專利名稱：用于治療膠質(zhì)細胞瘤(gbm)和其它癌癥的腫瘤相關肽組合物及相關抗癌疫苗的制作方法
用于治療膠質(zhì)細胞瘤(GBM)和其它癌癥的腫瘤相關肽組合
物及相關抗癌疫苗

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及免疫治療肽及其在免疫療法中的用途，特別是癌癥免疫療法中的用途。本發(fā)明披露了腫瘤相關T輔助細胞肽表位，為單獨或與其它腫瘤相關肽(刺激抗腫瘤免疫反應疫苗組合物的活性藥物成分)聯(lián)合。特別是，本發(fā)明肽的組合物可用于引發(fā)腦膠質(zhì)瘤抗腫瘤免疫反應的疫苗組合物之中。為了本發(fā)明之目的，所有參考文獻均以完整引用的形式并入本文。
背景技術：
神經(jīng)膠質(zhì)瘤是源自神經(jīng)系統(tǒng)膠質(zhì)細胞的腦腫瘤。神經(jīng)膠質(zhì)細胞(Glial cell)，通常稱為神經(jīng)膠質(zhì)(neuroglia)或簡單地稱為膠質(zhì)(glia)，是提供支持和營養(yǎng)、保持動態(tài)平衡、形成髓鞘和參與神經(jīng)系統(tǒng)信號傳輸?shù)姆巧窠?jīng)元細胞。神經(jīng)膠質(zhì)瘤的兩個最重要亞群為星形細胞瘤和少突膠質(zhì)細胞瘤，根據(jù)其來源的正常膠質(zhì)細胞類型(分別為星形膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞)而得名。多形性膠質(zhì)母細胞瘤(以下簡稱膠質(zhì)母細胞瘤)屬于星形細胞瘤的亞群，是成人中最常見的惡性腦腫瘤，約占所有惡性腦腫瘤的40%，約占膠質(zhì)瘤的50%。 它對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有很強的侵襲性，是所有膠質(zhì)瘤中惡性水平最高(IV級)的腫瘤。由于神經(jīng)影像學、顯微外科學、各種治療方案(如替莫唑胺或放射)的進步，在該疾病的治療方法上已經(jīng)取得了穩(wěn)步發(fā)展，雖然如此，膠質(zhì)母細胞瘤仍無法治愈。這種腦腫瘤的致死率非常高自首次確診后的預期平均存活時間為9至12個月。在1986年到1990年的觀察期， 5年存活率為8. 0%。截至目前，侵入性治療，包括腫瘤全切除，治療后五年存活率仍然不足 10%。因此，醫(yī)學上強烈需要其它有效治療方法。膠質(zhì)母細胞瘤的腫瘤細胞是腦腫瘤中分化最低的腫瘤細胞，所以，腫瘤細胞很可能遷移和增殖，并且具有高度的侵襲性，從而導致預后非常差。由于膠質(zhì)母細胞瘤在大腦中呈快速、侵襲性及浸潤性生長，因此會導致死亡。浸潤性生長模式導致這些腫瘤具有不可切除的特性。同時，膠質(zhì)母細胞瘤對放療、化療也具有相對的抗性，因此，治療后復發(fā)率高。此外，在手術切除和放療后，腫瘤細胞的免疫反應對徹底消除腫瘤細胞無效。膠質(zhì)母細胞瘤分為原發(fā)性膠質(zhì)母細胞瘤(新腫瘤)和繼發(fā)性膠質(zhì)母細胞瘤，這取決于在未分化星形膠質(zhì)細胞或膠質(zhì)前體細胞的惡性轉化期間基因機制上的差異。繼發(fā)性膠質(zhì)母細胞瘤發(fā)生在年齡最大達45歲的較年輕的人群中。平均在4到5年期間，繼發(fā)性膠質(zhì)母細胞瘤從低級別的星形細胞瘤發(fā)展為未分化的星形細胞瘤。相比之下，原發(fā)性膠質(zhì)母細胞瘤主要發(fā)生在較年長的人群中，平均年齡為55歲。一般來說，原發(fā)性膠質(zhì)母細胞瘤作為暴發(fā)性膠質(zhì)母細胞瘤而發(fā)生，特點是在3個月內(nèi)就可從無任何臨床或病理異常狀態(tài)進展為膠質(zhì)母細胞瘤。膠質(zhì)母細胞瘤沿有髓神經(jīng)遷移并在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛擴散。在大多數(shù)情況下， 手術治療持續(xù)療效有限。惡性膠質(zhì)瘤細胞通過產(chǎn)生免疫抑制物、削弱T細胞的增殖以及免疫刺激因子IL-2 的產(chǎn)生，從而逃逸宿主免疫系統(tǒng)的偵測。
顱內(nèi)腫瘤可發(fā)生于CNS的任何結構或細胞類型，包括腦、腦膜、腦垂體、頭骨、甚至殘留的胚胎組織。在美國，原發(fā)性腦腫瘤的總體年發(fā)病率是每10萬人中有14例。最常見的原發(fā)性腦腫瘤為腦膜瘤，占所有原發(fā)性腦腫瘤的27%，以及膠質(zhì)母細胞瘤，占所有原發(fā)性腦腫瘤的23% (而成人中，膠質(zhì)母細胞瘤占惡性腦瘤的40%)。這些腫瘤中，很多都具有侵襲性，并且級別高。原發(fā)性腦腫瘤是兒童中最常見的實體瘤，在兒童中，是僅次于白血病的第二位最常見癌癥死亡原因。如今，對膠質(zhì)母細胞瘤患者有效治療方法的探究工作仍在進行。已有研究對抗這些腫瘤細胞的免疫療法或通過征募免疫系統(tǒng)的治療方法。首先，在人類的免疫治療研究中， Northwest Therapeutics使用“DCVax Brain”(腦癌疫苗)治療膠質(zhì)母細胞瘤獲得了令人鼓舞的成果，在該研究中，可誘導抗原特異性CTL反應，與采用標準治療相比，延長了中位存活時間，同時最大限度地降低了毒性(Heimberger et al.，2006)。結直腸癌根據(jù)美國癌癥協(xié)會的報道，在美國，結直腸癌(CRC)是排在第三位的最常見癌癥， 受罪的新患者每年超過175，000名。在美國、日本、法國、德國、意大利、西班牙和英國，每年有超過480，000例患者罹患該疾病。它是發(fā)達國家癌癥死亡的最常見原因之一。研究表明， 結直腸癌的發(fā)病是遺傳和環(huán)境因素之間相互作用的結果。在大多數(shù)病例中，結直腸腫瘤似乎由腺瘤息肉演變而來；但是這個演變過程可能需要很多年。結直腸癌的主要風險因素是年齡，90%的病例在50歲之后診斷患有此病。根據(jù)美國癌癥協(xié)會的報道，結直腸癌的其它風險因素包括飲酒、飲食中脂肪和/或紅色肉類含量高、水果和蔬菜的攝取量不足。結直腸癌的發(fā)病率持續(xù)上升，特別是日本等地區(qū)，這些地區(qū)接受西化飲食，攝入過多的脂肪和肉類而纖維攝入量減少，這些因素可能是罪魁禍首。但是發(fā)病率的上升速度不如以前快，這可能是由于進行了更多的篩查和息肉切除從而防止了息肉發(fā)展成為癌癥。像大多數(shù)實體腫瘤的治療，一線治療為手術治療，然而，手術受益者仍局限于早期患者，而很大一部分患者在確診時已是晚期?；诜蜞奏さ幕煼桨甘峭砥诮Y直腸癌的標準治療。這些治療方案的大多數(shù)為所謂的FOLFOX方案(輸注5-FU/亞葉酸+奧沙利鉬) 和F0LFIRI (伊立替康、亞葉酸，團注和連續(xù)輸注5-FU)方案。第三代細胞毒素類藥物的引入，如伊立替康和奧沙利鉬，增加了顯著改善療效的希望，但預后仍較差，轉移癌的存活率一般仍只有大約20個月，因此，治療該疾病的需求仍遠未滿足。最近出現(xiàn)了新一代藥物，即靶向分子藥物，如阿瓦斯丁(貝伐單抗)和愛必妥(西妥昔單抗)，而且大約有40種針對不同階段結直腸癌的化合物處于后期臨床開發(fā)階段。這些化合物中的幾種相結合可增加未來潛在治療選擇的數(shù)量。絕大部分藥物都處于開發(fā)的2 期階段，這些化合物與開發(fā)中的任何其它結直腸癌藥物相比，更經(jīng)常地針對表皮生長因子受體(EGFR)，這是由于在約80%的結直腸癌患者中，EGRF表達都上調(diào)。對II期患者采用化療結合最近批準的單克隆抗體(mAb)(西妥昔單抗+伊立替康或F0LF0X4;貝伐單抗單藥或與F0LF0X4聯(lián)合)的臨床試驗目前正在進行。經(jīng)過三至四年的觀察，預計這些試驗會得出有統(tǒng)計學意義的結果。目前腫瘤科所用的單克隆抗體(mAb) —般都很可能不會干擾積極免疫治療。事實上，有臨床前證據(jù)表明，用貝伐單抗去除VEGF是DC-介導的T細胞激活的積極結果。
前列腺癌和其它腫瘤據(jù)估計，2007年有27050人死于前列腺癌，它是男性癌癥死亡的首要原因。雖然自20世紀90年代初以來，其死亡率在白人和非裔美國男性中一直下降，但是，非裔美國男性的死亡率仍然比白人男性高兩倍以上。前列腺癌是男性中最常見的癌癥。非裔美國男性的發(fā)病率顯著高于白人男性，其原因不明。在過去20年里，前列腺癌的發(fā)病率發(fā)生了很大的變化在1988-1992年期間迅速上升、1992-1995年期間急劇下降、自1995年以來略有增加。這些趨勢在很大程度上反映了采用前列腺特異抗原(PSA)血液檢查進行前列腺癌篩查的增加。過去10年中發(fā)病率增加趨緩最有可能是由于在65歲以上的男性中普遍開展PSA 篩查。在65歲以上的男性中，前列腺癌的發(fā)病率趨于穩(wěn)定。在白人男性中，發(fā)病率于1992 年達到高峰(每100000人男性中有237. 6人)，而在非裔美國男性中，于1993年達到高峰 (每100000人男性中有342. 8人)。前列腺癌的治療包括觀察等待、手術、放射治療、高強度聚焦超聲(HIFU)、化療、冷凍手術、激素治療、或一些組合療法。哪種方案最佳取決于疾病的階段、Gleason評分和PSA 水平。其它重要因素是男性的年齡、一般健康狀況、以及對潛在治療及其可能副作用的感覺。由于所有的治療均可能有一定的副作用，如勃起功能障礙和尿失禁，因此治療討論往往注重于治療目標與生活方式改變風險之間的平衡。如果癌癥已擴散出前列腺，治療選擇會發(fā)生明顯的變化，因此，大多數(shù)治療前列腺癌的醫(yī)生使用各種諾模圖來預測擴散概率。觀察等待、HIFU、放射治療、冷凍手術和外科手術一般在癌癥仍然局限在前列腺內(nèi)的男性中進行。激素療法和化療常常在疾病已經(jīng)擴散出前列腺的患者中進行。但是，也有特例對于一些晚期腫瘤，可使用放射治療，對于一些早期腫瘤，可使用激素治療。如果初始的治療失敗并且癌癥進展，也可使用冷凍療法、激素療法、 化療。在因臨床懷疑器官有限生長而接受前列腺癌根治術的前列腺癌患者中，很多人的手術準備確診性病理檢驗顯示，局部擴展性腫瘤擴展超出器官的邊界。這些患者有早期局部復發(fā)的高風險，就生化復發(fā)而言，由于PSA水平不斷增高，通?？梢詸z測。在這種情況下的治療性選擇包括外部放療和激素治療；然而，這些治療方法的價值，特別是延長患者的長期存活率方面，不能認為已經(jīng)得到證實。此外，可能的治療相關并發(fā)癥，如尿道狹窄的發(fā)展 (放療)、性欲喪失和陽痿、骨質(zhì)疏松方面的骨骼中鈣鹽降低的風險、以及病理性骨折風險明顯增加(激素消融)，也必須予以考慮。在所有前列腺癌中，有90%以上在發(fā)現(xiàn)時處于局部性和區(qū)域性階段；腫瘤在此階段確診的患者5年相對存活率接近100%。在過去25年中，所有階段腫瘤組合在一起的5 年存活率從69 %上升至接近90 %。根據(jù)最新的數(shù)據(jù)，10年相對存活率為93 %，15年相對存活率為77%。存活率，特別是5年存活率的巨大提升，部分歸因于早期診斷和治療的改進。 但是，在腫瘤擴散至其它組織和器官后，患者的存活率顯著下降。肺癌2007年美國預計新發(fā)病例為21萬例，約占確診癌癥病例的15%。男性發(fā)病率顯著下降，從1984年的每10萬人102例高點，下降到2003年的78. 5例。在女性中，這一發(fā)病率在一段長期的增長之后正趨向于平穩(wěn)。為了治療之目的，臨床上肺癌分為小細胞肺癌 (13% )和非小細胞肺癌(87% )0
在男性和女性中，大多數(shù)癌癥相關死亡均為肺癌。據(jù)估計，2007年有16. 039萬人死亡，約占所有癌癥死亡人數(shù)的四％。自1987年以來，每年死于肺癌的女性多于乳腺癌患者。從1991年至2003年，男性的死亡率持續(xù)下降，每年約下降1.9%。女性肺癌死亡率在連續(xù)增長幾十年后正趨于平穩(wěn)。肺癌死亡率的這些趨勢反映了過去30年吸煙率的下降。治療選擇根據(jù)癌癥的類型(小細胞和非小細胞肺癌)和階段進行確定，包括手術、 放療、化療、靶向生物治療，如貝伐單抗(Avastin )和埃羅替尼(Tarceva )。對于局部癌，通常選擇外科手術治療。最近的研究表明，手術隨后化療可提高早期非小細胞肺癌的存活率。由于該疾病在發(fā)現(xiàn)時通常已經(jīng)擴散，因此，常常使用放射和化療，有時與手術聯(lián)合使用?；焼委熁蚺c放療結合是治療小細胞肺癌的通常選擇；采用這一方案，有很大比例的患者獲得緩解，在一些病例中，緩解為持久緩解。肺癌的1年相對存活率在1975-1979年期間為37 %，至2002年，略上升至42%， 這主要是由于手術技術的改進和組合療法的使用。然而，所有階段的肺癌組合在一起，5年存活率僅為16%。對于疾病在檢出時仍為局部性的病例，存活率為49% ；但是僅有16%的肺癌在此早期得到確診。表1 :2007年美國按性別估計的新發(fā)癌癥病例和死亡人數(shù)(American CancerSociety. Cancer Facts & Figures 2007. Atlanta :American Cancer Society ； 2007.)
權利要求
1.一種藥物組合物，包含至少兩種肽，肽含有選自SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 8構成的組中的一個氨基酸序列、和/或含有與SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 8至少80%相同的一個變異氨基酸序列，和/或含有編碼SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 8的核酸的一種多聚核苷酸或變異氨基酸序列，以及一種藥用載體。
2.根據(jù)權利要求1所述的藥物組合物，進一步包含至少另外一種肽，該肽含有選自SEQ ID NO 9至SEQ ID NO 20構成的組中的一個氨基酸序列、或含有與SEQ IDNO 9至SEQ ID NO 20至少80%相同的一個變異氨基酸序列，或含有編碼SEQ IDNO 9至SEQ ID NO 20的核酸的一個多聚核苷酸或變異氨基酸序列。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的藥物組合物，其中該等肽總長度為8至100個氨基酸、優(yōu)選為8至30個氨基酸，最優(yōu)選為8至17個氨基酸。
4.根據(jù)權利要求1-3任一項所述的藥物組合物，其中至少一種肽包括非肽鍵。
5.根據(jù)權利要求1-4任一項所述的藥物組合物，包含至少兩種由根據(jù)SEQID NO 1至 SEQ ID NO 20的氨基酸序列構成的肽。
6.根據(jù)權利要求1-5任一項所述的藥物組合物，包含至少兩種含有一個根據(jù)SEQIDNO 1的氨基酸序列和一個根據(jù)SEQ ID NO 17的氨基酸序列、或一個根據(jù)SEQ IDNO 2的氨基酸序列和一個根據(jù)SEQ ID NO 17的氨基酸序列、或一個根據(jù)SEQ IDNO 3的氨基酸序列和一個根據(jù)SEQ ID NO 17的氨基酸序列的肽。
7.根據(jù)權利要求1-6任一項所述的藥物組合物，其中組合物中存在的肽的選擇、數(shù)目和/或數(shù)量根據(jù)組織、癌癥和/或患者而特定。
8.根據(jù)權利要求1-7任一項所述的藥物組合物，進一步包括至少一種合適的佐劑，佐劑從一組中選擇，該組包含 1018ISS、鋁鹽、Amplivax, AS 15、BCG、CP_870，893、CpG7909、 CyaA, dSLIM、 GM-CSF,IC30、 IC31、 Imiquimod、 ImuFact IMP321、 IS Patch、 ISCOMATRIX、 JuvImmune, LipoVac、MF59、單磷酰脂 A、MontanideIMS 1312、Montanide ISA 206、 Montanide ISA 50V,Montanide ISA-51、0K-432、0M-174、0M-197-MP_EC、0NTAK、PepTel 載體系統(tǒng)、PLG微粒、儀8丨卩11加0(1、3扎172、病毒顆粒和其它病毒樣顆粒、￥ -170806、4卩1^13公司的 QS21 刺激子、Ribi' s Detox。Qui 1、Superfos、Freund' s、GM-CSF、霍亂毒素、免疫佐劑、MF59和細胞因子。
9.根據(jù)權利要求8所述的藥物組合物，其中佐劑選自由集落刺激因子構成的組，如粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、或咪喹莫特或resimiquimod。
10.根據(jù)權利要求1-9任何一項所述的藥物組合物，另外含有至少有一種抗原提呈細胞。
11.根據(jù)權利要求10所述的藥物組合物，其中該抗原提呈細胞為樹突狀細胞。
12.根據(jù)權利要求10或11所述的藥物組合物，其中至少有一種抗原提呈細胞為a)用肽沖擊或加載，或b)包含一種編碼肽的表達載體。
13.根據(jù)上述任一權利要求所述的藥物組合物，其中該組合物被給予，其中疫苗給予方式為靜脈注射、動脈注射、腹腔注射、肌肉注射、皮內(nèi)注射、瘤內(nèi)注射、口服、經(jīng)皮、經(jīng)鼻腔、經(jīng)口腔、經(jīng)直腸、經(jīng)陰道、吸入、或外用。
14.一種治療或預防患者癌癥的方法，包括給予患者一個有效治療量的以上任一權利要求所述的藥物組合物。
15.根據(jù)權利要求14所述的方法，其中該藥物組合物為一種抗癌疫苗。
16.根據(jù)權利15所述的方法，其中該癌癥為口腔癌、咽癌，消化道癌、結腸癌、直腸癌、 肛門癌、呼吸道癌、乳腺癌、宮頸癌、陰道癌、外陰癌、子宮體癌、卵巢癌、男性生殖道癌、尿道癌、骨癌、軟組織癌、卡波西肉瘤、皮膚黑色素瘤、眼黑色素瘤、非黑色素瘤眼癌、腦癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌、甲狀腺癌、其它內(nèi)分泌腺癌、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、骨髓瘤，優(yōu)選為腎癌、結直腸癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、腦癌、胃腸道間質(zhì)瘤或膠質(zhì)母細胞瘤。
17.根據(jù)權利要求16所述的方法，其中該癌癥為直腸癌。
全文摘要
本發(fā)明涉及免疫治療肽及其在免疫療法中的用途，特別是在癌癥免疫療法中的用途。本發(fā)明披露了腫瘤相關T輔助細胞肽表位，為單獨或與其它腫瘤相關肽(刺激抗腫瘤免疫反應疫苗組合物的活性藥物成分)聯(lián)合。特別是本發(fā)明的肽組合物可用于引發(fā)腦膠質(zhì)瘤抗腫瘤免疫反應的疫苗組合物之中。
文檔編號A61K39/00GK102170901SQ200980139420
公開日2011年8月31日 申請日期2009年9月28日 優(yōu)先權日2008年10月1日
發(fā)明者克勞迪婭·特勞特魏因, 哈伯利特·辛格, 奧利弗·斯赫爾, 托尼·懷申克, 斯特芬·沃爾特, 諾波特·希爾夫 申請人:伊瑪提克斯生物技術有限公司