專利名稱：：28烷醇作為抗帕森氏病物質(zhì)在藥物和保健品中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及28烷醇及其衍生物或其藥物組合物，作為抗帕森氏病物質(zhì)在藥物和保健品中的用途，尤其是用于制備治療和預(yù)防帕森氏病在藥物和保健品及其并發(fā)癥等相關(guān)性疾病的藥物和保健品等方面的用途。
背景技術(shù)：
：帕金森氏病(Parkinson'sdisease,PD)是一種多見于中年以上的中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，又稱"震顫麻痹"，由JamesParkinson于1817年首次提出。該病突出表現(xiàn)為選擇性中腦黑質(zhì)多巴胺(DA)能神經(jīng)元喪失及紋狀體DA含量顯著減少，同時在神經(jīng)元細(xì)胞質(zhì)中產(chǎn)生泛素化蛋白沉淀即路易小體(Lewybody)。在散發(fā)PD患者中，黑質(zhì)和紋狀體中神經(jīng)膠質(zhì)增生是另一顯著的祌經(jīng)病理學(xué)特征。PD本身并不是一種致命的疾病，但是，如果患者沒有得到及時合理的治療，很容易導(dǎo)致身體機(jī)能下降，甚至生活不能自理，最后出現(xiàn)各種并發(fā)癥，如腫炎、泌尿系統(tǒng)感染等。病情發(fā)展到晚期將會全身僵直，臥床不起，器官功能衰竭而危及生命，給患者的工作、生活和家庭帶來極大的痛苦。隨著我國人口呈現(xiàn)出老齡化趨勢，PD患者的比例也在增加，由于環(huán)境污染和某些尚未確定的原因，此病也有向中年人甚至青年人發(fā)展的趨勢。PD的確切病因目前仍不清楚，可能與年齡老化、遺傳、環(huán)境等諸多因素有關(guān)。多巴胺(DA)是一種神經(jīng)信號傳輸物質(zhì)，中樞神經(jīng)系統(tǒng)中DA的缺乏是引起PD各種癥狀的主要原因。因此，提高中樞神經(jīng)系統(tǒng)中DA的含量或糾正DA能神經(jīng)元與膽堿能神經(jīng)元兩大系統(tǒng)功能的不平衡，是目前臨床治療所遵循的基本原則。PD藥物治療原則提倡盡早治療、逐漸增量、個體化給藥及聯(lián)合用藥。目前對于PD的治療方法主要有補(bǔ)充腦內(nèi)DA含量；增強(qiáng)或模擬DA作用的藥物；抗膽堿藥物；谷氨酸受體拮抗劑；神經(jīng)生長因子；手術(shù)治療或基因治療。雖然關(guān)于PD的藥物研究獲得了很多新的進(jìn)展，但是這些藥物的不良反應(yīng)限制了它們的應(yīng)用。同時，這些藥物只能改善PD的癥狀，而不能對疾病的進(jìn)程產(chǎn)生影響。PD傳統(tǒng)的治療方案是以左旋多巴(L-3，4-dihydroxyphenylethylamine,L-DOPA)為主，但存在不能阻止疾病發(fā)展、后期無效等問題。向腦內(nèi)植入能產(chǎn)生DA的細(xì)胞也有一定的療效，但因存活、效果、細(xì)胞來源等問題目前很難在臨床推廣。因此，能延緩或阻斷疾病進(jìn)程的新型藥物一神經(jīng)保護(hù)劑的研發(fā)將成為未來相當(dāng)一段時間內(nèi)PD治療藥物研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。目前，美國和歐洲5國(法國、德國、意大利、西班牙和英國)帕金森氏病治療市場總規(guī)模超過了20億美元。歐洲市場占54%，芙國市場占46%。上述國家帕金森氏病治療藥物市場的總體增長率為6.4%，其中歐洲增長6.8%，美國為5.9%。2000到2004年間，帕金森氏病市場的復(fù)合年增長率為10%。就市場規(guī)模而言，多巴胺激動劑依然是市場規(guī)模最大的藥物類別；L-DOPA衍生物和多巴胺脫羧酶抑制劑是第二大類藥物；COMT抑制劑市場規(guī)模相對較小，但增長最為迅速；單胺氧化酶抑制劑目前的市場規(guī)模也比較小，其代表藥Rasagiline每日只需口服一次，具有很好的耐受性。中到重度病人接受L-DOPA治療的基礎(chǔ)上加用rasagiline可改善癥狀以及運(yùn)動波動(motorfluctuations)。Rasagiline最重要的優(yōu)勢是可以在早期階段限制神經(jīng)變性。為期一年的由早期帕金森氏病人參加的臨床試驗顯示rasagiline可能具有神經(jīng)保護(hù)效果，有可能改善帕金森氏病的進(jìn)程。帕金森氏病的治療在我國開展較晚，市場規(guī)模較小，常用的治療品種有多巴絲肼、復(fù)方二氫麥角隱亭、卡比多巴/左旋多巴、培高利特甲磺酸鹽、苯海索、左旋多巴和司來吉蘭等品種?？筆D藥的新劑型產(chǎn)品及左旋多巴前藥IH在開發(fā)中，一個更加新穎的方法是通過神經(jīng)保護(hù)來治療PD，目前最具代表性的是立馬醋胺(remacemide)和利魯唑(riluzole)，這兩種藥還處于其他適應(yīng)癥的III期臨床試驗開發(fā)中6阿斯利康的Remacemide是一種有潛力的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)拮抗劑，可抗痙攣、抗缺血。安萬特的riluzole是一種谷氨酸釋放抑制劑。其它處于開發(fā)中的神經(jīng)保護(hù)藥還有抗氧化劑及自由基清除劑等。28烷醇是一種從天然產(chǎn)物中提取的烷醇類化合物(Octacosanol，縮寫OCS),、分子量為410.76，結(jié)構(gòu)式為CH3(CH2》6CH20H。目前申請者實(shí)驗室已能人工合成，其合成工藝已申請國家發(fā)明專利(申請?zhí)?0061008594.2;200610088034.6)，可溶于熱的乙醇、乙醚、苯、甲苯、二氯甲烷、氯仿及石油醚等有機(jī)溶劑，不溶于水。OCS安全性極高，經(jīng)小鼠口服試驗確認(rèn)LD5o在18000mg/kg以上。.目前對于OCS的研究主要集中在其增強(qiáng)體力和耐力；降低膽固醇，抑制脂質(zhì)過氧化等方面。關(guān)于其在帕金森氏病中的作用在國內(nèi)外還未見系統(tǒng)的文獻(xiàn)報道，本實(shí)驗結(jié)果初步證明OCS對兩種經(jīng)典的帕金森氏病動物模型具有良好的治療作用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及28烷醇類化合物，作為抗帕森氏病物質(zhì)在藥物和保健品中的用途，尤其是用于制備治療和預(yù)防帕金森氏病在藥物和保健品及其并發(fā)癥等相關(guān)性疾病的藥物和保健品等方面的用途。28烷醇的結(jié)構(gòu)如(1)所示，這類化合物可以從甘庶皮、菠菜、谷糠等中分離，也可通過化學(xué)合成得到。本發(fā)明的目的之一在于提供28烷醇類化合物或其組合物，包括28烷醇類化合物禾'Q制藥領(lǐng)域中常用的載體。本發(fā)明的又一目的在于提供28烷醇類化合物或其組合物在制備與治療和預(yù)防帕金森氏病及其并發(fā)癥藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的又一目的在于提供28垸醇類化合物或其組合物在制備與治療和預(yù)防帕金森氏病及其并發(fā)癥相關(guān)的功能性保健品中的應(yīng)用。為了完成本發(fā)明目的，本發(fā)明采取如下的技術(shù)方案-本發(fā)明還涉及含有作為活性成份的本發(fā)明28烷醇類化合物和常規(guī)藥物賦形劑或輔劑的藥物組合物。通常本發(fā)明藥物組合物含有0.05-95%或95。/。以上重量的本發(fā)明28烷醇類化合物。本發(fā)明還提供一種藥物組合物，它包括藥物有效劑量的，作為活性成分的28烷醇類化合物及藥學(xué)上可接受的載體。本發(fā)明28烷醇類化合物的藥物組合物可根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備。用于此目的時，如果需要，可將本發(fā)明28烷醇類化合物與一種或多種固體或液體藥物賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成可作為人藥或獸藥使用的適當(dāng)?shù)氖┯眯问交騽┝啃问?。本發(fā)明28烷醇類化合物或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、鼻腔、口腔粘膜、皮膚、腹膜或直腸給藥等，優(yōu)選口服給藥。本發(fā)明28烷醇類化合物或含有它的藥物組合物的給藥途徑，同樣包括注射給藥。注射包括靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、皮內(nèi)注射等。給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型。本發(fā)明28烷醇類化合物可以制成普通制劑、也可以是緩釋制劑、控釋制劑、耙向制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。為了將單位給藥劑型制成片劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體的例子是，例如各種稀釋劑與吸收劑。例如為了將給藥單元制成丸劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體的例子是，例如各種稀釋劑與吸收劑。例如將28烷醇類化合物制成微囊劑，混懸于水性介質(zhì)中形成混懸劑；亦可裝入硬囊中或制成注射劑應(yīng)用。例如，將本發(fā)明28烷醇類化合物制成注射用制劑，如溶液劑、混懸劑溶液劑、乳劑、，凍干粉針劑等。為達(dá)到用藥目的，增強(qiáng)治療效果，本發(fā)明的藥物或藥物組合物可用任何公知的給藥方法給藥。本發(fā)明28垸醇類化合物藥物組合物的給藥劑量取決于許多因素，例如所要預(yù)防或治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，患者或動物的性別、年齡、體重、性格及個體反應(yīng)，給藥途徑、給藥次數(shù)、治療目的，因此本發(fā)明的治療劑量可以有大范圍的變化。一般來講，本發(fā)明中28烷醇類化合物的使用劑量是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的?？梢愿鶕?jù)本發(fā)明28垸醇類化合物組合物中最后的制劑中所含有的實(shí)際藥物數(shù)量，加以適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，以達(dá)到其治療有效量的要求，完成本發(fā)明的預(yù)防或治療目的。本發(fā)明28烷醇類化合物的每天的合適劑量范圍本發(fā)明的28烷醇類化合物的用量為0.000001-10g/kg體重，優(yōu)選為0.00001-2g/kg體重，最優(yōu)選為0.001-1g/kg體重。上述劑量可以單一劑量形式或分成幾個，例如二、三或四個劑量方式給藥受限于給藥醫(yī)生的臨床經(jīng)驗以及包括運(yùn)用其它治療手段的給藥方案。每一種治療所需總劑量可分成多次或按一次劑量給藥。本發(fā)明的28烷醇類化合物或組合物可單獨(dú)服用，或與其他治療藥物或?qū)ΠY藥物合并使用并調(diào)整劑量。6圖l:不同濃度的28烷醇對于細(xì)胞增殖率的影響(作用24h)"尸O.Ol，與正常對照組比較圖2:不同濃度的28烷醇對于DA誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞損傷模型增殖率的影響##尸<0.01,與正常對照組比較；><0.01，與模型組比較圖3:'不同濃度的28烷醇對于細(xì)胞增殖率的影響(作用72h)"PO.Ol，與IH常對照組比較圖4:不同濃度的28烷醇對于MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞損傷模型增殖率的影響糊河Ol,與正常對照組比較；"尸O.Ol，與模型組比較具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施實(shí)例對本發(fā)明作進(jìn)一歩的闡述，但是不限制本發(fā)明。實(shí)施例1:28醇對MPTP致帕金森病小鼠模型行為學(xué)的研究一、材料及方法1.材料l.l受試品28醇，為白色粉末或鱗片狀晶體，由徐州師范大學(xué)提供，溶于熱的乙醇、乙醚、苯、甲苯、氯仿、二氯甲烷等有機(jī)溶劑，不溶于水。對酸、堿、還原劑穩(wěn)定，主要存在于米糠蠟、甘蔗蠟、葵花油蠟中，以0.5%CMC(縮甲基纖維素鈉)水助溶制成懸浮液。1.2試劑l-甲基-4-苯基-l,2,3,6-四氫吡啶(MPTP)，Sigma公司產(chǎn)品，貨號M0896，批號095K1166。1.3陽性對照藥左旋多巴片，北京曙光藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號060517。1.4動物:C57BL/6小鼠，雄性，體重24.5土0.8g，由北京維通利化動物公司提供。2.方法2.1小鼠PD模型的建立C57BL/6小鼠分成對照組、模型組、低劑量治療組(25mg/kg)、中劑量治療組(50mg/kg)、高劑量治療組(100mg/kg)、陽性藥組(左旋多巴，200mg/kg)。每組15只。熟悉環(huán)境3天后，根據(jù)自發(fā)運(yùn)動和轉(zhuǎn)桿行為情況進(jìn)行分組。做動物個體化標(biāo)志。模型組、治療各組及陽性藥組小鼠以MPTP15mg/kg的劑量腹腔注射4次，丌始時間為早8:30，每間隔兩小時l次。l周測定體重兩次。2.2給藥于造模后第l天，28醇治療各組、陽性藥組小鼠以0.1ml/10g每天分別灌胃1次，對照組和模型組給等量0.5。/。CMC水，連續(xù)一周。2.3行為學(xué)實(shí)驗造模和給藥1周后，各組分別進(jìn)行自發(fā)運(yùn)動實(shí)驗和轉(zhuǎn)桿實(shí)驗。2.3.1自發(fā)運(yùn)動實(shí)驗將小鼠置于自發(fā)運(yùn)動監(jiān)測儀(圓形，直徑50cm)中央部，保持環(huán)境安靜。在自發(fā)運(yùn)動監(jiān)測儀內(nèi)有多束紅外線穿過，動物活動時就阻隔紅外線束，即可被檢測并記數(shù)。預(yù)適應(yīng)2min后，記錄小鼠3min內(nèi)自發(fā)運(yùn)動次數(shù)。2.3.2轉(zhuǎn)桿實(shí)驗水平金屬桿(直徑3cm)長約為50cm，用金屬板分隔為5段，用擋板隔開動物彼此不受影響。實(shí)驗采用16r/min轉(zhuǎn)速。小鼠在轉(zhuǎn)桿上丌始爬行后自動記時，從轉(zhuǎn)桿跌落時可以被紅外裝置所監(jiān)測，自動停止記時并顯示小鼠在轉(zhuǎn)桿上運(yùn)動的時間。2.4統(tǒng)計學(xué)方法本實(shí)驗結(jié)果統(tǒng)計學(xué)處理，采用SPSS11.5中的ANOVA方法。~"^結(jié)果1、自發(fā)實(shí)驗結(jié)果28醇在100mg/kg劑量下連續(xù)給藥7天，使MPTP致帕金森小鼠模型自發(fā)活動次數(shù)明顯增加(P<0.05)，(見表l)。2、轉(zhuǎn)桿實(shí)驗結(jié)果28醇在25mg/kg，50mg/kg和100mg/kg劑量下連續(xù)給藥7天，使MPTP致帕金森小鼠模型轉(zhuǎn)桿運(yùn)動時間明顯延長(PO.05),(見表l)。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>中劑量50]583.8±16.3152.7±72.8*高劑量1001288.8±19.1*147.6±64.3*#>^oT6—5—，——#T7^^Tr^i^n^7—*7^:o7，—"7^o:oT:—一￥組比較。結(jié)論28醇在100mg/kg劑量下連續(xù)給藥7天對MPTP致帕金森小鼠模型自發(fā)運(yùn)動次數(shù)減少和四肢運(yùn)動協(xié)調(diào)能力下降有明顯改善作用；在25mg/kg，50mg/kg劑量下連續(xù)給藥7天對其四肢運(yùn)動協(xié)調(diào)能力有明顯改善作用，效果與陽性藥左旋多巴接近。實(shí)施例2:28醇對6-OHDA致帕金森病(PD)大鼠模型行為學(xué)的研究一、材料及方法1.材料l.l受試品28醇，為白色粉水或鱗片狀晶體，由徐州師范大學(xué)提供。溶于乙醇、乙醚、，苯、甲苯、氯仿、二氯甲烷等有機(jī)溶劑，不溶于水。對酸、堿、還原劑穩(wěn)定，主要存在于米糠蠟、甘蔗蠟、葵花油蠟中。以0.5。/。CMC(縮甲基纖維素鈉)水助溶制成懸浮液。1.2試齊U:6羥基多巴胺(6-OHDA),Sigma公司產(chǎn)品，貨號H116，批號115K4613;阿撲嗎啡(Apomorphine，APO)，Sigma公司產(chǎn)品，貨號A4393'批號085K1223。1.3動物SD大鼠，雄性，體重203.0g土7.9g，由北京維通利化動物公司提供。2.方法2.1大鼠PD模型的建立成年雄性健康SD大鼠經(jīng)一般行為檢測確認(rèn)其無異常后，隨機(jī)分為正常對照組、假手術(shù)組及篩模組。篩模組腹腔注射1%戊巴比妥鈉(50mg/kg體重)將大鼠麻醉后，嚴(yán)格顱平位(前図與后囟水平高度相差0.1mm以下，顱骨矢狀縫兩側(cè)旁開4mm處水平高度相差O.lmm以下)固定于大鼠腦立體定向儀上(注意將微量注射器針柄與操作平面保持垂直)。剪開頭皮，剝離骨膜后，根據(jù)大鼠體重和頭顱大小在規(guī)定范圍內(nèi)確定具體坐標(biāo)并標(biāo)記，用牙科鉆小心鉆透顱骨(注意勿損傷硬腦膜)。根據(jù)PaxinosWatson圖譜，確定右側(cè)紋狀體(CPU)坐標(biāo)，行兩點(diǎn)注射。按確定坐標(biāo)將微量注射器緩慢進(jìn)針到規(guī)定深度。向CPU兩點(diǎn)各注射6-OHDA15路，3jil(溶于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%抗壞血酸的生理鹽水)，注射速度為lpl/min，留針10min，緩慢退針3min(lmm/min)。假手術(shù)組用上述相同方法向兩點(diǎn)分別注射同體積的含0.2%抗壞血酸的生理鹽水。術(shù)后，手術(shù)各組大鼠肌肉注射青霉素，以防治感染。2.2篩選大鼠PD模型術(shù)后第4w丌始對大鼠6-OHDAPD模型進(jìn)行旋轉(zhuǎn)實(shí)驗篩選，APO頸部皮下注射(0.5mg/kg體重)，觀察其30min行為變化，若大鼠恒定轉(zhuǎn)向健側(cè)，且旋轉(zhuǎn)圈數(shù)M50r/30min，每分鐘最大旋轉(zhuǎn)次數(shù)大于等于7r/min，表示毀損穩(wěn)定，則視為成功PD大鼠模型，成功率為79%。2.3篩選后分組篩選成功的模型當(dāng)天隨機(jī)分組(每組旋轉(zhuǎn)次數(shù)與體重?zé)o明顯差異)。共分為模型組19只，高劑量治療組13只，中劑量治療組12只，低劑量治療組12只，陽性藥組12只，假手術(shù)組15只，正常對照組ll只。2.4給藥于分組后第1天，28醇高劑量組(70mg/kg)，中劑量組(35mg/kg),低劑量組(17.5mg/kg)，陽性藥組(140mg/kg)每天分別灌胃1次，正常對照組、模型組及假手術(shù)組給等量0.5%CMC水，連續(xù)1周。2.5行為學(xué)實(shí)驗連續(xù)給藥1周后開始行為學(xué)檢測。3種行為實(shí)驗全部采用雙盲方法，即籠子號統(tǒng)一用阿拉伯?dāng)?shù)字表示，實(shí)驗者不知每籠分組情況。2.5.1阿撲嗎啡誘導(dǎo)旋轉(zhuǎn)實(shí)驗用阿樸嗎啡(Apomorphine，APO)行大鼠(包括模型組、給藥組、假手術(shù)組)頸部皮下注射(0.5mg/kg體重)，觀察并記錄其在30min內(nèi)轉(zhuǎn)向健側(cè)的圈數(shù)及每分鐘平均轉(zhuǎn)數(shù)(部分錄像)。2.5.2Morris水迷宮實(shí)驗(露臺)Morris水迷宮主要由一不銹鋼制成的圓柱形黑色水池和一可移動位置的平臺組成。預(yù)先在水池里注入清水，并使平臺高出水面2cm，水溫控制在20±0.5°C，水中加入黑色墨水，成黑水白鼠對比。平臺置于某一象限的中間，大鼠入池位置為站臺所在位置的對象限，于象限邊l/2弧度處頭朝池壁入水，水池上空通過一攝像機(jī)與監(jiān)視電視和計算機(jī)相連接。當(dāng)設(shè)定的訓(xùn)練時間己到或動物己爬上平臺，計算機(jī)停止跟蹤并記錄下游泳軌跡和自動計算出動物在水池中所游過的路程，找到平臺所需的時間(即潛伏期)及游泳的速度等指標(biāo)。2.5.3平衡桿實(shí)驗平衡木桿長105cmX寬4cmX高3cm，木桿離地80cm，兩端由木架支撐。木桿的一端為起始區(qū)，長20cm，另一段為終點(diǎn)區(qū)，終點(diǎn)區(qū)后接一個大鼠籠，木桿下有l(wèi)m2，厚12cm墊子防止大鼠摔傷。實(shí)驗時，將大鼠放在起始區(qū)面對鼠籠方向，同時開始計時，記錄大鼠走過起始區(qū)的時間(潛伏期)和大鼠走過整個平衡桿的時間,.潛伏期最大允許時間為lmin，走過橫桿最大允許時間為2min。大鼠先訓(xùn)練3次，然后開始TF式實(shí)驗。2.6統(tǒng)計學(xué)方法本實(shí)驗結(jié)果統(tǒng)計學(xué)處理，采用SPSS11.5中的ANOVA方法。以P<0.05為有顯著性差異。^、結(jié)果1、阿撲嗎啡誘導(dǎo)旋轉(zhuǎn)實(shí)驗28醇在70mg/kg和35mg/kg劑量下連續(xù)給藥7天，使6-0HDA致PD大鼠模型向健側(cè)旋轉(zhuǎn)次數(shù)明顯減少(P<0.05)，(見表1)。2、"orris水迷宮實(shí)驗(露臺)28醇在70mg/kg和35mg/kg劑量下連續(xù)給藥7天，使6-OHDA致PD大鼠模型尋臺時間明顯縮短(P<0.05)，(見表2)。2、平衡桿實(shí)驗28醇在70mg/kg、35mg/kg和17.5mg/kg劑量下連續(xù)給藥7天，使6-OHDA致PD大鼠模型過桿潛伏期和過桿時間顯著減少(P<0.01，P<0.001)，(見表3和表4)。表l阿撲嗎啡誘導(dǎo)大鼠旋轉(zhuǎn)實(shí)驗結(jié)果組別劑量(mg/kg)n旋轉(zhuǎn)次數(shù)/30min±SD假手術(shù)組CMC水1534.0±20.0模荊組CMC水18319.9±179.8,.卩l(xiāng)l性藥紹14012163.5±57.8*17.512198.7±54.0中劑呈組3512171.8±49.1*高劑呈紹7012169.4±33.5*腳尸〈0肌與假手術(shù)組比較;*P<0.05,與模艱組比較。表2各組大鼠Morris水迷宮實(shí)驗(露臺)結(jié)果組別劑量(mg/kg)n尋臺時間(S)±SD止常對照幼CMC水1021.20±13.05假手術(shù)紹CMC水1528.33±17.09模艱組CMC水1858.50±32.31#m性藥節(jié)1401231.25±22.29低劑量節(jié)17.51233.50±20.20中劑呈絎351229.42±14.44*高劑呈紹701226.92±17.86*V0.05，與假手術(shù)紹比較；*戶<0.05,與模巧徹.比較。表3各組大鼠平衡桿潛伏期實(shí)驗結(jié)果組別劑量(mg/kg)n潛伏期(s)±SD止常對照紀(jì)CMC水110.57±0.58假手術(shù)幼CMC水141.66±1.24模荊紀(jì)CMC水184.96±3.44#Rl性藥幼140121.03±0.95**17.5120.81±0.51**中劑量鄉(xiāng)R35120.77±0.63**高劑呈幼70120.98±0.48**#尸<0.05,與假手術(shù)纟fl比較；*:*戶<0.01,與投型絎比較。表4各組大鼠平衡桿過桿實(shí)驗結(jié)果分析組別劑量(mg/kg)n過桿時間(s)±SD正常對照組CMC水116.43±5.19假手術(shù)紹CMC水159.66±6.41CMC水1851.99±36.93##陽性藥鉬140128.14±6.79**低劑呈紡17.51211.88±9.05**中劑量紹35128.84±6.94**高劑量新70126.07±3.88***PO.Ol，Lj假手術(shù)幼比較；**尸<0.01,***P<0.001與模艱紹比較。三、結(jié)論本實(shí)驗采用單側(cè)紋狀體內(nèi)注射6-OHDA致PD模型。采用雙盲法開展了3種動物行為學(xué)檢測。1.在阿樸嗎啡實(shí)驗中，患側(cè)黑質(zhì)紋狀體通路損傷導(dǎo)致動物模型向健側(cè)旋轉(zhuǎn)運(yùn)動明顯增加(PO.OOl)，經(jīng)28醇灌胃7天后旋轉(zhuǎn)次數(shù)明顯減少，其中高劑量70mg/kg組和中劑量35mg/kg組具有明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，與陽性藥左旋多巴的效果相同(P<0.05)，而28醇的用藥量僅為左旋多巴的1/4~1/2。2.在Morris水迷宮實(shí)驗中，模型組動物感覺與四肢協(xié)調(diào)運(yùn)動能力下降，尋臺時間明顯延長(P<0.05)，經(jīng)28烷醇灌胃7天后，3個劑量組均縮短了尋臺時間，其中，高劑量組和中劑量組具有明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，陽性藥有改善的趨勢但無統(tǒng)計學(xué)差異。3.在平衡桿實(shí)驗中，模型鼠的運(yùn)動始動性及運(yùn)動平衡能力均明顯比假手術(shù)組差(PO.05,PO.Ol)，經(jīng)28烷醇3個劑量灌胃7天后，上述表現(xiàn)均有明顯改善(PO.Ol)，其中高劑量組對運(yùn)動平衡能力的作用效果最佳(PO.OOl)。陽性藥也有明顯改善作用(P<0.01)?？傊?，我們在對28醇給藥1周后的藥效學(xué)研究證明，該藥能提高PD模型鼠的體力和對應(yīng)激的反應(yīng)力，提高運(yùn)動靈敏性，改善四肢協(xié)調(diào)性，有效對抗多巴胺神經(jīng)損傷造成的行為障礙，有些作用效果甚至優(yōu)于左旋多巴。實(shí)施例3:28烷醇對SH-SY5Y細(xì)胞存活率的影響及對DA和MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞損傷模型的保護(hù)作用實(shí)驗?zāi)康耐ㄟ^分別建立刺激劑多巴胺(Dopamine,DA)和l-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)誘導(dǎo)的兩種多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞株損傷體外細(xì)胞模型，觀察28烷醇的細(xì)胞保護(hù)作用。材料及方法1.材料1.1受試品28垸醇，為白色粉術(shù)或鱗片狀晶體，由徐州師范大學(xué)提供。溶于熱的乙醇、乙醚、苯、甲苯、氯仿、二氯甲烷等有機(jī)溶劑，不溶于水。對酸、堿、還原劑穩(wěn)定，主要存在于米糠蠟、甘蔗蠟、葵花油蠟中。以乙醇二甲基亞砜(1:1)配制為混懸液，以PBS稀釋為溶液待用。1.2試劑多巴胺(Dopamine,DA),1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)，4-甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)，均為Sigma公司產(chǎn)品。2.方法2.1DA及MPP+細(xì)胞損傷模型的建立多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞株(SH-SY5Y)使用含10。/。胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基，其中含有100U/ml青霉素，100U/ml鏈^素，于5%C02，37'C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。3~4天換液，生長融合至80y。傳代。于細(xì)胞培養(yǎng)液中加入終濃度為50pimol/LDA和20(^Mmol/LMPP+，制成細(xì)胞損傷模型。2.2細(xì)胞存活率檢測調(diào)整細(xì)胞濃度，以2xl()S個/孔加入96孔培養(yǎng)板中，100)iL/孔，設(shè)六個復(fù)孔。檢測28垸醇對細(xì)胞存活率影響時，每孔加入不同濃度的28垸醇(10"4-10—511101/10;檢測28烷醇抗DA和MPP+誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用時，除加入不同濃度的28烷醇外，每孔還分別加入終濃度為50pmol/L的DA和200|amol/L的MPP+，使終體積為200pL。將細(xì)胞置于5%C02，37。C培養(yǎng)箱分別培養(yǎng)24h和72h后，每孔再加入20(xL5mg/mLMTT，在同樣的條件下培養(yǎng)4h，2000r/min，4°C，離心5min，吸棄上清，向沉淀中加入150nLDMSO，于振蕩器振蕩15min,酶標(biāo)儀570nm處測定OD值。增殖率計算公式為[(OD實(shí)驗組-OD空白組)-(OD對照組-OD空白組)]/(OD對照組-OD空白組)xioo%。實(shí)驗結(jié)果1.不同濃度的28烷醇對于細(xì)胞增殖率的影響(作用24h)如圖1所示，10—14-—10—7mol/L28烷醇對于SH-SY5Y細(xì)胞的增殖率無明顯影響。142.不.同濃度的28垸醇對于DA誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞損傷模型增殖率的影響如圖2所示，10—13—l(T6mol/L28垸醇對于DA誘導(dǎo)的細(xì)胞存活率下降有明顯的抑制作用；10—14mOl/L28烷醇組與模型組相比未見顯著變化。3.不同濃度的28垸醇對于細(xì)胞增殖率的影響(作用72h)如圖3所示，10—14—10—7mol/L28烷醇對于SH-SY5Y細(xì)胞的增殖率無明顯影響。4.不同濃度的28烷醇對于MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞損傷模型增殖率的影響如圖4所示，10—12—10—7mol/L28烷醇對于MPP+誘導(dǎo)的細(xì)胞存活率下降有明顯的抑制作用；10—14、10—13和10—Smol/L28烷醇組與模型組相比未見顯著變化。結(jié)論10—|4—lCT7mol/L28烷醇作用24小時和72小時后，對于SH-SY5Y細(xì)胞的增殖率無明顯影響；l(T13"~10—6mol/L28垸醇對于DA誘導(dǎo)的細(xì)胞存活率下降有明顯的抑制作用；10"2—10—7mol/L28垸醇對于MPP+誘導(dǎo)的細(xì)胞存活率下降有明顯的抑制作用。以上結(jié)果提示，28烷醇具有細(xì)胞保護(hù)作用。1權(quán)利要求1、28烷醇及其衍生物在制備抗帕森氏病的藥物和保健品中的應(yīng)用。2、28烷醇及其衍生物在制備抗帕森氏病其并發(fā)癥的藥物和保健品中的應(yīng)用。3、一種抗帕森氏病的藥物組合物，其包括28烷醇及其衍生物和藥學(xué)土可接受的載體。4、根據(jù)權(quán)利要求3的藥物組合物，所述的藥物組合物包括片劑、膠囊、丸劑、注射劑、緩釋制劑、控釋制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。全文摘要本發(fā)明公開了28烷醇作為抗帕森氏病物質(zhì)在藥物和保健品中的用途，尤其是用于制備治療和預(yù)防帕森氏病及其并發(fā)癥等相關(guān)性疾病的藥物和保健品等方面的用途。本發(fā)明還公開了一種抗帕森氏病的藥物組合物，其包括28烷醇及其衍生物和藥學(xué)上可接受的載體。所述的藥物組合物包括片劑、膠囊、丸劑、注射劑、緩釋制劑、控釋制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。文檔編號A61P25/16GK101543485SQ20081010253公開日2009年9月30日申請日期2008年3月24日優(yōu)先權(quán)日2008年3月24日發(fā)明者何放亭,馮友建,嶺張,朱海波,凱渠,蔣繼宏,趙大龍申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所;徐州師范大學(xué)