專(zhuān)利名稱(chēng)：：治療眼科疾病的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及使用針對(duì)類(lèi)淀粉-湖太的抗體的方法，用于治療和/或預(yù)防眼科疾病，例如年齡相關(guān)黃斑退化，以及用于其它眼病理學(xué)中，例如青光眼、糖尿病性視網(wǎng)膜病變(包括糖尿病性黃斑水腫)、脈絡(luò)膜新生血管膜(CNV)、葡萄膜炎、近視退化、眼腫瘤、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞(centralretinalveinocclusion)、虹膜紅變、眼新血管生成、中心漿液性視網(wǎng)膜病變(centralserousretinopathy)、目艮表面問(wèn)題(ocularsurfacediscus)(例如干眼)、視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈阻塞、囊樣黃斑部水腫及任何其它視網(wǎng)膜退化性疾病。
背景技術(shù)：
：在美國(guó)，65歲以上個(gè)體中減小的最佳矯正視力的最常見(jiàn)起因?yàn)楸环Q(chēng)為年齡相關(guān)的黃斑退化(AMD)的視網(wǎng)膜病癥。隨著AMD進(jìn)展，該疾病特征在于敏銳、中心視力的損失。受AMD影響的眼睛區(qū)域?yàn)辄S斑-視網(wǎng)膜中心的小區(qū)域，其主要由感光細(xì)胞組成。占AMD患者的約85。/。-90%的所謂"干型"AMD(亦稱(chēng)為"地圖狀萎縮(geographicatrophy)")涉及由細(xì)胞總體萎縮造成的眼睛色素分布改變、感光體損失及視網(wǎng)膜功能減少。所謂"濕型"AMD涉及引起視網(wǎng)膜下空間中凝血或傷痕的異常脈絡(luò)膜血管增生。因此，濕型AMD的發(fā)作是由于在神經(jīng)視網(wǎng)膜下形成異常脈絡(luò)膜新生血管網(wǎng)絡(luò)4(脈絡(luò)膜新血管生成，CNV)而發(fā)生。新形成的血管是過(guò)度滲漏的。這引起視網(wǎng)膜下流體及血液積累，引起視敏度損失。最終，隨著涉及脈絡(luò)膜及視網(wǎng)膜的大的盤(pán)狀傷痕的形成，在所涉及區(qū)域中，功能性視網(wǎng)膜完全損失。盡管干型AMD患者可保持品質(zhì)減小的視力，但濕型AMD經(jīng)常導(dǎo)致失明。(Hamdi及Kenney,re/atoiMacw/art/egewerartow-awewWew/oz'《i^w^'era/"歷osde"ce,e305-314,2003年5月)。CNV不僅在濕型AMD中還在其它眼病理學(xué)，例如青光眼、糖尿病性視網(wǎng)膜病變(包括糖尿病性黃斑水腫)、布魯赫膜(Bruch'smembrane)破裂、近視退化、眼腫瘤及其它相關(guān)視網(wǎng)膜退化性疾病中發(fā)生。AMD是發(fā)病機(jī)制為明顯多因性的常見(jiàn)病癥，其中遺傳及環(huán)境因素在其發(fā)作及進(jìn)展中起作用。各種所進(jìn)行的研究已確定了AMD的若干風(fēng)險(xiǎn)因素，例如吸煙、衰老、家族史(Milton,Jm/0;/^a/mo/88,269(1979);Mitchell等人，(9;/^a/mo/ogy102，1450-1460(1995);Smith等人，(9;/^a/mo/ogy108,697-704(2001))、性別(女性中7倍較高可能性Klein等人，pp/^a/wo/ogj;99,933-943(1992))及種族(白種人最易受影響)。其它風(fēng)險(xiǎn)因素可包括眼睛特征，例如遠(yuǎn)視(farsightedness、hyperopia)及淺色眼睛，以及心血管疾病及高血壓。疾病發(fā)作進(jìn)展中的遺傳參與的證據(jù)亦已有文獻(xiàn)記錄(參見(jiàn)上文Hamdi及Kenney)。目前，不存在用于研究AMD的普遍接受的動(dòng)物模型。Malek等人(PNAS102,11900-5(2005))的初始研究已產(chǎn)生了具有當(dāng)組合時(shí)近似人類(lèi)AMD的形態(tài)特征的三個(gè)風(fēng)險(xiǎn)因素的動(dòng)物模型。值得注意的是該小鼠模型的發(fā)展已提供了測(cè)試針對(duì)AMD的治療耙標(biāo)和新穎分子機(jī)制的機(jī)會(huì)。仍存在對(duì)鑒定新穎靶標(biāo)及能夠治療和/或預(yù)防以下眼科疾病的治療劑的需要，所述眼科疾病例如年齡相關(guān)黃斑退化(濕型及干型)、青光眼、糖尿病性視網(wǎng)膜病變(包括糖尿病性黃斑水腫)、脈絡(luò)膜新生血管膜(CNV)、葡萄膜炎、近視退化、眼腫瘤、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞、虹膜紅變、眼新血管生成、中心漿液性視網(wǎng)膜病變、眼表面問(wèn)題(例如干眼)、視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈阻塞、囊樣黃斑部水腫及其它視網(wǎng)膜退化性疾病。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明公開(kāi)了與眼科疾病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)聯(lián)的新穎治療耙標(biāo)。特別地，本發(fā)明公開(kāi)了治療眼科疾病的下述方法，其包含向個(gè)體施用有效量的抑制劑/3-類(lèi)淀粉(A/3)肽?？蓪樹(shù)中制劑施用至患有以下眼科疾病的個(gè)體例如年齡相關(guān)黃斑退化(濕型及干型'AMD')、青光眼、糖尿病性視網(wǎng)膜病變(包括糖尿病性黃斑水腫)、脈絡(luò)膜新生血管膜(CNV)、葡萄膜炎、近視退化、眼腫瘤、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞、虹膜紅變、眼新血管生成、中心漿液性視網(wǎng)膜病變、眼表面問(wèn)題(例如干眼)、視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈阻塞、囊樣黃斑部水腫及其它視網(wǎng)膜退化性疾病。在一種實(shí)施方式中，抑制劑為抗體、反義分子、siRNA分子、核糖核酸酶或小分子化合物。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了治療患有年齡相關(guān)的黃斑退化的個(gè)體的下述方法，其包含向個(gè)體施用包含治療有效量的^-類(lèi)淀粉(A/3)肽的抑制劑的醫(yī)藥組合物。本發(fā)明的另一種實(shí)施方式涉及治療患有年齡相關(guān)的黃斑退化(AMD)的個(gè)體的下述方法，其包含向個(gè)體施用包含治療有效量的A/3抑制劑的醫(yī)藥組合物。本發(fā)明的另一種實(shí)施方式提供了治療有效量的A樹(shù)印制劑的用途，所述用途用于制備供促進(jìn)患有AMD的患者康復(fù)用的藥物。在此實(shí)施方式的一方面中，抗體包含具有受損的效應(yīng)器功能的Fc區(qū)。在此實(shí)施方式的另一方面中，疾病為AMD，包括濕型及干型AMD。本發(fā)明還提供了治療或預(yù)防與A如勺類(lèi)淀粉沉積相關(guān)的疾病的方法，其包含向個(gè)體施用有效劑量的醫(yī)藥組合物，該醫(yī)藥組合物包含與A/3肽或A/S肽的聚集形式特異性結(jié)合的抗體。在此實(shí)施方式的另一方面中，抗體包含與天然存在的Fc區(qū)相比具有變異的Fc區(qū)，其中該變異引起受損的效應(yīng)器功能。在一些實(shí)施方式中，施用該抗體產(chǎn)生比施用無(wú)變異的抗體更少的腦微出血。用于本發(fā)明的方法的抗體及多肽與A朋太或A湖太的聚集形式特異性結(jié)合。在一種實(shí)施方式中，抗體或多肽具有受損的效應(yīng)器功能。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽不是F(ab')2片段。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽不是Fab片段。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽不是單鏈抗體scFv。與A湖太或A湖太的聚集形式特異性結(jié)合且包含具有受損的效應(yīng)器功能的重鏈恒定區(qū)的多肽亦可用于本文所述的方法中的任一種。在一些實(shí)施方式中，多肽包含衍生自抗體9TL、6G或表3或表8中所示的其變異體的序列(例如一或多個(gè)CDR)。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽包含具有受損的效應(yīng)器功能的重鏈恒定區(qū)，其中重鏈恒定區(qū)包含F(xiàn)c區(qū)。在一些實(shí)施方式中，F(xiàn)c區(qū)中的N-糖基化被移除。在一些實(shí)施方式中，F(xiàn)c區(qū)包含N-糖基化識(shí)別序列內(nèi)的突變，由此使抗體或多肽的Fc區(qū)未經(jīng)N-糖基化。在一些實(shí)施方式中，F(xiàn)c區(qū)是經(jīng)聚乙二醇化的。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽的重鏈恒定區(qū)為含有突變A330P331至S330S331(參考野生型IgG2a序列的氨基酸編號(hào))的人類(lèi)重鏈IgG2a恒定區(qū)。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽包含IgG4的包含突變E233F234L235至P233V234A235的恒定區(qū)。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與A朋太的殘基1-16內(nèi)的表位特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與A湖太的N末端特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與A湖太的殘基16-28內(nèi)的表位特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體與A瀏太的C末端側(cè)上的表位特異性結(jié)合，例如由氨基酸25或之后氨基酸開(kāi)始的表位。抗體可與A湖太l-37、1-38、1-39、1-40、1-41、1-42、l-43中的任一種特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體可與C末端截短A湖太的游離C末端氨基酸特異性結(jié)合，例如A/31-37、1-38、1-39、1_40、1-41、1-42、1-43。在一種實(shí)施方式中，抗體或多肽與A/^—4()肽上的表位特異性結(jié)合。在此實(shí)施方式的另一方面中，抗體或多肽與A/3M2肽上的表位特異性結(jié)合。在此實(shí)施方式的再一方面中，抗體或多肽與A/M3肽上的表位特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與A/3Mo肽的殘基28-40內(nèi)的表位特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與A/3M2肽的殘基28-42內(nèi)的表位特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與A^.43肽的殘基28-43內(nèi)的表位特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與A朋太特異性結(jié)合，而沒(méi)有與全長(zhǎng)類(lèi)淀粉前驅(qū)蛋白質(zhì)(APP)結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與A^的聚集形式特異性結(jié)合，而沒(méi)有與可溶形式結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與A^的可溶形式特異性結(jié)合，而沒(méi)有與聚集形式結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與A/3的聚集形式及可溶形式特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與A/3Mo的C末端肽33-40特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與包括氨基酸35-40的、APm。上的表位特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與包括氨基酸36-40的、APwo上的表位特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與包括氨基酸39和/或40的、A(3M。上的表位特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與APMo特異性結(jié)合，但并不與APM2和/或A卩M3特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體包含本文所述的抗體9TL或衍生自9TL的抗體的可變區(qū)。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽競(jìng)爭(zhēng)地抑制抗體9TL、6G和/或衍生自9TL或6G的抗體或多肽與各AP肽的結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽以高于其與ApM2及APM3結(jié)合的親和性與A(3mo結(jié)合。在此實(shí)施方式的另一方面中，抗體不是抗體2294。在一些實(shí)施方式中，抗體與包括氨基酸25-34及40的、APl4。上的表位結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體包含本文所述的抗體6G或衍生自6G的抗體的可變區(qū)。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽競(jìng)爭(zhēng)地抑制抗體6G和/或衍生自6G的抗體或多肽與A(3的結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽以約IOOnM或以下、或20nM或以下，或2nM或以下的結(jié)合親和性(KD)與A(3肽結(jié)合。在此實(shí)施方式的一方面中，抗體或多肽以約IOOnM或以下、50nM或以下，或2iiM或以下的Kd與A(3Mc肽結(jié)合。在此實(shí)施方式的另一方面中，抗體或多肽亦以約IOOnM或以下，50nM或以下，或2nM或以下的KD與APM2肽結(jié)合?？梢砸员绢I(lǐng)域中已知的任何方法施用與AP肽特異性結(jié)合的抗體或多肽，包括靜脈內(nèi)、皮下、經(jīng)由吸入、動(dòng)脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、心內(nèi)、心室內(nèi)、非經(jīng)腸、鞘內(nèi)及腹膜內(nèi)。施用可通過(guò)注射和/或可為全身性(例如靜脈內(nèi))或局部施用。這通常也適用于本發(fā)明的多肽及多核苷酸。本發(fā)明還提供了通過(guò)施用醫(yī)藥組合物來(lái)治療眼科疾病的方法，所述醫(yī)藥組合物包含有效量的、與AP肽或AP肽的聚集形式特異性結(jié)合且具有受損的效應(yīng)器功能的抗體或多肽中的任一種，或編碼所述抗體或多肽的多核苷酸，及醫(yī)藥學(xué)上可接受的賦形劑。本發(fā)明還提供了包含下述組合物中的任何一種或多種的試劑盒及組合物，所述組合物包含有效量的與A(3肽或A(3肽的聚集形式特異性結(jié)合的抗體或多肽中的任一種，或編碼所述抗體或多肽的多核苷酸。一般在合適包裝中且具備適當(dāng)說(shuō)明書(shū)的這些試劑盒可用于本文所述的方法中的任一種。本發(fā)明還提供了一種制造治療性人化抗體的方法，該治療性人化抗體用于治療與人類(lèi)個(gè)體腦中的A湖太的類(lèi)淀粉沉積相關(guān)的疾病，該方法包含選擇與A湖太特異性結(jié)合的第一人化抗體；及改變?cè)摽贵w的FC區(qū)，以提供相對(duì)于所述第一人化抗體具有受損的效應(yīng)器功能的治療性人化抗體。本發(fā)明的另一種實(shí)施方式涉及保護(hù)或恢復(fù)個(gè)體視網(wǎng)膜功能的方法，其包含向所述個(gè)體施用包含治療有效量的A樹(shù)屯制劑的醫(yī)藥組合物。在一種實(shí)施方式中，抑制劑為抗體、反義分子、siRNA分子、核糖核酸酶或小分子化合物。本發(fā)明的另一種實(shí)施方式涉及保持或復(fù)原個(gè)體視敏度的方法，其包含治療有效量的A廚屯制劑。在上文實(shí)施方式的一方面中，上文方法用于并不因阿茲海默氏癥(Alzheimer'sdisease)、唐氏綜合征(Down'ssyndrome)或月畝類(lèi)淀粉血管病變而正在被治療的個(gè)體中。本發(fā)明的上述方法包括作為抗體的AP抑制劑。在一方面中，本文中所公開(kāi)的本發(fā)明涉及與A^,肽(表4中所示的SEQIDNO:15)的C末端結(jié)合的抗體。因此在一方面中，該方法包含用抗體9TL(可簡(jiǎn)稱(chēng)為"9TL")進(jìn)行的治療，抗體9TL通過(guò)具有ATCC檢錄號(hào)PTA-6124及PTA-6125的表達(dá)載體來(lái)產(chǎn)生。圖1中展示了9TL的重鏈及輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列。圖l中還展示了抗體9TL(包括Chothia及KabatCDR)的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)部分。應(yīng)當(dāng)理解提到9TL區(qū)域的任何部分或整體涵蓋由具有ATCC檢錄號(hào)PTA-6124及PTA-6125的表達(dá)載體產(chǎn)生的序列，和/或圖l中所示出的序列。在另一方面中，本發(fā)明包含施用具有表3中示出的氨基酸序列的9TL的抗體變異體。在另一方面中，本發(fā)明包含施用包含抗體9TL或表3中所示的其變異體9的片段或區(qū)域的抗體。在一種實(shí)施方式中，片段為抗體9TL的輕鏈。在另一種實(shí)施方式中，片段為抗體9TL的重鏈。在又一種實(shí)施方式中，片段含有來(lái)自抗體9TL的輕鏈和/或重鏈的一或多個(gè)可變區(qū)。在又一種實(shí)施方式中，片段含有來(lái)自圖l中所示的輕鏈和/或重鏈的一或多個(gè)可變區(qū)。在又一種實(shí)施方式中，片段含有來(lái)自抗體9TL的輕鏈和/或重鏈的一或多個(gè)CDR。在另一方面中，本發(fā)明包含施用多肽(其可以是或可以不是抗體)，其包含以下各物中的任何一種或多種a)抗體9TL或表3中所示的其變異體的一或多個(gè)CDR;b)來(lái)自抗體9TL或表3中所示的其變異體的重鏈的CDRH3;c)來(lái)自抗體9TL或表3中所示的其變異體的輕鏈的CDRL3;d)來(lái)自抗體9TL或表3中所示的其變異體的輕鏈的三個(gè)CDR;e)來(lái)自抗體9TL或表3中所示的其變異體的重鏈的三個(gè)CDR;f)來(lái)自抗體9TL或表3中所示的其變異體的輕鏈的三個(gè)CDR及來(lái)自抗體9TL或表3中所示的其變異體的重鏈的三個(gè)CDR。本發(fā)明另外提供施用多肽(其可以是或可以不是抗體)，其包含以下各物中的任何一種或多種a)衍生自抗體9TL或表3中所示的其變異體的一或多個(gè)(一、二、三、四、五或六個(gè))CDR;b)衍生自來(lái)自抗體9TL的重鏈的CDRH3的CDR;禾口/或c)衍生自來(lái)自抗體9TL的輕鏈的CDRL3的CDR。在一些實(shí)施方式中，CDR為圖1中所示的CDR。在一些實(shí)施方式中，衍生自抗體9TL或表3中所示的其變異體的一種或多種CDR與9TL或其變異體的至少一個(gè)、至少兩個(gè)、至少三個(gè)、至少四個(gè)、至少五個(gè)或至少六個(gè)CDR至少約85%、至少約86%、至少約87%、至少約88%、至少約89%、至少約90%、至少約91%、至少約92%、至少約93%、至少約94%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%—致。在另一方面中，本發(fā)明包含施用抗體6G(可簡(jiǎn)稱(chēng)為"6G")。圖8中展示6G的重鏈及輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列。圖8中亦展示抗體6G(包括Chothia及KabatCDR)的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)部分。在另一方面中，本發(fā)明包含施用具有表8中示出的氨基酸序列的6G的抗體變異體。在另一方面中，本發(fā)明包含施用包含抗體6G或表8中所示的其變異體的片段或區(qū)域的抗體。在一種實(shí)施方式中，片段為抗體6G的輕鏈。在另一種實(shí)施方式中，片段為抗體6G的重鏈。在又一種實(shí)施方式中，片段含有來(lái)自抗體6G的輕鏈和/或重鏈的一或多個(gè)可變區(qū)。在又一種實(shí)施方式中，片段含有來(lái)自圖8中所示的輕鏈和/或重鏈的一或多個(gè)可變區(qū)。在又一種實(shí)施方式中，片段含有來(lái)自抗體6G的輕鏈和/或重鏈的一或多個(gè)CDR。在另一方面中，本發(fā)明包含施用下述多肽(其可以是或可以不是抗體)，所述多肽包含以下各物中的任何一種或多種a)抗體6G或表8中所示的其變異體的一或多個(gè)CDR;b)來(lái)自抗體6G或表8中所示的其變異體的重鏈的CDRH3;c)來(lái)自抗體6G或表8中所示的其變異體的輕鏈的CDRL3;d)來(lái)自抗體6G或表8中所示的其變異體的輕鏈的三個(gè)CDR;e)來(lái)自抗體6G或表8中所示的其變異體的重鏈的三個(gè)CDR;f)來(lái)自抗體6G或表8中所示的其變異體的輕鏈的三個(gè)CDR及來(lái)自抗體6G或表8中所示的其變異體的重鏈的三個(gè)CDR。本發(fā)明另外包含施用多肽(其可以是或可以不是抗體)，其包含以下各物中的任何一種或多種a)衍生自抗體6G或表8中所示的其變異體的一或多個(gè)(一、二、三、四、五或六個(gè))CDR;b)衍生自來(lái)自抗體6G的重鏈的CDRH3的CDR;禾口/或c)衍生自來(lái)自抗體6G的輕鏈的CDRL3的CDR。在一些實(shí)施方式中，CDR為圖8中所示的CDR。在一些實(shí)施方式中，衍生自抗體6G或表8中所示的其變異體的該或此類(lèi)CDR至少約85。/c)、至少約86%、至少約87%、至少約88%、至少約89%、至少約90%、至少約91%、至少約92%、至少約93%、至少約94%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98。/。或至少約99。/o與6G或其變異體的至少一個(gè)、至少兩個(gè)、至少三個(gè)、至少四個(gè)、至少五個(gè)或至少六個(gè)CDR—致。在另一方面中，本發(fā)明包含施用包含下述重鏈可變區(qū)及下述輕鏈可變區(qū)的抗體，所述重鏈可變區(qū)包含來(lái)自SEQIDNO:26中所示的抗體6G重鏈可變區(qū)的三個(gè)CDR，所述輕鏈可變區(qū)包含來(lái)自SEQIDNO:27中所示的抗體6G輕鏈可變區(qū)的三個(gè)CDR。在另一方面中，本發(fā)明包含施用包含下述重鏈可變區(qū)及下述輕鏈可變區(qū)的抗體，所述重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:28、SEQIDNO:29及SEQIDNO:30中所示的三個(gè)CDR，所述輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:31、SEQIDNO:32及SEQIDNO:33中所示的三個(gè)CDR。在再一方面中，本發(fā)明包含含有SEQIDNO:26中所示的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)及含有SEQIDNO:27中所示的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。在再一方面中，本發(fā)明包含SEQIDNO:36中所示的重鏈氨基酸序列及SEQIDNO:37中所示的輕鏈氨基酸序列。在一些實(shí)施方式中，CDR為KabatCDR。在其它一些實(shí)施方式中，CDR為ChothiaCDR。在其它一些實(shí)施方式中，CDR為Kabat與ChothiaCDR的組合(亦稱(chēng)為"組合CDR"或"擴(kuò)展CDR")。換言之，對(duì)于含有一種以上CDR的任何給定實(shí)施方式而言，CDR可為Kabat、Chothia和/或組合CDR中的任一種。在一些實(shí)施方式中，多肽(例如抗體)包含SEQIDNO:5中所示的氨基酸序列，其中L1為L(zhǎng)、V或I;其中Y2為Y或W;其中S3為S、T或G;其中L4為L(zhǎng)、R、A、V、S、T、Q或E;其中V6為V、I、T、P、C、Q、S、N或F;且其中Y7為Y、H、F、W、S、I、V或A。在一些實(shí)施方式中，氨基酸序列為重鏈可變區(qū)中的CDR3。在本文中為方便起見(jiàn)，在本文上下文中或提到氨基酸時(shí)，"為/是"指參照在SEQID中的位置來(lái)選擇給定位置的氨基酸。舉例而言，"L1為L(zhǎng)、V或I"指在SEQIDNO:5中位置l的氨基酸L可被V或I取代。在一些實(shí)施方式中，多肽(例如抗體)包含SEQIDNO:6中所示的氨基酸序列，其中Y8為Y、A或H;且其中A11為A或S;且其中K12為K或A。在一些實(shí)施方式中，氨基酸序列為輕鏈可變區(qū)中的CDR1。在一些實(shí)施方式中，多肽(例如抗體)包含SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列，其中L1為L(zhǎng)、M、N、C、F、V、K、S、Q、G、S;其中G3為G、S或T;其中T4為T(mén)或S;其中H5為H或L;其中Y6為Y、P、A、W、Q、M、S或E;其中V8為V、L、K、H、T、A、E、或M;且其中L9為L(zhǎng)、I、T、S或V。在一些實(shí)施方式中，氨基酸序列為輕鏈可變區(qū)中的CDR3。在一些實(shí)施方式中，多肽(例如抗體)包含重鏈可變區(qū)，該重鏈可變區(qū)包含(a)SEQIDNO:3中所示的CDRl區(qū)域；(b)SEQIDNO:4中所示的CDR2區(qū)域；及(c)SEQIDNO:5中所示的CDR3區(qū)域，其中L1為L(zhǎng)、V或I;其中Y2為Y或W;其中S3為S、T或G;其中L4為L(zhǎng)、R、A、V、S、T、Q或E;其中V6為V、I、T、P、C、Q、S、N或F;且其中Y7為Y、H、F、W、S、I、V或A。在一些實(shí)施方式中，多肽(例如抗體)包含輕鏈可變區(qū)，該輕鏈可變區(qū)包含(a)SEQIDNO:6中所示的CDRl區(qū)域，其中Y8為Y、A或H;且其中A11為A或S;且其中K12為K或A;(b)SEQIDNO:7中所示的CDR2區(qū)域；及(c)SEQIDNO:8中所示的CDR3區(qū)域，其中L1為L(zhǎng)、M、N、C、F、V、K、S、Q、G、S;其中G3為G、S或T;其中T4為T(mén)或S;其中H5為H或L;其中Y6為Y、P、A、W、Q、M、S或E;其中V8為V、L、K、H、T、A、E或M;且其中L9為L(zhǎng)、I、T、S或V。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體為人抗體。在其它實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體為人化抗體。在一些實(shí)施方式中，抗體為單克隆抗體。在一些實(shí)施方式中，抗體(或多肽)系經(jīng)分離。在一些實(shí)施方式中，抗體(或多肽)為基本上純的。抗體的重鏈恒定區(qū)可來(lái)自任何類(lèi)型的恒定區(qū)，例如IgG、IgM、IgD、IgA及IgE;及任何同型體(isotype)，例如IgGl、IgG2、IgG3及IgG4。在一些實(shí)施方式中，抗體包含經(jīng)修飾恒定區(qū)，例如免疫惰性(其包括部分免疫惰性，且可與術(shù)語(yǔ)"具有受損的效應(yīng)器功能"互換使用)的恒定區(qū)，其例如并不觸發(fā)補(bǔ)體介導(dǎo)溶胞、并不刺激抗體依賴(lài)細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒性(ADCC)或并不活化微神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。在一些實(shí)施方式中，如Eur.J.Immunol.(1999)29:2613-2624;PCT申請(qǐng)案第PCT/GB99/01441號(hào)；和/或英國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)案第9809951.8號(hào)中所述來(lái)修飾恒定區(qū)。在其它實(shí)施方式中，抗體包含人類(lèi)重鏈IgG2a恒定區(qū)，該恒定區(qū)包含以下突變A330P331至S330S331(參考野生型IgG2a序列的氨基酸編號(hào))。Eur.J.Immunol.(1999)29:2613-2624。在一些實(shí)施方式中，抗體包含IgG4的恒定區(qū)，該恒定區(qū)包含以下突變E233F234L235至P233V234A235。在其它一些實(shí)施方式中，針對(duì)N連接糖基化而對(duì)恒定區(qū)去糖基化(aglycosylated)。在一些實(shí)施方式中，通過(guò)使寡糖附接殘基(例如Asn297)突變和/或側(cè)接作為恒定區(qū)中N-糖基化識(shí)別序列的部分的殘基，從而針對(duì)N連接糖基化而使恒定區(qū)去糖基化。在一些實(shí)施方式中，針對(duì)N連接糖基化而對(duì)恒定區(qū)去糖基化。以酶促方式或通過(guò)表達(dá)于糖基化缺乏宿主細(xì)胞中，從而可針對(duì)N連糖基化而使恒定區(qū)去糖基化。在另一方面中，本發(fā)明提供一種多核苷酸(其可經(jīng)分離)，其包含編碼抗體9TL或6G或表3及表8中所示的其變異體的片段或區(qū)域的多核苷酸。在一種實(shí)施方式中，片段為抗體9TL或6G的輕鏈。在另一種實(shí)施方式中，片段為抗體9TL或6G的重鏈。在又一種實(shí)施方式中，片段含有來(lái)自抗體9TL或6G的輕鏈和/或重鏈的一或多個(gè)可變區(qū)。在又一種實(shí)施方式中，片段含有來(lái)自抗體9TL或6G的輕鏈和/或重鏈的一或多個(gè)(即一、二、三、四、五、六個(gè))互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)。附圖簡(jiǎn)述圖1展示了9TL抗體的重鏈可變區(qū)(SEQIDNO:l)及輕鏈可變區(qū)(SEQIDNO:2)的氨基酸序列。KabatCDR表示為粗體，ChothiaCDR以下劃線(xiàn)表示。對(duì)重鏈及輕鏈可變區(qū)的氨基酸殘基依次編號(hào)。圖2展示了通過(guò)肽競(jìng)爭(zhēng)進(jìn)行的抗體9TL的表位定位。將AA.4o肽固定于SA芯片上。接著，使與IO/xM各種肽(A如勺氨基酸28-40、1-40、1-28、28-42、22-35、1-16、1-43、33-40、l-38或17-40)或空白(無(wú)肽)預(yù)培育lh的各單克隆抗體2289及9TLFab片段(各50nM)流到該芯片上。測(cè)量抗體Fab片段對(duì)固定A(3M。肽的結(jié)合。圖3是展示了通過(guò)肽競(jìng)爭(zhēng)進(jìn)行抗體2H6的表位定位的圖。將A/3M()肽固定于SA芯片上。使與16AtM各種肽(A如勺氨基酸l-16、1-28、1-38、1-40、1-42、1-43、17-40、17-42、22-35、25-35或33-40)或空白(無(wú)肽)預(yù)培育lh的各單克隆抗體2289、2286或2H6(各100nM)流到該芯片上。測(cè)量抗體與固定A/3M。肽的結(jié)合。圖4是展示了抗體2H6、2286及2289與不同A朋太C末端變異體的結(jié)合的圖。將GST-AiS變異體(M35A、V36A、G37A、G38A、V39A或V40A)或GST-A/3肽l-39、1-41、1-40、l-42固定于ELISA板上。將各固定的肽與單克隆抗體2286、2H6或2289(各mAb0.3nM)—起培育，且通過(guò)進(jìn)一步依次以經(jīng)生物素標(biāo)記的抗小鼠IgG(H+L)及Sterptavidin-HRP培育來(lái)檢測(cè)其結(jié)合。圖5為來(lái)自老化脂蛋白元同功異型物E4(APOE4)小鼠在正常膳食相對(duì)于高脂肪及膽固醇膳食下的a波及b波(A)及樣品視網(wǎng)膜電圖(B)的強(qiáng)度圖。圖6為對(duì)比正常膳食動(dòng)物的先前研究所繪的僅APOE4小鼠b波的強(qiáng)度圖。R2跡線(xiàn)展示當(dāng)以抗A/3抗體治療AMD狀小鼠(E4-HFC-R2)時(shí)的視網(wǎng)膜功能的保護(hù)或恢復(fù)。圖7展示AMD狀(APOE4)小鼠腦部的全A/3免疫組織化學(xué)。載片A(以抗A^抗體治療的AMD狀小鼠)展示陰性類(lèi)淀粉檢測(cè)。載片B、C及D(以介載體(vehicle)注射治療的AMD狀小鼠)展示陽(yáng)性類(lèi)淀粉檢測(cè)。載片E系取自陽(yáng)性對(duì)照且系取自血小板衍生APP小鼠模型(pdAPP，在血小板衍生生長(zhǎng)因子啟動(dòng)子控制下的突變(V717F)人類(lèi)APP(Games，D.等人，Nature373:523-527(1995))的腦。圖8展示6G抗體的重鏈可變區(qū)(SEQIDNO:l)及輕鏈可變區(qū)(SEQIDNO:27)的氨基酸序列。KabatCDR系呈粗體文且ChothiaCDR系經(jīng)加下劃線(xiàn)。對(duì)重鏈及輕鏈可變區(qū)的氨基酸殘基依次編號(hào)。圖9展示通過(guò)ELISA進(jìn)行的抗體6G的表位定位。將A湖太(1-16、1-28、17-40、17-42、22-35、28-40、28-42、1-38、1-40、1-42、l-43及33-40)固定于ELISA板上。將單克隆抗體6G(20nM)與各種固定肽培育l小時(shí)。使用山羊抗人類(lèi)KHRP綴合二抗來(lái)測(cè)量與固定A湖太結(jié)合的抗體6G。圖10展示通過(guò)ELISA進(jìn)行的抗體6G的表位定位。將各種A朋太固定于ELISA板上。將抗體6G與各種固定肽培育1h。使用山羊抗人類(lèi)/(HRP綴合二抗來(lái)測(cè)量與固定A湖太結(jié)合的抗體6G。"NB"指未檢測(cè)到結(jié)合。圖11為展示A/3上抗體6G結(jié)合的表位的示意圖。其中展示了A/3在類(lèi)淀粉前驅(qū)蛋白質(zhì)(APP)中及APP的部分在細(xì)胞膜中的相對(duì)位置。"CT99"指APP的C末端99個(gè)氨基酸。圖12為展示用針對(duì)A/3w6(m2324)及抗體6G的單克隆抗體對(duì)APP表達(dá)細(xì)胞進(jìn)行免疫染色的照片。上方的圖展示了細(xì)胞與m2324或6G(各5Mg/ml)—起培育且通過(guò)二次Cy3綴合山羊抗小鼠或抗人抗體來(lái)檢測(cè)結(jié)合之后在螢光顯微鏡下的細(xì)胞。下方的圖展示了在顯微鏡下所觀(guān)察的細(xì)胞。圖13為僅五個(gè)研究組的APOE4小鼠的b波強(qiáng)度圖正常膳食的對(duì)照APOE4小鼠；高脂肪及膽固醇膳食('HFC')的對(duì)照APOE4小鼠(AMD狀模型)；以7G10治療的APOE4-HFC小鼠；以2H6治療的APOE4-HFC小鼠；及以6G治療的APOE4-HFC小鼠。圖14為僅三個(gè)研究組的APOE4小鼠的b波強(qiáng)度圖正常膳食的對(duì)照APOE4小鼠；對(duì)照APOE4HFC小鼠；及以6G治療的APOE4-HFC小鼠。發(fā)明詳述AMD的小鼠模型已有助于測(cè)試如下假設(shè)不受理論限制，脂質(zhì)輸送調(diào)節(jié)異常及類(lèi)淀粉沉積可促進(jìn)見(jiàn)于年齡相關(guān)黃斑退化、青光眼、糖尿病性視網(wǎng)膜病變(包括黃斑水腫)及其它相關(guān)視網(wǎng)膜退化性疾病中所觀(guān)察到的視網(wǎng)膜變化的發(fā)病機(jī)制。己在阿茲海默氏癥中廣泛研究了A銜冗積，且先前研究已表明A/5在年齡相關(guān)黃斑退化(Yoshida，T.等人，J.ofClin.Invest.,115(10):2793-2800(2005);Anderson,D.等人，ExperimentalEyeResearch78:243-256(2004);Johnson,L等人，PNAS,99(18):11820-11835(2002))及青光眼(McKinnonSJ,FrontBiosci8:1140-56(2003);Tatton等人，SurvOphthalmol.48:S25-37(2003))中的潛在作用。然而，迄今尚未存在關(guān)于A(yíng)/3抑制劑是否可通過(guò)實(shí)現(xiàn)視網(wǎng)膜保護(hù)和/或恢復(fù)而在治療黃斑退化中提供治療性益處的討論。此外，尚未有關(guān)于A(yíng)/3同功異型物中的任一種是否可有差異地促進(jìn)AMD發(fā)病機(jī)制的討論。如上文所討論，A/3為見(jiàn)于阿茲海默氏癥中的神經(jīng)炎斑的主要成份。A/3為/3類(lèi)淀粉前驅(qū)蛋白質(zhì)(0APP或APP)的分裂產(chǎn)物。APP為一種含有大異位N末端域、跨膜域及小細(xì)胞質(zhì)C末端尾部的I型跨膜糖蛋白。染色體21上單一APP基因轉(zhuǎn)錄的替代性拼接產(chǎn)生氨基酸數(shù)目不同的若干同功異型物。阿茲海默氏癥中的先前研究已確定八^.42同功異型物對(duì)類(lèi)淀粉沉積必不可少，且與A/3m。相反，A/3M2可以是阿茲海默氏癥的發(fā)病機(jī)制中的引發(fā)分子(McGowan,E.等人，Neuron47:191-199(2005))。阿茲海默氏癥中的其它研究而且表明A/Mo同功異型物實(shí)際上可抑制類(lèi)淀粉沉積，且A/5mo抑制剤可使得阿茲海默氏癥進(jìn)程惡化(Kim,J.等人，NeurobiologyofDisease,27(3):627-633(2007))。本文中所公開(kāi)的本發(fā)明提供通過(guò)施用治療有效量的抗體9TL或6G或由16其衍生的抗體或多肽來(lái)預(yù)防和/或治療個(gè)體中眼科疾病的方法，此類(lèi)眼科疾病例如年齡相關(guān)黃斑退化(濕型及干型)、青光眼、糖尿病性視網(wǎng)膜病變(包括糖尿病性黃斑水腫)、布魯赫膜破裂、近視退化、眼腫瘤及其它相關(guān)視網(wǎng)膜退化性疾病?？贵w9TL及其衍生物己被描述于WO2006036291中，其公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用全部并入本文中。用于所公開(kāi)方法中的抗體及多肽與A/3L4o的C末端結(jié)合?？贵w6G及其衍生物已被描述于WO2006036291及WO2006118959中，其公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用全部并入本文中。本發(fā)明的方法意欲包括A/3的所有抑制劑，其包括但不限于小分子化合物及生物制劑，例如抗體、反義分子、siRNA分子及核糖核酸酶。通用技術(shù)除非另作說(shuō)明，否則本發(fā)明的實(shí)施將采用本領(lǐng)域內(nèi)的分子生物學(xué)(包括重組技術(shù))、微生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)及免疫學(xué)的公知技術(shù)。這些技術(shù)己被充分解釋于例如以下的文獻(xiàn)中MolecularCloning:ALaboratoryManual,secondedition(Sambrook等人，1989)ColdSpringHarborPress;OligonucleotideSynthesis(M.J.Gait編，1984);MethodsinMolecularBiology,HumanaPress;CellBiology:ALaboratoryNotebook(J.E.Cellis編，1998)AcademicPress;AnimalCellCulture(R丄Freshney編，1987);IntroductiontoCellandTissueCulture(J.P.Mather及P.E.Roberts,1998)PlenumPress;CellandTissueCulture:LaboratoryProcedures(A.Doyle,J.B.Griffiths及D.G.Newell編，1993-1998)J.WileyandSons;MethodsinEnzymology(AcademicPress,Inc.);HandbookofExperimentalImmunology(D.M.Weir及C.C.Blackwell編)；GeneTransferVectorsforMammalianCells(J.M.Miller及M.P.Calos編，1987);CurrentProtocolsinMolecularBiology(F.M.Ausubel等人編，1987);PCR:ThePolymeraseChainReaction,(Mullis等人編，1994);CurrentProtocolsinImmunology(J.E.Coligan等人編，1991);ShortProtocolsinMolecularBiology(WileyandSons,1999);Immunobiology(C.A.Janeway及P.Travers，1997);Antibodies(P.Finch,1997);Antibodies:apracticalapproach(D.Catty.編，IRLPress,1988-1989);Monoclonalantibodies:apracticalapproach(P.Shepherd及C.Dean編，OxfordUniversityPress,2000);Usingantibodies:alaboratorymanual(E.Harlow及D.Lane(ColdSpringHarborLaboratoryPress,1999);TheAntibodies(M.Zanetti及J.D.Capra編，HarwoodAcademicPublishers,1995)。定義"A朋太抑制劑"是能夠減少A湖太產(chǎn)生和/或沉積的任何藥劑。A湖太抑制劑包括但不限于抗體、反義分子、siRNA分子、核糖核酸酶或小分子化合物。此外，A湖太抑制劑是能夠結(jié)合A瀏太且減少A/3斑沉積的任何藥劑，其包括能夠中斷類(lèi)淀粉前驅(qū)蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)裂解為產(chǎn)物A湖太的任何藥劑。抑制A湖太產(chǎn)生及沉積的其它目標(biāo)包括但不限于例如能夠抑制或壓制/5分泌酶(亦稱(chēng)為BACEl或memapsin-2)或7分泌酶復(fù)合物(其最低限度由四種個(gè)別蛋白質(zhì)組成早老素(presenilin)、尼卡斯群(nicastrin)、前咽缺陷1(APH-1)及早老素增強(qiáng)子2(PEN-2))的小分子治療劑或siRNA。"抗體"為免疫球蛋白分子，其能夠經(jīng)由至少一個(gè)位于免疫球蛋白分子的可變區(qū)的抗原識(shí)別位點(diǎn)來(lái)與例如碳水化合物、多核苷酸、脂質(zhì)、多肽等的靶標(biāo)特異性結(jié)合。如本文中所用地，該術(shù)語(yǔ)不僅涵蓋完整多克隆或單克隆抗體，而且涵蓋其片段(例如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv)、單鏈(ScFv)、其突變體、包含抗體部分的融合蛋白，及包含抗原識(shí)別位點(diǎn)的免疫球蛋白分子的任何其它修飾構(gòu)型。抗體包括任何類(lèi)別的抗體，例如IgG、IgA或IgM(或其亞類(lèi))，且抗體不需屬于任何特定類(lèi)別。視其重鏈的恒定結(jié)構(gòu)域的抗體氨基酸序列而定，免疫球蛋白可被歸于不同類(lèi)別。存在五個(gè)主要類(lèi)別的免疫球蛋白IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且此類(lèi)者中的若干者可進(jìn)一步分成亞類(lèi)(同型體)，例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl及IgA2。將對(duì)應(yīng)于不同類(lèi)別免疫球蛋白的重鏈恒定結(jié)構(gòu)域分別稱(chēng)作a、5、e、7及m。不同類(lèi)別免疫球蛋白的次單位結(jié)構(gòu)及三維構(gòu)型是公知的。如本文中所用地，"單克隆抗體"指由基本上同類(lèi)的抗體群體獲得的抗體，即包含該群體的個(gè)別抗體除可微量存在的可能天然存在的突變外均相同。單克隆抗體為高度特異性的，它們針對(duì)單一抗原位點(diǎn)。而且，與通常包括針對(duì)不同決定子(表位)的不同抗體的多克隆抗體制劑相反，各單克隆抗體針對(duì)抗原上的單一抗原性位點(diǎn)。修飾語(yǔ)"單克隆"表明抗體的特征在于由抗體的基本上同類(lèi)群體獲得，且不應(yīng)理解為需要通過(guò)任何特定方法來(lái)產(chǎn)生抗體。舉例而言，根據(jù)本發(fā)明欲使用的單克隆抗體可通過(guò)先由Kohler及Milstein,1975,Nature,256:495所述的融合瘤方法來(lái)制得，或可通過(guò)例如美國(guó)專(zhuān)利第4,816,567號(hào)中所述的重組DNA方法制得。亦可自使用(例如)McCafferty等人，1990,Nature,348:552-554中所述技術(shù)產(chǎn)生的噬菌體文庫(kù)來(lái)分離單克隆抗體。如本文中所用地，"人化"抗體指非人(例如鼠類(lèi))抗體的下述形式，其是含有衍生自非人類(lèi)免疫球蛋白的最小序列的特異性嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其片段(例如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或抗體的其它抗原結(jié)合子序列)。在極大程度上，人化抗體是人類(lèi)免疫球蛋白(接受者抗體)，其中來(lái)自接受者的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的殘基被經(jīng)來(lái)自非人類(lèi)物種(供體抗體)的CDR的殘基置換，所述非人物種例如是具有所需特異性、親和性及能力的小鼠、大鼠或兔。在一些情況下，人類(lèi)免疫球蛋白的Fv框架區(qū)(FR)殘基被相應(yīng)非人類(lèi)殘基置換。此外，人化抗體可包含既未在接受者抗體中也未在輸入CDR或框架序列中發(fā)現(xiàn)的殘基，但將其包括進(jìn)來(lái)以進(jìn)一步改善及優(yōu)化抗體效能。一般而言，人化抗體將包含至少一個(gè)且通常二個(gè)可變結(jié)構(gòu)域的基本上全部，其中CDR區(qū)域的全部或基本上全部均對(duì)應(yīng)于非人類(lèi)免疫球蛋白的那些，并且，F(xiàn)R區(qū)域的全部或基本上全部均為人類(lèi)免疫球蛋白共有序列的那些。最優(yōu)地，人化抗體還將包含至少一部分免疫球蛋白恒定區(qū)或域(Fc)，通常為人類(lèi)免疫球蛋白的彼者。抗體可具有如W099/58572中所述經(jīng)修飾的Fc區(qū)。其它形式的人化抗體具有一或多個(gè)相對(duì)于原始抗體而言經(jīng)改變的CDR(—、二、三、四、五、六個(gè))，其還被稱(chēng)為一或多個(gè)"衍生自"一或多個(gè)來(lái)自原始抗體的CDR的CDR。如本文中所用，"人抗體"表示具有相應(yīng)于由人類(lèi)產(chǎn)生的抗體的氨基酸序列的氨基酸序和/或已使用本領(lǐng)域中已知或本文中所公開(kāi)的制造人抗體的技術(shù)中的任一種制得的抗體。人抗體的此定義包括包含至少一個(gè)人類(lèi)重鏈多肽或至少一個(gè)人類(lèi)輕鏈多肽的抗體。一個(gè)這樣的實(shí)例為包含鼠類(lèi)輕鏈及人類(lèi)重鏈多肽的抗體。可使用各種本領(lǐng)域中已知的技術(shù)來(lái)制造人抗體。在一種實(shí)施方式中，人抗體選自噬菌體文庫(kù)，其中該噬菌體文庫(kù)表達(dá)人抗體(Vaughan等人，1996,NatureBiotechnology,14:309-314;Sheets等人，1998，PNAS,(USA)95:6157-6162;Hoogenboom及Winter,1991,J.Mol.Biol"227:381;Marks等人，1991,J.Mol.Biol.,222:581)。還可通過(guò)將人類(lèi)免疫球蛋白基因座引入內(nèi)源免疫球蛋白基因已部分或完全失活的轉(zhuǎn)殖基因動(dòng)物(例如小鼠)中來(lái)制造人抗體。在美國(guó)專(zhuān)利第5,545,807號(hào)；第5,545,806號(hào)；第5,569,825號(hào)；第5,625,126號(hào)；第5，633,425號(hào)；及第5,661,016號(hào)中描述此方法。或者，可通過(guò)永生化產(chǎn)生針對(duì)靶標(biāo)抗原的抗體的人類(lèi)B淋巴細(xì)胞來(lái)制備人抗體(此B淋巴細(xì)胞可自個(gè)體中回收或可經(jīng)體外免疫)。例如參見(jiàn)Cole等人，MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy,AlanR.Liss，第77頁(yè)(1985);Boerner等人，1991,J.Immunol.,147(l):86-95;及美國(guó)專(zhuān)利第5,750,373號(hào)。如本文中所用，術(shù)語(yǔ)"9TL"及"抗體9TL"可互換使用，以指通過(guò)保藏號(hào)為ATCCPTA-6124及ATCCPTA-6125的表達(dá)載體產(chǎn)生的抗體。圖l中展示了重鏈及輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列。圖1中圖解性地示出了抗體9TL(包括Chothia及KabatCDR)的CDR部分。編碼重鏈及輕鏈可變區(qū)的多核苷酸展示于SEQIDNO:9及SEQIDNO:10中。在實(shí)例中描述了對(duì)9TL的分析。如本文中所用地，術(shù)語(yǔ)"6G"及"抗體6G"可互換使用，以指具有SEQIDNO:36中所示的重鏈氨基酸序列及SEQIDNO:37中所示的輕鏈氨基酸序列的抗體。圖8中展示了重鏈及輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列。圖8中圖解性地示出了抗體6G(包括Chothia及KabatCDR)的CDR部分。編碼重鏈及輕鏈的多核苷酸展示于SEQIDNO:38及SEQIDNO:39中。在實(shí)例中描述了對(duì)6G的分析。術(shù)語(yǔ)"多肽"、"寡肽"、"肽"及"蛋白質(zhì)"本文中可互換使用，以指任何長(zhǎng)度的氨基酸的聚合物。聚合物可為線(xiàn)性或帶支鏈的，其可包含修飾氨基酸且其可雜有非氨基酸。所述術(shù)語(yǔ)也涵蓋己經(jīng)天然修飾或通過(guò)干預(yù)(intervention)來(lái)修飾的氨基酸聚合物；例如雙硫鍵形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其它操作或修飾，例如與標(biāo)記組份綴合。該定義內(nèi)還包括例如含有一或多個(gè)氨基酸類(lèi)似物(例如包括非天然氨基酸等)的多肽以及本領(lǐng)域中已知的其它修飾。應(yīng)了解因?yàn)楸景l(fā)明的多肽基于抗體，所以多肽可作為單鏈或相關(guān)鏈的形式出現(xiàn)。如本文中可互換使用的"多核苷酸"或"核酸"指任何長(zhǎng)度的核苷酸的聚合物，其包括DNA及RNA。核苷酸可為脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、經(jīng)修飾核苷酸或堿基和/或其類(lèi)似物，或可通過(guò)DNA或RNA聚合酶來(lái)并入聚合物中的任何受體。多核苷酸可包含經(jīng)修飾的核苷酸，例如甲基化核苷酸及其類(lèi)似物。如果存在的話(huà)，對(duì)核苷酸結(jié)構(gòu)的修飾可在聚合物組裝之前或之后進(jìn)行。核苷酸的序列可雜有非核苷酸組份。在聚合之后可對(duì)多核苷酸進(jìn)一步修飾，例如通過(guò)與標(biāo)記組份綴合來(lái)修飾。其它類(lèi)型的修飾包括(例如)"蓋子(cap)"、以類(lèi)似物取代天然存在的核苷酸中的一種或多種、核苷酸間修飾，例如具有不帶電的連接的修飾(例如膦酸甲酯、磷酸三酯、磷酰胺酸酯、胺基甲酸酯等)及具有帶電的連接的修飾(例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)、含有側(cè)位部分的修飾(例如蛋白質(zhì)，例如核酸酶、毒素、抗體、信號(hào)肽、聚-L-離胺酸等)、具有嵌入劑的修飾(例如吖啶、補(bǔ)骨脂素等)、含有螯合劑的修飾(例如金屬、放射性金屬、硼、氧化金屬等)、含有烷化劑的修飾、具有經(jīng)修飾的連接的修飾(例如"-變旋異構(gòu)核酸等)，以及多核苷酸的未經(jīng)修飾形式。另外，通常存在于糖中的任何羥基可(例如)經(jīng)膦酸酯基、磷酸酯基置換，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)保護(hù)基保護(hù)，或經(jīng)活化以制備與其它核苷酸的其它鍵，或可與固體支撐物綴合。5'及3'末端OH可經(jīng)磷酸化或經(jīng)胺或具有l(wèi)至20個(gè)碳原子的有機(jī)封端基團(tuán)部分取代。其它羥基也可衍生至標(biāo)準(zhǔn)保護(hù)基。多核苷酸亦可含有本領(lǐng)域中一般已知的核糖或脫氧核糖類(lèi)似物，包括(例如)2'-0-甲基-、2'-0-烯丙基、2'-氟-或2'-疊氮基-核糖、碳環(huán)糖類(lèi)似物、ce-變旋異構(gòu)糖、差向異構(gòu)糖(例如阿拉伯糖、木糖或來(lái)蘇糖、吡喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖(sedoheptulose))、非環(huán)狀類(lèi)似物及脫堿基核苷類(lèi)似物，例如甲基核糖苷。一或多個(gè)磷酸二酯連接可被備選的連接基團(tuán)置換。這些備選的連接基團(tuán)基團(tuán)包括但不限于其中磷酸鹽/酯被P(0)S("硫代酯")、P(S)S("二硫代酯")、(0)NR2("酰胺酸酯")、P(O)R、P(O)OR'、CO或CH2("甲縮醛")置換的實(shí)施方式，其中R或R'各自獨(dú)立地為H或經(jīng)取代或未經(jīng)取代的垸基，它們?nèi)芜x地含有醚(-O-)鍵的烷基(l-20個(gè)C)、芳基、烯基、環(huán)烷基、環(huán)烯基或芳垸基。多核苷酸中并非所有鍵均需相同。先前的描述也適用于本文中所提及的所有多核苷酸，包括RNA及DNA?？贵w的"可變區(qū)"指單獨(dú)或呈組合形式的抗體輕鏈的可變區(qū)或抗體重鏈的可變區(qū)。重鏈及輕鏈的可變區(qū)各由四個(gè)通過(guò)三個(gè)亦稱(chēng)為高變區(qū)的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)連接的框架區(qū)(FR)組成。各鏈中的CDR由FR緊密保持在一起，且與來(lái)自其它鏈的CDR—起促成抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)的形成。存在至少兩種測(cè)定CDR的技術(shù)(l)基于交叉物種序列可變性的方法(g卩，Kabat等人，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,(第五版，1991,NationalInstitutesofHealth,BethesdaMD));及(2)基于抗原抗體復(fù)合物的結(jié)晶學(xué)研究的方法(Al-lazikani等人(1997)J.Molec.Biol.273:927-948))。如本文中所用地，CDR可指由任一種方法或由兩方法的組合界定的CDR。抗體的"恒定區(qū)"指單獨(dú)或呈組合形式的抗體輕鏈的恒定區(qū)或抗體重鏈的恒定區(qū)。與抗體或多肽"優(yōu)先結(jié)合"或"特異性結(jié)合"(本文中可互換使用)的表位是本領(lǐng)域中充分了解的術(shù)語(yǔ)，且在本領(lǐng)域中，測(cè)定此特異性或優(yōu)先結(jié)合的方法也是公知的。與分子與替代性細(xì)胞或物質(zhì)的反應(yīng)或締合相比，若分子更頻繁、更迅速、以更大持續(xù)時(shí)間和/或更大親和性與特定細(xì)胞或物質(zhì)反應(yīng)或締合，則將該分子稱(chēng)為展現(xiàn)"特異性結(jié)合"或"優(yōu)先結(jié)合"。與抗體與其它物質(zhì)的結(jié)合相比，若抗體以更大親和性、親和力、更容易和/或以更大持續(xù)時(shí)間與耙標(biāo)結(jié)合，則抗體與靶標(biāo)"特異性結(jié)合"或"優(yōu)先結(jié)合"。舉例而言，與A/3Mo表位特異性或優(yōu)先結(jié)合的抗體與其與其它A/3M。表位或非A^-4。表位的結(jié)合相比，能以更大親和性、親和力、更容易和/或更大持續(xù)時(shí)間與此表位結(jié)合。通過(guò)閱讀此定義還應(yīng)了解例如，與第一靶標(biāo)特異性或優(yōu)先結(jié)合的抗體(或部分或表位)可與或可不與第二靶標(biāo)特異性或優(yōu)先結(jié)合。因此，"特異性結(jié)合"或"優(yōu)先結(jié)合"未必需要(盡管其可包括)獨(dú)占結(jié)合。大體而言，但并非一定，提到結(jié)合指優(yōu)先結(jié)合。如本文中所用地，"基本上純"指至少50%純(即無(wú)污染物)、更優(yōu)選至少90%純、更優(yōu)選至少95%純、更優(yōu)選至少98%純、更優(yōu)選至少99%純的物質(zhì)。"宿主細(xì)胞"包括可以是或已是用于并入多核苷酸插入物的載體接受者的個(gè)別細(xì)胞或細(xì)胞培養(yǎng)物。宿主細(xì)胞包括單一宿主細(xì)胞的子代，且由于天然、偶然或故意突變，子代可不必完全與原始親本細(xì)胞相同(在形態(tài)學(xué)或染色體組DNA補(bǔ)體方面)。宿主細(xì)胞包括用本發(fā)明的多核苷酸體內(nèi)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。術(shù)語(yǔ)"Fc區(qū)"用于定義免疫球蛋白重鏈的C末端區(qū)域。"Fc區(qū)"可為天然序列Fc區(qū)或變異Fc區(qū)。盡管免疫球蛋白重鏈的Fc區(qū)的邊界可改變，但人類(lèi)IgG重鏈Fc區(qū)通常被定義為自位置Cys226的氨基酸殘基或自Pro230至其羧基末端的伸展。Fc區(qū)中的殘基編號(hào)為如在Kabat中EU指數(shù)的編號(hào)。Kabat等人，SequencesofProteinsofImunologicalInterest，第5版，PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda，Md.，1991。免疫球蛋白的Fc區(qū)一般包含兩個(gè)恒定結(jié)構(gòu)域CH2及CH3。如本文中所用地，"Fc受體"及"FcR"描述與抗體的Fc區(qū)結(jié)合的受體。優(yōu)選的FcR是天然序列人類(lèi)FcR。此外，優(yōu)選的FcR是結(jié)合IgG抗體的FcRCy受體)，其包括FcryRI、Fc7RII及FcryRni亞類(lèi)受體，包括這類(lèi)受體的等位基因變異體及備選剪接形式。FcryRn受體包括FcryRnA("活化受體")及FcryRnB("抑制受體")，其具有主要在其細(xì)胞質(zhì)域中存在不同的類(lèi)似氨基酸序列。FcR系綜述于Ravetch及Kinet，1991,Ann.Rev.Immunol"9:457-92;Cape傳人，1994,Immunomethods,4:25-34;及deHaas等人，1995,J.Lab.Clin.Med.，126:330-41中。"FcR"亦包括新生兒受體FcRn，其負(fù)責(zé)將母體IgG轉(zhuǎn)移至胎兒(Guyer等人，1976,J.Immunol.,117:587;及Kim等人，1994,J.Immunol.,24:249)。"補(bǔ)體依賴(lài)細(xì)胞毒性"及"CDC"指在補(bǔ)體存在下將耙標(biāo)溶胞。通過(guò)將補(bǔ)體系統(tǒng)的第一組份(Clq)結(jié)合于與同源抗原復(fù)合的分子(例如抗體)來(lái)引發(fā)補(bǔ)體活化路徑。為評(píng)定補(bǔ)體活化，可進(jìn)行CDC檢驗(yàn)，例如，如Gazzano-Santoro等人，J.Immunol.Methods,202:163(1996)中所述進(jìn)行。"功能性Fc區(qū)"具有天然序列Fc區(qū)的至少一種效應(yīng)器功能。示例性的"效23應(yīng)器功能"包括Clq結(jié)合；補(bǔ)體依賴(lài)細(xì)胞毒性(CDC);Fc受體結(jié)合；抗體依賴(lài)細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒性(ADCC);吞噬作用；細(xì)胞表面受體(例如B細(xì)胞受體；BCR)的調(diào)降等。此類(lèi)效應(yīng)器功能一般需要Fc區(qū)與結(jié)合域(例如抗體可變結(jié)構(gòu)域)組合，可使用各種本領(lǐng)域中已知用以評(píng)估此類(lèi)抗體效應(yīng)器功能的檢驗(yàn)來(lái)對(duì)其加以評(píng)定。"天然序列Fc區(qū)"包含與自然界中發(fā)現(xiàn)的Fc區(qū)的氨基酸序列一致的氨基酸序列。"變異Fc區(qū)"包含由于至少一個(gè)氨基酸修飾而不同于天然序列Fc區(qū)的氨基酸序列、然而保持天然序列Fc區(qū)的至少一種效應(yīng)器功能的氨基酸序列。與天然序列Fc區(qū)相比或與親本多肽的Fc區(qū)相比，變異Fc區(qū)在天然序列Fc區(qū)中或在親本多肽的Fc區(qū)中優(yōu)選具有至少一個(gè)氨基酸取代，例如約一至約十個(gè)氨基酸取代，且優(yōu)選約一至約五個(gè)氨基酸取代。本文中變異Fc區(qū)將與天然序列Fc區(qū)和/或與親本多肽的Fc區(qū)優(yōu)選具有至少約80。/。序列一致性，且最優(yōu)選與其具有至少約90%序列一致性，更優(yōu)選與其具有至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%序列一致性。如本文中所用地，"抗體依賴(lài)性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性"及"ADCC"指細(xì)胞介導(dǎo)反應(yīng)，其中表達(dá)Fc受體(FcR)的非特異性細(xì)胞毒性細(xì)胞(例如自然殺手(NK)細(xì)胞、嗜中性白血球及巨噬細(xì)胞)識(shí)別靶標(biāo)細(xì)胞上的結(jié)合抗體，隨后引起靶標(biāo)細(xì)胞的溶胞?？墒褂皿w外ADCC檢驗(yàn)來(lái)評(píng)定所關(guān)注分子的ADCC活性，例如美國(guó)專(zhuān)利第5,500，362號(hào)或第5,821,337號(hào)中所述的檢驗(yàn)。用于此類(lèi)檢驗(yàn)的適用效應(yīng)器細(xì)胞包括周?chē)簡(jiǎn)魏思?xì)胞(PBMC)及NK細(xì)胞。或者或另外，例如在動(dòng)物模型中可體內(nèi)評(píng)定所關(guān)注分子的ADCC活性，例如Clynes等人，1998,PNAS(USA),95:652-656中所公開(kāi)的動(dòng)物模型。如本文中所用地，"有效劑量"或"有效量"的藥物、化合物或醫(yī)藥組合物為足以實(shí)現(xiàn)有利或所需結(jié)果的量。對(duì)于預(yù)防性用途而言，有利或所需結(jié)果包括例如消除或減小風(fēng)險(xiǎn)、減輕嚴(yán)重程度或延遲疾病發(fā)作的結(jié)果，該發(fā)作包括疾病的生物化學(xué)、組織和/或行為癥狀，在疾病發(fā)展期間呈現(xiàn)的其并發(fā)癥及中間病理學(xué)表型。對(duì)于治療性用途而言，有利或所需結(jié)果包括但不限于例如保護(hù)或恢復(fù)視網(wǎng)膜功能或保持或復(fù)原視敏度的臨床結(jié)果。有效劑量可以一或多次施用來(lái)施用。為達(dá)成本發(fā)明的目的，有效劑量的藥物、化合物或醫(yī)藥組合物為足以直接或間接地實(shí)現(xiàn)預(yù)防性或治療性治療的量。如在臨床情形中了解，有效劑量的藥物、化合物或醫(yī)藥組合物可與或可不與另一藥物、化合物或醫(yī)藥組合物聯(lián)合來(lái)達(dá)成。因此，在施用一或多種治療劑的情形下可考慮"有效劑量"，并且，單一藥劑若與一或多種其它藥劑聯(lián)合，所需結(jié)果可達(dá)成或已達(dá)成，單一藥劑則可視為是以有效量給出的。如本文中所用，"治療"為獲得有利或所需結(jié)果(包括臨床結(jié)果)的方法。為達(dá)成本發(fā)明的目的，有利或所需臨床結(jié)果包括但不限于復(fù)原、預(yù)防或保護(hù)視網(wǎng)膜功能。"A湖太的生物作用"或"A/3生物活性"意謂A/5在眼科疾病中的作用，其可為直接或間接作用，且不受理論限制地包括A/3在脂質(zhì)輸送調(diào)節(jié)異常中的涉入。間接作用包括但不限于A(yíng)/3對(duì)視網(wǎng)膜功能及視敏度起作用。如本文中所用，"延遲"眼科疾病的發(fā)展意謂推遲、阻礙、減緩、推延、穩(wěn)定和/或延期疾病的發(fā)展。視疾病史和/或所治療的個(gè)體而定，此延遲可具有變化的時(shí)間長(zhǎng)度。對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言顯而易見(jiàn)足夠或顯著延遲可實(shí)際上涵蓋預(yù)防，因?yàn)閭€(gè)體并不發(fā)展該疾病。"延遲"眼科疾病發(fā)展的方法為當(dāng)與不使用該方法相比時(shí)，在給定時(shí)間框架內(nèi)減小疾病發(fā)展機(jī)率和/或在給定時(shí)間框架內(nèi)減小疾病程度的方法。此類(lèi)比較通常系基于臨床研究，使用統(tǒng)計(jì)上顯著數(shù)目的個(gè)體。眼科疾病的"發(fā)展"意謂個(gè)體中眼科疾病的發(fā)作和/或進(jìn)展。使用如本文所述的標(biāo)準(zhǔn)臨床技術(shù)可檢測(cè)眼科疾病的發(fā)展。然而，發(fā)展還表示最初可能不可檢測(cè)的疾病進(jìn)展。為達(dá)成本發(fā)明的目的，在此情況下，進(jìn)展指如由標(biāo)準(zhǔn)眼科檢查(ophthalmogicalexamination)或通過(guò)較專(zhuān)業(yè)化測(cè)試來(lái)測(cè)定的疾病病況的生物學(xué)過(guò)程。多種診斷性測(cè)試包括但不限于視野、視敏度、螢光血管攝影術(shù)(fluoresceinangiography)、視網(wǎng)膜電圖、光學(xué)同步斷層攝影法(OCT)、視覺(jué)誘發(fā)電位(VEP)、靛氰綠、色彩視覺(jué)、阿姆斯勒方格表(Amslergrid)、眼內(nèi)壓及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它診斷工具。AMD的診斷性測(cè)試尤其包括但不限于視敏度、眼底檢査(fundoscopicexamination^螢光血管攝影術(shù)、靛氰綠及眼同步斷層攝影法(OCT)。"發(fā)展"包括出現(xiàn)、復(fù)發(fā)及發(fā)作。如本文中所用，眼科疾病的"發(fā)作"或"出現(xiàn)"包括初始發(fā)作和/或復(fù)發(fā)。如本文中所用，"保護(hù)"視網(wǎng)膜功能指穩(wěn)定或保持視網(wǎng)膜功能。如本文中所用，"恢復(fù)"視網(wǎng)膜功能系指在先前損害之后復(fù)原視網(wǎng)膜功能。視網(wǎng)膜功能的保護(hù)或恢復(fù)可通過(guò)測(cè)量統(tǒng)計(jì)上顯著結(jié)果(即pO.05)來(lái)測(cè)定，如通過(guò)上述眼科診斷工具中的任一種來(lái)測(cè)量，尤其例如視敏度、視網(wǎng)膜電圖、視野、眼底檢查、螢光血管攝影術(shù)、靛氰綠及眼同步斷層攝影法(OCT)。舉例而言，如下文實(shí)例4中所示，統(tǒng)計(jì)上顯著的視網(wǎng)膜功能保護(hù)或恢復(fù)系由視網(wǎng)膜電圖中b波振幅恢復(fù)來(lái)展示(p^.008)。視敏度的"保持"或"復(fù)原"可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)視力表以及本領(lǐng)域中公知的多種眼科診斷工具來(lái)測(cè)量。如本文中所用地，"聯(lián)合"施用包括同時(shí)施用和/或在不同時(shí)間施用。聯(lián)合施用亦涵蓋以共制劑來(lái)施用或以獨(dú)立組合物來(lái)施用。如本文中所用，聯(lián)合施用意謂涵蓋向個(gè)體施用抗A/3抗體與另一藥劑的任何狀況，其可同時(shí)和/或獨(dú)立發(fā)生。如本文中進(jìn)一步討論地，應(yīng)了解可以以不同給藥頻率或間隔來(lái)施用抗A樹(shù)亢體及其它藥劑。舉例而言，抗A/3抗體可每周施用，而其它藥劑可較不頻繁地施用。應(yīng)了解可使用同一施用途徑或不同施用途徑來(lái)施用抗A廚亢體及其它藥劑。"生物樣品"涵蓋多種自個(gè)體獲得的樣品類(lèi)型且可用于診斷或監(jiān)測(cè)檢驗(yàn)。該定義涵蓋生物源的血液及其它液體樣品、固體組織樣品，例如活組織檢査樣品或組織培養(yǎng)物或由此衍生的細(xì)胞及其子代。該定義亦包括在取得其之后以任何方式操作的樣品，例如通過(guò)以試劑處理、溶解或某些組份(例如蛋白質(zhì)或多核苷酸)的富集或包埋于半固體或固體基質(zhì)中以達(dá)成切片目的。術(shù)語(yǔ)"生物樣品"涵蓋臨床樣品，且亦包括培養(yǎng)物中的細(xì)胞、細(xì)胞上清液、細(xì)胞溶胞物、血清、血漿、生物流體及組織樣品。"個(gè)體"(或者稱(chēng)為"受檢者")為哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選為人類(lèi)。哺乳動(dòng)物亦包括但不限于農(nóng)畜(例如牛)、體育動(dòng)物、寵物(例如貓、狗、馬)、靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物、小鼠及大鼠。如本文中所用，"載體"指能夠在宿主細(xì)胞中遞送且優(yōu)選能夠表達(dá)一或多種所關(guān)注基因或序列的構(gòu)建體。載體的實(shí)例包括但不限于病毒載體、26裸DNA或RNA表達(dá)載體、質(zhì)粒、粘粒或噬菌體載體、與陽(yáng)離子縮合劑相關(guān)的DNA或RNA表達(dá)載體、囊封于脂質(zhì)粒中的DNA或RNA表達(dá)載體，及某些真核細(xì)胞，例如生產(chǎn)細(xì)胞。如本文中所用地，"表達(dá)控制序列"意指指導(dǎo)核酸轉(zhuǎn)錄的核酸序列。表達(dá)控制序列可以是，例如，組成性或誘導(dǎo)性啟動(dòng)子的啟動(dòng)子，或增強(qiáng)子。表達(dá)控制序列與待轉(zhuǎn)錄的核酸序列可操作地連接。如本文中所用，"醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑"包括當(dāng)與活性成份組合時(shí)使該成份保持生物活性且對(duì)個(gè)體的免疫系統(tǒng)為非反應(yīng)性的任何物質(zhì)。實(shí)例包括但不限于標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)藥載劑中的任一種，例如磷酸鹽緩沖生理食鹽水溶液、水、例如油/水乳液的乳液及多種類(lèi)型的濕潤(rùn)劑。用于噴霧劑或非經(jīng)腸施用的優(yōu)選稀釋劑為磷酸鹽緩沖生理食鹽水或生理(0.9%)食鹽水。通過(guò)公知公知方法來(lái)調(diào)配包含此類(lèi)載劑的組合物(例如參見(jiàn)Wem/"g,朋k尸/fl潔flcewricfl/S"'e"cas1，第18片反，A.Gennaro編，MackPublishingCo.,Easton,PA，1990;及iem/"gtow，T7eSc/ewce朋d尸racriceo/P/za簡(jiǎn)ac少第20版，MackPublishing,2000)。如本文中所用的術(shù)語(yǔ)"k。n"意指抗體與抗原締合的締合速率常數(shù)(onrateconstant)。如本文中所用的術(shù)語(yǔ)"k。ff"意指抗體自抗體/抗原復(fù)合物解離的解離速率常類(lèi)女(offrateconstant)。如本文中所用的術(shù)語(yǔ)"KD"意指抗體-抗原相互作用的平衡解離常數(shù)。組合物及組合物的制造方法抗A/3抗體及多肽I.抗體9TL及9TL衍生抗體及多肽本發(fā)明涵蓋組合物，包括醫(yī)藥組合物，其包含抗體9TL及表3中所示的其變異體或衍生自抗體9TL及表3中所示的其變異體的多肽；及包含編碼9TL抗體及其變異體或多肽的序列的多核苷酸。如本文中所用，組合物包含一或多種與A/3Mo的C末端結(jié)合的抗體或多肽(其可以是或可以不是抗體)和/或一或多種包含編碼一或多種與A/3M。的C末端結(jié)合的抗體或多肽的序列，例如醫(yī)藥學(xué)上可接受的賦形劑，包括緩沖劑，其在本領(lǐng)域中是公知的。本發(fā)明的抗體及多肽特征在于以下特征中的任一種(一種或多種)(a)與A/3M。的C末端肽28-40結(jié)合，但并不顯著與Aft-42或A艮43結(jié)合；(b)與AA-40的C末端肽33-40結(jié)合；(c)抑制在個(gè)體中形成類(lèi)淀粉斑；(d)減少個(gè)體眼睛中的類(lèi)淀粉斑；(e)治療、預(yù)防、改善一或多種眼科疾病癥狀，該眼科疾病包括但不限于年齡相關(guān)黃斑退化(干型及濕型)、青光眼、糖尿病性視網(wǎng)膜病變(包括黃斑水腫)及其它相關(guān)視網(wǎng)膜退化性疾??；(f)產(chǎn)生視網(wǎng)膜功能的顯著保護(hù)或恢復(fù)；及(g)產(chǎn)生視敏度的顯著保持或復(fù)原。與其它所報(bào)導(dǎo)的抗A^抗體相反，本發(fā)明的抗體及多肽還可展現(xiàn)想要的安全性。因此，本發(fā)明提供以下各物中的任一種，或包含以下各物中的任一種的組合物(包括醫(yī)藥組合物)(a)抗體9TL或表3中所示的其變異體；(b)抗體9TL或表3中所示的其變異體的片段或區(qū)域；(c)抗體9TL或表3中所示的其變異體的輕鏈；(d)抗體9TL或表3中所示的其變異體的重鏈；(e)來(lái)自抗體9TL或表3中所示的其變異體的輕鏈和/或重鏈的一或多個(gè)可變區(qū)；(f)抗體9TL或表3中所示的其變異體的一或多個(gè)CDR(—、二、三、四、五或六個(gè)CDR);(g)來(lái)自抗體9TL的重鏈的CDRH3;(h)來(lái)自抗體9TL或表3中所示的其變異體的輕鏈的CDRL3;(i)來(lái)自抗體9TL或表3中所示的其變異體的輕鏈的三個(gè)CDR;(j)來(lái)自抗體9TL或表3中所示的其變異體的重鏈的三個(gè)CDR;(k)來(lái)自抗體9TL或表3中所示的其變異體的輕鏈的三個(gè)CDR及來(lái)自抗體9TL或表3中所示的其變異體的重鏈的三個(gè)CDR;及(l)包含(b)至(k)中的任一種的抗體。本發(fā)明還提供了包含以上各物中的任何一種或多種的多肽。圖1中圖解性地示出了抗體9TL(包括Chothia及KabatCDR)的CDR部分。CDR區(qū)域的測(cè)定系是本領(lǐng)域內(nèi)公知的。應(yīng)當(dāng)了解在一些實(shí)施方式中，CDR可以是Kabat與ChothiaCDR的組合(亦稱(chēng)為"組合CDR"或"擴(kuò)展CDR")。在一些實(shí)施方式中，CDR為KabatCDR。在其它實(shí)施方式中，CDR為ChothiaCDR。換言之，在具有一種以上CDR的實(shí)施方式中，CDR可為Kabat、Chothia、組合CDR或其組合中的任一種。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了下述多肽(其可以是或可以不是抗體)，其包含基本上與9TL或表3中所示的其變異體的至少一個(gè)CDR、至少兩個(gè)、至少三個(gè)、至少四個(gè)、至少五個(gè)或所有六個(gè)CDR—致的至少一個(gè)CDR、至少兩個(gè)、至少三個(gè)或至少四個(gè)、至少五個(gè)或所有六個(gè)CDR。其它實(shí)施方式包括具有基本上與9TL的至少兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)或六個(gè)CDR—致或衍生自9TL的至少兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)或六個(gè)CDR的抗體。在一些實(shí)施方式中，該至少一個(gè)、二個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)或六個(gè)CDR與9TL或表3中所示的其變異體的至少一個(gè)、二個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)或六個(gè)CDR至少約85。/。、86%、87%、88%、89%、90%、95%、96%、97%、98%或99%—致。應(yīng)了解，為達(dá)成本發(fā)明的目的，盡管活性程度與9TL或表3中所示的其變異體相比可改變(可更大或更小)，但結(jié)合特異性和/或總體活性一般得以保持。本發(fā)明還提供了下述多肽(其可以是或可以不是抗體)，其包含9TL或表3中所示的其變異體的氨基酸序列，該氨基酸序列具有以下各物中的任一種9TL或表3中所示的其變異體的序列的至少5個(gè)鄰接氨基酸、至少8個(gè)鄰接氨基酸、至少約10個(gè)鄰接氨基酸、至少約15個(gè)鄰接氨基酸、至少約20個(gè)鄰接氨基酸、至少約25個(gè)鄰接氨基酸、至少約30個(gè)鄰接氨基酸，其中此類(lèi)氨基酸中的至少3者來(lái)自9TL(圖1)或表3中所示的其變異體的可變區(qū)。在一種實(shí)施方式中，可變區(qū)是來(lái)自9TL的輕鏈。在另一種實(shí)施方式中，可變區(qū)來(lái)自9TL的重鏈。示例性多肽具有來(lái)自9TL的重鏈及輕鏈可變區(qū)的鄰接氨基酸(上述長(zhǎng)度)。在另一種實(shí)施方式中，5個(gè)(或5個(gè)以上)鄰接氨基酸來(lái)自圖1中所示的9TL的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)。在一些實(shí)施方式中，鄰接氨基酸來(lái)自9TL的可變區(qū)。n.抗體6G及6G衍生抗體及多肽本發(fā)明另外還提供了治療眼科疾病的方法，其包含施用與A/5m。、42及A/3m3結(jié)合的抗體或多肽。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽以比其與A&.42及A/3m3結(jié)合更高的親和性與A&.4o結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體與A/3w6、A/3l37、A艮38及A/3L39結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體與Afe.35結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體與八/328_4()結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與包括氨基酸25-34及40的A/3M。上的表位結(jié)合。本發(fā)明還提供了治療眼科疾病的方法，其包含施用下述醫(yī)藥組合物，此類(lèi)醫(yī)藥組合物包含本文所述的抗體或多肽中的任一種(例如抗體6G及表8中所示的其變異體或衍生自抗體6G及表8中所示的其變異體的多肽)；或本文所述的多核苷酸。如本文中所用，組合物包含一或多種與A/3M。的C末端結(jié)合的抗體或多肽(其可以是或可以不是抗體)和/或一或多種包含編碼一或多種與A/3Mo的C末端結(jié)合的抗體或多肽的序列的多核苷酸。此類(lèi)組合物可另外包含合適賦形劑，例如醫(yī)藥學(xué)上可接受的賦形劑，包括緩沖劑，其在本領(lǐng)域中是公知的。本發(fā)明的抗體及多肽特征在于以下特征中的任一種(一種或多種)(a)與A/3mo、Aft.42及A^.43結(jié)合；(b)與A/3M0、A^42及Aft.43結(jié)合，其中與AA.40結(jié)合的親和性高于與A/3M2及Aft-43結(jié)合的親和性；(c)與包括氨基酸25-34及40的A/3m。上的表位結(jié)合；(d)與Aft.36、A/3w7、A/^38及A艮39結(jié)合，但與其與A/^,的結(jié)合相比具有較低親和性；(e)以小于約l//M的Kd與A/322—37結(jié)合；(f)與A/522-35結(jié)合；(g)與Afe,結(jié)合；(h)并不與表達(dá)于細(xì)胞中的APP結(jié)合；W減少個(gè)體眼睛中的類(lèi)淀粉斑；(O治療、預(yù)防、改善一或多種下述眼科疾病癥狀，所述眼科疾病包括但不限于年齡相關(guān)黃斑退化(干型及濕型)、青光眼、糖尿病性視網(wǎng)膜病變(包括黃斑水腫)及其它相關(guān)視網(wǎng)膜退化性疾??；(k)產(chǎn)生視網(wǎng)膜功能的顯著保護(hù)或恢復(fù)；及(l)產(chǎn)生視敏度的顯著保持或復(fù)原。本發(fā)明的抗體及多肽還可具有本文所述的受損的效應(yīng)器功能。與其它報(bào)導(dǎo)過(guò)的抗A/3抗體相比，具有受損的效應(yīng)器功能的抗體及多肽可展現(xiàn)出想要的安全性。舉例而言，本發(fā)明的組合物可能不引起顯著或不可接受水準(zhǔn)的以下各項(xiàng)中的任何一種或多種腦維管結(jié)構(gòu)中出血(腦出血)；腦膜腦炎(包括變換磁共振掃描)；腦脊髓液中白血球計(jì)數(shù)升高；中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥。因此，本發(fā)明提供以下各物中的任一種，或包含以下各物中的任一種的組合物(包括醫(yī)藥組合物)(a)抗體6G或表8中所示的其變異體；(b)抗體6G或表8中所示的其變異體的片段或區(qū)域；(C)抗體6G或表8中所示的其變異體的輕鏈；(d)抗體6G或表8中所示的其變異體的重鏈；(e)來(lái)自抗體6G或表8中所示的其變異體的輕鏈和/或重鏈的一或多個(gè)可變區(qū)；(f)抗體6G或表8中所示的其變異體的一或多個(gè)CDR(—、二、三、四、五或六個(gè)CDR);(g)來(lái)自抗體6G的重鏈的CDRH3;(h)來(lái)自抗體6G或表8中所示的其變異體的輕鏈的CDRL3;(i)來(lái)自抗體6G或表8中所示的其變異體的輕鏈的三個(gè)CDR;(j)來(lái)自抗體6G或表8中所示的其變異體的重鏈的三個(gè)CDR;(k)來(lái)自抗體6G或表8中所示的其變異體的輕鏈的三個(gè)CDR及來(lái)自抗體6G或表8中所示的其變異體的重鏈的三個(gè)CDR;及(l)包含(b)至(k)中的任一種的抗體。本發(fā)明亦提供包含以上各物中的任何一種或多種的多肽。圖8中圖解性地示出了抗體6G(包括Chothia及KabatCDR)的CDR部分。CDR區(qū)域的測(cè)定系是本領(lǐng)域公知的。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種下述多肽(其可以是或可以不是抗體)，其包含基本上與6G或表8中所示的其變異體的至少一個(gè)CDR、至少兩個(gè)、至少三個(gè)、至少四個(gè)、至少五個(gè)或所有六個(gè)CDR—致的至少一個(gè)CDR、至少兩個(gè)、至少三個(gè)或至少四個(gè)、至少五個(gè)或所有六個(gè)CDR。其它一些實(shí)施方式包括具有基本上與6G的至少兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)或六個(gè)CDR—致或衍生自6G的至少兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)或六個(gè)CDR的抗體。在一些實(shí)施方式中，該至少一個(gè)、二個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)或六個(gè)CDR與6G或表8中所示的其變異體的至少一個(gè)、二個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)或六個(gè)CDR至少約850/0、86%、87%、88%、89%、90%、95%、96%、97%、98%或99%—致。應(yīng)了解，為達(dá)成本發(fā)明的目的，盡管活性程度與6G或表8中所示的其變異體相比可改變(可更大或更小)，但結(jié)合特異性和/或總體活性一般得以保持。本發(fā)明還提供了下述多肽(其可以是或可以不是抗體)，其包含6G或表8中所示的其變異體的氨基酸序列，該氨基酸序列具有以下各物中的任一種6G或表8中所示的其變異體的序列的至少5個(gè)鄰接氨基酸、至少8個(gè)鄰接氨基酸、至少約10個(gè)鄰接氨基酸、至少約15個(gè)鄰接氨基酸、至少約20個(gè)鄰接氨基酸、至少約25個(gè)鄰接氨基酸、至少約30個(gè)鄰接氨基酸，其中此類(lèi)氨基酸中的至少3者來(lái)自6G(圖8)或表8中所示的其變異體的可變區(qū)。在一種實(shí)施方式中，可變區(qū)來(lái)自6G的輕鏈。在另一種實(shí)施方式中，可變區(qū)來(lái)自6G的重鏈。示例性多肽具有來(lái)自6G的重鏈及輕鏈可變區(qū)的鄰接氨基酸(上述長(zhǎng)度)。在另一種實(shí)施方式中，5個(gè)(或5個(gè)以上)鄰接氨基酸來(lái)自圖8中所示的6G的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)。在一些實(shí)施方式中，鄰接氨基酸來(lái)自6G的可變區(qū)。如下文所述的示例性實(shí)施方式，本發(fā)明的抗體及多肽的結(jié)合親和性可變化，其不需為(但可為)一個(gè)特定值或范圍。本發(fā)明的抗體及多肽對(duì)A湖太(包括或A/3mq、A艮42或A/5m3肽)的結(jié)合親和性(KD)可為約0.10nM至約0.80nM，約0.15nM至約0.75nM及約0.18nM至約0.72nM。在一些實(shí)施方式中，結(jié)合親和性為約2pM、約5pM、約10pM、約15pM、約20pM、約40pM或大于約40pM。在一個(gè)實(shí)施方式中，結(jié)合親和性在約2pM與22pM的間。在其它實(shí)施方式中，結(jié)合親和性小于約IOnM、約5nM、約lnM、約900pM、約800pM、約700pM、約600pM、約500pM、約400pM、約300pM、約200pM、約150pM、約100pM、約90pM、約80pM、約70pM、約60pM、約50pM、約40pM、約30pM、約10pM。在一些實(shí)施方式中，結(jié)合親和性為約10nM。在其它實(shí)施方式中，結(jié)合親和性小于約10nM、小于約50nM、小于約100nM、小于約150nM、小于約200nM、小于約250nM、小于約500nM或小于約lOOOnM。在其它實(shí)施方式中，結(jié)合親和性小于約5nM。在其它實(shí)施方式中，結(jié)合親和性小于約lnM。在其它實(shí)施方式中，結(jié)合親和性為約O.lnM或約0.07nM。在其它實(shí)施方式中，結(jié)合親和性小于約O.lnM或小于約0.07nM。在其它實(shí)施方式中，結(jié)合親和性為約IOnM、約5nM、約lnM、約900pM、約800pM、約700pM、約600pM、約500pM、約400pM、約300pM、約200pM、約150pM、約IOOpM、約90pM、約80pM、約70pM、約60pM、約50pM、約40pM、約30pM、約IOpM中的任一種至約2pM、約5pM、約IOpM、約15pM、約20pM或約40pM中的任一種。在一些實(shí)施方式中，結(jié)合親和性為約10nM、約5nM、約1nM、約900pM、約800pM、約700pM、約600pM、約500pM、約400pM、約300pM、約200pM、約150pM、約100pM、約90pM、約80pM、約70pM、約60pM、約50pM、約40pM、約30pM、約10pM中的任一種。在其它實(shí)施方式中，結(jié)合親和性為約2pM、約5pM、約10pM、約15pM、約20pM、約40pM或大于約40pM。本發(fā)明的抗體或多肽可與A/^40、A/3M2禾B/或A/3M2肽的組合結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方式中，抗體或多肽與至少A/3M()及Aft-42肽結(jié)合。本發(fā)明的抗體及多肽還可與Aft.36、A/^-37、A/Sl38、AA-39、A/3m2及A/3M3中的任何一種或多種結(jié)合，但在一些實(shí)施方式中，對(duì)此類(lèi)肽中的任何一種或多種的結(jié)合親和性小于其對(duì)A/3M。的結(jié)合親和性。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與A/3w6、37、A&.38、A/3w9、A/3m2及A/3m3中的任何一種或多種的KD為與A&,的Ko的至少約5倍、至少約10倍、至少約20倍、至少約30倍、至少約40倍、至少約50倍、至少約80倍、至少約IOO倍、至少約150倍、至少約200倍或至少約250倍。本發(fā)明還提供了制造此類(lèi)抗體或多肽中的任一種的方法?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域中已知的程序來(lái)制造本發(fā)明的抗體?？赏ㄟ^(guò)抗體的蛋白水解或其它降解、通過(guò)如上所述的重組方法(即單一或融合多肽)或通過(guò)化學(xué)合成來(lái)制造多肽。通過(guò)化學(xué)合成便利地制得抗體的多肽，尤其至多約50個(gè)氨基酸的較短多肽?；瘜W(xué)合成方法是本領(lǐng)域已知的，并且可商業(yè)獲得。舉例而言，通過(guò)采用固相方法的自動(dòng)化多肽合成儀可制造抗體。還參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利第5，807,715號(hào);第4,816,567號(hào)；及第6,331,415號(hào)。在另一替代方法中，可使用本領(lǐng)域中公知的程序以重組方式制得抗體。在一種實(shí)施方式中，多核苷酸包含編碼抗體的重鏈和/或輕鏈可變區(qū)的序列。在另一種實(shí)施方式中，將包含核苷酸序列的多核苷酸克隆進(jìn)一或多個(gè)用于表達(dá)或繁殖的載體中?？蓪⒕幋a所關(guān)注抗體的序列保持于宿主細(xì)胞中的載體中，接著將宿主細(xì)胞擴(kuò)展且冷凍，以備后用。本文進(jìn)一步描述了載體(包括表達(dá)載體)及宿主細(xì)胞。本發(fā)明還涵蓋本發(fā)明的抗體(例如9TL及6G)的單鏈可變區(qū)片段("scFv")。通過(guò)使用短連接肽來(lái)連接輕鏈和/或重鏈可變區(qū)，從而制得單鏈可變區(qū)片段。Bird等人(1988)Science242:423-426。連接肽的實(shí)例為(GGGGS)3，其橋接一可變區(qū)的羧基末端與另一可變區(qū)的胺基末端的間約333.5nm。已設(shè)計(jì)且使用其它序列的連接子。Bird等人(1988)。連接子可又經(jīng)修飾以獲其它功能，例如藥物附接或附接于固體支撐物。可以重組或合成方式制造單鏈變異體。為合成制造scFv，可使用自動(dòng)合成儀。為重組制造scFv，可將含有編碼scFv的多核苷酸的合適質(zhì)粒引入合適宿主細(xì)胞中，該宿主細(xì)胞可為真核的，例如酵母、植物、昆蟲(chóng)或哺乳動(dòng)物細(xì)胞；或?yàn)樵说?，例如大腸桿菌(E.coli)?？赏ㄟ^(guò)例如多核苷酸連接反應(yīng)的常規(guī)操作來(lái)制得編碼所關(guān)注的scFv的多核苷酸?？墒褂帽绢I(lǐng)域中已知的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)純化技術(shù)來(lái)分離得到的scFv。本發(fā)明還涵蓋其它形式的單鏈抗體，例如雙功能抗體。雙功能抗體是二價(jià)、雙特異性抗體，其中，VH及VL域表達(dá)于單一多肽鏈上，但使用過(guò)短而無(wú)法使同一鏈上的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間成對(duì)的連接子，由此使得所述結(jié)構(gòu)域與另一鏈的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)域成對(duì)，且產(chǎn)生兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)(例如參見(jiàn)Holliger,P.等人(1993)Proc.Natl.AcadSci.USA90:6444-6448;Poljak,R.J.等人(1994)Structure2:1121-1123)。舉例而言，可使用本文中所公開(kāi)的抗體來(lái)制備雙特異性抗體(對(duì)至少兩種不同抗原(即A/3MQ及A^-42)具有結(jié)合特異性的單克隆抗體)。本領(lǐng)域中已知制造雙特異性抗體的方法(例如參加Suresh等人，1986,MethodsinEnzymology121:210)。傳統(tǒng)上，重組制造雙特異性抗體系基于兩個(gè)免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(duì)(其中兩個(gè)重鏈具有不同特異性)的共表達(dá)(Millstein及Cuello,1983，Nature305，537-539)。根據(jù)一種制造雙特異性抗體的方法，將具有所需結(jié)合特異性(抗體-抗原組合位點(diǎn))的抗體可變結(jié)構(gòu)域與免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域序列融合。優(yōu)選與包含鉸鏈區(qū)、CH2及CH3區(qū)中的至少部分的免疫球蛋白重鏈恒定結(jié)構(gòu)域融合。其優(yōu)選具有含有輕鏈綴合所必需的位點(diǎn)(存在于融合中的至少一種中)的第一重鏈恒定區(qū)(CH1)。將編碼免疫球蛋白重鏈融合及(若需要)免疫球蛋白輕鏈的DNA插入獨(dú)立表達(dá)載體中且共轉(zhuǎn)染于合適宿主生物體中。在該構(gòu)建中所使用的三個(gè)多肽鏈的不等比率提供最適產(chǎn)率的實(shí)施方式中，此舉提供調(diào)節(jié)三個(gè)多肽片段的相互比例的高靈活性。然而，當(dāng)?shù)缺嚷实闹辽賰蓚€(gè)多肽鏈的表達(dá)產(chǎn)生高產(chǎn)率時(shí)或當(dāng)比率不具有特定重要性時(shí)，可能在一表達(dá)載體中插入兩個(gè)或所有三個(gè)多肽鏈的編碼序列。在一種方法中，雙特異性抗體包含在一條臂中具有第一結(jié)合特異性的雜合免疫球蛋白重鏈，及在另一條臂中的雜合免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(duì)(提供第二結(jié)合特異性)。在僅一半雙特異性分子中具有免疫球蛋白輕鏈的此不對(duì)稱(chēng)結(jié)構(gòu)促進(jìn)所需雙特異性化合物與非所需免疫球蛋白鏈組合的分離。在1994年3月3日公開(kāi)的PCT公開(kāi)文本第WO94/04690號(hào)中描述了此方法。包含兩個(gè)共價(jià)連接抗體的異源綴合抗體也在本發(fā)明的范疇內(nèi)。此類(lèi)抗體已用于使免疫系統(tǒng)細(xì)胞耙向非所需細(xì)胞(美國(guó)專(zhuān)利第4,676,980號(hào))，且用于治療HIV感染(PCT申請(qǐng)公開(kāi)文本第WO91/00360號(hào)及第WO92/200373號(hào)；EP03089)?？墒褂萌魏伪憷慕宦?lián)方法來(lái)制造異源綴合抗體。合適的交聯(lián)劑及技術(shù)在本領(lǐng)域中是公知的，其被描述于美國(guó)專(zhuān)利第4,676,980號(hào)中。還可使用合成蛋白質(zhì)化學(xué)的已知方法(包括涉及交聯(lián)劑的方法)來(lái)體外制備嵌合或雜合抗體。舉例而言，可使用二硫化物交換反應(yīng)或通過(guò)形成硫醚鍵構(gòu)建免疫毒素。用于此目的的合適試劑的實(shí)例包括亞胺基硫醇鹽及甲基-4-巰基丁酸酰亞胺酯?？墒褂帽绢I(lǐng)域中己知的任何方法來(lái)制造包含抗體9TL的一或多個(gè)CDR或衍生自抗體9TL的一或多個(gè)CDR的人化抗體。舉例而言，可用四個(gè)通用步驟，將單克隆抗體人化。這些步驟為(l)測(cè)定起始抗體輕鏈及重鏈可變結(jié)構(gòu)域的核苷酸及預(yù)測(cè)氨基酸序列，(2)設(shè)計(jì)人化抗體，即決定在人化過(guò)程期間使用何種抗體框架區(qū)，(3)實(shí)際的人化方法/技術(shù)，及(4)人化抗體的轉(zhuǎn)染及表達(dá)。例如參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利第4,816，567號(hào)；第5，807,715號(hào)；第5,866,692號(hào)；第6,331,415號(hào)；第5,530,101號(hào)；第5，693，761號(hào)；第5,693,762號(hào)；第5,585,089號(hào)；第6，180，370號(hào)；第5,225，539號(hào)；第6,548,640號(hào)。在重組人化抗體中，可修飾Fc部分，以避免與FcY受體及補(bǔ)體免疫系統(tǒng)相互作用。此類(lèi)型的修飾由CambridgeUniversity的DepartmentofPathology的MikeClark博士設(shè)計(jì)，且在1999年1l月18日公開(kāi)的WO99/58572中描述過(guò)制備此類(lèi)抗體的技術(shù)。舉例而言，若將抗體用于人類(lèi)的臨床試驗(yàn)及治療，則可將恒定區(qū)設(shè)計(jì)為更類(lèi)似于人類(lèi)恒定區(qū)以避免免疫應(yīng)答。例如參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利第5，997，867號(hào)及第5,866，692號(hào)。本發(fā)明涵蓋對(duì)抗體9TL及6G的修飾，包括并不顯著影響其特性的功能等同抗體及具有增強(qiáng)或減小活性和/或親和性的變異體。舉例而言，抗體9TL或6G的氨基酸序列可經(jīng)突變，以獲得對(duì)靶標(biāo)A瀏太具有所需結(jié)合親和性的抗體。多肽修飾為本領(lǐng)域中的常規(guī)實(shí)踐，無(wú)需在本文中詳細(xì)描述。將多肽修飾示例于實(shí)例中。經(jīng)修飾多肽的實(shí)例包括具有氨基酸殘基保守性取代的多肽、并不顯著不利地改變功能活性的一或多個(gè)缺失或添加氨基酸或使用化學(xué)類(lèi)似物。氨基酸序列插入包括長(zhǎng)度范圍介于一個(gè)殘基至含有一百個(gè)或更多殘基的多肽之間的氨基末端和/或羧基末端融合以及單一或多個(gè)氨基酸殘基的序列內(nèi)插入。末端插入的實(shí)例包括具有N末端甲硫胺?；鶜埢目贵w或與表位標(biāo)簽融合的抗體?？贵w分子的其它插入變異體包括抗體的N末端或C末端與酶或多肽的融合，其增大抗體的血清半衰期。取代變異體具有至少一個(gè)在所移除抗體分子中的氨基酸殘基及插入其位置中的不同殘基。雖然最關(guān)注的用于取代性誘變的位點(diǎn)包括高變區(qū)，但也涵蓋FR改變。表l中在標(biāo)題"保守性取代"下展示保守性取代。如果此類(lèi)取代引起生物活性改變，則可引入在表l中被稱(chēng)為"示例性取代"或如下文參考氨基酸分類(lèi)進(jìn)一步描述的更實(shí)質(zhì)性變化，并且對(duì)產(chǎn)物加以篩選。表l:氨基酸取代原始?xì)埢Ｊ匦匀〈纠匀〈鶤la(A)ValVal;Leu;lieArg(R)LysLys;Gin;AsnAsn(N)GinGin;His;Asp,Lys;ArgAsp(D)GluGlu;AsnCys(C)SerSer;AlaGin(Q)AsnAsn;GluGlu(E)AspAsp;GinGly(G)AlaAla36<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>通過(guò)選擇對(duì)維持以下各者的作用顯著不同的取代來(lái)實(shí)現(xiàn)抗體的生物特性的實(shí)質(zhì)性修飾(a)取代區(qū)域內(nèi)的多肽主鏈結(jié)構(gòu)，例如呈片狀或螺旋構(gòu)型，(b)靶標(biāo)位點(diǎn)處的分子的電荷或疏水性，或(c)側(cè)鏈的堆積?；诔Ｒ?jiàn)側(cè)鏈特性，將天然存在的殘基分組(1)非極性正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、lie;(2)不帶電的極性Cys、Ser、Thr、Asn、Gin;(3)酸性(帶負(fù)電荷)Asp、Glu;(4)堿性(帶正電荷)Lys、Arg;(5)影響鏈取向的殘基Gly、Pro;及(6)芳族Trp、Tyr、Phe、His。通過(guò)將此類(lèi)類(lèi)別中一種的成員交換為另一類(lèi)別來(lái)達(dá)成非保守性取代。任何不涉及保持抗體的適當(dāng)構(gòu)型的半胱氨酸殘基通常還可被絲氨酸取代，以改良分子的氧化穩(wěn)定性且防止異常交聯(lián)。相反地，可將半胱氨酸鍵添加至抗體中以改良其穩(wěn)定性，尤其當(dāng)抗體為例如Fv片段的抗體片段時(shí)。氨基酸修飾可介于改變或修飾一或多種氨基酸至完全重設(shè)計(jì)例如可變區(qū)的區(qū)域之間。對(duì)可變區(qū)的改變可改變結(jié)合親和性和/或特異性。在一些實(shí)施方式中，在CDR域內(nèi)達(dá)成不多于一至五個(gè)保守性氨基酸取代。在其它實(shí)施方式中，在CDR域內(nèi)達(dá)成不多于一至三個(gè)保守性氨基酸取代。在再其它實(shí)施方式中，CDR域?yàn)镃DRH3和/或CDRL3。修飾還包括糖基化及非糖基化多肽以及具有其它翻譯后修飾的多肽，此類(lèi)翻譯后修飾例如用不同糖的糖基化、乙?；傲姿峄??？贵w系在其恒定區(qū)中的保守位置處糖基化(Jefferis及Lund,1997,Chem.Immunol.65:111-128;Wright及Morrison,1997,TibTECH15:26-32)。免疫球蛋白的寡糖側(cè)鏈影響蛋白質(zhì)的功能(Boyd等人，1996,Mol.Immunol.32:1311-1318;Wittwe及Howard,1990，Biochem.29:4175-4180)及在糖蛋白部分的間的分子內(nèi)相互作用(其可影響糖蛋白的構(gòu)型及所呈現(xiàn)的三維表面)(Hefferis及Limd，同上；Wyss及Wagner,1996，CurrentOpin.Biotech.7:409-416)。寡糖亦可用以使給定糖蛋白基于特異性識(shí)別結(jié)構(gòu)靶向某些分子。亦已報(bào)導(dǎo)抗體的糖基化影響抗體依賴(lài)細(xì)胞毒性(ADCC)。詳言的，已報(bào)導(dǎo)具有風(fēng)l，4)-N-乙?；咸前坊D(zhuǎn)移酶III(GnTin)(催化對(duì)分GlcNAc的形成的糖基轉(zhuǎn)移酶)的四環(huán)素調(diào)節(jié)表達(dá)的CHO細(xì)胞改良ADCC活性(Umana等人，1999，MatureBiotech.17:176-180)。抗體的糖基化通常為N連接型或O連接型。N連接型指將碳水化合物部分附接于天冬酰胺殘基的側(cè)鏈。三肽序列天冬酰胺-X-絲氨酸、天冬酰胺-X-蘇氨酸及天冬酰胺-X-半胱氨酸(其中X為除脯氨酸外的任何氨基酸)為用于碳水化合物部分酶促附接于天冬酰胺側(cè)鏈的識(shí)別序列。因此，在多肽中存在此類(lèi)三肽序列中的任一種，產(chǎn)生潛在糖基化位點(diǎn)。O-連接型糖基化系指糖N-乙酰基半乳胺糖、半乳糖或木糖中的一種附接于羥基氨基酸，最常見(jiàn)為絲氨酸或蘇氨酸，盡管也可使用5-羥基脯氨酸或5-羥基離氨酸。通過(guò)改變氨基酸序列使得其含有上述三肽序列中的一種或多種，來(lái)便利地實(shí)現(xiàn)添加糖基化位點(diǎn)至抗體(針對(duì)N連接型糖基化位點(diǎn))。該改變亦可通過(guò)向原始抗體的序列添加一或多個(gè)絲氨酸或蘇氨酸殘基或用一或多個(gè)絲氨酸或蘇氨酸殘基取代來(lái)達(dá)成(針對(duì)O連接型糖基化位點(diǎn))。還可在不改變根本核苷酸序列的情況下改變抗體的糖基化模式。糖基化很大程度上視用以表達(dá)抗體的宿主細(xì)胞而定。因?yàn)橛糜诒磉_(dá)重組糖蛋白(例如抗體M乍為潛在的治療劑的細(xì)胞類(lèi)型很少為天然細(xì)胞，所以可預(yù)計(jì)抗體的糖基化模式變化(例如參見(jiàn)Hse等人，1997,J.Biol.Chem.272:9062-9070)。除宿主細(xì)胞選擇之外，在抗體重組制造期間影響糖基化的因素包括生長(zhǎng)模式、培養(yǎng)基制劑、培養(yǎng)物密度、氧合作用、pH值、純化方案及其類(lèi)似因素。已提出各種方法來(lái)改變?cè)谔囟ㄋ拗魃矬w中達(dá)成的糖基化模式，其包括引入或過(guò)量表達(dá)涉入寡糖產(chǎn)生的某些酶(美國(guó)專(zhuān)利第5，047，335號(hào)；第5,510,261號(hào)及第5,278,299號(hào))?？梢悦复俜绞阶蕴堑鞍字幸瞥腔蚰承╊?lèi)型的糖基化，例如使用內(nèi)切糖苷酶H(EndoH)、如實(shí)例3中所述的N-糖苷酶F、內(nèi)切糖苷酶F1、內(nèi)切糖苷酶F2、內(nèi)切糖苷酶F3來(lái)移除。另外，重組宿主細(xì)胞可經(jīng)遺傳設(shè)計(jì)以在加工某些類(lèi)型的多糖中為有缺陷的。本領(lǐng)域中公知此類(lèi)及類(lèi)似技術(shù)。其它修飾方法包括使用本領(lǐng)域中已知的偶合技術(shù)，其包括但不限于酶促方式、氧化取代及螯合。例如，為附接標(biāo)記用于免疫檢驗(yàn)，可使用修飾。經(jīng)修飾9TL的多肽是使用本領(lǐng)域中的已建立程序制得的，且可使用本領(lǐng)域中已知的標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)來(lái)篩選，其中一些在下文及實(shí)例中描述。在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，抗體包含經(jīng)經(jīng)修飾的恒定區(qū)，例如免疫上惰性或部分惰性的恒定區(qū)，例如并不觸發(fā)補(bǔ)體介導(dǎo)溶胞、并不刺激抗體依賴(lài)細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒性(ADCC)或并不活化微神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞；或在以下各項(xiàng)中的任何一種或多種中具有減小的活性(與未修飾抗體相比)觸發(fā)補(bǔ)體介導(dǎo)溶胞、剌激抗體依賴(lài)細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒性(ADCC)或活化微神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。對(duì)恒定區(qū)的不同修飾可用于達(dá)成效應(yīng)器功能的最佳水準(zhǔn)和/或組合。例如參見(jiàn)Morgan等人，//wmmo/ogy86:319-324(1995);Lund等人，乂/附mw"o/ogy157:4963-9157:4963-4969(1996);Idusogie等人，,/mmw"o/ogy164:4178-4184(2000);Tao等人，,/mm,o/ogy143:2595-2601(1989);及Jefferis等人，Zwmmo/og/ca/7eWe鄉(xiāng)163:59-76(1998)。在一些實(shí)施方式中，如Eur.J.Immunol.(1999)29:2613-2624;PCT申請(qǐng)案第PCT/GB99/01441號(hào)；和/或英國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)案第9809951.8號(hào)中所述來(lái)修飾恒定區(qū)。在其它實(shí)施方式中，抗體包含人類(lèi)重鏈IgG2a恒定區(qū)，該恒定區(qū)包含以下突變A330P331至S330S331(參考野生型IgG2a序列的氨基酸編號(hào))。Eur.J.Immunol.(1999)29:2613-2624。在再其它實(shí)施方式中，針對(duì)N連接糖基化而使恒定區(qū)去糖基化。在一些實(shí)施方式中，通過(guò)使糖基化氨基酸殘基突變或側(cè)接作為恒定區(qū)中N-糖基化識(shí)別序列的部分的殘基，從而針對(duì)N連接糖基化而使恒定區(qū)去糖基化。舉例而言，N-糖基化位點(diǎn)N297可突變至A、Q、K或H。參見(jiàn)Tao等人，/mm麗o/ogy143:2595-2601(1989);及Jefferis等人，/附mw"o/ogz'ca/7eWews163:59-76(1998)。在一些實(shí)施方式中，針對(duì)N連接糖基化而使恒定區(qū)去糖基化。以酶促方式(例如通過(guò)酶PNGase來(lái)移除碳水化合物)或通過(guò)表達(dá)于糖基化缺乏宿主細(xì)胞中，從而可針對(duì)N連接糖基化而使恒定區(qū)去糖基化。其它抗體修飾包括己如1999年11月18日公開(kāi)的PCT公開(kāi)文本第WO99/58572號(hào)中所述來(lái)修飾的抗體。除針對(duì)靶標(biāo)分子的結(jié)合域外，此類(lèi)抗體包含具有基本上與人類(lèi)免疫球蛋白重鏈的恒定結(jié)構(gòu)域的全部或部分同源的氨基酸序列的效應(yīng)器結(jié)構(gòu)域。此類(lèi)抗體能夠結(jié)合靶標(biāo)分子，而不觸發(fā)顯著補(bǔ)體依賴(lài)溶胞，或靶標(biāo)的細(xì)胞介導(dǎo)破壞。在一些實(shí)施方式中，效應(yīng)器結(jié)構(gòu)域能夠特異性結(jié)合FcRn和/或Fc7RIIb。此類(lèi)者通常系基于衍生自?xún)蓚€(gè)或兩個(gè)以上人類(lèi)免疫球蛋白重鏈CH2域的嵌合結(jié)構(gòu)域。以此方式修飾的抗體尤其適用于慢性抗體療法，以避免對(duì)公知抗體療法的發(fā)炎性及其它不利反應(yīng)。本發(fā)明包括親和成熟實(shí)施方式。舉例而言，可通過(guò)本領(lǐng)域中已知的程序來(lái)制造親和成熟抗體(Marks等人，1992，Bio/Technology，10:779-783;Barbas等人，1994，ProcNat.Acad.Sci,USA91:3809-3813;Schier等人，1995,Gene,169:147-155;Yelton等人，1995，J.Immunol"155:1994-2004;Jackson等人，1995,J.Immunol.,154(7):3310-9;Hawkins等人，1992,J.Mol.Biol"226:889-896;及WO2004/058184)。以下方法可用于調(diào)節(jié)抗體的親和性且用于分析CDR。用于分析抗體的CDR和/或改變(例如改良)例如抗體的多肽的結(jié)合親和性的一種方法被稱(chēng)為"文庫(kù)掃描誘變(libraryscanningmutagenesis)"。大體而言，文庫(kù)掃描誘變?nèi)缦鹿ぷ?。使用本領(lǐng)域認(rèn)可的方法，將CDR中的一或多個(gè)氨基酸位置經(jīng)兩個(gè)或兩個(gè)以上(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個(gè))氨基酸置換。由此產(chǎn)生小型克隆文庫(kù)(在一些實(shí)施方式中，對(duì)于每個(gè)經(jīng)分析的氨基酸位置為一個(gè))，其各具有兩個(gè)或兩個(gè)以上成員的復(fù)雜性(complexity)(若兩個(gè)或兩個(gè)以上氨基酸在每個(gè)位置經(jīng)取代)。大體而言，該文庫(kù)還包括包含天然(未經(jīng)取代)氨基酸的克隆。針對(duì)對(duì)耙標(biāo)多肽(或其它結(jié)合靶標(biāo))的結(jié)合親和性，篩選來(lái)自各文庫(kù)的少量克隆(例如約20-80個(gè)克隆(視文庫(kù)的復(fù)雜性而定))，且鑒定具有增大、相同、減小或無(wú)結(jié)合的候選物。在本領(lǐng)域中公知測(cè)定結(jié)合親和性的方法?？墒褂肂IAcore表面等離子體共振分析來(lái)測(cè)定結(jié)合親和性，該分析檢測(cè)約2倍或更大的結(jié)合親和性差異。當(dāng)起始抗體已以相對(duì)較高親和性結(jié)合時(shí)，例如約10nM或10nM以下的Kd，BIAcore尤其適用。在本文實(shí)例中描述使用BIAcore表面等離子體共振的篩選。可使用KinexaBiocensor、閃爍鄰近檢驗(yàn)(scintillationproximityassay)、ELISA、ORIGEN免疫檢驗(yàn)(IGEN)、螢光猝減、螢光轉(zhuǎn)移和/或酵母展示來(lái)測(cè)定結(jié)合親和性。還可使用合適生物檢驗(yàn)來(lái)篩選結(jié)合親和性。在一些實(shí)施方式中，使用本領(lǐng)域認(rèn)可的誘變方法(其中一些在本文中描述)，用所有20種天然氨基酸置換CDR中的每個(gè)氨基酸位置(在一些實(shí)施方式中一次一種)。這產(chǎn)生了小型克隆文庫(kù)(在一些實(shí)施方式中，對(duì)于每個(gè)經(jīng)分析的氨基酸位置為一個(gè))，其各具有20個(gè)成員的復(fù)雜性(若所有20個(gè)氨基酸均在每個(gè)位置經(jīng)取代)。在一些實(shí)施方式中，待篩選的文庫(kù)包含在兩個(gè)或兩個(gè)以上位置的取代，其可在同一CDR中或在兩個(gè)或兩個(gè)以上CDR中。因此，文庫(kù)可包含在一個(gè)CDR中的兩個(gè)或兩個(gè)以上位置的取代。文庫(kù)可包含在兩個(gè)或兩個(gè)以上CDR中的兩個(gè)或兩個(gè)以上位置的取代。文庫(kù)可包含在3、4、5個(gè)或5個(gè)以上位置的取代，此類(lèi)位置見(jiàn)于二、三、四、五或六個(gè)CDR中?？墒褂玫腿哂嗝艽a子來(lái)制備取代。例如參見(jiàn)Balint等人，(1993)Gene137(1):109-18)的表2。CDR可為CDRH3禾口/或CDRL3。CDR可為CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2和/或CDRH3中一種或多種。CDR可為KabatCDR、ChothiaCDR或擴(kuò)展CDR?？蓪?duì)具有改良結(jié)合的候選物測(cè)序，由此鑒定引起改良親和性(亦稱(chēng)為"改良"取代)的CDR取代突變體。還可對(duì)結(jié)合的候選物測(cè)序，由此鑒定保持結(jié)合的CDR取代?？蛇M(jìn)行多輪篩選。舉例而言，具有改良結(jié)合的候選物(各包含在一或多個(gè)CDR的一或多個(gè)位置的氨基酸取代)也可用于設(shè)計(jì)在各改良CDR位置(即，CDR中的氨基酸位置，于此處取代突變體展示改良的結(jié)合)含有至少原始及經(jīng)取代氨基酸的第二文庫(kù)。下文進(jìn)一步討論對(duì)此文庫(kù)的制備及篩選或選擇。文庫(kù)掃描誘變也提供了分析CDR的方式，至于具有改良結(jié)合、相同結(jié)合、減小結(jié)合或無(wú)結(jié)合的克隆的頻率還提供了與各氨基酸位置對(duì)抗體-抗原復(fù)合物穩(wěn)定性的重要性有關(guān)的信息。舉例而言，若CDR的位置在改變?yōu)樗?0個(gè)氨基酸時(shí)保持結(jié)合，則將該位置鑒定為不太可能為抗原結(jié)合所需的位置。相反地，若CDR的位置在僅小百分比的取代中保持結(jié)合，則將該位置鑒定為對(duì)CDR功能重要的位置。因此，文庫(kù)掃描誘變方法產(chǎn)生了CDR中可改變?yōu)槎喾N不同氨基酸(包括所有20種氨基酸)的位置及CDR中不能改變或僅能改變?yōu)樯贁?shù)氨基酸的位置的信息。具有改良親和性的候選物可在第二文庫(kù)中組合，這視所需文庫(kù)的復(fù)雜性而定，其包括在該位置的改良氨基酸、原始氨基酸，且可另外包括在該位置的其它取代，或允許使用所需篩選或選擇方法。另外，若需要，則相鄰氨基酸位置可對(duì)至少兩種或兩種以上氨基酸隨機(jī)化。相鄰氨基酸的隨機(jī)化可允許突變CDR中的額外構(gòu)型靈活性，其可又允許或促進(jìn)引入較大數(shù)目的改良突變。文庫(kù)還可包含在第一輪篩選中并不展示改良親和性的位置的取代。使用本領(lǐng)域中已知的任何方法，包括使用BIAcore表面等離子體共振分析的篩選及使用在選擇技術(shù)中已知的任何方法(包括噬菌體展示、酵母展示42及核糖體展示)的選擇，針對(duì)具有改良和/或改變結(jié)合親和性的文庫(kù)成員，對(duì)第二文庫(kù)加以篩選或選擇。本發(fā)明還涵蓋包含來(lái)自本發(fā)明的抗體(例如9TL及6G)或多肽的一或多個(gè)片段或區(qū)域的融合蛋白。在一種實(shí)施方式中，提供了下述融合多肽，其包含可變輕鏈區(qū)的至少10個(gè)鄰接氨基酸和/或所示可變重鏈區(qū)的至少10個(gè)氨基酸。在其它實(shí)施方式中，提供了下述融合多肽，其包含可變輕鏈區(qū)的至少約10個(gè)、至少約15個(gè)、至少約20個(gè)、至少約25個(gè)或至少約30個(gè)鄰接氨基酸；和/或可變重鏈區(qū)的至少約10個(gè)、至少約15個(gè)、至少約20個(gè)、至少約25個(gè)或至少約30個(gè)鄰接氨基酸。在另一種實(shí)施方式中，融合多肽包含9TL或6G的輕鏈可變區(qū)和/或重鏈可變區(qū)。在另一種實(shí)施方式中，融合多肽包含9TL或6G的一或多個(gè)CDR。在再其它實(shí)施方式中，融合多肽包含抗體9TL或6G的CDRH3和/或CDRL3。為達(dá)成本發(fā)明的目的，9TL或6G融合蛋白分別含有一或多個(gè)9TL或6G抗體，及在天然分子中不附接于其的另一氨基酸序列，例如來(lái)自另一區(qū)域的異源序列或同源序列。示例性異源序列包括但不限于"標(biāo)簽"，例如FLAG標(biāo)簽或6His標(biāo)簽。標(biāo)簽在本領(lǐng)域中是公知的。可通過(guò)本領(lǐng)域中已知的方法，例如以合成或重組方式來(lái)產(chǎn)生融合多肽。盡管本發(fā)明的融合蛋白也可通過(guò)本領(lǐng)域中已知的其它方式來(lái)制備，例如包括化學(xué)合成，但通常使用本文所述的重組方法，通過(guò)制備表達(dá)編碼其的多核苷酸來(lái)制造本發(fā)明的融合蛋白。本發(fā)明還提供了包含與促進(jìn)與固體支撐物偶合的藥劑(例如生物素或抗生物素蛋白)綴合(例如連接)的抗體或多肽的組合物。為簡(jiǎn)單起見(jiàn)，通常針對(duì)抗體提及，但應(yīng)了解此類(lèi)方法適用于本文所述的A/3結(jié)合實(shí)施方式中的任一種。綴合通常指如本文中所述連接此類(lèi)組份?？稍谌魏味喾N方法中達(dá)成連接(其一般為以鄰近締合方式將此類(lèi)組份固定至少以便施用)。舉例而言，當(dāng)每種具有能夠與另一種反應(yīng)的取代基時(shí)，在藥劑與抗體的間的直接反應(yīng)為可能的。舉例而言，例如氨基或巰基的親核基團(tuán)一方面可能夠與例如酐或酰基鹵的含羰基基團(tuán)反應(yīng)或另一方面可能夠與含有良好離去基團(tuán)(例如鹵基)的烷基反應(yīng)。本發(fā)明的抗體或多肽可與標(biāo)記劑(或者稱(chēng)為"標(biāo)記")連接，此類(lèi)標(biāo)記例如螢光分子、放射性分子的或本領(lǐng)域中已知的任何其它標(biāo)記。標(biāo)記在本領(lǐng)域中是已知的，其一般(直接或間接)提供信號(hào)。本發(fā)明還提供了組合物(包括醫(yī)藥組合物)及試劑盒，其包含抗體9TL或6G，及如本公開(kāi)文本所闡明的本文所述的任何或所有抗體和/或多肽。具有受損的效應(yīng)器功能的抗A湖太抗體及多肽本發(fā)明的方法使用與/3-類(lèi)淀粉(A/3)肽特異性結(jié)合且具有受損的效應(yīng)器功能的抗體或多肽(包括包含此類(lèi)抗體或多肽的醫(yī)藥組合物)。此類(lèi)抗體及多肽的其它特征在于以下特征中的任一種(一種或多種)(a)抑制在個(gè)體中形成類(lèi)淀粉斑；(b)減少個(gè)體眼睛中的類(lèi)淀粉斑；(c)治療、預(yù)防、改善一或多種眼科疾病癥狀，該眼科疾病包括但不限于年齡相關(guān)黃斑退化(干型及濕型)、青光眼、糖尿病性視網(wǎng)膜病變(包括黃斑水腫)及其它相關(guān)視網(wǎng)膜退化性疾??；(d)產(chǎn)生視網(wǎng)膜功能的顯著保護(hù)或恢復(fù)；及(e)產(chǎn)生視敏度的顯著保持或復(fù)原。本文所述的抗體及多肽可展現(xiàn)想要的安全性，舉例而言，本發(fā)明的組合物并不引起顯著或不可接受水準(zhǔn)或具有減小水準(zhǔn)的以下各項(xiàng)中的任何一種或多種腦維管結(jié)構(gòu)中出血(腦出血)；腦膜腦炎(包括變換磁共振掃描)；腦脊髓液中白血球計(jì)數(shù)升高；中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥。如本文中所用，具有"受損的效應(yīng)器功能"(與"免疫上惰性"或"部分免疫上惰性"可互換使用)的抗體或多肽指并不具有任何效應(yīng)器功能或具有減小效應(yīng)器功能活性(與具有未修飾或天然存在恒定區(qū)的抗體或多肽相比)的抗體或多肽，例如其在以下各項(xiàng)的任何一種或多種中不具有活性或具有減小的活性a)觸發(fā)補(bǔ)體介導(dǎo)溶胞；b)剌激抗體依賴(lài)細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒性(ADCC);及c)活化微神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。效應(yīng)器功能活性可減少約10。/。、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%及100%中的任一種。在一些實(shí)施方式中，抗體與/3-類(lèi)淀粉肽結(jié)合，而不觸發(fā)顯著補(bǔ)體依賴(lài)溶胞，或靶標(biāo)的細(xì)胞介導(dǎo)破壞。舉例而言，恒定區(qū)上的Fc受體結(jié)合位點(diǎn)可經(jīng)修飾或突變以移除或減小對(duì)某些Fc受體(例如cYRI、Fc7RII和/或FcYRIII)的結(jié)合親和性。為簡(jiǎn)單起見(jiàn)，針對(duì)抗體而提及，但是應(yīng)了解該實(shí)施方式也適用于多肽。用EU編號(hào)系統(tǒng)(Kabat等人，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest;第5版，PublicHealthService,NationalInstitutesofHealthy,Bethesda，Md.,1991)來(lái)指示(例如IgG抗體的)恒定區(qū)的哪個(gè)氨基酸殘基是經(jīng)改變或突變的。該編號(hào)可用于特定類(lèi)型的抗體(例如IgGl)或物種(例如人類(lèi))，但應(yīng)了解，可橫跨各類(lèi)型的抗體及物種達(dá)成類(lèi)似改變。在一些實(shí)施方式中，與A湖太特異性結(jié)合的抗體包含具有受損的效應(yīng)器功能的重鏈恒定區(qū)。重鏈恒定區(qū)可具有天然存在的序列或?yàn)樽儺愺w。在一些實(shí)施方式中，天然存在的重鏈恒定區(qū)的氨基酸序列是經(jīng)突變的，例如通過(guò)氨基酸取代、插入和/或缺失來(lái)突變，由此削弱恒定區(qū)的效應(yīng)器功能。在一些實(shí)施方式中，重鏈恒定區(qū)的Fc區(qū)的N-糖基化也可改變，例如可完全或部分移除，由此削弱恒定區(qū)的效應(yīng)器功能。在一些實(shí)施方式中，通過(guò)移除抗A湖太的Fc區(qū)(例如在IgG的CH2域中)的N-糖基化來(lái)受損的效應(yīng)器功能。在一些實(shí)施方式中，通過(guò)使糖基化氨基酸殘基突變或側(cè)接作為恒定區(qū)中糖基化識(shí)別序列的部分的殘基來(lái)移除Fc區(qū)的N-糖基化。三肽序列天冬酰胺-X-絲氨酸(N-X-S)、天冬酰胺-X-蘇氨酸(N-X-T)及天冬酰胺-X-半胱氨酸(N-X-C)(其中X為除脯氨酸外的任何氨基酸)為用于碳水化合物部分酶促附接于天冬酰胺側(cè)鏈以達(dá)成N-糖基化的識(shí)別序列。恒定區(qū)中三肽序列中氨基酸中的任一種的突變產(chǎn)生糖基化IgG。舉例而言，人類(lèi)IgGl及IgG3的N-糖基化位點(diǎn)N297可突變?yōu)锳、D、Q、K或H。參見(jiàn)Tao等人，/mw柳o/ogy143:2595-2601(1989);及Jefferis等人，/mmw"o/og/ca/iev/e鄉(xiāng)163:59-76(1998)。已報(bào)導(dǎo)具有以Gln、His或Lys取代Asn-297的人類(lèi)IgGl及IgG3并不與人類(lèi)FcyRI結(jié)合且并不活化補(bǔ)體，其中Clq結(jié)合能力對(duì)IgGl而言完全喪失且對(duì)于IgG3而言顯著減小。在一些實(shí)施方式中，三肽序列中氨基酸N突變?yōu)橐韵掳被嶂械娜我环NA、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W、Y。在一些實(shí)施方式中，三肽序列中氨基酸N突變?yōu)楸Ｊ匦匀〈?。在一些?shí)施方式中，三肽序列中氨基酸X突變?yōu)楦彼?。在一些?shí)施方式中，三肽序列中氨基酸S突變?yōu)锳、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、V、W、Y。在一些實(shí)施方式中，三肽序列中氨基酸T突變?yōu)锳、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、V、W、Y。在一些實(shí)施方式中，三肽序列中氨基酸C突變?yōu)锳、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、V、W、Y。在一些實(shí)施方式中，三肽后的氨基酸突變?yōu)镻。在一些實(shí)施方式中，以酶促方式(例如，如實(shí)例3中所述的N-糖苷酶F、內(nèi)切糖苷酶F1、內(nèi)切糖苷酶F2、內(nèi)切糖苷酶F3及內(nèi)切糖苷酶H)移除恒定區(qū)中的N-糖基化。亦可通過(guò)在具有N-糖基化缺乏的細(xì)胞株中產(chǎn)生抗體來(lái)達(dá)成N-糖基化的移除。Wright等人，JImmunol.160(7):3393-402(1998)。在一些實(shí)施方式中，與附接于恒定區(qū)的N-糖基化位點(diǎn)的寡糖相互作用的氨基酸殘基經(jīng)突變，以減小對(duì)FcyRI的結(jié)合親和性。舉例而言，可將人類(lèi)IgG3的F241、V264、D265突變。參見(jiàn)Lund等人，,/mm朋o/ogy157:4963-4969(1996)。在一些實(shí)施方式中，通過(guò)如PCTWO99/58572及Armour等人，Mo/ecw/a廠(chǎng)7mmtmo/ogy40:585-593(2003);Reddy等人，/mmwwo/ogy164:1925-1933(2000)中所述修飾區(qū)域(例如人類(lèi)IgG的233-236、297和/或327-331)，來(lái)使得效應(yīng)器功能受損。除針對(duì)靶標(biāo)分子的結(jié)合域外，PCTWO99/58572及Armour等人所述的抗體包含具有基本上與人類(lèi)免疫球蛋白重鏈的恒定區(qū)的全部或部分同源的氨基酸序列的效應(yīng)器結(jié)構(gòu)域。此類(lèi)抗體能夠結(jié)合靶標(biāo)分子，而不觸發(fā)顯著補(bǔ)體依賴(lài)溶胞，或耙標(biāo)的細(xì)胞介導(dǎo)破壞。在一些實(shí)施方式中，效應(yīng)器結(jié)構(gòu)域?qū)cyRI、FcYRIIa及FcYRIII具有減小的親和性。在一些實(shí)施方式中，效應(yīng)器結(jié)構(gòu)域能夠特異性結(jié)合FcRn和/或FcryRIIb。此類(lèi)者通常系基于衍生自?xún)蓚€(gè)或兩個(gè)以上人類(lèi)免疫球蛋白重鏈Ch2域的嵌合域。以此方式修飾的抗體尤其適用于慢性抗體療法以避免對(duì)公知抗體療法的發(fā)炎性及其它不利反應(yīng)。在一些實(shí)施方式中，抗體的重鏈恒定區(qū)為具有以下突變中的任一種的人類(lèi)重鏈IgGl:1)A327A330P331至G327S330S331;2)E233L234L235G236至P233V234A235，其中G236缺失；3)E233L234L235至P233V234A235;4)E233L234L235G236A327A330P331至P233V234A235G327S330S331，其中G236缺失；5)E233L234L235A327A330P331至P233V234A235G327S330S331;及6)N297至A297或除N外的任何其它氨基酸。在一些實(shí)施方式中，抗體的重鏈恒定區(qū)為具有以下突變的人類(lèi)重鏈IgG2:A330P331至S330S331。在一些實(shí)施方式中，抗體的重鏈恒定區(qū)為具有以下突變中的任一種的人類(lèi)重鏈IgG4:E233F234L235G236至P233V234A235，其中G236缺失；E233F234L235至P233V234A235;及S228L235至P228E235。抗體的恒定區(qū)亦可經(jīng)修飾以使得補(bǔ)體活化受損。舉例而言，通過(guò)使C1結(jié)合基元(例如，Clq結(jié)合基元)中恒定區(qū)中的氨基酸殘基突變，在補(bǔ)體的Cl組份的結(jié)合之后，IgG抗體的補(bǔ)體活化可減少。已報(bào)導(dǎo)人類(lèi)IgGl的D270、K322、P329、P331中的每一種的Ala突變顯著減小抗體與Clq結(jié)合及活化補(bǔ)體的能力。對(duì)于鼠類(lèi)IgG2b而言，Clq結(jié)合基元構(gòu)成殘基E318、K320及K322。Idusogie等人，//mm,ofogy164:4178-4184(2000);Duncan等人，Nature322:738-740(1988)。人們認(rèn)為，針對(duì)鼠類(lèi)IgG2b而鑒定的Clq結(jié)合基元E318、K320及K322對(duì)于其它抗體同型體而言為常見(jiàn)的。Duncan等人，Nature322:738-740(1988)。通過(guò)以在其側(cè)鏈上具有不適當(dāng)官能基的殘基置換三個(gè)指定殘基中的任一種，可消除對(duì)IgG2b的Clq結(jié)合活性。不一定只能用Ala置換離子殘基來(lái)消除Clq結(jié)合。還可能使用其它經(jīng)垸基取代的非離子殘基(例如Gly、Ile、Leu或Val)或例如Phe、Tyr、Trp及Pro的芳族非極性殘基來(lái)代替三個(gè)殘基中的任一種以消除Clq結(jié)合。另外，還可能使用例如Ser、Thr、Cys及Met的極性非離子殘基來(lái)代替殘基320及322(但不代替318)以消除Clq結(jié)合活性。本發(fā)明還提供了具有受損的效應(yīng)器功能的抗體，其中該抗體具有經(jīng)修飾鉸鏈區(qū)?？赏ㄟ^(guò)修飾鉸鏈區(qū)，來(lái)調(diào)節(jié)人類(lèi)IgG對(duì)其Fc受體的結(jié)合親和性。Canfield等人，乂五x;.173:1483-1491(1991);Hezareh等人，,KVo/.75:12161-12168(2001);Redpath等人，//w謹(jǐn)w/mm腳/ogy59:720-727(1998)。特異性氨基酸殘基可被突變或缺失。經(jīng)修飾鉸鏈區(qū)可包含衍生自與CH1域的類(lèi)別或亞類(lèi)不同的抗體類(lèi)別或亞類(lèi)的抗體的完整鉸鏈區(qū)。舉例而言，IgG抗體類(lèi)別的恒定結(jié)構(gòu)域(CHl)可附接于IgG4抗體類(lèi)別的鉸鏈區(qū)?；蛘?，新鉸鏈區(qū)可包含部分天然鉸鏈或重復(fù)單元，其中重復(fù)的各單元47系衍生自天然鉸鏈區(qū)。在一些實(shí)施方式中，通過(guò)將一或多個(gè)半胱氨酸殘基轉(zhuǎn)化為例如丙氨酸的中性殘基或通過(guò)將適當(dāng)置放的殘基轉(zhuǎn)化為半胱氨酸殘基來(lái)改變天然鉸鏈區(qū)。美國(guó)專(zhuān)利第5，677,425號(hào)。使用本領(lǐng)域認(rèn)可的蛋白質(zhì)化學(xué)且優(yōu)選使用遺傳工程技術(shù)及如本文中所述來(lái)進(jìn)行此類(lèi)改變。與A湖太特異性結(jié)合且與具有受損的效應(yīng)器功能的重鏈恒定區(qū)融合的多肽也可用于本文所述的方法。在一些實(shí)施方式中，多肽包含衍生自抗體9TL或表3中所示的其變異體的序列。在一些實(shí)施方式中，多肽衍生自與A湖太結(jié)合的單結(jié)構(gòu)域抗體?？墒褂帽绢I(lǐng)域中已知的方法產(chǎn)生單結(jié)構(gòu)域抗體。Omidfar等人，說(shuō)o/.25:296-305(2004);Herring等人，7>ew&腸tec/mo/ogy21:484-489(2003》在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽不是F(ab')2片段。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽不是Fab片段。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽不是單鏈抗體scFv。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽是聚乙二醇化F(ab')2片段。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽是聚乙二醇化Fab片段。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽是聚乙二醇化單鏈抗體scFv。還可使用本領(lǐng)域中已知的制造具有受損的效應(yīng)器功能的抗體的其它方法?？稍谝换蚨鄠€(gè)檢驗(yàn)中測(cè)試具有經(jīng)修飾恒定區(qū)的抗體及多肽，以評(píng)估與起始抗體相比生物活性的效應(yīng)器功能減小的水平。舉例而言，可使用本文中所公開(kāi)的檢驗(yàn)以及任何本領(lǐng)域認(rèn)可的檢驗(yàn)來(lái)評(píng)定具有經(jīng)改變Fc區(qū)的抗體或多肽結(jié)合補(bǔ)體或Fc受體(例如微神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞上的Fc受體)或經(jīng)改變鉸鏈區(qū)的能力。PCTWO99/58572;Armour等人，Mo/ecw/ar/mmw"o/og少40:585-593(2003);Reddy等人，J.Immunology164:1925-1933(2000);Song等人，/"/ec,細(xì)/m^2wm'(y70:5177-5184(2002)。在一些實(shí)施方式中，與/3類(lèi)淀粉特異性結(jié)合的抗體為多克隆抗體。在一些實(shí)施方式中，抗體為單克隆抗體。在一些實(shí)施方式中，抗體為人抗體。在一些實(shí)施方式中，抗體為嵌合抗體。在一些實(shí)施方式中，抗體為人化抗體。在一些實(shí)施方式中，抗體為靈長(zhǎng)化抗體。例如參見(jiàn)Yocum等人，J.i/ewwato/.25:1257-62(1998);Bugelski等人，//wmawc&五x/en'mewto/7bx/co/w19:230-243(2000)。在一些實(shí)施方式中，通過(guò)突變將抗體去免疫化以使抗體并不活化人類(lèi)免疫系統(tǒng)。例如參見(jiàn)Nanus等人，t/ra/ogy170:S84-S89(2003)。如本文中所用地，A湖太包括類(lèi)淀粉前驅(qū)蛋白質(zhì)的酶促分裂產(chǎn)物的任何片段。舉例而言，A湖太包括A^.40、A/3m2或A/Sl43的任何片段；及經(jīng)各種數(shù)目的氨基酸在A(yíng)艮4。、A/3m2或A/3m3的N末端或C末端截短的欣。本文中所用的氨基酸編號(hào)基于對(duì)A/3M3(SEQIDNO:17)的編號(hào)。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與A湖太的1-16位殘基內(nèi)的表位特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與A瀏太的16-28位殘基內(nèi)的表位特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多妝與A/3l4。妝的28-40位殘基內(nèi)的表位特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與A/5M2肽的28-42位殘基內(nèi)的表位特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與八/31-43肽的28-43位殘基內(nèi)的表位特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與A湖太特異性結(jié)合，而不與全長(zhǎng)類(lèi)淀粉前驅(qū)蛋白質(zhì)(APP)結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與A/5的聚集形式特異性結(jié)合，而不與可溶形式結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與A/3的可溶形式特異性結(jié)合，而不與聚集形式結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與A/3的聚集形式及可溶形式特異性結(jié)合。在本領(lǐng)域中已知與A郎勺各種聚集形式結(jié)合的抗體，例如，與類(lèi)淀粉樹(shù)行生可擴(kuò)散配位體(ADDL)結(jié)合的抗體；與類(lèi)淀粉原纖維和/或沉積物結(jié)合的抗體。WO03/104437;美國(guó)公開(kāi)文本第2003/0147887號(hào)；美國(guó)公開(kāi)文本第2004/0219146號(hào)。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽包含一、二或三個(gè)來(lái)自3D6免疫球蛋白輕鏈(美國(guó)公開(kāi)文本第2003/0165496號(hào)或第2004/0087777號(hào)中的SEQIDNO:2)的CDR禾口/或一、二或三個(gè)來(lái)自3D6免疫球蛋白重鏈(美國(guó)公開(kāi)文本第2003/0165496號(hào)或第2004/0087777號(hào)中的SEQIDNO:4)的CDR。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽包含如美國(guó)公開(kāi)文本第2003/0165496號(hào)中SEQIDNO:8中示出的可變重鏈區(qū)及如美國(guó)公開(kāi)文本第2003/0165496號(hào)中SEQIDNO:5中示出的可變輕鏈區(qū)。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽包含如美國(guó)公開(kāi)文本第2003/0165496號(hào)中SEQIDNO:12中示出的可變重鏈區(qū)及如美國(guó)公開(kāi)文本第2003/0165496號(hào)中SEQIDN0:11中示出的可變輕鏈區(qū)。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽包含一、二或三個(gè)來(lái)自10D5免疫球蛋白輕鏈(在美國(guó)公開(kāi)文本第2003/0165496號(hào)或第2004/0087777號(hào)中的SEQIDN0:14)的CDR和/或一、二或三個(gè)來(lái)自10D5免疫球蛋白重鏈(在美國(guó)公開(kāi)文本第2003/0165496號(hào)或第2004/0087777號(hào)中的SEQIDNO:16)的CDR。在一些實(shí)施方式中，抗體或多妝與A/3m。的33-40位殘基內(nèi)的表位特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與A/^4。上包括35-40位氨基酸的表位特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與A/3M。上包括36-40位氨基酸的表位特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多欣與A/3m。上包括第39和/或40位氨基酸的表位特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽與A^-4。特異性結(jié)合，但并不與A/3M2和/或A艮43特異性結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽為本文所述的抗體9TL或衍生自9TL的抗體或多肽。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽競(jìng)爭(zhēng)地抑制抗體9TL和/或衍生自9TL的抗體或多肽與A/3M。的結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體不是PCTWO2004/032868中所述的抗體2286。在其它實(shí)施方式中，抗體或多肽是本文所述的抗體6G或衍生自6G的抗體或多肽。在一些實(shí)施方式中，抗體或多肽競(jìng)爭(zhēng)地抑制抗體6G禾n/或衍生自6G的抗體或多肽與AA,及A/3M2的結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗體不是US2004/0146512及WO04/032868中所述的抗體2294。如WO2006118959中所述，抗體2294與極類(lèi)似于抗體6G的表位#人5口no制造抗體及多肽的方法是本領(lǐng)域中已知的，并且在本文中有所描述。通過(guò)識(shí)別相同或空間上疊蓋的表位，可將競(jìng)爭(zhēng)檢驗(yàn)用以測(cè)定兩個(gè)抗體是否結(jié)合同一表位，或一抗體競(jìng)爭(zhēng)地抑制另一抗體與抗原的結(jié)合。此類(lèi)檢驗(yàn)在本領(lǐng)域中是已知的。通常將抗原固定于多孔板上且測(cè)量未經(jīng)標(biāo)記的抗體阻斷經(jīng)標(biāo)記的抗體結(jié)合的能力。此類(lèi)競(jìng)爭(zhēng)檢驗(yàn)的常見(jiàn)標(biāo)記為放射性標(biāo)記或酶標(biāo)記。多核苷酸、載體及宿主細(xì)胞本發(fā)明還提供了編碼本發(fā)明的抗體及多肽(包括包含圖1及圖8中所示的輕鏈及重鏈可變區(qū)的多肽序列的抗體)的分離多核苷酸，及包含該多核苷酸的載體及宿主細(xì)胞。因此，本發(fā)明提供了下述多核苷酸(或組合物，包括醫(yī)藥組合物)，其包含編碼以下各物中的任一種的多核苷酸(a)抗體9TL或6G或表3及表8中所示的其變異體；(b)抗體9TL或6G或表3及表8中所示的其變異體的片段或區(qū)域；(c)抗體9TL或6G或表3及表8中所示的其變異體的輕鏈；(d)抗體9TL或6G或表3及表8中所示的其變異體的重鏈；(e)來(lái)自抗體9TL或6G或表3及表8中所示的其變異體的輕鏈和/或重鏈的一或多個(gè)可變區(qū)；(f)抗體9TL或6G或表3及表8中所示的其變異體的一或多個(gè)CDR(—、二、三、四、五或六個(gè)CDR);(g)來(lái)自抗體9TL或6G的重鏈的CDRH3;(h)來(lái)自抗體9TL或6G或表3及表8中所示的其變異體的輕鏈CDRL3;(i)來(lái)自抗體9TL或6G或表3及表8中所示的其變異體的輕鏈的三個(gè)CDR;(j)來(lái)自抗體9TL或6G或表3及表8中所示的其變異體的重鏈的三個(gè)CDR;(k)來(lái)自抗體9TL或6G或表3及表8中所示的其變異體的輕鏈的三個(gè)CDR及來(lái)自抗體9TL或6G或表3及表8中所示的其變異體的重鏈的三個(gè)CDR;及(l)包含(b)至(k)中的任一種的抗體。在一些實(shí)施方式中，多核苷酸包含SEQIDNO:9、SEQIDNO:IO、SEQIDNO:34及SEQIDNO:35中所示的多核苷酸中的任一種或兩者。在另一方面中，本發(fā)明提供了編碼本文所述的抗體(包括抗體片斷)及多肽(例如具有受損的效應(yīng)器功能的抗體及多肽)中的任一種的多核苷酸?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域中已知的程序制造所述多核苷酸。在另一方面中，本發(fā)明提供了下述組合物(例如醫(yī)藥組合物)，其包含本發(fā)明的多核苷酸中的任一種。在一些實(shí)施方式中，組合物包含表達(dá)載體，所述表達(dá)載體包含編碼如本文中所述的9TL抗體的多核苷酸。在其它實(shí)施方式中，組合物包含下述表達(dá)載體，所述表達(dá)載體包含編碼本文所述的抗體或多肽中的任一種的多核苷酸。在再其它一些實(shí)施方式中，組合物包含SEQIDNO:9及SEQIDNO:10中所示的多核苷酸中的任一種或兩者。本文進(jìn)一步描述了表達(dá)載體及多核苷酸組合物的施用。在另一方面中，本發(fā)明提供了制造本文所述的多核苷酸中的任一種的方法。本發(fā)明還涵蓋與任何此類(lèi)序列互補(bǔ)的多核苷酸。多核苷酸可為單鏈(編碼或反義)或雙鏈且可為DNA(染色體組DNA、cDNA或合成DNA)或RNA分子。RNA分子包括含有內(nèi)含子且以一對(duì)一方式對(duì)應(yīng)于DNA分子的HnRNA分子及不含有內(nèi)含子的mRNA分子。其它編碼或非編碼序列可(但不必需)存在于本發(fā)明的多核苷酸內(nèi)，且多核苷酸可(但不必需)與其它分子和/或支撐材料連接。多核苷酸可包含天然序列(即編碼抗體或其部分的內(nèi)源序列)或可包含此序列的變異體。多核苷酸變異體含有一或多個(gè)取代、添加、缺失和/或插入，使得經(jīng)編碼多肽的免疫應(yīng)答性相對(duì)于天然免疫應(yīng)答性分子而言并不減小。一般可如本文中所述來(lái)評(píng)定對(duì)經(jīng)編碼多肽的免疫應(yīng)答性的影響。變異體優(yōu)選展現(xiàn)與編碼天然抗體或其部分的多核苷酸序列至少約70%—致性，更優(yōu)選至少約80%—致性且最佳至少約90%—致性。若在如下所述針對(duì)最大對(duì)應(yīng)性對(duì)齊時(shí)，在兩條序列中的核苷酸或氨基酸的序列是相同的，則將兩挑多核苷酸或多肽序列稱(chēng)為"一致"。通常通過(guò)在比較窗口上比較序列，以鑒定和比較序列相似性的局部區(qū)域，從而進(jìn)行兩條序列之間的比較。如本文中所用的"比較窗口"指至少約20個(gè)鄰接位置的區(qū)段(通常30至約75個(gè)，40至約50個(gè))，其中兩個(gè)序列經(jīng)最佳對(duì)準(zhǔn)之后，序列可與具有相同數(shù)目的鄰接位置的參考序列相比。用于比較的序列的最佳對(duì)齊可使用生物信息學(xué)軟件(DNASTAR,Inc.,Madison,WI)的Lasergene軟件包中的Megalign程序，使用默認(rèn)參數(shù)來(lái)進(jìn)行。此程序體現(xiàn)了以下參考文獻(xiàn)中所述的若干對(duì)準(zhǔn)方案Dayhoff,M.O.(1978)Amodelofevolutionarychangeinproteins-Matricesfordetectingdistantrelationships。在Dayhoff,M.O.(編)AtlasofProteinSequenceandStructure,NationalBiomedicalResearchFoundation,WashingtonDC第5巻，Suppl.3，第345-358頁(yè)；HeinJ.,1990,UnifiedApproachtoAlignmentandPhylogenes,第626-645頁(yè)；MethodsinEnzymology,第183巻，AcademicPress,Inc.,SanDiego,CA;Higgins,D.G.及Sharp,P.M.,1989,CABIOS5:151-153;Myers,E.W.及MullerW.,1988,CABIOS4:11-17;Robinson,E.D.,1971,Comb.Theor.11:105;Santou,N.,Nes,M.,1987,Mol.Biol.Evol.4:406-425;Sneath,P.H.A.及Sokal,R.R.,1973,NumericalTaxonomythePrinciplesandPracticeofNumericalTaxonomy,FreemanPress,SanFrancisco,CA;Wilbur,W丄及Lipman,D丄，1983,Proc.Natl.Acad.Sci.USA80:726-730中。優(yōu)選地，通過(guò)在具有至少20個(gè)位置的比較窗口上比較兩個(gè)經(jīng)最佳對(duì)準(zhǔn)的序列來(lái)測(cè)定"序列一致性百分比"，其中在兩個(gè)序列最佳對(duì)準(zhǔn)下與參考序列(其并不包含添加或缺失)相比，比較窗口中的多核苷酸或多肽序列的部分可包含20%或以下、通常5%至15%或10%至12%的添加或缺失(即缺口)。該百分比系如下計(jì)算測(cè)定相同核酸堿或氨基酸殘基在兩個(gè)序列中均存在的位置數(shù)目以產(chǎn)生匹配位置的數(shù)目，用匹配位置的數(shù)目除以參考序列中位置總數(shù)(即窗口尺寸)且將結(jié)果乘以100以產(chǎn)生序列一致性百分比。變異體亦可(或者)基本上與天然基因或其部分或補(bǔ)體同源。此類(lèi)多核苷酸變異體能夠在適度嚴(yán)格條件下與編碼天然抗體(或互補(bǔ)序列)的天然存在DNA序列雜交。合適的"適度嚴(yán)格條件"包括在5xSSC、0.5%SDS、1.0mMEDTA(pH8.0)的溶液中預(yù)洗；在5(TC-65。C、5xSSC下雜交過(guò)夜；接著在65。C下洗滌兩次歷時(shí)20分鐘，每次2x、0.5x及0.2xSSC(含有0.in/。SDS)。如本文中所用，"高度嚴(yán)格條件"或"高嚴(yán)格性條件"為如下條件(l)采用低離子強(qiáng)度及高溫進(jìn)行洗滌，例如在5(TC下用0.015M氯化鈉/0.0015M檸檬酸鈉/0.1%十二烷基硫酸鈉；(2)雜交期間采用變性劑，例如甲酰胺，例如在42°C下用50%(v/v)甲酰胺與0.1%牛血清白蛋白/0.1%聚蔗糖(Ficoll)/0.1。/o聚乙烯吡咯啶酮/50mM磷酸鈉緩沖劑(pH6.5)，以及750mM氯化鈉、75mM檸檬酸鈉；或(3)在42。C下采用50。/。甲酰胺、5xSSC(0.75MNaCl、0.075M檸檬酸鈉)、50mM磷酸鈉(pH6.8)、0.1%焦磷酸鈉、5x丹哈德溶液(Denhardt'ssolution).經(jīng)超聲波處理的鮭魚(yú)精DNA(50/ig/ml)、0.1%SDS及10。/o硫酸葡聚糖，在42。C下以0.2xSSC(氯化鈉/檸檬酸鈉)洗滌及在55匸下以50%甲酰胺洗滌，接著進(jìn)行由在55"C下含有EDTA的0.1xSSC組成的高嚴(yán)格性洗滌。本領(lǐng)域技術(shù)人員將知道如何調(diào)節(jié)適應(yīng)例如探針長(zhǎng)度及其類(lèi)似因素的因素所必需的溫度、離子強(qiáng)度等。普通技術(shù)人員應(yīng)了解由于遺傳密碼子的簡(jiǎn)幷，因此存在多種編碼如本文中所述的多肽的核苷酸序列。一些此類(lèi)多核苷酸帶有與任何天然基因的核苷酸序列的最小同源性。然而，本發(fā)明特別地涵蓋由密碼子用途差異造成變化的多核苷酸。另外，包含本文中所提供的多核苷酸序列的基因的等位基因也在本發(fā)明的范疇內(nèi)。等位基因?yàn)閮?nèi)源基因，其由于一或多種突變(例如核苷酸的缺失、添加和/或取代)而改變。所得mRNA及蛋白質(zhì)可(但不必需)具有改變的結(jié)構(gòu)或功能。可使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)(例如雜交、擴(kuò)增和/或數(shù)據(jù)庫(kù)序列比較)來(lái)鑒定等位基因。可使用化學(xué)合成、重組方法或PCR獲得本發(fā)明的多核苷酸。在本領(lǐng)域中公知化學(xué)多核苷酸合成的方法，這無(wú)需在本文中詳細(xì)描述。本領(lǐng)域技術(shù)人員可使用本文中所提供的序列及商業(yè)DNA合成儀以制造所需DNA序列。通過(guò)使用在適當(dāng)載體中的分離DNA且將其插入合適宿主細(xì)胞中來(lái)獲得RNA。當(dāng)將細(xì)胞復(fù)制物及DNA轉(zhuǎn)錄于RNA中時(shí)，可接著使用本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法分離RNA，例如，如Sambrook等人，(1989)所闡明。合適的克隆載體可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)來(lái)構(gòu)建或可選自大量本領(lǐng)域中可得的克隆載體。表達(dá)載體一般為含有根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸的可復(fù)制多核苷酸構(gòu)建體。這表明表達(dá)載體必須在宿主細(xì)胞中可復(fù)制為離合染色小體或染色體DNA的整合部分。合適的表達(dá)載體包括但不限于質(zhì)粒，病毒載體，包括腺病毒、腺相關(guān)病毒、反轉(zhuǎn)錄病毒，粘粒及PCT公開(kāi)文本第WO87/04462號(hào)中公開(kāi)的表達(dá)載體。通過(guò)大量適當(dāng)方式中的任一種，包括電穿孔，采用氯化鈣、氯化銣、磷酸鈣、DEAE-葡聚糖或其它物質(zhì)的轉(zhuǎn)染；微彈轟擊；脂質(zhì)轉(zhuǎn)染(lipofection);及感染(例如，其中載體為例如牛痘病毒的感染劑)，可將含有所關(guān)注的多核苷酸的載體引入宿主細(xì)胞中。本發(fā)明還提供了包含本文所述的多核苷酸中的任一種的宿主細(xì)胞。為達(dá)成分離編碼所關(guān)注抗體、多肽或蛋白質(zhì)的基因的目的，任何能夠過(guò)度表達(dá)異源DNA的宿主細(xì)胞均可使用。哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞的非限制性實(shí)例包括但不限于COS、HeLa及CHO細(xì)胞。還參見(jiàn)PCT公開(kāi)文本第WO87/04462號(hào)。合適的非哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞包括原核生物(例如大腸桿菌或枯草芽孢桿菌08.^^////))及酵母(例如釀酒酵母(&匿w層)、粟酒裂殖酵母cs.pom^);或乳酸克魯維酵母(K/GCfc))。宿主細(xì)胞優(yōu)選以比宿主細(xì)胞中相應(yīng)所關(guān)注內(nèi)源抗體或蛋白質(zhì)(若存在)的水準(zhǔn)高約5倍、更優(yōu)選高10倍、甚至更優(yōu)選高20倍的水準(zhǔn)來(lái)表達(dá)cDNA。通過(guò)免疫檢驗(yàn)或FACS實(shí)現(xiàn)與A/3M。特異性結(jié)合的宿主細(xì)胞的篩選?？设b定過(guò)量表達(dá)所關(guān)注抗體或蛋白質(zhì)的細(xì)胞。具有受損的效應(yīng)器功能的9TL或6G衍生抗體及抗A/3抗體的診斷用途與一或多個(gè)A卵太的C末端結(jié)合的抗體9TL或6G可用于鑒定或檢測(cè)眼睛中耙標(biāo)A/3的存在或不存在。為簡(jiǎn)單起見(jiàn)，通常將針對(duì)9TL或6G抗體來(lái)描述，但是應(yīng)了解此類(lèi)方法適用于本文所述的A/5結(jié)合實(shí)施方式(例如多肽)中的任一種。檢測(cè)一般包括使生物樣品與結(jié)合于A(yíng)/5M。的本文所述的抗體接觸，及在A(yíng)^,與特異性結(jié)合于A(yíng)/3M。的抗體(例如9TL)的間形成復(fù)合物。此復(fù)合物的形成可為體外或體內(nèi)的。如本文中所用的術(shù)語(yǔ)"檢測(cè)"包括在有或無(wú)參考對(duì)照的情況下的定性和/或定量檢測(cè)(測(cè)量水準(zhǔn))。多種已知方法中的任一種均可用于檢測(cè)，這包括但不限于免疫檢驗(yàn)，其使用結(jié)合多肽的抗體，例如通過(guò)酶聯(lián)結(jié)免疫吸附劑分析法(ELISA)、放射免疫檢驗(yàn)(RIA)及其類(lèi)似方法；及用于被編碼多肽的功能性檢驗(yàn)，例如結(jié)合活性或酶促檢驗(yàn)。在一些實(shí)施方式中，抗體被可檢測(cè)標(biāo)記。其它實(shí)施方式是本領(lǐng)域中已知的，并且在本文中描述過(guò)。本發(fā)明的抗體及多肽可用于檢測(cè)、診斷及監(jiān)測(cè)具有改變或異常A/3或/3APP表達(dá)的眼科疾病、病狀或病癥。因此在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供方法，其包括使疑似在眼睛中具有改變或異常A/3表達(dá)的個(gè)體的樣品(樣品)與本發(fā)明的抗體或多肽接觸，及測(cè)定A湖太的水準(zhǔn)是否不同于對(duì)照或比較樣品的A瀏太水準(zhǔn)。在其它實(shí)施方式中，本發(fā)明提供方法，其包括接觸個(gè)體的樣品(樣品)及測(cè)定A/3表達(dá)水準(zhǔn)。對(duì)于診斷應(yīng)用而言，抗體可以可檢測(cè)部分標(biāo)記，所述可檢測(cè)部分包括但不限于放射性同位素、螢光標(biāo)記及各種酶-受體標(biāo)記。在本領(lǐng)域中己知使標(biāo)記與抗體綴合的方法。在本發(fā)明的其它實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體無(wú)需被標(biāo)記，可使用與本發(fā)明的抗體結(jié)合的經(jīng)標(biāo)記抗體來(lái)檢測(cè)其存在。本發(fā)明的抗體可用于任何已知檢驗(yàn)法中，例如競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合檢驗(yàn)、直接及間接夾心式檢驗(yàn)及免疫沉淀檢驗(yàn)。Zola,MonoclonalAntibodies:AManualofTechniques,第147-158頁(yè)(CRCPress,Inc.1987)?？贵w還可用于體內(nèi)診斷檢驗(yàn)，例如體內(nèi)成像。一般以放射核素(例如mIn、99Tc、14C、131I、1251或311)標(biāo)記抗體以便所關(guān)注細(xì)胞或組織可使用免疫閃爍掃描法來(lái)局部化。遵照本領(lǐng)域中公知的技術(shù)，抗體亦可用作病理學(xué)中的染色劑。具有受損的效應(yīng)器功能的抗A^抗體可用于測(cè)量視網(wǎng)膜功能以診斷處于視網(wǎng)膜相關(guān)退化性眼科疾病風(fēng)險(xiǎn)中或經(jīng)診斷患有視網(wǎng)膜相關(guān)退化性眼科疾病的個(gè)體，及評(píng)定任何治療及疾病階段的進(jìn)展。在一些實(shí)施方式中，向個(gè)體施用具有受損的效應(yīng)器功能的抗A/3抗體，且測(cè)量血漿中的A/3水準(zhǔn)，由此而得的血漿A/3的增加表明個(gè)體中的腦部類(lèi)淀粉負(fù)荷的存在和/或水準(zhǔn)。此類(lèi)方法可用于監(jiān)測(cè)治療的有效性及疾病階段，且可用于確定未來(lái)給藥及頻率。具有受損的效應(yīng)器功能的抗體可具有更好的安全性，并且提供針對(duì)此類(lèi)診斷用途的優(yōu)勢(shì)。為治療目的使用抗A^抗體的方法本文所述的抗體(包括多肽)、多核苷酸及醫(yī)藥組合物可用于治療、預(yù)防及抑制特征在于視網(wǎng)膜相關(guān)退化的眼科疾病發(fā)展的方法中。此類(lèi)方法包含向個(gè)體施用有效量的與蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)沉積物特異性結(jié)合的抗體或編碼該抗體的多核苷酸，其中該抗體具有受損的效應(yīng)器功能。本文所述的抗體(包括多肽)、多核苷酸及醫(yī)藥組合物可用于治療、預(yù)防及抑制年齡相關(guān)黃斑退化及其它眼科疾病的發(fā)展的方法中，此類(lèi)其它眼科疾病例如年齡相關(guān)黃斑退化(濕型及干型)、青光眼、糖尿病性視網(wǎng)膜病變(包括糖尿病性黃斑水腫)、布魯赫膜破裂、近視退化、眼腫瘤及其它相關(guān)視網(wǎng)膜退化性疾病。此類(lèi)方法包含向個(gè)體施用抗體、多肽或多核苷酸或醫(yī)藥組合物。在預(yù)防性應(yīng)用中，以足以消除或減小風(fēng)險(xiǎn)、減輕嚴(yán)重程度或延遲疾病發(fā)作的量向易患眼科疾病或另外處于眼科疾病風(fēng)險(xiǎn)中的患者施用醫(yī)，在疾病發(fā)展期間呈現(xiàn)的其并發(fā)癥及中間病理學(xué)表型。在治療性應(yīng)用中，以足以治愈或至少部分停滯疾病癥狀(生物化學(xué)、組織和/或行為癥狀)的量向疑似患有或已患有此疾病的患者施用組合物或藥物，此類(lèi)癥狀包括疾病發(fā)展中的其并發(fā)癥及中間病理學(xué)表型。年齡相關(guān)黃斑退化的并發(fā)癥及中間病理學(xué)表型包括厚擴(kuò)散視網(wǎng)膜下色素上皮細(xì)胞(RPE)沉積、唇富脈絡(luò)膜小疣狀沉積(lip-richdrusen-likedeposit)、布魯赫膜增厚、RPE萎縮的斑點(diǎn)區(qū)域及脈絡(luò)膜新血管生成。本發(fā)明還提供了延遲個(gè)體的視網(wǎng)膜退化和/或其癥狀的發(fā)展的方法，其包含向個(gè)體施用有效劑量的包含本文所述的抗體、多肽或多核苷酸的醫(yī)藥組合物。本發(fā)明還提供了恢復(fù)或保護(hù)個(gè)體視網(wǎng)膜功能的方法，其包含向個(gè)體施用有效劑量的包含本文所述的抗體、多肽或多核苷酸的醫(yī)藥組合物。本發(fā)明還提供了在個(gè)體視網(wǎng)膜中減少類(lèi)淀粉斑和/或減少或減緩A/3積累的方法，其包含向個(gè)體施用有效劑量的包含本文所述的抗體、多肽或多核苷酸的醫(yī)藥組合物。本發(fā)明還提供了在個(gè)體視網(wǎng)膜中移除或清除類(lèi)淀粉斑和/或A辦只累的方法，其包含向個(gè)體施用有效劑量的包含本文所述的抗體、多肽或多核苷酸的醫(yī)藥組合物。在一些實(shí)施方式中，類(lèi)淀粉斑系在個(gè)體的腦中。本發(fā)明還提供了減少視網(wǎng)膜組織中的A瀏太、抑制和/或減少視網(wǎng)膜組織中的A瀏太積累的方法，其包含向個(gè)體施用有效劑量的包含本文所述的抗體、多肽或多核苷酸的醫(yī)藥組合物。A/3多肽可呈可溶、寡聚或沉積形式。寡聚形式的A/3可由2-50個(gè)A/3多肽構(gòu)成，其可為全長(zhǎng)l-40及l(fā)-42的肽禾n/或此類(lèi)肽的任何截短型式的混合物。本發(fā)明還提供了改良或逆轉(zhuǎn)眼科疾病中視網(wǎng)膜退化的方法，其包含向個(gè)體施用有效劑量的包含本文所述的抗體、多肽或多核苷酸的醫(yī)藥組合物。本發(fā)明還提供了治療或預(yù)防與視網(wǎng)膜退化相關(guān)的疾病的方法，其包含向個(gè)體施用有效劑量的醫(yī)藥組合物，該醫(yī)藥組合物包含與/3類(lèi)淀粉肽或/5類(lèi)淀粉肽的聚集形式特異性結(jié)合的抗體，其中該抗體包含與天然存在的Fc區(qū)具有變異的FC區(qū)，其中該變異引起受損的效應(yīng)器功能，由此使施用該抗體產(chǎn)生比施用無(wú)變異抗體更小的腦微出血。通過(guò)在單一時(shí)間點(diǎn)或多個(gè)時(shí)間點(diǎn)單一直接注射至單一或多個(gè)部位，可實(shí)現(xiàn)本文所述的方法(包括預(yù)防方法或療法)。還可幾乎同時(shí)施用至多個(gè)部位。施用頻率可在療法過(guò)程期間被確定及調(diào)節(jié)，且施用頻率基于實(shí)現(xiàn)所需結(jié)果。在一些情況下，持續(xù)連續(xù)釋放抗體(包括多肽)、多核苷酸的制劑及本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可能是適當(dāng)?shù)?。用于達(dá)成持續(xù)釋放的各種制劑及設(shè)備是本領(lǐng)域中已知的?；颊摺€(gè)體或個(gè)體包括哺乳動(dòng)物，例如人類(lèi)、牛、馬、犬、貓、豬及綿羊動(dòng)物。個(gè)體優(yōu)選為人類(lèi)，其可罹患或可未罹患疾病或本文所示癥狀。本發(fā)明的方法可預(yù)防地施用于一般人群，而不需對(duì)個(gè)體患者進(jìn)行任何風(fēng)險(xiǎn)評(píng)定。本發(fā)明的方法適用于確實(shí)具有年齡相關(guān)黃斑退化的已知遺傳風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體。此類(lèi)個(gè)體包括具有已經(jīng)歷該疾病的親戚的個(gè)體及通過(guò)分析遺傳或生物化學(xué)標(biāo)記物確定風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體?？捎糜谏衔姆椒ǖ尼t(yī)藥組合物包括本文所述的抗體、多肽和/或多核苷酸中的任一種。在一些實(shí)施方式中，抗體為抗體9TL或6G或表3及8中所示的其變異體。在一些實(shí)施方式中，抗體為與A瀏太特異性結(jié)合且包含具有受損的效應(yīng)器功能的恒定區(qū)的抗體。施用及劑量抗體優(yōu)選在載劑、優(yōu)選醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑中向哺乳動(dòng)物施用。合適載齊U及其帝U齊ll被描述于/em/wgtowk尸Aamwcewrtca/6We"c^y，第18版，A.Gennaro編，MackPublishingCo.，Easton，PA，1990;及/，/"gtow,77eiS"dewcetmd尸rac"'ceo/尸力ar顧c》第20版，MackPublishing,2000。通常將適當(dāng)量的醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽用于制劑中以使制劑等張。載劑的實(shí)例包括鹽水、林葛爾氏溶液(Ringer'ssolution)及右旋糖溶液。溶液的pH值優(yōu)選為約5至約8，且更優(yōu)選約7至約7.5。其它載劑包括持續(xù)釋放制劑，例如含有抗體的固體疏水聚合物的半透性基質(zhì)，此類(lèi)基質(zhì)系呈成形對(duì)象的形式，例如膜、脂質(zhì)?；蛭⒘?。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，視例如施用途徑及施用抗體的濃度而定，某些載劑可為更優(yōu)選的。通過(guò)注射(例如全身性、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)、門(mén)靜脈內(nèi)(intraportal)、月畝內(nèi)、月畝心室內(nèi)(intracerebralventricular)及鼻內(nèi))或通過(guò)其它方法(例如輸注，其確保其以有效形式遞送至血流)，可向哺乳動(dòng)物施用抗體。亦可通過(guò)隔離灌注(isolatedperfusion)技術(shù)，例如隔離組織灌注來(lái)施用抗體以發(fā)揮局部治療作用。另外，本發(fā)明的抗體可局部地或以例如玻璃體內(nèi)注射、視網(wǎng)膜下注射或雙面注射的注射形式向眼睛施用。關(guān)于將化合物向眼睛施用的其它信息可見(jiàn)于Tolentino等人，24(2004)132-138;Reich等人，Mo/腦/ar由.ow9(2003)210-216中?？蓱{經(jīng)驗(yàn)決定施用抗體的有效劑量及進(jìn)度，且進(jìn)行此類(lèi)決定在本領(lǐng)域的技術(shù)范圍內(nèi)。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解必須施用的抗體的劑量將視(例如)將接受抗體的哺乳動(dòng)物、施用途徑、特定類(lèi)型的所用抗體及其它向哺乳動(dòng)物施用的藥物而改變。為抗體選擇適當(dāng)劑量的指導(dǎo)見(jiàn)于關(guān)于抗體治療性用途的文獻(xiàn)中，例如7/aw/Z)oc^:o/Afcwoc/owa/JwriZ0(i/M,Ferrone等人編，NogesPublications,ParkRidge,N丄，1985,第22章及第303-357頁(yè)；Smith等人，^wWo(i^Zw//wmawZ)/agwos^朋d7%erap_y,Haber等人編，RavenPress,NewYork,1977，第365-389頁(yè)。視上文提及的因素而定，單獨(dú)使用的抗體的典型每日劑量范圍可介于每天lAtg/kg至至多100mg/kg體重或更多。大體而言，可使用以下劑量中的任一種施用至少約50mg/kg體重；至少約10mg/kg體重；至少約3mg/kg體重；至少約lmg/kg體重；至少約750/xg/kg體重；至少約500Aig/kg體重；至少約250Atg/kg體重；至少約100pg/kg體重；至少約50Atg/kg體重；至少約10/Ig/kg體重；至少約liLtg/kg體重或更多的劑量。在治療開(kāi)始時(shí)，可以較低劑量或較小頻率施用抗體以避免潛在副作用，例如暫時(shí)性腦類(lèi)淀粉血管病變(CAA)。在一些實(shí)施方式中，可存在一個(gè)以上抗體。此類(lèi)組合物可含有至少一個(gè)、至少兩個(gè)、至少三個(gè)、至少四個(gè)、至少五個(gè)本發(fā)明的不同抗體(包括多肽)。抗體還可與有效量的一或多種其它治療劑組合向哺乳動(dòng)物施用?？贵w可與該或此類(lèi)其它治療劑依次或同時(shí)施用。抗體及治療劑的量視(例如)使用何類(lèi)型藥物、所治療的病理學(xué)病狀及施用進(jìn)度及途徑而定，但若個(gè)別地使用每一種，則該量通常將較小。向哺乳動(dòng)物施用抗體之后，可以本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的多種方式監(jiān)測(cè)哺乳動(dòng)物的生理?xiàng)l件。可使以上施用原理及劑量適合于本文所述的多肽。編碼本文所述的抗體或多肽的多核苷酸還可用于在所需細(xì)胞中遞送及表達(dá)抗體或多肽。顯然，表達(dá)載體可用以直接表達(dá)抗體?？扇淼?、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、經(jīng)口、經(jīng)腸、非經(jīng)腸、經(jīng)鼻內(nèi)、經(jīng)皮或通過(guò)吸入來(lái)施用表達(dá)載體。舉例而言，表達(dá)載體施用包括局部(local)或全身性施用，包括注射、口服、顆粒槍或插入導(dǎo)管施用及局部(topical)施用。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉表達(dá)載體的施用來(lái)獲得外源蛋白質(zhì)體內(nèi)表達(dá)。例如參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利第6，436，908號(hào)；第6,413,942號(hào)；及第6,376,471號(hào)還可使用包含編碼本發(fā)明的抗體的多核苷酸的治療組合物的靶向遞送。受體介導(dǎo)的DNA遞送技術(shù)被描述于(例如)Findeis等人，7>e"&歷她c/mo/.(1993)11:202;Chiou等人，Gewe77zera/ew^svMe^O(is1爿m/O/DzVe"7>ww/er(J.A.Wolff編)(1994);Wu等人，/歷o/.C&w.(1988)263:621;Wu等人，J歷o/.CAem.(1994)269:542;Zenke等人，尸roc.爿cad5W,卩C7&i)(1990)87:3655;Wu等人，C7e附.(1991)266:338中。在基因療法方案中，以約IOOng至約200mgDNA的范圍施用含有多核苷酸的治療組合物以局部施用。在基因療法方案期間還可使用約500ng至約50mg、約l/xg至約2mg、約5yg至約500yg及約20/xg至約100/zgDNA的濃度范圍?？墒褂没蜻f送介載體，遞送本發(fā)明的治療性多核苷酸及多肽?；蜻f送介載體可具有病毒或非病毒來(lái)源(一般參見(jiàn)Jolly,Qzwcer77era/_y(1994)1:51;Kimura,//wmtm77erapy(1994)5:845;Connelly,//w顧wG騰77^ra/_y(1995)1:185;及Kaplitt,淑臟Ge"e/b(1994)6:148)。使用內(nèi)源哺乳動(dòng)物啟動(dòng)子或異源啟動(dòng)子可誘導(dǎo)此類(lèi)編碼序列的表達(dá)。編碼序列的表達(dá)可為組成性的或受調(diào)控的。在本領(lǐng)域中公知用于遞送所需多核苷酸及在所需細(xì)胞中表達(dá)的病毒基載體。示例性病毒基介載體包括但不限于重組反轉(zhuǎn)錄病毒(例如參見(jiàn)PCT公開(kāi)文本第WO90/07936號(hào)；第WO94/03622號(hào)；第WO93/25698號(hào)；第WO93/25234號(hào)；第WO93A1230號(hào)；第WO93A0218號(hào)；第WO91/02805號(hào)；美國(guó)專(zhuān)利第5,219，740號(hào)；第4,777,127號(hào)；英國(guó)專(zhuān)利第2,200,651號(hào)；及EP0345242)、a病毒基載體(例如辛德畢斯病毒(Sindbisvirus)載體、勝利基森林病毒(Semlikiforestvirus)(ATCCVR-67;ATCCVR-1247)、羅斯河病毒(RossRivervirus)(ATCCVR-373;ATCCVR-1246)及委內(nèi)端拉馬腦炎病毒(Venezuelanequineencephalitisvirus)(ATCCVR-923;ATCCVR-1250;ATCCVR1249;ATCCVR-532)),及腺相關(guān)病毒(AAV)載體(例如參見(jiàn)PCT公開(kāi)文本第WO94/12649號(hào)；第WO93/03769號(hào)；第WO93/19191號(hào)；第WO94/28938號(hào)；第WO95/11984號(hào)及第WO95/00655號(hào))。還可采用如Curiel，/Twm.(1992)3:147中所述的與殺死腺病毒連接的DNA施用。亦可采用非病毒遞送介載體及方法，其包括但不限于與單獨(dú)殺死腺病毒連接或不連接的多價(jià)陽(yáng)離子縮合DNA(例如參見(jiàn)Curiel,//wm.77er(1992)3:147);配位體連接DNA(例如參見(jiàn)Wu,5Zo/.CAem.(1989)264:16985);真核細(xì)胞遞送介載體細(xì)胞(例如參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利第5,814,482號(hào)；PCT公開(kāi)文本第WO95/07994號(hào)；第WO96/17072號(hào)；第WO95/30763號(hào)及第WO97/42338號(hào))及核電荷中和或與細(xì)胞膜融合。亦可采用裸DNA。在PCT公開(kāi)文本第WO90/11092號(hào)及美國(guó)專(zhuān)利第5,580,859號(hào)中描述示例性裸DNA引入法。在美國(guó)專(zhuān)利第5,422，120號(hào)；PCT公開(kāi)文本第WO95/13796號(hào)；第WO94/23697號(hào)；第WO91/14445號(hào)；及EP0524968中描述可充當(dāng)基因遞送介載體的脂質(zhì)粒。在Philip,Mo/.Ce〃所o/.(1994)14:2411中且在Woffendin，尸rac.A^/.爿cm/.(1994)91:1581中描述其它方法。試劑盒本發(fā)明還提供了含有本文所述的適用于治療眼科疾病的物質(zhì)的制品及試劑盒，此類(lèi)眼科疾病例如年齡相關(guān)黃斑退化(濕型及干型)、青光眼、糖尿病性視網(wǎng)膜病變(包括糖尿病性黃斑水腫)、布魯赫膜破裂、近視退化、眼腫瘤及其它相關(guān)視網(wǎng)膜退化性疾病。該制品包含具有標(biāo)記的容器。合適的容器包括(例如)瓶、小瓶及試管。容器可由例如玻璃或塑料的多種材料形成。容器裝有具有活性劑的組合物，所述活性劑對(duì)于治療病理學(xué)眼科病狀或?qū)τ跈z測(cè)或純化A/3或/5APP為有效的。組合物中的活性劑為抗體，且優(yōu)選包含對(duì)A^或/3APP具特異性的單克隆抗體。在一些實(shí)施方式中，活性劑包含抗體9TL或6G或由此衍生的任何抗體或多肽。在一些實(shí)施方式中，活性劑包含具有受損的效應(yīng)器功能的抗A/3抗體或多肽。在一些實(shí)施方式中，抗A/3抗體或多肽包含重鏈恒定區(qū)，其中該恒定區(qū)具有受損的效應(yīng)器功能。容器上的標(biāo)記指示組合物用于治療例如AMD的病理學(xué)眼科病狀且亦可指示對(duì)體內(nèi)或體外用途的指導(dǎo)，例如上述那些。本發(fā)明還提供了包含本文所述的抗體(例如9TL或6G)、多肽、多核苷酸中任一種的試劑盒。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的試劑盒包含上述容器。在其它實(shí)施方式中，本發(fā)明的試劑盒包含上述容器及包含緩沖劑的第二容器。其可另外包括其它自商業(yè)及使用者觀(guān)點(diǎn)來(lái)看所需的物質(zhì)，包括其它緩沖劑、稀釋劑、過(guò)濾器、針、注射器及包裝插頁(yè)，此類(lèi)包裝插頁(yè)具有進(jìn)行本文所述的任何方法(例如用于治療AMD的方法及用于抑制或減小腦中A/3肽堆積的方法)的說(shuō)明書(shū)。在欲用于檢測(cè)或純化A/3或/3APP的試劑盒中，抗體通常以一種可檢測(cè)標(biāo)記物例如放射性同位素、螢光化合物、生物發(fā)光化合物、化學(xué)發(fā)光化合物、金屬螯合劑或酶標(biāo)記。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供用于本文所述的方法中任一種的組合物(本文所述)，無(wú)論是用作藥物和/或用于藥物的制造。提供以下實(shí)施例以說(shuō)明本發(fā)明，但非限制本發(fā)明。實(shí)施例l.抗體9TL及其變異體的結(jié)合親和性測(cè)定A.通用方法以下通用方法用于此實(shí)例中。62用于分析克隆的表達(dá)載體抗體的Fab片段的表達(dá)在類(lèi)似于Barbas(2001)尸/agecfop/a乂'a/afoorato;^yma冊(cè)a/，ColdSpringHarbor,NY,ColdSpringHarborLaboratoryPresspg2.10.VectorpComb3X)中所述啟動(dòng)子的IPTG誘導(dǎo)性lacZ啟動(dòng)子控制下，然而修飾包括添加及表達(dá)以下其它結(jié)構(gòu)域IgG2a人類(lèi)免疫球蛋白的人類(lèi)/c輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域及CHI恒定結(jié)構(gòu)域、Ig7-2鏈C區(qū)、蛋白質(zhì)檢錄號(hào)P01859;免疫球蛋白k輕鏈(智人(homosapiens))、蛋白質(zhì)檢錄號(hào)CAA09181。小規(guī)模Fab制備如下進(jìn)行96孔板中的Fab小規(guī)模表達(dá)。自以Fab文庫(kù)轉(zhuǎn)型的大腸桿菌起始，挑選菌落以接種母板(瓊脂LB+胺芐青霉素(Ampicillin)(50A(g/ml)+2y。葡萄糖)及工作板(2毫升/孔，96孔/板，含有1.5mLLB+胺芐青霉素(50Atg/ml)+2%葡萄糖)。兩板均在30。C下生長(zhǎng)8-12小時(shí)。將母板儲(chǔ)存在4。C下且使來(lái)自工作板的細(xì)胞在5000rpm下?；乙詌mLLB+胺芐青霉素(50/xg/ml)+lmMIPTG將其再懸浮以誘導(dǎo)Fab表達(dá)。在3(TC下5h的表達(dá)時(shí)間后通過(guò)離心來(lái)收集細(xì)胞，接著將細(xì)胞再懸浮于500ML緩沖液HBS-P(IOmMHEPES緩沖液(pH7.4)，150mMNaCl，0.005%P20)中。通過(guò)冷凍(-80。C)接著在37。C下融化的一個(gè)循環(huán)來(lái)達(dá)成HBS-P再懸浮細(xì)胞的溶胞。以5000rpm將細(xì)胞溶胞物離心30min以自含有Fab的上清液分離細(xì)胞碎片。接著將上清液注入BIAcore等離子體共振裝置中以獲得各Fab的親和性信息。自母板取出表達(dá)Fab的克隆以將DNA測(cè)序且用于如下所述的大規(guī)模Fab制造及詳細(xì)分析。大規(guī)模Fab制備為獲得詳細(xì)動(dòng)力學(xué)參數(shù)，表達(dá)Fab且將其自大規(guī)模培養(yǎng)物純化。以來(lái)自所選Fab表達(dá)大腸桿菌克隆的5mL過(guò)夜培養(yǎng)物接種含有200mLLB+胺節(jié)青霉素(50Mg/ml)+2。/。葡萄糖的錐形瓶。在3(TC下培育克隆直至達(dá)成1.0的OD55Qnm，且接著通過(guò)將培養(yǎng)基置換為200mlLB+胺芐青霉素(50Atg/ml)+1mMIPTG來(lái)對(duì)其加以誘導(dǎo)。在3(TC下5h的表達(dá)時(shí)間后，通過(guò)離心使細(xì)胞?；?，接著將其再懸浮于10mLPBS(pH8)中。通過(guò)冷凍/融化(分別在-8(TC及37'C下)的兩個(gè)循環(huán)獲得細(xì)胞的溶胞。將細(xì)胞溶胞物的上清液負(fù)載于以PBS(pH8)平衡的Ni-NTA超流瓊脂糖(Qiagen,Valencia.CA)管柱上，接著以5管柱體積的PBS(pH8)洗滌。以PBS(pH8)+300mM咪唑使個(gè)別Fab洗脫于不同級(jí)分中。將含有Fab的級(jí)分匯集且于PBS中滲析(dialized)，接著通過(guò)ELISA定量，隨后進(jìn)行親和性分析。全抗體制備為表達(dá)全抗體，將重鏈及輕鏈可變區(qū)克隆于哺乳動(dòng)物表達(dá)載體中，且使用脂質(zhì)轉(zhuǎn)染胺(lipofectamine)將其轉(zhuǎn)染于HEK293細(xì)胞中以瞬間表達(dá)。使用標(biāo)準(zhǔn)方法，使用蛋白質(zhì)A來(lái)純化抗體。載體pDb.9TL.hFc2a是包含9TL抗體的重鏈的表達(dá)載體，其適用于重鏈的瞬間或穩(wěn)定表達(dá)。載體pDb.9TL.hFc2a具有對(duì)應(yīng)于以下區(qū)域的核苷酸序列鼠類(lèi)細(xì)胞巨大病毒啟動(dòng)子區(qū)(核苷酸1-612);合成的內(nèi)含子(核苷酸619-1507);DHFR編碼區(qū)(核苷酸707-1267);人類(lèi)生長(zhǎng)激素信號(hào)肽(核苷酸1525-1602);9TL的重鏈可變區(qū)(核苷酸1603-1951);含有以下突變的人類(lèi)重鏈IgG2a恒定區(qū)A330P331至S330S331(參考野生型IgG2a序列的氨基酸編號(hào)；參見(jiàn)Eur.J.Immunol.(1999)29:2613-2624);SV40晚期多聚腺嘌呤信號(hào)(核苷酸2960-3203);SV40增強(qiáng)子區(qū)(核苷酸3204-3449);噬菌體fl區(qū)(核苷酸3537-4992)及/3內(nèi)酰胺酶(AmpR)編碼區(qū)(核苷酸4429-5286)。2004年7月20日將載體pDb.9TL.hFc2a保藏于A(yíng)TCC且指定為ATCC檢錄號(hào)PTA-6124。載體pEb.9TL.hK為包含9TL抗體的輕鏈的表達(dá)載體且適用于輕鏈的瞬間表達(dá)。載體pEb.9TL.hK具有對(duì)應(yīng)于以下區(qū)域的核苷酸序列鼠類(lèi)細(xì)胞巨大病毒啟動(dòng)子區(qū)(核苷酸1-612);人類(lèi)EF-1內(nèi)含子(核苷酸619-1142);人類(lèi)生長(zhǎng)激素信號(hào)肽(核苷酸1173-1150);抗體91^輕鏈可變區(qū)(核苷酸1251-1593);人類(lèi)/c鏈恒定區(qū)(核苷酸1594-1914);SV40晚期多聚腺嘌呤信號(hào)(核苷酸1932-2175);SV40增強(qiáng)子區(qū)(核苷酸2176-2421);噬菌體fl區(qū)(核苷酸2509-2964)及/3內(nèi)酰胺酶(AmpR)編碼區(qū)(核苷酸3401-4258)。2004年7月20日將載體pEb.9TL.hK保藏于A(yíng)TCC且指定為ATCC檢錄號(hào)PTA-6125。Biacore檢驗(yàn)使用BlAcore3000TM表面等離子體共振(SPR)系統(tǒng)(BIAcore,INC,PiscawayNJ)，來(lái)測(cè)定9TL單克隆抗體的親和性。測(cè)定親和性的一種方法為將9TL固定于CM5芯片上且測(cè)量A/3Mo肽對(duì)抗體的結(jié)合動(dòng)力學(xué)。根據(jù)供貨商的說(shuō)明書(shū)以N-乙基-N'-(3-二甲胺基丙萄-碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)及N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化CM5芯片。將抗體9TL或其變異體稀釋于10mM乙酸鈉(pH4.0或5.0)中且以0.005mg/mL的濃度注射于活化芯片上。使用穿過(guò)個(gè)別芯片信道的可變流動(dòng)時(shí)間，達(dá)成如下范圍的抗體密度1000-2000個(gè)反應(yīng)單位(RU)或2000-3000個(gè)反應(yīng)單位(RU)。以乙醇胺阻斷芯片。再生研究展示含有2倍體積PIERCE洗脫緩沖液及1倍體積4MNaCl的溶液有效移除所結(jié)合的A/3M。肽同時(shí)保持芯片上9TL的活性歷時(shí)200次以上的注射。將HBS-EP緩沖液(O.OlMHEPES(pH7.4)，0.15MNaCl，3mMEDTA，0.005%界面活性劑P20)用作所有BIAcore檢驗(yàn)的電泳緩沖液。將經(jīng)純化A/^4。合成肽樣品的連續(xù)稀釋物(0.1-10x估計(jì)KD)以100^L/min注射lmin且允許10min的解離時(shí)間。通過(guò)將數(shù)據(jù)擬合為l:l朗繆爾(Langmuir)結(jié)合模型(Karlsson,R.Roos,H.Fagerstam,L.Petersson，B.(1994).MethodsEnzymology6.99-110)使用BIAevaluation程序來(lái)同時(shí)獲得動(dòng)力學(xué)締合速率(k。n)及解離速率(k。ff)。平衡解離常數(shù)(KD)值系計(jì)算為k。ff/k。n?；蛘撸ㄟ^(guò)將AA-4o肽固定于SA芯片上且測(cè)量9TLFab及9TL變異體的Fab對(duì)固定Aft-4。肽的結(jié)合動(dòng)力學(xué)來(lái)測(cè)定親和性。通過(guò)表面等離子體共振(SPR)系統(tǒng)(BIAcore3000，BIAcore，Inc.，Piscaway,NJ)來(lái)測(cè)定9TLFab片段及其變異體Fab片段的親和性。根據(jù)供貨商的說(shuō)明書(shū)來(lái)使用SA芯片(鏈親和素(streptavidin))。將經(jīng)生物素標(biāo)記的A/3肽1-40稀釋于HBS-EP(IOmMHEPES(pH7.4)，150mMNaCl，3mMEDTA，0.005%P20)中，并以0.005mg/mL的濃度注射于芯片上。使用穿過(guò)個(gè)別芯片信道的可變流動(dòng)時(shí)間，達(dá)成兩個(gè)范圍的抗原密度對(duì)于詳細(xì)動(dòng)力學(xué)研究而言為10-200反應(yīng)單位(RU)，且對(duì)于濃度研究及篩選而言為500-600RU。再生研究展示IOOmM磷酸(亦可接著用含有2體積50mMNaOH及l(fā)體積70。/。乙醇的溶液)有效移除所結(jié)合的Fab同時(shí)保持芯片上A卵太的活性歷時(shí)200次以上的注射。將HBS-EP緩沖液用作所有BIAcore檢驗(yàn)的電泳緩沖液。將經(jīng)純化Fab樣品的連續(xù)稀釋物(O.l-lOx估計(jì)KD)以lOOAiL/min注射2min且允許10min的解離時(shí)間。通過(guò)ELISA和/或SDS-PAGE電泳使用已知濃度(通過(guò)氨基酸分析測(cè)定)的標(biāo)準(zhǔn)Fab來(lái)測(cè)定Fab蛋白質(zhì)的濃度。通過(guò)將數(shù)據(jù)擬合為1:1朗繆爾結(jié)合模型(Karlsson,R.Roos,H.Fagerstam,L.Petersson,B.(1994).MethodsEnzymology6.99-110)使用BIAevaluation程序來(lái)同時(shí)獲得動(dòng)力學(xué)締合速率(k。n)及解離速率(k。ff)。平衡解離常數(shù)(KD)值系計(jì)算為k。ff/k。n。B.抗體9TL及其變異體對(duì)AU勺結(jié)合親和性圖1中展示了抗體9TL的重鏈及輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列。下表2中展示了使用上述兩種Biacore方法測(cè)定的9TL抗體對(duì)A^.40的結(jié)合親和性。表2.抗體9TL及Fab片段的結(jié)合親和性<table>tableseeoriginaldocumentpage66</column></row><table>下表3中展示了9TL的變異體的氨基酸序列。表3中所示的變異體的所有氨基酸取代均系相對(duì)于9TL序列來(lái)描述。表3中亦展示9TL變異體的Fab片段的結(jié)合親和性。通過(guò)上述BIAcore分析以固定于SA芯片上的A/3M。來(lái)測(cè)定Kd及其它幼力學(xué)參數(shù)。表3.抗體9TL變異體的氨基酸序列及動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)。<table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table>1二所有CDR均為擴(kuò)展CDR，其包括Kabat及ChothiaCDR兩者。依次編號(hào)氨基酸殘基。2二以實(shí)驗(yàn)測(cè)定加下劃線(xiàn)的k。n。其它者估計(jì)為與9TL相同。3:KD值系計(jì)算為Kj^k。ff/k。n。實(shí)施例2:抗體9TL所結(jié)合的A^-4o肽上的表位的分析為測(cè)定由抗體9TL識(shí)別的A/5多肽上的表位，使用表面等離子體共振(SPR,Biacore3000)結(jié)合分析。將與生物素(GlobalPeptideServices,CO)偶合的A/^4o多肽固定于鏈親和素涂布芯片(SA芯片)上。在不存在或存在A(yíng)/5肽的不同可溶片段(IOmM，來(lái)自AmericanPeptideCompanyInc.,CA)的情況下使A/3抗體Fab片段(50nM)與固定A/3m。結(jié)合。下表4中展示了AA.4Q、A/3L42及A0M3的氨基酸序列。替換了抗體9TLFab片段與A^—4。的結(jié)合的A0肽分別為Afe.40、A&-4o、A/333-4Q及A/5n,(圖2)。因此，抗體9TL與A^,的C末端肽(33-40)結(jié)合。如圖2中所示，A&.2s、A/32s.42、A/522-35、A/3w6、Aft.43及A/Sl3s肽并不抑制抗體9TLFab片段的結(jié)合，這表明抗體9TL與A/3Mo肽的C末端結(jié)合。另外，A&8.42及A/3M3肽并不抑制抗體9TL與A^.4。的結(jié)合，盡管其可易于抑制A/5mo與対照抗體(抗體2289，在美國(guó)申請(qǐng)公開(kāi)文本第2004/0146512號(hào)及第WO04/032868號(hào)中描述此抗體)結(jié)合，該對(duì)照抗體與A/^4o的16-28結(jié)合。此類(lèi)結(jié)果展示抗體9TL與A/3Mo優(yōu)先結(jié)合，但不與A/3m2及A/5m3結(jié)合。表4./3類(lèi)淀粉肽的氨基酸序列1-40(WT)DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVV(SEQIDNO:15)1-42(WT)DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGWIA(SEQIDNO:16)1-43(WT)DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIAT(SEQIDNO:17)實(shí)例3.單克隆抗體2H6及去糖基化2H6的產(chǎn)生A.單克隆抗體2H6的產(chǎn)生及分析以約16個(gè)連續(xù)周間隔，以25-100/zg在佐齊lJ(每腳墊(footpad)50^，每小鼠總共IOOAd)中與KLH綴合的肽(A/3MQ的氨基酸28-40)使小鼠免疫，如以下文獻(xiàn)中所述GeerligsHJ等人，1989,J.Immunol.Methods124:95-102;KenneyJS等人，1989,J.Immunol.Methods121:157-166;及WicherK等人，1989，Int.Arch.AllergyAppl.Immunol.89:128-135。首先以CFA(傅氏完全佐劑(completeFreud'sadjuvant))中的50yg肽使小鼠免疫。21天之后，以IFA(傅氏不完全佐劑)中的25Mg肽使小鼠第二次免疫。第二次免疫二十三天之后，以IFA中的25pg肽進(jìn)行第三次免疫。十天之后，使用ELISA來(lái)測(cè)試抗體力價(jià)。第三次免疫34天之后，以IFA中的25yg肽進(jìn)行第四次免疫。在第四次免疫32天之后，以100/xg可溶肽進(jìn)行最終加強(qiáng)免疫。自經(jīng)免疫小鼠獲得脾細(xì)胞，用聚乙二醇1500使其以10:1的比率與NSO骨髓瘤細(xì)胞融合。析出(platedout)雜合物于DMEM中的96孔板中，該DMEM含有20M馬血清及2-草酰乙酸鹽/丙酮酸鹽/胰島素(Sigma)，且開(kāi)始進(jìn)行次黃嘌呤/胺基蝶呤/胸苷選擇。在第8天，添加含有20%馬血清的100/xlDMEM至所有孔中。通過(guò)使用抗體捕獲免疫檢驗(yàn)來(lái)篩選雜合物的上清液。以類(lèi)別特異性第二抗體執(zhí)行抗體類(lèi)別的測(cè)定。選擇一系列單克隆抗體產(chǎn)生細(xì)胞株以用于分析。一種所選細(xì)胞株產(chǎn)生如被稱(chēng)為2H6的抗體。此抗體經(jīng)測(cè)定具有IgG2b重鏈。測(cè)定抗體2H6與A^.4o的親和性。使用蛋白質(zhì)A親和性層析法自融合瘤培養(yǎng)物的上清液純化單克隆抗體2H6。使上清液平衡為pH8。接著將上清液負(fù)載于以PBS平衡至pH8的蛋白質(zhì)A管柱MabSelect(AmershamBiosciences#17-5199-02)。以5管柱體積的PBS(pH8)洗滌管柱。以50mM檸檬酸鹽-磷酸鹽緩沖液(pH3)洗脫抗體。以lM磷酸鹽緩沖液(pH8)中和經(jīng)洗脫抗體。以PBS滲析經(jīng)純化抗體。通過(guò)SDS-PAGE，使用鼠類(lèi)mAb標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)來(lái)測(cè)定抗體濃度。2H6Fab是通過(guò)使用ImmunopureFab試劑盒(pierce#44885)的2H6全抗體的木瓜酶蛋白質(zhì)分解來(lái)制備的，且通過(guò)遵照制造商的說(shuō)明書(shū)流經(jīng)蛋白質(zhì)A層析法來(lái)對(duì)其加以純化。通過(guò)SDS-PAGE及A280使用lOD^.6mg/ml來(lái)測(cè)定濃度。使用BlAcore3000TM表面等離子體共振(SPR)系統(tǒng)(BIAcore,INC，PiscawayNJ)來(lái)測(cè)定2H6單克隆抗體的親和性。測(cè)定親和性的一種方法為將2H6抗體固定于CM5芯片上且測(cè)量A/^4o肽對(duì)抗體的結(jié)合動(dòng)力學(xué)。根據(jù)供貨商的說(shuō)明書(shū)，以^乙基-1^'-(3-二甲胺基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽@0(:)及^羥基琥珀酰亞胺(NHS)來(lái)活化CM5芯片。將2H6單克隆抗體稀釋于10mM乙酸鈉(pH4.0或5.0)中且以0.005mg/mL的濃度注射于活化芯片上。使用穿過(guò)個(gè)別芯片信道的可變流動(dòng)時(shí)間，達(dá)成如下范圍的抗體密度1000-2000反應(yīng)單位(RU)或2000-3000反應(yīng)單位(RU)。以乙醇胺阻斷芯片。再生研究展示Pierce洗脫緩沖液(產(chǎn)品號(hào)21004，PierceBiotechnology,Rockford,IL)與4MNACL(2:1)的混合物有效地移除了所結(jié)合的A/3M。肽，同時(shí)保持芯片上的2H6抗體活性歷時(shí)200次以上的注射。將HBS-EP緩沖液(0.01MHEPES(pH7.4)，0.15MNaCl，3mMEDTA，0.005。/。界面活性劑P20)用作所有BIAcore檢驗(yàn)的電泳緩沖液。將經(jīng)純化A/3M。合成肽樣品的連續(xù)稀釋物(O.l-lOx估計(jì)KD)以lOOAtL/分鐘注射l分鐘且允許10分鐘的解離時(shí)間。通過(guò)將數(shù)據(jù)擬合為l:l朗繆爾結(jié)合模型(Karlsson,R.Roos,H.Fagerstam，L.Petersson,B.(1994).MethodsEnzymology6.99-110)，使用BIAevaluation程序，來(lái)同時(shí)獲得動(dòng)力學(xué)締合速率(k。n)及解離速率(k。ff)。平衡解寓常數(shù)(Kd)值系計(jì)算為k。ff/k。n。或者，親和性系通過(guò)將A/3Mo肽固定于SA芯片上且測(cè)量2H6Fab對(duì)固定.4()肽的結(jié)合動(dòng)力學(xué)來(lái)測(cè)定。通過(guò)表面等離子體共振(SPR)系統(tǒng)(BIAcore3000,BIAcore，Inc.,Piscaway,NJ)來(lái)測(cè)定2H6Fab片段的親和性。根據(jù)供貨商的說(shuō)明書(shū)來(lái)使用SA芯片(鏈親和素)。將經(jīng)生物素標(biāo)記的A瀏太1-40(SEQIDNO:15)稀釋于HBS-EP(10mMHEPES(pH7.4)，150mMNaCl，3mMEDTA，0.005%P20)中且以0.005mg/mL的濃度注射于芯片上。使用穿過(guò)個(gè)別芯片信道的可變流動(dòng)時(shí)間，達(dá)成兩個(gè)范圍的抗原密度對(duì)于詳細(xì)動(dòng)力學(xué)研究而言為10-200個(gè)反應(yīng)單位(RU)，且對(duì)于濃度研究而言為500-600RU。再生研究展示Pierce洗脫緩沖液與4MNaCl(2:l)的混合物有效移除所結(jié)合的Fab同時(shí)保持芯片上的A朋太活性歷時(shí)200次以上的注射。將HBS-EP緩沖液用作所有BIAcore檢驗(yàn)的電泳緩沖液。將經(jīng)純化Fab樣品的連續(xù)稀釋物(O.l-lOx估計(jì)KD)以lOO/xL/min注射2min，且允許IOmin的解離時(shí)間。通過(guò)ELISA禾n/或SDS-PAGE電泳，使用已知濃度(通過(guò)氨基酸分析測(cè)定)的標(biāo)準(zhǔn)Fab來(lái)測(cè)定Fab蛋白質(zhì)的濃度。通過(guò)將數(shù)據(jù)擬合為1:1朗繆爾結(jié)合模型(Karlsson,R.Roos,H.Fagerstam,L.Petersson,B.(1994).MethodsEnzymology6.99-110)，使用BIAevaluation程序，來(lái)同時(shí)獲得動(dòng)力學(xué)締合速率(k。n)及解離速率(k。ff)。平衡解離常數(shù)(KD)值系計(jì)算為k。ff/k。n。下表5中展示了使用上述兩種方法測(cè)定的2H6抗體的親和性。如上所述來(lái)測(cè)試與A/5L4。的氨基酸28-40的肽結(jié)合的鼠類(lèi)抗體2286的親和性。在美國(guó)申請(qǐng)案第10/683,815號(hào)及PCT/US03/32080中描述抗體2286。表5.抗體2H6及2286的結(jié)合親和性<table>tableseeoriginaldocumentpage73</column></row><table>為測(cè)定由抗體2H6識(shí)別的A/3多肽上的表位，使用表面等離子體共振(SPR,Biacore3000)結(jié)合分析。將與生物素(GlobalPeptideServices,CO)偶合的A/3mo多妝(SEQIDN0:15)固定于鏈親和素涂布芯片(SA芯片)上。在不存在或存在A(yíng)湖太的不同可溶片段(16pM，來(lái)自AmericanPeptideCompanyInc.,CA)的情況下使A/3抗體(100nM)與固定AA-4o結(jié)合。替換抗體2H6與AU勺結(jié)合的A卵太分別為A/3n.40、八/333-4()及八艮4()(圖3)。因此，抗體2H6與AU勺C末端肽(33-40)結(jié)合。然而，AU勺此C末端肽(33-40)在測(cè)試濃度下并不替換抗體2286與AA-4o的結(jié)合。如圖3中所示，A/^38肽并不抑制抗體2H6或抗體2286與A/3mo的結(jié)合，表明類(lèi)似于抗體2286，抗體2H6所結(jié)合的表位包括AU太的氨基酸39禾口/或40(圖3)。另外，AA-42及A^-43肽并不抑制抗體2H6與AU勺結(jié)合，盡管其可易于抑制A/3^與對(duì)照抗體(抗體2289，在美國(guó)申請(qǐng)案第10/683,815號(hào)及PCT/US03/32080中描述此抗體)結(jié)合，該對(duì)照抗體與八&—4()的16-28結(jié)合(圖3)。此類(lèi)結(jié)果展示抗體2H6與AU尤先結(jié)合，但不與A/3M2及A/3M3結(jié)合。為進(jìn)一步評(píng)定抗體2H6所結(jié)合的^-類(lèi)淀粉肽的離散氨基酸殘基的涉入，通過(guò)定點(diǎn)誘變產(chǎn)生不同的A/3M。變異體，其中最后6個(gè)氨基酸(A/3M。氨基酸殘基35-40)中的每一種個(gè)別地經(jīng)丙氨酸置換(丙氨酸掃描誘變)。將此類(lèi)A^.40變異體(表6中所示的序列)在大腸桿菌中表達(dá)為鼓胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)融合蛋白(AmershamPharmaciaBiotech,Piscataway,NJUSA)，接著在谷胱甘肽-瓊脂糖珠粒(Sigma-AldrichCorp.,St.Louis,MO，USA)上進(jìn)行親和性純化。作為對(duì)照，野生型(WT)A/5m。以及A/5^、A/5M2及Aft-39也表達(dá)為GST融合蛋白。接著將A艮40、A0M1、A/5m2,、Aft.39以及六個(gè)不同變異體(表6中所示的M35A(l-40)、V36A(l-40)、G37A(l-40)、G38A(1陽(yáng)40)、V39A(1-40)、V40A(l-40))固定(1000.025yg/ml的GST肽/孔)于ELISA檢驗(yàn)板上，且與在自0.3nM向下(使用0.3nMmAb的數(shù)據(jù)展示于圖4中)的連續(xù)稀釋物中的mAb2286、2289及2H6中的任一種一起培育。IO次連續(xù)洗滌之后，檢驗(yàn)板系依次經(jīng)每孔IOO/xl0.03/xg/ml的生物素綴合山羊抗小鼠(H+L)抗體(VectorLaboratories,載體弁BA-9200,BurllingameCA，USA)、每孔IOOyl0.025/xg/ml的HRP綴合鏈親和素(AmershamBiosciencesCorp.,#RPN4401V，NJ,USA)培育。在450nm處讀取板的吸光度。<table>tableseeoriginaldocumentpage74</column></row><table>M35A(1-40)DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLAVGGVV(SEQIDNO:20)V36A(1-40)DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMAGGVV(SEQIDNO:21)G37A(1-40)DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVAGVV(SEQIDNO:22)G38A(1-40)DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGAVV(SEQIDNO:23)V39A(1-40)DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGAV(SEQIDNO:24)V40A(1-40)DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVA(SEQIDNO:25)如圖4中所示，針對(duì)A/5的氨基酸16至28的Mab2289以相同強(qiáng)度識(shí)別所有變異體，且充當(dāng)板上蛋白質(zhì)濃度及蛋白質(zhì)完整性的內(nèi)部正對(duì)照。如圖4中所示，抗體2H6并不識(shí)別A/3M。A/3l39或A^-42。A/3Mo變異體V40A、V39A、G38A、G37A、V36A及M35A展示與抗體2h6減小的結(jié)合，證明抗體2H6表位在A(yíng)^-4o的C末端處擴(kuò)展至少6個(gè)氨基酸。V及G至A的突變?yōu)闃O保守突變且不太可能在蛋白質(zhì)中產(chǎn)生重要構(gòu)型變化，因此，此類(lèi)突變對(duì)抗體2H6結(jié)合的較大作用可歸因于抗體在A(yíng)3范圍內(nèi)區(qū)分所提及氨基酸的能力，且此類(lèi)數(shù)據(jù)證明此抗體的極高程度的特異性。為測(cè)定2H6及9TL是否為與A/3M。結(jié)合而競(jìng)爭(zhēng)，使用Biacore檢驗(yàn)來(lái)進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)。將抗體2H6、9TL及2289固定于CM5芯片的不同信道上。根據(jù)供貨商的說(shuō)明書(shū)，以N-乙基-N'-(3-二甲胺基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)及N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化CM5芯片信道。將抗體2H6、9TL及2289各稀釋于IOmM乙酸鈉(pH4.0)中且以0.005mg/mL的濃度注射于活化芯片上?？贵w密度對(duì)于2H6而言為1625個(gè)反應(yīng)單位(RU);對(duì)于9TL而言為4000RU;且對(duì)于2289而言為2200RU。以乙醇胺阻斷各信道。使A/3Mo肽(150MM)流動(dòng)于芯片上歷時(shí)2分鐘。接著使0.6/iM的抗體2H6(待針對(duì)結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)進(jìn)行測(cè)試)流動(dòng)于芯片上歷時(shí)l分鐘。將HBS-EP緩沖液(0.01MHEPES(pH7.4)，0.15MNaCl，3mMEDTA，0.005。/。界面活性劑P20)用作所有BIAcore檢驗(yàn)的電泳緩沖液。測(cè)量A&,的結(jié)合后，通過(guò)以Pierce洗脫緩沖液(產(chǎn)品號(hào)21004，PierceBiotechnology,Rockford，IL)與4MNaCl(2:l)的混合物洗滌兩次歷時(shí)6sec來(lái)再生芯片的所有信道。接著對(duì)抗體9TL且接著對(duì)抗體2289進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合。觀(guān)察到9TL與2H6的間對(duì)與Aft,結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)，但在9TL與2289的間或在2H6與2289的間未觀(guān)察到競(jìng)爭(zhēng)。對(duì)在固定抗體與流動(dòng)于芯片上的相同抗體的間競(jìng)爭(zhēng)的觀(guān)察結(jié)果充當(dāng)正對(duì)照。B.抗體2H6并不與APP結(jié)合為測(cè)定2H6是否與類(lèi)淀粉前驅(qū)蛋白質(zhì)(APP)結(jié)合，測(cè)定2H6與以野生型APP轉(zhuǎn)染的細(xì)胞的結(jié)合。以編碼野生型人類(lèi)類(lèi)淀粉前驅(qū)蛋白質(zhì)的cDNA轉(zhuǎn)染293細(xì)胞。轉(zhuǎn)染四十八小時(shí)之后，在冰上以單克隆抗體抗A/3w6、抗八/316.28或2H6(5yg/ml，在具有10%FCS的DMEM中)將細(xì)胞培育45分鐘。接著在PBS中將細(xì)胞洗滌三次歷時(shí)5分鐘，以4。/。PFA固定。在PBS中將細(xì)胞再洗滌三次，且在螢光顯微鏡下以來(lái)自JacksonImmunoresearch的二次Cy3綴合山羊抗小鼠抗體(1:500的稀釋物)檢測(cè)抗體結(jié)合。識(shí)別A/3中N末端或中心表位的抗A3w6及抗A&6.28抗體兩者均展示與表達(dá)于細(xì)胞上的APP前驅(qū)蛋白質(zhì)的顯著結(jié)合。相反，2H6并不與APP表達(dá)細(xì)胞妙a5口口oC.去糖基化抗體2H6的產(chǎn)生為產(chǎn)生去糖基化抗體2H6，在37X:下以在20mMTris-HCl(pH8.0)中的肽-N-糖苷酶F(Prozyme，0.05U/mg抗體)將經(jīng)純化抗體2H6培育7天。通過(guò)MALDI-TOF-MS及蛋白質(zhì)凝膠電泳來(lái)檢驗(yàn)去糖基化的完整性。通過(guò)蛋白質(zhì)A層析法純化去糖基化抗體且通過(guò)Q-瓊脂糖移除內(nèi)毒素。使用上述Biacore檢驗(yàn)來(lái)測(cè)試去糖基化2H6對(duì)A^-4。的結(jié)合親和性，且發(fā)現(xiàn)去糖基化2H6對(duì)A/5M。的結(jié)合親和性與完整抗體2H6—致。實(shí)施例4:去糖基化抗體2H6(2H6-D)在年齡相關(guān)黃斑退化的動(dòng)物模型中保護(hù)及恢復(fù)視網(wǎng)膜功能中的作用初始研究(Malek,G.等人，PNAS102:11900-5(2005))證明以下三個(gè)風(fēng)險(xiǎn)因素的組合產(chǎn)生極近似人類(lèi)AMD的臨床特征的動(dòng)物模型(l)脂蛋白元同功異型物E4(APOE4)基因型、(2)老年(65周齡以上)及(3)高脂肪及膽固醇富含(HF-C)膳食。年老APOE4小鼠發(fā)展類(lèi)似于在干型及濕型人類(lèi)AMD中所觀(guān)察的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)的病變，包括視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)色素改變、厚擴(kuò)散RPE下沉積、脂質(zhì)富含脈絡(luò)膜小疣狀沉積、布魯赫膜增厚、上覆感光體退化的RPE萎縮的斑點(diǎn)區(qū)域及脈絡(luò)膜新血管生成(CNV)。與膳食方案無(wú)關(guān)，在對(duì)照人類(lèi)^PO五3表達(dá)小鼠中的任一種中均未檢測(cè)到此類(lèi)改變，亦未在年輕^PC^4動(dòng)物中檢測(cè)到任何病理學(xué)。自全視野暗視視網(wǎng)膜電圖(fullfieldscotopicelectroretinogram)鑒定功能性不足。與對(duì)照相比，受影響的動(dòng)物在a波振幅及b波振幅中具有顯著減小。重要的是此類(lèi)組織病理學(xué)及功能性改變需要存在所有三個(gè)風(fēng)險(xiǎn)因素。自發(fā)出現(xiàn)CNV的此動(dòng)物模型首先并有人類(lèi)疾病的生理上相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素。A.實(shí)驗(yàn)方案抗體的施用。將表達(dá)人類(lèi)ApoE4的年老(65周齡以上)靶標(biāo)置換小鼠用于實(shí)驗(yàn)。先前已公開(kāi)(Malek,G.等人，PNAS102:11900-5(2005))存在于此類(lèi)小鼠中的AMD狀表型。對(duì)于八周治療研究而言，將65周齡或65周齡以上的ApoE4轉(zhuǎn)殖基因小鼠分配至四組中的一種。連續(xù)保持第一組(E4-ND)處于正常膳食("=2)。對(duì)第二組(E4-HFC-R1)喂食高脂肪、膽固醇富集(HF-C)膳食歷時(shí)8周(w=2)。對(duì)第三組(E4-HFC-R1)喂食HF-C膳食歷時(shí)8周且使其每周接受Rinat1(3mg/kg)的腹膜內(nèi)注射(肝5)。對(duì)第四組(E4-HFC-R2)喂食HF-C膳食歷時(shí)8周且使其每周接受Rinat2(3mg/kg)的腹膜內(nèi)注射(w二5)。研究完成之后，為各組去遮蔽(unmasked):Rinatl為PBS介載體且Rinat2為去糖基化抗A/3抗體2H6(如實(shí)例3中所述的小鼠單克隆抗人類(lèi)A&8-40IgG2b'2H6-D')。體內(nèi)評(píng)定。在第0周進(jìn)行眼底檢査，而在第8周進(jìn)行眼底及螢光素血管造影術(shù)。使用眼底相機(jī)(TRC-50EX視網(wǎng)膜相機(jī))來(lái)拍攝照片。使用TOPCONIMAGEnetTM系統(tǒng)來(lái)捕獲影像。經(jīng)由血管出入孔(vascularaccessport)注射螢光素染料(10%螢光素鈉，約O.lmL/kg)。染料注射之后，在若干時(shí)點(diǎn)拍攝照片以包括動(dòng)脈相、早期動(dòng)靜脈相及若干晚期動(dòng)靜脈相，以便評(píng)估新血管生成且監(jiān)測(cè)與CNV病變相關(guān)的螢光素滲漏。由眼科醫(yī)師獨(dú)立地進(jìn)行螢光素血管造影術(shù)的解譯及分析。在施用8周HF-C膳食前后，自小鼠(禁食5小時(shí))收集全血中的總血漿膽固醇含量。螢光血管攝影術(shù)(FA)。一動(dòng)物(E4-HFC-R2)在血管造影術(shù)的晚期框架中展示可能的滲漏。在FA之后但在視網(wǎng)膜電圖之前動(dòng)物死亡且無(wú)組織可恢復(fù)。視網(wǎng)膜電圖記錄。在第九周期間，由暗適應(yīng)至少12小時(shí)的動(dòng)物獲得視網(wǎng)膜電圖(ERG)記錄。用氯胺酮/甲苯噻嗪混合物麻醉各動(dòng)物，其瞳孔放大且在動(dòng)物穩(wěn)定于37'C溫暖墊上之后，使用置于與眼睛接觸的銀線(xiàn)測(cè)試電極連同一滴2.5%羥丙基甲基纖維素來(lái)記錄ERG示蹤。將小鼠置于適光刺激室中，在該室中將動(dòng)物曝露于光閃(flashesoflight)(最大強(qiáng)度1000cd-s/m2，自0.0005起始，以l個(gè)對(duì)數(shù)步長(zhǎng)衰減)。自基線(xiàn)至a波波谷測(cè)量a波振幅，且自a波波谷至b波波峰測(cè)量b波振幅。組織分析。在殺死之日，將小鼠稱(chēng)重，以Avertin過(guò)度給藥(0.2/x1/10gm體重)，且接著以20mL鹽水心內(nèi)灌注。迅速移除腦部，且在新鮮制備的用于組織病理學(xué)的10。/。福爾馬林(formalin)中將腦的左半邊浸漬固定16h。以10%MeOH、1xPBS及2%H202預(yù)處理三十微米振動(dòng)切片機(jī)切片(vibratomesection),將其以PBS洗滌，在88%甲酸中培育1分鐘以用于抗原恢復(fù)且以5。/o正常山羊血清(NGS)及PBS將其阻斷。以1%NGS/PBS中的經(jīng)生物素標(biāo)記的4G8—抗(針對(duì)/3-類(lèi)淀粉的氨基酸殘基17-24的Signet4G8單克隆小鼠人類(lèi)lgG2b)的l:1000稀釋物培育切片過(guò)夜，且如制造商所述使用ABCVectastain試劑盒(VectorLabs)進(jìn)行目測(cè)。B.結(jié)果通過(guò)施用去糖基化抗體來(lái)恢復(fù)/保護(hù)視網(wǎng)膜功能。如圖5中所示，相對(duì)于處于正常膳食的小鼠(E4-ND)，在喂食高脂肪及膽固醇富含膳食的ApoE4小鼠(E4-HFC)中，存在統(tǒng)計(jì)上顯著的a波振幅及b波振幅的減小(a波p^.0106，b波p-0.008)。將由經(jīng)注射動(dòng)物獲得的ERG與ERG的基線(xiàn)組(baselineset)進(jìn)行相比。與E4-HFC(未圖標(biāo))相比，在任一經(jīng)注射組(E4-HFC-R1及E4-HFC-R2)的a波振幅中不存在顯著差異。相反地，在E4-HFC-R2組中，b波振幅展示視網(wǎng)膜功能的驚人恢復(fù)禾n/或保護(hù)(圖6)。在必f//F-C蘼會(huì)游經(jīng)茫射拔J/5貧沐2^-D游JP(9"V、Jf屮鄧沉祝游減夕。如圖7中所說(shuō)明，8周用抗體2H6-D的免疫療法后，與對(duì)照介載體組相比，E4-HFC小鼠中的總A/3免疫染色減小。C.結(jié)論以上數(shù)據(jù)證明1)視網(wǎng)膜功能的恢復(fù)/保護(hù)，如由經(jīng)注射抗八樹(shù)亢體2116-D的小鼠的ERG證明，及2)與未經(jīng)治療的AMD小鼠組相比，當(dāng)以抗體2H6-D在小鼠腦中治療時(shí)，類(lèi)淀粉沉積減少。實(shí)施例5.抗體6G及其變異體的結(jié)合親和性測(cè)定A.通用方法將以下通用方法用于此實(shí)例及其它實(shí)例中。用于克隆分析的表達(dá)載體抗體的Fab片段表達(dá)處于類(lèi)似于Barbas(2001)P/^getfo//a乂'a/aZorato^y應(yīng)艦a/,ColdSpringHarbor,NY,ColdSpringHarborLaboratoryPresspg2.10.VectorpComb3X)中所述啟動(dòng)子的IPTG誘導(dǎo)性lacZ啟動(dòng)子控制下，然而修飾包括添加及表達(dá)以下額外域IgG2a人類(lèi)免疫球蛋白的人類(lèi)/c輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域及CHI恒定結(jié)構(gòu)域、Ig-2鏈C區(qū)、蛋白質(zhì)檢錄號(hào)P01859;免疫球蛋白/c輕鏈(智人)、蛋白質(zhì)檢錄號(hào)CAA09181。小規(guī)模Fab制備如下進(jìn)行96孔板中的Fab小規(guī)模表達(dá)。自以Fab庫(kù)轉(zhuǎn)型的大腸桿菌起始，挑選菌落以接種母板(瓊脂LB+胺芐青霉素(50Mg/ml)+2。/。葡萄糖)及工作板(2毫升/孔，96孔/板，含有L5mLLB+胺芐青霉素(50Atg/ml)+2。/。葡萄糖)。兩板均在3(TC下生長(zhǎng)8-12小時(shí)。將母板儲(chǔ)存在4。C下，使來(lái)自工作板的細(xì)胞在5000rpm下?；乙詌mLLB+胺芐青霉素(50/ig/ml)+lmMIPTG將其再懸浮以誘導(dǎo)Fab表達(dá)。在3(TC下5h的表達(dá)時(shí)間后通過(guò)離心來(lái)收集細(xì)胞，接著將細(xì)胞再懸浮于500yL緩沖液HBS-P(lOmMHEPES緩沖液(pH7.4)，150mMNaCl，0.005%P20)中。通過(guò)冷凍(-80。C)接著在37。C下融化的一個(gè)循環(huán)來(lái)達(dá)成HBS-EP再懸浮細(xì)胞的溶胞。以5000rpm將細(xì)胞溶胞物離心30min以自含有Fab的上清液分離細(xì)胞碎片。接著將上清液注入BIAcore等離子體共振裝置中以獲得各Fab的親和性信息。自母板取出表達(dá)Fab的克隆以將DNA測(cè)序且用于如下所述的大規(guī)模Fab制造及詳細(xì)分析。大規(guī)模Fab制備為獲得詳細(xì)動(dòng)力學(xué)參數(shù)，表達(dá)Fab且將其自大規(guī)模培養(yǎng)物純化。以來(lái)自所選Fab表達(dá)大腸桿菌克隆的5mL過(guò)夜培養(yǎng)物接種含有200mLLB+胺節(jié)青霉素(50Atg/ml)+2M葡萄糖的錐形瓶。在3(TC下培育克隆直至達(dá)成1.0的OD55。nm，且接著通過(guò)將培養(yǎng)基置換為200mlLB+胺芐青霉素(50yg/ml)+lmMIPTG來(lái)將其誘導(dǎo)。在3(TC下5h的表達(dá)時(shí)間后，通過(guò)離心使細(xì)胞?；又鴮⑵湓賾腋∮贗OmLPBS(pH8)中。通過(guò)冷凍/融化(分別在-8(TC及37。C下)的兩個(gè)循環(huán)獲得細(xì)胞的溶胞。將細(xì)胞溶胞物的上清液負(fù)載于以PBS(pH8)平衡的Ni-NTA超流瓊脂糖(Qiagen,Valencia.CA)管柱上，接著以5管柱體積的PBS(pH8)洗滌。以PBS(pH8)+300mM咪唑來(lái)洗脫處于不同級(jí)份中的各Fab。將含有Fab的級(jí)分匯集且于PBS中滲析，接著通過(guò)ELISA定量，隨后進(jìn)行親和性分析。全抗體制備為表達(dá)全抗體，將重鏈及輕鏈可變區(qū)克隆于哺乳動(dòng)物表達(dá)載體中且使用脂質(zhì)轉(zhuǎn)染胺將其轉(zhuǎn)染于HEK293細(xì)胞中以瞬間表達(dá)。使用標(biāo)準(zhǔn)方法，使用蛋白質(zhì)A來(lái)純化抗體。載體pDb.6G.hFc2a為包含6G抗體的重鏈的表達(dá)載體且適用于重鏈的瞬間或穩(wěn)定表達(dá)。載體pDb.6G.hFc2a具有對(duì)應(yīng)于以下區(qū)域的核苷酸序列鼠類(lèi)細(xì)胞巨大病毒啟動(dòng)子區(qū)(核苷酸1-612);合成內(nèi)含子(核苷酸619-1507);DHFR編碼區(qū)(核苷酸707-1267);人類(lèi)生長(zhǎng)激素信號(hào)肽(核苷酸1525-1602);6G的重鏈可變區(qū)；含有以下突變的人類(lèi)重鏈IgG2a恒定區(qū)A330P331至S330S331(參考野生型IgG2a序列的氨基酸編號(hào)；參見(jiàn)Eur.J.Immunol.(1999)29:2613-2624);SV40晚期多聚腺嘌呤信號(hào);SV40增強(qiáng)子區(qū);噬菌體fl區(qū)及/3內(nèi)酰胺酶(AmpR)編碼區(qū)。載體pEb.6G.hK為包含6G抗體的輕鏈的表達(dá)載體且適用于輕鏈的瞬間表達(dá)。載體pEb.6G.hK具有對(duì)應(yīng)于以下區(qū)域的核苷酸序列鼠類(lèi)細(xì)胞巨大病毒啟動(dòng)子區(qū)(核苷酸1-612);人類(lèi)EF-1內(nèi)含子(核苷酸619-1142);人類(lèi)生長(zhǎng)激素信號(hào)肽(核苷酸l173-1150);抗體6G輕鏈可變區(qū)；人類(lèi)/C鏈恒定區(qū)；SV40晚期多聚腺嘌呤信號(hào)；SV40增強(qiáng)子區(qū)；噬菌體fl區(qū)及/3內(nèi)酰胺酶(AmpR)編碼區(qū)。Biacore檢驗(yàn)使用BlAcore3000TM表面等離子體共振(SPR)系統(tǒng)(BIAcore,INC,PiscawayNJ)使用上文實(shí)例l中所述的方法來(lái)測(cè)定6G單克隆抗體的親和性。ELISA檢驗(yàn)將ELISA用于測(cè)量抗體6G及變異體與非經(jīng)生物素標(biāo)記的A湖太的結(jié)合。在4"下以在PBS(pH7.4)中的2.5^g/mlA湖太涂布NUNCmaxisorp板歷時(shí)多于1小時(shí)。以PBS緩沖液(pH7.4)中的1%BSA來(lái)阻斷板。在室溫下使一抗(來(lái)自細(xì)胞上清液、含抗A/3抗體的血清或處于所需稀釋度的經(jīng)純化全抗體或Fab)與固定A湖太培育lh。洗滌之后，用二抗(以1:5000稀釋的HRP綴合山羊抗人類(lèi)/c鏈抗體(MPBiomedicals,55233))培育板。洗滌之后，通過(guò)添加TMB受體(KPL，50-76-02,50-65-02)來(lái)測(cè)量所結(jié)合的二抗。通過(guò)添加lM磷酸來(lái)終止HRP反應(yīng)且測(cè)量在450nm處的吸光度。將ELISA用于測(cè)量抗體6G及變異體與經(jīng)生物素標(biāo)記的A瀏太的結(jié)合。在4"C下以在PBS(pH7.4)中的6)Wg/ml鏈親和素(Pierce,21122)涂布NUNCmaxisorp板歷時(shí)多于l小時(shí)。以PBS緩沖液(pH7.4)中的1%BSA來(lái)阻斷板。洗滌之后，在室溫下將PBS(pH7.4)中的經(jīng)生物素標(biāo)記的A湖太培育1小時(shí)。在室溫下使一抗(來(lái)自細(xì)胞上清液、含抗A針亢體的血清或處于所需稀釋度的經(jīng)純化全抗體或Fab)與固定A湖太培育lh。洗滌之后，用二抗(以1:5000稀釋的HRP綴合山羊抗人類(lèi)/c鏈抗體(MPBiomedicals,55233))培育板。洗滌之后，通過(guò)添加TMB受體(KPL,50-76-02,50-65-02)來(lái)測(cè)量所結(jié)合的二抗。通過(guò)添加lM磷酸來(lái)終止HRP反應(yīng)且測(cè)量在450nm處的吸光度。B.抗體6G及變異體對(duì)A/3Mo、A^42及其它A湖太的結(jié)合親和性圖8中展示抗體6G的重鏈及輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列。下表7中展示使用上述Biacore測(cè)定的6G抗體對(duì)A/3M。、A/3M2及Afe.37的結(jié)合親和性。表7.抗體6GFab片段的結(jié)合親和性<table>tableseeoriginaldocumentpage82</column></row><table>固定于鏈親和素芯片上的經(jīng)生3.6xl053.9x10-311物素標(biāo)記的A/322-37，6GFab流動(dòng)于其上下表8中展示了6G的變異體的氨基酸序列。表8中所示的變異體的所有氨基酸取代均是相對(duì)于6G的序列來(lái)描述的。6G變異體的相對(duì)結(jié)合也展示于表8中。通過(guò)上述ELISA以固定于ELISA板表面上的非經(jīng)生物素標(biāo)記的A^.4?；駻/3M2來(lái)測(cè)定結(jié)合。表8.抗體6G變異體的氨基酸序列及結(jié)合數(shù)據(jù)。通過(guò)ELISA而得的6G重鏈突變變異體結(jié)合數(shù)據(jù)A450ELISA克隆編號(hào)突變A/3M26GF99D100N101Y102D103R1042.550.951AY1.600.261BM0.370.221G0.510.212GP0.300.503EC0.260.404GS1.410.305DN1.520.396AT0.860.317BS0.440.277DC0.230.318HH0.210.199ER0.220.2610AF1.850.3410EL0.410.2410GI0.630.22<table>tableseeoriginaldocumentpage84</column></row><table>實(shí)施例6:抗體6G所結(jié)合的AI3肽上的表位的分析為測(cè)定由抗體6G識(shí)別的A湖太上的表位，使用ELISA結(jié)合分析。將各種A卵太(GlobalPeptideServices,CO)固定于ELISA板上。通過(guò)如上所述的ELISA來(lái)測(cè)定6G全抗體(20nM)與固定A如勺結(jié)合。下表9中展示APm。、A(3,.42及APi-43的氨基酸序列。如圖9中所示，抗體6G與A湖太17-40、17-42、22-35、28-40、1-38、1-40、1-42、l-43及28-42結(jié)合;但與28-42的結(jié)合較比與其它A湖太的結(jié)合弱得多?？贵w6G并不與A湖太1-16、l-28及33-40結(jié)合。因此，抗體6G與例如22-35、1-38、1-40、l-42及l(fā)-43的各種截短A瀏太的C末立而結(jié)合。下表9展示了如使用Biacore檢驗(yàn)通過(guò)k。ff(l/s)測(cè)量的6G對(duì)A/3Mo與對(duì)其他A朋太的結(jié)合親和性比較。抗體6G以與其它肽相比最高的親和性與A/5^結(jié)合，其中對(duì)截短A/^-4o(例如l-36、1-37、1-38及1-39)、A&.42及A/SM3具有顯著較低親和性。此表明A/3的氨基酸40(纈氨酸)的側(cè)鏈或主鏈系與6G與A^40的結(jié)合有關(guān)；且當(dāng)不存在此氨基酸時(shí)結(jié)合顯著減小(例如約10至約50-250倍的親和性損失)。以較低親和性與羧基末端酰胺化A/3Mo的結(jié)合表明6G與A/5MQ的結(jié)合涉及(但不取決于)A/3M。的游離C末端。與A/3m2及A/5m3的狡低親和性結(jié)合可歸因于在A(yíng)/3MQ與A^-42或A/3M3的單體形式間的構(gòu)型差異。已展示A^.42的單體具有不同于溶液中A/3L4(3單體的構(gòu)型。參見(jiàn)蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)(ProteinDataBank)(pdb檔案)中所示具有檢錄號(hào)lIYT的AU勺單體結(jié)構(gòu)同等物；及蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)(pdb檔案)中所示具有檢錄號(hào)lBA6及l(fā)BA4的AU勺單體結(jié)構(gòu)同等物。表9<table>tableseeoriginaldocumentpage85</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage86</column></row><table>作為分析物，肽流動(dòng)于具有通過(guò)胺化學(xué)固定的6G單克隆抗體(配位體)的CM5芯片上弁羧基端酰胺化的肽通過(guò)ELISA檢驗(yàn)進(jìn)行抗體6G的表位定位。將各種A湖太(此類(lèi)肽具有添加至C末端的甘氨酸)的經(jīng)生物素標(biāo)記的15聚體(15-mer)或10聚體(10-mer)固定于鏈親和素涂布板上。以固定肽培育抗體6G(2.5/xg/ml至10^g/ml)且如上所述測(cè)量結(jié)合。如圖10中所示，抗體6G與具有氨基酸20-34、21-35、22-36、23-37、24-38、25-39及25-34的A湖太(在C末端具有甘氨酸)結(jié)合；但并不與具有氨基酸19-33、26-40、27-41、24-33及26-35的A郞太(在此類(lèi)肽的C末端具有甘氨酸)結(jié)合。此表明抗體6G所結(jié)合的表位包括氨基酸25至34。基于上文所示數(shù)據(jù)，抗體所6G結(jié)合的表位似乎包括氨基酸25-34及40。圖11為展示抗體6G的表位的示意圖。B.抗體6G并不與APP結(jié)合為測(cè)定6G是否與類(lèi)淀粉前驅(qū)蛋白質(zhì)(APP)結(jié)合，測(cè)定6G與以野生型APP轉(zhuǎn)染的細(xì)胞的結(jié)合。以編碼野生型人類(lèi)類(lèi)淀粉前驅(qū)蛋白質(zhì)的cDNA轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞。轉(zhuǎn)染四十八小時(shí)之后，在冰上以單克隆抗體抗A/3w6、(m2324)或6G(5/ig/ml，在具有10%FCS的DMEM中)將細(xì)胞培育45分鐘。接著在PBS中將細(xì)胞洗滌三次歷時(shí)5分鐘，以4%PFA固定。在PBS中將細(xì)胞再洗滌三次，且在螢光顯微鏡下以來(lái)自JacksonImmunoresearch的Cy3綴合山羊抗小鼠二抗(l:500的稀釋物)檢測(cè)抗體結(jié)合。如圖12中所示，識(shí)別A/5中N末端表位的抗AA^抗體展示與表達(dá)于細(xì)胞上的APP前驅(qū)蛋白質(zhì)的顯著結(jié)合。相反，6G并不與APP表達(dá)細(xì)胞結(jié)合。實(shí)施例7:鼠類(lèi)抗體7G10(抗A^-42/A/3M3)的制造及分析。以100/ig在佐劑中與KLH綴合的肽使小鼠免疫，如Konig，G.等人，AnnalsNewYorkAcademyofSciences.777:344-55(1996)中所述。因?yàn)锽A4肽的位置29-42完全處于A(yíng)PP推定跨膜區(qū)域內(nèi)且本質(zhì)上為疏水性的，所以KLH肽與親水性間隔基綴合。KLH-HDGDGD-MVGGVVIA系在A(yíng)naspec下合成，且5個(gè)殘基間隔基足以克服不溶性問(wèn)題且將C末端擴(kuò)展遠(yuǎn)離載劑。在第一天，以具有CFA(傅氏完全佐劑)的100yg35-42/KLH肽以皮下方式使小鼠免疫。在第15天，以100/xg肽/KLHRibi/礬使小鼠免疫。在第55天，如第15天般使小鼠免疫。在第95天，以100^g肽/KLH以靜脈內(nèi)方式對(duì)小鼠進(jìn)行加強(qiáng)免疫。自經(jīng)免疫小鼠獲得脾細(xì)胞，且在第99天用聚乙二醇1500融合使其以10:l的比率與P3x63Ag8.653骨髓瘤細(xì)胞(ATCCCRL1580)融合。將融合細(xì)胞接種于(platedinto)DMEM中的96孔板中，該DMEM含有20。/。馬血清及2-草酰乙酸鹽/丙酮酸鹽/胰島素(Sigma)，且上清液在融合之后第10天使用Elisa檢驗(yàn)開(kāi)始檢驗(yàn)，且以2/xg/mlA^—42(Anaspec)涂布。選擇及擴(kuò)增陽(yáng)性物及進(jìn)一步對(duì)其加以分析。當(dāng)測(cè)試A/3M2游離肽時(shí)，融合的日的小鼠血清力價(jià)為1/9000。由Biacore分析7G10與Api-40、l-42及l(fā)-43的親和性結(jié)合。Biacore檢驗(yàn)如實(shí)例l中先前所述使用BIAcore3000⑧來(lái)測(cè)定7G10抗體的親和性。將N-生物素標(biāo)記的A/51-40、l-42及l(fā)-43捕獲于SA芯片上。以上列7G10備料的1/6稀釋物起始，分別注射抗A/31-40Fab、抗A/31-42Fab及抗A/31-43Fab的三倍稀釋物系列。以6%EtOH+6mMNaOH的18sec脈沖使芯片再生。樣品IgG(mg/mL)體積(mL)Fab(mg/mL)體積(mL)KD(nM)Aft-40肽0.6722.41.4580.4不適用A"肽0.6722.41.4580.437.6AU太0.6722.41.4580.441如上所指出，7010對(duì)八&.42肽具有37.6nM的KD且對(duì)A/3m3肽具有41nM的Kd。對(duì)A/3M。肽未檢測(cè)到可測(cè)量的結(jié)合。實(shí)施例10:抗體9TL、6G及7G10在年齡相關(guān)黃斑退化動(dòng)物模型中保護(hù)及恢復(fù)視網(wǎng)膜功能中的比較作用A.實(shí)驗(yàn)方案抗體的施用。重復(fù)如上文實(shí)例4中所述的方案。將65周齡或65周齡以上的ApoE4轉(zhuǎn)殖基因小鼠分配至5組中的一種歷時(shí)八周。連續(xù)保持第一組(E4-ND)處于正常膳食("=6)。對(duì)第二組(E4-HFC-R1)喂食高脂肪、膽固醇富集(HF-C)膳食歷時(shí)8周(《=12)。對(duì)第三組(E4-HFC-R1)喂食HF-C膳食歷時(shí)8周且使其每周接受Rinat3(3mg/kg)的腹膜內(nèi)注射(肝12)。對(duì)第四組(E4-HFC-R2)喂食HF-C膳食歷時(shí)8周且使其每周接受Rinat4(3mg/kg)的腹膜內(nèi)注射(/^12)。對(duì)第五組(E4-HFC-R)喂食HF-C膳食歷時(shí)8周且使其每周接受Rinat5(3mg/kg)的腹膜內(nèi)注射("=12)。研究完成之后，為各組去遮蔽Rinat3為7G10;Rinat4為去糖基化抗Ai8抗體2H6;且Rinat5為6G。如上文實(shí)例4中先前所述來(lái)進(jìn)行眼底檢查及螢光素血管造影術(shù)。第八周之后，如上文實(shí)例4中先前所述來(lái)獲得ERG記錄。結(jié)果通過(guò)施用去糖基化抗體來(lái)恢復(fù)/保護(hù)視網(wǎng)膜功能。如圖13中所示，b波振幅證實(shí)在以2H6(E4-HFC抗A/3Mo)治療的組中顯著恢復(fù)和/或保護(hù)視網(wǎng)膜功能。b波振幅表明以7G10(E4-HFC抗A&42/A艮43)治療的組幾乎無(wú)恢復(fù)。令人驚訝地，b波振幅表明在6G(E4-HFC抗A/3M。/A/3,.42)治療的組中甚至更大地恢復(fù)和/或保護(hù)視網(wǎng)膜功能。如圖14中所示，以6G治療的組的b波振幅可與正常小鼠的對(duì)照組相當(dāng)，表明視網(wǎng)膜功能的完全恢復(fù)和/或保護(hù)。結(jié)論以上數(shù)據(jù)證明l)RPE下類(lèi)淀粉(sub-RPEamyloid)在A(yíng)MD中為病原性和/或毒性的；2)顯著恢復(fù)/保護(hù)視網(wǎng)膜功能，如由經(jīng)抗A針亢體2H6-D注射的小鼠的ERG證明；及3)完全恢復(fù)/保護(hù)視網(wǎng)膜功能，如由經(jīng)雙特異性抗A/5mq/A/5m26G注射的小鼠的ERG證明。應(yīng)了解本文所述的實(shí)施例及實(shí)施方式系僅出于說(shuō)明性目的，在本文教導(dǎo)下，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠提出各種修改或改變，它們將被包括于本申請(qǐng)的宗旨及范圍內(nèi)。本文中所引用的所有公開(kāi)文本、專(zhuān)利及專(zhuān)利申請(qǐng)都出于所有目的而以通過(guò)引用全部并入本文中，引用的程度就如同已特定地及個(gè)別地表明將各個(gè)別公開(kāi)文本、專(zhuān)利或?qū)＠暾?qǐng)以引用的方式并入一樣。生物材料的保藏已由AmericanTypeCultureCollection,10801UniversityBoulevard,Manassas,Virginia20110-2209,USA(ATCC)保藏以下物質(zhì)。材料pDb.9TL.hFc2apEb.9TL.hKpDb.6G.hFc2apEb.6G.hK抗體號(hào)9TL重鏈9TL輕鏈6G重鏈6G輕鏈ATCC檢錄號(hào)PTA-6124PTA-6125PTA-6786PTA-6787保藏曰期2004年7月20日2004年7月20曰2005年6月15日2005年6月15日載體pEb.9TL.hK為編碼9TL輕鏈可變區(qū)及輕鏈/c恒定區(qū)的多核苷酸；且載體pDb.9TL.hFc2a為編碼9TL重鏈可變區(qū)及重鏈IgG2a恒定區(qū)的多核苷酸，該重鏈IgG2a恒定區(qū)含有以下突變A330P331至S330S331(參考野生型IgG2a序列的氨基酸編號(hào)；參見(jiàn)五wr.//mmwwo/.(1999)29:2613-2624)。載體pEb.6G.hK為編碼6G輕鏈可變區(qū)及輕鏈/c恒定區(qū)的多核苷酸；且載體pDb.6G.hFc2a為編碼6G重鏈可變區(qū)及重鏈IgG2a恒定區(qū)的多核苷酸，該重鏈IgG2a恒定區(qū)含有以下突變A330P331至S330S331(參考野生型IgG2a序列的氨基酸編號(hào)；參見(jiàn)五,J./mmw"o/.(1999)29:2613-262勺。在國(guó)際承認(rèn)用于專(zhuān)利程序的微生物保藏布達(dá)佩斯條約(BudapestTreatyontheInternationalRecognitionoftheDepositofMicroorganismsforthePurposeofPatentProcedure)及其(布達(dá)佩斯條約)條例的條款下執(zhí)行此類(lèi)保藏。此舉確保自保藏的日起保持保藏物的可存活行培養(yǎng)物歷時(shí)30年。該保藏物將通過(guò)ATCC在布達(dá)佩斯條約款項(xiàng)下而可獲得，且服從在RinatNeuroscienceCorp.與ATCC之間的協(xié)議，其確保一旦相關(guān)美國(guó)專(zhuān)利公布或一旦使任何美國(guó)或國(guó)外專(zhuān)利申請(qǐng)案(無(wú)論何者首先出現(xiàn))變得公諸于眾，公眾即可獲得保藏物的培養(yǎng)物的子代永久及無(wú)限制利用性，且確保對(duì)根據(jù)35USCSection122及依照其的委員細(xì)則(包括37CFRSection1.14，其特定參考886OG638)，由美國(guó)專(zhuān)利與商標(biāo)委員對(duì)其授權(quán)所確定者可獲得子代的利用性。本申請(qǐng)案的受讓人已同意若保藏中材料的培養(yǎng)物在合適條件下培養(yǎng)時(shí)死亡或損失或破壞，則將通知立即以另一相同物替換此類(lèi)材料。不應(yīng)將保藏材料的利用性理解為在違背任何政府當(dāng)局根據(jù)其專(zhuān)利法授予的權(quán)利的情況下實(shí)踐本發(fā)明的許可?？贵w序列9TL重鏈可變區(qū)氨基酸序列(SEOIDNO:l)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYYTEAYYIH雨RQAPGQGLE■GRIDPATGNTKYAPRLQDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCASLYSLPVYWGQGTTVTVSS9TL輕鏈可變區(qū)氨基酸序列(SEOIDNO:2)DWMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLYSDAKTYL隨FQQRPGQSPRRLIYQISRLDPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCLQGTHYPVLFGQGTRLEIKRT909TLCDRHl(擴(kuò)展CDR)(SEOIDNO:3)GYYTEAYYIH9TLCDRH2(擴(kuò)展CDR)(SEQIDNO:4)RIDPATGNTKYAPRLQD9TLCDRH3(擴(kuò)展CDR)(SEOIDNO:5)LYSLPVY9TLCDRLl(擴(kuò)展CDR)(SEOIDNO:6)KSSQSLL丫SDAKTYLN9TLCDRL2(擴(kuò)展CDR)(SEOIDNO:7)QISRLDP9TLCDRL3付廣展CDR)(SEOIDNO:8)LQGTHYPVL9TL重鏈可變區(qū)核苷酸序列(SEOIDNO:9)ACCGTGTCCTCT9TL輕鏈可變區(qū)核苷酸序列(SEOIDNO:10)GATGTTGTGATGACCCAGTCCCCACTGTCTTTGCCAGTTACCCTGGGACAACCAGAAACGCACT919TL重鏈全抗體氨基酸序列(包括如本文所述的經(jīng)修飾IgG2a)(SEOIDNO:ll)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYYTEAYYIH雨RQAPGQGLEWMGRIDPATGSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVS翻SGALTSGVHTFPAVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRWSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK9TL輕鏈全抗體氨基酸序列(SEOIDNO:12)DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLYSDAKTYLNWFQQRPGQSPRRLIYQISRLDPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCLQGTHYPVLFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC9TL重鏈全抗體核苷酸序列(包括如本文所述的經(jīng)修飾IgG2a)(SEOIDNO:13)AGGTTTCCTGCAAAGCATCTGGTTACTATACGGAGGCTTACTATATCCACTGGGTGCTAGAGcTccAAbGAcGGcTGcccTbcAAGGAcGcGAAGcTGGGGGGtcAcGGTGcGcGGAGGAcccTcGGTAcMAAAIIc5GTcG一麗-G還cTKGAGGGTT丁ccGcTGGAc^Gc8Gt^A9mGAIT、nfJca^Gw^MCAAGTcGGTcaTGacAgcGMcc{ccAccGcKGTTAGcA_7cAGAccCCAcGGGAA蓋丁GGTGccccGAAccAc二G^AG5ATSccgcGKGTGc一GGACAMAG5GGGGTGGGAAAAw丌cTAGGAAGGGGSmG隨wcTTccA:AGAAc工GcTAAcGccAccTAGcAGATccAcGcGG929TL輕鏈全抗體核苷酸序列(SEOIDNO:14)GATGTTGTGATGACCCAGTCCCCACTGTCTTTGCCAGTTACCCTGGGACAACCAGCATTTTACACTTAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAAGATGTGGGAGTTTATTACTGCT6G重鏈可變區(qū)氨基酸序列(SEOIDNO:26)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTTYAIH雨RQAPGQGLE畫(huà)GFTSPYSGVSNYNQKFKGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARFDNYDRGYVRDYWGQGTLVTVS6G輕鏈可變區(qū)氨基酸序列(SEOIDNO:27)D國(guó)TQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDNDRISFL,YQQKPGQPPKLLIYAATKQGTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSKEFPWSFGGGTKVEIKRTV6GCDRHl(擴(kuò)展CDR)(SEOIDNO:28)GYTFTTYAIH6GCDRH2(擴(kuò)展CDR)(SEOIDNO:29)FTSPYSGVSNYNQKFKG6GCDRH3(擴(kuò)展CDR)(SEOIDNO:30)FDNYDRGYVRDY6GCDRLl(擴(kuò)展CDR)(SEOIDNO:31)RASESVDNDRISFLN6GCDRL2(擴(kuò)展CDR)(SEOIDNO:32)AATKQGT6GCDRL3(擴(kuò)展CDR)(SEOIDNO:33)QQSKEFPWS6G重鏈可變區(qū)核苷酸序列(SEOIDNO:34)GCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCC6G輕鏈可變區(qū)核苷酸序列(SEOIDNO:35)TCAGCAGTCCAAAGAGTTTCCCTGGTCCTTTGGCGGTGGCACCAAGGTGGAGATCAAACGCACTGTG6G重鏈全抗體氨基酸序列(包括如本文所述的經(jīng)修飾IgG2a)(SEOIDNO:36)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTTYAIHWVRQAPGQGLE畫(huà)GFTSPYSGVSNYNQKFKGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARFDNYDRGYVRDYWGPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRWSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK6G輕鏈全抗體氨基酸序列(SEOIDNO:37)DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDNDRISFLNWYQQKPGQPPKLLIYAATKQGTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSKEFPWSFGGGTKVEiKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC6G重鏈全抗體核苷酸序列(包括如本文所述的經(jīng)修飾IgG2aKSEOIDm7G10重鏈氨基酸序列〖SEOIDNO:40)EVKLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSTYAMSWIRQTPEKRLE雨ASIGNSSRTYYPDSVKGRFTISRDNAGSILYLQMSSLRSEDTAIYYCARGEDGNYAWFTYWGQGTQVTVSm7G10輕鏈氨基酸序列(SEOIDNO:41)DIVLTQSPATLSVTPGDSVSLSCRASQSVKNNLHWYQQKSHESPRLLIKYTFQSMSGIPSRFSGSGSGTDFTLIINSVETEDFGMYFCQQSNRWPLTFGAGTKLELNO:38)AAGTGTCCTGCAAAGCCTCCGGTTACACCTTTACCACCTATGCCATCCATTGGGTGCCTGTCTCCAGGAAAG6G輕鏈全抗體核苷酸序列(SEOIDNO:39)TCAGCAGTCCAAAGAGTTTCCCTGGTCCTTTGGCGGTGGCACCAAGGTGGAGATCGGGCCTGAGTTCTCCAGTCACAAAGAGCTTCAACCGCGGTGAGTGC1cTTcAAcG5Ga2GtcGGSGGGAApc5Gfi8研cVcGGcG丁AGc丁cGGGcGwC5G蕓，SAC^cA8ccwGcrcTwcyGGAAccGGc5TAWGGHGG^ccAGAccTGAGGGAG，GAcACT5cAAA:cGScGMccA:cAGc^AGGGTTeccKcGAccGcTAAcGccAc9TAGcAGATccAcGcGGTGGAcGccGcTGcTGAAGATcGc仏5cTAcc丌G丌GAGTTGcccATGGcTAGAcA8，AccMccKGGcAGcccccGATGcTAAAGcccccAcGGTAccTcGTT丁GGAGccGGGATcGGtGA5GKcTccGGGcAcccGTGTca^cMccSGTaTcMGc5cTGG了AcccGAAcccG"ACTAcAGAGm7G10HlCDR氨基酸序列(SEOIDNO:42)TYAMSm7G10H2CDR氨基酸序列(SEOIDNO:43)SIGNSSRTYYPDSVKGm7G10H3CDR氨基酸序列(SEQIDNO:44)GEDGNYAWFTYm7G10Ll氨基酸序列(SEOIDNO:45)RASQSVKNNLHm7G10L2氨基酸序列(SEOIDNO:46)Y丁FQSMSm7G10L3氨基酸序列(SEOIDNO:47)QQSNRWPLTm7G10HC重鏈核苷酸序列(SEOIDNO:48)M7G10HC輕鏈核苷酸序列(SEOIDNO:49)CAG丁CTTTCCTGCAGGGCCAGCCAAAGTGTTAAGAACAACCTACACTGGTATCAACGCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGGGGACTCAGGTCACCGTCTCCPTTSIMATaACMC蕓AG叮AAt;CCAT丁aAcPcGI;;;cKAt5GS丌SGG8A:AKcA_lTGGcGA<CGcTGATcAMcG…GPGAtAAGAGTcccTGGGAGGccGAGTGTTcAGAGGGGGTcTGGGTGGTcGAGTGAAGHcAccGcGGGGGcTAccA^GGKG5Ac^GAAc5GTAGGGTTAAc5^GTGcGc3T5cATGAJcGGt:卩GGFGA9權(quán)利要求1.治療患有眼科疾病的個(gè)體的方法，所述方法包括向所述個(gè)體施用有效量的β類(lèi)淀粉(Aβ)肽的抑制劑。1.治療患有眼科疾病的個(gè)體的方法，所述方法包括向所述個(gè)體施用有l(wèi)的^類(lèi)淀粉(A②肽的抑制劑。2.如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述抗體與選自由APw6、APw7、A(3l38、A(3l39、ApMQ、APM2及APM3組成的組的A(3肽特異性結(jié)合。3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述抗體與ApMo上的表位特異性結(jié)合。4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述抗體還與APM2上的表位特異性仏人^口口o5.如權(quán)利要求1所述的方法，6.如權(quán)利要求2所述的方法所述A湖太結(jié)合。7.如權(quán)利要求3所述的方法，其中該抗體以約100iiM或更小的Kd與所述A^,肽結(jié)合。8.如權(quán)利要求8所述的方法，所述A/3M2肽結(jié)合。9.如權(quán)利要求2所述的方法，10.如權(quán)利要求2所述的方法，及40的表位結(jié)合。11.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述抗體以高于其與A/Sm2及A/3m3結(jié)合的親和性與A/SM。結(jié)合，且其中所述抗體不是抗體2294。12.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述抗體的Fc區(qū)未經(jīng)N-糖基化或具有相對(duì)于天然Fc區(qū)而言經(jīng)改變的N-糖基化模式。13.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述抗體包含下述重鏈可變區(qū)和下述輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:26中所示的抗體6G重鏈可變區(qū)的三個(gè)CDR，所述輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:27中所示的抗體6G輕鏈可變區(qū)的三個(gè)CDR。其中該抗體還以約100iiM或更小的Kd與其中所述抗體與所述A湖太的C末端結(jié)合。其中所述抗體與八^.4()上包括氨基酸25-3414.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述抗體包含下述重鏈可變區(qū)和下述輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:26中所示的氨基酸序列，所述輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:27中所示的氨基酸序列。15.治療患有年齡相關(guān)的黃斑退化的個(gè)體的方法，所述方法包括向所述個(gè)體施用有效量的抗體，其中，所述抗體與A/3mo及A/3M2上的表位特異性結(jié)合。全文摘要本發(fā)明描述了使用針對(duì)類(lèi)淀粉-β肽的抑制劑(包括單克隆抗體)用于治療眼科疾病(例如年齡相關(guān)的黃斑退化)的方法。文檔編號(hào)A61P27/02GK101687922SQ200880007669公開(kāi)日2010年3月31日申請(qǐng)日期2008年3月6日優(yōu)先權(quán)日2007年3月9日發(fā)明者家-揚(yáng)·林申請(qǐng)人:禮納特神經(jīng)系統(tǒng)科學(xué)公司