專(zhuān)利名稱(chēng)：一種具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥锛捌渌幬镏苿┑闹谱鞣椒?br> 技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，特別是涉及一種具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥?及其藥物制劑。
背景技術(shù)：
糖尿病是一種常見(jiàn)的有遺傳傾向的內(nèi)分泌代謝疾病，其病理生理改變是胰島素分 泌絕對(duì)或相對(duì)不足，引起糖、脂肪、蛋白質(zhì)等代謝紊亂。目前，糖尿病已成為全世界許多國(guó)家 的常見(jiàn)病和多發(fā)病，其死亡率已居腫瘤、心血管之后的第三位，全球糖尿病患者中90%以上 患的是2型糖尿病，即非胰島素依賴(lài)型糖尿病(NID. DM)。此外，糖尿病目前的流行趨勢(shì)呈年 輕化，WHO預(yù)測(cè)到2025年在發(fā)展中國(guó)家的糖尿病人群中只有26%超過(guò)65歲，而在發(fā)達(dá)國(guó)家 這個(gè)數(shù)字為62%。中國(guó)由于人口基數(shù)大，目前絕對(duì)患病人數(shù)居世界首位，其中絕大部分為2 型糖尿病。根據(jù)WHO預(yù)測(cè)，1995-2025年間，中國(guó)糖尿病增長(zhǎng)幅度將達(dá)68 %，增長(zhǎng)率居全球首 位，屆時(shí)我國(guó)糖尿病患者絕對(duì)人數(shù)將突破5000萬(wàn)。近年來(lái)隨著中藥現(xiàn)代化與國(guó)際化進(jìn)程的 不斷推進(jìn)，從中藥中提取出其有效成分或單體，將其開(kāi)發(fā)成抗糖尿病藥物成為了研究熱點(diǎn)。樺褐孔菌是一種藥用真菌，主要分布在北緯45° -50°的寒冷地區(qū)，含有以多糖、 三萜類(lèi)、留體類(lèi)和多酚類(lèi)化合物為主的多種成分，具有抗腫瘤、抗氧化、降血糖、抗炎、止痛、 抗血小板凝集、抗病毒、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等多種藥理活性。從16世紀(jì)開(kāi)始，俄羅斯、波蘭、芬 蘭等國(guó)的居民就已經(jīng)開(kāi)始食用，并且用于防治胃腸道、糖尿病、癌癥等多種疾病。1955年莫 斯科醫(yī)科院宣布樺褐孔菌為抗癌物質(zhì)，政府批準(zhǔn)樺褐孔菌可用于醫(yī)藥品開(kāi)發(fā)。美國(guó)十分關(guān) 注樺褐孔菌的免疫增強(qiáng)效果，并將其制成健康輔助食品。日本的研究人員高度評(píng)價(jià)這種民 間的藥物，把樺褐孔菌菌核作為肝癌，艾滋病和0-157大腸桿菌中毒的治療劑，并申請(qǐng)多項(xiàng) 有關(guān)樺褐孔菌的專(zhuān)利，認(rèn)為樺褐孔菌是一種“萬(wàn)能藥”。但到目前為止尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān)采用超 聲波方法從樺褐孔菌中獲取總?cè)祁?lèi)化合物并開(kāi)發(fā)降血糖藥物制劑的諸報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種作用明確、毒副作用小的具有降血糖作用的樺褐孔菌 總?cè)铺崛∥铩１景l(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥锏乃?物制劑。本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下—種具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥?，用下述方法制?1)將樺褐孔菌粉碎后過(guò)篩，按lg 8-12mL的比例加入體積濃度為70% -95%的 乙醇水溶液浸泡1-3小時(shí)后進(jìn)行超聲波提取，提取的次數(shù)為2-4次，每次30-120分鐘，合并 提取液，分離上清液，并將上清液濃縮干燥后獲得乙醇浸膏；(2)將所述乙醇浸膏分散于蒸餾水中，然后用石油醚振蕩萃取3-5次，每次2-4小時(shí)，將萃取液和水相萃余物分離；(3)將所述水相萃余物用正丁醇振蕩萃取3-5次，每次2-4小時(shí)，分離出萃取液，合 并濃縮并干燥，即獲得三萜含量為70-300mg/g的具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛?物。所述超聲波的功率為100-150W。所述的步驟(2)中乙醇浸膏與蒸餾水的用量比為lg 20_50mL。所述的步驟(2)中石油醚的用量為乙醇浸膏重量的10-30倍。所述步驟(3)中正丁醇的用量為乙醇浸膏重量的10-30倍。所述制劑由25-70重量份的所述具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥锖?30-75重量份的藥用輔料制成。所述藥物制劑的劑型為顆粒劑、膠囊劑、片劑、散劑、滴丸劑、懸浮劑或栓劑。本發(fā)明的具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥飳?duì)高血糖小鼠具有明顯的降 低空腹血糖水平，明顯緩解高血糖小鼠糖尿病癥狀的作用，且對(duì)主要臟器沒(méi)有明顯毒性。


圖1為具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥锏谋由V圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。實(shí)施例1(1)將100g樺褐孔菌粉碎后過(guò)30目篩，用800mL體積濃度為70%濃度的乙醇水 溶液浸泡2小時(shí)，然后超聲波提取2次，超聲波的功率為150W，每次30min，合并提取液，離 心分離上清液，并將上清液濃縮干燥后獲得乙醇浸膏6. 462g ；(2)將乙醇浸膏分散于20重量倍于乙醇浸膏的蒸餾水中，然后用10重量倍于乙醇 浸膏的石油醚振蕩萃取3次每次2小時(shí)，將萃取液和水相萃余物分離；(3)將上述水相萃余物用10重量倍于乙醇浸膏的正丁醇振蕩萃取3次，每次2小 時(shí)，分離出萃取液，然后將萃取液合并濃縮并干燥，即獲得4. 294g具有降血糖作用的樺褐 孔菌總?cè)铺崛∥铮瑢?duì)其進(jìn)行含量測(cè)定，三萜含量為100. 270mg/g。見(jiàn)圖1(展開(kāi)條件石油醚丙酮=4 1其中，點(diǎn)a為具有降血糖作用的樺褐孔 菌總?cè)铺崛∥铮c(diǎn)b為樺褐孔菌醇標(biāo)準(zhǔn)品)實(shí)施例2(1)將100g樺褐孔菌粉碎后過(guò)30目篩，用1000mL體積濃度為80%濃度的乙醇水 溶液浸泡3小時(shí)，然后超聲波提取3次，超聲波的功率為100W，每次2小時(shí)，合并提取液，抽 濾分離上清液，并將上清液濃縮干燥后獲得乙醇浸膏10. 977g ；(2)將乙醇浸膏分散于30重量倍于乙醇浸膏的蒸餾水中，然后用20重量倍于乙醇 浸膏的石油醚振蕩萃取4次，每次3小時(shí)，將萃取液和水相萃余物分離；(3)將上述水相萃余物用20重量倍于乙醇浸膏的正丁醇振蕩萃取4次，每次3小 時(shí)，然后將萃取液合并濃縮并干燥，即可獲得6. 304g具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺?取物，三萜含量為115. 736mg/g。
4
實(shí)施例3(1)將100g樺褐孔菌粉碎后過(guò)30目篩，用1200mL體積濃度為95%濃度的乙醇水 溶液浸泡1小時(shí)，然后超聲波提取4次，超聲波的功率為100W，每次1小時(shí)，合并提取液，離 心分離上清液，并將上清液濃縮干燥后獲得乙醇浸膏4. 391g ； (2)將上述乙醇浸膏分散于50重量倍于乙醇浸膏的蒸餾水中，然后用30重量倍于 乙醇浸膏的石油醚振蕩萃取5次，每次4小時(shí)，將萃取液和水相萃余物分離；(3)將上述水相萃余物用30重量倍于乙醇浸膏的正丁醇振蕩萃取5次，每次4小 時(shí)，然后將萃取液合并濃縮并干燥，即可獲得3. 840g具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺?取物，三萜含量為75. 000mg/g。注其中含量計(jì)算公式為含量=(、
正丁醇層浸霄總量(g)各實(shí)施例的具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥?，遇醋?濃硫酸反應(yīng)，氯 仿-濃硫酸反應(yīng)及三氯醋酸反應(yīng)呈陽(yáng)性。薄層色譜分析，該提取物中含有三萜類(lèi)化合物樺 褐孔菌醇，其含量經(jīng)HPLC分析為2-50mg/mL。實(shí)施例4具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥飳?duì)高血糖小鼠的降血糖作用通過(guò)腹腔注射四氧嘧啶的方式誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生糖尿病癥狀。注射四氧嘧啶水合物 72h后，用試劑盒測(cè)量小鼠的血糖值(血液來(lái)源于小鼠尾靜脈)，將血糖值高于11. lmmol/L 的小鼠隨機(jī)分為4組，每組8只。第一組為糖尿病小鼠對(duì)照；第二組為格列苯脲為陽(yáng)性對(duì)照 藥組；第三組為本發(fā)明的具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥?，每天為小鼠灌飼具?降血糖降血脂作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥铩５谒慕M為正常小鼠對(duì)照組，每天正常飲食。待 測(cè)樣品均與0.4%的羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)水溶液混懸后，通過(guò)灌胃針將樣品溶液強(qiáng)行 灌入小鼠胃內(nèi)，第一組和第四組每天灌飼CMC-Na水溶液。每天記錄飲食、飲水及體重。灌 胃20天之后，從小鼠眼球取血直至小鼠死亡，然后立即將小鼠解剖，迅速取出肝臟、胸腺和 脾臟并稱(chēng)重。小鼠血液離心獲得血清，測(cè)定小鼠血清中血糖含量，總膽固醇含量，甘油三酯 含量，高密度脂蛋白含量及小鼠肝糖原含量。結(jié)果顯示，四氧嘧啶誘導(dǎo)的糖尿病小鼠多飲、多食、生長(zhǎng)緩慢，脾指數(shù)及胸腺指數(shù) 比正常組小鼠低，而具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥锟梢杂行У母纳铺悄虿⌒∈?多飲，多食的癥狀，體重、脾指數(shù)及胸腺指數(shù)較糖尿病模型組均有所增加。如表1所示，腹腔注射四氧嘧啶致使糖尿病小鼠的血糖水平增大了 2倍以上。灌 胃具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥?0天后，空腹血糖水平有了顯著地降低(p < 0. 01)，空腹血糖值從最初的10. 26mmol/L降低到3. 96mmol/L。具有降血糖作用的樺褐 孔菌總?cè)铺崛∥镄∈蟮母翁窃勘忍悄虿∧Ｐ徒M高，說(shuō)明具有降血糖作用的樺褐孔菌 總?cè)铺崛∥锟纱龠M(jìn)血糖向肝糖元的轉(zhuǎn)化。表1具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥飳?duì)糖尿病小鼠血糖水平和肝糖原 含量的影響
5 ## :p < 0. 01與糖尿病模型組比較；# :p < 0. 01與正常對(duì)照組比較測(cè)定血脂水平的結(jié)果顯示，糖尿病模型組小鼠的總膽固醇含量、甘油三酯含量比 正常對(duì)照組高，而高密度脂蛋白含量比正常對(duì)照組低。灌胃具有降血糖作用的樺褐孔菌總 三萜提取物后，糖尿病小鼠的總膽固醇含量、甘油三酯含量有所降低，高密度脂蛋白含量明 顯增高(？<0.05)，從1.02讓01/1增至1.77讓01/1。這些數(shù)據(jù)表明，具有降血糖作用的樺 褐孔菌總?cè)铺崛∥飳?duì)糖尿病小鼠具有良好的降血脂作用。表2具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥飳?duì)糖尿病小鼠血脂水平的影響
組別
劑量總膽固醇
(mg/kg/d) (mmol/1)
甘油三酯 (mmol/1)
高密度脂蛋白 (mmol/1)
糖尿病模型組(第一-組)
格列苯脲對(duì)照組(第20 二組)
具有降血糖作用的500 樺褐孔菌總?cè)铺?取物組(第三組) 正常對(duì)照組(第四-組)
3. # :p < 0. 05，## :p < 0. 01 與糖尿病模型組比較；* :p < 0. 05，** :p < 0. 01 與正 常對(duì)照組比較實(shí)施例5顆粒劑(以重量百分比計(jì))本發(fā)明的具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥?5%玉米淀粉65%蔗糖10%
將上述原料加入適量的體積濃度為70%的乙醇水溶液潤(rùn)濕而制成軟材，過(guò)14目 尼龍篩制粒，濕顆粒于60°C干燥，干顆粒過(guò)14目篩整粒，再過(guò)4號(hào)篩篩去細(xì)粉，然后分裝，密 封，包裝即得成品。實(shí)施例6膠囊劑(以重量百分比計(jì))本發(fā)明的具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥?70%玉米淀粉5%糊精10%微晶纖維素10微粉硅膠5%將上述原料加入適量的體積濃度為70%的乙醇水溶液潤(rùn)濕而制成軟材，過(guò)20目 尼龍篩制粒，濕顆粒于60°C干燥，干顆粒過(guò)14目篩整粒，所得顆粒灌入膠囊，制成成品。實(shí)施例7片劑(以重量百分比計(jì))本發(fā)明的具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥?32%玉米淀粉32%糊精25%蔗糖5%滑石粉5%硬脂酸鎂取本發(fā)明的具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥?、淀粉、糊精、蔗糖，混勻?成顆粒。60°C以下干燥，加入5%滑石粉，1 %硬脂酸鎂，混勻，壓制成片，包糖衣或薄膜衣，既
得成品。散劑、滴丸劑、懸浮劑或栓劑的制備是取本發(fā)明的具有降血糖作用的樺褐孔菌總 三萜提取物加上適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)可接受的輔料按常規(guī)的方法制成。
權(quán)利要求
一種具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥?，其特征是用下述方法制?1)將樺褐孔菌粉碎后過(guò)篩，按1g∶8-12mL的比例加入體積濃度為70％-95％的乙醇水溶液浸泡1-3小時(shí)后進(jìn)行超聲波提取，提取的次數(shù)為2-4次，每次30-120分鐘，合并提取液，分離上清液，并將上清液濃縮干燥后獲得乙醇浸膏；(2)將所述乙醇浸膏分散于蒸餾水中，然后用石油醚振蕩萃取3-5次，每次2-4小時(shí)，將萃取液和水相萃余物分離；(3)將所述水相萃余物用正丁醇振蕩萃取3-5次，每次2-4小時(shí)，分離出萃取液，合并濃縮并干燥，即獲得三萜含量為70-300mg/g的具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥铩?br> 2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥?，其特征在于所?超聲波的功率為100-150W。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥铮涮卣髟谟谒?的步驟(2)中乙醇浸膏與蒸餾水的用量比為lg 20-50mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥?，其特征在于所?的步驟(2)中石油醚的用量為乙醇浸膏重量的10-30倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥铮涮卣髟谟谒?步驟(3)中正丁醇的用量為乙醇浸膏重量的10-30倍。
6.權(quán)利要求1-5之一的具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥锏乃幬镏苿涮卣?在于所述制劑由25-70重量份的所述具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥锖?0-75重 量份的藥用輔料制成。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的具有降血糖降血脂作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥锏乃幬镏?劑，其特征在于所述藥物制劑的劑型為顆粒劑、膠囊劑、片劑、散劑、滴丸劑、懸浮劑或栓劑。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥铮孟率龇椒ㄖ瞥?1)將樺褐孔菌粉碎后過(guò)篩，加入乙醇水溶液浸泡后進(jìn)行超聲波提取，分離上清液，并將上清液濃縮干燥后獲得乙醇浸膏；(2)將乙醇浸膏分散于蒸餾水中，然后用石油醚振蕩萃取，將萃取液和水相萃余物分離；(3)將述水相萃余物用正丁醇振蕩萃，分離出萃取液，合并濃縮并干燥，即獲得三萜含量為70-300mg/g的具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥铩１景l(fā)明的具有降血糖作用的樺褐孔菌總?cè)铺崛∥飳?duì)高血糖小鼠具有明顯的降低空腹血糖水平，明顯緩解高血糖小鼠糖尿病癥狀的作用，且對(duì)主要臟器沒(méi)有明顯毒性。
文檔編號(hào)A61K9/02GK101849973SQ20101019799
公開(kāi)日2010年10月6日 申請(qǐng)日期2010年6月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月11日
發(fā)明者董鵬, 邢玥, 陳海霞 申請(qǐng)人:天津大學(xué)