專利名稱：含有修飾型超氧化物歧化酶的吸入劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有超氧化物歧化酶的吸入劑，詳細(xì)地說，本發(fā)明涉及含有卵磷脂化超氧化物歧化酶(以下有時(shí)簡記為PC-S0D)作為有效成分的、特別用于治療間質(zhì)性肺炎等肺疾病的吸入劑。
背景技術(shù)：
超氧化物歧化酶(以下有時(shí)簡記為SOD)是1965年由Huber等人從牛的血液中作為抗炎蛋白提取出的生理活性蛋白質(zhì)，已明確其可以特異性地清除作為活性氧之一的過氧化物陰離子(02_)。在生物體內(nèi)，活性氧主要從嗜中性白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等吞噬細(xì)胞中釋放出來用于殺菌，而且通常相對(duì)于過量的活性氧，存在以SOD為首的各種抗氧化物質(zhì)，從而防御活性氧對(duì)正常細(xì)胞造成的傷害。但是，如果活性氧超過SOD等抗氧化物質(zhì)所產(chǎn)生的抗氧化能力而過量存在的話， 則在其附近存在的物質(zhì)(特別是細(xì)胞膜)會(huì)受到活性氧的攻擊，出現(xiàn)各種病態(tài)。事實(shí)上，活性氧被證明其具有強(qiáng)有力的組織損傷性以來，人們已經(jīng)解明活性氧是炎癥、過敏、缺血再灌流所致的組織損傷；抗癌劑所致的肺纖維癥；等多種病態(tài)的發(fā)生-惡化因子。在這種狀況下，人們發(fā)現(xiàn)了特異性地清除活性氧的S0D，并對(duì)其臨床應(yīng)用的可能性廣泛進(jìn)行了研究。本發(fā)明人等也對(duì)SOD的臨床適用性做了深入研究，在研究過程中認(rèn)識(shí)到， 為了提高SOD的臨床效果，重要的是，抑制SOD從腎臟排泄以維持其在血中的濃度、以及提高其與細(xì)胞膜的親和性從而將存在于細(xì)胞膜上的過剩的活性氧清除，并且，本發(fā)明人研究了各種修飾型S0D，提出了卵磷脂化超氧化物歧化酶(PC-SOD)(專利文獻(xiàn)1、專利文獻(xiàn)9)。該P(yáng)C-SOD是利用基因重組技術(shù)制備Cu/Zn-人超氧化物歧化酶(SOD)后使每1分子S0D( 二聚體)上化學(xué)鍵合平均4分子的卵磷脂衍生物(磷脂酰膽堿衍生物PC)而得到的卵磷脂化SOD。PC-SOD對(duì)細(xì)胞膜具有高親和性，在病變部位確認(rèn)到針對(duì)作為發(fā)病因子的缺血-再灌流障礙、蒽環(huán)系抗癌劑所誘發(fā)的心肌癥等活性氧參與的疾病具有較高治療效果，已經(jīng)提出了以該P(yáng)C-SOD作為有效成分的急性心力衰竭治療劑(專利文獻(xiàn)2)、抗病毒劑 (專利文獻(xiàn)幻、狼瘡性腎炎治療劑(專利文獻(xiàn)4)、伴隨腦血管障礙的功能障礙改善劑(專利文獻(xiàn)幻、抗纖維化劑(專利文獻(xiàn)6)或抗過敏疾病處置劑(專利文獻(xiàn)7)、燙傷治療劑(專利文獻(xiàn)8)等各種方案。另外，肺炎是病原體侵入肺泡區(qū)域發(fā)生增殖并引起生物體反應(yīng)的感染癥，另一方面，間質(zhì)性肺炎是以肺泡壁為主要病變部位(以肥厚、細(xì)胞浸潤、纖維化為主要特征)并且延長炎癥-纖維化的疾病。該間質(zhì)性肺炎分為原因已明的間質(zhì)性肺炎和原因未明的間質(zhì)性肺炎，是一種難治愈的疾病，該疾病由炎癥導(dǎo)致細(xì)胞、膠原蛋白等增加，肺泡壁增厚，氧的攝取量減小，從而陷入氣促憋悶的狀態(tài)(呼吸困難)。間質(zhì)性肺炎中也有暫時(shí)性的間質(zhì)性肺炎，但大多數(shù)情況下肺硬化慢慢地發(fā)展，進(jìn)而不可逆性惡化，肺變硬，發(fā)展為不能維持呼吸的肺纖維化癥。在該間質(zhì)性肺炎中，特發(fā)性間質(zhì)性肺炎(idiopathic interstitial pueumonias IIP)并不是一種疾病，而是原因不明的間質(zhì)性肺炎的總稱，該病名與美國的特發(fā)性肺纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis :IPF)基本上為同義詞。在日本，特發(fā)性間質(zhì)性肺炎是1981年由間質(zhì)性肺疾病調(diào)查研究班推薦使用的病名，其癥狀大多緩慢發(fā)展，但有時(shí)產(chǎn)生急性惡化，無論哪種情況均為預(yù)后不良，大多瀕臨死亡。現(xiàn)在，在日本，作為臨床病理學(xué)上的疾病單元，特發(fā)性間質(zhì)性肺炎被分類為特發(fā)性肺纖維化、非特異性間質(zhì)性肺炎、急性間質(zhì)性肺炎、隱源性機(jī)化性肺炎、呼吸性細(xì)支氣管炎伴間質(zhì)性肺疾病、脫屑性間質(zhì)性肺炎、淋巴細(xì)胞間質(zhì)性肺炎等。特發(fā)性間質(zhì)性肺炎的原因尚不明，據(jù)推測，肺的纖維化除多種基因背景以外，還與炎癥、免疫相關(guān)。近年來，已知間質(zhì)性肺炎作為抗癌劑的副作用而發(fā)病，特別是作為吉非替尼 (Gefitinib)的嚴(yán)重副作用，間質(zhì)性肺炎成為了問題。不管怎樣，過氧化物陰離子等活性氧、鐵絡(luò)合物均參與伴隨間質(zhì)性肺炎發(fā)病的細(xì)胞毒性作用的誘導(dǎo)或過敏反應(yīng)的誘發(fā)，因此可以認(rèn)為，通過利用SOD等清除這些活性氧，抑制這些誘導(dǎo)，其結(jié)果能夠?qū)﹂g質(zhì)性肺炎進(jìn)行治療。于是，本發(fā)明人立足于上述想法，使用在先提出的細(xì)胞親和性高的卵磷脂化超氧化物歧化酶(PC-SOD)，研究了針對(duì)間質(zhì)性肺炎患者、以及特發(fā)性間質(zhì)性肺炎患者治療的效果，結(jié)果確認(rèn)到，該P(yáng)C-SOD發(fā)揮了極為有效的治療效果。但是，其效果尚不充分，還需要進(jìn)一步的改良。在這種現(xiàn)狀下，本發(fā)明人進(jìn)一步進(jìn)行了研究并確認(rèn)到，向肺組織直接給予PC-SOD 的經(jīng)呼吸道給藥或噴霧給藥能夠以高濃度維持肺組織中的PC-SOD濃度，對(duì)間質(zhì)性肺炎極其有效，以至完成了本發(fā)明。迄今為止，將PC-SOD本身直接對(duì)肺組織經(jīng)呼吸道給藥來治療間質(zhì)性肺炎、特別是特發(fā)性間質(zhì)性肺炎的想法尚未具體地存在。在這點(diǎn)上本發(fā)明可以說是極為獨(dú)特的。
日本特開平9-117279號(hào)公報(bào)日本特開平9-5觀43號(hào)公報(bào)日本特開平9-59178號(hào)公報(bào)日本特開平9-110717號(hào)公報(bào)日本特開平10-338645號(hào)公報(bào)日本特開2001-2585號(hào)公報(bào)日本特開2001-151695號(hào)公報(bào)日本特開2006-169128號(hào)公報(bào)日本特開2001-64199號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)1
專利文獻(xiàn)2
專利文獻(xiàn)3
專利文獻(xiàn)4
專利文獻(xiàn)5
專利文獻(xiàn)6
專利文獻(xiàn)7
專利文獻(xiàn)8
專利文獻(xiàn)9

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明鑒于上述現(xiàn)狀，其課題在于提供一種以PC-SOD作為有效成分的用于間質(zhì)性肺炎的吸入劑，特別是提供一種用于治療特發(fā)性(急性)或慢性間質(zhì)性肺炎的吸入劑。用于解決所述課題的本發(fā)明的基本方式為一種吸入劑，其特征在于，其以下述通式(I)表示的卵磷脂化超氧化物歧化酶作為有效成分，
SOD， (Q-B)m (I)(式中，SOD’表示超氧化物歧化酶的殘基；Q表示化學(xué)橋聯(lián)；B表示在甘油的2位具有羥基的溶血卵磷脂的、除去了所述羥基的氫原子后的殘基；m為溶血卵磷脂相對(duì)于1分子超氧化物歧化酶的平均鍵合數(shù)，表示1以上的整數(shù))。更優(yōu)選的吸入劑的特征在于，在本發(fā)明使用的式(I)表示的卵磷脂化超氧化物歧化酶中，Q為-C (0) - (CH2)n-C (0)-(式中，η表示2以上的整數(shù))。進(jìn)一步具體地說，本發(fā)明涉及一種吸入劑，其特征在于，SOD’是人超氧化物歧化酶的殘基，具體地說，SOD’是人超氧化物歧化酶的氨基酸序列中的第111位的氨基酸變?yōu)?S-(2-羥基乙硫基)半胱氨酸后的超氧化物歧化酶修飾體的殘基。最具體地說，本發(fā)明涉及一種吸入劑，其特征在于，超氧化物歧化酶為在活性中心含有銅和鋅的超氧化物歧化酶。進(jìn)而，本發(fā)明涉及含有卵磷脂化超氧化物歧化酶的同時(shí)含有其穩(wěn)定化劑的吸入劑，其中含有糖成分、特別是蔗糖作為穩(wěn)定化劑。最具體地說，本發(fā)明涉及一種吸入劑，其特征在于，該吸入劑處于吸入用微粉制劑的形態(tài)、或者吸入用水溶液或懸浮液制劑的形態(tài)，并且，其是經(jīng)呼吸道給藥的吸入劑。并且，本發(fā)明涉及一種吸入劑，其用于治療或預(yù)防間質(zhì)性肺炎，特別地，該吸入劑的特征在于，間質(zhì)性肺炎是作為抗癌劑的副作用而出現(xiàn)的癥狀。需要說明的是，本發(fā)明中的間質(zhì)性肺炎包括特發(fā)性間質(zhì)性肺炎，作為臨床病理學(xué)上的疾病單元，還包括被分類為特發(fā)性肺纖維化、非特異性間質(zhì)性肺炎、急性間質(zhì)性肺炎、 隱源性機(jī)化性肺炎、呼吸性細(xì)支氣管炎伴間質(zhì)性肺疾病、脫屑性間質(zhì)性肺炎、淋巴細(xì)胞性間質(zhì)性肺炎等的疾病。本發(fā)明中，作為間質(zhì)性肺炎的發(fā)病，例如通過施用藥劑或其代謝物來誘導(dǎo)細(xì)胞毒性作用或誘發(fā)過敏反應(yīng)，由于過氧化物陰離子等活性氧、鐵絡(luò)合物參與了該誘發(fā)，所以通過利用SOD等清除這些活性氧來有效抑制這些誘導(dǎo)，其結(jié)果可對(duì)間質(zhì)性肺炎進(jìn)行有效治療。 并且，本發(fā)明的吸入劑也可以用作作為抗癌劑的副作用之一的間質(zhì)性肺炎的有效治療劑。迄今，有效的間質(zhì)性肺炎治療劑尚不存在，在這種狀況下，可以用特異性的PC-SOD 進(jìn)行給藥，特別是通過經(jīng)呼吸道給藥可以以高濃度將PC-SOD給藥至肺組織，具有治療效果極高的優(yōu)點(diǎn)。并且，與現(xiàn)有的SOD相比較，本發(fā)明使用的PC-SOD與細(xì)胞膜的親和性優(yōu)異，清除局部病變部位的過氧化物陰離子的能力高。而且，由于同時(shí)含有糖成分、特別是蔗糖作為穩(wěn)定化劑，PC-SOD本身的穩(wěn)定性變得優(yōu)異，可以使半衰期短的SOD的效果持續(xù)發(fā)揮，從而能夠有效對(duì)間質(zhì)性肺炎進(jìn)行治療，在這點(diǎn)上是特別優(yōu)異的。


圖1是表示實(shí)施例2中的肺泡清洗液中的總細(xì)胞數(shù)的圖。圖2是表示實(shí)施例2中的肺泡巨噬細(xì)胞的結(jié)果的圖。圖3是表示實(shí)施例2中的淋巴細(xì)胞的結(jié)果的圖。圖4是表示實(shí)施例2中的嗜中性白細(xì)胞的結(jié)果的圖。圖5是表示實(shí)施例3中的肺組織中的羥基脯氨酸量的結(jié)果的圖。
圖6是表示實(shí)施例4中的肺泡清洗液中的總細(xì)胞數(shù)的圖。圖7是表示實(shí)施例4中的肺泡巨噬細(xì)胞的結(jié)果的圖。圖8是表示實(shí)施例4中的淋巴細(xì)胞的結(jié)果的圖。圖9是表示實(shí)施例4中的嗜中性白細(xì)胞的結(jié)果的圖。
具體實(shí)施例方式在用于本發(fā)明所提供的間質(zhì)性肺炎治療劑的卵磷脂化超氧化物歧化酶(PC-SOD) 中，“卵磷脂”是指表示磷脂酰膽堿的通常的卵磷脂，“溶血卵磷脂”是指鍵合在卵磷脂的甘油的2位上的1分子脂肪酸脫落，在2位碳原子上鍵合有羥基的化合物。通常，使化學(xué)橋聯(lián)劑鍵合在溶血卵磷脂的2位羥基上，得到卵磷脂衍生物，使1個(gè)以上該卵磷脂衍生物與SOD結(jié)合，從而能夠得到本發(fā)明中作為有效成分使用的PC-S0D。該 PC-SOD可以用下式(I)表示SOD， (Q-B)m (I)(式中，SOD’表示超氧化物歧化酶的殘基；Q表示化學(xué)橋聯(lián)；B表示在甘油的2位具有羥基的溶血卵磷脂的、除去了所述羥基的氫原子后的殘基；m為溶血卵磷脂相對(duì)于1分子超氧化物歧化酶的平均鍵合數(shù)，表示1以上的整數(shù))。在此使用的SOD’只要能夠發(fā)揮分解生物體內(nèi)的活性氧(02_)這樣的其本來的功能，對(duì)其來源就沒有特別限定，可以廣泛使用來自各種動(dòng)植物或微生物的SOD殘基。但是， 當(dāng)考慮到作為藥品的用途時(shí)，優(yōu)選盡可能地減小SOD殘基在生物體內(nèi)的抗原性。因而，作為所使用的S0D’，優(yōu)選根據(jù)本發(fā)明的間質(zhì)性肺炎治療劑的給藥對(duì)象，適宜地選擇適當(dāng)?shù)腟OD殘基。例如，因?yàn)橐袁F(xiàn)實(shí)的間質(zhì)性肺炎患者為對(duì)象進(jìn)行給藥，所以為了盡可能減小給藥產(chǎn)生的生物體內(nèi)的抗原性，優(yōu)選使用人源的SOD殘基。因此，作為本發(fā)明的間質(zhì)性肺炎治療用的S0D，考慮到抗原性，以使用人源的SOD為宜。作為人源的S0D，特別優(yōu)選使用人源的Cu/Zn SOD(在活性中心含有銅和鋅的人源的SOD ；以下有時(shí)也簡稱為人Cu/Zn SOD)，這是因?yàn)樵揝OD在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)量多，并且已經(jīng)確立了利用基因工程手段的生產(chǎn)技術(shù)，能夠大量制備。所述人Cu/Zn SOD可以是任意的人Cu/Zn S0D，包括由人組織或培養(yǎng)細(xì)胞制造的天然的人Cu/Zn SOD;利用基因工程手段制造的人Cu/Zn SOD ；具有與天然的人Cu/Zn SOD實(shí)質(zhì)上相同的氨基酸序列的重組人Cu/Zn SOD;使這些人Cu/Zn SOD的氨基酸序列式中的部分氨基酸缺失、插入、置換或發(fā)生了化學(xué)修飾或化學(xué)改造而得到的SOD等。其中，優(yōu)選天然的人Cu/Zn SOD的氨基酸序列式中的第111位氨基酸(半胱氨酸 Cys)變?yōu)镾-(2-羥基乙硫基)半胱氨酸后的人Cu/Zn SOD。這樣的人Cu/Zn SOD詳細(xì)記載于例如專利文獻(xiàn)1(日本特開平9-117279號(hào)公報(bào))，可以按照該方法獲得。因而，記載于專利文獻(xiàn)1 (日本特開平9-117279號(hào)公報(bào))的人Cu/Zn SOD的制備構(gòu)成本說明書的一部分，本發(fā)明中使用的PC-SOD可以以這些人Cu/Zn SOD為材料而獲得。在本發(fā)明中使用的以式⑴表示的PC-SOD中，B表示的“在甘油的2位具有羥基的溶血卵磷脂的、除去了所述羥基的氫原子后的殘基”具體表示下式(II)-O-CH(CH2OR) [CH2OP (0) (0) (OCH2CH2N+ (CH3) 3) ] (II)
(式中，R為脂肪酸殘基(?；?)。作為R所表示的脂肪酸殘基(?；?，優(yōu)選碳原子數(shù)為10 觀的飽和或不飽和脂肪酸殘基，更優(yōu)選為肉豆蔻酰基、棕櫚?；?、硬脂?；?、二十酰基、二十二?；⑵渌荚訑?shù)為14 22的飽和脂肪酸殘基，特別優(yōu)選作為具有16個(gè)碳原子的飽和脂肪酸殘基的棕櫚?；?。并且，對(duì)通式(I)中Q所表示的化學(xué)橋聯(lián)沒有特別限定，只要能夠使SOD和卵磷脂橋聯(lián)而形成化學(xué)鍵(共價(jià)鍵)即可。作為這樣的化學(xué)橋聯(lián)，特別優(yōu)選殘基-C(O)-(CH2) n-C(0)_(式中，η表示2以上的整數(shù))。該殘基是除去存在于式HO-C(O)-(CH2)n-C(O)-OH 所表示的直鏈狀二羧酸或其酸酐、酯、鹵化物等的兩端的羥基(其中，對(duì)于酸酐、酯、鹵化物的情況，為相當(dāng)于存在于兩端的羥基的部分)后的殘基。在通式(I)中，當(dāng)Q為上述的直鏈狀的二羧酸殘基時(shí)，Q的一端通過酯鍵與來自上述式(II)的溶血卵磷脂殘基的羥基的氧鍵合。并且，形成了酯鍵的Q的另一端通過酰胺鍵等與SOD的氨基直接鍵合。需要說明的是，上述化學(xué)橋聯(lián)殘基中，η為2以上的整數(shù)，優(yōu)選為2 10的整數(shù)。并且，式(I)中，m表示溶血卵磷脂相對(duì)于1分子SOD的平均鍵合數(shù)。因而，m為1 以上的整數(shù)，優(yōu)選為1 12，特別優(yōu)選為4。本發(fā)明中使用的PC-SOD的制造方法、即卵磷脂衍生物與SOD (優(yōu)選人Cu/ZnSOD) 的鍵合方法可以通過例如專利文獻(xiàn)1所記載的方法來進(jìn)行。示意性地表示其優(yōu)選的PC-SOD的化學(xué)結(jié)構(gòu)時(shí)，特別優(yōu)選以下的PC-S0D。(m為鍵合的卵磷脂衍生物數(shù))S卩，其為在以E. coli (大腸桿菌)為宿主通過基因重組制造的人Cu/Zn SOD的游離氨基上共價(jià)鍵合有平均4分子的卵磷脂衍生物的PC-S0D。對(duì)于本發(fā)明提供的吸入劑(特別是用于間質(zhì)性肺炎治療的吸入劑)中所用的 PC-SOD而言，優(yōu)選精制到可以作為藥物使用的程度并且實(shí)質(zhì)上不含有作為藥物不允許混入的物質(zhì)。例如，PC-SOD優(yōu)選使用精制到2，500U/mg(2. 5kU/mg)以上的SOD比活性(specific SOD activity)后的產(chǎn)品，更優(yōu)選使用精制到3，000U/mg(3. OkU/mg)以上的SOD比活性后的
Φ 口
廣 BFI ο需要說明的是，本發(fā)明中IU(單元)表示如下的PC-SOD的酶量在pH7.8/30°C的條件下使用 NBT(硝基四氮唑藍(lán))，基于 J. Biol. Chem. ,vol. 244,No. 226049-6055(1969)所記載的方法進(jìn)行測定，將NBT的還原速度抑制50%所需的PC-SOD的酶量。本發(fā)明所提供的吸入劑是以這樣制備的PC-SOD作為有效成分的吸入劑。所述吸入劑意味著用于到達(dá)氣管、支氣管、肺等處的藥物組合物，優(yōu)選為點(diǎn)鼻劑或適于經(jīng)鼻或經(jīng)肺給藥的組合物，特別是適于經(jīng)肺給藥的組合物。本發(fā)明的吸入劑使用上述的PC-SOD作為有效成分，可以以粉末、溶液或懸浮液的形態(tài)進(jìn)行制造。在作為粉末制造吸入劑時(shí)，可以通過將作為有效成分的上述PC-SOD直接進(jìn)行微細(xì)化處理，或添加賦形劑、滑潤劑、粘合劑、崩解劑、穩(wěn)定化劑、矯味-矯臭劑等添加劑進(jìn)行微細(xì)化處理來制造。作為賦形劑，可舉出例如乳糖、白糖、葡萄糖、甘露醇、山梨糖醇之類的糖類；玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、預(yù)膠化淀粉、糊精或羧甲基淀粉之類的淀粉衍生物；結(jié)晶纖維素、低取代羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈣之類的纖維素衍生物； 阿拉伯膠、右旋糖苷、支鏈淀粉；等有機(jī)系賦形劑；或輕質(zhì)無水硅酸、合成硅酸鋁或偏硅酸鋁鎂之類的硅酸衍生物；磷酸鈣之類的磷酸鹽；碳酸鈣之類的碳酸鹽；或硫酸鈣之類的硫酸鹽；等無機(jī)賦形劑。作為滑潤劑，可舉出例如硬脂酸、硬脂酸鈣或硬脂酸鎂之類的硬脂酸金屬鹽；滑石；膠態(tài)二氧化硅；VEEGUM(硅酸鎂鋁)或硅蠟之類的蠟類；硼酸；己二酸；硫酸鈉；硫酸鹽； 二醇；富馬酸；苯甲酸鈉；DL-亮氨酸；脂肪酸鈉鹽；月桂基硫酸鈉或月桂基硫酸鎂之類的月桂基硫酸鹽；無水硅酸或硅酸水合物之類的硅酸類；或上述的淀粉衍生物。作為粘合劑，可舉出例如聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇、或與上述的賦形劑相同的化合物。作為崩解劑，可舉出例如與上述的賦形劑相同的化合物、或交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、 羧甲基淀粉鈉或交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮之類的經(jīng)化學(xué)修飾的淀粉-纖維素類。作為穩(wěn)定化劑，可舉出例如甲基對(duì)羥基苯甲酸酯或丙基對(duì)羥基苯甲酸酯之類的對(duì)羥基苯甲酸酯類；氯丁醇、苯甲醇或苯乙醇之類的醇類；苯扎氯銨；苯酚或甲酚之類的苯酚類；硫柳汞；脫氫乙酸；山梨酸等。并且，作為矯味-矯臭劑，可舉出通常使用的甜味劑、酸味劑或香料等。對(duì)于本發(fā)明提供的吸入劑，在以溶液或懸浮劑的形態(tài)制造吸入劑時(shí)，例如可以通過將PC-SOD溶解或懸浮在水或水與輔助溶劑(例如乙醇、丙二醇、聚乙二醇之類的醇系輔助溶劑)的混合物中來制造。這樣的溶液或懸浮液可以進(jìn)一步含有防腐劑、增溶劑、緩沖劑、等滲劑、吸收促進(jìn)劑、增稠劑等。作為防腐劑可舉出苯扎氯銨，作為增溶劑可舉出聚山梨醇酯或表面活性劑，作為等滲劑可舉出氯化鈉等。并且，懸浮液也可以進(jìn)一步添加有懸浮化劑(例如微結(jié)晶纖維素、 羧甲基纖維素鈉)。如上制造的吸入劑使用吸入劑領(lǐng)域中一般的手段(例如滴管、移液管、插管、或霧化器、吸入器等噴霧器)制成霧狀，向鼻腔內(nèi)或口腔內(nèi)或向氣管、支氣管、肺等中直接給藥。 使用噴霧器時(shí)，將吸入劑與適當(dāng)?shù)膰娚鋭?例如二氯氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷之類的氯氟碳、或二氧化碳等氣體等)一起作為制成加壓袋形式的氣溶膠進(jìn)行噴霧，或使用吸入器進(jìn)行給藥。本發(fā)明的吸入劑優(yōu)選在含有作為有效成分的PC-SOD的同時(shí)含有穩(wěn)定化劑。作為這樣的穩(wěn)定化劑，可舉出例如糖成分。作為糖成分，只要是藥物上可使用的糖成分就沒有特別限定，但其中優(yōu)選蔗糖。因此，本發(fā)明提供的最優(yōu)選的吸入劑是同時(shí)含有PC-SOD和蔗糖的組合物。作為蔗糖，優(yōu)選精制到可以作為藥品使用的程度的蔗糖，特別適宜使用經(jīng)活性炭處理后的蔗糖。通過與PC-SOD —起使用這樣的蔗糖，能夠防止長期保存造成的PC-SOD的活性降低，從而能夠制備出穩(wěn)定性高的吸入用組合物，即使對(duì)該組合物進(jìn)行冷凍干燥時(shí)，其性狀也特別良好。本發(fā)明所提供的吸入劑、特別是間質(zhì)性肺炎治療用的吸入劑中PC-SOD與蔗糖的配合比例可以根據(jù)給藥量、劑型等適宜決定，沒有特別限定。但是，以PC-SOD與蔗糖的重量比計(jì)，優(yōu)選其處于0. 1/100 80/100程度的范圍內(nèi)，更優(yōu)選0. 4/100 60/100的程度。并且，使用本發(fā)明提供的吸入劑進(jìn)行間質(zhì)性肺炎治療時(shí)，有效成分PC-SOD的量和制劑的給藥量根據(jù)制劑制備的方法、劑型、對(duì)象疾病的程度、患者的年齡、體重的不同而不同，不能一概地限定，例如作為臨床量，可例示成人1人1天0. 5 100mg(1500U 30萬 U)。并且，對(duì)給藥次數(shù)也不能一概地限定，可以1天1次或1天數(shù)次給藥。實(shí)施例以下通過具體的實(shí)施例更詳細(xì)地說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受這些實(shí)施例的任何限定。^MM 1 :PC-S0D對(duì)tn萊霍素i秀發(fā)肺損傷1草型小鼠的作用將博萊霉素5mg/kg經(jīng)呼吸道對(duì)ICR系小鼠(6 8周齡、體重28 32g)給藥， 造成肺損傷。對(duì)肺損傷的形成進(jìn)行確認(rèn)，測定肺泡清洗液中的巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、嗜中性白細(xì)胞，確認(rèn)細(xì)胞浸潤狀態(tài)(炎癥狀態(tài))，并且測定羥基脯氨酸量(膠原蛋白量)，確認(rèn)纖維化狀態(tài)。以該肺損傷模型小鼠為對(duì)象，將各濃度的PC-SOD—天一次通過靜脈內(nèi)給藥 (intravenous)、經(jīng)呼吸道給藥(intratracheal)和肺吸入給藥(inhalation)的各種給藥途徑進(jìn)行給藥。最后給藥后6小時(shí)將小鼠安樂死，回收血清、肺組織，通過ELISA法測定血清中和肺組織中的PC-SOD的濃度。其結(jié)果歸納于下述表1。[表 1]
權(quán)利要求
1.一種吸入劑，其特征在于，其以下述通式(I)表示的卵磷脂化超氧化物歧化酶作為有效成分，SOD， (Q-B)m (I)式(I)中，SOD’表示超氧化物歧化酶的殘基；Q表示化學(xué)橋聯(lián)；B表示在甘油的2位具有羥基的溶血卵磷脂的、除去了所述羥基的氫原子后的殘基；m為溶血卵磷脂相對(duì)于1分子超氧化物歧化酶的平均鍵合數(shù)，表示1以上的整數(shù)。
2.如權(quán)利要求1所述的吸入劑，其特征在于，式⑴中，Q為-C(O)-(CH2)n-C(O)-,該式中η表示2以上的整數(shù)。
3.如權(quán)利要求1或2所述的吸入劑，其特征在于，SOD’是人超氧化物歧化酶的殘基。
4.如權(quán)利要求1或2所述的吸入劑，其特征在于，SOD’是人超氧化物歧化酶的氨基酸序列中的第111位氨基酸變?yōu)镾-(2-羥基乙硫基)半胱氨酸后的超氧化物歧化酶修飾體的殘基。
5.如權(quán)利要求3或4所述的吸入劑，其特征在于，超氧化物歧化酶為在活性中心含有銅和鋅的超氧化物歧化酶。
6.如權(quán)利要求2至5任一項(xiàng)所述的吸入劑，其中，η為2 10的整數(shù)。
7.如權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)所述的吸入劑，其中，m為1 12的整數(shù)。
8.如權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)所述的吸入劑，其特征在于，該吸入劑進(jìn)一步含有穩(wěn)定化劑。
9.如權(quán)利要求8所述的吸入劑，其特征在于，所述穩(wěn)定化劑為糖。
10.如權(quán)利要求9所述的吸入劑，其特征在于，所述糖為蔗糖。
11.如權(quán)利要求10所述的吸入劑，其特征在于，所述蔗糖為經(jīng)活性炭處理的蔗糖。
12.如權(quán)利要求1所述的吸入劑，其特征在于，該吸入劑處于吸入用微粉制劑的形態(tài)。
13.如權(quán)利要求1所述的吸入劑，其特征在于，該吸入劑處于吸入用水溶液或懸浮液制劑的形態(tài)。
14.如權(quán)利要求1 13任一項(xiàng)所述的吸入劑，其中，該吸入劑經(jīng)呼吸道給藥。
15.如權(quán)利要求1 13任一項(xiàng)所述的吸入劑，其中，該吸入劑用于治療或預(yù)防間質(zhì)性肺炎。
16.如權(quán)利要求1 13任一項(xiàng)所述的吸入劑，其特征在于，間質(zhì)性肺炎是作為抗癌劑的副作用而出現(xiàn)的癥狀。
全文摘要
本發(fā)明提供一種特別地用于治療特發(fā)性(急性)或慢性間質(zhì)性肺炎的吸入劑，其含有有效發(fā)揮超氧化物歧化酶(SOD)作用的卵磷脂化超氧化物歧化酶(以下記作PC-SOD)作為有效成分，該吸入劑的特征在于，其以下述通式(I)SOD’(Q-B)m (I)(式中，SOD’表示超氧化物歧化酶的殘基；Q表示化學(xué)橋聯(lián)；B表示在甘油的2位具有羥基的溶血卵磷脂的、除去了所述羥基的氫原子后的殘基；m為溶血卵磷脂相對(duì)于1分子超氧化物歧化酶的平均鍵合數(shù)，表示1以上的整數(shù))表示的PC-SOD作為有效成分。
文檔編號(hào)A61K9/72GK102238958SQ20098014843
公開日2011年11月9日 申請(qǐng)日期2009年11月9日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月3日
發(fā)明者水島徹 申請(qǐng)人:日本株式會(huì)社Ltt生物醫(yī)藥