專利名稱：丹參丹酚酸a的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種丹參丹酚酸A的制備方法，丹酚酸A的結(jié)構(gòu)如下 技術(shù)背景丹參是最常用的藥材之一，用于治療心絞痛、高血壓、冠心病和中風(fēng)等心腦血管疾病。但一般用的都是從丹參中提取的粗提物或直接用丹參飲片。近二十多年，丹參的主要活性成分丹酚酸類化合物陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)。體外實驗結(jié)果顯示，丹酚酸類化合物除了用于治療心腦血管疾病，還可治療多種疾病，如肝病、腎病、消化潰瘍、腫瘤等。丹參總酚酸中以丹酚酸B含量最高，因此，人們開發(fā)的重點集中于丹酚酸B，而含量較低而活性較強的丹酚酸A被人們忽略。
杜冠華等人對丹酚酸A的活性進行了大量研究，發(fā)現(xiàn)丹酚酸A對大鼠離體心肌缺血再灌注損傷有明顯的保護作用，對小鼠腦缺血再灌注引起的腦損傷有保護作用，對樟柳堿或東莨菪堿引起的小鼠記憶獲得障礙具有明顯的改善作用，對大鼠半乳糖性白內(nèi)障形成有抑制作用，因此在心腦血管方向有良好的療效。
中國專利CN1397276A，2003年公開了水或醇提、樹脂層析，再經(jīng)硅膠柱層析的純化制備丹酚酸A的方法。中國專利CN1513848A，2004年公開了采用水溫浸、離心、超濾、調(diào)酸、有機溶劑萃取再經(jīng)反相柱層析制備丹酚酸A的方法。
由于丹酚酸A在藥材中含量低，甚至沒有，因此丹酚酸A產(chǎn)率低，生產(chǎn)成本高，在工業(yè)大生產(chǎn)上有一定的局限性，實際上并不能從根本上解決丹酚酸A的工業(yè)生產(chǎn)問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，提供一種丹酚酸A的制備方法。
本發(fā)明丹參丹酚酸A的制備方法，其工藝步驟為1、提取在水或乙醇水溶液作為提取溶劑時，溫浸溫度為50～99℃，采用乙醇水溶液作為提取溶劑時濃度為10％～95％。提取的方法可以采用回流法、溫浸法?，F(xiàn)以乙醇回流提取的方法為例進行說明。
丹參粗粉，加10倍量60％乙醇回流提取3次，每次1.5小時，濾過。
合并提取液，采用過濾，自然沉淀或離心的方法，初步除去提取液中固體雜質(zhì)。
2、柱層析純化丹酚酸A(1)采用特選填料制備色譜柱；(2)色譜柱活化；(3)溶液經(jīng)色譜柱吸附，用水、稀醇水溶液或丙酮-水溶液洗脫，除去雜質(zhì)；(4)用適當(dāng)濃度的醇水溶液或丙酮-水溶液或乙腈-水溶液洗脫，減壓或常壓濃縮至洗脫液無有機溶劑在上述步驟(1)中，特選填料是大孔樹脂類、離子交換樹脂、MCI-GELCHP-20P、Sephadex LH-20凝膠、或C18、C8鍵合相等色譜柱填料，推薦方案為用非極性或弱極性的大孔樹脂做色譜柱填料，優(yōu)選為聚苯乙烯骨架大孔樹脂。
上述步驟(2)中色譜柱活化的方法可用丙酮、甲醇、乙腈或其他有機溶劑與水的混合物，也可用堿-水溶液，或堿醇溶液活化。
上述步驟(3)中，洗脫用水可含微量的酸或無機鹽。
上述步驟(3)中，可以單用水洗脫雜質(zhì)或單用稀醇水溶液或低濃度的丙酮-水溶劑洗脫雜質(zhì)，也可先用水洗脫然后再用稀醇水溶液或低濃度的丙酮-水溶液洗脫雜質(zhì)。
上述步驟(3)中，稀醇水溶液等溶劑可以為甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等醇的水溶液，也可采用乙腈的水溶液，或它們的混合物。
上述步驟(3)中，稀醇水溶液等溶劑的濃度一般在40％以下，最好用20-30％的濃度，低濃度的丙酮-水溶液常用的丙酮含量一般在50％以下，最好為10-30％的濃度。
上述步驟(4)中，適當(dāng)濃度的丙酮-水、醇水溶液或乙腈-水溶液中，有機相所占比例一般大于20％，最好用35％～60％的濃度。所述醇水溶液等溶劑可以為甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等醇的水溶液，或它們的混合物。
3、調(diào)PH值有機溶劑萃取將如上溶液用酸或堿調(diào)PH值至2～7，經(jīng)有機溶劑萃取，然后分離有機溶劑得含高含量丹酚酸A溶液。優(yōu)選PH值范圍為3～5。有機溶劑優(yōu)選為乙酸酯類，可以是乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯等乙酸酯類溶劑，或它們的混合物。
4、干燥萃取液的干燥可采用一步法，也可采用兩步法。兩步法為先在常壓或減壓條件下濃縮，然后采用真空干燥或冷凍干燥等方法干燥。一步法采用減壓濃縮干燥得到丹酚酸A成品。
本發(fā)明丹參丹酚酸A的制備方法，用水或醇提取，主要是把丹參酚酸類化合物提取完全，是丹酚酸A產(chǎn)率提高的基礎(chǔ)。柱層析時由于在洗脫去雜質(zhì)的過程采用水和低濃度醇溶劑，使提取液中的雜質(zhì)得到進一步除去。在丹酚酸A的洗脫過程中，由于采用適當(dāng)濃度的有機溶劑-水溶液，使丹酚酸A與其它成分得到較好分離；經(jīng)過柱層析后，還有少量雜質(zhì)存在，經(jīng)過調(diào)節(jié)PH值有機溶劑萃取，最終制得了純度較高的丹酚酸A。最終提取物得量達(dá)3‰以上，丹酚酸A含量達(dá)到90％以上，且質(zhì)量穩(wěn)定、工藝成熟、可以大規(guī)模生產(chǎn)。與其它丹酚酸A的制備方法相比，產(chǎn)率大大提高，成本降低。對于提高丹參療效，充分利用中藥材資源等具有很重要的意義。
具體實施例下面結(jié)合具體實施例，對本發(fā)明及一步詳細(xì)說明實施例一丹酚酸A的制備方法，其工藝步驟為1、水提取(溫浸法)丹參粗粉，加8倍量水80℃溫浸3次，每次1.0小時，濾過。
2、柱層析純化丹酚酸A合并濾液離心(4000轉(zhuǎn)/分鐘)10分鐘，取上清液過1400大孔吸附樹脂柱，先用水洗至糖檢測反應(yīng)為陰性，改用20％乙醇洗脫至FeCl3反應(yīng)為陰性。
3、再用40％乙醇洗脫至FeCl3反應(yīng)為陰性，收集洗脫液，60℃減壓濃縮至無醇味。
4、調(diào)PH值，有機溶劑萃取加鹽酸調(diào)節(jié)PH值至3～5，用藥液1.5倍量體積的乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯相。
5、濃縮干燥減壓濃縮萃取液至浸膏狀，60℃真空干燥6小時，得淡黃色粉末，即為丹參丹酚酸A。
實施例二與實施例一基本相同，所不同的是提取過程為60％乙醇水溶液回流提取。具體方法如下丹參粗粉，加10倍量60％乙醇回流提取3次，每次1.5小時，濾過。
實施例三與實施例一基本相同，所不同的是提取液離心后采用過濾初步除去固體雜質(zhì)。
實施例四與實施例一基本相同，所不同的是實施例一中的工藝步驟2中，直接用10％乙醇水溶液洗脫，除去雜質(zhì)。
實施例五與實施例一基本相同，所不同的是實施例一中的工藝步驟3中，用80％乙醇水溶液洗脫丹酚酸A。
實施例六與實施例一基本相同，所不同的是濃縮洗脫液時采用常壓濃縮。
實施例七與實施例一基本相同，所不同的是調(diào)PH值有機溶劑萃取時調(diào)PH值至2～3。
實施例八與實施例一基本相同，所不同的是調(diào)PH值有機溶劑萃取時采用的有機溶劑為乙酸丁酯。
實施例九與實施例一基本相同，所不同的是濃縮干燥采用一步法直接減壓濃縮干燥得到丹酚酸A成品。
實施例十與實施例一基本相同，所不同的是在柱層析分離、純化丹酚酸A的洗脫過程中，采用的是甲醇水溶液。
實施例十一與實施例一基本相同，所不同的是在柱層析分離、純化丹酚酸A的洗脫過程中，采用的是丙酮-水溶液。
實施例十二與實施例一基本相同，所不同的是在柱層析分離、純化丹酚酸A的洗脫過程中，采用的是乙腈水溶液。
實施例十三與實施例一基本相同，所不同的是在柱層析分離、純化丹酚酸A的洗脫過程中，采用的MCI-GEL CHP-20P作色譜柱填料。
實施例十四與實施例一基本相同，所不同的是在柱層析分離、純化丹酚酸A的洗脫過程中，采用C18鍵合相作色譜柱填料。
實施例十五與實施例一基本相同，所不同的是在柱層析分離、純化丹酚酸A的洗脫過程中，采用的C8鍵合相作色譜柱填料。
實施例十六與實施例一基本相同，所不同的是在柱層析分離、純化丹酚酸A的洗脫過程中，采用的Sephadex LH-20作色譜柱填料。
本發(fā)明所要求保護的具體技術(shù)方案，不限于上述實施例(具體試驗結(jié)果見下頁附表1)所表達(dá)的技術(shù)方案的具體組合。
附表1



使用儀器類型高效液相色譜儀梯度方法恒流檢測器紫外檢測器 儀器型號Agilent 1100檢測波長285nm柱型號Kromasil KR100-7C18柱(250×4.6mm)積分方法面積歸一法圖1實施例四產(chǎn)品高效液相含量測定2實施例六產(chǎn)品高效液相含量測定3實施例八產(chǎn)品高效液相含量測定4實施例十六產(chǎn)品高效液相含量測定圖
權(quán)利要求
1.一種丹參丹酚酸A的制備方法，其工藝步驟為步驟一、提取提取為將丹參飲片或粉碎的丹參采用水或濃度10-95％的乙醇作為提取溶劑，采用溫浸、回流法提取，采用過濾、自然沉淀或離心方法初步除去固體雜質(zhì)。步驟二、柱層析純化丹酚酸A(1)采用填料制備色譜柱；(2)色譜柱活化；(3)溶液經(jīng)色譜柱吸附，用水、40％以下濃度的稀醇水溶液或50％以下濃度的丙酮水溶液洗脫，除去雜質(zhì)。(4)再用有機相占比例大于20％的醇水溶液或丙酮-水溶液或乙腈-水溶液洗脫，減壓或常壓濃縮至洗脫液無有機溶劑。步驟三、調(diào)PH值有機溶劑萃取將如上溶液用酸或堿調(diào)PH值至2～7，經(jīng)有機溶劑萃取，然后分離有機溶劑得高含量丹酚酸A溶液。步驟四、濃縮干燥。濃縮采用減壓濃縮或常壓濃縮，干燥采用真空干燥或冷凍干燥。
2.權(quán)利要求1所述的丹參丹酚酸A的制備方法，其特征是水或乙醇水溶液作為提取溶劑時，溫浸溫度為50～99℃。
3.權(quán)利要求1所述的丹參丹酚酸A的制備方法，步驟二柱層析純化丹酚酸A(1)采用填料制各色譜柱，所采用的用于制備色譜柱的填料是大孔樹脂類、離子交換樹脂、MCI-GEL CHP-20P、Sephadex LH-20凝膠、或C18、C8鍵合相色譜柱填料。
4.權(quán)利要求1所述的丹參丹酚酸A的制備方法，步驟二柱層析純化丹酚酸A(1)采用填料制備色譜柱，采用的填料為非極性或弱極性的大孔樹脂。
5.權(quán)利要求3或權(quán)利要求4所述的丹參丹酚酸A的制備方法，所選用的是聚苯乙烯骨架的大孔樹脂。
6.權(quán)利要求1所述的丹參丹酚酸A的制備方法，步驟三調(diào)PH值有機溶劑萃取中，PH值范圍為3～5，有機溶劑為乙酸酯類。
7.權(quán)利要求6所述的丹參丹酚酸A的制備方法，乙酸酯類是乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯或它們的混合物。
8.權(quán)利要求1所述的丹參丹酚酸A的制備方法，步驟二中所述的稀醇水溶液或醇水溶液指的是甲醇、乙醇、丙醇、丁醇的水溶液，或它們的混合物。
9.權(quán)利要求1所述的丹參丹酚酸A的制備方法，步驟二(3)中的稀醇水溶液和丙酮水溶液是稀醇水溶液20-30％的濃度；丙酮水溶液10-30％的濃度。
10.權(quán)利要求1所述的丹參丹酚酸A的制備方法，步驟二(4)中的丙酮-水、醇水溶液或乙腈-水溶液中，有機相濃度為35～60％。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種丹參丹酚酸A的制備方法。將丹參藥材用水或醇提取。初步除去固體雜質(zhì)，柱色譜純化丹酚酸A，濃縮洗脫液，再經(jīng)調(diào)pH值有機溶劑萃取，濃縮干燥，即得丹酚酸A。用本發(fā)明方法制備丹酚酸A提取率高，純度好，提取物中丹酚酸A含量可達(dá)90％以上，且質(zhì)量穩(wěn)定，可大規(guī)模生產(chǎn)。
文檔編號A61K36/185GK101041620SQ200610165779
公開日2007年9月26日 申請日期2006年12月18日 優(yōu)先權(quán)日2006年7月13日
發(fā)明者黎豫杭, 柴建國, 張善飛, 潘迎鋒, 張建兵 申請人:正大青春寶藥業(yè)有限公司