專利名稱：含有木鱉子提取物的傷口愈合劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有傷口愈合功效的木鱉子(Momordicae semen)提取物。本發(fā)明還涉及含有木鱉子提取物活性成分的傷口愈合局部透皮劑，通過(guò)誘導(dǎo)皮膚受傷的動(dòng)物模型證 實(shí)其能夠縮短傷口閉合和治療所需的時(shí)間。
背景技術(shù)：
木鱉子是木鱉子(Momordicae)的成熟種子，木鱉子是廣泛分布于中國(guó)南部的多 年生藤本植物。從9月至11月收集其果實(shí)，然后如下處理將每個(gè)果實(shí)切成兩片并半干；立 即取出種子或?qū)⒑蟹N子的果實(shí)放入罐中，直至果皮和果肉腐爛，將種子分離。用這種方法處理的木鱉子對(duì)于風(fēng)濕性疼痛和肌肉痙攣等具有強(qiáng)效抗炎活性和治 療功效。直至最近，木鱉子提取物的已知成分是固醇、齊墩果醇酸、木鱉子酸、木鱉子皂苷I、 II?，F(xiàn)在，廣泛使用的用于治療一般皮膚傷口的外用制劑是桿菌肽、慶大霉素、卡那霉 素、四環(huán)素、土霉素、甲氯環(huán)素、多粘菌素、硝基糠腙、磺胺嘧啶、夫西地酸等。事實(shí)上，對(duì)用 于有效治療難處理傷口如糖尿病性足部潰爛的新的、較好的傷口愈合藥劑存在著很大的需 求。此外，研發(fā)了 一種新的傷口愈合劑，如將上述外用制劑與濕敷料如水凝膠或聚氨酯泡沫 體混合的功能性敷料將形成高附加值的產(chǎn)品。發(fā)明詳述技術(shù)問(wèn)題本發(fā)明的發(fā)明人努力研發(fā)了用于治療或緩和傷口的藥物，使用與化學(xué)物質(zhì)相比由 局部施用引起的副作用或毒性少的植物化學(xué)藥品。將選定的粗制草藥提取物施用于用于測(cè) 試的皮膚受傷的小鼠模型，并且結(jié)果顯示木鱉子提取物或其含有木鱉子皂苷I的級(jí)分顯著 縮短了受傷皮膚閉合或治療所需的時(shí)間。因此，本發(fā)明的目的在于提供一種傷口愈合藥劑，其包含木鱉子提取物或含有木 鱉子皂苷I的木鱉子級(jí)分。技術(shù)解決方法本發(fā)明涉及一種傷口愈合藥劑，其特征在于含有木鱉子提取物作為活性成分。上述木鱉子提取物含有木鱉子級(jí)分，該級(jí)分含有由以下的通式1表示的作為活性 成分的木鱉子皂苷I。通式1 附圖描述

圖1表示皮膚受傷小鼠模型中顯示的傷口愈合效果。最佳實(shí)施方式以下將進(jìn)一步舉例說(shuō)明本發(fā)明。本發(fā)明涉及用于局部透皮應(yīng)用的藥物制劑，包含木鱉子提取物或含有木鱉子皂苷 I的木鱉子級(jí)分作為活性成分，通過(guò)皮膚受傷的動(dòng)物模型證實(shí)其顯著縮短了傷口閉合和治 療所需的時(shí)間。根據(jù)本發(fā)明的木鱉子提取物通過(guò)用為木鱉子干重2-10倍的水或含水醇溶液提取 來(lái)獲得，其也可以通過(guò)傳統(tǒng)的用于粗制藥品的提取方法獲得。上述方法中所用的醇優(yōu)選 c「c6，更優(yōu)選甲醇、乙醇等。根據(jù)本發(fā)明的包含木鱉子皂苷I的木鱉子級(jí)分可以從木鱉子提取物獲得，所述木 鱉子提取物通過(guò)用極性溶劑以傳統(tǒng)的方法處理木鱉子獲得。通過(guò)使用非離子吸附樹脂或反 相硅膠樹脂以傳統(tǒng)的柱色譜層析法處理木鱉子提取物可以有效地生產(chǎn)木鱉子級(jí)分，也可以 使用有機(jī)溶劑通過(guò)皂苷沉淀法來(lái)生產(chǎn)木鱉子級(jí)分，所述有機(jī)溶劑優(yōu)選丙酮、乙酸乙酯等。在進(jìn)行柱色譜層析法中，可以與有機(jī)溶劑，諸如含水醇溶液、乙醇、丙酮等一起使 用Amberlite XAD-16或十八烷基甲硅烷基(0DS)-硅膠樹脂，從而可以從木鱉子提取物中 選擇性地制備包含高濃縮皂苷的級(jí)分。將木鱉子提取物溶解于3-5倍(w/w)的蒸餾水中，并加入超過(guò)水5-10倍(w/w)的 丙酮，然后選擇性地沉淀皂苷，由此最終產(chǎn)生含有提高含量的木鱉子皂苷的級(jí)分?？梢酝ㄟ^(guò)使用常規(guī)的方法制得根據(jù)本發(fā)明的木鱉子提取物或含有木鱉子皂苷I 的木鱉子級(jí)分，通過(guò)將作為活性成分的木鱉子提取物或含有木鱉子皂苷I的木鱉子級(jí)分與 藥物學(xué)上可接受的載體、成形劑、稀釋劑等以20000-20 1的重量比，并且相對(duì)于整個(gè)藥物 組合物的含量為0. 01-30wt%重量比混合。以這種方式，可以制得膏劑、敷劑、貼劑等形式的傷口愈合局部透皮劑。此外，根據(jù)本發(fā)明的木鱉子提取物或級(jí)分的劑量根據(jù)內(nèi)部再吸收速率、體重、年 齡、性別、健康狀況、飲食、給藥時(shí)間、使用方法、排泄速率、疾病嚴(yán)重程度、醫(yī)學(xué)專家(或主 管人)的決定、患者需求等而不同。此外，以這種方式由此制造的單位劑量制劑可以根據(jù)醫(yī)學(xué)專家指導(dǎo)和監(jiān)控的決定 以及患者的需求，通過(guò)專門的方法來(lái)使用，或以規(guī)律的時(shí)間間隔來(lái)給藥。本發(fā)明可以使用下文中所述的實(shí)施例來(lái)得到進(jìn)一步的描述，但本發(fā)明并不限于這些。
實(shí)施例制備實(shí)施例1 木鱉子提取物的制備將獲自中國(guó)草藥市場(chǎng)的木鱉子種子研磨成合適的大小，將含水乙醇溶液(2L， 10% )加入磨細(xì)的木鱉子種子中(1kg，干重)，然后在80°C的水浴中提取兩次，6小時(shí)。將 提取物過(guò)濾，在60°C下使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓濃縮，在真空爐中將溶劑完全除去，將所得物干 燥并磨成粉，然后獲得木鱉子提取物(40-50g)。制備實(shí)施例2 使用非離子吸附樹脂制備木鱉子皂苷I級(jí)分1使用非離子吸附樹脂Amberlite XAD-16對(duì)制備實(shí)施例1中獲得的提取物進(jìn)行柱 色譜層析。將溶解于甲醇中(10%)的提取物(30g)倒入吸附樹脂柱中(11)。將蒸餾水和含 水甲醇溶液(30%，ν/ν)各自以樹脂體積3倍的量流過(guò)柱子，接著將含水甲醇溶液(70% ) 和100%的甲醇各自以樹脂體積3倍的量流過(guò)柱子，以獲得洗出液級(jí)分。將所得到的級(jí)分干 燥，磨成粉，并最終獲得木鱉子皂苷I級(jí)分1 (IOg)。制備實(shí)施例3 使用用于沉淀的有機(jī)溶劑制備木鱉子皂苷I級(jí)分2通過(guò)使用有機(jī)溶劑如丙酮沉淀制備實(shí)施例1中所獲得的提取物來(lái)獲得含有高 濃度木鱉子皂苷I的級(jí)分。將制備實(shí)施例1中獲得的提取物(IOOg)溶解于蒸餾水中 (300-500ml)，加入丙酮(1800-3000ml)，并混合在一起，然后產(chǎn)生了含有皂苷的沉淀物。通 過(guò)使用濾紙將沉淀物分離出來(lái)，干燥，然后獲得了木鱉子皂苷I級(jí)分2(60g)。制備實(shí)施例4 使用反相硅膠樹脂色譜層析制備木鱉子皂苷I級(jí)分3使用十八烷基甲硅烷基(ODS)-硅膠樹脂(YMOGEL 0DS_A12nm，S_150m)對(duì)制備實(shí) 施例3中獲得的提取物進(jìn)行柱色譜層析。相對(duì)于IOg樣品，使用了 250g樹脂。將 樹脂2-3 倍量的30% (ν/ν)含水甲醇溶液流過(guò)后，將樹脂2-3倍量的60% (ν/ν)含水甲醇溶液流過(guò)， 以獲得洗出液級(jí)分。將所得到的級(jí)分減壓濃縮，在真空爐中將溶劑完全干燥，然后獲得了木鱉子皂苷I 級(jí)分 3 (3. 5g)。制備實(shí)施例5 純木鱉子皂苷I的分離從制備實(shí)施例4中獲得的級(jí)分純化木鱉子皂苷I。使用乙腈和水的混合溶劑 (29 71，0.1%三氟醋酸)以9. 5ml/min的洗脫速度進(jìn)行高性能液相色譜層析(HLPC)，并 且只收集約45min時(shí)的峰。將所得到的級(jí)分減壓濃縮并在真空爐中完全干燥。所用的柱是 YMC J’ Sphere0DS-H80，并且在 210nm 處檢測(cè)波長(zhǎng)。為了檢測(cè)所獲得材料的結(jié)構(gòu)，將其質(zhì)譜和NMR譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)中的相比較[Iwamoto， Okabe， Yamauchi, Tanaka， Rokutani, Hara, Mihashi, Higuchi.Studies on the constituents of Momordicacochinchinensis Spreng.I.Isolation and characterization of the seedsaponins， Momordica saponin I and II.(對(duì) 木 鱉子組分的研究。I.種子皂苷、木鱉子皂苷I和II的分離和表征Khemical & pharmaceuticalbulletin 1985,33(2) :464_478]，并發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)與木鱉子皂苷I的相同，已 經(jīng)報(bào)道了木鱉子皂苷I存在于木鱉子中(木鱉子皂苷I ;3-0-β-D-吡喃半乳糖基(1-> 2)-[a-L_吡喃鼠李糖基(1- > 3)]-i3_D-葡糖醛酸吡喃糖苷-28-0-i3_D-吡喃木糖基 (1- > 3) - β -D-吡喃葡糖基(1- > 3) - [ β -D-吡喃木糖基(1- > 4) ] - a -L-吡喃鼠李糖基 (1- > 2) - β -D-吡喃巖藻糖基絲石竹皂甙)。[通式1] 分子量1673.77熔點(diǎn)241_244°C比旋光[a]19D=-14.8° (CO. 7, MeOH H2O = 1 2)制備實(shí)施例1至4中獲得的木鱉子提取物和木鱉子皂苷I級(jí)分的含量顯示于表1 中。[表 1] 實(shí)施例1 木鱉子提取物的傷口愈合效果1.測(cè)試材料和給藥將制備實(shí)施例1獲得的木鱉子提取物、制備實(shí)施例4中獲得的木鱉子皂苷I級(jí)分3 和制備實(shí)施例5中獲得的木鱉子皂苷I分別以50、10和5 μ g/20 μ 1的濃度溶解于CMC中 (羧甲基纖維素，0.5%)。將由此制得的測(cè)試材料(20μ1)局部施用于受傷的小鼠皮膚上，
每天一次，連續(xù)10天。作為陽(yáng)性對(duì)照藥物，如上制備了 CGS-21680(Tocris，USA)，并以10 μ g/20 μ 1的劑 量局部施用，每天一次，連續(xù)10天。2.測(cè)試方法將二十五只具有24g士2g體重的⑶-1血統(tǒng)的小鼠分成5組。將小鼠放入分開的 籠子中。用環(huán)已烯巴比妥(90mg/kg，IP)麻醉后，將小鼠肩部和背部的毛剃除。使用鋒利的 打孔機(jī)(ID12mm)將一部分皮膚切除，該部分皮膚包括皮膚下的肌肉層和與其連接的組織。 在皮膚上形成傷口后，將木鱉子提取物、木鱉子皂苷I級(jí)分3、木鱉子皂苷I和CGS-21680的 測(cè)試材料各自以50、10、5和10 μ g/20 μ 1的濃度分別局部施用于小鼠，每天一次，連續(xù)10 天。在第1、3、5、7、9和 11 天使用 Image-ProPlus (Media Cybernetics，版本4· 5. 0. 29) 測(cè)量透明塑料薄膜上檢測(cè)的受傷皮膚面積。然后，使用graph-prism (Graph Software USA) 計(jì)算傷口閉合率(％)和傷口閉合所需的時(shí)間(CT5tl)(表2和圖1)。在一尾方差分析(一 尾AN0VA)后進(jìn)行Durmett ’ s測(cè)試，以比較各個(gè)測(cè)量點(diǎn)的處理組和載體組。差異在P < 0. 05 是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。如表2和圖1所示，發(fā)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的木鱉子提取物、含有木鱉子皂苷I的木鱉子 級(jí)分和木鱉子皂苷I具有較好的傷口愈合效果。[表 2] (*相對(duì)于載體組P < 0. 05)實(shí)施例2 大鼠的口服急性毒性測(cè)試如下對(duì)6周大的SPF (無(wú)特異性病原體)SD大鼠進(jìn)行2_周重復(fù)劑量毒性測(cè)試。將制備實(shí)施例1中獲得的木鱉子提取物和制備實(shí)施例4中獲得的木鱉子皂苷I級(jí) 分3分別溶解于0.5% CMC中。將制劑口服給藥于大鼠(5只大鼠/組)，每日劑量分別為 2，000mg/kg 和 500mg/kg，持續(xù) 2 周。在第15天，觀察大鼠的存活、臨床癥狀和體重變化。然后，對(duì)大鼠進(jìn)行血液學(xué)測(cè)試 和血液生化測(cè)試。然后將大鼠尸檢，并用肉眼觀察來(lái)發(fā)現(xiàn)它們腹腔和胸腔器官的任何異常。 結(jié)果表明沒(méi)有發(fā)現(xiàn)明顯的臨床癥狀，并且所有大鼠都存活了。此外，關(guān)于它們的體重、血液 學(xué)和血液生化測(cè)試和尸檢，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)毒性。因此，認(rèn)為根據(jù)本發(fā)明的木鱉子提取物和木鱉子 皂苷I級(jí)分3對(duì)于口服是安全的，口服的最小致死劑量(LD5tl)分別為2，000mg/kg和500mg/
kg ο制劑實(shí)施例1 透皮組合物的制備如下所述使用本發(fā)明的木鱉子提取物或含有木鱉子皂苷I的木鱉子級(jí)分制備透 皮組合物。[組合物1]活性成分(0. 04g)、聚丙烯酸鈉(1. 3g)、甘油(3. 6g)、氫氧化鋁(0. 04g)、對(duì)羥基苯 甲酸甲酯(0. 2g)，水(14g)[組合物2]活性成分(0.08g)、丙二醇(1.6g)、液體石蠟(0. Sg)、肉豆蔻酸異丙酯(0. 4g)、 Gelva 1430(16. 4g)。制劑實(shí)施例2 膏劑的制備如下從本發(fā)明的木鱉子提取物或含有木鱉子皂苷I的木鱉子級(jí)分制備膏劑組合 物。[組合物]活性成分(Ig)、鯨蠟醇棕櫚酸酯(20g)、鯨蠟醇(40g)、硬脂醇(40g)、肉豆蔻酸異 丙酯(80g)、山梨酸酐硬脂酸酯(20g)、聚山梨酸酯(60g)、丙基P-氧苯甲酸酯(Ig)、甲基 P-氧苯甲酸酯(Ig)、適量磷酸和蒸餾水。[工業(yè)實(shí)用性]本發(fā)明公開了沒(méi)有由局部施用引起的副作用或毒性但在治療傷口中具有較好效 果的木鱉子提取物、天然提取物，因此預(yù)期可以用作傷口愈合藥劑。
權(quán)利要求
一種傷口愈合藥劑，其含有木鱉子提取物或含有木鱉子皂苷I的木鱉子級(jí)分作為活性成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的傷口愈合藥劑，其中通過(guò)用水或低級(jí)含水醇溶液提取木鱉子來(lái)獲 得所述木鱉子提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的傷口愈合藥劑，其中通過(guò)使用有機(jī)溶劑的皂苷沉淀法或通過(guò)使用 非離子吸附樹脂或反相硅膠樹脂的柱色譜層析，使所述木鱉子級(jí)分含有提高含量的木鱉子 皂苷I。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的傷口愈合藥劑， [通式1] 其中所述木鱉子級(jí)分含有16-80wt%由通式1所示的木鱉子皂苷I。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的傷口愈合藥劑，其中所述藥劑是局部透皮組合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求6的傷口愈合藥劑，其中將所述局部透皮組合物配制成膏劑、敷劑或 貼劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有傷口愈合功效的木鱉子提取物。特別地，本發(fā)明涉及含有木鱉子提取物活性成分的傷口愈合透皮劑，通過(guò)誘導(dǎo)皮膚受傷的動(dòng)物模型證實(shí)其能夠縮短傷口閉合和治療所需的時(shí)間。
文檔編號(hào)A61K36/42GK101861158SQ200880116400
公開日2010年10月13日 申請(qǐng)日期2008年10月21日 優(yōu)先權(quán)日2007年10月22日
發(fā)明者尹世晙, 張基旭, 表成洙, 金周玄, 金峰撤 申請(qǐng)人:Sk化學(xué)株式會(huì)社