專利名稱：用于治療過敏性炎癥的磷脂的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了 一種用于治療過敏性炎癥的^粦脂和藥物組合物 以及一種過壽丈性炎癥的治療方法。該組合物含有磷脂，尤其是稱為
嘌嗎可坦(pumactant)的磷脂的混合物。
背景技術(shù)：
總是有必要尋找能改善對引起多種病癥的炎癥治療的方法。

發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)本發(fā)明，提供了一種具有二?；〈牧字；?、用于治 療過敏性炎癥的磷脂。
磷脂天然存在于人或動物體內(nèi)，尤其是在i者如肺表面的體內(nèi)表 面上，它們在該體內(nèi)表面提供天然保護(hù)屏障，防止刺激物刺激肺中 的受體。已經(jīng)表明這種天然屏障在哮喘癥中是有欠缺的。 一種諸如 。票嗎可坦的石粦脂已經(jīng)一皮纟皮露用于治療哮喘，理由是它能》務(wù)復(fù)天然屏 障，從而減少暴露在刺激物中的受體數(shù)目。但是尚無人指出諸如。票 嗎可坦的磷脂會影響使用它的組織。
現(xiàn)在我們出乎意料地發(fā)現(xiàn)，諸如噤嗎可坦的磷脂確實與使用它 的組織相互作用從而抑制抗炎應(yīng)答。這種相互作用的性質(zhì)還不清 楚，但是可以從本申請的實施例1中清楚地看到其結(jié)果。從這個實 施例中可以看出，該磷脂抑制T細(xì)胞增殖，尤其抑制通過T細(xì)胞的淋巴細(xì)胞分泌。買施例1中的數(shù)據(jù)表明了在受到卵清蛋白肽刺激的
T細(xì)胞中T細(xì)胞增殖的抑制。卵清蛋白是一種抗原，其通常用于才莫 擬(model)諸如過敏性結(jié)膜炎和過壽丈性呼吸道疾病之類的過壽丈性 病癥、諸如關(guān)節(jié)炎之類的自身免疫病癥，以及諸如肺炎之類的炎癥。 因此，顯而易見的是石粦脂對于這種病癥的治療是非常有用的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供一種用于治療過壽丈性炎癥的藥物組合物， 該組合物含有一種具有二?；执牧字；牧字?，其與藥學(xué)上 可接受的稀釋劑和載體相結(jié)合。
根據(jù)本發(fā)明，還提供具有二酰基取代的磷脂?；牧字蛘吒?據(jù)本發(fā)明的藥物組合物在制備用于治療過壽文性炎癥藥物中的用途。
優(yōu)選地，用于本發(fā)明的磷脂為化學(xué)式(I )的磷脂
<formula>formula see original document page 6</formula>
其中R]和112各自獨立地代表具有13到21個碳原子的々包和或 不々包和烴基；以及
R"代表氫原子或膽堿、甘油、乙醇胺、絲氨酸或肌醇基團；優(yōu) 選地，R3代表月旦石咸或甘油。
更加優(yōu)選地，本發(fā)明使用的磷脂為化學(xué)式(II)的磷脂
其中R1和112各自獨立地代表具有13至21個石友原子的飽和或 不々包和烴基；以及
R 代表氫原子或膽堿、甘油、乙醇胺、絲氨酸或肌醇基團；優(yōu) 選地，R3代表膽;威或甘油。
本發(fā)明中使用的磷脂具有被兩個酰基取代的磷脂?；?。優(yōu)選 地，本發(fā)明使用的磷脂是被兩個?；〈牧字；?。該?；梢?各自具有一個一^:有14到22個碳原子的飽和或不飽和?；?即， W和R"各自獨立地^表一個具有13到21個義友原子的飽和或不飽 和烴基)，優(yōu)選16到20個碳原子(即，R1和R"尤選地各自獨立地 代表一個具有15到19個,灰原子的々包和或不々包和烴基)。優(yōu)選地， 該磷脂通過?；绞胶酗柡突鶊F棕櫚?；鵆16: O(即，W和R2 優(yōu)選地各自獨立地4戈表具有15個碳原子的々包和烴基)以及石更脂酰 C18:0 (即，R'和R"尤選地各自獨立地4戈表具有17個碳原子的々包 和爛基)和/或不々包和基團油?；鵆18:l (即，R"和RM尤選地各自 獨立地^表具有17個石灰原子的單不々包和烴基)和C18:2 (即，R1 和R"優(yōu)選地各自獨立地代表具有17個-友原子的雙不々包和烴基)。更 具體地，該磷脂具有兩個相同的飽和或不々包和?；?即，R1和R2 優(yōu)選地相同，代表相同的爛基)，尤其是二棕櫚酰和二硬脂酰，或 其中主要含有這些基團的磷脂混合物，尤其是二棕櫚酰為主要二酰 基部分的混合物。
該-疇脂既可選動物源-疇脂，也可選合成》粦脂；優(yōu)選合成,粦脂。
動物源磷脂可以以常規(guī)方法通過剁碎或從諸如豬肺或牛肺的
哺乳動物肺灌洗而獲得。可以^使用的動物源磷脂的實例包括 Curosurf (Chiesi Farmaceutici),其乂人剁石卒的豬肺中生產(chǎn)出來，并含 有99%的磷脂和1 %的表面蛋白；Alveofact (Dr. Karl Thomae, Ltd., 德國)， 一種從牛肺灌洗中獲得的化合物，含有90%的磷脂、約1% 的蛋白質(zhì)、3%的膽固醇、0.5%的游離脂肪酸和包括甘油三酯的其 他成分；Survanta (Abbott, Ltd.，德國)，其通過脂4是耳又剁^ 卒的牛肺而 制得，并含有約84%的磷脂、1%的蛋白質(zhì)、和6%的游離脂肪酸； BLES (BLES Biochemicals， Canada),通過牛肺灌洗制得；或也稱為 牛月申泡表面活寸生劑(calfactant)的Infasurf(Forest Labs)，其是通過 小牛肺灌洗獲得，并含有35 mg/ml的磷脂，該磷脂為26 mg/ml的 磷脂酰膽石威(PC )、 26 mg/ml的二棕櫚酰石粦脂酰膽石成(DPPC )、 0.65 mg/ml的蛋白質(zhì)和0.26 mg/ml的發(fā)u7J^月太。
合成磷脂優(yōu)選地是二酰基磷脂酰膽堿(DAPC)例如DPPC、 二油酰基磷脂酰膽堿(DOPC )或二硬酯?；字Ｄ懯?DSPC )、 磷脂酰甘油(PG)、 PC、磷月旨酰乙醇胺(PE)、磷脂酰絲氨酸(PS)、 石舞脂酰力幾醇(PI),和/或-粦脂酸。
磷脂優(yōu)選地是二酰基磷脂酰膽》咸和磷脂酰甘油的混合物。磷脂 酰甘油優(yōu)選二酰基磷脂酰甘油。磷脂酰甘油的?；梢韵嗤虿?同，優(yōu)選每一個具有14至22個5灰原子的脂肪酸?；?。實際上，磷 脂酰甘油成分可以是含有不同?；氖贾８视偷幕旌衔铩?yōu)選 地，》岸脂酰甘油的脂肪酸酰基的至少一部分是不々包和脂肪酸殘基， 例如，單或雙不飽和C18(即，R1和112優(yōu)選地各自獨立地代表具 有17個石友原子的單或X5l不々包和烴基)或C20脂肪&復(fù)殘基(即，R1 和R2優(yōu)選地各自獨立地代表具有19個-友原子的單或雙不飽和烴 基)。
在石岸脂酰甘油組分中，優(yōu)選的?；謂f戈基為棕櫚?；?、油酰基、 亞油?；喡轷；突ㄉ臍w?；?。因此在化學(xué)式(I )或(II )
化合物中，當(dāng)R3代表一個甘油時，R1和R2各自獨立地代表 CH3(CH2)14-;
CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7-; CH3(CH2)4CH=CHCH2CH=CH(CH2)7-; CH3CH2CH=CHCH2CH=CHCH2CH=CH(CH2)7-;或 CH3(CH2)4[CH=CHCH2〗4CH2CH2-。
該磷脂優(yōu)選含有二棕櫚酰磷脂酰膽械和碌脂酰甘油。
該磷脂優(yōu)選為DPPC和PG的混合物。更優(yōu)選地，該磷脂為 DPPC和PG以重量比為1:9到9:1的〉'昆合物，^尤選乂人6:4到8:2,更 虧尤選約為7:3。 DPPC可以通過4吏用Baer & Bachrea,Can. J. of Biochem. Physiol 1959,37, page 953的方法進(jìn)4亍甘油石粦酰月旦石咸的酰4匕 來制備，并且可以乂人Sigma (London) Ltd商購。PG可以通過 Comfurions et al, Biochem. Biophys Acta 1977,488, pages 36 to 42和 Dawson, Biochem J. 1967， 102， pages 205 to 210的方》去通過蛋黃石粦 脂酰膽堿制備，或從其它磷脂酰膽堿，例如大豆磷脂酰膽堿制備。
當(dāng)在諸如氯仿之類的常用溶劑中與DPPC共沉淀時，PG與 DPPC形成細(xì)粉。優(yōu)選地，該磷脂為DPPC與衍生自蛋黃磷脂酰膽 堿的磷脂酰甘油的混合物，其導(dǎo)致磷脂?；衔锉籆16、 C18(飽 和或不々包和)和C20 (不々包和)?；幕旌衔锼帧礁?。這些^ft合物 是具有化學(xué)式(I )或(II )的化合物，其中R'和112優(yōu)選地各自 獨立地代表一個具有15個^友原子的烴基、具有17個,友原子的々包和 或不飽和烴基和具有19個》灰原子的不々包和烴基。
商品化的合成磷脂產(chǎn)品的實例包括Surfaxin (Discovery Labs)， 也稱為露西納表面活性劑(lucinactant),其含有26摩爾4分(molar part)的DPPC、 8摩爾4分的POPG、 5摩爾4分的PA和1摩爾^分的 KL-4;肺表面活性因子(Lung Surfactant Factor, LSF(Altana)), 也稱為盧舒普肽(lusupultide)，其含有重組體SP-C、 DPPC、 PG和 PA;灃谷康生(Exosurf) (GSK,德國)，由DPPC ( ~ 84% )、鯨蠟 西孚禾口泰〉各沙泊 (tyloxapol )纟且成；或口票口馬可Jt旦(Britannia Pharmaceuticals)，由DPPC和PG以重量比7:3混合的混合物組成， 它們可以用于本發(fā)明。
該磷脂優(yōu)選地是一種其熔化溫度等于或低于體溫(即接受治療 的人體或動物的體溫)的磷脂或磷脂的混合物。這種磷脂混合物優(yōu) 選含有熔化溫度等于或低于體溫的擴散石粦脂(spreading phopholipid),例如PG、 PE、 PS或PI。
該磷脂優(yōu)選以每平方厘米發(fā)炎區(qū)域從1 fig,優(yōu)選從10 jig，更 伊匸選乂人50 |ag到1000 |ig,伊C選到800 |ag,更4尤選到300 |ug的比率 使用。
該磷脂優(yōu)選以干粉的形式使用。 一般地，粉狀磷脂的粒徑可以 在0.5 jam至U 100 |im范圍內(nèi)，更適合0.5 至)J 20 pm, j尤選0.5 jLim 到10|iim。該石岸脂優(yōu)選為表面活性石粦脂(SAPL)。
根據(jù)本發(fā)明的磷脂或磷脂組合物優(yōu)選用于炎癥的治療。適合使 用本發(fā)明治療的炎癥為發(fā)炎的傷口、自身免疫病癥(例如關(guān)節(jié)炎)、 過敏性病癥(例如季節(jié)性哮喘、常年性孝喘、鼻炎、花粉癥)，和/ 或至丈每丈反應(yīng)(例如昆蟲咬傷)。
本發(fā)明治療的發(fā)炎傷口優(yōu)選為不是由外科手術(shù)導(dǎo)致的人或動 物體表面的創(chuàng)口或擦傷。接受治療的人或動物體表面可選為體內(nèi)表 面或體夕卜表面。
本發(fā)明中炎癥的治療優(yōu)選包4舌抑制淋巴細(xì)"包分泌和/或T-細(xì)胞增殖。
根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物含有藥學(xué)可接受的賦形劑?？梢允褂?任何適合的賦形劑，優(yōu)選無水賦形劑。當(dāng)載體或稀釋劑為液體時， 其優(yōu)選為非水賦形劑。該賦形劑優(yōu)選含有表面活性劑?！嚼粲帽砻婊?性劑是有益的，因為其使得溶化溫度高于體溫的磷脂可以用在該組 合物中。更優(yōu)選地，該表面活性劑為藥學(xué)可接受的表面活性劑或疏 水蛋白。這種試劑的實例包括21個氨基酸合成的肽KL-4;非離 子型表面活性劑泰洛沙泊；鯨蠟醇(或十六醇)；或棕櫚酸膽甾醇 酯。另一種適合的賦形劑為種蛋白質(zhì)，尤其是改善吸收的蛋白質(zhì)， 例如脫輔基蛋白B。
當(dāng)該組合物以液體的形式4是供時，賦形劑優(yōu)選包括磷脂被分散 或溶解在其中的載液。該載液通常是在體溫下基本不揮發(fā)或僅少量
揮發(fā)的載液。適合的載體包括生理學(xué)可接受的二醇，尤其是丙二醇、 聚乙二醇和/或丙三醇。
該組合物可選;也以液態(tài)、半液態(tài)或糊狀l是供。糊狀物可以這樣 制備僅將磷脂分散到適合的載體中，或者，在適當(dāng)?shù)臅r候，將磷 脂;容解于熱載體中，并讓石粦脂在冷卻時，伊。選在形成糊狀物的加泮+ 過程中沉淀成為粉末。丙二醇作為載體尤其有效，因為在室溫下磷 脂可以在其中分散為糊狀物，而在體溫下形成流動的溶液。同樣也 可以1吏用聚乙二醇，其在室溫下為蠟狀固體而在體溫下為液態(tài)，例 如PEG 600。石壽脂在丙二醇中的多種分散體已經(jīng)在美國專利第 6133249號中^己載，其全部內(nèi)容以引用形式并入到本文中。
才艮據(jù)本發(fā)明，還才是供了一種治療炎癥的方法，該方法包括對需 要這種治療的人類或動物患者施用治療有效量的磷脂。該磷脂優(yōu)選 為根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物的形式。


使用下列附圖來圖示說明本發(fā)明，附圖不構(gòu)成對權(quán)利要求范圍
的限制
圖1是2個小時前二者中之一通過不同量嘌嗎可坦預(yù)處理的T-細(xì)胞相對于對照的抑制百分率的對比圖；和
圖2為在用D-9 DPPC (稱氘代磷脂酰膽堿)培養(yǎng)24小時之后 的B3Z磷脂酰膽堿(稱磷脂酰膽堿)的ESI-MS質(zhì)i普圖。
具體實施例方式
現(xiàn)在用下列實施例來舉例說明本發(fā)明，其不構(gòu)成對權(quán)利要求范 圍的限制。
實施例中的試—驗被設(shè)計為評價嘌嗎可坦和淋巴細(xì)胞系的免疫 細(xì)胞之間相互作用的機制。試驗表明，在導(dǎo)致細(xì)胞免疫應(yīng)答的抑制 率大于50%的濃度下，對于大部分細(xì)胞磷脂成分僅有非常有限的改 變。然而由使用噤嗎可坦培養(yǎng)而導(dǎo)致的膜磷脂成分的改變具有4交高 的可重現(xiàn)性。這些結(jié)果表明，嘌嗎可坦對細(xì)胞免疫應(yīng)答的抑制作用 不能歸結(jié)于總膜細(xì)胞磷脂組分的改變，而是通過更專門更有針對性 的才幾制一皮調(diào)節(jié)。
實施例1:
用噤嗎可坦(70%的二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、 30%的蛋 黃磷脂酰甘油)在0 mM-3.6 mM的濃度下培養(yǎng)小鼠T-細(xì)胞雜交瘤 細(xì)胞(B3Z細(xì)月包，卵清蛋白特異的，帶有受NFAT調(diào)控的p-半乳糖 苷酶報告結(jié)構(gòu)(LacZ)) 0-2小時。然后用卵清蛋白衍生的肽在指定 濃度的嘌嗎可坦的存在下刺激細(xì)胞24小時。通過LacZ表達(dá)測定細(xì) 胞活化情況，通過p-半乳糖苷酶反應(yīng)產(chǎn)物的形成進(jìn)行比色法監(jiān)測。
結(jié)果在圖1中示出?？梢钥闯?，通過用0.22mM。票嗎可坦i咅養(yǎng)， B3Z細(xì)月包的活化#皮抑制了 39%。在3.6 mM時抑制達(dá)到69%。在細(xì) 胞刺激之前2小時的預(yù)培養(yǎng)并沒有增強對。票嗎可坦的這種抑制應(yīng)答 的程度。這種應(yīng)答表明，對嘌嗎可坦的抑制應(yīng)答是十分迅速的并且 不需要事先改變細(xì)胞膜磷脂組成。
實施例2:
B3Z纟田月包用3.6 mM的。票嗎可坦無菌乳'液i咅養(yǎng)達(dá)到24小時，在該乳 液中，用含有穩(wěn)定同位素氘(曱基-d9)-膽石咸的DPPC (d9-DPPC) 代替7。/。(w: w)的DPPC。在培養(yǎng)2小時、6小時或24小時之后， 使用氯仿和甲醇提取總細(xì)胞脂質(zhì)體，并用電噴霧電離質(zhì)語法定量其 磷脂組分。天然磷脂酰膽石咸(PC)類是通過m/z 184母離子掃描確 定的，而含有(甲基-d9 )標(biāo)記的PC類是通過m/ z 193的同樣的掃 4苗確定的。
在對照的B3Z細(xì)胞中，DPPC是含量非常少的成分。用噤嗎可 坦培養(yǎng)2小時i"吏細(xì)月包的DPPC含量增力口了 280%, <旦DPPC的纟色對 濃度,人未超過細(xì)月包PC的10%。在培養(yǎng)生長細(xì)月包24小時之后，纟田月包 數(shù)目和總膜磷脂濃度都加倍。然而甚至在這些條件下，總細(xì)胞DPPC
乂人未超過在2小時時7見察的10%。這些結(jié)果表明，甚至在噤嗎可坦 持續(xù)以2(H咅的濃度過量存在(以加入的。票嗎可坦與測量的細(xì)力包PC 濃度的濃度比計算)時，嘌嗎可坦的吸收也是有限的并容易達(dá)到々包和。
通過3艮《宗在該調(diào)整的噤嗎可坦中d9-DPPC成分的結(jié)果(fate )， 證明了 。票嗎可坦被直接結(jié)合到B3Z細(xì)胞PC中。這些分析結(jié)果說明， 到24小時為止，免疫細(xì)力包吸收的噤嗎可坦PC的50%以上仍然以 DPPC的形式存在，其剩余部分被轉(zhuǎn)化為更不飽和的PC分子。圖2 i^明了這些結(jié)果。
權(quán)利要求
1.一種用于治療過敏性炎癥的磷脂，包括二?；〈牧字；?。
2. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的磷脂，具有化學(xué)式(II ):
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷脂，具有化學(xué)式(I ):<formula>formula see original document page 2</formula>、0z其中W和112各自獨立地代表具有13至21個碳原子的々包 和或不々包和烴基；優(yōu)選地，W和W各自獨立地代表具有15至 19個碳原子的飽和或不飽和烴基；以及R 代表氫原子或膽堿、甘油、乙醇胺、絲氨酸或肌醇基團； 優(yōu)選地，R3代表膽;咸或甘油。<formula>formula see original document page 2</formula>
4. 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的磷脂，其中R 代表甘油并且R1 和W各自獨立地代表CH3(CH2)14-;CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7-; CH3(CH2)4CH=CHCH2CH=CH(CH2)7-; CH3CH2CH=CHCH2CH=CHCH2CH=CH(CH2)7-;或 CH3(CH2)4[CH=CHCH2]4CH2CH2-。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項所述的磷脂，其為磷脂酰膽堿、 石粦脂酰甘油、^粦脂酰乙醇胺、》壽脂酰絲氨酸、》奔脂酰力幾醇，和 /或^舞脂酸。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項所述的磷脂，其為二棕櫚酰磷脂 酰月旦石威和石粦脂酰甘油以重量比1:9到9:1, <尤選/人6:4到8:2, 更優(yōu)選約7:3的混合物。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項所述的;粦脂，其為合成磷脂。
8. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的磷脂，其以每平方厘米發(fā)炎 區(qū)域從1昭，優(yōu)選從10嗎，更優(yōu)選從50嗎至'J IOOO叱，優(yōu)選 ，)J 800 更4尤選至)J 300 fig的t匕4M吏用。
9. 4艮據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的磷脂，其為干粉形式。
10. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的磷脂，其中所述治療包括抑 制'淋巴細(xì)力包分泌。
11. 一種用于治療過每文性炎癥的藥物組合物，其包含一種具有二酰 基取代的磷脂酰基的磷脂，以及藥學(xué)可接受的賦形劑。
12. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的組合物，其中所述磷脂如權(quán)利要求2 至10中的4壬一項所限定。
13. 根據(jù)權(quán)利要求11或12所述的組合物，其中所述治療包括抑制 -淋巴細(xì)力包分泌。
14. 才艮據(jù)權(quán)利要求11至13中任一項所述的組合物，其中所述賦形 劑是表面活性劑、蛋白質(zhì)，和/或載液。
15. 權(quán)利要求1至10中任一項所述的磷脂或權(quán)利要求11至14中 任一項所述的藥物組合物在制備用于治療過每丈性炎癥的藥品 中的用途。
16. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的用途，其中所述治療包括抑制淋巴細(xì) 胞分泌。
17. —種用于治療過每文性炎癥的方法，包纟舌向需要這種治療的人或 動物患者施用治療有效量的具有二酰基耳又代的磷脂?；牧字?br> 18. 根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述磷脂如權(quán)利要求2至 10中i"壬一項所限定。
19. 根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述磷脂是以權(quán)利要求11 至14中的4壬一項所限定的藥物組合物的形式。
20. 才艮據(jù)4又利要求17至19中任一項所述的方法，其中所述》壽脂抑 制-淋巴細(xì)力包分)必。
全文摘要
用于治療過敏性炎癥的含有二?；〈牧字；牧字秃羞@種磷脂的藥物組合物，以及一種治療過敏性炎癥的方法。該磷脂尤其是一種稱為嘌嗎可坦的磷脂混合物。
文檔編號A61K31/683GK101180063SQ200680017502
公開日2008年5月14日 申請日期2006年5月23日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月23日
發(fā)明者克里斯托弗·平恩, 安東尼·波斯特爾, 德里克·艾倫·伍德科克 申請人:大不列顛藥品有限公司