專(zhuān)利名稱(chēng)：磺胺氯吡嗪及其衍生物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種磺胺氯吡嗪及其衍生物的用途。
背景技術(shù)：
弓形蟲(chóng)病是由剛地弓形蟲(chóng)(Toxoplasma gondii)引起的一種分布極為廣泛的全球 性人獸共患病，可在人和牛、羊、豬、雞等多種動(dòng)物之間進(jìn)行傳播。弓形蟲(chóng)屬于真球蟲(chóng)目肉孢 子蟲(chóng)科弓形蟲(chóng)屬，是一種專(zhuān)性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲(chóng)，分布于世界各地，能感染幾乎所有的溫血?jiǎng)?物。動(dòng)物感染弓形蟲(chóng)后，一方面影響其生產(chǎn)性能，另一方面成為人類(lèi)弓形蟲(chóng)病的傳染源。因 此，對(duì)動(dòng)物弓形蟲(chóng)病的防治具有重要的經(jīng)濟(jì)學(xué)意義和公共衛(wèi)生學(xué)意義。人類(lèi)感染弓形蟲(chóng)病 的情況較嚴(yán)重，根據(jù)第二次全國(guó)人體重要寄生蟲(chóng)病現(xiàn)狀調(diào)查，全國(guó)人體弓形蟲(chóng)血清陽(yáng)性率 為7. 88%，而貴州省則高達(dá)16. 81%。家畜家禽感染弓形蟲(chóng)病更為嚴(yán)重，豬的陽(yáng)性率可高達(dá) 66. 39 %、牛的陽(yáng)性率達(dá)31. 94 %，牦牛的陽(yáng)性率可達(dá)67. 4 %、綿羊和山羊的陽(yáng)性率則超過(guò) 26%，雞的陽(yáng)性率也可達(dá)25. 17%。目前弓形蟲(chóng)病的防治還依賴(lài)于藥物，公認(rèn)有效的治療藥 物有乙胺嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、阿奇霉素等。由于現(xiàn)有的抗弓形蟲(chóng)藥物都不能完 全殺死蟲(chóng)體，停藥后的復(fù)發(fā)率較高，且由于這些藥的用藥時(shí)間長(zhǎng)，毒副作用較大，因此，需要 尋找一種高效、低毒的抗弓形蟲(chóng)藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決缺乏高效、低毒的抗弓形蟲(chóng)藥物的技術(shù)問(wèn)題，提供一種磺胺氯吡嗪 及其衍生物用于制備治療弓形蟲(chóng)病的藥物的用途，該磺胺氯吡嗪及其衍生物具有顯著的抗 弓形蟲(chóng)效果，有望成為新一代治療弓形蟲(chóng)病的藥物。為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)在本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種磺胺氯吡嗪及其衍生物的用途，用于制備治療 弓形蟲(chóng)病的藥物。在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“衍生物”指母體化合物分子中的原子或原子團(tuán)被其他原子或原 子團(tuán)取代所形成的化合物，該化合物為母體化合物的衍生物。本發(fā)明磺胺氯吡嗪衍生物包 括磺胺氯吡嗪藥學(xué)上可接受的鹽，優(yōu)選的，所述磺胺氯吡嗪衍生物為磺胺氯吡嗪鈉，因?yàn)樾?成鈉鹽后性質(zhì)穩(wěn)定、易溶于水?；前仿冗拎汉突前仿冗拎衡c的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下 磺胺氯吡嗪磺胺氯吡嗪鈉優(yōu)選的，所述藥物為口服藥物。在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種抗弓形蟲(chóng)的藥物組合物，包含有效成分磺胺 氯吡嗪或其衍生物。
所述衍生物包括磺胺氯吡嗪藥學(xué)上可接受的鹽，優(yōu)選的，所述磺胺氯吡嗪衍生物 為磺胺氯吡嗪鈉。優(yōu)選的，所述藥物組合物制成口服藥物。本發(fā)明磺胺氯吡嗪及其衍生物，具有很好的抗弓形蟲(chóng)效果，且藥品安全試驗(yàn)表明， 該磺胺氯吡嗪及其衍生物作為抗弓形蟲(chóng)藥物安全、毒性小，具有很大應(yīng)用價(jià)值和市場(chǎng)前景。
具體實(shí)施例方式下列實(shí)施例中，未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按常規(guī)條件。本發(fā)明提供了磺胺氯吡嗪及其衍生物用于制備治療弓形蟲(chóng)病的藥物的用途。其中 磺胺氯吡嗪衍生物優(yōu)選為磺胺氯吡嗪鈉。下面以具體的實(shí)施例詳細(xì)描述本發(fā)明。實(shí)施例1抗弓形蟲(chóng)藥物的初步篩選試驗(yàn)為尋找有效的抗弓形蟲(chóng)藥物，選擇了臨床上使用較多的6種藥物(阿奇霉素、泰妙 菌素、克拉霉素、磺胺氯吡嗪鈉、甲硝唑、甲氧芐胺嘧啶)進(jìn)行抗小鼠弓形蟲(chóng)感染初步實(shí)驗(yàn)。(1)6種藥物對(duì)比初步實(shí)驗(yàn)設(shè)7個(gè)組，每組10只昆明系雄性小白鼠，共計(jì)70只。用剛地弓形蟲(chóng)(Toxoplasma gondii)長(zhǎng)寧株(CN株，從上海發(fā)病豬分離的強(qiáng)毒株)速殖子，按IX IO4個(gè)/鼠腹腔接種小 鼠，接種后4h用藥組通過(guò)口灌服用藥(各組所用藥物與劑量見(jiàn)表1)，連續(xù)用藥6d，在接種 后第6d和第7d每組分別剖檢1 2只，取腹腔液鏡檢，在血球計(jì)數(shù)板上初步觀測(cè)速殖子數(shù) 量，接種后IOd結(jié)束實(shí)驗(yàn)。初步實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。阿奇霉素與磺胺氯吡嗪鈉均按150mg/kg灌服，具有明顯 的抗弓形蟲(chóng)效果，其存活率和平均存活天數(shù)明顯高于其余4種藥物和感染不用藥組(P < 0. 05)，出現(xiàn)少量死亡的時(shí)間也有所推遲，腹腔液鏡檢的速殖子數(shù)比感染不用藥組降低 95%以上。而泰妙菌素、克拉霉素、甲硝唑、甲氧芐胺嘧啶在所用劑量下，其死亡率、平均存 活天數(shù)與感染不用藥組無(wú)明顯差異(P > 0. 05)，腹腔液鏡檢的速殖子數(shù)僅甲硝唑低于感染 不用藥組。表1 6種藥物抗弓形蟲(chóng)初步效果 注*指表1的本列中，“ + ”號(hào)前為剖檢數(shù)，“ + ”號(hào)后為灌死數(shù)。**指存活率的計(jì) 算扣除了剖檢與灌死數(shù)，存活率(％)=(實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)存活數(shù)/實(shí)驗(yàn)數(shù))X100。同列中數(shù) 值上標(biāo)字母不同者表示差異顯著(P < 0. 05)。
4
(2)磺胺氯吡嗪鈉和阿奇霉素不同劑量實(shí)驗(yàn)在上述實(shí)驗(yàn)(1)的基礎(chǔ)上，對(duì)阿奇霉素和磺胺氯吡嗪鈉的抗弓形蟲(chóng)效果作進(jìn)一步 觀察和驗(yàn)證，并將灌服用藥改為飲水用藥。設(shè)9個(gè)組，各組所用藥物與設(shè)計(jì)劑量見(jiàn)表2，不感染對(duì)照組10只鼠，8個(gè)感染組每 組35只鼠(10+25)，共計(jì)290只，體重19 25g。感染組每鼠腹腔接種弓形蟲(chóng)速殖子IO4 個(gè)/0. 2mL，接種后4h用藥組開(kāi)始通過(guò)飲水服用藥物，連續(xù)用藥5d。用藥量按每只鼠體重 22g計(jì)，用蒸餾水將磺胺氯吡嗪鈉分別配成0. 06%,0. 08%,0. 濃度，用0. 乙醇將阿 奇霉素分別配成0.06%、0.08%、0. 濃度，自由飲用，統(tǒng)計(jì)各組每天的飲用量。在接種后 第1 5d，感染組每組剖檢5只，取腹腔液鏡檢計(jì)速殖子量。接種后IOd結(jié)束實(shí)驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表2和表3。從表2可知，磺胺氯吡嗪鈉3個(gè)劑量組的存活率和平均存活時(shí) 間優(yōu)于阿奇霉素(P < 0. 05)，阿奇霉素3個(gè)劑量組的平均存活時(shí)間略?xún)?yōu)于感染不用藥組。 盡管阿奇霉素3個(gè)劑量組的存活率均不高，但其死亡時(shí)間明顯推遲，在感染后第7d,感染不 用藥組己全部死亡，而阿奇霉素3個(gè)劑量組的死亡率為40% 60%。用藥期間，各感染組 的平均體重?zé)o明顯差異，但均低于不感染不用藥組。感染后10d，各感染組存活鼠的平均體 重均明顯低于感染后第5d，且顯著低于不感染不用藥組。表2磺胺氯吡嗪鈉和阿奇霉素抗弓形蟲(chóng)效果 注*為被同籠小鼠咬死。同列中數(shù)值上標(biāo)字母不同者表示差異顯著(P < 005)。表3顯示，感染后1 5d每組剖檢5只，其鏡檢腹腔液的平均速殖子數(shù)，磺胺氯吡 嗪鈉3個(gè)劑量組與阿奇霉素組3個(gè)劑量組和感染不用藥組相比，用藥后第4d和第5d均減少 99%以上；而阿奇霉素3個(gè)劑量組與感染不用藥組相比，在用藥后第4d減少80% 82%， 用藥后第5d減少71% 93%。表3腹腔液速殖子量(X IOVmL)
上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，磺胺氯吡嗪鈉具有很好的抗弓形蟲(chóng)效果，其平均存活天數(shù)和 腹腔速殖子減少率均優(yōu)于阿奇霉素?；前仿冗拎衡c是一種抗球蟲(chóng)藥，主要用于防治畜禽球 蟲(chóng)病，目前在國(guó)內(nèi)廣泛生產(chǎn)與使用，但未見(jiàn)該藥有抗弓形蟲(chóng)病效果的相關(guān)報(bào)道。本發(fā)明首次 發(fā)現(xiàn)磺胺氯吡嗪鈉具有非常顯著的抗弓形蟲(chóng)效果，可用作治療弓形蟲(chóng)病的有效藥物。實(shí)施例2不同磺胺藥物療效比較實(shí)驗(yàn)磺胺類(lèi)藥物是一類(lèi)廣泛應(yīng)用于人和動(dòng)物的抗菌藥物。磺胺類(lèi)藥物的作用機(jī)理是干 擾弓形蟲(chóng)的葉酸代射，使弓形蟲(chóng)的生長(zhǎng)、繁殖受到抑制。正常狀態(tài)下，弓形蟲(chóng)利用對(duì)氨基苯 甲酸，在二氫葉酸合成酶和還原酶的參與下，合成四氫葉酸，而磺胺類(lèi)藥物的基本結(jié)構(gòu)與對(duì) 氨基苯甲酸相似，能和對(duì)氨基苯甲酸互相競(jìng)爭(zhēng)二氫葉酸合成酶，阻礙二氫葉酸的形成以致 影響核酸和蛋白質(zhì)的合成，從而抑制弓形蟲(chóng)的生長(zhǎng)與繁殖。磺胺嘧啶與乙胺嘧啶的復(fù)配劑 是抗弓形蟲(chóng)藥物實(shí)驗(yàn)的對(duì)照藥物。(1)實(shí)驗(yàn)用藥物磺胺嘧啶鈉(SD, 99. 53% ),磺胺二甲嘧啶鈉(SDD, 99. 55% ),磺胺對(duì)甲氧嘧啶鈉 (SMD，99. 23%)，乳酸甲氧芐啶(ΤΜΡ，99· 55%)，磺胺甲氧噠嗪鈉(SMP，99. 50%)，磺胺氯噠 嗪鈉(SPD，99.81% )和磺胺氯吡嗪鈉(SPZ，99. 97% )，七種藥物均以藥品原料粉末狀形式提供。(2)步驟及結(jié)果90只小鼠隨機(jī)分為9組(各10只)，前8組感染RH株(RH株是國(guó)際公認(rèn)的強(qiáng)毒 株，第8組作為感染對(duì)照)，第9組為健康對(duì)照。感染蟲(chóng)體24小時(shí)后，將7種藥物(磺胺 嘧啶鈉、磺胺二甲嘧啶鈉、磺胺對(duì)甲氧嘧啶鈉、乳酸甲氧芐啶、磺胺甲氧噠嗪鈉、磺胺氯噠嗪 鈉、磺胺氯吡嗪鈉)溶于生理鹽水，按小鼠體重配成250mg/kg后，使用灌胃針給藥5天(見(jiàn) 表4)。第8，9組每天灌等量的生理鹽水。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，每天觀察并記錄死亡情況，本實(shí)驗(yàn)持 續(xù)30天。試驗(yàn)結(jié)果表明口服磺胺嘧啶鈉(SD)和磺胺氯吡嗪鈉(SPZ)有顯著的抗弓形蟲(chóng)作 用。感染不治療組小鼠被毛豎立、弓背、活動(dòng)減少。治療組中，第1組和第6組，小鼠死亡時(shí) 間大大推遲，顯示出明顯的療效，該兩組小鼠平均存活天數(shù)等指標(biāo)無(wú)顯著性差異，與其余各 組比較呈現(xiàn)顯著性差異(P < 0. 05)。表47種不同藥物療效評(píng)價(jià) 注表4中同一欄內(nèi)不同上角標(biāo)表示差異顯著(P < 0. 05)實(shí)施例3不同磺胺藥物的藥品安全測(cè)試用分組的健康小鼠直接灌服不同種藥物，觀察健康及體重等指標(biāo)。小鼠分成8組， 前7組分別灌服7種不同磺胺藥持續(xù)5天(見(jiàn)表5)，第8組灌服等量生理鹽水。試驗(yàn)過(guò)程 中每五天單只稱(chēng)重并每天記錄小白鼠健康狀況，實(shí)驗(yàn)持續(xù)25天。結(jié)果表明所有的藥物在250mg/kg/day劑量下不會(huì)致死。表5體重變化情況表 明，乳酸甲氧芐啶(TMP)灌藥組增重與健康對(duì)照組無(wú)顯著性差異。磺胺二甲嘧啶鈉(SDD)， 磺胺甲氧噠嗪鈉(SMP)和磺胺氯吡嗪鈉(SPZ)相對(duì)于其他藥物組小鼠增重明顯，此三種藥 物毒性更小。表5藥物安全性試驗(yàn)
組另IJ治療分組及劑量 存活數(shù)量平均體重變化
(250 mg/kg/d WB)(總數(shù))(直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束)1 磺胺嘧啶鈉(SD)10(10)a2AT 注表中同一欄內(nèi)不同上角標(biāo)表示差異顯著(P < 0. 05)實(shí)施例4磺胺氯吡嗪鈉濃度梯度治療及與乙胺嘧啶復(fù)配試驗(yàn)療效評(píng)價(jià)132只小鼠隨機(jī)分為11組(每組各12只)，感染剛地弓形蟲(chóng)(Toxoplasma gondii) RH株CVCC(3172s)速殖子(5000個(gè)/只，RH株是國(guó)際公認(rèn)的強(qiáng)毒株)，第11組為感染對(duì)照。 感染蟲(chóng)體24小時(shí)后，將藥物溶于生理鹽水，按小鼠體重配成不同的給藥劑量(見(jiàn)表6)，按照 下表6使用灌胃針連續(xù)給藥5天，其中第9組每天灌藥2次，第11組每天灌等量生理鹽水。 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，每天觀察并記錄死亡情況，本實(shí)驗(yàn)持續(xù)40天。表6磺胺氯吡嗪鈉(SPZ)與磺胺嘧啶鈉(SD)濃度梯度治療及與乙胺嘧啶(PM)復(fù)
配試驗(yàn)療效評(píng)價(jià) 注表6中，“ > “表示截止實(shí)驗(yàn)結(jié)束(感染后第40天)，治療組仍有存活小鼠， 將其統(tǒng)計(jì)存活時(shí)間為> 40d ；SPZ指磺胺氯吡嗪鈉；SD指磺胺嘧啶鈉；PM指乙胺嘧啶。本試驗(yàn)結(jié)果表明口服SPZ有顯著的抗弓形蟲(chóng)作用。感染對(duì)照組小鼠被毛豎立、弓 背、活動(dòng)減少。治療組中，除第4、8、9組全部死亡外，其余治療組實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)均有存活。從平 均死亡時(shí)間和半數(shù)死亡時(shí)間看，第2組和第5組小鼠死亡時(shí)間已大大推遲，顯示出明顯的療 效。通過(guò)觀察5、6、7、8、9、10這六組小鼠健康狀況和毛色，得出這些組明顯不如2、3、4組， 顯示乙胺嘧啶明顯毒性作用。SD(80mg/kg)與PM(15mg/kg)復(fù)配治療結(jié)果不理想，毒性作用 明顯，無(wú)顯著療效。SPZ(250mg/kg)治療效果佳，不僅死亡率低，而且小鼠健康狀況良好，說(shuō) 明SPZ具有很好的抗弓形蟲(chóng)效果。實(shí)施例5其他6種藥物治療弓形蟲(chóng)病的療效實(shí)驗(yàn)本發(fā)明找了另外6種藥物進(jìn)行治療弓形蟲(chóng)病藥物篩選。將84只小鼠隨機(jī)分為7 組(每組各12只)，感染弓形蟲(chóng)RH株速殖子(5000個(gè)/只)，第7組為感染不用藥對(duì)照組。 感染蟲(chóng)體24小時(shí)后，將藥物溶于(混懸于)生理鹽水和羧甲基纖維素中，按小鼠體重配成 不同的給藥劑量(見(jiàn)表7)，給藥5天每天1次，試驗(yàn)方法同實(shí)施例4，第7組每天灌等量生 理鹽水。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，每天觀察并記錄死亡情況，本實(shí)驗(yàn)持續(xù)40天。 表7其他6種藥物療效評(píng)價(jià) 注“ >"表示截止實(shí)驗(yàn)結(jié)束(感染后第40d)，治療組仍有存活小鼠，將其統(tǒng)計(jì)存 活時(shí)間為> 40d ；SPZ指磺胺氯吡嗪鈉。表7的結(jié)果顯示這六種藥物除了三字球蟲(chóng)粉外治療效果均不明顯。從數(shù)據(jù)中 可以看出三字球蟲(chóng)粉(含30% SPZ，本實(shí)驗(yàn)中所用三字球蟲(chóng)粉的量換算成SPZ藥物濃度為250mg/kg)治療組明顯推遲小鼠死亡時(shí)間，并能保護(hù)超過(guò)50%的小鼠免于發(fā)病死亡。這個(gè) 結(jié)果與實(shí)施例4 一致，證明有效藥物SPZ治療弓形蟲(chóng)病的療效顯著。實(shí)施例6已篩定磺胺藥磺胺氯吡嗪鈉對(duì)弓形蟲(chóng)感染的大鼠的治療試驗(yàn)試驗(yàn)共分4組，每只大鼠接種3. 5 X IO7個(gè)上海CN株，6小時(shí)后開(kāi)始投藥(磺胺氯吡 嗪鈉或磺胺嘧啶鈉)，按體重計(jì)算藥物，將藥物溶解在少量水中，30分鐘內(nèi)喝完。連續(xù)飼喂 5天。一周內(nèi)每天測(cè)量大鼠的體溫，每2個(gè)星期采血一次，計(jì)數(shù)大鼠的死亡情況(見(jiàn)表8)。表8篩選的有效藥物治療結(jié)果 表8結(jié)果表明，磺胺嘧啶鈉、磺胺氯吡嗪鈉治療組死亡率明顯低于感染對(duì)照組，且 磺胺氯吡嗪鈉組大鼠保護(hù)率為100%、效果要好于磺胺嘧啶鈉組。實(shí)施例7磺胺氯吡嗪鈉對(duì)弓形蟲(chóng)人工感染豬的治療試驗(yàn)選用45日齡豬，使其每只豬感染弓形蟲(chóng)5 X IO7個(gè)上海CN株后，治療組用磺胺氯 吡嗪鈉治療磺胺氯吡嗪鈉15mg/kg，連續(xù)灌服5天，20天后統(tǒng)計(jì)增重(見(jiàn)表9)。表9弓形蟲(chóng)人工感染豬治療試驗(yàn) 表9結(jié)果表明磺胺氯吡嗪鈉15mg/kg連續(xù)給人工感染豬灌服5天，與感染對(duì)照組 相比保護(hù)率提高，體溫稍降低，增重提高，說(shuō)明磺胺氯吡嗪鈉具有良好的抗弓形蟲(chóng)效果。以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能 因此而理解為對(duì)本發(fā)明專(zhuān)利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)， 在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范 圍。因此，本發(fā)明專(zhuān)利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。
權(quán)利要求
一種磺胺氯吡嗪及其衍生物的用途，其特征在于，用于制備治療弓形蟲(chóng)病的藥物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述衍生物包括磺胺氯吡嗪藥學(xué)上可接 受的鹽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述衍生物為磺胺氯吡嗪鈉。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述藥物為口服藥物。
5.一種抗弓形蟲(chóng)的藥物組合物，其特征在于，包含有效成分磺胺氯吡嗪或其衍生物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于，所述衍生物包括磺胺氯吡嗪藥學(xué) 上可接受的鹽。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的藥物組合物，其特征在于，所述衍生物為磺胺氯吡嗪鈉。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物制成口服藥物。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)一種磺胺氯吡嗪及其衍生物用于制備治療弓形蟲(chóng)病藥物的用途。本發(fā)明還公開(kāi)了抗弓形蟲(chóng)的藥物組合物，包含有效成分磺胺氯吡嗪或其衍生物。本發(fā)明的磺胺氯吡嗪及其衍生物，具有顯著的抗弓形蟲(chóng)效果，有望成為新一代治療弓形蟲(chóng)病的藥物。
文檔編號(hào)A61P33/02GK101890027SQ20101025322
公開(kāi)日2010年11月24日 申請(qǐng)日期2010年8月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月13日
發(fā)明者姜連連, 曾艷波, 朱順海, 王權(quán), 程軍, 董輝, 蔣蔚, 趙其平, 陳永軍, 韓紅玉, 馬衛(wèi)嬌, 黃兵 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所