專利名稱：芒果苷鈣鹽作為ampk激動(dòng)劑的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種芒果苷鈣鹽作為AMPK激活劑的用途。
背景技術(shù)：
磷酸腺苷(AMP)激活的蛋白激酶(AMP-activatedprotein kinase,AMPK)是一種 在細(xì)胞內(nèi)行使能量代謝調(diào)節(jié)的蛋白激酶。眾多研究已證實(shí)，AMPK影響糖、脂肪及蛋白質(zhì)代 謝，AMPK在糖尿病及肥胖癥等人類代謝性疾病的發(fā)病中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。最近研究還 發(fā)現(xiàn)，AMPK基因突變可導(dǎo)致心肌肥大及心律失常。在心肌及血管平滑肌受缺血/缺氧或心 血管活性物質(zhì)刺激時(shí)，AMPK激活還能通過(guò)影響細(xì)胞周期及物質(zhì)代謝抑制細(xì)胞增殖，在高血 壓及動(dòng)脈粥樣硬化的防治中起重要作用。因此AMPK有望成為代謝性疾病及心血管疾病重 要的治療新靶點(diǎn)。研究者們還認(rèn)為，AMPK與衰老、AMPK與神經(jīng)系統(tǒng)的能量代謝調(diào)控領(lǐng)域在未來(lái)可能 會(huì)有重要突破。有實(shí)驗(yàn)結(jié)果初步揭示，AMPK在老年性疾病發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮重要調(diào)控作用。 此外，已有實(shí)驗(yàn)室著手研究AMPK在下丘腦能量代謝調(diào)節(jié)中是否也扮演著關(guān)鍵角色。AMPK激活劑AICAR可抑制致炎細(xì)胞因子(如TNF- α、IL-1 β、IL-6、iNOS等)的 表達(dá)、減輕NF- κ B的激活等研究結(jié)果顯示出AMPK在細(xì)胞前炎性調(diào)節(jié)過(guò)程中的作用，提示 AMPK系統(tǒng)是一個(gè)新型的抗炎信號(hào)途徑，AMPK的活化在治療炎癥性疾病中具有重要價(jià)值。AMPK對(duì)于腫瘤細(xì)胞的基本物質(zhì)代謝及能量代謝具有十分重要的意義，它的激活可 以阻止腫瘤細(xì)胞的物質(zhì)合成和生長(zhǎng)。有文獻(xiàn)報(bào)道AMPK還能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。陳奇等報(bào)道AMPK 的激活可能下調(diào)C0X-2的表達(dá)，并可能提高以5-氟尿嘧啶治療為基礎(chǔ)的結(jié)腸癌的化療敏感 性。AMPK與運(yùn)動(dòng)的關(guān)系亦顯示出AMPK激活劑在肌肉系統(tǒng)疾病及作為運(yùn)動(dòng)替代方面的 潛力。綜上，AMPK激活劑的研究開(kāi)發(fā)具有重要的臨床意義，但目前尚未有上市的AMPK激 活劑李忌.AMPK 糖尿病與心血管疾病治療新靶點(diǎn).中國(guó)醫(yī)學(xué)論壇報(bào)，2009，(1149)；任 俊芳.AMPK與心血管重構(gòu).國(guó)際病理科學(xué)與臨床雜志，2008，28(1) 33-36 ；Ricardo Lage, Carlos Dieguez, Antonio Vidal-Puig. et al. AMPK -.a metabolic gauge regulating whole-body energy homeostasis. Trends MolMed，2008，14 (12) :539_49 ；符慶瑛，高鈺 琪.蛋白激酶AMPK的研究進(jìn)展.生命科學(xué)，17(2) :147-152;陳奇，梁后杰，鄒嵐，等.一磷 酸腺苷活化蛋白激酶對(duì)環(huán)氧合酶-2表達(dá)與5-氟尿嘧啶治療結(jié)腸癌敏感性的關(guān)系.實(shí)用醫(yī) 院臨床雜志，2008，5 (3) :56-58等。Maria Dolores Giro ‘ η 等報(bào)道芒果苷(mangiferin)可提高 AMPK 磷酸 化Man'a Dolores Giro ‘ η, Natalia Sevillano, Rafael Salto, et al. Salacia oblongaextract increases glucose transporter 4-mediated glucose uptake in L6 rat myotubes :Role of mangiferin. Clinical Nutrition(2009) :l_10。芒果苷化學(xué)結(jié)構(gòu)如下


發(fā)明內(nèi)容
雖有關(guān)于芒果苷提高AMPK磷酸化的報(bào)道，但僅一篇，且本發(fā)明人所發(fā)明的化合物
芒果苷鈣鹽(結(jié)構(gòu)式如下)是否同樣具有該作用卻不得而知。 另外，本發(fā)明人在對(duì)上述芒果苷鈣鹽的作用靶點(diǎn)的研究過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)芒果苷與芒 果苷鈣鹽不但皆具有促進(jìn)AMPK磷酸化的活性，而且產(chǎn)生以下幾點(diǎn)意想不到的結(jié)果1、芒果苷鈣鹽對(duì)AMPK的激活活性高于芒果苷。2、在與AMPK相關(guān)的幾種具代表性的疾病模型中，芒果苷鈣鹽具有相應(yīng)的藥理活 性，且活性高于芒果苷。為此，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案本發(fā)明提供一種芒果苷鈣鹽在制備AMPK激活劑中的應(yīng)用。本發(fā)明提供一種芒果苷鈣鹽在制備AMPK激活劑中的應(yīng)用。其特征在于所述芒果
苷鈣鹽具有以下結(jié)構(gòu)式 鑒于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)AMPK在疾病發(fā)生發(fā)展中所起重要作用的揭示，本發(fā)明所提供的 芒果苷鈣鹽在制備AMPK激活劑中的應(yīng)用，其特征在于所述AMPK激活劑可用于預(yù)防或治 療下述疾病中的任何一種或幾種糖尿病、糖尿病各種慢性并發(fā)癥(包括糖尿病性心臟病、 2型糖尿病并發(fā)腦梗塞、2型糖尿病并發(fā)非酒精性脂肪肝、糖尿病腎病、糖尿病視網(wǎng)膜病變、 糖尿病性周圍神經(jīng)病變等)、肥胖、高脂血癥、胰島素抵抗、高胰島素血癥、X綜合征、心肌肥 大、心律失常、動(dòng)脈粥樣硬化、缺血性心臟病、心力衰竭、高血壓、上呼吸道感染、慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺病、哮喘、肺纖維化、肝炎、脂肪肝、酒精肝、肝纖維化、肝硬化、前列腺炎、 胰腺炎、腎炎、腎病綜合征、慢性腎功能不全、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨性關(guān)節(jié)炎、 炎癥性腸病、阿爾茨海默氏病、記憶障礙、梗塞性癡呆、帕金森氏癥、腫瘤(包括腫瘤放療、 化療不敏感；腫瘤放療、化療產(chǎn)生的毒性反應(yīng))、肌肉萎縮、肌肉無(wú)力癥。
本發(fā)明所提供的芒果苷鈣鹽在制備AMPK激活劑中的應(yīng)用，其特征在于所述AMPK 激活劑可用于運(yùn)動(dòng)替代。本發(fā)明提供的芒果苷鈣鹽用作AMPK激活劑的有效劑量范圍為0. 05-10mg/kg/日 /人，優(yōu)選用量為0. 5-2mg/kg/日/人。以上用量是根據(jù)體外試驗(yàn)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果推算的， 因動(dòng)物與人體之間的差異，各種疾病之間的差異、體內(nèi)外差異，故允許實(shí)際臨床應(yīng)用劑量有 所調(diào)整。用法可根據(jù)具體疾病進(jìn)行選擇，各種給藥途徑皆可。下面給出具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，但不限于此。


圖1芒果苷鈣鹽對(duì)腫瘤細(xì)胞毒性的影響?？v坐標(biāo)為細(xì)胞死亡率(％ )。(注與單 獨(dú)給藥組比較:*p < 0. 05，< 0. 01)圖2芒果苷鈣鹽(20mg/kg)與芒果苷(40mg/kg)對(duì)ΚΚ-ay小鼠胰島素敏感指數(shù)與 血脂等的影響(注與模型組比較*p < 0. 05，< 0. 01，< 0. 001)圖3芒果苷鈣鹽(20mg/kg)與芒果苷(40mg/kg)對(duì)ΚΚ-ay小鼠肝酶的影響(注 與模型組比較*P < 0. 05，**P < 0.01)圖4芒果苷鈣鹽對(duì)癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶力影響?？v坐標(biāo)為潛伏期(EL)。(注與模 型組比較:*p < 0. 05，**P < 0. 01)圖5芒果苷鈣鹽對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的影響。(注與模型組比較廣P < 0. 05，**P < 0. 01)
具體實(shí)施例方式本發(fā)明所述的芒果苷可以采用市售品(具有相應(yīng)提取設(shè)備的廠家均可以生產(chǎn)，如 廣西昌洲天然產(chǎn)物開(kāi)發(fā)有限公司)，亦可以由知母或芒果葉等植物中提取分離后得到。碳 酸鈉、氯化鈣、乙醇等均采用市售品。芒果苷對(duì)照品(供含量測(cè)定用)由中國(guó)生物制品所提{共。實(shí)施例1 芒果苷的制備IOOkg知母飲片加80%乙醇回流提取兩次，每次1小時(shí)，減壓回收乙醇，大孔樹(shù)脂 吸附，水洗后，用20%乙醇洗脫，洗脫液減壓濃縮得粗品新芒果苷；再用40%乙醇洗脫，洗 脫液減壓濃縮得粗芒果苷。粗品芒果苷經(jīng)重結(jié)晶精制獲得芒果苷純品，芒果苷樣品經(jīng)與芒 果苷對(duì)照品進(jìn)行鑒別，確定所獲得樣品為芒果苷，純度經(jīng)HPLC測(cè)定大于95%。實(shí)施例2 芒果苷鈣鹽的制備按照本發(fā)明人申請(qǐng)的專利PCT/CN2008/001008中所載制備方法皆可制備芒果苷 鈣鹽。本處僅提供一種方法用以說(shuō)明芒果苷鈣鹽的獲得。在反應(yīng)器中加入芒果苷42. 2g(0. lmol)、水100ml、乙醇900ml充分混懸，將碳酸鈉 5. 30g(0. 05mol)加水制成0. 1% (w/v)溶液，緩慢加入攪拌狀態(tài)的混懸液中，反應(yīng)至澄清，
5過(guò)濾，向溶液中加入丙酮適量，充分?jǐn)嚢?，有大量沉淀析出，靜置，抽濾，固體物低于60°C干 燥，得淡黃色固體芒果苷鈉鹽34. 5g，收率為81.7%。樣品純度經(jīng)HPLC測(cè)定為95%。將芒果苷鈉鹽4. 44g(0. Olmol)水1500ml制成的水溶液，將無(wú)水氯化鈣 0. 44g(0. O(Mmol)加水IOOml制成溶液，在攪拌狀態(tài)下緩慢滴加氯化鈣溶液，使產(chǎn)生沉淀， 滴加完畢繼續(xù)攪拌，使反應(yīng)完全，4°C冷藏3小時(shí)以上，過(guò)濾，固體物低于60°C干燥，得淡黃 綠色固體芒果苷鈣鹽3. 07g,收率為69. 2%。經(jīng)HPLC測(cè)定純度大于98%。為了說(shuō)明發(fā)明內(nèi)容中所述芒果苷鈣鹽的藥理活性，本發(fā)明人采用體內(nèi)外相結(jié)合、 以具代表性的疾病模型作為各類疾病代表的方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。即用體外方式研究芒果苷 鈣鹽對(duì)AMPK磷酸化的影響及對(duì)腫瘤細(xì)胞的化療增敏作用；又分別以KK-ay小鼠、類風(fēng)濕性 關(guān)節(jié)炎大鼠、阿爾茨海默氏病大鼠來(lái)代表糖脂代謝紊亂性疾病、自身免疫疾病、神經(jīng)變性疾 病。以期說(shuō)明芒果苷鈣鹽作為AMPK激活劑、用以治療各種疾病的可行性。詳細(xì)闡述如下試驗(yàn)例1 芒果苷鈣鹽對(duì)AMPK激活作用1、材料按實(shí)施例2制備芒果苷鈣鹽，按實(shí)施例1制備芒果苷，二者皆以DMSO溶解。臨用 前以培養(yǎng)基或HBS緩沖液稀釋。DMSO終濃度彡0. 2%。L6細(xì)胞購(gòu)自ATCC。高糖DMEM培養(yǎng)基購(gòu)自GIBCO公司；胎牛血清購(gòu)自Hyclone公 司?？笰MPK兔源多克隆抗體、抗ACC兔源多克隆抗體、抗AMPK蘇氨酸172位點(diǎn)磷酸化兔源 多克隆抗體、抗ACC絲氨酸79位點(diǎn)磷酸化兔源多克隆抗體購(gòu)自Cell Signal Technology 公司。2、實(shí)驗(yàn)方法2. 1細(xì)胞培養(yǎng)與分化分化前的L6細(xì)胞用高糖DMEM培養(yǎng)基，含10%胎牛血清，100U/ml青霉素、100U/ml 鏈霉素，置于含有的5% C02的培養(yǎng)箱內(nèi)37°C培養(yǎng)。L6細(xì)胞的分化是在細(xì)胞長(zhǎng)滿60%左右 時(shí)，換成含2%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基，每?jī)商旄鼡Q一次培養(yǎng)基，直到L6細(xì)胞分化至 90%左右。2. 2化合物處理及樣品收集先將6孔板中的細(xì)胞在無(wú)血清的高糖DMEM培養(yǎng)基中饑餓。受試物以不同的濃度 梯度加到無(wú)血清的高糖DMEM培養(yǎng)基中，DMSO含量0.2%。受試物與細(xì)胞孵育3h，然后，用 冰冷的 1 XPBS 洗 2 次，加入 200 μ 1 IX SDS 電泳緩沖液(50mMTris ·Η(Χ，IOOmM DTT，2% 電 泳級(jí)SDS，0. 溴酚藍(lán)，10%甘油)裂解細(xì)胞lOmin。收集裂解液，超聲15秒鐘，在100°C煮 樣品IOmin02. 3免疫印跡檢測(cè)裂解液經(jīng)10% SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析，再在轉(zhuǎn)膜儀中以100V，l_2h轉(zhuǎn)移 到PVDF膜上。將凝膠中的蛋白質(zhì)半干轉(zhuǎn)移到硝酸纖維薄膜上，麗春紅S(P0nceaU S)確定 條帶。在封閉液(3%脫脂奶粉，0. 1% Tween, TBS溶解)中封閉1小時(shí)，加入1 1000稀 釋一抗4°C過(guò)夜，TBS洗滌3X15min，加入1 1000稀釋二抗，室溫孵育1小時(shí)，TBS洗滌 3X15min，置于ECL中沖洗5_10min，用X光片壓片顯影。3、結(jié)果結(jié)果表明芒果苷與芒果苷鈣鹽皆顯著增強(qiáng)了 AMPK磷酸化水平，同時(shí)顯著增強(qiáng)ACC磷酸化水平，芒果苷起效濃度為2 μ mol/L,芒果苷鈣鹽為0. 5 μ mol/L,可見(jiàn)芒果苷鈣鹽 活性高于芒果苷。試驗(yàn)例2 芒果苷鈣鹽對(duì)腫瘤細(xì)胞的化療增效作用1、材料按實(shí)施例2制備芒果苷鈣鹽(MGG)。順鉬(DDP)、阿霉素(ADM)、紫杉醇(TAXOL)由 市場(chǎng)購(gòu)得。實(shí)驗(yàn)樣品者皆用DMSO溶解后使用。2、分組陰性對(duì)照組為DMSO組、芒果苷鈣鹽組(5 μ g/ml)、順鉬組(1 μ mol/L)、阿霉素組 (lymol/L)、紫杉醇組(1 μ mol/L)、芒果苷鈣鹽(5yg/ml) +順鉬組(1 μ mol/L)、芒果苷鈣 鹽(5 μ g/ml)+阿霉素組(1 μ mol/L)、芒果苷鈣鹽(5 μ g/ml) +紫杉醇組(1 μ mol/L)。3、實(shí)驗(yàn)方法將體外培養(yǎng)的人肝癌Bel-7402細(xì)胞系，按照IO3-IO4/孔，每孔200 μ 1接種到96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，24小時(shí)后加入各受試物，其中加入兩個(gè)樣品的組別，需在加入芒果苷鈣鹽 后與細(xì)胞共同培養(yǎng)3h后，再加入順鉬或阿霉素或紫杉醇，培養(yǎng)72h，然后采用四氮唑鹽還原 法(MTT法)檢測(cè)細(xì)胞毒性。試驗(yàn)重復(fù)兩次。4、結(jié)果芒果苷鈣鹽聯(lián)合順鉬或阿霉素或紫杉醇組的細(xì)胞毒性顯著高于單獨(dú)應(yīng)用順鉬或 阿霉素或紫杉醇組。表明芒果苷鈣鹽對(duì)化療具有增加其細(xì)胞毒作用(見(jiàn)附圖1)。試驗(yàn)例3 芒果苷鈣鹽對(duì)KK-ay小鼠的影響1、藥物按實(shí)施例2制備的芒果苷鈣鹽，按實(shí)施例1制備芒果苷，二者皆用3%。羧甲基纖維 素鈉混懸后使用。鹽酸羅格列酮為浙江萬(wàn)馬藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。2、動(dòng)物雄性KK-ay小鼠，16周齡。IVC籠具飼養(yǎng)，每籠2只，溫度22°C。3、分組及給藥將KK-ay小鼠隨機(jī)分為8組，即模型組(η = 10)，芒果苷低劑量組[20mg/kg，η = 10]，芒果苷中劑量組[40mg/kg, η = 10]，芒果苷高劑量組[80mg/kg, η = 10]，芒果苷鈣鹽 低劑量組[20mg/kg，n = 10]，芒果苷鈣鹽中劑量組[40mg/kg，η = 10]，芒果苷鈣鹽高劑量 組[80mg/kg，n = 10]，二甲雙胍組[500mg/kg，η = 10]。每日固定時(shí)間以灌胃給藥的方式 進(jìn)行?？瞻捉M給予等量的生理鹽水。共給藥30天。4、觀察指標(biāo)血糖與血脂試驗(yàn)結(jié)束時(shí)采血標(biāo)本，血糖(mmol/L)、血脂[包括甘油三酯(TG， mmol/L)、膽固醇(TC，mmol/L)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL，mmol/L)、高密度脂蛋白膽固醇 (HDL，mmol/L)]、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT，U/L)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST，U/L)采用GF-D800型 半自動(dòng)生化分析儀(山東高密彩虹分析儀器有限公司生產(chǎn))檢測(cè)。胰島素放射免疫法，Y計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)，胰島素放免分析試劑盒，山東濰坊市三維 (3V)生物公司生產(chǎn)。胰島素敏感指數(shù)(ISI)計(jì)算=ISI= Ln(l/FPGX1/INS)。尿微量白蛋白于代謝籠中收集24h尿液并記錄尿量，尿液離心取上清-80°C保存?zhèn)溆?。隨意尿于每周周一 13 00用提尾反射法收集。采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA法檢測(cè)尿微量白蛋白， 計(jì)算尿白蛋白排泄率(尿白蛋白排泄率=尿微量白蛋白濃度(mg/L)X尿液的總量(ml)/ 收集總量的時(shí)間(分鐘)=Pg/分鐘，UAER)，圖中單位以mg/24h表示。5、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析計(jì)量資料值以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差(hsD)表示。兩組間比較采用t檢驗(yàn)。6、結(jié)果芒果苷鈣鹽20mg/kg即能顯著改善KK-ay小鼠的血糖、血脂、胰島素、尿白蛋白排 泄率、肝酶等各項(xiàng)指標(biāo)，顯著提高胰島素敏感指數(shù)。而芒果苷40mg方能顯著改善上述指標(biāo)。 可見(jiàn)芒果苷鈣鹽較芒果苷起效劑量降低，活性增強(qiáng)(見(jiàn)附圖2、3)。試驗(yàn)例4 芒果苷鈣鹽對(duì)癡呆大鼠的活性作用1試驗(yàn)材料1. 1 動(dòng)物SD雄性大鼠，SPF級(jí)，體重250 300g，自由飲水進(jìn)食，實(shí)驗(yàn)前在實(shí)驗(yàn)環(huán)境中適應(yīng) 2-3d，實(shí)驗(yàn)室溫度控制在25°C，相對(duì)濕度為40% -80%。1.2藥品、試劑及設(shè)備芒果苷鈣鹽按制備例方法制備。凝聚態(tài)β淀粉樣肽1 40片段(AM_4Q)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦立體定位儀(SN2型)為日本成茂公司產(chǎn)品。水迷宮中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所研制。2分組與給藥將SD鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，具體如下(1)假手術(shù)對(duì)照組即海馬內(nèi)注射等 量生理鹽水；(2)AM_4CI處理模型組；(3)芒果苷鈣鹽低劑量組(5mg/kg，簡(jiǎn)稱MGGL組)；(4) 芒果苷鈣鹽中劑量組(10mg/kg，簡(jiǎn)稱MGGM組)；(5)芒果苷鈣鹽高劑量組(20mg/kg，簡(jiǎn)稱 MGGH 組)。給藥方法各組動(dòng)物于造模前一周開(kāi)始灌胃給藥，每天1次，連續(xù)4周。迷宮訓(xùn)練 期間，于訓(xùn)練前0. 5h給藥。3試驗(yàn)方法3. IA0^40誘導(dǎo)大鼠AD樣病變模型的制備應(yīng)用凝聚態(tài)β淀粉樣肽1 40片段(AM_4CI)注入大鼠海馬內(nèi)建立AD樣病變的動(dòng) 物模型。具體如下SD大鼠經(jīng)麻醉后于立體定位儀下以AM_4(1行雙側(cè)海馬內(nèi)注射，每側(cè)各1μ 1(預(yù)先 將Αμ_4(1溶于無(wú)菌生理鹽水10 μ g/ μ 1，用前37°C下孵育1周)。注射部位為前囟后3. 5mm, 腦正中線旁開(kāi)2. 0mm，其深度為2. 7mm。3. 2觀察指標(biāo)與方法空間學(xué)習(xí)記憶力測(cè)試采用Morris水迷宮法。平臺(tái)設(shè)于迷宮東北象限正中，水平 面高出平臺(tái)1. 5cm，水溫保持在19°C 20°C，大鼠連續(xù)訓(xùn)練5d，每天2次，設(shè)定最長(zhǎng)游動(dòng)時(shí) 間為70s，以秒表記時(shí)，記錄大鼠找到平臺(tái)所需時(shí)間(潛伏期，EL)。4.結(jié)果隨訓(xùn)練天數(shù)增加，各組大鼠平均EL逐漸縮短。與假手術(shù)組比較，模型組大鼠EL明顯延長(zhǎng)，第4天開(kāi)始差異顯著，說(shuō)明造模成功。以第5d潛伏期為例，比較實(shí)驗(yàn)各組的EL，結(jié) 果芒果苷鈣鹽中高劑量組大鼠EL皆明顯縮短，表明芒果苷鈣鹽能顯著改善AM_4(I誘導(dǎo)的 大鼠空間學(xué)習(xí)記憶障礙(見(jiàn)附圖4)。試驗(yàn)例5 芒果苷鈣鹽對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型的影響1 材料Wistar大鼠，雌性，100 士 20g。牛源性II型膠原蛋白(Collagen II)，酸可溶性，美 國(guó)Sigma公司產(chǎn)品；弗氏不完全佐劑，美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品。TNF-α試劑盒購(gòu)自南京建成 生物工程研究所。2 造模將酸溶性II型膠原蛋白(C II )用弗氏不完全佐劑配成C II濃度為2.5mg/ml的 乳劑，按每只大鼠100 μ 1乳劑含C II 250 μ g，于右后足跖皮內(nèi)注射致炎。正常對(duì)照組每只大鼠注射不含C II的弗氏不完全佐劑制成的乳劑100 μ 1。3給藥與分組將大鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，具體如下(1)正常對(duì)照組；(2)模型組；(3)芒 果苷鈣鹽低劑量組(5mg/kg，簡(jiǎn)稱MGGL組)；(4)芒果苷鈣鹽中劑量組(10mg/kg，簡(jiǎn)稱MGGM 組)；(5)芒果苷鈣鹽高劑量組(20mg/kg，簡(jiǎn)稱MGGH組)；(6)陽(yáng)性對(duì)照組地塞米松磷酸鈉 組(0. lmg/kg,簡(jiǎn)稱 Dexa 組)。給藥方法初次免疫2周后開(kāi)始灌胃給藥，每天1次，連續(xù)4周，正常對(duì)照組與模型 組給予同等體積的生理鹽水。4觀察指標(biāo)4. 1足腫脹度用毛細(xì)管放大測(cè)量法測(cè)右后足體積，求出腫脹增長(zhǎng)百分率[(給藥 后值-給藥前值)/給藥前值]X100 %。4. 2細(xì)胞因子的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)大鼠股動(dòng)脈取血，提取血清，冷藏待測(cè)。TNF-a 按ELISA試劑盒說(shuō)明進(jìn)行檢測(cè)。5 結(jié)果芒果苷鈣鹽中高劑量組可顯著抑制模型大鼠足腫脹與細(xì)胞因子TNF-α的分泌。 表明芒果苷鈣鹽對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型大鼠具有治療作用(見(jiàn)附圖5)。
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權(quán)利要求
一種芒果苷鈣鹽在制備AMPK激活劑中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述芒果苷鈣鹽具有以下結(jié)構(gòu)式
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述AMPK激活劑可用于預(yù)防或治療下述 疾病中的任何一種或幾種糖尿病、糖尿病慢性并發(fā)癥、肥胖、高脂血癥、胰島素抵抗、高胰 島素血癥、X綜合征、心肌肥大、心律失常、動(dòng)脈粥樣硬化、缺血性心臟病、心力衰竭、高血壓、 上呼吸道感染、慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺病、哮喘、肺纖維化、肝炎、脂肪肝、酒精肝、肝 纖維化、肝硬化、前列腺炎、胰腺炎、腎炎、腎病綜合征、慢性腎功能不全、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類 風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨性關(guān)節(jié)炎、炎癥性腸病、阿爾茨海默氏病、記憶障礙、梗塞性癡呆、帕金森 氏癥、腫瘤。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述AMPK激活劑可用于運(yùn)動(dòng)替代。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述腫瘤為腫瘤放療、化療不敏感；腫瘤 放療、化療產(chǎn)生的毒性反應(yīng)。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述糖尿病慢性并發(fā)癥為糖尿病性心臟 病、2型糖尿病并發(fā)腦梗塞、2型糖尿病并發(fā)非酒精性脂肪肝、糖尿病腎病、糖尿病視網(wǎng)膜病 變、糖尿病性周圍神經(jīng)病變。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述AMPK激活劑可用于預(yù)防或治療下述 疾病中的任何一種或幾種糖尿病、糖尿病慢性并發(fā)癥、肥胖、高脂血癥、胰島素抵抗、高胰 島素血癥、X綜合征、心肌肥大、心律失常、動(dòng)脈粥樣硬化、缺血性心臟病、心力衰竭、高血壓、 上呼吸道感染、慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺病、哮喘、肺纖維化、肝炎、脂肪肝、酒精肝、肝 纖維化、肝硬化、前列腺炎、胰腺炎、腎炎、腎病綜合征、慢性腎功能不全、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類 風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨性關(guān)節(jié)炎、炎癥性腸病、阿爾茨海默氏病、記憶障礙、梗塞性癡呆、帕金森 氏癥、腫瘤。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述AMPK激活劑可用于運(yùn)動(dòng)替代。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于所述腫瘤為腫瘤放療、化療不敏感；腫瘤 放療、化療產(chǎn)生的毒性反應(yīng)。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述糖尿病慢性并發(fā)癥為糖尿病性心臟 病、2型糖尿病并發(fā)腦梗塞、2型糖尿病并發(fā)非酒精性脂肪肝、糖尿病腎病、糖尿病視網(wǎng)膜病 變、糖尿病性周圍神經(jīng)病變。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種芒果苷鈣鹽制備AMPK激活劑的用途。所述芒果苷鈣鹽結(jié)構(gòu)式如下。
文檔編號(hào)A61P25/16GK101919839SQ20101020567
公開(kāi)日2010年12月22日 申請(qǐng)日期2010年6月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月12日
發(fā)明者吳巍, 滕厚雷 申請(qǐng)人:海南德澤藥物研究有限公司