專(zhuān)利名稱(chēng)：含有腫節(jié)風(fēng)提取物的藥物組合物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物藥腫節(jié)風(fēng)，具體地說(shuō)是一種含有腫節(jié)風(fēng)及同科屬植物提取物的藥物組合物及其用途。
背景技術(shù)：
腫節(jié)風(fēng)(Sarcandra glabra(Thunb)Nakai)為金粟蘭科草珊瑚屬植物，干燥全草又名草珊瑚、九節(jié)茶、接骨木、駁骨茶、骨消風(fēng)等。為多年生常綠草本，分布于江西、安徽、浙江、湖南、湖北、四川、廣東、廣西等省，江西省為主要產(chǎn)地。腫節(jié)風(fēng)有活血祛瘀、止痛、清熱解毒等功效。用于治療常見(jiàn)炎癥、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。近代用于癌癥輔助治療，對(duì)多種惡性腫瘤如胃癌、胰腺癌、肝癌、食道癌、直腸癌等有輔助療效。腫節(jié)風(fēng)注射液、口服液、片劑用于血小板減少性紫癜患者升高血小板，也用于癌癥輔助治療。有報(bào)道腫節(jié)風(fēng)總黃酮類(lèi)提取物可用于血小板紫癜及癌癥輔助治療，但有效部位未達(dá)到50％以上(50％至99％)的純度，有效成分純度未達(dá)到85％以上(85％至99％)的純度，更無(wú)黃酮有效部位、皂苷有效部位、多糖有效部位的制劑。目前市售腫節(jié)風(fēng)注射液、口服液、片劑是粗制劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是要提供一種新的含有腫節(jié)風(fēng)提取物的藥物組合物及其用途，它含有腫節(jié)風(fēng)提取到的黃酮有效部位、有效成分，皂苷有效部位、多糖有效部位。其有效部位達(dá)到50％以上(50％至99％)的純度，有效成分純度達(dá)到85％以上(85％至99％)的純度。
本發(fā)明的目的可以采取以下方法來(lái)實(shí)現(xiàn)一種含有腫節(jié)風(fēng)提取物的藥物組合物，其特征在于它含有從腫節(jié)風(fēng)中提取出的有效部位和/或有效成分，包括黃酮，和/或皂苷，和/或多糖的有效部位，或以下黃酮有效成分中的一個(gè)或幾個(gè)異秦皮啶-7-O-葡萄糖苷、5，7-二羥基二氫黃酮、2′，6′-二羥基-4′-甲氧基查耳酮、異美五針?biāo)啥潼S酮、二氫楊梅樹(shù)皮素、蹄紋天竺葵素苷、落新婦苷、柚皮素4′，7-二甲醚，所述的腫節(jié)風(fēng)中提取出的有效部位的純度為50％至99％，所述的腫節(jié)風(fēng)中提取出的有效成分的純度為85％至99％。
所述的組合物的形式包括片劑包括一般口服片、含片、咀嚼片，針劑包括小針劑、大針劑、粉針劑、乳劑、混懸液，丸劑，滴丸，膠囊及軟膠囊，顆粒，泡騰劑，口服液，糖漿，乳劑，合劑，緩釋劑，控釋劑，靶向制劑及其它各種制劑。
所述的含有腫節(jié)風(fēng)提取物的藥物組合物的制備方法，其特征在于包括以下步驟總黃酮部位及成分的提取分離黃酮類(lèi)總提取物可以選擇以下的一種方法提取得到醇回流提取、醇滲漉提取或水煎煮，其中醇回流提取方法是取腫節(jié)風(fēng)藥材粗粉，用35％～95％乙醇6～10倍量作溶劑，浸漬1小時(shí)后，加熱回流提取2～4次，每次1～4小時(shí)，回收乙醇，干燥，即得總提物；醇滲漉提取方法是取腫節(jié)風(fēng)粗粉，用25％～95％乙醇作溶劑，浸漬后，以1～7ml/分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，回收乙醇，干燥，即得總提物；煎煮提取的方法是取腫節(jié)風(fēng)藥材加6～10倍量水煎煮，每次1～3小時(shí)，濾過(guò)，濾液合并，濃縮，干燥即得總提取物；分離精制總黃酮及其單體有效成分可以選擇以下的一種方法提取得到大孔樹(shù)脂吸附法、超臨界萃取法或有機(jī)溶劑提取法，其中有機(jī)溶劑提取法有機(jī)溶劑乙酸乙酯法提取腫節(jié)風(fēng)干浸膏中的總黃酮用水將腫節(jié)風(fēng)干膏超聲溶解，用乙酸乙酯反復(fù)萃取，得總黃酮；超臨界萃取法腫節(jié)風(fēng)總提取物，置入超臨界萃取器中，調(diào)節(jié)流量，壓力20-50MPa、溫度100-350℃、時(shí)間60-120min得萃取物總黃酮；大孔樹(shù)脂吸附法大孔吸附樹(shù)脂提取腫節(jié)風(fēng)干浸膏中的總黃酮取腫節(jié)風(fēng)總浸膏，用水稀釋后，再用恒流泵泵入已預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HBD-100大孔吸附，用水洗柱，水洗后用50～90％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，干燥得固形物即為總黃酮；干燥方法分離精制后的黃酮類(lèi)提取物可以采用烘干法、真空干燥法或噴霧干燥法。
總皂苷的提取分離總皂苷總提取物可以選擇以下的一種方法提取得到醇回流提取、醇滲漉提取或水煎煮提取，其中醇回流提取方法是取腫節(jié)風(fēng)藥材粗粉，用35％-95％乙醇6-10倍量作溶劑，浸漬1小時(shí)后，加熱回流提取2-4次，每次1-4小時(shí)，回收乙醇，濃縮液經(jīng)有機(jī)溶劑萃取，回收有機(jī)溶劑，大孔吸附樹(shù)脂處理，干燥，即得總提物；醇滲漉提取方法是取腫節(jié)風(fēng)粗粉，用25％-95％乙醇作溶劑，浸漬后，以1-7ml/分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，回收乙醇；濃縮液經(jīng)有機(jī)溶劑萃取，回收有機(jī)溶劑，大孔吸附樹(shù)脂處理，干燥，即得總提物；煎煮提取的方法是取腫節(jié)風(fēng)藥材加6-10倍量水煎煮，每次1-3小時(shí)，濾過(guò)，濾液合并，濃縮，濃縮液經(jīng)有機(jī)溶劑萃取，回收有機(jī)溶劑，大孔吸附樹(shù)脂處理，干燥即得總提取物。
分離精制總皂苷及其單體有效成分可以選擇以下的一種方法提取得到大孔樹(shù)脂吸附法、超臨界萃取法或有機(jī)溶劑提取法，其中大孔樹(shù)脂吸附法是總提取物先用乙酸乙脂處理，去除脂溶性物質(zhì)；再用正丁醇萃取水層的總皂苷；正丁醇萃取物回收有機(jī)溶劑，經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂富集進(jìn)一步去除雜質(zhì)；富集總皂苷的大孔吸附樹(shù)脂用70％乙醇洗脫，洗脫液用量3-5倍柱體積，洗脫物回收乙醇，干燥，得總皂苷。
干燥方法本發(fā)明分離精制后的總皂苷提取物可以采用烘干法、真空干燥法、噴霧干燥法或冷凍干燥法。
多糖有效部位的分離本發(fā)明的中藥腫節(jié)風(fēng)多糖提取物方法水提醇沉法取腫節(jié)風(fēng)藥材，水煎，過(guò)濾，用乙醇沉淀，離心，取沉淀物。反復(fù)幾次，再醇沉，過(guò)濾，干燥，無(wú)水乙醇、丙酮洗，干燥，得多糖部位。
大孔樹(shù)脂吸附法取腫節(jié)風(fēng)藥材，水煎，過(guò)濾，乙醇沉淀24-48小時(shí)，離心，取沉淀物加水溶解，通過(guò)大孔樹(shù)脂，水洗。洗出液用乙醇沉浸，反復(fù)幾次，再醇沉，過(guò)濾，無(wú)水乙醇、丙酮洗、干燥，得多糖部位。
大孔樹(shù)脂吸附、分離法取腫節(jié)風(fēng)總浸膏，用水稀釋后，通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，用水洗柱，洗柱液與吸附時(shí)流出液合并為溶液A。水洗后乙醇洗脫，收集洗脫液，將分離的溶液A泵入吸附柱進(jìn)行吸附。吸附完畢，水洗柱。洗柱液與吸附時(shí)的流出液合并，干燥，得固形物即為多糖部位。
所述的含有腫節(jié)風(fēng)提取物的藥物組合物的應(yīng)用，其特征在于應(yīng)用于抗腫瘤作用，增效減毒作用，抗腫瘤放、化療的毒性反應(yīng)包括減輕白細(xì)胞下降及血小板減少。
所述的含有腫節(jié)風(fēng)提取物的藥物組合物的應(yīng)用，其特征在于應(yīng)用于治療血熱妄行、皮膚紫斑、原發(fā)性血小板減少性紫癜及繼發(fā)性血小板減少性紫癜，升高血小板。
所述的含有腫節(jié)風(fēng)提取物的藥物組合物的應(yīng)用，其特征在于應(yīng)用于抗菌抗炎，治療咽喉炎、氣管支氣管炎、肺炎、角膜炎、蜂窩組織炎、闌尾炎。
具體實(shí)施例方式
下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施方案。
一、總黃酮部位及成分的提取分離及含量測(cè)定本發(fā)明的中藥腫節(jié)風(fēng)黃酮類(lèi)總提取物可以通過(guò)將腫節(jié)風(fēng)進(jìn)行醇回流提取、醇滲漉提取或水煎煮提取得到，其中A、醇回流提取方法是取腫節(jié)風(fēng)藥材粗粉，用35％-95％乙醇6-10倍量作溶劑，浸漬1小時(shí)后，加熱回流提取2-4次，每次1-4小時(shí)，回收乙醇，干燥，即得總提物；B、醇滲漉提取方法是取腫節(jié)風(fēng)粗粉，用25％-95％乙醇作溶劑，浸漬后，以1-7ml/分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，回收乙醇，干燥，即得總提物；C、煎煮提取的方法是取腫節(jié)風(fēng)藥材加6-10倍量水煎煮，每次1-3小時(shí)，濾過(guò)，濾液合并，濃縮，干燥即得總提取物。
分離精制上述A、B、C腫節(jié)風(fēng)提取物，任何1種再經(jīng)有機(jī)溶劑提取法、或大孔吸附樹(shù)脂吸附法、或超臨界萃取法分離精制獲得總黃酮。
機(jī)溶劑提取法有機(jī)溶劑乙酸乙酯法提取腫節(jié)風(fēng)干浸膏中的總黃酮用一定量的水將腫節(jié)風(fēng)干膏超聲溶解，用一定量的乙酸乙酯反復(fù)萃取，乙酸乙酯采用3因素，3水平正交試驗(yàn)確定工藝路萃取，得總黃酮的含量大于50％，總黃酮的回收率在80％以上。
超臨界萃取法腫節(jié)風(fēng)提取物，置入超臨界萃取器中，調(diào)節(jié)流量、壓力20MPa、溫度350C、時(shí)間120min得萃取物。測(cè)定萃取物中的總黃酮含量，總黃酮的回收率?？傸S酮的回收率總黃酮量大于50％，總黃酮的回收率在80％以上。
大孔樹(shù)脂吸附法大孔吸附樹(shù)脂提取腫節(jié)風(fēng)干浸膏中的總黃酮取腫節(jié)風(fēng)總浸膏，用水稀釋后，再用恒流泵泵入已預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HBD-100大孔吸附。用水洗柱，水洗后用50-90％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，干燥得固形物即為總黃酮，黃酮的含量大于50％，總黃酮的回收率在80％以上。
總黃酮含量測(cè)定對(duì)照品溶液制備精密稱(chēng)取105℃減壓干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品100mg，置100ml容量瓶中，加60％乙醇70ml，置水浴上微熱溶解，放冷，加60％乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取10ml，置50ml容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備精密吸取對(duì)照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，與6.0ml分別置25ml量瓶中，各加水5ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，用6ml水同法作空白，照分光光度法在500nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液制備精密稱(chēng)取總提物20mg，置25ml容量瓶中，加70％乙醇10ml，溶解，加水稀釋定容至刻度，搖勻，即得。精密吸取1ml，置25ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“各加水5ml”起依法操作，以供試品溶液1ml，加水稀釋至25ml作空白，過(guò)濾，取濾液依法測(cè)定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的重量，計(jì)算，即得。
經(jīng)測(cè)定總黃酮類(lèi)以蘆丁計(jì)算含達(dá)到50％以上至99％的純度。
干燥方法本發(fā)明分離精制后的黃酮類(lèi)提取物可以采用烘干法、真空干燥法、噴霧干燥法。烘干法、真空干燥法干燥時(shí)間長(zhǎng)，真空干燥前須在水浴上預(yù)干燥，將水分控制在20％以?xún)?nèi)，真空干燥時(shí)易拉干成蜂窩狀，干燥可在2-3天內(nèi)完成，反之，含水量高，真空干燥時(shí)會(huì)溢出，而烘干法所需時(shí)間更長(zhǎng)。噴霧干燥時(shí)間短，可在數(shù)小時(shí)內(nèi)完成。三種方法如何選擇，可視實(shí)際條件。
二、總皂苷的提取分離本發(fā)明的中藥腫節(jié)風(fēng)總皂苷提取物可以通過(guò)將腫節(jié)風(fēng)進(jìn)行醇回流提取、醇滲漉提取或水煎煮提取得到，其中醇回流提取方法是取腫節(jié)風(fēng)藥材粗粉，用35％-95％乙醇6-10倍量作溶劑，浸漬1小時(shí)后，加熱回流提取2-4次，每次1-4小時(shí)，回收乙醇，濃縮液經(jīng)有機(jī)溶劑萃取，回收有機(jī)溶劑，大孔吸附樹(shù)脂處理，干燥，即得總提物；醇滲漉提取方法是取腫節(jié)風(fēng)粗粉，用25％-95％乙醇作溶劑，浸漬后，以1-7ml/分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，回收乙醇；濃縮液經(jīng)有機(jī)溶劑萃取，回收有機(jī)溶劑，大孔吸附樹(shù)脂處理，干燥，即得總提物；煎煮提取的方法是取腫節(jié)風(fēng)藥材加6-10倍量水煎煮，每次1-3小時(shí)，濾過(guò)，濾液合并，濃縮，濃縮液經(jīng)有機(jī)溶劑萃取，回收有機(jī)溶劑，大孔吸附樹(shù)脂處理，干燥即得總提取物。
分離精制本發(fā)明制備方法中得到的提取物經(jīng)分離精制，可以用效地去除雜質(zhì)，將總皂苷部位有效地富集，明顯地提高總提取物的活性和藥效。本發(fā)明分離精制方法為大孔樹(shù)脂吸附法。還可用超臨界萃取法及有機(jī)溶劑提取獲得總皂苷及其單體有效成分。
總提取物先用乙酸乙脂處理，去除脂溶性物質(zhì)；再用正丁醇萃取水層的總皂苷；正丁醇萃取物回收有機(jī)溶劑，經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂富集進(jìn)一步去除雜質(zhì)；富集總皂苷的大孔吸附樹(shù)脂用70％乙醇洗脫，洗脫液用量3-5倍柱體積，洗脫物回收乙醇，干燥，得總皂苷及其單體有效成分。
總皂苷含量測(cè)定總皂苷以Rb1為對(duì)照，紫外分光光度法測(cè)定，總皂苷含量大于50％至98％。對(duì)照品試液的配置精密稱(chēng)取人參皂苷Rb1對(duì)照品5mg置5ml量瓶中，加甲醇置刻度，搖勻，制成人參皂苷Rb1 1mg/ml的對(duì)照品溶液。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的確定精密吸取人參皂苷Rb1對(duì)照品(1mg/ml)30、60、90、120、150ul置具塞試管中，操作方法同上步驟，于550nm處測(cè)定各吸收波長(zhǎng)繪制曲線結(jié)果，人參皂苷Rb1對(duì)照品濃度在(8～45ug/ml)間成線性關(guān)系。計(jì)算回歸方程為Y＝0.01825X-0.0024r＝0.9987。樣品的含量測(cè)定精密稱(chēng)取同-批樣品按“標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定”中的方法測(cè)定吸收度，并根據(jù)回歸方程計(jì)算總皂苷中人參皂苷的含量。
經(jīng)測(cè)定總皂苷以人參皂苷計(jì)算含達(dá)到50％以上至99％的純度。
干燥方法本發(fā)明分離精制后的總皂苷提取物可以采用烘干法、真空干燥法、噴霧干燥法、冷凍干燥。烘干法、真空干燥法干燥時(shí)間長(zhǎng)，真空干燥前須在水浴上預(yù)干燥，將水分控制在20％以?xún)?nèi)，真空干燥時(shí)易拉干成蜂窩狀，干燥可在2-3天內(nèi)完成，反之，含水量高，真空干燥時(shí)會(huì)溢出，而烘干法所需時(shí)間更長(zhǎng)。噴霧干燥時(shí)間短，可在數(shù)小時(shí)內(nèi)完成。冷凍干燥先減壓濃縮，再冷凍干燥，該方法有助于保存熱不穩(wěn)定物質(zhì)的活性。四種方法如何選擇，可視實(shí)際條件。
三、多糖有效部位的分離及含量測(cè)定多糖有效部位的分離本發(fā)明的中藥腫節(jié)風(fēng)多糖提取物方法同前述可以通過(guò)將腫節(jié)風(fēng)進(jìn)行醇回流提取、醇滲漉或水煎煮提取得到。
1、水提醇沉法取腫節(jié)風(fēng)藥材，水煎1-3小時(shí)，過(guò)濾，濃縮到一定密度，用60-80％乙醇沉淀24-48小時(shí)，離心，取沉淀物。反復(fù)幾次，加活性碳處理，再醇沉，過(guò)濾，干燥，無(wú)水乙醇、丙酮洗，干燥，得白色粉末，為多糖部位。
2、大孔樹(shù)脂吸附法取腫節(jié)風(fēng)藥材，水煎1-3小時(shí)，過(guò)濾，濃縮到一定密度，用60-80％乙醇沉淀24-48小時(shí)，離心，取沉淀物加水溶解，通過(guò)大孔樹(shù)脂(AB-8型或其它類(lèi)似型)，水洗。洗出液用乙醇沉浸，反復(fù)幾次，加活性碳處理，再醇沉，過(guò)濾，無(wú)水乙醇、丙酮洗、干燥，得白色粉末，為多糖部位。
3、大孔樹(shù)脂吸附、分離法取腫節(jié)風(fēng)總浸膏，用水稀釋后，通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱進(jìn)行吸附。用水洗柱，洗柱液與吸附時(shí)流出液合并為溶液A。水洗后用3倍柱體積70％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，干燥得固形物，將分離的溶液A泵入大孔樹(shù)脂吸附柱進(jìn)行吸附。吸附完畢，用3倍柱體積的水洗柱。洗柱液與吸附時(shí)的流出液合并，干燥，得固形物即為多糖部位。
多糖含量測(cè)定 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備精密稱(chēng)取干燥至恒重的葡萄糖100mg，水溶解并定容10則其濃度為1.0mg/ml，將其濃度稀釋100倍即為對(duì)照品溶液。苯酚液的配制稱(chēng)取苯酚100g于燒瓶中，加入0.1g鋁片，0.05g碳酸鈉，加熱蒸餾，收集182℃餾分10g，加蒸餾水190g溶解，置于棕色瓶中備用。標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 精密吸取標(biāo)準(zhǔn)貯備液5mL用水定容為25mL，分別取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml定容為25ml。再分別取1.0ml于具塞試管中各加入苯酚液1.0ml，迅速滴加濃硫酸5.0ml，另以1.0ml水同上操作，作為空白。室溫放置30min，于其最大吸收波長(zhǎng)λmax＝490nm處測(cè)其吸光度值。樣品液的制備準(zhǔn)確量取5ml腫節(jié)風(fēng)浸膏，加至裝有95ml無(wú)水乙醇的燒瓶中，水浴加熱至澄清，棄去上清液，揮干乙醇，沉淀用30ml的水溶解(若壁上附有，則超聲令其溶)，溶液用Sevage法去除蛋白，上清液用無(wú)水乙醇配成80％的溶液，放置過(guò)夜，過(guò)濾(因沉淀細(xì)微，易被抽濾過(guò)去，用漏斗過(guò)濾)，沉淀分別用無(wú)水乙醇，丙酮，乙醚洗滌，揮去有機(jī)溶劑后，將沉淀連同濾紙一起用蒸餾水洗滌，超聲令紙上的沉淀充分溶解，過(guò)濾，洗至濾液為無(wú)色，濾液一并轉(zhuǎn)移至250ml量瓶中，定容，備用。多糖含量的測(cè)定精密吸取樣品液2.0ml于50ml量瓶中，定容，再吸取1.0mL按7.3中的步驟操作，測(cè)定其吸收值，樣品多糖的含量根據(jù)下列公式計(jì)算(以葡萄糖計(jì)算)。多糖含量(mg/ml)＝A樣/A對(duì)×葡萄糖對(duì)照品的濃度×稀釋倍數(shù)。
測(cè)得經(jīng)測(cè)定以葡萄糖計(jì)算多糖含達(dá)到50％以上至99％的純度。
四、單體化合物的分離本發(fā)明從分離制得的總黃酮部位中分離得到得到4個(gè)化合物(IA、IB、IC)并進(jìn)行了初步結(jié)構(gòu)鑒定，其中3個(gè)為新發(fā)現(xiàn)，1個(gè)是已知。
化合物IA白色晶體，mp212.2℃。UV(MeOH)λmax 338nm、295nm、230nm、215nm。IR(KBr)1716(-COO-)，1600-1500(苯環(huán))。1H-NMR中質(zhì)子信號(hào)δ7.96(1H，d，J＝9.6Hz)和6.40(1H，d，J＝9.6Hz)顯示有苯環(huán)上鄰偶的兩個(gè)質(zhì)子，δ3.92和3.82(3H，s)顯示有兩個(gè)甲氧基的存在，7.13(1H，s)為苯環(huán)上的質(zhì)子，δ3.0-4.0表明糖上質(zhì)子。13C-NMR中δ159.7，149.3，144.3，142.3，141.6，140.2，114.6，114.4和105.52顯示了香豆素母核，δ102.1，77.4，76.4，74.1，69.9和60.8為一組糖上碳的信號(hào)，因此該化合物為香豆素的單糖苷，由于糖的端基氫δ5.17的偶合常數(shù)為6.8Hz，推測(cè)所連糖為β葡萄糖。故初步鑒定該化合物為異秦皮啶-7-O-葡萄糖苷。
化合物IA.的結(jié)構(gòu)化合物IB土黃色晶體，mp136.9℃。UV(MeOH)λmax331nm、 293nm、212nm。IR(KBr)1600-1500(苯環(huán))。1H-NMR(DMSO)δ7.05~6.5為苯環(huán)上氫，4.99(1H，dd，J＝4，9Hz，H-2)，3.07(1H，dd，H-3trans)，2.86(1H，dd，H-3cis)。13C-NMR(DMSO)δ74.1(C-2)，36.9(C-3)，171.8(C-4)，166.4(C-5)，114.2(C-6)，149.0(C-7)，115.4(C-8)，146.1(C-9)，115.8(C-10)，145.8(C-1’)，145.4(C-2’，6’)，145.3(C-3’，5’)，128.5(C-4’)。根據(jù)光譜及相關(guān)信息鑒定該化合物為5，7-二羥基二氫黃酮。
化合物IB.的結(jié)構(gòu)化合物IC亮黃色晶體，mp77.2℃。UV(MeOH)λmax333nm、210nm。IR(KBr)1600-1500(苯環(huán))。1H-NMR(DMSO)δ7.46(1H，d，J＝15.6Hz，H-βα)，6.25(1H，d，J＝15.6Hz，H-α)，7.50~6.48為苯環(huán)上氫，3.61(3H，s，OCH3)。13C-NMR(DMSO)δ72.7(C-α)，51.9(C-β)，169.9(C＝O)，106.7(C-1’)，146.3(C-2’)，96.8(C-3’)，165.8(C-4’)，91.8(C-5’)，148.7(C-6’)，145.5(C-1)，144.9(C-2，6)，126.6(C-3，5)，144.0(C-4)，36.2(OCH3)。根據(jù)光譜及相關(guān)信息鑒定該化合物為2’，6’-二羥基-4’-甲氧基查耳酮。
化合物IC.的結(jié)構(gòu)此外，還分離到已知化合物落新婦苷(astibin)。
五、總黃酮有效部位、有效成分及總皂苷有效部位、有效成分、多糖有效部位的抗腫瘤及抗腫瘤的增效減毒應(yīng)用及升白升血小板作用(一)整體實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)多種腫瘤試驗(yàn)證明，我們提出的黃酮有效部位、有效成分及皂苷有效部位、多糖有效部位及其配制成注射劑、片劑等有直接抗腫瘤的作用。
1、直接抗腫瘤實(shí)驗(yàn)在直接抗小鼠S180實(shí)體瘤試驗(yàn)中及在直接抗小鼠S180腹水型腫瘤試驗(yàn)中，通過(guò)口服、腹腔注射、肌肉注射、尾靜脈注射這四種方式給腫節(jié)風(fēng)黃酮有效部位、有效成分(異秦皮啶-7-O-葡萄糖苷、5，7-二羥基二氫黃酮、2′，6′-二羥基-4′-甲氧基查耳酮、異美五針?biāo)啥潼S酮、二氫楊梅樹(shù)皮素、蹄紋天竺葵素苷、落新婦苷、柚皮素4′，7-二甲醚)及皂苷有效部位，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明陽(yáng)性對(duì)照西藥環(huán)磷酰胺有明顯的抗腫瘤作用，黃酮有效部位、有效成分及皂苷有效部位、多糖有效部位的抑瘤率在30％和80％之間，使S180腹水型腫瘤小鼠的生命延長(zhǎng)率30-90％。，有抗腫瘤的作用。
表1 腫節(jié)風(fēng)黃酮有效部位抗腫瘤S180結(jié)果(x±s，n＝10)

2、增效實(shí)驗(yàn)環(huán)磷酰胺治療小鼠S180實(shí)體瘤增效試驗(yàn)中、小鼠S180腹水型腫瘤增效試驗(yàn)中，通過(guò)口服、腹腔注射、肌肉注射、尾靜脈注射這四種方式給藥環(huán)磷酰胺減少劑量20mg/kg及環(huán)磷酰胺劑量為20mg/kg分別加用腫節(jié)風(fēng)黃酮有效部位、有效成分(異秦皮啶-7-O-葡萄糖苷、5，7-二羥基二氫黃酮、2′，6′-二羥基-4′-甲氧基查耳酮、異美五針?biāo)啥潼S酮、二氫楊梅樹(shù)皮素、蹄紋天竺葵素苷、落新婦苷、柚皮素4′，7-二甲醚)及皂苷有效部位、多糖有效部位，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明表明單用環(huán)磷酰胺的抑瘤率在5％和20％之間，生命延長(zhǎng)率在16％和50％之間。腫節(jié)風(fēng)黃酮有效部位、有效成分及皂苷有效部位、多糖有效部位抑瘤率在30％和70％之間，說(shuō)明腫節(jié)風(fēng)黃酮有效部位、有效成分、多糖有效部位及皂苷有效部位與環(huán)磷酰胺合用時(shí)可明顯增強(qiáng)化療藥環(huán)磷酰胺抗腫瘤作用。
表2 腫節(jié)風(fēng)黃酮有效部位抗腫瘤S180增效實(shí)驗(yàn)結(jié)果(x±s，n＝10)

3、減毒實(shí)驗(yàn)在50％以上(50％至99％)純度的黃酮對(duì)環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷治療小鼠S180實(shí)體瘤減毒試驗(yàn)中，通過(guò)口服、腹腔注射、肌肉注射、尾靜脈注射這四種方式給藥環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷和分別加腫節(jié)風(fēng)黃酮有效部位、有效成分(異秦皮啶-7-O-葡萄糖苷、5，7-二羥基二氫黃酮、2′，6′-二羥基-4′-甲氧基查耳酮、異美五針?biāo)啥潼S酮、二氫楊梅樹(shù)皮素、蹄紋天竺葵素苷、落新婦苷、柚皮素4′，7-二甲醚)及皂苷有效部位、多糖有效部位。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明小鼠在給藥環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷后都出現(xiàn)血小板和白細(xì)胞顯著下降，分別加腫節(jié)風(fēng)黃酮有效部位、有效成分及皂苷有效部位、多糖有效部位后，白細(xì)胞和血小板明顯的上升，說(shuō)明腫節(jié)風(fēng)黃酮有效部位、有效成分及皂苷有效部位、多糖有效部位和化療藥合用時(shí)有明顯的減毒作用。
(二)體外實(shí)驗(yàn)1、對(duì)體外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用實(shí)驗(yàn)1在對(duì)體外培養(yǎng)的小鼠S180肉瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用染色的實(shí)驗(yàn)中，腫節(jié)風(fēng)黃酮有效部位、有效成分及皂苷有效部位，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明腫節(jié)風(fēng)黃酮有效部位、有效成分及皂苷有效部位異秦皮啶-7-O-葡萄糖苷、5，7-二羥基二氫黃酮、2′，6′-二羥基-4′-甲氧基查耳酮、異美五針?biāo)啥潼S酮、二氫楊梅樹(shù)皮素、蹄紋天竺葵素苷、落新婦苷、柚皮素4′，7-二甲醚對(duì)上述腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率在20％至95％之間，說(shuō)明黃酮有效部位、有效成分及皂苷有效部位異秦皮啶-7-O-葡萄糖苷、5，7-二羥基二氫黃酮、2′，6′-二羥基-4′-甲氧基查耳酮、異美五針?biāo)啥潼S酮、二氫楊梅樹(shù)皮素、蹄紋天竺葵素苷、落新婦苷、柚皮素4′，7-二甲醚具有抗腫瘤作用。
表3 腫節(jié)風(fēng)體外對(duì)小鼠S180腫瘤細(xì)胞的抑制率(RPMI-1640培養(yǎng)液臺(tái)盼藍(lán)液染色計(jì)數(shù)藍(lán)染率)

2、體外抑菌實(shí)驗(yàn)在體外抑菌試驗(yàn)中，采用綠膿桿菌、肺炎桿菌、變形桿菌、大腸桿菌、白色念球菌、金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌、甲型副傷寒桿菌、甲鏈球菌、卡他球菌、流感桿菌、肺炎雙球菌、鏈球菌及脆弱類(lèi)桿菌等15種117株菌，經(jīng)MIC和MSC試驗(yàn)表明黃酮有效部位、有效成分(異秦皮啶-7-O-葡萄糖苷、5，7-二羥基二氫黃酮、2′，6′-二羥基-4′-甲氧基查耳酮、異美五針?biāo)啥潼S酮、二氫楊梅樹(shù)皮素、蹄紋天竺葵素苷、落新婦苷、柚皮素4′，7-二甲醚)及皂苷有效部位有不同程度的抗菌作用。
權(quán)利要求
1.一種含有腫節(jié)風(fēng)提取物的藥物組合物，其特征在于它含有從腫節(jié)風(fēng)中提取出的有效部位和/或有效成分，包括黃酮，和/或皂苷，和/或多糖的有效部位，或以下黃酮的有效成分中的一個(gè)或幾個(gè)異秦皮啶-7-O-葡萄糖苷、5，7-二羥基二氫黃酮、2′，6′-二羥基-4′-甲氧基查耳酮、異美五針?biāo)啥潼S酮、二氫楊梅樹(shù)皮素、蹄紋天竺葵素苷、落新婦苷、柚皮素4′，7-二甲醚，所述的腫節(jié)風(fēng)中提取出的有效部位的純度為50％至99％，所述的腫節(jié)風(fēng)中提取出的有效成分的純度為85％至99％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有腫節(jié)風(fēng)提取物的藥物組合物，其特征在于所述的組合物的形式包括片劑包括一般口服片、含片、咀嚼片，針劑包括小針劑、大針劑、粉針劑、乳劑、混懸液，丸劑，滴丸，膠囊及軟膠囊，顆粒，泡騰劑，口服液，糖漿，乳劑，合劑，緩釋劑，控釋劑，靶向制劑及其它各種制劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的含有腫節(jié)風(fēng)提取物的藥物組合物的應(yīng)用，其特征在于應(yīng)用于抗腫瘤作用，增效減毒作用，抗腫瘤放、化療的毒性反應(yīng)包括減輕白細(xì)胞下降及血小板減少。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的含有腫節(jié)風(fēng)提取物的藥物組合物的應(yīng)用，其特征在于應(yīng)用于治療血熱妄行、皮膚紫斑、原發(fā)性血小板減少性紫癜及繼發(fā)性血小板減少性紫癜，升高血小板。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的含有腫節(jié)風(fēng)提取物的藥物組合物的應(yīng)用，其特征在于應(yīng)用于抗菌抗炎，治療咽喉炎、氣管支氣管炎、肺炎、角膜炎、蜂窩組織炎、闌尾炎。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種含有腫節(jié)風(fēng)提取物的藥物組合物，它含有從腫節(jié)風(fēng)中提取出的有效部位和/或有效成分，包括黃酮，和/或皂苷，和/或多糖的有效部位，或以下黃酮的有效成分中的一個(gè)或幾個(gè)異秦皮啶－7－O－葡萄糖苷、5，7－二羥基二氫黃酮、2′，6′－二羥基－4′－甲氧基查耳酮、異美五針?biāo)啥潼S酮、二氫楊梅樹(shù)皮素、蹄紋天竺葵素苷、落新婦苷、柚皮素4′，7－二甲醚，其有效部位的純度為50％至99％，有效成分的純度為85％至99％。本發(fā)明可用于抗腫瘤及增效減毒，抗腫瘤放、化療的毒性反應(yīng)，包括升白細(xì)胞及升血小板，也能升高原發(fā)性及繼發(fā)性血小板減少性紫癜患者的血小板，或用于常見(jiàn)細(xì)菌感染性疾病。
文檔編號(hào)A61P27/02GK1839903SQ200610049219
公開(kāi)日2006年10月4日 申請(qǐng)日期2006年1月18日 優(yōu)先權(quán)日2006年1月18日
發(fā)明者連曉媛, 張治針, 湯祖麟 申請(qǐng)人:江西博士聯(lián)科技研究開(kāi)發(fā)有限責(zé)任公司