專利名稱：：委陵菜屬植物總三萜提取物的制備方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及從薔薇科委陵菜屬植物提取、分離、制備具有生物活性的總三路提取物的方法，屬于中藥加工領域。
背景技術：
：薔薇科委陵菜屬(Potentilla)植物均具有清熱利濕，止血，殺蟲等功效，可用于治療肝炎、蟯蟲病、功能性子宮出血、外傷出血等。近年來民間用該屬多種植物治療糖尿病。例如委陵菜(PotentillaChinensisser.)，多裂委陵菜(P.multifidaL.)，翻白草(P.discolorBunge)等，均代茶飲用治療糖尿病。研究表明，它們治療糖尿病的有效成分是其三萜酸及其糖苷的有效部位，包括委陵菜酸(termenticacid)及其葡萄糖苷野薔薇苷(rosamultin)、euscaphicacid及其苷kaji-ichigosideF-l等。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage3</column></row><table>目前為止，還沒有文獻報道從委陵菜屬植物制備總三萜提取物的方法，特別是從委陵菜屬植物制備總三萜含量在50%以上的提取物的制備工藝。本發(fā)明提供了從委陵菜屬植物中提取總三萜提取物的方法。
發(fā)明內容本發(fā)明提供了從委陵菜屬植物中提取總三萜提取物的方法，本方法適用工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明的技術方案包括如下步驟1、取委陵菜屬植物全草藥材，制成常規(guī)飲片，用5—10倍30%—70%乙醇提取三次，提取液減壓濃縮至小體積并無乙醇氣味(不含乙醇)。2、上述濃縮后的提取液加水稀釋后，并且必要時濾去沉淀，上常規(guī)處理后的大孔樹脂柱，常規(guī)水洗脫至近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)。大孔樹脂為非極性大孔樹脂，包括苯乙烯樹脂，乙烯基苯乙烯樹脂，甲基苯乙烯樹脂。例如D101型大孔樹脂，AB-8型大孔樹。3、為了提高委陵菜屬總三萜的含量，可以再用水溶性有機溶劑低濃度的水溶液洗脫多糖和其它雜質。水溶性有機溶劑低濃度水溶液是20%以下的稀乙醇，或是25%以下的稀甲醇，或是20%以下的稀丙酮，或是15。/。以下的稀丙醇。4、用水溶性有機溶劑較高濃度的水溶液進行洗脫，收集洗脫液，濃縮至小體積。水溶性有機溶劑較高濃度的水溶液是20%以上的乙醇水溶液，或是25%以上的甲醇水溶液，或是20%以上的丙酮水溶液，或是15%以上的丙醇溶液。5、濃縮至小體積的提取液，加水溶性有機溶劑至有機溶劑含量45%-85%進行沉淀，分取上層部分，減壓濃縮至干，即得委陵菜屬三萜提取物。水溶性有機溶劑是乙醇，或是丙酮，或是異丙醇，沉淀時，乙醇濃度為60%-85%，或者丙酮濃度為50%-80%，或者異丙醇濃度為45%-75%。用本工藝所制得的總三萜提取物含有委陵菜酸(termenticacid)及其葡萄糖苷野薔薇苷(rosamultin)、euscaphicacid及其苷kaji-ichigosideF-l等。其總三萜含量以野薔薇苷計可以在50%以上。委陵菜屬植物包括委陵菜(P.ChinensisSer.),多裂委陵菜(P.multifidaL.)，翻白草(P.discolorBunge)，云南翻白草(P-griffithiiHook.f.vax.velutirmCard.),三葉委陵菜(P.freynianaBornm)，莓葉委陵菜(P.fragarioidesL)，叉葉委陵菜(P.bifurcaL),蛇含委陵菜(P.kleinianaWightetArn.)，絹毛細蔓委陵菜(P.reptansLvar.sericophyllaFranch.),銀葉委陵菜(P.leuconotaD.Don),金老梅(P.arbusculaD.Don),長柔毛委陵菜(P.griffithiiHook.f.var.relulinaCard.),小葉金老梅(P.parvifoliaFisch.)，亮葉委陵菜(P.fulgensWall.)等。委陵菜屬植物總三萜提取物總三萜的含量測定方法。對照品溶液的制備精密稱取野薔薇苷對照品，加甲醇分別制成每1ml含野薔薇苷2mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取委陵菜屬植物總三萜提取物，加甲醇分別制成每1ml含委陵菜屬植物總三萜提取物約4mg的溶液，即得。分別吸取野薔薇苷對照品溶液(2mg/ml)40u1和60P1、供試液50P1于具塞刻度試管中，分別加8%香草醛乙醇試液0.5ml、72%硫酸試液5ml，充分搖勻后于60"C水浴中加熱30分鐘，立即用冰水浴冷卻10分鐘，取出，搖勻，平行操作兩份，以試劑做空白，照分光光度法于560nm波長處分別測定吸收度，通過吸收度可計算出各供試液中所含的委陵菜屬植物總三萜提取物總三萜。具體實施例方式用以下的實施例對本發(fā)明作具體說明，但本發(fā)明并不限于下列實施例包含的內容。取委陵菜屬植物委陵菜(P.ChinensisSer.)500g，用70%的甲醇4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用70%的甲醇4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用7(W的甲醇4000ml加熱回流提取l小時，傾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70°C以下濃縮至1000ml，并且無乙醇味，加水1000ml，去除沉淀，上己常規(guī)處理好的DIOI型大孔樹脂(3kg，D101型大孔樹脂為苯乙烯型)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質，至近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)，用5%的稀甲醇洗脫至洗脫液近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)后，用70%的甲醇5000ml洗脫。洗脫液真空濃縮至250ml,在攪拌下加酒精750ml，靜置，分取上層液，減壓濃縮至干，即得委陵菜屬植物總三萜提取物10克以上。化學成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野薔薇苷，含量以野蓄薇苷計50%以上。取委陵菜屬植物多裂委陵菜(P.multifidaL.)lkg，用50%的甲醇8000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用50%的甲醇8000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用50%的甲醇8000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中7(TC以下濃縮至1000ml,并且無甲醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已常規(guī)處理好的D2型大孔樹脂(3kg，D2型大孔樹脂為乙基苯乙烯型)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質，至近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)，用10%的稀甲醇洗至洗脫液近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)后，用50%的甲醇3000ml洗脫。洗脫液真空濃縮至500ml，在攪拌下加酒精1000ml，靜置，分取上層液，減壓濃縮至干，即得委陵菜屬植物總三萜提取物20克以上?；瘜W成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野薔薇苷，含量以野薔薇苷計50%以上。取委陵菜屬植物翻白草(P.discolorBunge)2kg，用30%的甲醇16升加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用30%的甲醇16升加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用30%的甲醇16升ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70°C以下濃縮至1000ml，并且無甲醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已常規(guī)處理好的DM2型大孔樹脂(3kg，DM2型大孔樹脂為2-甲基苯乙烯型)分離柱，用水洗去雜質，至近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)，用13%的稀甲醇洗至近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)后，用60%的甲醇10000ml洗脫。洗脫液真空濃縮至1000ml，在攪拌下加酒精4000ml，靜置，分取上層液，減壓濃縮至干，即得委陵菜屬植物總三萜提取物42.5克?；瘜W成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野薔薇苷，含量以野薔薇苷計52.7%。取委陵菜屬植物云南翻白草(P.griffithiiHook,f.var.velutinaCard.)500g，用60%的丙酮4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用60%的丙酮4000ml加熱回流提取l小時，傾取提取液，藥渣再用60%的丙酮4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70°C以下濃縮至1000ml，并且無丙酮味，加水1000ml，去除沉淀，上已常規(guī)處理好的MD型大孔樹脂(3kg，MD型大孔樹脂為a-甲基苯乙烯型)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質，至近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)，用4%的稀丙酮洗至洗脫液近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)后，用30%的丙酮25000ml洗脫。洗脫液真空濃縮至250ml，在攪拌下加丙酮500ml，靜置，分取上層液，減壓濃縮至干，即得委陵菜屬植物總三萜提取物13克以上?；瘜W成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野薔薇苷，含量以野薔薇苷計50%以上。取委陵菜屬植物三葉委陵菜(P.freynianaBornm)lkg，用45%的丙酮8000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用45%的丙酮8000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用45%的丙酮8000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70°C以下濃縮至1000ml，并且無丙酮味，加水1000ml，去除沉淀，上已常規(guī)處理好的DIOI型大孔樹脂(3kg,D101型大孔樹脂為苯乙烯型)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質，至近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)，用7%的稀丙酮洗至洗脫液近無色，用50%的丙酮50000ml洗脫。洗脫液真空濃縮至500ral，在攪拌下加丙酮1500ml,靜置，分取上層液，減壓濃縮至干，即得委陵菜屬植物總三萜提取物25.4克?；瘜W成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野薔薇苷，含量以野薔薇苷計52.挑。取委陵菜屬植物莓葉委陵菜(P.fragarioidesL)500g，用30%的丙酮4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用30%的丙酮4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用30%的丙酮4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70°C以下濃縮至1000ml，并且無丙酮味，加水lOOOml,去除沉淀，上已常規(guī)處理好的DIOI型大孔樹脂(3kg,D101型大孔樹脂為苯乙烯型)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質，至近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)，用10%的稀丙酮洗脫至洗脫液接近無色，用70%的丙酮3000ml洗脫。洗脫液真空濃縮至250ml，在攪拌下加丙酮1000ml，靜置，分取上層液，減壓濃縮至干，即得委陵菜屬植物總三萜提取物11.6克?；瘜W成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野薔薇苷，含量以野薔薇苷計50%以上。取委陵菜屬植物叉葉委陵菜(P.bifurcaL)500g，用70%的乙醇4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用70%的乙醇4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用70%的乙醇4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中7(TC以下濃縮至1000ml，并且無乙醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已常規(guī)處理好的D101型大孔樹脂(3kg，D101型大孔樹脂為苯乙烯型)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質，至近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)，用4%的稀乙醇洗至洗脫液近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)后，用2(m的乙醇15000ml洗脫。洗脫液真空濃縮至250ml，在攪拌下加異丙醇750ml，靜置，分取上層液，減壓濃縮至干，即得委陵菜屬植物總三萜提取物7.4克。化學成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野薔薇苷，含量以野薔薇苷計50.0%。取委陵菜屬植物蛇含委陵菜(P.kleinianaWightetArn.)500g，用50%的乙醇4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用50%的乙醇4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用50%的乙醇4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70°C以下濃縮至1000ml，并且無乙醇味，加水1000ml，去除沉淀，上上已常規(guī)處理好的DIOI型大孔樹脂(2kg，D101型大孔樹脂為苯乙烯型)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質，至近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)，用7%的異丙醇洗至洗脫液近無色，用40%的異丙醇30000ral洗脫。洗脫液真空濃縮至250ml,在攪拌下加異丙醇500ml，靜置，分取上層液，減壓濃縮至干，即得委陵菜屬植物總三萜提取物12克以上?；瘜W成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野薔薇苷，含量以野薔薇苷計50%以上。取委陵菜屬植物絹毛細蔓委陵菜(P.r印tansLvar.sericophyllaFranch.)500g，用30%的乙醇4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用30%的乙醇4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用30%的乙醇4000inl加熱回流提取l小時，傾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70。C以下濃縮至1000ml，并且無乙醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已常規(guī)處理好的D101型大孔樹脂G.5kg，D101型大孔樹脂為苯乙烯型)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質，至近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)，用10%的稀乙醇洗至洗脫液近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)后，用4(^的乙醇40000ml洗脫。洗脫液真空濃縮至250ml，在攪拌下加異丙醇1000ml，靜置，分取上層液，減壓濃縮至干，即得委陵菜屬植物總三萜提取物12.5克?；瘜W成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野薔薇苷，含量以野薔薇苷計52.7%。取委陵菜屬植物銀葉委陵菜(P.leuconotaD.Don)500g，用水4000ral加熱煎煮0.5小時，傾取提取液，藥渣再用水3000ml加熱煎煮1小時，傾取提取液，藥渣再用水4000ml加熱煎煮0.5小時，傾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，上已常規(guī)處理好的D101型大孔樹脂(1.5kg，D101型大孔樹脂為苯乙烯型)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質，至近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)，用4%的稀乙醇洗至洗脫液近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)后，用40%的乙醇5000ml洗脫。40%的乙醇洗脫液真空濃縮至250ml，在攪拌下加異丙醇250ml，靜置，分取上層液，減壓濃縮至干，即得委陵菜屬植物總三萜提取物13.3克?；瘜W成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野薔薇苷，含量以野薔薇苷計51.1%。[實施例H"^—]取委陵菜屬植物金老梅(P.arbusculaD.Don)lkg，用水6000ml加熱煎煮0.5小時，傾取提取液，藥渣再用水4000ml加熱煎煮l小時，傾取提取液，藥渣再用水4000ml加熱煎煮1小時，傾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，上己常規(guī)處理好的D101型大孔樹脂(3kg，D101型大孔樹脂為苯乙烯型)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質，至近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)，續(xù)用7%的稀乙醇洗至洗脫液近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)后，用40%的乙醇4000ml洗脫。40%的乙醇洗脫液真空濃縮至500ml，在攪拌下加丙酮500ml，靜置，分取上層液，減壓濃縮至干，即得委陵菜屬植物總三萜提取物20克以上?；瘜W成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野薔薇苷，含量以野薔薇苷計50%以上。[實施例十二]取委陵菜屬植物長柔毛委陵菜(P.griffithiiHook.f.置.relulinaCard.)2kg，用水12升加熱煎煮0.5小時，傾取提取液，藥渣再用水8升加熱煎煮l小時，傾取提取液，藥渣再用水8升加熱煎煮小時，傾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，上已常規(guī)處理好的DIOI型大孔樹脂(3kg，D101型大孔樹脂為苯乙烯型)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質，至近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)，用10%的稀乙醇洗至洗脫液近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)后，用40%的乙醇4000ml洗脫。40%的乙醇洗脫液真空濃縮至干，即得委陵菜屬植物總三萜提取物50克以上。化學成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野薔薇苷。取委陵菜屬植物小葉金老梅(P.parvifoliaFisch.)500g，用水4000ml加熱煎煮0.5小時，傾取提取液，藥渣再用水3000ml加熱煎煮1小時，傾取提取液，藥渣再用水3000ml加熱煎煮1小時，傾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，上已常規(guī)處理好的D101型大孔樹脂(3kg，D101型大孔樹脂為苯乙烯型)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質，至近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)，用40%的乙醇4000ml洗脫。40%的乙醇洗脫液真空濃縮至干，即得委陵菜屬植物總三萜提取物10克?；瘜W成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野薔薇苷。取委陵菜屬植物亮葉委陵菜(P.fulgensWall.)10kg，用水60升加熱煎煮30小時，傾取提取液，藥渣再用水50升加熱煎煮1小時，傾取提取液，藥渣再用水50升加熱煎煮1小時，傾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀，上已常規(guī)處理好的D101型大孔樹脂(3kg，D101型大孔樹脂為苯乙烯型)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質，至近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)，用5%的稀乙醇洗至洗脫液近無色，并且糖反應試驗陰性(molish反應陰性)后，用4CW的乙醇50000ml洗脫。洗脫液真空濃縮至5000ml，在攪拌下加酒精15000ml,靜置，分取上層液，減壓濃縮至干，即得委陵菜屬植物總三萜提取物350克以上?；瘜W成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野薔薇苷。權利要求1、一種委陵菜屬植物總三萜提取物的制備方法，其特征是委陵菜屬植物提取液通過大孔樹脂吸附分離，制備委陵菜屬植物總三萜提取物。2、按照權利要求1中所述的方法，其特征是委陵菜屬植物提取液水溶液通過大孔樹脂吸附后，再用水洗脫，用含有機溶劑的水溶液洗脫，洗脫液濃縮得委陵菜屬植物總三萜提取物。3、按照權利要求2中所述的方法，其特征是委陵菜屬植物提取水溶液通過大孔樹脂吸附后，用水洗脫，用含有機溶劑濃度較低的水溶液洗脫，再用有機溶劑濃度較高的水溶液洗脫，洗脫液濃縮后得委陵菜屬植物總三萜提取物。4、按照權利要求3中所述的方法，其特征是委陵菜屬植物提取水溶液通過大孔樹脂吸附后，用水洗脫，用含有機溶劑濃度較低的水溶液洗脫，再用有機溶劑濃度較高的水溶液洗脫，收集有機溶劑濃度較高的洗脫液，濃縮成小體積后，加入有機溶劑進行沉淀，分取上層清液，濃縮至干，即得委陵菜屬植物總三萜提取物。5、按照權利要求3，或4中所述的方法，其中含有機溶劑濃度較低的水溶液是低于10%的乙醇水溶液，或者低于15%的甲醇水溶液，或者低于10%的丙酮，或者低于8%的丙醇水溶液；含有機溶劑濃度較高的水溶液是高于10%的乙醇水溶液，或者高于15%的甲醇水溶液，或者高于10%的丙酮水溶液，或者高于8%的丙醇溶液。6、按照權利要求4中所述的方法，其特征是的用于沉淀的有機溶劑的濃度是乙醇濃度為60%-85%,或者是丙酮濃度為50%-80%，或者是異丙醇濃度為45%-75%。7、按照權利要求l，或2,或3,或4中所述的方法，其中委陵菜屬植物是委陵菜，或者是多裂委陵菜，或者是翻白草，或者是云南翻白草，或者是三葉委陵菜，或者是莓葉委陵菜，或者是莓葉委陵菜，或者是叉葉委陵菜，或者是蛇含委陵菜，或者是絹毛細蔓委陵菜，或者是銀葉委陵菜，或者是金老梅，或者是長柔毛委陵菜，或者是小葉金老梅，或者是亮葉委陵菜。8、按照權利要求l，或2，或3，或4中所述的方法，其中大孔樹脂是非極性大孔樹脂。9、按照權利要求l，或2，或3，或4中所述的方法，其中大孔樹脂是苯乙烯樹脂，或者是乙烯苯乙烯樹脂，或者是甲基苯乙烯樹脂。10、按照權利要求l，或2，或3，或4中所述的方法，其中委陵菜屬植物總三萜提取物含有委陵菜酸和/或野薔薇苷。全文摘要本發(fā)明涉及一種委陵菜屬植物總三萜提取物的制備方法，該方法是將委陵菜屬植物的提取物的水溶液用大孔樹脂吸附處理，用水洗脫后，用水溶性有機溶劑低濃度水溶液洗脫糖和其它雜質，再用水溶性有機溶劑較高濃度的水溶液進行洗脫，洗脫液濃縮成小體積，加乙醇產(chǎn)生沉淀后，分取上清液，減壓濃縮至干，即得委陵菜屬植物總三萜提取物。委陵菜屬植物總三萜提取物主要有效成分是委陵菜酸及其苷類化合物。文檔編號A61K36/73GK101172131SQ20061011420公開日2008年5月7日申請日期2006年11月1日優(yōu)先權日2006年11月1日發(fā)明者羅河生,趙曉霞申請人:中國醫(yī)藥研究開發(fā)中心有限公司