專利名稱：甘草酸或甘草次酸在制備治療炎癥性腸病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及甘草酸或甘草次酸在制備治療炎癥性腸病藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
炎性腸病(Inflammatory bowel disease IBD)是一種困擾醫(yī)生和科學家多年的頑疾，主要包括潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)和克隆氏病(Crohn’s disease，CD)兩種，前者是一種慢性非特異性結(jié)腸炎癥，重者發(fā)生潰瘍甚至癌變，病變主要累及結(jié)腸粘膜及粘膜下層，臨床主要表現(xiàn)為腹瀉、腹痛和粘液膿血便，后者病變可累及到胃腸道各部位，是一種慢性肉芽舯性炎癥，呈階梯性分布，臨床主要表現(xiàn)為腹瀉、腹痛、瘺管和不同程度的全身癥狀。第十屆歐洲胃腸病學年會上，歐洲克隆氏病與炎性腸病聯(lián)合會主席RodMitchell指出，目前在歐洲有100萬IBD患者，在西方國家大部分地區(qū)潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病率穩(wěn)定，最高到10例/10萬人口。而克隆氏病的發(fā)病率在過去30年升高了600％，我國發(fā)病率也呈明顯的上升趨勢，此病癥可導致患者發(fā)生結(jié)直腸癌的風險顯著升高，嚴重威脅人類的健康。盡管研究多年，人類目前仍然無法完全治愈該病。
目前常用的治療藥物為(1)氨基水楊酸類早在40年代就開始于IBD的治療，效果較好的是水楊酸偶氮磺胺吡啶，但可造成急慢性腎中毒，副反應(yīng)多，長期用藥患者難以耐受；(2)皮質(zhì)類固醇類1955年，Truelove應(yīng)用強的松龍治療UC取得良效，至今皮質(zhì)類固醇類仍為治療IBD的主藥，對控制發(fā)作特別有效，對中重度患者和活動期病例亦然，但有明顯的副作用，不易長期使用，停藥后易復(fù)發(fā)；(3)免疫抑制劑臨床應(yīng)用免疫抑制劑始于1962年，目前已成為治療IBD的一種重要方法，常用藥物包括嘌呤類藥物、氨甲蝶呤及環(huán)孢菌素等，但可產(chǎn)生包括過敏及抑制造血等嚴重的不良反應(yīng)?？梢?，研制新的安全、有效藥物，對人類最終攻克這一頑癥，有著重要的意義。我國傳統(tǒng)的天然藥物歷經(jīng)數(shù)千年臨床，為尋找有效藥物提供了豐富的藥源，因此從天然、傳統(tǒng)藥物中篩選治療炎癥性腸病的藥物不僅是可行的，而且可填補我國在這一領(lǐng)域的空白。
甘草酸、甘草次酸是甘草中最重要的有效成分，具有抗炎、抗病毒，和保肝解毒及增強免疫功能等作用。由于甘草酸有糠皮質(zhì)激素樣藥理作用而無嚴重不良反應(yīng)，臨床被廣泛用于治療各種急慢性肝炎。支氣管炎和艾滋病，還具有抗癌防癌、干擾素誘生劑及細胞免疫調(diào)節(jié)劑等功能。但甘草酸、甘草次酸防治炎癥性腸病(IBD)的作用尚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對上述問題提供甘草酸或甘草次酸在制備抗炎癥性腸病藥物中的應(yīng)用，用甘草酸或甘草次酸制備的抗炎癥性腸病的藥物，具有較好的療效。
本發(fā)明提供的技術(shù)方案是甘草酸或甘草次酸在制備抗炎癥性腸病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明經(jīng)口及靜脈注射給予甘草酸或甘草次酸，一天一次，10天后，可使炎癥性小鼠結(jié)腸臟器指數(shù)、結(jié)腸損傷系數(shù)明顯降低，結(jié)腸MPO活性明顯升高，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA明顯降低，SOD活性及GSH含量明顯升高，表明甘草酸、甘草次酸可治療炎癥性腸病。
本發(fā)明經(jīng)口給予甘草酸105mg/kg、甘草次酸72mg/kg，一天一次，10天后，結(jié)腸系數(shù)分別下降82.3％、57.65％；炎癥評分級別分別下降4.0倍、1.72倍；MPO活性分別升高2.83倍、1.62倍。
本發(fā)明經(jīng)注射給予甘草酸105mg/kg、甘草次酸72mg/kg，一天一次，10天后，結(jié)腸系數(shù)分別下降98.86％、63.55％炎癥評分級別下降4.0倍、2.75倍，MPO活性升高3.20倍、2.39倍。


附圖為本發(fā)明甘草酸、甘草次酸處理10天對炎癥性腸病小鼠結(jié)腸損傷的保護作用圖。
具體實施例方式
本發(fā)明通過以下實施例作進一步說明中醫(yī)藥學在治療慢性、疑難疾病方面常能發(fā)揮重要作用，療效好、特別是毒副作用小等特點。本發(fā)明選擇甘草酸、甘草次酸作為抗炎癥性腸病的藥物，通過建立炎癥性腸病的動物模型，探討甘草酸、甘草次酸對炎癥性腸病的影響及藥物作用機制。旨在選擇一種抗炎癥性腸病療效確切、毒性小的藥物。
木發(fā)明通過建立炎癥性腸病動物模型等技術(shù)揭示了甘草酸、甘草次酸對炎癥性腸病的作用及機制。
材料與方法藥品及試劑甘草酸、甘草次酸，由深圳資福藥業(yè)提供；美莎拉秦緩釋顆粒劑(艾迪莎)，由法國愛的發(fā)制藥集團提供；MPO檢測試劑盒，由南京建成生物工程研究所提供。牛血清白蛋白、DTNB及GSH試劑盒及標準品均由sigma公司提供。TBA、鄰苯三酚、乙酸、乙醚等試劑均為市售分析純試劑。
動物健康成熟雄性昆明小鼠45只，體重18～22g，雌雄各半，由武漢大學實驗動物中心提供，生產(chǎn)許可證號SCXK(鄂)2003-2004。小鼠飼料，購于武漢大學實驗動物中心。
儀器TG328A型分析天平，紫外分光光度計，高速勻漿器等實驗方法動物分組與處理昆明小鼠隨機分組正常對照組，模型組，艾迪莎陽性藥物對照組，甘草酸口服組，甘草次酸口服組，分別經(jīng)口給予甘草酸、甘草次酸酸105mg/Kg、72mg/Kg，一日一次；甘草酸注射組，甘草次酸注射組，小鼠腹腔注射給予甘草酸105mg/Kg、72mg/Kg，一日一次；艾迪莎組小鼠灌腸給予艾迪莎600mg/Kg，一日一次；正常對照組和模型組小鼠經(jīng)口給予等量的生理鹽水，一日一次。給藥7天后，除正常對照組外，其余各組均采用乙酸刺激造結(jié)腸炎模型，小鼠于第6日給藥后禁食，次日給藥后，乙醚吸入麻醉，用聚乙烯管給小鼠直腸注入乙酸，注入前先排清腸內(nèi)大便，將聚乙烯管插入小鼠肛門約1.5cm，注入0.1ml 6％的乙酸，1min后用等張生理鹽水沖洗兩次，讓動物保持平躺，自然蘇醒。正常對照組直腸注入等體積的生理鹽水。各組小鼠持續(xù)給藥至第10天，未次給藥后24h，頸椎脫臼處死，冰上解剖，取全段結(jié)腸，稱重，計算結(jié)腸臟器指數(shù)，進行結(jié)腸炎癥(CMDI)評分。取結(jié)腸組織用Tris緩沖液制成5％的勻漿液，供檢測MPO、MDA、SOD、GSH。
檢測指標結(jié)腸損傷指數(shù)(CMDI)取全段結(jié)腸，沿腸系膜剪開腸腔，肉眼觀察腹腔粘連及結(jié)腸潰瘍、充血情況，按表1進行結(jié)腸評分標準(CMDI)評分。
髓過氧化物酶(MPO)準確稱取組織重量，按重量體積比為1∶19加入Tris緩沖勻漿液，高速勻漿后反復(fù)凍融，制成5％的腸勻漿液，Lowry法檢測蛋白量。按MPO檢測試劑盒嚴格操作。
脂質(zhì)過氧化物酶(MDA)采用TBA比色法檢測腸勻漿中MDA含量。
超氧化物歧化酶(SOD)采用鄰苯三酚法檢測腸勻漿中SOD活力。
谷胱甘肽(GSH)按GSH檢測試劑盒檢測腸勻漿中GSH的含量。
表1.結(jié)腸損傷指數(shù)(CMDI)評分標準

兩項分數(shù)相加為總得分。
實驗結(jié)果1.甘草酸、甘草次酸對炎癥性腸病小鼠結(jié)腸損傷的保護作用由附圖可見，甘草酸、甘草次酸經(jīng)口和注射給藥均可明顯的保護乙酸導致的小鼠結(jié)腸損傷，模型組可見重度粘連，潰瘍多于2處以上，評分級別7.5；陽性對照組可見一處潰瘍，未見粘連，輕度紅腫，評分級別2.5級；甘草酸口服組、甘草次酸口服組評分級別分別為1.5級、2.75級；甘草酸注射組、甘草次酸注射組評分級別分別為1.5級、2.0級，表明甘草酸、甘草次酸口服給藥及注射給藥對炎癥性腸病有明顯的保護作用。結(jié)果見附圖。
2.甘草酸、甘草次酸對炎癥性腸病小鼠結(jié)腸臟器系數(shù)、損傷系數(shù)、MPO活性的影響可見甘草酸、甘草次酸能明顯減輕炎癥性腸病小鼠結(jié)腸水腫，經(jīng)口給予甘草酸105mg/kg、甘草次酸72mg/kg，結(jié)腸系數(shù)分別下降82.3％、57.65％，炎癥評分級別分別下降4.0倍、1.72倍，MPO活性分別升高2.83倍、1.62倍；本發(fā)明經(jīng)注射給予甘草酸105mg/kg、甘草次酸72mg/kg，一天一次，10天后，結(jié)腸系數(shù)分別下降98.86％、63.55％炎癥評分級別下降4.0倍、2.75倍，MPO活性升高3.20倍、2.39倍，與陽性對照藥相比作用顯著，結(jié)果見表2。
表.2甘草酸、甘草次酸對炎癥性腸病小鼠結(jié)腸臟器系數(shù)、炎癥評分、MPO活性的影響(x±s，n＝10)

與正常組相比**P＜0.01；與模型組相比▲▲P＜0.013.甘草酸、甘草次酸對炎癥性腸病小鼠結(jié)腸MDA、GSH含量及SOD活性的影響與正常組相比，模型組結(jié)腸組織中MDA的含量顯著升高(P＜0.01)，GSH含量及SOD活性顯著下降；與模型組相比，甘草酸、甘草次酸均可有效改善上述指標，且較陽性對照藥效果更好，結(jié)果見表3。
表3甘草酸、甘草次酸對炎癥性腸病小鼠結(jié)腸MDA、GSH含量及SOD活性的影響(x±s，n＝10)

與正常組相比**P＜0.01；與模型組相比▲P＜0.05，▲▲P＜0.01實驗結(jié)論甘草酸、甘草次酸能有效保護炎癥性腸病小鼠結(jié)腸損傷，其機制可能與增強組織抗氧化能力有關(guān)，與目前主要治療炎癥性腸病的藥物-艾迪莎相比，療效更為顯著。
權(quán)利要求
1.甘草酸或甘草次酸在制備治療炎癥性腸病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及甘草酸或甘草次酸在制備抗炎癥性腸病藥物中的應(yīng)用。甘草酸或甘草次酸可通過抑制炎癥反應(yīng)及抗氧化作用達到抗炎癥性腸病的作用。用甘草酸或甘草次酸制備的抗炎癥性腸病的藥物對炎癥性腸病具有療效好，安全范圍大等優(yōu)點，可以作為抗人炎癥性腸病的藥物。與目前主要治療炎癥性腸病的藥物—艾迪莎相比，療效更為顯著。
文檔編號A61P1/00GK1846705SQ20061001836
公開日2006年10月18日 申請日期2006年2月17日 優(yōu)先權(quán)日2006年2月17日
發(fā)明者丁虹, 馬瑤, 王黎, 付婷婷, 周惠萍, 項瑾, 劉穎, 王瑩 申請人:武漢大學