專利名稱：一種發(fā)酵蟲草菌粉的水溶性活性組分及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種發(fā)酵蟲草菌粉的活性組分及其用途。
背景技術(shù)：
冬蟲夏草為我國(guó)傳統(tǒng)的名貴中藥，具溫和平補(bǔ)之性。據(jù)歷代文獻(xiàn)記載，蟲草能保肺益腎，秘精益氣，補(bǔ)虛損，補(bǔ)命門，止咳化痰；常用于痰飲咳嗽，咯血，自汗，盜汗，陽痿，遺精，肺結(jié)核，腰膝酸痛，病后久虛等。
發(fā)酵蟲草菌粉具有與天然冬蟲夏草類似的化學(xué)成分和藥理功能。經(jīng)證實(shí)無毒、無致畸、無致突變作用，臨床廣泛用于慢支、男性性功能低下、高血脂、老年虛證等，療效確切。發(fā)酵蟲草菌粉主要含有蟲草多糖、腺嘌呤核苷(腺苷)、脲嘧啶核苷、麥角甾醇、天門冬氨酸等多種氨基酸，還含有鋅、硒等重要微量元素和鉀、鎂、鈣等金屬離子和維生素B1、B2、E等多種成分。
冬蟲夏草具有廣泛的藥理作用和臨床用途，如降低血脂，增加心、腦供血，輕度降血壓，抑制血小板聚集，延長(zhǎng)缺氧動(dòng)物生存時(shí)間，抗炎、止咳、鎮(zhèn)靜、抗流涎、促性腺等。同時(shí)，發(fā)酵蟲草菌粉的化學(xué)成分復(fù)雜，其制劑多以菌粉的原藥材入藥，服用量大，藥材中的有效成分的溶出度低。這種發(fā)酵蟲草菌粉化學(xué)成分的復(fù)雜性、臨床適應(yīng)癥的多樣性必然影響蟲草制劑的臨床療效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種發(fā)酵蟲草菌粉的壯陽、抗疲勞功效的有效活性部位，該部位為發(fā)酵蟲草菌粉的水溶性活性組分，主要用于性功能低下的治療和預(yù)防，增強(qiáng)體質(zhì)和耐力，緩解和改善高工作強(qiáng)度和壓力引起的身體疲勞和精神疲憊，改善老年虛癥的癥狀。
為了提高蟲草菌粉的療效，我們采用現(xiàn)代化學(xué)分離技術(shù)和活性篩選手段對(duì)發(fā)酵蟲草菌粉的壯陽和抗疲勞的活性部位進(jìn)行了篩選，以期發(fā)現(xiàn)療效更好、作用更加明確的組分，使發(fā)酵蟲草菌粉這個(gè)源于天然蟲草、類似天然蟲草的功效進(jìn)一步提高，更好地造福人類。
按照化合物的極性，使用不同極性溶媒提取/萃取分離發(fā)酵蟲草菌粉，獲得蟲草菌粉水提物、蟲草菌粉醇提物和蟲草菌粉石油醚提取物的不同制備物，并對(duì)這些制備物的壯陽和抗疲勞的活性進(jìn)行了篩選，發(fā)現(xiàn)其水溶性組分為蟲草菌粉的壯陽和抗疲勞的活性部位。利用本發(fā)明制備獲得的有效部位制備物療效明確、服用劑量減小，可以制備成藥物、保健品、功能食品或食品添加劑，或者在復(fù)方制劑中含有該活性組分。
本發(fā)明利用現(xiàn)代化學(xué)分離和藥理活性評(píng)價(jià)技術(shù)發(fā)現(xiàn)并證實(shí)了發(fā)酵蟲草菌粉的水溶性組分為蟲草壯陽和抗疲勞的有效活性部位。蟲草的水提取物含有多糖類、氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、甘露醇、生物堿、微量元素和金屬離子等類化合物。
本發(fā)明提供了發(fā)酵蟲草菌粉的水溶性組分在制備用于治療和預(yù)防性功能低下、增強(qiáng)耐力、改善疲勞和老年虛癥癥狀的藥物、保健品或直接作為食品添加劑的應(yīng)用以及在復(fù)方制備中含有本發(fā)明的活性組分的應(yīng)用。
本發(fā)明提供的藥物、保健品或復(fù)方制劑中，所述水溶性活性組分的質(zhì)量含量為1-100％，其作為食品添加劑的含量為0.01-20％。
本發(fā)明所述的發(fā)酵蟲草菌粉是指與天然蟲草有著相似的化學(xué)成分，被用作天然蟲草的人工替代品，包括多種菌株的發(fā)酵產(chǎn)物，如為由新鮮冬蟲夏草分離所得擬青霉菌株Cs-4發(fā)酵生產(chǎn)的蟲草菌粉、由中華頭孢霉發(fā)酵生產(chǎn)的蟲草頭孢菌粉、或由蝙蝠蛾被孢霉發(fā)酵生產(chǎn)的蟲草被孢菌粉、由蝙蝠蛾被毛孢生產(chǎn)的蟲草被毛孢菌粉或蛹蟲草菌粉等，也包括國(guó)家藥典規(guī)定的天然冬蟲夏草品種本身和具有蟲草功效的品種或替代品種。
本發(fā)明提供了制備發(fā)酵蟲草菌粉的水溶性活性組分的方法。該方法采用極性溶媒優(yōu)選水提取，包括1)采用發(fā)酵蟲草菌粉原料的直接水提取制備；2)滲漉制備；3)采用脂溶性溶劑提取發(fā)酵蟲草菌粉后的藥渣制備4)采用CO2超臨界萃取發(fā)酵蟲草菌粉后的藥渣制備。將發(fā)酵蟲草菌粉或所述藥渣裝入提取罐內(nèi)，按1∶2-1∶10加入水，煮沸并維持1-3hr，過濾，濾渣以同樣條件重復(fù)提取1-3hr，過濾并合并濾液，經(jīng)減壓濃縮或水蒸氣加熱濃縮至稠膏狀，得到水溶性活性組分(浸膏)；或者濾液經(jīng)噴霧干燥制備獲得水溶性活性組分(粉術(shù))。
所述由CO2超臨界萃取后的藥渣或者脂溶性溶劑提取后的藥渣生產(chǎn)制備水溶性活性組分的方法還提供了發(fā)酵蟲草菌粉的綜合利用，大大提高了發(fā)酵蟲草菌粉的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
本發(fā)明提供的活性組分提高了療效，增加了活性成分的溶出度，減小了服用劑量并使有效成分的含量更易于控制。和傳統(tǒng)的發(fā)酵蟲草菌粉制劑相比，更適用于治療和預(yù)防性功能低下、工作壓力等引起的身體疲勞和精神疲憊和老年虛癥。
本發(fā)明提供的藥物、保健品或者在復(fù)方制劑中均可以采用藥學(xué)上常規(guī)方法制備，如可以是片劑、咀嚼劑、顆粒劑、口服液、糖漿、膠囊、軟膠囊、滴丸、丸劑、注射劑或凍干粉針劑等；本發(fā)明的有效活性部位可以以任何形式作為食品添加劑用于性功能低下癥、疲勞、老年虛癥的功能食品的制備。
下面是本發(fā)明提供的發(fā)酵蟲草菌粉水溶性活性組分的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)1發(fā)酵蟲草菌粉的不同部位提取物對(duì)大鼠交配能力的影響分別用水、乙醇和石油醚提取制備獲得發(fā)酵蟲草菌粉水提物、醇提物和石油醚提取物。
雌性大鼠50只，戊巴比妥鈉麻醉，行雙側(cè)卵巢切除術(shù)，術(shù)后肌注青霉素2萬U/kg.d，連續(xù)5天，2周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)前48hr，皮下注射苯甲酸雌二醇20ug/只，4hr前皮下注射黃體酮注射液500ug/只。雄性大鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，正常對(duì)照組(1ml/100g)，陽性對(duì)照組(男寶膠囊，162mg/kg)，蟲草水提物(150mg/kg)，蟲草醇提物(125mg/kg)，蟲草石油醚提取物組(125mg/kg)，各組均每日灌胃給藥一次，連續(xù)21d。
觀察方法雄性大鼠末次給藥后，放入實(shí)驗(yàn)籠中適應(yīng)環(huán)境5min，每籠加入一只雌鼠，在夜間安靜紅色燈光下，記錄捕捉潛伏期(自雌鼠投入至雄鼠第一次捕捉雌鼠的時(shí)間)、射精潛伏期(自雌鼠投入至雄鼠第一次射精的時(shí)間)、20min內(nèi)各組內(nèi)雄鼠捕捉雌鼠次數(shù)及射精次數(shù)，并計(jì)算20min內(nèi)各組內(nèi)雄鼠的捕捉百分率及射精百分率。
結(jié)果顯示，蟲草菌粉的不同提取物中，蟲草水提取物具有明顯的壯陽效果，能增強(qiáng)雄性大鼠的交配能力，表現(xiàn)為與雌鼠合籠后捕捉雌鼠的潛伏期和交配的潛伏期縮短，20min捕捉雌鼠的次數(shù)和交配次數(shù)明顯增加。蟲草醇提物和蟲草石油醚提取物沒有表現(xiàn)出類似的壯陽作用。
表1 發(fā)酵蟲草菌粉的不同部位提取物對(duì)大鼠性功能交配能力的實(shí)驗(yàn)(x±s)

**P＜0.01，*P＜0.05，與正常對(duì)照組比較。
實(shí)驗(yàn)2發(fā)酵蟲草菌粉的水溶性提取物對(duì)小鼠轉(zhuǎn)棒耐力和游泳時(shí)間的影響轉(zhuǎn)棒耐力實(shí)驗(yàn)昆明小鼠分組，水溶性提取物灌胃給藥(150、300mg/kg)連續(xù)給藥4天，于第3次給藥后45min將動(dòng)物放在小鼠轉(zhuǎn)棒疲勞儀上，轉(zhuǎn)速20r/min，觀察動(dòng)物在棒上的活動(dòng)時(shí)間(從放上轉(zhuǎn)棒到因疲勞而掉下的時(shí)間)。結(jié)果見表2?？梢钥闯?，水溶性提取物可明顯延長(zhǎng)小鼠轉(zhuǎn)棒耐力時(shí)間。
游泳試驗(yàn)以上小鼠于第4天給藥后30min，給小鼠負(fù)體重5％的重量，將小鼠放于22℃的游泳箱水中。記錄自游泳開始至頭部全部沉入水中8sec不能浮出水面的時(shí)間作為小鼠游泳時(shí)間。結(jié)果顯示水溶性提取物可明顯延長(zhǎng)小鼠游泳耐力時(shí)間，具有增強(qiáng)小鼠耐力和抗疲勞的作用。
表2 水溶性提取物對(duì)小鼠轉(zhuǎn)棒疲勞的影響(x±s)

*p＜0.05，與空白對(duì)照組比較。
具體實(shí)施例方式
(一)發(fā)酵蟲草菌粉水溶性活性組分的制備方法一、水提取制備將發(fā)酵蟲草菌粉1kg裝入提取罐內(nèi)，按1∶2-1∶10加入水，煮沸并維持1-3hr，過濾，濾渣以上述同樣條件再次提取1-3hr，過濾并合并濾液。經(jīng)減壓濃縮或水蒸氣加熱濃縮，得到水溶性活性組分(浸膏)?；?yàn)V液經(jīng)噴霧干燥獲得水溶性活性組分(粉末)。
方法二、滲漉制備將發(fā)酵蟲草菌粉1kg裝入提取罐內(nèi)，按1∶5-1∶15加入水，保持溫度20-80℃，靜置12-24hr，收集滲漉液；以同樣條件再次加水滲漉過夜，合并滲漉液。經(jīng)水蒸氣加熱濃縮或真空減壓濃縮，得到水溶性活性組分制備物(浸膏)?；驖B漉液經(jīng)噴霧干燥獲得水溶性活性組分(粉末)。
方法三、采用脂溶性溶劑提取后的藥渣制備發(fā)酵蟲草菌粉1kg，按1∶2-1∶5加入石油醚，回流2hr，過濾后的藥渣同方法一的步驟，經(jīng)水提取、干燥制備獲得水溶性活性組分。
方法四、采用CO2超臨界萃取后的藥渣制備將發(fā)酵蟲草菌粉裝入萃取缸內(nèi)，裝入超臨界萃取釜中，萃取溫度為45-60℃，萃取壓力為15-45Mpa，經(jīng)循環(huán)萃取，并保持恒溫恒壓1-3hr，獲得超臨界萃取物后的藥渣。再將該藥渣采用方法一的步驟制備獲得水溶性活性組分。
(二)發(fā)酵蟲草菌粉水溶性活性組分的藥物制劑的制備片劑處方(1000片)蟲草菌粉水溶性組分干燥粉末300g淀粉 90g乙醇(70％)Q.S.
硬脂酸鎂 Q.S.
滑石粉Q.S.
制備工藝與通常的片劑藥物工藝相同。
膠囊處方(1000粒)蟲草菌粉水溶性組分干燥粉末300g硬脂酸鎂 Q.S.
乳糖 50g制備工藝與通常的膠囊制劑工藝相同。
咀嚼片處方(1000片)蟲草菌粉水溶性活性組分干燥粉末600g甘露醇200g硬脂酸鎂 4g5％PEG6000(溶于50％醇)Q.S.
滑石粉50制備工藝與通常的咀嚼片工藝相同。
口服液處方(1000ml)蟲草菌粉水溶液600g蔗糖 300-500g蒸餾水 加至 1000ml制備工藝與通常的口服液工藝相同附蟲草菌粉水溶液的制備水溶性活性組分干燥粉術(shù)或者浸膏600g用40-70％乙醇(首選50％)溶解，靜置，濾過，制備獲得。
糖漿劑處方(1000ml)蟲草菌粉水溶性活性組分浸膏600g蔗糖 400-600g苯甲酸鈉 1-5g蒸餾水 加至 1000ml制備工藝與通常的糖漿劑工藝相同。
顆粒劑處方(1000包)蟲草菌粉水溶性組分干燥粉末600g蔗糖粉1000-3000g糊精 500-1200g乙醇 Q.S.
制備工藝與通常的顆粒制劑工藝相同。
權(quán)利要求
1.一種發(fā)酵蟲草菌粉的水溶性活性組分，由極性溶媒優(yōu)選水提取，經(jīng)水蒸氣加熱濃縮或減壓濃縮或噴霧干燥制備獲得。
2.一種如權(quán)利要求1所述的發(fā)酵蟲草菌粉的水溶性活性組分在制備壯陽和抗疲勞藥物、保健品或復(fù)方制劑，或者將該活性組分直接作為食品添加劑的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物、保健品或復(fù)方制劑中，所述水溶性活性組分的質(zhì)量含量為1-100％，其作為食品添加劑的添加量為0.01-20％。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的發(fā)酵蟲草菌粉是指與天然蟲草有著相似的化學(xué)成分，被用作天然蟲草的人工替代品。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的發(fā)酵蟲草粉為由新鮮冬蟲夏草分離所得擬青霉菌株Cs-4發(fā)酵生產(chǎn)的蟲草菌粉、由中華頭孢霉發(fā)酵生產(chǎn)的蟲草頭孢菌粉、由蝙蝠蛾被孢霉發(fā)酵生產(chǎn)的蟲草被孢菌粉、由蝙蝠蛾被毛孢生產(chǎn)的蟲草被毛孢菌粉或蛹蟲草菌粉。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物、保健品的劑型有片劑、咀嚼劑、顆粒劑、口服液、膠囊、軟膠囊、沖劑、糖漿、滴丸、丸劑、注射劑或凍干粉針劑。
全文摘要
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種發(fā)酵蟲草菌粉的水溶性活性組分以及作為壯陽和抗疲勞作用的應(yīng)用。該活性組分是由極性較大的溶媒優(yōu)選水提取，經(jīng)濃縮干燥(優(yōu)選噴霧干燥)制備獲得，具有壯陽、抗疲勞和增強(qiáng)體力的功效，主要用于治療和預(yù)防性功能低下、增強(qiáng)體質(zhì)和耐力、緩解和改善高工作強(qiáng)度和壓力引起的身體疲勞和精神疲憊、改善老年虛癥的癥狀。以該活性組分為主要原料可以制備成藥物、保健品、復(fù)方制劑，或作為食品添加劑。所制備的藥物等可以是片劑、膠囊、粉劑、滴丸、丸劑、顆粒劑、糖漿或咀嚼劑等。和發(fā)酵蟲草菌粉制劑相比，本發(fā)明制備獲得的活性組分的制劑具有療效提高、臨床適應(yīng)癥明確、服用劑量減小和有效成分更容易溶出等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61P11/00GK1903227SQ20061002867
公開日2007年1月31日 申請(qǐng)日期2006年7月6日 優(yōu)先權(quán)日2006年7月6日
發(fā)明者王澤君 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)