專利名稱：含溴二氫黃酮醇木脂素的制備及治療病毒性乙肝醫(yī)藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及一種B環(huán)二氧六環(huán)的二氫黃酮醇木脂素化合物或其可藥用鹽用于制備降低乙肝病毒表面抗原HBsAg和乙肝e抗原HBeAg、 抑制HBV DNA復(fù)制、或治療乙型肝炎病毒感染疾病藥物的用途。該黃酮木脂素具有極顯著 的抑制HBsAg和HBeAg活性，在20微克/毫升濃度下其清除HBsAg和HBeAg的強(qiáng)度分別為 34. 3%和19. 9%，分別是陽性對(duì)照藥物(10000單位/毫升的α -干擾素)相應(yīng)活性的2. 1 倍和1.2倍；同時(shí)，在該濃度時(shí)其對(duì)HBV DNA顯示出大于57%的抑制率，是α -干擾素相應(yīng) 抑制率的1. 5倍。以上藥效學(xué)結(jié)果表明該黃酮木脂素或其可藥用鹽可預(yù)期用于制備清除 HBsAg和HBeAg、抑制HBV DNA復(fù)制、治療乙型肝炎病毒感染疾病非核苷類藥物的用途。
背景技術(shù)：
乙型肝炎(乙肝)是由乙型肝炎病毒HBV引起的傳染病。HBV是嗜肝DNA病毒科 hepadnaviridae的一員，其形狀為直徑42納米的球形顆粒。HBV是奇特的病毒，在其它動(dòng) 物中較少有傳染性，唯有在人體或者靈長(zhǎng)類動(dòng)物黑猩猩體內(nèi)才能得以復(fù)制。該病毒通過乙 肝病毒攜帶者和乙肝病人的血液、唾液、精液、陰道分泌物進(jìn)行傳播，具有慢性攜帶狀態(tài)。乙 肝在我國(guó)廣泛流行，因其分為垂直傳播、水平傳播、家庭內(nèi)傳播、醫(yī)源性傳播和性傳播等多 種方式，對(duì)人群感染率高，在某些地區(qū)感染率達(dá)到35%以上。據(jù)有關(guān)資料，肝炎檢測(cè)陽性的 患者已經(jīng)達(dá)到1.89億，而應(yīng)就診未就診人數(shù)(攜帶者)將近4億，是當(dāng)前危害人民健康最 嚴(yán)重的傳染病之一。乙肝臨床表現(xiàn)多樣化，易發(fā)展為慢性乙型肝炎(CHB)和肝硬化，少數(shù)病 人可轉(zhuǎn)變?yōu)樵l(fā)性肝癌。乙肝表面抗原(HBsAg)是乙肝病毒的外殼蛋白，HBsAg陽性是判斷HBV感染的金 標(biāo)準(zhǔn)。HBsAg陽性、但無肝炎癥狀出現(xiàn)者成為HBV病毒攜帶者。HBsAg滴度越大，其合并乙 肝核心抗原HBeAg、HBV DNA陽性和DNA多聚酶活性升高的幾率就越大，因而傳染性越強(qiáng)。 因此，抑制HBsAg的分泌和復(fù)制是研發(fā)抗乙肝病毒藥物中的一個(gè)重要靶標(biāo)和檢測(cè)標(biāo)的。北 京地壇醫(yī)院吳淑云等報(bào)告乙肝HBsAg清除和乙肝閉環(huán)共價(jià)DNA(cccDNA)存在一定相關(guān)性， 清除HBsAg是cccDNA水平顯著降低的標(biāo)志。2002年，在《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》發(fā)表研究結(jié) 果之研究者認(rèn)為對(duì)于CHB患者，如在肝硬化前獲HBsAg清除，則其肝硬化和肝細(xì)胞癌發(fā)生 率將降低60倍。美國(guó)肝病研究協(xié)會(huì)AASLD、亞太肝臟研究協(xié)會(huì)APASL和歐洲肝臟研究協(xié)會(huì) EASL的指南中均將HBsAg血清清除作為治療終點(diǎn)判定標(biāo)準(zhǔn)之一。據(jù)2008年歐洲肝臟研究學(xué)會(huì)年會(huì)報(bào)道聚乙二醇干擾素α -2a治療CHB患者48 周后停藥，隨訪1、2、3、4年，其HBsAg清除率分別為3%、6%、8%和11%，而單獨(dú)用拉米夫 定者對(duì)HBsAg清除率于停藥后1、2、3、4年僅為0%、0%、0%和3%。因而該干擾素被認(rèn)為 是治療HBeAg陰性CHB患者最佳治療選擇?？梢姲l(fā)現(xiàn)能夠高效清除HBsAg的藥物具有重大 的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益。乙肝e抗原HBeAg是乙肝病毒HBV內(nèi)核的結(jié)構(gòu)蛋白，在乙肝病毒繁殖時(shí)大量產(chǎn)生。 乙肝病毒HBV具有所有已知DNA病毒中最小的基因組(僅3. 2kb)，其基因主要編碼五種蛋白(S、C、E、P、X)。C蛋白為病毒核心蛋白，而E蛋白是C蛋白的一部分，成為乙肝e抗原(HBeAg)，其是已經(jīng)編碼好但未組裝到病毒顆粒中的蛋白，在病毒復(fù)制時(shí)會(huì)分泌到患者血液 中去。臨床上，通常將血清HBeAg作為HBV復(fù)制、傳染性、病情嚴(yán)重程度以及對(duì)其進(jìn)行治療 應(yīng)答進(jìn)行評(píng)價(jià)的重要標(biāo)志物。該抗原與HBV DNA密切相關(guān)，是臨床上表達(dá)病毒復(fù)制非常實(shí) 用的血清標(biāo)志物。血清標(biāo)志物HBeAg陽性患者說明其體內(nèi)有HBV復(fù)制，故而有較高的傳染 性?；颊逪BeAg表達(dá)越高說明該患者傳染性越強(qiáng)。同理，抑制HBeAg的分泌和復(fù)制也是研 發(fā)抗乙肝病毒藥物中的一個(gè)重要靶標(biāo)和檢測(cè)標(biāo)的。HBeAg清除說明體內(nèi)有著持續(xù)的HBV抑 制，ALT正常，組織炎癥壞死減輕，肝硬化發(fā)生的幾率降低。因此，血清HBeAg被認(rèn)為能夠反 映更為穩(wěn)定的治療效果，HBeAg血清清除標(biāo)志著患者免疫系統(tǒng)開始發(fā)揮作用。2002年，在 《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》發(fā)表研究結(jié)果之研究者認(rèn)為對(duì)于CHB患者，如在肝硬化前獲HBeAg 清除，則其肝硬化和肝細(xì)胞癌發(fā)生率將降低10倍。美國(guó)肝病研究協(xié)會(huì)AASLD、亞太肝臟研究 協(xié)會(huì)APASL和歐洲肝臟研究協(xié)會(huì)EASL的指南中均將HBeAg血清清除作為治療終點(diǎn)判定標(biāo) 準(zhǔn)之一。所以，能夠抑制、降低HBeAg表達(dá)或活性的藥物也即屬于治療乙肝病毒感染有效藥 物。目前，對(duì)乙肝患者的用藥主要分為保肝降酶、抗病毒、抗肝纖維化和調(diào)節(jié)免疫等數(shù) 個(gè)大類?？共《臼歉痉椒?，而保肝降酶只是輔助治療，多治標(biāo)而鮮見治本。近些年來取 得進(jìn)展的還是在于抗病毒藥物治療方面的研究。然而，目前對(duì)于病毒性乙肝臨床上的治療 方案只能達(dá)到抑制HBV復(fù)制和繼發(fā)感染，最主要藥物仍是核苷類藥物如拉米呋啶(3-TC)、 恩替卡韋、阿德福韋(ADV)、替比夫定等，還有處于臨床試驗(yàn)期中的emtricitabine、 tenofoviiNclevuding等。在我國(guó)，拉米呋啶已經(jīng)成為醫(yī)保用藥，應(yīng)用于大批HBV患者。核 苷類藥物部分優(yōu)點(diǎn)為生物利用度高，口服較安全。然而，它們雖然能有效地控制病情，但一 則售價(jià)昂貴；二則長(zhǎng)期使用均可出現(xiàn)耐藥性，以及停藥后出現(xiàn)HBV DNA、ALT及肝組織學(xué)的 不同程度的反彈；三是長(zhǎng)期使用核苷類藥物出現(xiàn)的較為明顯的眾所周知的不良作用，例如 腎臟損傷、嬰兒致畸等。最為頭痛的是病毒耐藥的出現(xiàn)大大降低了治愈率，因?yàn)楹塑疹愃?物對(duì)病毒復(fù)制是可逆的，所以對(duì)大部分患者若欲達(dá)到最大療效，療程必須在一年以上，如此 其耐藥性隨之出現(xiàn)，就達(dá)不到預(yù)期之效果。核苷類藥物還有難以清除cccDNA、治療一年后 HBsAg難以陰轉(zhuǎn)等不足之處。干擾素(α、β_干擾素)以及重組干擾素類等來源于人白細(xì)胞的生物工程類抗病 毒藥物近期成為研究和治療CHB熱點(diǎn)藥物，其具有抗病毒和免疫調(diào)節(jié)雙重作用。其既可通 過抗病毒作用抑制病毒復(fù)制從而減輕肝臟細(xì)胞炎癥反應(yīng)，減少肝細(xì)胞損害，延緩病情發(fā)展 從而起到改善病人臨床癥狀和肝臟生理功能；又可以增強(qiáng)免疫作用，通過加強(qiáng)體內(nèi)自然殺 傷細(xì)胞和輔助性T細(xì)胞的作用，尤其是可以促進(jìn)殺傷T細(xì)胞去殺傷被病毒感染細(xì)胞，因此間 接起到抗病毒作用。干擾素治療CHB患者獲得的HBsAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換比拉米呋啶更為持久， 2003年《消化道》雜志上一項(xiàng)研究顯示干擾素治療組HBsAg的3年復(fù)發(fā)率顯著低于拉米 呋啶組，且長(zhǎng)效干擾素可以每周使用一次，較為方便。因此，干擾素日漸成為臨床上用于治 療慢性乙肝病毒的首選藥物之一，但其副作用和不良反應(yīng)報(bào)道較多，總有效率不高，價(jià)格昂 貴，患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)大，因而造成臨床上難以廣泛使用，且對(duì)失代償肝硬化患者不適宜應(yīng)用。近幾年隨著肝病的研究，發(fā)展了標(biāo)準(zhǔn)化的HBV DNA的分析，大大推進(jìn)了對(duì)乙肝患者 病情的了解。HBV DNA的定量分析能預(yù)測(cè)乙肝的嚴(yán)重性及其預(yù)后，因?yàn)镠BV DNA持續(xù)陽性(即持續(xù)病毒血癥)容易使乙肝病情進(jìn)展和加重；高乙肝病毒(HBV DNA)含量容易促進(jìn)肝硬 化的形成；HBV DNA持續(xù)存在是肝細(xì)胞癌(HCC)發(fā)生的高危因素，特別是病毒含量較高、病 程較長(zhǎng)、年齡較大或合并其它肝病者；持續(xù)高濃度的HBV DNA存在，可導(dǎo)致失代償性肝硬化 及原發(fā)性肝重癥的死亡率明顯增加。同時(shí)必須認(rèn)識(shí)到，HBV DNA水平與肝臟組織學(xué)的關(guān)系極 其密切文獻(xiàn)報(bào)道經(jīng)抗病毒治療，肝臟纖維化的改善和消除明顯；近期國(guó)際肝病會(huì)議報(bào)導(dǎo)， 強(qiáng)效和低耐藥性的抗病毒治療，隨著HBV DNA的降低和轉(zhuǎn)陰，而觀察到肝硬化可出現(xiàn)不同程 度的逆轉(zhuǎn)，因此現(xiàn)在主張肝硬化也應(yīng)進(jìn)行抗病毒治療因此，HBV DNA指標(biāo)在抗病毒治療中的應(yīng)用也起著舉足輕重的作用HBV DNA的水 平是決定慢性乙型肝炎是否需要抗病毒治療的重要指標(biāo)；根據(jù)HBV DNA的不同情況分別制 定出HBeAg陽性或HBeAg陰性的不同治療標(biāo)準(zhǔn)和要求；在抗病毒治療中，根據(jù)HBVDNA的治 療反應(yīng)，判斷是否病毒學(xué)早期應(yīng)答進(jìn)而決定長(zhǎng)期用藥的策略以取得持續(xù)性的病毒學(xué)應(yīng)答， 達(dá)到持續(xù)病毒抑制的目的；根據(jù)HBVDNA的病毒學(xué)的應(yīng)答情況，創(chuàng)造HBeAg血清學(xué)的轉(zhuǎn)換基 礎(chǔ)和條件，以達(dá)到其良好的中間治療目標(biāo)；根據(jù)HBV DNA持續(xù)抑制情況爭(zhēng)取病毒持續(xù)陰性， 以爭(zhēng)取達(dá)到抗病毒最終治療目標(biāo)；根據(jù)HBV DNA持續(xù)完全受到抑制，也顯示出了 cccDNA的 不同程度好轉(zhuǎn)和消失；在抗病毒治療中，以HBV DNA的變化來評(píng)估和預(yù)防抗病毒藥物所引 起的病毒變異及耐藥發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)；一旦發(fā)生病毒變異或耐藥時(shí)，HBV DNA的變化是唯一的最 先的信號(hào)和診斷依據(jù)，也是治療耐藥和改變治療策略的指導(dǎo)和依據(jù)。綜上所述，對(duì)HBV DNA的抑制程度在乙肝的進(jìn)一步診斷和治療上有著新的重大意 義，對(duì)療效的觀察，對(duì)評(píng)估乙肝預(yù)后及耐藥危險(xiǎn)性均有較大的指導(dǎo)作用。由上述因素可知 抑制乙肝病毒在體內(nèi)增殖的另外一個(gè)根本環(huán)節(jié)在于抑制HBV DNA的復(fù)制。HBV DNA水平的 降低或者低于檢測(cè)水平是檢驗(yàn)抗病毒藥物的另外一把金鑰匙。所以，亞太肝臟研究學(xué)會(huì)和 歐洲肝臟研究學(xué)會(huì)均將HBV DNA檢測(cè)不到作為乙型肝炎病毒患者治療終點(diǎn)之一。我國(guó)新藥 開發(fā)指南中也將受測(cè)化合物對(duì)于HBV DNA的抑制強(qiáng)度視為必須完成的測(cè)試項(xiàng)目之一。拉米 呋啶之所以能夠成為首選核苷類藥物便是因?yàn)槠渚哂袕?qiáng)效的抑制HBV DNA復(fù)制之活性。因 此既能抑制HBV DNA復(fù)制又能抑制HBsAg和/或HBeAg的化合物將更有希望成為治療乙肝 患者的創(chuàng)新性藥物。必須說明的是目前使用的抗病毒藥物其實(shí)只是病毒復(fù)制的抑制劑，并不能直接 殺滅病毒和破壞病毒體，否則就會(huì)損傷宿主細(xì)胞。這些抗病毒藥物(多為核苷類藥物)還 存在上述毒副作用大、易引起病毒基因突變、停藥后易反跳等缺點(diǎn)。因此，開發(fā)新型抗病毒 藥物是當(dāng)今藥物研發(fā)領(lǐng)域的當(dāng)務(wù)之急，其對(duì)于治療我國(guó)大量的乙肝患者和病毒攜帶者、控 制傳染源等都有著極其重要的社會(huì)意義和經(jīng)濟(jì)意義。所以，從民族民間長(zhǎng)期使用的天然藥 物中發(fā)現(xiàn)新的非核苷類乙肝病毒抑制劑及此類能夠降低HBsAg、HBeAg或抑制HBV DNA復(fù)制 的先導(dǎo)化合物有著很大的指導(dǎo)性意義，并有著遼闊的發(fā)展前景。基于此目的，發(fā)明人以前曾完成多項(xiàng)抗乙肝病毒天然產(chǎn)物及其結(jié)構(gòu)改造衍生物的 專利和文章，發(fā)現(xiàn)了多種抑制乙肝病毒表面抗原HBsAg或乙肝病毒e抗原HBeAg活性、抑制 HBV DNA復(fù)制的化合物，從而說明從天然產(chǎn)物及其合成衍生物中篩選出能夠降低HBsAg或 HBeAg、防治乙肝病毒感染的創(chuàng)新性藥物是可行的[參見“一類對(duì)映桉烷醇類倍半萜抑制 乙肝病毒的醫(yī)藥用途”(趙昱、劉光明、于榮敏、李海波等；ZL 200610053827. 4) ；“2β-羥基 冬青酸抑制乙肝病毒的醫(yī)藥用途”(李校堃、趙昱、黃可新、李海波等；ZL200610053749. 8)；“2 α，3 β - 二羥基-5，11(13) - 二烯桉烷_12_酸抑制乙肝病毒的醫(yī)藥用途”(趙昱、張禮和、孫漢董、李海波等；ZL 200610053601.4)；“艾里莫芬烷內(nèi)酯抑制乙肝病毒的用途及其藥物 組合物”(趙昱、李海波、楊雷香、周長(zhǎng)新等；ZL 03153691.3)；“一種艾里莫芬內(nèi)酯酸天然產(chǎn) 物及其應(yīng)用”(趙昱、周長(zhǎng)新、施樹云、王曉雨等；ZL 200610053575. 5)；“一種桉烷型倍半 萜酸及其用途”(趙昱、劉光明、李海波、巫秀美等；ZL 200610053579. 3)；“六棱菊屬植物提 取物抑制單純皰疹病毒及乙肝病毒的用途”(趙昱、周長(zhǎng)新、于榮敏、白驊；CN 1989989Α)； “1 β _氧代_5，11 (13)- 二烯桉烷-12-酸抑制乙肝病毒的醫(yī)藥用途”(趙昱、李校堃、黃可 新、李海波等；CN 1927197Α) ；“ 1 β -羥基冬青酸抑制乙肝病毒的醫(yī)藥用途”(趙昱、李校堃、 黃可新、巫秀美等；CN 1935131Α)；“對(duì)映艾里莫芬烷酸及其抑制乙肝表面抗原的醫(yī)藥用 途”(黃可新、李校堃、王曉雨、趙昱等；CN 101239054) ；“ 1_氧-取代苯甲?？崴峄衔?及其抑制乙肝病毒用途”(李校堃、胡利紅、巫秀美、趙昱等；CN101293836)；發(fā)明人已發(fā)表 之抑制 HBsAg、HBeAg 以及 HBV DNA 等活性文章參見“ In Vitro Antiviral Activity of Three EnantiomericSesquiterpene Lactones from Senecio Species Against Hepatitis B Virus，，，Haibo Li (李海波)，Changxin Zhou (周長(zhǎng)新)，Xiumei Wu (巫秀美)，Yu Zhao* ( M S )等，Antiviral Chemistry&Chemotheriipy，2005，16，277—282 ；"Evaluation of Antiviral Activity of Compounds Isolated fromRanunculus sieboldii Miq. and Ranunculus sceleratus L", Haibo Li (李海波)，Changxin Zhou (周長(zhǎng)新)， Xiumei Wu(巫秀美)，Yu Zhao* (趙昱)等，Planta Medica，2005，71 (12)，1128-1133 ； "Application ofhigh-speed counter-current chromatography for the isolation of antiviraleremophiIenolides from Ligularia atroviolacea，，，Shi, Shu-Yun(施樹云)， Hai-Bo (李海波)，Zhao，Yu (趙昱)等，Biomedical Chromatography, 2008, 22 (9), 985-991 ； "Purification and identification of antiviralcomponents from Laggera pterodonta by high-speed counter-currentchromatographyShuyun Shi(施豐對(duì)云)，Yu Zhao(M 昱)等，Journalof Chromatography B，2007，859，119-124]。毋庸置疑，繼續(xù)從天然產(chǎn)物及 其結(jié)構(gòu)改造衍生物中尋找能夠清除HBsAg或HBeAg、抑制HBVDNA復(fù)制的先導(dǎo)化合物是非常 有必要性和緊迫性的，也因此被國(guó)家科技部列為新藥研制重大專項(xiàng)之一。
在上述治療CHB藥物中，還有一類是保肝類藥物，其臨床大量使用之典型為存在 于菊科植物水飛薊的種子中的水飛薊素。水飛薊已在臨床上廣泛應(yīng)用，在市場(chǎng)上其商品 名為L(zhǎng)egalon 利肝隆或Flavobion ，其代表性化合物當(dāng)屬黃酮木脂素水飛薊賓。黃酮 木脂素化合物屬于雜木脂素類，是由一分子苯丙素和一分子黃酮結(jié)合而成的一類天然產(chǎn) 物。水飛薊中水飛薊賓含量最多，活性也最高。該藥作用主要有以下幾點(diǎn)(一)抗自由 基活性水飛薊素對(duì)于由四氯化碳、半乳糖胺、醇類和其他肝毒素造成的肝損害具有保護(hù) 作用。1990年Lotteron等人報(bào)道了在小鼠肝微粒體內(nèi)，水飛薊素能減少由四氯化碳代謝 引起的體外脂質(zhì)過氧化及由還原型輔酶單獨(dú)引起的過氧化作用，這些都表明水飛薊素為 鏈中斷抗氧化劑或?yàn)樽杂苫宄齽?二)保護(hù)肝細(xì)胞膜通過抗脂質(zhì)過氧化反應(yīng)維持細(xì) 胞膜的流動(dòng)性，保護(hù)肝細(xì)胞膜。還能阻斷真菌毒素鬼筆毒環(huán)肽和α-鵝膏蕈堿等與肝細(xì) 胞上特異受體的結(jié)合，抑制其對(duì)肝細(xì)胞的攻擊及跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，中斷其肝腸循環(huán)，從而增強(qiáng)肝 細(xì)胞膜對(duì)于多種損害因素的抵抗力。(三)促進(jìn)肝細(xì)胞的修復(fù)和再生水飛薊賓進(jìn)入細(xì) 胞后可以與雌二醇受體結(jié)合，并使之激活，活化的受體可以增強(qiáng)肝細(xì)胞核內(nèi)RNA聚合酶1的活性，使RNA轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)，促進(jìn)酶及蛋白質(zhì)的合成，并間接促進(jìn)DNA的合成，有利于肝細(xì)胞 的修復(fù)和再生。(四)抗腫瘤作用各種活性氧能氧化鳥嘌呤形成8-羥基鳥嘌呤，造成 DNA損傷，進(jìn)而引起腫瘤，水飛薊賓作為一個(gè)有效的抗自由基物質(zhì)也顯示了預(yù)防和治療腫 瘤的作用。三十多年的臨床實(shí)驗(yàn)證明該藥具有確切的療效和低毒性(參閱Flora，K.等， Am. J. Gastroenterol, 1998,93,139-143 ；Sailer, R.等，Drugs,2001,61(14),2035-2063 ；
Gazak, R.等，Curr. Med. Chem. 2007，14，315-338 ； Svagera5 Ζ.等，Phytother. Res. 2003， 17，524-530 ； Gazak, R.等，Bioorg. Med. Chem. 2004，12，5677-5687 ；Varga, Ζ.等； Phytothe. Res. 2001，15，608-612. Singh，R. P.等，Curr. CancerDrug Tar. 2004,4,1-11) 因此，以水飛薊賓為代表的黃酮木脂素類化合物引起了越來越多的關(guān)注，如發(fā)明人于 2006-2009年間制備并報(bào)道的多個(gè)系列水飛薊賓類衍生物也具有顯著的抗氧化活性(楊雷 香、趙星等，"Design ，synthesis and examination of neuron protective properties of alkenylated and amidateddehydro-silybin derivatives", Journal of Medicinal Chemistry，2009，52(23)，7732-7752 ；汪峰，趙昱等，“Preparation of C-23 esterified silybinderivatives and evaluation of their lipid peroxidation inhibitory and DNAprotective properties", Bioorganic&Medicinal Chemistry,2009,17(17)， 6380-6389 ；楊雷香，等，"Synthesis and antioxidant propertiesevaluation of novel silybin analogues，，，Journal of Enzyme Inhibition andMedicinal Chemistry, 2006，21(4), 399-404 ；等等)。在發(fā)明人報(bào)道的上述文章中，經(jīng)發(fā)明人設(shè)計(jì)并合成出的多個(gè) 系列之A環(huán)、B環(huán)、E環(huán)、23位取代的黃酮木脂素類化合物都顯示出強(qiáng)效捕獲DPPH自由基和 超氧陰離子自由基的活性、抗氧化活性、以及保護(hù)PC12細(xì)胞的活性。但是顯而易見上述研 究?jī)H集中于研究水飛薊賓類黃酮木脂素的抗氧化作用和細(xì)胞保護(hù)作用。近期(2006年)，謝軍報(bào)道了聯(lián)合應(yīng)用具有抗病毒和免疫調(diào)節(jié)雙重作用的干擾素 和保肝護(hù)肝的水飛薊賓磷脂復(fù)合物治療慢性乙肝的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合用藥對(duì)患者體內(nèi)ALT、 AST值降低比單獨(dú)用干擾素效果明顯，說明水飛薊賓磷脂復(fù)合物能加強(qiáng)干擾素的治療慢性 乙肝之作用。但是，類似的治療方案仍是將水飛薊賓等黃酮木脂素作為輔助用藥，且主要是 用于保護(hù)肝細(xì)胞膜而非直接用其實(shí)施抗病毒作用。左國(guó)營(yíng)等(左國(guó)營(yíng)，劉樹玲，徐貴麗，世界華人消化雜志，2006年14卷13期， 1241-1246頁)綜述了近20年來藥用植物成分體外抗HBV活性的研究進(jìn)展，文中論及多種 天然產(chǎn)物，其中并沒有報(bào)道任何黃酮木脂素類化合物具有抗HBV活性的相關(guān)記錄，尤其是 水飛薊賓類天然產(chǎn)物及其衍生物，國(guó)內(nèi)幾乎無人涉及，僅由發(fā)明人團(tuán)隊(duì)對(duì)其進(jìn)行了前人未 加注意的結(jié)構(gòu)改造和抗氧化活性研究。以水飛薊賓為代表的黃酮木脂素化合物雖然具有以上所述之抗氧化療效，然而其 見報(bào)于抗病毒治療方面之文獻(xiàn)相對(duì)較少，黃酮木脂素類化合物治療DNA類病毒感染尤其是 其用于抗乙肝病毒方面(包括抑制HBsAg或HBeAg、抑制HBV DNA復(fù)制)的應(yīng)用尚未得到有 效開發(fā)，故此從黃酮木脂素中尋找抗乙肝病毒領(lǐng)域的活性化合物，亦即將黃酮木脂素結(jié)構(gòu) 改造使其具有抗DNA類病毒活性是一個(gè)嶄新的領(lǐng)域；從其中發(fā)現(xiàn)清除HBsAg或HBeAg、抑 制HBV DNA復(fù)制的先導(dǎo)化合物更是前人所未嘗試過的挑戰(zhàn)。為了探索這個(gè)領(lǐng)域，我們?cè)O(shè)計(jì) 并制備了與水飛薊賓結(jié)構(gòu)有所差異的一種新的角型黃酮木脂素衍生物，也即在B環(huán)2，3位 偶合成二氧六環(huán)，形成C環(huán)/B環(huán)/D環(huán)呈翻轉(zhuǎn)角式環(huán)系空間結(jié)構(gòu)，而水飛薊賓因B環(huán)上為3，4位偶合成二氧六環(huán)方式，故其C環(huán)/B環(huán)/D環(huán)呈線性伸展環(huán)系空間結(jié)構(gòu)。如此設(shè)計(jì)可以生 成新型空間結(jié)構(gòu)完全不同于水飛薊賓的一類新型木質(zhì)素二氫黃酮醇類化合物(也是一類 新型黃酮木脂素化合物)。以期發(fā)現(xiàn)能降低HBsAg或HBeAg、抑制HBV DNA復(fù)制的黃酮木脂 素先導(dǎo)化合物，從而將其進(jìn)一步開發(fā)成具有能清除HBsAg或HBeAg、抑制HBV DNA復(fù)制、治療 CHB的創(chuàng)新性藥物，據(jù)此完成本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供式(1)所示的B環(huán)二氧六環(huán)的二氫黃酮醇木脂素化合物或其 可藥用鹽，以及式(1)化合物或其可藥用鹽用于制備清除HBsAg或HBeAg、抑制HBV DNA復(fù) 制、治療乙型病毒性肝炎的藥物的用途。
權(quán)利要求
具有式(1)所示結(jié)構(gòu)的B環(huán)二氧六環(huán)的二氫黃酮醇木脂素化合物或其可藥用鹽；式(1)化合物的名稱為(±) 2 [2，3 二氫 3 (3 溴 5 甲氧基 4 羥基苯基) 2 羥甲基 1，4苯并二氧六環(huán) 5] 2，3 二氫 3，5，7 三羥基 4H 1 苯并吡喃 4 酮。FSA00000134480500011.tif
2. 一種制備式(1)所示結(jié)構(gòu)的B環(huán)二氧六環(huán)型二氫黃酮醇木脂素化合物的方法，其特 征是(士)-2- (2，3- 二羥基苯基)-2，3- 二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃_4_酮在銀 鹽催化下，與3-溴-5-甲氧基-4-羥基肉桂醇進(jìn)行偶合反應(yīng)而得；其中銀鹽是指碳酸銀、氧化銀或硝酸銀；無水溶劑是指無水苯、無水丙酮、無水四氫呋 喃等無水非質(zhì)子溶劑或它們的混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的B環(huán)二氧六環(huán)的二氫黃酮醇木脂素化合物或其可藥用鹽用于制備 治療乙型病毒性肝炎的藥物的用途。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的B環(huán)二氧六環(huán)的二氫黃酮醇木脂素化合物或其可藥用鹽用于制備 降低乙型肝炎病毒表面抗原HBsAg的藥物的用途。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的B環(huán)二氧六環(huán)的二氫黃酮醇木脂素化合物或其可藥用鹽用于制備 清除乙肝e抗原HBeAg的藥物的用途。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的B環(huán)二氧六環(huán)的二氫黃酮醇木脂素化合物或其可藥用鹽用于制備 抑制乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸HBV DNA復(fù)制的藥物的用途。
7.一種用于清除HBsAg或HBeAg、抑制HBV DNA復(fù)制、治療乙型病毒性肝炎的藥物組合 物，其含有治療有效量的作為活性成分的根據(jù)權(quán)利要求1的B環(huán)二氧六環(huán)的二氫黃酮醇木 脂素化合物或其可藥用鹽和可藥用輔料。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的藥物組合物，其制劑形式是采用不同給藥途徑制備的注射劑、口 服制劑、貼片、皮下植埋劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及含溴二氫黃酮醇木脂素的制備及治療病毒性乙肝醫(yī)藥用途，具體涉及一種B環(huán)二氧六環(huán)的二氫黃酮醇木脂素化合物及其制備方法，以及該化合物或其可藥用鹽用于制備清除乙肝病毒表面抗原和乙肝e抗原藥物、抑制HBV DNA復(fù)制藥物的用途。其具有顯著的抑制HBsAg和HBeAg活性，在20微克/毫升濃度下其清除HBsAg和HBeAg的強(qiáng)度分別是陽性對(duì)照藥物α-干擾素相應(yīng)活性的2.1倍和1.2倍；同時(shí)，在該濃度時(shí)其對(duì)HBV DNA顯示出大于57％的抑制率。以上表明該黃酮木脂素或其可藥用鹽可預(yù)期用于制備清除HBsAg和HBeAg、抑制HBV DNA復(fù)制、治療乙型肝炎病毒感染疾病之非核苷類藥物的用途。
文檔編號(hào)A61K31/357GK101955478SQ20101018145
公開日2011年1月26日 申請(qǐng)日期2010年5月25日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月25日
發(fā)明者巫秀美, 曾蘇, 杜一民, 楊哲, 程偉, 趙昱, 陽應(yīng)華, 龔景旭 申請(qǐng)人:大理學(xué)院