮發(fā)油。藥理學研究證明，北柴胡具有解熱、抗炎、鎮(zhèn)痛、免疫增強、保肝利膽、抗菌、抗病毒及抗腫瘤等作用；與北柴胡相仿，小葉黑柴胡具有明顯的解熱、抗炎、鎮(zhèn)痛和增強免疫功能的作用(趙玉珍，陶上乘，王英華等.中藥材，1998，21 (6) :307-309)。文獻報道北柴胡的提取成分(水提取成分，50%乙醇提取成分，氫氧化鋇提取成分)對小鼠脾淋巴細胞的增殖，白細胞介素-2和腫瘤壞死因子的分泌水平，均有明顯的增強作用。文獻(張興權，陳鴻珊.中國藥理學與毒理學雜志，1989,3(1) :31.)報道柴胡 (Bupleurum chinense DC)多糖能顯著增加脾系數(shù)；提高巨噬細胞和天然殺傷細胞功能；能提高病毒特異抗體滴度；能明顯增加淋巴細胞轉化率和皮膚遲發(fā)超敏反應，顯示免疫促進作用。柴胡另一成分皂苷對小鼠TPA引起的皮膚慢性炎癥和二甲苯引起的耳殼炎癥有一定程度的抑制作用。以上研究均未涉及柴胡多糖，及其多糖對急性肺損傷的作用。綜觀國內(nèi)外的研究，均未見報道柴胡總多糖的治療急性肺損傷藥效及其藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供柴胡總多糖在治療急性肺損傷藥物中新的藥用用途及柴胡總多糖的制備方法。本發(fā)明所述的中藥柴胡包括北柴胡(Bupleurum chinense DC)和小葉黑柴胡 (Bupleurum smithii var. parvifolium)。本發(fā)明從上述中藥柴胡中分離提取得到總多糖提取物。整體動物模型試驗證實其具有較強的治療實驗性急性肺損傷作用。本發(fā)明進行了柴胡總多糖對急性肺損傷小鼠的治療作用實驗研究，實驗結果揭示，小葉黑柴胡和北柴胡總多糖對急性肺損傷有治療作用。所述的柴胡總多糖可顯著降低肺組織濕重/干重比值、明顯抑制肺灌洗液中蛋白滲出、減少肺中性粒細胞聚集數(shù)量、降低髓過氧化物酶(MPO)活性，抑制腫瘤壞死因子(TNF-α)水平升高，血清一氧化氮(NO)升高也受到抑制。本發(fā)明的目的通過下述技術方案實現(xiàn)1、制備柴胡總多糖中藥柴胡包括北柴胡(Bupleurum chinense DC)和小葉黑柴胡(Bupleurum smithii var. parvifolium)。柴胡藥材以95%乙醇冷浸提取，濾過，藥渣于室溫下置通風處晾干，然后用熱水提取3次，濾過，合并提取液，濃縮，離心，上清液以三氯醋酸去游離蛋白，離心，上清液用水透析3天，透析液濃縮至小體積后加乙醇至含醇量80%，離心，沉淀冷凍干燥即得總多糖提取物，收率達3%以上，多糖含量超過65%。所述的中藥柴胡包括北柴胡(Bupleurum chinense DC)和小葉黑柴胡(Bupleurum smithii var. parvifolium)。2、柴胡總多糖用于治療急性肺損傷試驗1)單個核細胞計數(shù)肺灌洗液離心，200μ 1 NS收集下層細胞沉積，打勻。0.05%龍膽紫染液稀釋后，光學顯微鏡下計數(shù)單個核細胞數(shù)。結果顯示，與模型組相比，小葉黑柴胡和北柴胡總多糖均可顯著降低小鼠單個核細胞數(shù)的增多(P < 0.001)。2)肺濕重/干重比測定右肺下葉置于濾紙，待濾紙吸干表面水分后稱重，以此為濕重；之后放置在37°C 培養(yǎng)箱烘干(> 7 )，直到兩次稱重，重量不再變化，稱得干重；計算肺組織濕重/干重比 (即W/D)。干濕比=濕重/干重。結果顯示，與模型組相比，小葉黑柴胡和北柴胡總多糖可顯著抑制小鼠肺濕重/干重比值的增高(P < 0. 01，P < 0. 05)。3)肺總蛋白測定考馬斯亮藍法檢測蛋白含量。牛血清白蛋白作為標準蛋白溶液，制作標準曲線。 小鼠肺灌洗液離心。上清用生理鹽水稀釋?？捡R斯染液中加入待測樣品后，于自動酶標儀 (Labsystems Dragon) 540nm處讀取吸收度(A)值。結果顯示，與模型組相比，小葉黑柴胡和北柴胡總多糖可顯著抑制小鼠肺總蛋白水平的升高(P < 0. 001，P < 0. 01)。4)肺灌洗液MPO測定小鼠肺灌洗液離心。上清按MPO試劑盒說明書測定。結果顯示，與模型組相比，小葉黑柴胡和北柴胡總多糖可顯著降低小鼠肺灌洗液MPO的增高(P < 0. 05，P < 0. 01) ；20 和40mg/kg北柴胡總多糖也有一定的藥效，但沒有顯著性差異(P = 0. 07)。
5)灌洗液TNF-α測定小鼠肺灌洗液離心。上清按TNF-Ci試劑盒說明書測定。結果顯示，與模型組相比， 小葉黑柴胡和北柴胡總多糖均可顯著降低小鼠肺灌洗液TNF-Ci水平的升高(Ρ<0. 001)。6)血清NO測定取小鼠血，離心得血清。血清NO按Griss試劑法測定。結果顯示，與模型組相比， 小葉黑柴胡總多糖和北柴胡總多糖均可顯著降低小鼠血清NO水平的增高(P < 0. 001)。表1是急性肺損傷小鼠各指標測定結果(X士SD)表 權利要求
1.柴胡總多糖在制備治療急性肺損傷藥物中的用途；所述的柴胡總多糖通過下述方法和步驟制備柴胡藥材以95%乙醇冷浸提取，濾過，藥渣于室溫下置通風處晾干，然后用熱水提取3 次，濾過，合并提取液，濃縮，離心，上清液以三氯醋酸去游離蛋白，離心，上清液用水透析3 天，透析液濃縮至小體積后加乙醇至含醇量80%，離心，沉淀冷凍干燥即得總多糖提取物， 收率達3 %以上，多糖含量超過65 %。
2.按權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的柴胡藥材選自北柴胡 Bupleurumchinense DC 或/J、卩十M柴古月 Bupleurum smithii var· parvifolium。
3.柴胡總多糖在制備防治重癥非典型性肺炎藥物中的用途。
4.柴胡總多糖在制備防治細菌性肺炎藥物中的用途。
5.柴胡總多糖在制備防治非細菌性肺炎藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明屬中藥領域，涉及柴胡總多糖在制備防治急性肺損傷藥物中的用途。本發(fā)明從中藥柴胡中分離提取得到總多糖提取物，平均產(chǎn)物收率3.32％，多糖含量超過65％。所述柴胡總多糖提取物經(jīng)整體實驗證實，對小鼠急性肺損傷有明顯的治療作用。所述柴胡總多糖能通過其抗炎機制，降低肺的毛細血管通透性、減輕肺水腫、抑制全身和肺部局部炎癥反應，從而減少急性肺損傷?？捎糜谥苽浞乐渭毦腥净蚍羌毦腥镜榷喾N刺激因素引發(fā)的急性肺損傷藥物。
文檔編號A61P29/00GK102475713SQ201010567850
公開日2012年5月30日 申請日期2010年11月26日 優(yōu)先權日2010年11月26日
發(fā)明者力弘, 狄宏曄, 程小芹, 章蘊毅, 謝俊云, 陳道峰 申請人:復旦大學