專利名稱：小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗的制備方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明為一種小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗的制備方法，屬于生物工程技術(shù)領域。
背景技術(shù)：
小鵝瘟是由鵝細小病毒引起的一種主要侵害雛鵝和雛番鴨的烈性傳染病，發(fā)病率和死亡率都很高，發(fā)病雛鵝的死亡率最高可達90% 100%。長期以來，小鵝瘟疫苗是預防小鵝瘟疫病的主要措施。雖然我國目前已具有預防小鵝瘟的活疫苗凍干產(chǎn)品如小鵝瘟活疫苗(SYG株)和小鵝瘟活疫苗(GD株)等，但仍存在一些不足之處，如疫苗必須通過注射途徑使用，不但費時費力，而且無法避免因人工圍捕和注射疫苗等引起的各種嚴重應激反應， 如減食、減蛋，生長受抑等，這也是目前種鵝養(yǎng)殖者不愿意加強免疫，特別是在種鵝產(chǎn)蛋期間不愿意加強免疫的主要原因。另外，因現(xiàn)行的小鵝瘟凍干活疫苗不具有緩釋功能，免疫期短，保護率低；加上目前培育的種鵝新品種產(chǎn)蛋期都比較長，如果種鵝在產(chǎn)蛋期間不加強免疫就無法避免雛鵝發(fā)生小鵝瘟。由此可見這些問題的存在不但制約了小鵝瘟疫苗預防效力的充分發(fā)揮，而且影響到種鵝的生產(chǎn)性能、生長速度和經(jīng)濟效益。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有小鵝瘟凍干活疫苗所存在的缺點，提供一種小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗的制備方法，原理是利用多孔淀粉對小鵝瘟病毒進行高效吸附，再使用腸溶性高分子材料進行微膠囊化包埋，最后通過流化床進行干燥脫水。本發(fā)明充分利用微膠囊的優(yōu)異特性，解決現(xiàn)行小鵝瘟凍干活疫苗存在的免疫期短，使用不便，影響種鵝生產(chǎn)性能等不足之處，可以在種鵝產(chǎn)蛋期進行口服免疫，而不會產(chǎn)生應激反應。從而延長了免疫期， 彌補了常規(guī)活疫苗的缺陷。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)途徑實現(xiàn)的，小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗的制備方法，包括如下步驟(1)將小鵝瘟SYG毒株(購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所)通過鵝胚增殖培養(yǎng)后制成疫苗半成品；(2)半成品經(jīng)無菌檢合格后，加入5%的蔗糖脫脂乳溶液，攪拌混勻后再加入 20% -40%的多孔淀粉，37°C控溫攪拌20-40分鐘；(3)將步驟( 制得的液體與等體積-2. 5%的海藻酸鈉溶液混合，充分攪拌后經(jīng)流化床脫水干燥，制成小鵝瘟微膠囊化疫苗干粉。所述的制成小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗干粉粒徑范圍在5-15 μ m，每克所含病毒效價為0. 7X IO7-L 5X IO7ELD5tl，該疫苗可以通過口服途徑免疫。小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗半成品的制造是采用鵝胚增殖的培養(yǎng)方法。本發(fā)明方法科學，簡單，生產(chǎn)穩(wěn)定可靠，疫苗效價損耗較少。通過使用多孔淀粉作為微膠囊骨架，使制成的微膠囊粒徑均勻，易干燥脫水，分散性較好。制成的疫苗不僅具有抗原含量高、緩釋時間長、毒副作用小、成本低廉，使用方便、保存期長、無任何有害殘留等優(yōu)點，還可以通過口服途徑免疫，減少了應激反應，可以使種鵝在產(chǎn)蛋期進行加強免疫。用本方法生產(chǎn)的小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗干粉每克效價為0. 7X IO7-L SXlO7ELD500產(chǎn)品不加任何防腐劑，在2-8°C密封條件下可保存2年效價不降低。疫苗經(jīng)口服途徑(飲水或拌料)一次免疫接種后，可產(chǎn)生2個月左右的免疫保護期。


圖1是本發(fā)明的小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗低倍掃描電鏡圖片；圖2是本發(fā)明的小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗高倍掃描電鏡圖片；
具體實施例方式實施例一將購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所的小鵝瘟SYG毒株通過鵝胚增殖培養(yǎng)后制成疫苗半成品，無菌檢驗合格后加入5%的蔗糖脫脂乳溶液，混勻后再加入20%的多孔淀粉，37°C控溫攪拌40分鐘。將上述液體與等體積1 %的海藻酸鈉溶液混合，充分攪拌后經(jīng)流化床脫水干燥，制成小鵝瘟微膠囊化疫苗干粉，疫苗干粉粒徑范圍在5-15 μ m。將制成的疫苗接種非免疫鵝胚，經(jīng)測定每克疫苗所含毒價為1.5X IO7ELD5tlt5將疫苗加入含增稠劑的稀釋液中充分混勻，經(jīng)飲水途徑對50只健康成年鵝進行免疫接種，另設30只健康成年鵝作為非免疫對照組，兩組健康成年鵝分開飼養(yǎng)。在免疫后的7、14、28、42、56、70天，從免疫組與對照組中隨機抽檢10份血清，測定相應的ELD5tl，求得中和指數(shù)(中和指數(shù)=試驗組ELD5tl/對照組 ELD50) 0結(jié)果表明，免疫7、14、28、42、56、70天后的血清中和指數(shù)分別為IOl4UO2 0UO21, IO2 2UO2 0UOl50根據(jù)《中國獸藥典》附錄27頁中的要求(血清中和指數(shù)應彡IO18)，可以判斷，小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗在免疫后的第14天即可產(chǎn)生堅強保護力，免疫保護期達 56天以上。實施例二將購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所的小鵝瘟SYG毒株通過鵝胚增殖培養(yǎng)后制成疫苗半成品，無菌檢驗合格后加入5%的蔗糖脫脂乳溶液，混勻后再加入40%的多孔淀粉，37°C控溫攪拌20分鐘。將上述液體與等體積2. 5%的海藻酸鈉溶液混合，充分攪拌后經(jīng)流化床脫水干燥，制成小鵝瘟微膠囊化疫苗干粉，疫苗干粉粒徑范圍在5-15 μ m。將制成的疫苗接種非免疫鵝胚，經(jīng)測定每克疫苗所含毒價為0. 7 X IO7ELD500將疫苗加入飼料中混和均勻，經(jīng)拌料途徑對45只健康成年鵝進行免疫接種，另設30只健康成年鵝作為非免疫對照組，兩組健康成年鵝分開飼養(yǎng)。在免疫后的7、14、28、42、56、70天，從免疫組與對照組中隨機抽檢10 份血清，測定相應的ELD5tl，求得中和指數(shù)(中和指數(shù)=試驗組ELD5tl/對照組ELD5tl)。結(jié)果表明，免疫7、14、28、42、56、70天后的血清中和指數(shù)分別為10L2U0L8U02 0U02 °U0L8U0L2o 根據(jù)《中國獸藥典》附錄27頁中的要求(血清中和指數(shù)應> 1018)，可以判斷，小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗在免疫后的第14天即可產(chǎn)生堅強保護力，免疫保護期達56天。實施例三按實施例一所述制備方法制成的疫苗經(jīng)飲水途徑免疫開產(chǎn)種鵝40只，另設30只健康成年鵝作為非免疫對照組。取免疫組和對照組在免疫后不同時間段O0-30天，31-40 天，41-50天，51-60天)所產(chǎn)蛋孵出的雛鵝各10只，于5日齡時攻擊致死量的小鵝瘟病毒液，觀察10天。結(jié)果試驗組不同時間段的免疫保護率分別為90 %、100 %、100 %、80 %，而對照組不同時間段的死亡率分別為ΙΟΟ^ΑΟ^ΑΟ^ΑΟ^。由此可見，該疫苗對雛鵝具有較好的保護效果。實施例四按實施例一所述制備方法制成的疫苗經(jīng)飲水途徑免疫80只健康成年番鴨，另設 40只健康成年番鴨作為非免疫對照組，兩組番鴨分開飼養(yǎng)。在免疫后的7、14、28、42、56、70 天，從免疫組與對照組中隨機抽檢10份血清，測定相應的ELD5tl，求得中和指數(shù)(中和指數(shù)= 試驗組ELD5tl/對照組ELD5tl)。結(jié)果表明，免疫7、14、28、42、56、70天后的血清中和指數(shù)分別為10L1、10L8、102 °、10L9、10L7、10L2。根據(jù)《中國獸藥典》附錄27頁中的要求(血清中和指數(shù)應彡1018)，可以判斷，小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗對番鴨的保護期達42天以上。同時， 取免疫組與對照組番鴨在免疫后20-25天所產(chǎn)蛋孵出的雛番鴨各10只，于5日齡時攻擊致死量的小鵝瘟病毒液。結(jié)果免疫組番鴨全部保護，而對照組番鴨有70%發(fā)病死亡。由此可見，該疫苗對番鴨也具有較好的保護效果。
權(quán)利要求
1.小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗的制備方法，其特征包括如下步驟(1)將購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所的小鵝瘟SYG毒株通過鵝胚增殖培養(yǎng)后制成疫苗半成品 ；(2)半成品經(jīng)無菌檢合格后，加入5%的蔗糖脫脂乳溶液，攪拌混勻后再加入 20% -40%的多孔淀粉，37°C控溫攪拌20-40分鐘；(3)將步驟( 制得的液體與等體積-2.5%的海藻酸鈉溶液混合，充分攪拌后經(jīng)流化床脫水干燥，制成小鵝瘟微膠囊化疫苗干粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗的制備方法，其特征是所述的小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗干粉粒徑范圍在5-15 μ m。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗的制備方法，其特征是所述的小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗每克所含病毒效價為0. 7X IO7-L 5X 107ELD5Q。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗的制備方法，其特征是所述的小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗通過口服途徑免疫。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗的制備方法，其特征是所述的小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗一次免疫接種后，產(chǎn)生至少56天的免疫保護期。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗的制備方法。該疫苗的制造方法是將小鵝瘟SYG毒株通過鵝胚增殖培養(yǎng)后制成疫苗半成品，無菌檢驗合格后加入5％的蔗糖脫脂乳溶液，攪拌混勻；在上述半成品溶液中加入20％-40％的多孔淀粉，37℃控溫攪拌20-40分鐘；將上述液體與等體積1％-2.5％的海藻酸鈉溶液混合，充分攪拌后經(jīng)流化床脫水干燥，制成小鵝瘟微膠囊化疫苗干粉。本發(fā)明方法科學，簡單，生產(chǎn)穩(wěn)定可靠，疫苗效價損耗較少。采用疫苗微膠囊化技術(shù)，不僅使小鵝瘟活疫苗可以通過口服途徑免疫，減小了應激反應，而且賦予該活疫苗以緩釋功能，產(chǎn)蛋期間的種鵝可照常使用。
文檔編號A61K39/23GK102397541SQ201010286400
公開日2012年4月4日 申請日期2010年9月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月17日
發(fā)明者劉學賢, 呂曉娟, 徐步, 戴有理, 李新華, 龔建森 申請人:江蘇省家禽科學研究所