專利名稱：：流感疫苗的分子增強(qiáng)型皮膚遞送的制作方法流感疫苗的分子增強(qiáng)型皮膚遞送本申請要求申請日為2003年5月12日的美國臨時(shí)申請?zhí)?0/470，243的優(yōu)先權(quán)，以上文獻(xiàn)被以全文形式收作本文參考。1.發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及皮膚疫苗制劑，它被設(shè)計(jì)成將免疫原性組合物定向遞送到皮膚的真皮區(qū)室，皮膚包括真皮內(nèi)和表皮區(qū)室。本發(fā)明的皮膚疫苗制劑包括抗原性或免疫原性劑，和至少一種分子，例如，化學(xué)制劑，它能增強(qiáng)抗原性或免疫原性劑向真皮內(nèi)區(qū)室或表皮區(qū)室的免疫細(xì)胞的呈遞和/或可利用性，導(dǎo)致了增強(qiáng)的免疫反應(yīng)。本發(fā)明的皮膚疫苗制劑具有增強(qiáng)了的效力，在將抗原性或免疫原性劑遞送到真皮內(nèi)區(qū)室或表皮區(qū)室時(shí)，對存在于它里面的免疫細(xì)胞具有增強(qiáng)了的呈遞和/或可利用性。所述皮膚疫苗制劑的增強(qiáng)了的效力導(dǎo)致了使用比常規(guī)更低的抗原性或免疫原性劑的劑量，在施用一個(gè)真皮內(nèi)或表皮劑量之后產(chǎn)生治療有效的免疫反應(yīng)，并且沒有必要進(jìn)行強(qiáng)化免疫。2.發(fā)明背景2.l疫苗疫苗通常由活的減毒的病原體、完整的失活的有機(jī)體或失活的毒素組成。在很多場合下，這些方法業(yè)已成功地誘導(dǎo)了基于抗體介導(dǎo)的反應(yīng)的免疫保護(hù)作用。然而，某些病原體，例如，HIV，HCV，TB，和癡疾，需要誘導(dǎo)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫性(CMI)。非活性疫苗通常被證實(shí)不能有效產(chǎn)生CMI。另外，盡管活的疫苗可以誘導(dǎo)CMI，但某些活的減毒的疫苗可能導(dǎo)致在免疫抑制對象體內(nèi)發(fā)病。上述問題的結(jié)果是，已出現(xiàn)了疫苗開發(fā)的若干種新途徑，如重組蛋白亞基，合成肽，蛋白多糖綴合物，以及質(zhì)粒DM。盡管這些新的方法可以提供重要的安全性優(yōu)點(diǎn)，但一般的問題是，疫苗本身通常具有較差的免疫原性。因此，一直需要開發(fā)有效的和安全的佐劑，可將它用于疫苗制劑中以增強(qiáng)疫苗的免疫原性。例如，有關(guān)疫苗開發(fā)技術(shù)現(xiàn)狀的綜述參見，Edelman，2002，MolecularBiotech.21:129-148;O'Hagan等，2001,BiomolecularEngineering,18:69-85;Singh等，2002，Pharm.Res.19(6):715-28)。傳統(tǒng)上，疫苗制劑的免疫原性是通過以包括佐劑的制劑形式注射它提高的。免疫學(xué)佐劑最初由Ramon(1924，Ann.Inst.Pasteur,38:1)披露為"與特異性抗原組合使用的物質(zhì)，它能產(chǎn)生比抗原本身更可靠的免疫反應(yīng)"。業(yè)已將多種物質(zhì)，包括生物學(xué)和合成物質(zhì)用作佐劑。不過，盡管多年來對大量的候選物質(zhì)進(jìn)行了深入評估，目前唯一得到美國食品和藥物管理署批準(zhǔn)的佐劑是鋁-基礦物質(zhì)(通常稱之為明諷)。明諷具有引起爭議的安全性記錄(例如，參見，Malakoff，Science,2000,288:1323)，并且比較性研究表明，對于蛋白亞基的抗體誘導(dǎo)來說，它是弱的佐劑，而對于CMI來說是差的佐劑。另外，明礬佐劑可以誘導(dǎo)IgE抗體反應(yīng)，并且與某些對象的過敏反應(yīng)相關(guān)(例如，參見，Gupta等，1998，DrugDeliv.Rev.32:155-72;Relyveld等，1998，Vaccine16:1016-23)。自從明礬開發(fā)以來，很多實(shí)驗(yàn)佐劑業(yè)已發(fā)展到臨床試驗(yàn)階段，并且某些佐劑業(yè)已被證實(shí)為高效的，但是證明了在用于人體治療時(shí)具有太高的毒性。另外，盡管特定的佐劑可能證實(shí)為在一種組織中是安全的和有效的，但是相同的制劑在另一種組織空間中可能表現(xiàn)較差或者是有毒的。因此，必須對每一種制劑作為新的遞送器械進(jìn)行重新評估，使得臨床醫(yī)生可用于新的組織空間?，F(xiàn)有的疫苗制劑通常要在幾個(gè)月的時(shí)間跨度上施用若干次，以便誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，使宿主在隨后遇到所述抗原時(shí)能夠產(chǎn)生保護(hù)作用，例如，所述抗原是微生物本身。因此，盡管用于多種傳染性疾病的疫苗目前是可以得到的，但其中的很多，包括流感、破傷風(fēng)和乙型肝炎疫苗需要施用一次以上，以便產(chǎn)生保護(hù)作用。在衛(wèi)生保健匱乏或不足的國家，上述限制是非常成問題的。另外，在發(fā)達(dá)國家，依從性也是一個(gè)問題，特別是對于兒童免疫計(jì)劃來說更是如此。因此，很顯然存在對能導(dǎo)致增強(qiáng)了的治療效力和保護(hù)性免疫反應(yīng)的更有效的疫苗制劑和遞送它們的更有效的方法的需要。具體地講，需要開發(fā)能夠減弱或消除對長期注射方案的需要的疫苗制劑。2.2流感疫苗根據(jù)抗原性差異，可以將流感病毒劃分成A,B和C型。曱型流感病毒是通過命名法描述的，它包括亞型或型、地理學(xué)起源、菌抹編號、以及分離年份，例如A/Beijing/353/89。HA具有至少15種亞型(H1-H13)和9種NA亞型(N1-N9)。所有亞型都發(fā)現(xiàn)于禽類中，但是只有H1-H3和N1-N2發(fā)現(xiàn)于人類、豬和馬體內(nèi)(Murphy和Webster,"Orthomyxoviruses",inVirology,ed.Fields,B.N.,Knipe，D.M.，Chanock，R.M.，p.1091-1152，RavenPress,NewYork,1990)。曱型和乙型流感病毒流行病可在老年人和患有慢性疾病的患者中導(dǎo)致較高的死亡率。流行性感冒是每年發(fā)生的，并且是世界范圍內(nèi)的高發(fā)病率和死亡率的原因.兒童具有最高的發(fā)病率，并且主要造成了流感病毒在人類群體中的傳播。老年人和存在健康問題，如免疫損傷的個(gè)體，具有引起并發(fā)癥和因?yàn)榱鞲懈腥径≡旱妮^高的風(fēng)險(xiǎn)。僅在美國，在1956-1988年間，在7個(gè)流感季節(jié)中的每一個(gè)因?yàn)榉窝缀土鞲卸霈F(xiàn)的死亡超過IO，000例，在兩個(gè)季節(jié)中的每一個(gè)報(bào)道的死亡人數(shù)超過40,000例(Update:InfluenzaActivity--UnitedStatesandWorldwide,andCompositionofthe1992—1993influenzavaccine,MorbidityandMortalityWeeklyReport.U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,PublicHealthService,41No.18:315-323，1992)。典型的流感流行，導(dǎo)致肺炎和下呼吸道發(fā)病率的增加，這是由較高的住院率和死亡率所證明的。老年人或患有潛在慢性疾病的人最有可能出現(xiàn)這種并發(fā)癥，不過年幼的嬰兒也有可能患嚴(yán)重疾病。這樣的人群特別需要保護(hù)。目前現(xiàn)有的流感疫苗是失活的或活的減毒的流感疫苗。失活的流感疫苗包括三種類型抗原制劑之一失活的全病毒、亞病毒體，其中用去污劑或其他制劑破壞純化的病毒顆粒，以便溶解脂類外被，(所謂的"分離的"疫苗)或純化的HA和NA(亞單位疫苗)。這些失活的疫苗通常是肌內(nèi)注射U.m.)使用的。流感疫苗通常是三價(jià)疫苗，它們通常包括來自兩種甲型流感病毒菌抹和一種乙型流感菌林的抗原。在大多數(shù)場合下，標(biāo)準(zhǔn)的0.5mL的注射劑量包括來自每一種菌林的15jjg的血細(xì)胞凝集素抗原，它是通過單向散射免疫擴(kuò)散法(SRD)測定的(Wood等，1977，J.Biol.Stand.5:237-247;Wood等，1981，J.Biol.Stand.9:317-330)?，F(xiàn)有控制與每年流感流行相關(guān)的發(fā)病率和死亡率的措施是基于肌內(nèi)施用的失活的分離的或亞單位流感疫苗的使用。這種疫苗在預(yù)防呼吸道疾病和流感并發(fā)癥方面的效力從在健康成年人中的75%到在老年人中的不到50%。因此，明顯存在對施用流感疫苗的替代方法的需要，特別是無痛或以比肌內(nèi)注射疼痛更輕的方法，不存在注射部位感染的相同的危險(xiǎn)，并且不會出現(xiàn)因?yàn)?針恐懼"而導(dǎo)致的患者依從性相關(guān)的負(fù)面效應(yīng)。另外，需要通過不會對衛(wèi)生保健工作者造成負(fù)面影響，如高的針刺傷危險(xiǎn)的施用途徑施用流感疫苗。仍然需要治療上更有效的流感疫苗制劑，它能減少或消除對長時(shí)間注射方案的需要，并且還能減輕任何類型的刺激，無論它是局部的或系統(tǒng)性的。3.發(fā)明概述本發(fā)明在某種程度上是基于本發(fā)明人的出人意料的發(fā)現(xiàn)。通過專一性地靶定對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室進(jìn)行真皮，特別是真皮內(nèi)疫苗遞送制劑，能提高疫苗的治療效力和保護(hù)性免疫反應(yīng)?；诒景l(fā)明人的理解和認(rèn)識，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑的增強(qiáng)了的效力在某種程度上是由于真皮內(nèi)區(qū)室提供了理想的免疫空間，使抗原性或免疫原性劑能夠直接接觸存在于它里面的免疫細(xì)胞。實(shí)際上，真皮內(nèi)區(qū)室很少被作為抗原性或免疫原性劑的遞送部位有效靶定，至少在某種程度上是由于專一性和可再現(xiàn)地，即將針精確地放入真皮內(nèi)空間，和適當(dāng)?shù)倪f送壓力遞送抗原性或免疫原性劑的難度。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)還可能出現(xiàn)在其他真皮區(qū)室，包括，但不局限于皮膚的表皮區(qū)室。盡管不希望受任何特定作用機(jī)制的限制，但皮膚是用于遞送疫苗和基因治療劑的吸引人的目標(biāo)部位。對于疫苗(遺傳學(xué)和常規(guī)疫苗)來說，皮膚是誘人的遞送部位，因?yàn)樵谠摻M織中存在高濃度的抗原呈遞細(xì)胞(APC)和APC前體，特別是存在于真皮內(nèi)區(qū)室中的表皮朗罕氏細(xì)胞(LC)和免疫細(xì)胞。本發(fā)明制劑的增強(qiáng)了的效力可以用包括用于真皮內(nèi)和表皮遞送的皮膚疫苗制劑實(shí)現(xiàn)。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括表皮和真皮制劑)包括抗原性或免疫原性劑，和至少一種分子，例如，化學(xué)制劑，它能增強(qiáng)抗原性或免疫原性劑向免疫細(xì)胞，例如，真皮內(nèi)區(qū)室的免疫細(xì)胞(例如，抗原呈遞細(xì)胞)，或表皮區(qū)室的免疫細(xì)胞(例如，表皮朗罕氏細(xì)胞(LC))的呈遞和/或可利用性，產(chǎn)生增強(qiáng)了的保護(hù)性免疫反應(yīng)。在具體實(shí)施方案中，所述分子起著延長抗原性或免疫原性劑與真皮區(qū)室的免疫細(xì)胞，例如，抗原呈遞細(xì)胞、表皮朗罕氏細(xì)胞(LC)的接觸時(shí)間的作用，產(chǎn)生增強(qiáng)了的保護(hù)性免疫反應(yīng)。本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括表皮和真皮制劑)具有增強(qiáng)了的效力，例如，增強(qiáng)了的保護(hù)性免疫反應(yīng)，在所述抗原性或免疫原性劑被遞送到皮膚區(qū)室時(shí)，具有對存在于它里面的免疫細(xì)胞，例如，抗原呈遞細(xì)胞的增強(qiáng)了的可利用性和/或呈遞。另外，在所述抗原性或免疫原性劑被遞送到皮膚區(qū)室時(shí)，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑具有增強(qiáng)了的效力，時(shí)間，^致^強(qiáng)了i疫反應(yīng)。皮膚疫苗制劑(包"表皮和真皮制劑)的增強(qiáng)了的效力在施用比常用的抗原性或免疫原性劑更低的劑量到皮趺之后導(dǎo)致了治療有效反應(yīng)，例如，保護(hù)性免疫反應(yīng)，并且不需要強(qiáng)化免疫?？捎糜诒景l(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括表皮和真皮制劑)中的分子包括一旦施用到皮膚空間之后能夠聚合或膠凝，以產(chǎn)生半固體或固體明膠狀基質(zhì)的膠凝劑。在某些實(shí)施方案中，使所述明膠狀基質(zhì)使得抗原性和/或免疫原性制劑對皮膚空間中的免疫細(xì)胞具有增強(qiáng)了的呈遞和/或相互作用。在具體實(shí)施方案中，所述膠凝劑是在一旦施用到真皮空間之后能夠聚合或膠凝的膠凝劑。優(yōu)選的是，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的聚合物能增強(qiáng)抗原性或免疫原性劑對皮膚區(qū)室的免疫細(xì)胞，例如，抗原呈遞細(xì)胞的呈遞和/或可利用性。根據(jù)由真皮內(nèi)區(qū)室所產(chǎn)生的物理限制，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑除了抗原性或免疫原性劑和分子，特別是膠凝劑，例如，在一旦施用到真皮內(nèi)空間之后能夠聚合或膠凝的聚合物之外，原本還打算包括生物或粘膜附著性物質(zhì)。不過，根據(jù)本發(fā)明人的意外發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑除了粘膜或生物附著性物質(zhì)之外不需要膠凝劑。本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑可簡單地具有粘膜或生物附著性物質(zhì)。另外，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑可簡單地具有在一旦施用到真皮內(nèi)空間之后能夠聚合或膠凝的聚合物。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及真皮內(nèi)疫苗制劑，它包括抗原性或免疫原性劑，以及一旦施用到真皮內(nèi)空間之后能夠聚合或膠凝的至少兩種聚合物。可用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括表皮和真皮制劑)中的其他分子包括粘膜或生物附著性物質(zhì)，它能增強(qiáng)抗原性或免疫原性劑對真皮區(qū)室的免疫細(xì)胞的呈遞和/或可利用性。在某些實(shí)施方案中，所述粘膜或生物附著性物質(zhì)可以允許抗原性或免疫原性劑附著在真皮空間的免疫細(xì)胞，例如，抗原呈遞細(xì)胞上。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包括抗原性或免疫原性劑和至少兩種粘膜或生物附著性分子的皮膚疫苗制劑。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括表皮和真皮制劑)還包括一種或多種添加劑，包括但不局限于，佐劑、賦形劑、穩(wěn)定劑和滲透促進(jìn)劑?？捎糜诒景l(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括表皮和真皮制劑)中的分子包括聚合物，優(yōu)選生物相容性和/或生物可降解的聚合物，它能發(fā)生熱誘導(dǎo)的物理轉(zhuǎn)變，在生理溫度下，例如，在25-37'C的溫度下由液體轉(zhuǎn)變成凝膠。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的是，所述生理溫度應(yīng)當(dāng)是高于所述聚合物的液體-凝膠轉(zhuǎn)變的溫度。優(yōu)選的，所述聚合物是非離子嵌段共聚物，又被稱作普盧蘭尼克或泊洛沙姆，包括，但不局限于，普盧蘭尼克F-127，普盧蘭尼克F-68，和普盧蘭尼克F108。在某些實(shí)施方案中，所述聚合物起著補(bǔ)給站的作用。另外，所述聚合物能增強(qiáng)抗原性或免疫原性劑對真皮區(qū)室的免疫細(xì)胞例如抗原呈遞細(xì)胞的呈遞和/或可利用性。在某些實(shí)施方案中，所述聚合物是佐劑。在其他實(shí)施方案中，所述聚合物還是生物附著性和/或粘膜附著性物質(zhì)。用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括表皮和真皮制劑)中的分子還可以是粘膜或生物附著性物質(zhì)，它導(dǎo)致了增強(qiáng)了的免疫反應(yīng)。在某些實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的粘膜或生物附著性物質(zhì)可以促進(jìn)抗原性或免疫原性劑對皮膚區(qū)室的免疫細(xì)胞表面的附著性。用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的粘膜或生物附著性物質(zhì)的例子包括，但不局限于，聚卡波非，聚丙烯酸(PAA),carobopols，聚羥乙烯EX55，capricol，卡波姆，多糖，透明質(zhì)酸，殼聚糖；外源凝集素；纖維素，甲基纖維素，羧甲基纖維素，羥丙基曱基纖維素，藻酸鈉，明膠，果膠，阿拉伯膠，和聚維酮。本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括表皮和真皮制劑)還可以包括抗原性或免疫原性劑和起著膠凝劑作用，例如，能在生理溫度下聚合或膠凝的分子，以及起著粘膜或生物附著性物質(zhì)作用的分子。在本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑中使用聚合物的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是，它們特別適合在低于生理溫度的溫度下，例如，在25-37t:下的真皮內(nèi)遞送，所述真皮內(nèi)疫苗制劑是液體，并且在真皮內(nèi)注射之后，所述真皮內(nèi)疫苗制劑隨著在對象體內(nèi)被加熱到高于液體-凝膠轉(zhuǎn)變溫度而形成凝膠。在具體實(shí)施方案中，明膠樣制劑能夠?qū)⒖乖曰蛎庖咴詣┚徛尫诺秸嫫ぶ?，加?qiáng)了有效的免疫反應(yīng)。另外，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗遞送系統(tǒng)對于真皮內(nèi)施用是理想的，因?yàn)槊髂z狀材料能防止任何液體泄露，從而增加了業(yè)已確定了的真皮內(nèi)遞送的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗遞送系統(tǒng)以下以流感疫苗制劑為例，該制劑在施用到對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室時(shí)，增強(qiáng)了所述流感疫苗制劑的保護(hù)性免疫反應(yīng)和效力。在一種具體實(shí)施方案中，所述流感疫苗遞送系統(tǒng)包括來自流感病毒的一種或多種抗原，和至少一種生物相容性、生物可降解的膠凝劑，例如，能發(fā)生熱誘導(dǎo)的物理轉(zhuǎn)變的聚合物，其在生理溫度下由液體轉(zhuǎn)變成凝膠。在另一種具體實(shí)施方案中，所述流感疫苗遞送系統(tǒng)包括來自流感病毒的一種或多種抗原，和至少一種粘膜或生物附著性物質(zhì)。在另一種具體實(shí)施方案中，所述流感疫苗遞送系統(tǒng)包括來自流感病毒的一種或多種抗原，至少一種膠凝劑，例如聚合物，和至少一種粘膜或生物附著性物質(zhì)。本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑在產(chǎn)生針對抗原性或免疫原性劑的免疫反應(yīng)的快速和高水平的免疫反應(yīng)方面是特別有利的，針對所述制劑的免疫反應(yīng)是理想的。本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑能夠用低劑量的抗原性或免疫原性劑獲得預(yù)防水平上的系統(tǒng)免疫。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)性劑的劑量的60%，優(yōu)選50%，更優(yōu):40i的抗原':或免i原;生劑產(chǎn)i了保護(hù)性免疫反應(yīng)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑包括抗原性或免疫原性劑的劑量，該劑量低于本領(lǐng)域常用劑量，例如，在Physician'sDeskReference中，采用常規(guī)疫苗遞送方法，例如，肌內(nèi)和靜脈內(nèi)所推薦的劑量。優(yōu)選的是，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑在一個(gè)真皮內(nèi)劑量之后導(dǎo)致了治療性和預(yù)防性有效免疫反應(yīng)。本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑可以真皮內(nèi)施用，用于每年一次的免疫。相對現(xiàn)有制劑而言，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括表皮和真皮制劑)具有增強(qiáng)了的治療效力，安全性，和毒性特征。由本發(fā)明的皮膚疫苗制劑所產(chǎn)生的效果和優(yōu)點(diǎn)在某種程度上是由于所述特定制劑以及它們在靶定皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室方面的應(yīng)用。優(yōu)選的是，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑提供了更大的和更持久的保護(hù)作用，特別是對于不能對免疫作出良好反應(yīng)的高危群體來說更是如此。本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑的治療效力在某種程度上是由于抗原性或免疫原性劑向皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室中的抗原呈遞細(xì)胞(APCs)的緩慢釋放，明膠狀基質(zhì)對局部皮膚組織的促炎作用，使所述組織具有對白細(xì)胞的增強(qiáng)了的化學(xué)趨化作用，或明膠狀基質(zhì)的促-佐劑作用。在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑在免疫學(xué)不成熟，抑制或衰老對象體內(nèi)增強(qiáng)免疫反應(yīng)方面具有治療和/或預(yù)防作用。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的是，本文所提供的原理同樣可應(yīng)用于將疫苗制劑遞送到角質(zhì)層以外的部位，以便沉積到對象皮膚的表皮內(nèi)區(qū)室。用于摩擦皮膚，特別是皮膚的角質(zhì)層以將物質(zhì)沉積到表皮區(qū)室的方法和器械為本領(lǐng)域所公知，并且包括在本發(fā)明中，如在申請日分別為2001年10月29日、2001年11月27日、2000年5月22日和2002年10月29日的美國臨時(shí)專利申請?zhí)?0/330，713、60/333，162和美國專利申請流水號09/576，643、美國申請流水號10/282，231中所披露的，以上所有文獻(xiàn)都以它們的全文形式收作本文參考。本發(fā)明還涉及試劑盒，包括本文所披露的本發(fā)明真皮內(nèi)施用的器械和真皮內(nèi)疫苗制劑。本發(fā)明還涉及包括本文所披露的本發(fā)明的真皮施用器械和真皮疫苗制劑的試劑盒。本發(fā)明還涉及包括本文所披露的本發(fā)明的表皮施用器械和皮膚疫苗制劑的試劑盒。4.附圖的簡要說明圖l當(dāng)流感接種物補(bǔ)充了普盧蘭尼克F127時(shí)對流感抗原的血清反應(yīng)。用含有普盧蘭尼克F127的流感病毒疫苗制劑對Balb/c小鼠免(w/oF127)。圖2當(dāng)流感接種物補(bǔ)充了普盧蘭尼克F127和粘膜附著性物質(zhì)時(shí)對流感抗原的血清反應(yīng)。用含有普盧蘭尼克F127和粘膜附著性物質(zhì)的流感病毒疫苗制劑對Balb/c小鼠進(jìn)行免疫的血清抗體反應(yīng)與單獨(dú)使用流感病毒疫苗制劑的抗體反應(yīng)進(jìn)行比較(w/oF127/粘膜附著性物質(zhì))。圖3當(dāng)流感接種物補(bǔ)充了普盧蘭尼克F127和羧曱基纖維素時(shí)對流感抗原的血清反應(yīng)。用含有普盧蘭尼克F127和羧甲基纖維素的流感病毒疫苗制劑對Balb/c小鼠進(jìn)行免疫的血清抗體反應(yīng)與單獨(dú)使用流感病毒疫苗制劑的抗體反應(yīng)進(jìn)行比較(w/o羧甲基纖維素)。圖4當(dāng)流感接種物補(bǔ)充了明膠時(shí)對流感抗原的血清反應(yīng)。用含有明膠的流感病毒疫苗制劑對Balb/c小鼠進(jìn)行免疫時(shí)的血清抗體反應(yīng)與單獨(dú)使用流感病毒疫苗制劑的抗體反應(yīng)進(jìn)行比較(w/o明膠)。圖5當(dāng)流感接種物補(bǔ)充了甲基纖維素時(shí)對流感抗原的血清反應(yīng)。在用含有曱基纖維素的流感病毒疫苗制劑對Balb/c小鼠進(jìn)行免疫時(shí)的血清抗體反應(yīng)與單獨(dú)使用流感病毒疫苗制劑的抗體反應(yīng)進(jìn)行比較(w/o曱基纖維素)。圖6當(dāng)流感接種物補(bǔ)充了曱基纖維素(終點(diǎn)效價(jià))時(shí)對流感抗原的血清反應(yīng)。用含有曱基纖維素的流感病毒疫苗制劑對Balb/c小鼠進(jìn)行免疫時(shí)的血清抗體反應(yīng)與單獨(dú)使用流感病毒疫苗制劑的抗體反應(yīng)進(jìn)行比較(w/o甲基纖維素)。對每一個(gè)動物的反應(yīng)進(jìn)行作圖。圖7豬的DRAIZE評分。對甲基纖維素補(bǔ)充和當(dāng)甲基纖維素與流感病毒疫苗免疫原組合時(shí)進(jìn)行皮膚相容性測定。圖8針器械。根據(jù)本發(fā)明設(shè)計(jì)的針組件的分解透視圖。圖9針器械。圖8所示實(shí)施方案的部分剖視圖。圖10針器械。圖9所示實(shí)施方案結(jié)合在注射器主體上，以便形成注射器械。圖11A是優(yōu)選實(shí)施方案的手柄末端的正視圖。圖IIB是微型研磨機(jī)的優(yōu)選實(shí)施方案的側(cè)視圖。圖12A是圖11A和IIB所示微型研磨器械的透視圖。圖12B是圖IIB所示微型研磨器械的剖視圖。圖13是圖11A,IIB，12A，和12B所示微型研磨器械在對象皮膚上的研磨表面的側(cè)視圖。圖14是圖13所示實(shí)施方案中的研磨表面的透視圖。圖14A是研磨表面的剖視側(cè)視圖。圖15是圖13所示實(shí)施方案的研磨表面的仰視圖。圖16是皮膚的研磨皺紋的部分剖視透視圖。5.發(fā)明的詳細(xì)說明本發(fā)明涉及專門設(shè)計(jì)的用于定向遞送，優(yōu)選選擇性地和專一性地遞送抗原性或免疫原性劑到對象皮膚的特定區(qū)室，包括真皮內(nèi)和表皮區(qū)室的皮膚疫苗制劑。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑被設(shè)計(jì)成定向遞送，優(yōu)選選擇性地和專一性地遞送抗原性或免疫原性劑到對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑被直接定向遞送到皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室。本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑包括抗原性或免疫原性劑和至少一種分子，例如，化學(xué)制劑，它能增強(qiáng)所述抗原性或免疫原性向免疫細(xì)胞，如真皮內(nèi)區(qū)室的免疫細(xì)胞的呈遞和/或可利用性，產(chǎn)生增強(qiáng)了的保護(hù)性免疫反應(yīng)。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑中的分子延長了所述抗原性或免疫原性劑與真皮內(nèi)區(qū)室的免疫細(xì)胞，例如，抗原呈遞細(xì)胞的接觸時(shí)間，產(chǎn)生增強(qiáng)了的保護(hù)性免疫反應(yīng)。盡管不希望受特定作用機(jī)制的限制，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑獲得了增強(qiáng)了的治療效力，例如，增強(qiáng)了的保護(hù)性免疫反應(yīng)，在某種程度上是由于抗原性或免疫原性劑在注射部位的持續(xù)存在，即"補(bǔ)給站效應(yīng)"。優(yōu)選的是，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑能降低抗原性或免疫原性劑從注射部位清除的速度。更具體地講，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑可以在注射部位，例如，真皮空間緩慢釋放抗原性或免疫原性劑。本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑可以增強(qiáng)抗原性或免疫原性劑的免疫學(xué)反應(yīng)或治療效力，包括(l)增強(qiáng)抗原性或免疫原性劑的免疫原性；(2)增強(qiáng)免疫反應(yīng)的速度和/或持續(xù)時(shí)間；(3)調(diào)節(jié)抗體反應(yīng)的活性，專一性，同種型或類型分布；(4)刺激細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)；(5)促進(jìn)粘膜免疫性；或(6)降低抗原性或免疫原性劑的劑量。盡管不希望受特定作用模式的限制，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑通過使抗原性或免疫原性劑專一性靶定皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室能增強(qiáng)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，所述區(qū)室中包括抗原呈遞細(xì)胞，例如，樹突狀細(xì)胞和朗罕氏細(xì)胞。本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑能夠增強(qiáng)細(xì)胞介導(dǎo)的和/或體液介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。可以通過本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑調(diào)控的細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)包括，例如，Thl或Th2CD4+T-輔助細(xì)胞介導(dǎo)的或CD8+細(xì)胞毒性T-淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的反應(yīng)。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑被設(shè)計(jì)成定向遞送，優(yōu)選選擇性地和專一性地遞送抗原性或免疫原性劑到對象皮膚的表皮內(nèi)區(qū)室。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的表皮疫苗制劑被直接定向遞送到皮膚的表皮區(qū)室。本發(fā)明的表皮疫苗制劑包括抗原性或免疫原性劑和至少一種分子，例如，化學(xué)制劑，它能增強(qiáng)抗原性或免疫原性劑向免疫細(xì)胞，如表皮區(qū)室的免疫細(xì)胞的呈遞和/或可利用性，產(chǎn)生增強(qiáng)了的保護(hù)性免疫反應(yīng)。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的表皮疫苗制劑延長了抗原性或免疫原性劑與表皮區(qū)室的免疫細(xì)胞，例如，抗原呈遞細(xì)胞的接觸時(shí)間，產(chǎn)生增強(qiáng)了的保護(hù)性免疫反應(yīng)?？捎糜诒景l(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮內(nèi)和表皮疫苗制劑)中的分子包括膠凝劑，如能夠聚合或膠凝，例如形成半固體或固體二維或三維基質(zhì)的聚合物。優(yōu)選的是，所述分子一旦施用到真皮內(nèi)或表皮區(qū)室，就能夠，例如，使抗原性或免疫原性劑與其中的免疫學(xué)空間接觸和相互作用。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的聚合物不形成脂質(zhì)體或膠束結(jié)構(gòu)。所述聚合物優(yōu)選能增強(qiáng)抗原性或免疫原性劑向皮膚區(qū)室的免疫細(xì)胞，例如，真皮內(nèi)或表皮區(qū)室的免疫細(xì)胞的呈遞和/或可利用性。優(yōu)選的是，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮內(nèi)和表皮疫苗制劑)中的分子是生物學(xué)相容性的和/或生物可降解的。在具體實(shí)施方案中，所述分子是生物分子，包括但不局限于蛋白、多肽和肽。在某些實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮內(nèi)和表皮疫苗制劑)中的分子是在施用皮膚疫苗制劑的對象的生理溫度，例如，對于人類對象來說，在25-37。C下能夠發(fā)生從液體轉(zhuǎn)變成凝膠的物理轉(zhuǎn)變的任何聚合物。在某些實(shí)施方案中，所述物理轉(zhuǎn)變不包括脂質(zhì)體或膠束。優(yōu)選的是，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮內(nèi)和表皮疫苗制劑)中的聚合物的從液體到凝膠的轉(zhuǎn)變是熱誘導(dǎo)的，并且最優(yōu)選是可逆的。在某些實(shí)施方案中，聚合物的液體-凝膠轉(zhuǎn)變是化學(xué)誘導(dǎo)的。所述聚合物的液體-凝膠轉(zhuǎn)變溫度優(yōu)選低于施用皮膚疫苗制劑(包括真皮內(nèi)和表皮疫苗制劑)的對象的生理溫度。在某些實(shí)施方案中，所述聚合物從液體到凝膠的轉(zhuǎn)變還導(dǎo)致了聚合物的黏度提高至少30%，至少50%，至少60%，至少80%,至少90°/。或至少99%。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述聚合物是非離子嵌段共聚物，包括但不局限于，普盧蘭尼克F-127，普盧蘭尼克F-108,和普盧蘭尼克F108。所述聚合物可以具有佐劑，生物附著性物質(zhì)或粘膜附著性物質(zhì)的一種或多種特征?？捎糜诒景l(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮內(nèi)和表皮疫苗制劑)中的其他分子是生物或粘膜附著性物質(zhì)，它的優(yōu)點(diǎn)在某種程度上是由于它們能夠使抗原性或免疫原性劑附著在皮膚空間的生物學(xué)和免疫學(xué)表面，例如，皮膚空間的免疫細(xì)胞的表面上?？捎糜诒景l(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮內(nèi)和表皮疫苗制劑)中的生物或粘膜附著性物質(zhì)的非限定性例子包括，聚卡波非、capricol、聚丙烯酸(PAA)、carobopols、聚鞋乙烯EX55、卡波姆、多糖、透明質(zhì)酸、殼聚糖、外源凝集素、纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素、羥丙甲基纖維素、藻酸鈉、明膠、果膠、阿拉伯膠和聚維酮。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮內(nèi)和表皮疫苗制劑)還包括一種或多種添加劑，包括但不局限于，佐劑、賦形劑、穩(wěn)定劑、滲透促進(jìn)劑和粘膜或生物附著性物質(zhì)。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮內(nèi)和表皮疫苗制劑)還可以包括一種或多種其他可以藥用的載體，包括任何合適的稀釋劑或賦形劑。優(yōu)選的是，所述可以藥用的載體本身不會誘導(dǎo)生理學(xué)反應(yīng)，例如，免疫反應(yīng)。最優(yōu)選的是，所述可以藥用的栽體不會導(dǎo)致任何負(fù)面或不希望的副作用和/或不會導(dǎo)致過高的毒性。用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮內(nèi)和表皮疫苗制劑)中的可以藥用的載體包括但不局限于，鹽水、緩沖過的鹽溶液、葡萄糖、水、甘油、無菌等滲含水緩沖液以及它們的組合?？梢运幱玫妮d體、稀釋劑、和賦形劑的其它例子披露于以下文獻(xiàn)中Remington'sPharmaceuticalSciences(MackPub.Co.,N.J.，currentedition;以上所有文獻(xiàn)都被以全文形式收作本文參考)。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮內(nèi)和表皮疫苗制劑)還可以包括濕潤劑、乳化劑或pH緩沖劑。本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮內(nèi)和表皮疫苗制劑)可以是固體，如適合重構(gòu)的冷凍干燥的粉末、液體溶液、懸浮劑、片劑、丸劑、膠嚢、緩釋制劑、或粉末。在具體的優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑不是乳液，因?yàn)槿橐旱恼嫫?nèi)遞送在技術(shù)上是困難的，并且是浪費(fèi)勞動力的。本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑可以是適合真皮內(nèi)遞送的任何形式。在一種實(shí)施方案中，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑是可流動的、可注射介質(zhì)形式，即可以用注射器注射的低黏度制劑。在另一種實(shí)施方案中，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑是明膠狀基質(zhì)形式的，例如，半固體或固體二維或三維基質(zhì)。在另一種實(shí)施方案中，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑是具有有限的流動性的高黏度、稠的介質(zhì)形式的。在任一種實(shí)施方案中，所述抗原性或免疫原性劑一致性地并且均勻地分散在所述制劑中。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述真皮內(nèi)疫苗制劑可以通過改變溫度而從可流動的、可注射介質(zhì)轉(zhuǎn)變成明膠，或者相反，以便真皮內(nèi)疫苗制劑在低于轉(zhuǎn)變溫度的情況是可流動的、可注射介質(zhì)形式，并且在高于轉(zhuǎn)變溫度下是明膠。所述可流動的、可注射介質(zhì)可以是液體。另外，所述可流動的、可注射介質(zhì)是顆粒狀材料分散在它里面，以便所述介質(zhì)保持流動性，可以注射，例如，可以用注射器施用的液體。本發(fā)明的表皮疫苗制劑可以是適合真皮內(nèi)遞送的任何形式，正如在申請日為2001年10月29日、2001年11月27日、2000年5月22日和2002年10月29日的美國臨時(shí)專利申請?zhí)?0/330，713，60/333，162和美國專利申請流水號09/576，643，美國申請?zhí)?0/282,231中所披露的，以上所有文獻(xiàn)都以它們的全文形式收作本文參考。優(yōu)選的是，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮內(nèi)和表皮疫苗制劑)是穩(wěn)定的制劑，即，所述抗原性或免疫原性劑發(fā)生很小的至不可檢測水平的降解和/或聚集，并且可以長時(shí)間地保存而又不喪失生物學(xué)活性，例如，所述抗原性制劑的抗原性或免疫原性。本發(fā)明的皮膚疫苗制劑的穩(wěn)定性在某種程度上是由于抗原性或免疫原性劑被包埋，例如，一致性地和均勻地分散在所述聚合物的明膠狀基質(zhì)中，它提供了能保護(hù)并且防止抗原性或免疫原性劑發(fā)生降解和/或其他不希望的會導(dǎo)致生物學(xué)活性降低的聚合物結(jié)構(gòu)網(wǎng)絡(luò)。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑在2x:-8x:，優(yōu)選4匸的溫度下具有至少2年的穩(wěn)定性，這是當(dāng)真皮內(nèi)疫苗制劑是液體形式時(shí)(即，不是凝膠形式時(shí))通過高效大小排阻層析(HPSEC)所測定的。即，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑在保存上述限定時(shí)間之后具有低的至不可檢測水平的抗原性或免疫原性劑的聚集和/或降解。優(yōu)選的是，不超過5%,不超過4%，不超過3%，不超過2%，不超過1%，最優(yōu)選不超過0.5。yi的抗原性或免疫原性分子形成了聚集或降解，這是在保存上述限定時(shí)間之后通過HPSEC所測定的。另外，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑在上述條件下長時(shí)間保存時(shí)幾乎沒有表現(xiàn)出抗原性或免疫原性劑的生物學(xué)活性的喪失，這是通過本領(lǐng)域所公知的標(biāo)準(zhǔn)方法評估的。本發(fā)明的皮膚疫苗制劑在保存上述時(shí)間之后保持了超過80%、超過85%、超過90%、超過95°/。、超過98%、超過99%、或超過99.5%的在保存之前的起始生物學(xué)活性。用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮內(nèi)和表皮疫苗制劑)中的測定，并且取決于抗原性或免疫原性劑的效力和性質(zhì)。對于本發(fā)明的強(qiáng)化遞送系統(tǒng)來說，抗原性或免疫原性劑的濃度優(yōu)選低于在采用其他施用途徑，例如肌內(nèi)途徑時(shí)的常用濃度。用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮內(nèi)和表皮疫苗制劑)中的抗原性或免疫原性劑的濃度為常用于獲得有效免疫反應(yīng)的濃度的60%、優(yōu)選50%、更優(yōu)選40%。通常，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮內(nèi)和表皮疫苗制劑)中的抗原性或免疫原性劑的起始濃度為使用常規(guī)施用途徑，例如，肌內(nèi)注射常用于引起所需免疫反應(yīng)的濃度。然后調(diào)整用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮內(nèi)和表皮疫苗制劑)中的抗原性或免疫原性劑的濃度，例如，通過用合適的稀釋劑稀釋，以便獲得有效的保護(hù)性免疫反應(yīng)，這是通過本領(lǐng)域所公知的以及本文所披露的標(biāo)準(zhǔn)方法所評估的。用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮內(nèi)和表皮疫苗制劑)中的分子的濃度取決于所使用的特定分子。在具體實(shí)施方案中，當(dāng)所述分子是聚合物時(shí)，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的聚合物濃度可以為至少5%(w/v)、至少10%(w/v)、至少15%(w/v)、至少20%(w/v)、至少25%(w/v)或至少30%(w/v)。在某些實(shí)施方案中，所述聚合物的濃度高于大約30%(w/v)。在其他實(shí)施方案中，所述聚合物的濃度低于大約0%(w/v)。在另一種具體實(shí)施方案中，當(dāng)所述分子是粘膜或生物附著性物質(zhì)時(shí)，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的濃度可以為至少0.1%(w/v)、至少0.5%(w/v)、至少1%(w/v)、至少5°/。(w/v)或至少10%(w/v)。本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮內(nèi)和表皮疫苗制劑)可以制備成單位劑型。每個(gè)小瓶中的單位劑量可以包括0.1mL-lmL，優(yōu)選0.1-0.5mL的制劑。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑的單位劑型可以包括50nL-100jnL、50|aL-200|uL或50mL-500jaL的制劑。如果必要，可以通過向每一個(gè)小瓶中添加無菌稀釋劑將所述制劑調(diào)整到理想濃度。本發(fā)明的皮膚疫苗制劑在誘導(dǎo)理想的免疫反應(yīng)方面更有效，因此用于皮膚遞送的總體積可以小于常規(guī)的體積。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑的成分，例如，抗原性或免疫原性劑和分子，例如聚合物是分別提供的或以單位劑型形式混合在一起，例如，作為干燥的冷凍干燥的粉末或無水濃縮物裝在密封的容器，如安瓿或小袋中，上面標(biāo)明了活性成分，例如，抗原性或免疫原性劑的用量。在其他實(shí)施方案中，可以提供無菌稀釋劑安瓿，以便所述成分可以在施用之前混合。在具體實(shí)施方案中，所述分子可以在施用之前與抗原性或免疫原性劑混合。在另一種具體實(shí)施方案中，所述分子可以在施用期間在真皮內(nèi)遞送器械中與抗原性或免疫原性劑混合。在另一種具體實(shí)施方案中，所述分子可以在施用期間在真皮遞送器械中與抗原性或免疫原性劑混合。在另一種具體實(shí)施方案中，所述分子可以在施用期間在表皮遞送器械中與抗原性或免疫原性劑混合。本發(fā)明還提供了包裝在密封容器，如標(biāo)明成分用量的安瓿或小袋中的真皮內(nèi)疫苗制劑。在一種實(shí)施方案中，所述真皮內(nèi)疫苗制劑是以液體形式提供的，在另一種實(shí)施方案中，是作為干滅菌的冷凍干燥的粉末或無水濃縮物在密封的容器中提供的，并且可以重構(gòu)，例如用水或鹽水重構(gòu)到適合給對象使用的濃度。在另一種實(shí)施方案中，所述真皮內(nèi)疫苗制劑是以液體形式在標(biāo)明了成分用量和濃度的密封容器中提供的。本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑可以通過能產(chǎn)生穩(wěn)定的，無菌的，可注射制劑的任何方法制備。在具體實(shí)施方案中，當(dāng)所述分子是聚合物時(shí)，所述聚合物可以溶解在水溶液，例如水中，在低于聚合物的液體-凝膠轉(zhuǎn)變溫度，并且具有在高于所述液體-凝膠轉(zhuǎn)變溫度時(shí)能夠形成明膠狀基質(zhì)的濃度下進(jìn)行。形成聚合物溶液的最佳濃度取決于特定聚合物，并且將在5.1.l節(jié)中討論。在同一種實(shí)施方案中，將抗原性或免疫原性劑溶解在水溶液，例如水中，并且與所述聚合物混合，以便形成穩(wěn)定的，無菌的，可注射制劑?；蛘?，所述抗原性或免疫原性劑可以是顆粒狀的，并且溶解在聚合物溶液中，以便形成穩(wěn)定的、無菌的、可注射制劑。對于本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑的增強(qiáng)的性能來說，所述抗原性或免疫原性劑應(yīng)當(dāng)均勻地分散在整個(gè)明膠狀基質(zhì)中，這一目的可以通過將抗原性或免疫原性劑溶解在含有聚合物的溶液中實(shí)現(xiàn)，溶解是在低于液體-凝膠轉(zhuǎn)變溫度的溫度下進(jìn)行的，以便一旦溫度提高，所述抗原性或免疫原性劑能均勻地分散并且包埋在明膠狀基質(zhì)中。本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑具有將抗原性或免疫原性劑真皮內(nèi)遞送到對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室的特殊用途。優(yōu)選的是，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑是使用披露于以下文獻(xiàn)中的真皮內(nèi)器械和方法施用的美國專利申請?zhí)?9/417，671，申請日為1999年10月14曰；09/606,909，申請日為2000年6月29日；09/893，746，申請日為2001年6月29曰；10/028，989，申請?jiān)粸?001年12月28曰；10/028,988，申請日為2001年12月28日；或國際公開號EP10922444，公開日為2001年4月18日；WO01/02178,公開日為2002年1月10日；和WO02/02179,公開日為2002年1月10日；以上所有文獻(xiàn)的內(nèi)容都被全文收作本文參考。本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑被用于對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室，使得刺入對象皮膚的真皮內(nèi)空間，而又不穿過它。優(yōu)選的是，所述真皮內(nèi)疫苗制劑被施用到大約1.0-3.0mm的深度上，更優(yōu)選1.0-2.0mm的深度的真皮內(nèi)空間。與常規(guī)施用模式，例如疫苗制劑的肌肉注射相比，本發(fā)明的用于真皮內(nèi)遞送的真皮內(nèi)疫苗制劑提供了無痛和較少入侵性的施用模式，因此，例如在對象依從性方面更為有利。本發(fā)明的表皮疫苗制劑具有用于表皮內(nèi)遞送抗原性或免疫原性劑到對象皮膚的表皮內(nèi)區(qū)室的特殊用途。優(yōu)選地，本發(fā)明的表皮疫苗制劑是使用披露于以下文獻(xiàn)中的任何方法和器械施用的申請日分別為2001年10月29日，2001年11月27日，和2000年5月22日，和2002年10月29日的美國臨時(shí)專利申請?zhí)?0/330，713，60/333，162和美國專利申請流水號09/576，643，美國申請?zhí)?0/282，231，以上所有文獻(xiàn)都以它們的全文形式收作本文參考。在某些實(shí)施方案中，所述真皮內(nèi)疫苗制劑是在例如，用冷凍干燥的粉末重構(gòu)制備之后12小時(shí)之內(nèi)、優(yōu)選6小時(shí)之內(nèi)、5小時(shí)之內(nèi)、3小時(shí)之內(nèi)或1小時(shí)之內(nèi)施用的。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述真皮內(nèi)疫苗制劑在即將真皮內(nèi)施用之前被制備成用于給對象真皮內(nèi)施用，即與所述分子混合。本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括表皮和真皮內(nèi)疫苗制劑)在按照本發(fā)明的方法施用時(shí)少有或沒有短期和/或長期的毒性。最優(yōu)選的是，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑在真皮內(nèi)施用時(shí)，在注射部位少有或沒有負(fù)面或不希望的反應(yīng)，例如，皮膚刺激、腫脹、皮疹、壞死、皮膚敏化。在另一種最優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的表皮疫苗制劑在施用于表皮時(shí)，在注射部位少有或沒有負(fù)面或不希望的反應(yīng)，例如，皮膚刺激，腫脹，皮滲、壞死、皮膚敏化。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑優(yōu)選以可流動的介質(zhì)，例如，液體形式，在低于對象的生理溫度的溫度下施用到對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室。優(yōu)選的是，施用的溫度低于真皮內(nèi)疫苗制劑中的聚合物的液體-凝膠轉(zhuǎn)變溫度。一旦將所述制劑導(dǎo)入對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室，所述真皮內(nèi)疫苗制劑的黏度提高，以便形成明膠狀基質(zhì)，即流動性注射基質(zhì)的穩(wěn)定固體或半固體相，它能夠抵抗流動。與流動性注射基質(zhì)相比，明膠狀基質(zhì)的黏度提高了至少30%，或至少50%,或至少60%,或至少80%,或至少90%。本發(fā)明還提供了包括本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑的藥物包或試劑盒。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包括裝有本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑的一種或多種成分，例如，裝有抗原性或免疫原性劑，分子，例如化學(xué)制劑的一個(gè)或多個(gè)容器的試劑盒。在另一種具體實(shí)施方案中，所述試劑盒包括兩個(gè)容器，一個(gè)容器裝有抗原性或免疫原性劑，另一個(gè)容器裝有所述分子。與所述容器相關(guān)的可以是由管理生產(chǎn)，使用或銷售藥物或生物學(xué)產(chǎn)品的政府機(jī)構(gòu)規(guī)定的標(biāo)簽，所述標(biāo)簽反應(yīng)了得到用于人類給藥的生產(chǎn)，使用或銷售的機(jī)構(gòu)的許可。本發(fā)明還涉及包括本文所披露的本發(fā)明的真皮內(nèi)施用器械和真皮內(nèi)疫苗制劑的試劑盒。本發(fā)明還涉及包括本文所披露的本發(fā)明的真皮施用器械和真皮疫苗制劑的試劑盒。本發(fā)明還涉及包括本文所披露的本發(fā)明的表皮施用器械和表皮疫苗制劑的試劑盒。本發(fā)明涉及免疫和/或在對象體內(nèi)刺激免疫學(xué)免疫反應(yīng)的方法，包括將本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑的單一劑量遞送到對象，優(yōu)選人體真皮內(nèi)。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一次或多次強(qiáng)化免疫。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的是，本文所提供的原理還可適用于將疫苗制劑遞送到超過角質(zhì)層的部位，以便沉積到對象皮膚的表皮內(nèi)區(qū)室。用于摩擦皮膚，特別是皮膚角質(zhì)層以將一種物質(zhì)沉積到表皮區(qū)室的方法和器械為本領(lǐng)域所公知，并且包括在本發(fā)明內(nèi)，正如在以下文獻(xiàn)中所披露的申請日分別為2001日10月29日，2001年11月27日，2000年5月22日，和2002年10月29日的美國臨時(shí)專利申請?zhí)?0/330，713，60/333，162和美國專利申請流水號09/576，643,美國申請流水號10/282，231中，以上所有文獻(xiàn)都以它們的全文形式收作本文參考。5.1分子5.1.1膠凝劑在某些實(shí)施方案中，可用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮和表皮疫苗制劑)中的分子是一旦在施用到對象皮膚的皮膚區(qū)室時(shí)它們就聚合或膠凝的膠凝劑。所述膠凝劑，優(yōu)選形成半固體至固體基質(zhì)，所述基質(zhì)可以是二維或三維的，它可以使抗原性或免疫原性劑與皮膚區(qū)室的生物學(xué)和免疫學(xué)空間，特別是與存在于它里面的免疫細(xì)胞相互作用。在某些實(shí)施方案中，所述膠凝劑能夠增強(qiáng)抗原性或免疫原性劑與皮膚區(qū)室的生物學(xué)和免疫學(xué)空間的呈遞和/或可利用性。適合本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮和表皮疫苗制劑)的膠凝劑優(yōu)選在所施用的對象體內(nèi)分解和/或降解，并且不會對對象產(chǎn)生任何毒性，有害的或不希望的作用。在某些實(shí)施方案中，所述膠凝劑可能不膠凝，而只是增稠，即，通過目測評估所述分子的祐度增加。無論所述膠凝劑在低于液體-凝膠轉(zhuǎn)變溫度時(shí)的物理狀態(tài)如何，所述膠凝劑在高于轉(zhuǎn)變溫度的溫度，例如，生理溫度下，其祐度可以提高至少30%,至少50°/。，至少60°yi,至少80%,至少90%,或至少99°/。。用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮和表皮疫苗制劑)中的膠凝劑優(yōu)選發(fā)生熱誘導(dǎo)的物理轉(zhuǎn)變，在皮膚疫苗制劑的溫度提高到超過由第一溫度和第二溫度組成的溫度范圍時(shí)從液體轉(zhuǎn)變成凝膠。優(yōu)選的是，所述第一溫度在l-2on的范圍內(nèi)，而所述第二溫度在2s-"。c的范圍內(nèi)。用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮和表皮疫苗制劑)中的膠誘導(dǎo)的液體-凝膠轉(zhuǎn)變。在具體實(shí)施方案中，當(dāng)所述對象是人時(shí)，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮和表皮疫苗制劑)中的膠凝劑是經(jīng)過選擇和配制的，以便所述皮膚疫苗制劑在低于40°C，優(yōu)選低于37匸的溫度下發(fā)生熱誘導(dǎo)的液體-凝膠轉(zhuǎn)變。在某些實(shí)施方案中，所述膠凝劑在大約10r-大約371C,優(yōu)選大約25X:-37"C發(fā)生熱誘導(dǎo)的液體-凝膠轉(zhuǎn)變。優(yōu)選的是，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑的液體-凝膠轉(zhuǎn)變是通過提高皮膚疫苗制劑的粘度實(shí)現(xiàn)的。在具體實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的膠凝劑是聚合物。任何生物相容性，生物可降解的聚合物都可以使用，只要在配體-凝膠轉(zhuǎn)變特性就行?？捎糜谥苽浔景l(fā)明的皮膚疫苗制劑:包括真皮和表皮疫苗制劑)的某些聚合物的非限定性例子包括聚醚，優(yōu)選聚氧化烯嵌段共聚物，更優(yōu)選包括聚氧化乙烯-聚氧化丙烯嵌段共聚物的聚氧化烯嵌段共聚物，在本文中稱之作POE-POP嵌段共聚物，如普盧蘭尼克F68,普盧蘭尼克F127，普盧蘭尼克L121，和普盧蘭尼克LlOl，和四聚醇胺T1501;和聚(醚-酯)嵌段共聚物。上述聚合物的某些例子披露于被以全文形式收作本文參考的美國專利號5，702，717和5,861，174中。本發(fā)明涉及皮膚疫苗制劑(包括真皮和表皮疫苗制劑)，它包括一種以上的上述聚合物和/或能夠提供理想特征，例如，在遞送到對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室時(shí)具有增強(qiáng)了的保護(hù)性免疫反應(yīng)的其他聚合物。在某些實(shí)施方案中，所述皮膚疫苗制劑(包括真皮和表皮疫苗制劑)還可以包括其他聚合物和/或其他添加劑，所述額外成分的使用量不會導(dǎo)致本發(fā)明的皮膚疫苗制劑的性能要求的不一致性。另外，所述聚合物可以與其他聚合物或其他添加劑，如糖類組合，例如混合，以便改變液體-凝膠轉(zhuǎn)變溫度，通常在水溶液中混合。作為本發(fā)明的聚合物，聚氧化烯嵌段共聚物(普盧蘭尼克共聚物)是特別優(yōu)選的。聚氧化烯嵌段共聚物是包括第一種聚氧化烯的至少一個(gè)嵌段(即，聚合物片段)和第二種聚氧化烯的至少一個(gè)嵌段的聚合物，盡管還可以存在其他嵌段。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述聚氧化烯嵌段共聚物包括第一種聚氧化烯的至少一個(gè)嵌段和第二種聚氧化烯的至少一個(gè)嵌段。在另一種具體實(shí)施方案中，第一種聚氧化烯是聚氧化乙烯，而第二種聚氧化烯是聚氧化丙烯。POE-POP嵌段共聚物是用作本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮和表皮疫苗制劑)中的生物學(xué)相容性聚合物的一種類型的優(yōu)選的聚氧化烯嵌段共聚物。可以設(shè)計(jì)所述聚合物，并且用不同數(shù)量的POE-POP嵌段，并且通過POP和POE嵌段的不同排列合成。本領(lǐng)域已知的任何聚氧化烯嵌段共聚物都包括在本發(fā)明的方法和制劑的范圍內(nèi)。例如，有關(guān)聚氧化烯嵌段共聚物的綜述，它們的分子結(jié)構(gòu)，合成和純化參見Newman等，1998，AdvancedDrugDeliveryReviews32:199-223;Verheul&Snippe，1992,Res.Immunol.143(5):512-9;Hunter等，1994AIDS,Res.andHumanRetroiruses10:Suppl.2，S95-8;Newman等，1998,Crit.Rev.Ther.DrugCarrierSyst.15(2):89-142;Kabanov等，2002AdvancedDrugDeliveryReviews54:223-233;Moghimi等，2000Tiptech，18:412-20;以上所有文獻(xiàn)都以全文形式收作本文參考?？梢栽诒景l(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮和表皮疫苗制劑)中用作膠凝劑的聚氧化烯嵌段共聚物可以是三嵌段，例如L81，L92，L101,L121，L122,L141，L180,L185,反向三嵌段，例如，25R1，31R1,八嵌段，例如，TllOl，T1301,T1501,反向八嵌段，例如，T130R1，T130R2，T150R1。本發(fā)明涉及聚氧化烯共聚物，其中，POP和POE嵌段的方向和大小可以使用本領(lǐng)域的公知方法改變，以根據(jù)要制備的真皮內(nèi)疫苗制劑獲得理想的表面活性劑特性。在具體實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮和表皮疫苗制劑)和本發(fā)明的方法中的聚氧化烯共聚物是線性分子，所述聚合物嵌段組織成POE-POP-POE。本發(fā)明涉及低分子量聚氧化烯共聚物和高分子量聚氧化烯共聚物。低分子量共聚物的分子量可以為大約2-6KDa。高分子量共聚物的分子量可以為12-15KDa。優(yōu)選的是，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的共聚物具有佐劑活性，例如，增強(qiáng)疫苗制劑的治療效力。在優(yōu)選實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的聚氧化烯共聚物的分子量為大約12-15KDa,具有佐劑活性。在另一種優(yōu)選實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮和表皮疫苗制劑)中的聚氧化烯共聚物具有低的POE濃度，優(yōu)選10%，更優(yōu)選8%，最優(yōu)選5%,以便獲得最佳佐劑活性。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述聚氧化烯的POE濃度不超過5%。本發(fā)明包括可以通過商業(yè)渠道獲得的任何普盧蘭尼克共聚物，例如，TiterMax(CytRxCorporation，Atlanta,GA.);Syntex佐劑制劑(SyntexRes.，PaloAlto，CA.)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明包括由WyandotteChemicalCorporation和BASFPerformanceChemicals(Parsiponny，NJ)生產(chǎn)的普盧蘭尼克共聚物，包括，但不局限于，L31，L81，L92，LlOl，L121,L122,P102,F108,L141，L180,L185,P1004和P1005。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明包括高分子量CRL共聚物，如由CytRxCorporation(Norcross，GA)出售的共聚物的用途。CRL共聚物在POE和POP嵌段的方向上與普盧蘭尼克共聚物類似，不過，它們的尺寸明顯更大。CRL共聚物包括9000-20，000道爾頓的P0P核心，其旁側(cè)是P0E嵌段，它占總分子量的2.5-20%。本領(lǐng)域所公知的任何CRL共聚物都屬于本發(fā)明方法和皮膚疫苗制劑的范圍。用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮和表皮疫苗制劑)中的聚合物的濃度可以為至少10%(w/v)，至少15%(w/v)，至少20°/。(w/v),至少25。/。(w/v),或至少30Uw/v)。在某些實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的聚合物濃度低于10%(w/v)。在其他實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的聚合物濃度超過30%(w/v)。用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮和表皮疫苗制劑)中的聚合物濃度優(yōu)選是這樣的濃度，即在該濃度下，在生理溫度，例如37iC下，所述聚合物的水溶液膠凝，形成半固體至固體二維或三維基質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，在生理溫度，例如37'C下，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的聚合物在20分鐘以內(nèi)或更少，優(yōu)選在IO分鐘以內(nèi)或更少，最優(yōu)選在5分鐘以內(nèi)或更少時(shí)間內(nèi)膠凝，這是通過肉眼檢查所確定的，優(yōu)選的是，所述聚合物的水溶液膠凝的濃度同樣是本發(fā)明的皮膚疫苗制劑的治療效力被提高的濃度，這是用本領(lǐng)域所公知的標(biāo)準(zhǔn)方法確定的，例如，根據(jù)對抗原性或免疫原性劑的抗體反應(yīng)與對照制劑，例如，僅包括抗原性或免疫原性劑的制劑的抗體反應(yīng)確定。用于測定本發(fā)明的皮膚內(nèi)疫苗制劑的聚合物的濃度的典型方法可以包括以下方法制備所述聚合物的含水母液；然后在低于液體-凝膠轉(zhuǎn)變溫度的溫度，例如，在水上在4X:下優(yōu)選通過機(jī)械攪拌，例如磁力攪拌培養(yǎng)所述溶液，；將所述溶液的pH調(diào)整到生理學(xué)pH，在7.0-7.4的范圍內(nèi)，優(yōu)選調(diào)整到7.2;然后對該溶液進(jìn)行滅菌，優(yōu)選通過過濾，例如，4吏用0.2微米的GelmanAcrodiscPFSyringeFilter#4187滅菌；然后在37t)下，例如，通過將它放入37X:的水浴中培養(yǎng)該溶液，肉眼監(jiān)測該溶液；具體地講，肉眼監(jiān)測該溶液的勦度。在某些實(shí)施方案中，所述溶液在5分鐘以內(nèi)或更少時(shí)間內(nèi)膠凝。在其他實(shí)施方案中，所述溶液在20分鐘以內(nèi)或更少時(shí)間內(nèi)，在15分鐘以內(nèi)或更少時(shí)間內(nèi)，10分鐘以內(nèi)或更少時(shí)間內(nèi)凝膠。如果所述溶液不能在上述時(shí)間范圍內(nèi)膠凝的話，可以調(diào)整聚合物的濃度，以便使用更大百分比的聚合物。可以調(diào)整所述聚合物的濃度，以^^所述溶液優(yōu)選膠凝，這是通過在生理溫度，例如，371C下肉眼檢查所述溶液確定的。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及由BASFCorporations提供的LutrolF級化合物，包括，但不局限于，F(xiàn)127，F(xiàn)68，F(xiàn)87，和F108。優(yōu)選的是，所述LutrolF級化合物在生理溫度，例如，在25-37'C的溫度范圍內(nèi)，在大約10%(w/v)-20%(w/v)，大約10%(w/v)-25%(w/v)，大約10%(w/v)-大約30%(w/v),或大約10%(w/v)-大約35%(w/v)的濃度范圍內(nèi)聚合形成凝膠。盡管不希望受特定作用機(jī)制的限制，Lutrol化合物的聚合導(dǎo)致了所述化合物的交聯(lián)，這種交聯(lián)是共價(jià)的或非共價(jià)的，以便形成二維或三維明膠狀基質(zhì)。聚合程度可以在5%-50%，優(yōu)選60°/。-80%范圍內(nèi)，最優(yōu)選大約90%。在具體實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑和方法中的LutrolF級化合物是F127,它能在37匸的溫度下和20%(w/v)的濃度下形成明膠狀基質(zhì)。F127普盧蘭尼克的聚合可以是化學(xué)和/或熱誘導(dǎo)的。優(yōu)選的是，F(xiàn)127普盧蘭尼克的聚合是熱誘導(dǎo)的。在另一種具體實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮和表皮疫苗制劑)和方法中的LutrolF級化合物是F68，它能在37"C的溫度和超過30%(w/v)的濃度下形成明膠狀基質(zhì)。在另一種具體實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑和方法中的LutrolF級化合物是F108，它能在371C的溫度和20%(w/v)的濃度下形成明膠狀基質(zhì)。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑和方法中的膠凝劑，例如，在體溫，即在25-37r的溫度范圍內(nèi)能聚合形成凝膠。所述膠凝劑的聚合可以是化學(xué)和/或熱誘導(dǎo)的。盡管不希望受特定作用模式的限制，膠凝劑的聚合涉及所述聚合物的共價(jià)或非共價(jià)交聯(lián)，以形成二維或三維明膠狀基質(zhì)。聚合程度可以在5%-50%,優(yōu)選60%-80%范圍內(nèi)，最優(yōu)選大約90。/。。用于本發(fā)明方法中的膠凝劑在熱和/或化學(xué)變化之前可以是固體、液體或糊狀物。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的膠凝劑具有一種或多種佐劑的生物學(xué)特性。在本文中，術(shù)語"佐劑"表示輔助化合物，當(dāng)它存在于真皮內(nèi)疫苗制劑中時(shí)，能協(xié)助皮膚疫苗制劑中的活性分子，例如，免疫原性或抗原性制劑產(chǎn)生需要的生理學(xué)反應(yīng)，例如，增強(qiáng)對抗原性或免疫原性劑的免疫反應(yīng)。在其他實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的膠凝劑具有黏膜或生物附著性特性?？捎糜诒景l(fā)明的真皮疫苗制劑中的膠凝劑的用量通常占真皮內(nèi)疫苗制劑的大約1%-50%(w/v),大約15%(w/v)-大約30%(w/v)，優(yōu)選大約10°/。(w/v)-大約30%(w/v)。5.1.2粘膜或生物附著性分子在某些實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮和表皮疫苗制劑)中的分子是粘膜或生物附著性分子，它能促進(jìn)抗原性或免疫原性劑附著在皮膚區(qū)室的生物學(xué)和免疫學(xué)表面上，即，免疫細(xì)胞的表面。在本文中，生物附著性或粘膜附著性表示具有長時(shí)間附著在生物學(xué)表面上的能力。優(yōu)選的是，所述粘膜附著性或生物附著性導(dǎo)致了所述真皮內(nèi)疫苗制劑的生物學(xué)活性的增強(qiáng)，例如，增強(qiáng)了治療效力。盡管不希望受特定作用機(jī)制的限制，粘膜或生物附著性能夠使本發(fā)明胞，例如:存在于真皮內(nèi)^室-的:原呈遞細(xì)胞。由粘膜或生;附著性分子產(chǎn)生的附著特性最有可能導(dǎo)致抗原性或免疫原性劑在真皮區(qū)室中的長時(shí)間停留?？乖曰蛎庖咴詣┑倪f送從粘膜附著性或生物附著性中受益，這是通過將抗原性或免疫原性劑附著或"粘貼"在目標(biāo)生物學(xué)表面上，即，真皮空間實(shí)現(xiàn)的。另外，可以將抗原性或免疫原性劑固定在目標(biāo)生物學(xué)表面上，從而使得抗原性或免疫原性劑能夠緩慢釋放，即，補(bǔ)給站效應(yīng)。可用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的粘膜或生物附著性分子包括，但不局限于聚合物，例如，聚卡波非聚丙烯酸(PAA)，carobopols，capricol，聚羥乙烯EX55，卡波姆，多糖，透明質(zhì)酸，殼聚糖；外源凝集素；纖維素，甲基纖維素，羧曱基纖維素，羥丙甲基纖維素，藻酸鈉，明膠，果膠，阿拉伯膠，聚維酮。有關(guān)現(xiàn)有粘膜附著性和生物附著性分子的綜述可以參見以下文獻(xiàn)Robinson等，AnnalsNewYorkAcademyofSciences,307-314;Haas等，2002,ExpertOpin.Biol.Ther.2(3):287-298;Woodley，2001，CIin.Pharmacokin.40(2):77-84;Peppas等，1996,Biomaterials17;1553-61;以上戶斤有文獻(xiàn)的內(nèi)容都被全文收作本文參考。用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的生物附著性或粘膜附著性分子的濃度可以為0.1%(w/v)-1°/。(w/v)，0.1%(w/v)-5%(w/v)，或0.1%(w/v)-10%(w/v)，或0.01%(w/v)-10°/。(w/v)，或0.01%(w/v)-0.04%(w/v)。用于本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑中的粘膜或生物附著性分子的濃度優(yōu)選是這樣的濃度，在該濃度下本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑的治療效力得到增強(qiáng)，例如，這是通過相對于例如，僅包括原性劑的抗體反應(yīng)5.2免疫原性或抗原性制劑可用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮和表皮疫苗制劑)中的抗原性或免疫原性劑制劑包括來自動物，植物，細(xì)菌，原生動物，寄生蟲，病毒的抗原或它們的組合的抗原。用于本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑中的抗原性或免疫原性劑可以是能夠在合適條件下在對象體內(nèi)產(chǎn)生免疫反應(yīng)的任何物質(zhì)，包括，但不局限于，多肽，肽，蛋白，糖蛋白，和多糖。本發(fā)明的皮膚疫苗制劑可以包括一種或多種抗原性或免疫原性劑。用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的抗原性或免疫原性劑的用量可以根據(jù)抗原性或免疫原性劑的化學(xué)性質(zhì)和效力而改變。通常，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中抗原性或免疫原性劑的起始濃度是利用常規(guī)施用途徑，例如，肌內(nèi)注射誘導(dǎo)需要的免疫反應(yīng)的常規(guī)用量。然后，例如通過用稀釋劑稀釋來調(diào)整本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中抗原性或免疫原性劑的濃度，以便獲得有效的保護(hù)性免疫反應(yīng)，這是使用本領(lǐng)域所公知的和本文所披露的標(biāo)準(zhǔn)方法確定的。用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的抗原性或免疫原性劑的濃度為常用于獲得有效免疫反應(yīng)的濃度的60%,優(yōu)選50°/。，更優(yōu)選40%。在具體實(shí)施方案中，所述抗原性或免疫原性劑可以是來源于病毒的任何病毒肽，蛋白，多肽或它們的片段，所述病毒包括，但不局限于，RSV-病毒蛋白，例如，RSVF糖蛋白，RSVG糖蛋白，流感病毒蛋白，例如，流感病毒神經(jīng)氨酸酶，流感病毒血細(xì)胞凝集素，單純皰瘆病毒蛋白，例如，單純皰滲病毒糖蛋白，例如，包括gB，gC，gD，和gE。細(xì)菌的例子包括衣原體MOMP和PorB抗原。在其他實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的抗原性或免疫原性劑可以是致病性病毒的抗原，例如包括但不局限于腺病毒科(例如，乳腺病毒和禽腺病毒)，皰疹病毒科(例如，單純皰疹病毒1，單純皰滲病毒2，單純皰滲病毒5，和單純皰滲病毒6)，leviviridae(例如，levivirus，腸細(xì)菌階段MS2，allolevirus)，痘病毒科(例如，chordopoxvirinae，葛'J痘病毒屬,麻雀痘病毒，capripoxvirus，leporiipoxvirus，suipoxvirus，molluscipoxvirus，和entomopoxvirinae)，papovaviridae(例如，多瘤病毒和乳頭瘤病毒)，副粘病科(例如，副粘病，副流感病毒1，mobillivirus(例如，麻療病毒)，rubulavirus(例如，腮腺炎病毒)，肺炎病毒科(例如，肺炎病毒，人呼吸道合胞病毒)，和偏肺炎病毒(例如，禽肺炎病毒和人偏肺炎病毒))，小RM病毒科(例如，腸道病毒，鼻病毒，肝炎病毒(例如，人甲型肝炎病毒)，cardiovirus，和apthovirus)，呼腸孤病毒科(例如，正呼腸孤病毒，環(huán)狀病毒，輪狀病毒，cypovirus，fijivirus，phytoreovirus，和oryzavirus),retroviridae(例如，哺乳動物B型逆轉(zhuǎn)錄病毒，哺乳動物C型逆轉(zhuǎn)錄病毒，禽C型逆轉(zhuǎn)錄病毒，D型逆轉(zhuǎn)錄病毒類，BLV-HTLV逆轉(zhuǎn)錄病毒，慢病毒(例如人類免疫缺陷性病毒1和人類免疫缺陷性病毒2)，spumavirus)，黃病毒科(例如，丙型肝炎病毒)，肝病毒科(例如，乙型肝炎病毒)，togaviridae(例如，ot病毒(例如，辛德畢斯病毒)和rubivirus(例如，風(fēng)滲病毒)),棒狀病毒科(例如，vesiculovirus,狂犬病病毒,ephemerovirus，cytorhabdovirus，和necleorhabdovirus)，沙粒病毒科(例如，沙粒病毒，淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒，Ippy病毒，和拉沙病毒)，和冠狀病毒科(例如，冠狀病毒和torovirus)。用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的抗原性或免疫原性劑可以是傳染性致病劑，包括，但不局限于，流感病毒血細(xì)胞凝集素(Genbank保藏號J02132;Air，1981，Proc.Natl.Acad.Sci.USA78:7639-7643;Newton等，1983，Virology128:495-501),人類呼吸道合胞病毒G糖蛋白(Genbank保藏號Z33429;Garcia等，1994,J.Virol;Collins等，1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:7683)，核心蛋白，基質(zhì)蛋白或登革熱病毒的其他蛋白(Genbank保藏號M19197;Hahn等，1988，Virology162:167-180)，麻滲病毒血細(xì)胞凝集素(Genbank保藏號M81899;Rota等，1992，Virology188:135-142)，單純皰療病毒2型糖蛋白gB(Genbank保藏號M14923;Bzik等，1986,Virology155:322-333),脊髓灰質(zhì)炎病毒IVPl(Emini等，1983，Nature304:699)，HIVI的外被糖蛋白(Putney等，1986，Science234:1392-1395)，乙型肝炎表面抗原(Itoh等，1986，Nature308:19;Neurath等，1986，Vaccine4:34)，白喉毒素(Audibert等，1981，Nature289:543)，鏈球菌24M表位(Beachey，1985，Adv.Exp.Med.Biol.185:193)，淋球菌菌毛蛋白(Rothbard和Schoolnik，1985，Adv.Exp.Med.Biol.185:247)，假狂犬病毒g50(gpD)，假狂犬病毒II(gpB)，假狂犬病毒gIII(gpC)，假狂犬病毒糖蛋白H，假狂犬病毒糖蛋白E,傳染性胃腸炎糖蛋白195，傳染性胃腸炎基質(zhì)蛋白，豬輪狀病毒糖蛋白38，豬細(xì)小病毒衣殼蛋白，Serpulinahydodysenteriae保護(hù)性抗原，牛病毒性腹竭糖蛋白55，新城雞痘病毒血細(xì)胞凝集素-神經(jīng)氨酸酶，豬流感血細(xì)胞凝集素，豬流感神經(jīng)氨酸酶，口蹄疫病毒，豬霍亂病毒，豬流感病毒，非洲豬痘病毒，肺炎支原體，傳染性牛鼻氣管炎病毒(例如，傳染性牛鼻氣管炎病毒糖蛋白E或糖蛋白G)，或傳染性喉氣管炎病毒(例如，傳染性喉氣管炎病毒糖蛋白G或糖蛋白I)，LaCrosse病毒糖蛋白(Gonzales-Scarano等，1982，Virology120:42),新生牛腹瀉病毒(Matsuno和Inouye，1983，InfectionandImmunity39:155)，委內(nèi)瑞拉馬腦脊髄炎病毒(MathewsandRoehrig，1982，J.Immunol.129:2763),puntatoro病毒(Dalrymple等,1981，inReplicationofNegativeStrandViruses,BishopandCompans(eds.)，Elsevier,NY，p.167)，鼠白血病病毒(Steeves等，1974，J.Virol.14:187),小鼠乳腺瘤病毒(Massey和Schochetman,1981,Virology115:20)，乙型肝炎病毒核心蛋白和/或乙型肝炎病毒表面抗原或它的片段或衍生物(例如，參見，英國專利公開號GB2034323A公開日為1980年6月4曰；Ganem和Va函s，1987，Ann.Rev.Biochem.56:651-693;Tiollais等，1985，Nature317:489-495)，馬流感病毒或馬皰滲病毒的抗原(例如，馬流感病毒A型/阿拉斯加91神經(jīng)氨酸酶，馬流感病毒A型/邁阿密63神經(jīng)氨酸酶，馬流感病毒A型/肯塔基81神經(jīng)氨酸酶馬皰滲病毒1型糖蛋白B，和馬皰疹病毒1型糖蛋白D，牛呼吸道合胞病毒或牛副流感病毒抗原(例如，牛呼吸道合胞病毒結(jié)合蛋白(BRSVG)，牛呼吸道合胞病毒融合蛋白(BRSVF)，牛呼吸道合胞病毒核殼蛋白(BRSVN)，牛副流感病毒3型融合蛋白，和牛副流感病毒3型血細(xì)胞凝集素神經(jīng)氨酸酶)，牛病毒性腹瀉病毒糖蛋白48或糖蛋白53。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的抗原性或免疫原性劑是癌抗原或腫瘤抗原。本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的任何癌或腫瘤抗原都可用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中，包括，但不局限于，KS1/4泛-癌抗原(PerezandWalker,1990，J.Immunol.142:3662-3667;Bumal，1988，Hybridoma7(4):407-415)，卵巢癌抗原(CA125)(Yu等，1991，CancerRes.51(2):468-475),prostaticacidphosphate(Tailor等，1990,Nucl.AcidsRes.18(16):4928)，前歹'J腺特異性抗原(Henttu和Vihko，1989，Biochem.Biophys.Res.Comm.160(2):903-910;Israeli等，1993，CancerRes.53:227-230)，黑素瘤-相關(guān)的抗原p97(Estin等，1989,J.Natl.CancerInstit.81(6):445-446),黑素瘤抗原gp75(Vijayasardahl等，1990，J.Exp.Med.171(4):1375-1380)，高分子量黑素瘤抗原(麗-MAA)(Natali等，1987，Cancer59:55-63;Mittelman等，1990，JClin.Invest.86:2136-2144)，前列腺特異性膜抗原，癌胚抗原(CEA)(Foon等，1994，Proc.Am.Soc.Clin.Oracol.13:294)，多形表皮粘蛋白抗原，人乳脂球抗原，結(jié)直腸癌相關(guān)抗原，如:CEA，TAG-72(Yokata等，1992，CancerRes.52:3402-3408)、C017-1A(Ragnhammar等，1993，Int.J.Cuncer53:751-758):GICA19-9CHerlyn等，1982，J.CIin.Immunol.2:135)CTA-1和LEA,Burkitt's淋巴瘤抗原-38.13，CD19(Ghetie等，1994，Blood83:1329-1336),人B-淋巴瘤抗原-CD20(Reff等，1994，Blood83:435-445)，CD33(Sgouros等，1993，J.Nucl.Med.34:422-430)，黑素瘤特異性抗原，如神經(jīng)節(jié)苷脂GD2(Saleh等，1993，J.Immunol.，151，3390-3398)，神經(jīng)節(jié)苷脂GD3(Shitara等，1993，CancerImmunol.I腿unother.36:373-380)，神經(jīng)節(jié)苷脂GM2(Livingston等，1994，J.Clin.Oncol.12:1036-1044),神經(jīng)節(jié)苷脂GM3(Hoon等，1993，CancerRes.53:5244-5250)，腫瘤特異性移植類型的細(xì)胞表面抗原(TSTA)，如病毒誘導(dǎo)的腫瘤抗原，包括T-抗原DNA腫瘤病毒和RM腫瘤病毒的外被抗原，癌胚抗原-ot-胎蛋白，如結(jié)腸的CEA，膀胱癌癌胚抗原(Hellstrom等，1985，Cancer.Res.45:2210—2188),分化抗原，如人肺癌抗原L6，L20(Hellstrom等，1986，CancerRes.46:3917-3923)，纖維肉瘤的抗原，人白血病T細(xì)胞抗原-Gp37(Bhattacharya-Chatterjee等，1988，J.ofImmunospecifically.141:1398-1403)，新糖蛋白，鞘類磷脂，乳腺癌抗原，如EGFR(表皮生長因子受體)，HER2抗原(pl85HER2)，多形表皮粘蛋白(PEM)(Hilkens等，1992,TrendsinBio.Chem.Sci.17:359)，惡性人淋巴細(xì)胞抗原-APO-l(Bernhard等，1989,Science245:301-304)，分化抗原(Feizi，1985，Nature314:53-57)如存在于胎兒紅細(xì)胞，原內(nèi)胚層中的I抗原，存在于成年人紅血球中的I抗原，植入前的胚胎，存在于胃腺癌中的I(Ma),存在于乳腺表皮中的M18,M39，存在于骨髓細(xì)胞中的SSEA-1,存在于結(jié)直腸癌中的VEP8，VEP9，Myl，VIM-D5，D56-22,TRA-1-85(血型H)，存在于結(jié)腸腺癌中的C14,存在于肺腺癌中的F3，存在于胃癌中的AH6,Y半抗原，存在于胎生癌細(xì)胞中的LeY，TL5(血型A)，存在于A431細(xì)胞中的EGF受體，存在于胰腺癌中的E1系列(血型B)，存在于胎生癌細(xì)胞中的FC10.2，胃腺癌抗原，存在于腺癌中的CO-514(血型Lea)，存在于腺癌中的NS-IO，CO-43(血型Leb)，存在于A431細(xì)胞中的EGF受體上的G49，存在于結(jié)腸腺癌中的MH2(血型ALeb/Ley)，存在于結(jié)腸癌中的19.9，胃癌粘蛋白，存在于骨髄樣細(xì)胞中的TsA7，存在于黑素瘤中的R24，4.2，G03，Dl.l，OFA-l,GM2，0FA-2，GD2，和存在于胎生癌細(xì)胞中的Ml:22:25:8，和存在于4-8細(xì)胞階段胚胎中的SSEA-3和SSEA-4。在一種實(shí)施方案中，所述抗原是來自皮膚T細(xì)胞淋巴瘤的T細(xì)胞受體衍生的肽(參見，Edelson，1998，TheCancerJournal4:62)。所述接種物還可以含有來自腎臟的癌抗原。所述抗原可以是自體的，以便所述抗原是從患者體內(nèi)收集的，在體外進(jìn)行處理，并且送回到相同的患者體內(nèi)。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑的抗原性或免疫原性劑包括需要針對它的免疫反應(yīng)的病毒。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑包括重組或嵌合病毒。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑包括減毒的病毒。重組，嵌合的和減毒的病毒的生產(chǎn)可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行。本發(fā)明涉及活的重組病毒疫苗或失活的重組病毒疫苗，以便按照本發(fā)明進(jìn)行配制。優(yōu)選活的疫苗，因?yàn)樵谒拗髦械脑鲋硶?dǎo)致相似類型和強(qiáng)度的長時(shí)間的刺激能夠以天然感染形式發(fā)生，因此，產(chǎn)生顯著的，長時(shí)間的免疫性。所述活的重組病毒疫苗制劑的生產(chǎn)可以通過常規(guī)方法實(shí)現(xiàn)，涉及在細(xì)胞培養(yǎng)物或在雞胚胎的尿嚢中繁殖，和隨后進(jìn)行純化。在具體實(shí)施方案中，所述重組病毒對所施用的對象是非致病性的。就此而言，將遺傳工程病毒用于疫苗用途，可能需要在所述菌林中存在減毒特征。將合適的突變(例如，缺失)導(dǎo)入用于轉(zhuǎn)染的模板，可能提供具有減毒特征的新型病毒。例如，與溫度敏感性或冷適應(yīng)相關(guān)的特異性錯(cuò)義突變可以產(chǎn)生缺失突變。這樣的突變應(yīng)當(dāng)比與冷或熱敏感性突變體相關(guān)的點(diǎn)突變更穩(wěn)定，并且恢復(fù)頻率應(yīng)當(dāng)非常低。另外，可以構(gòu)建具有"自殺"特征的嵌合病毒，以便用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑。所述病毒在宿主內(nèi)只會進(jìn)行一輪或幾輪復(fù)制。在用作疫苗時(shí)，所述重組病毒會進(jìn)行有限的復(fù)制周期，并且誘導(dǎo)足夠水平的免疫反應(yīng)，但是不會在人體宿主內(nèi)進(jìn)一步發(fā)展并且導(dǎo)致疾病。另外，可以按照本發(fā)明的方法制備失活的(滅活的)病毒。失活的疫苗制劑可以使用常規(guī)技術(shù)制備，以"殺傷"嵌合病毒。失活的疫苗因?yàn)樗鼈兊母腥灸芰σ呀?jīng)被破壞而被說成是"死的"。理想的是，破壞病毒的感染性，而又不影響它的免疫性。為了制備失活的疫苗，可以讓嵌合病毒在細(xì)胞培養(yǎng)物中或在雞胚胎的尿嚢中生長，通過帶狀超速離心純化，通過甲醛或-丙內(nèi)酯失活，并且合并。在某些實(shí)施方案中，完全外源的表位，包括來自其他病毒或非病毒病原體的抗原可以通過工程方法進(jìn)入病毒，以便用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑。例如，非相關(guān)病毒的抗原，如HIV(gp160，gpl20，gp41)寄生蟲抗原(例如，痗疾)，細(xì)菌或真菌抗原或腫瘤抗原可以工程改造成減毒的菌林。實(shí)際上，任何異源基因序列都可以構(gòu)建成本發(fā)明的嵌合病毒，以用于皮膚疫苗制劑。優(yōu)選的是，異源基因序列是起著生物學(xué)反應(yīng)調(diào)節(jié)劑作用的部分和肽。優(yōu)選的是，可以誘導(dǎo)對多種病原體中任意一種保護(hù)性免疫反應(yīng)的表位，或能結(jié)合中和抗體的抗原可以通過嵌合病毒表達(dá)或作為嵌合病毒的一部分。例如，可以構(gòu)建成本發(fā)明的嵌合病毒的異源基因序列包括，但不局限于，流感和副流感血細(xì)胞凝集素神經(jīng)氨酸酶和融合糖蛋白，如人PIV3的HN和F基因。在另一種實(shí)施方案中，可以工程改造成嵌合病毒的異源基因序列包括編碼具有免疫調(diào)節(jié)活性的蛋白的序列。免疫調(diào)節(jié)蛋白的例子包括，但不局限于，細(xì)胞因子，1型干擾素，Y干擾素，菌落刺激因子，白介素-1,-2，-4,-5,-6,-12，和這些制劑的拮抗劑。其他異源序列可以來自腫瘤抗原，并且所得到的嵌合病毒被用于產(chǎn)生針對腫瘤細(xì)胞的免疫反應(yīng)，導(dǎo)致了體內(nèi)腫瘤抑制作用。根據(jù)本發(fā)明，重組病毒可以工程改造成能表達(dá)腫瘤相關(guān)抗原(TAAs)，包括，但不局限于由T細(xì)胞識別的人腫瘤抗原(Robbins和Kawakami，1996，Curr.Opin.Immunol.8:628-636,以全文形式收作本文參考)，黑素細(xì)胞系蛋白，包括gp100，MART-1/MelanA，TRP-1(gp75)，酪氨酸酶；腫瘤特異性廣泛擁有的抗原，MAGE-1，MAGE-3，BAGE，GAGE-1，GAGE-1，N-乙酰葡糖氨基轉(zhuǎn)移酶-V，pl5;肺瘤特異性突變抗原，P-catenin，MUM-1，CDK4;乳腺，卵巢，宮頸，和胰腺癌的非黑素瘤抗原，HER-2/neu，人乳頭瘤病毒-E6，-E7，MUC-1。用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑的抗原性或免疫原性劑可以包括一種或多種特定制劑和由CenterforDiseaseControl確定的毒素。在具體實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的特定制劑可以包括選自葡萄球菌腸毒素B，肉毒桿菌毒素的一種或多種抗原，炭疽，和鼠疫耶爾森氏菌的保護(hù)性抗原。在表l中列舉了用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的特定抗原和毒素的非限定性例子表I:選擇抗原<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>5.2.1流感病毒抗原用于根據(jù)本發(fā)明方法的包括表皮和真皮內(nèi)遞送在內(nèi)的皮膚遞送的本發(fā)明優(yōu)選的疫苗遞送系統(tǒng)是流感病毒疫苗，它可以包括一種或多種流感病毒抗原。優(yōu)選的是，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括表皮和真皮內(nèi)疫苗制劑)中的流感病毒抗原是表面抗原，包括，但不局限于，血細(xì)胞凝集素和神經(jīng)氨酸酶抗原或它們的組合。所述流感病毒抗原可以構(gòu)成完整流感疫苗制劑的一部分?；蛘?，所述流感病毒抗原可以作為純化的或大體上純化的抗原形式存在。用于分離和純化流感病毒抗原的技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的，并且是本發(fā)明所采用的。適用于本發(fā)明的組合物的血細(xì)胞凝集素/神經(jīng)氨酸酶制劑的例子是由EvansMedicalLimitedofSpeke，Merseyside，UnitedKingdom生產(chǎn)和銷售的"Fluvirin"產(chǎn)品，還可參見S.Renfrey和A,Watts,1994Vaccine,12(8):747-752;以上文獻(xiàn)被以全文形式收作本文參考?？捎糜诒景l(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括表皮和真皮內(nèi)疫苗制劑)中的流感疫苗可以是任何通過商業(yè)渠道獲得的流感疫苗，優(yōu)選三價(jià)亞單位疫苗，例如，流感病毒疫苗減毒的流感疫苗(AventisPasteur,Inc.Swiftwater,PA)。本發(fā)明的流感疫苗制劑在低于常用于肌內(nèi)遞送流感疫苗的劑量下具有治療效力。用于本發(fā)明的皮膚疫苗(包括表皮和真皮內(nèi)疫苗制劑)中的流感疫苗可以是非活性流感抗原性制劑，優(yōu)選分離的流感或亞單位抗原性制劑，它是用本領(lǐng)域的公知方法制備的。最優(yōu)選的是，用于本發(fā)明的流感疫苗是三價(jià)疫苗。本發(fā)明涉及包括非活性流感抗原性制劑的流感疫苗制劑，優(yōu)選用活的病毒制備的分離的流感制劑或亞單位抗原制劑。最優(yōu)選的是，所述流感抗原性制劑是分離的流感抗原性制劑。本發(fā)明的流感疫苗制劑可以包括來自一種病毒菌林，或來自多種菌林的流感病毒抗原。例如，所述流感疫苗制劑可以包括來自三種或三種以上病毒菌抹的抗原。純粹是舉例來說，流感疫苗制劑可以包括來自一種或多種甲型流感菌抹的抗原，以及來自一種或多種乙型流感菌抹的抗原。流感菌林的例子是甲型流感/Texas/36/91,A/Nanchang/933/95和B/Harbin/7/94)。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的流感疫苗制劑包括商業(yè)出售的流感疫苗，流感病毒疫苗，它是減毒的流感疫苗(ConnaughtLaboratories,Swiftwater,Pa.)。流感病毒疫苗是三價(jià)亞病毒粒子疫苗，包括15jig/劑量的來自甲型流感/Texas/36/91(NINI)，A/Beijing/32/92(H3N2)和B/Panama，45/90病毒的每一種Has。優(yōu)選的是，本發(fā)明的流感疫苗制劑與常規(guī)疫苗相比具有更少量的血細(xì)胞凝集素，并且以更小的體積施用。在某些實(shí)施方案中，每林流感的血細(xì)胞凝集素的量為大約1-7.5pg，更優(yōu)選大約3jag或大約5pg，該用量大約分別為用于肌內(nèi)施用的常規(guī)疫苗中的血細(xì)胞凝集素劑量的1/5或1/3。根據(jù)本發(fā)明的流感疫苗制劑的一個(gè)劑量的體積為0.025ml-2.5ml，更優(yōu)選大約O.lffll或大約0.2ml。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及50p1的流感疫苗的劑量體積。0.1ml的劑量大體上為常規(guī)肌內(nèi)注射流感疫苗劑量體積的1/5?？梢哉嫫?nèi)施用的液體的體積在某種程度上取決于注射部位。例如，對于在三角肌部位的注射來說，0.1ml是最大優(yōu)選體積，而在腰部可以使用較大的體積，例如，大約0.2ml。用于測定流感疫苗效力的標(biāo)準(zhǔn)是國際通用的。在下面的表格中列舉了抗流感的有效疫苗的歐盟官方標(biāo)準(zhǔn)。理論上講，對于疫苗中所.包含的所有流感菌林來說，為了滿足歐盟的要求，并因此在歐盟獲得銷售許可，流感疫苗必須滿足以下表格中的標(biāo)準(zhǔn)之一。不過，在實(shí)踐中，對于所有菌林，特別是將要上市的新疫苗來說，必須滿足至少兩種或兩種以上，優(yōu)選所有三種指標(biāo)。在某些場合下，滿足兩項(xiàng)指標(biāo)就足夠的。例如，所有菌抹滿足三項(xiàng)指標(biāo)中的兩項(xiàng)就可以接受，而第三項(xiàng)指標(biāo)有某些菌抹而不是所有菌株滿足(例如三種菌抹中的兩種)。對于成年人群(18-60歲)和老年人群(>60歲)來說，所述要求是不同的。表II:有效的流感疫苗的歐盟標(biāo)準(zhǔn)<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>血清轉(zhuǎn)化率被定義為在免疫之后，對每一種疫苗菌林來說血清血細(xì)胞凝集素抑制(HI)效價(jià)提高了至少四倍的疫苗的百分比。轉(zhuǎn)化系數(shù)被定義為對每一種疫苗菌抹來說在免疫之后血清HI幾何平均效價(jià)(C3MTs)的增加倍數(shù)。保護(hù)率被定義為在免疫之后血清HI效價(jià)等于或大于l:40的疫苗的百分比(每一種疫苗菌林的)，并且通常被認(rèn)作是標(biāo)志性保護(hù)作用。本發(fā)明的流感疫苗制劑滿足了上文所提供的所有歐盟的流感疫苗標(biāo)準(zhǔn)，因此，所述疫苗在歐洲得到了批準(zhǔn)。優(yōu)選的是，在所述疫苗中所出現(xiàn)的所有流感菌林滿足了三項(xiàng)歐盟標(biāo)準(zhǔn)中的兩項(xiàng)。更優(yōu)選的是，所有菌林滿足了至少兩項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)，而所有菌林滿足了第三項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)，或至少所有菌株中除一項(xiàng)之外滿足了第三項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)。更優(yōu)選的是，所使用的所有菌林滿足了所有三項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)。更優(yōu)選的是，本發(fā)明的流感疫苗制劑還滿足聯(lián)邦藥物管理和/或USPHS對現(xiàn)有流感疫苗的要求的某些或所有標(biāo)準(zhǔn)。5.3添加劑在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮和表皮疫苗制劑)還包括一種或多種添加劑，包括，但不局限于，佐劑，賦形劑，穩(wěn)定劑，滲透促進(jìn)劑，粘膜附著性分子，和生物附著性分子。皮膚疫苗制劑中的添加劑能夠以協(xié)同或補(bǔ)充形式起作用，以便增強(qiáng)本發(fā)明的皮膚疫苗制劑的效力。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑還可以包括一種或多種佐劑。用于疫苗制劑中增強(qiáng)疫苗制劑的效力和保護(hù)性免疫反應(yīng)的任何常規(guī)佐劑都屬于本發(fā)明的范圍。例如，有關(guān)佐劑的綜述參見，Vogel和Powell,1995，ACompendiumofVaccineadjuvantandexcipient;M.F.Powell,M.J.Newman(eds.)，PlenumPress,NewYork,page141-228;以上所有文獻(xiàn)都被以全文形式收作本文參考?？捎糜诒景l(fā)明的皮膚疫苗制劑中的佐劑的非限定性例子在下面的表in中列舉。通常，佐劑以包括至少三種類型的分子為特征，這三種類型是根據(jù)它們的功能劃分的，并且所有分子都屬于本發(fā)明的范圍。在一種實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的佐劑可以起著補(bǔ)給站的作用。補(bǔ)給站的非限定性例子包括明礬和不完全弗氏佐劑，它保持抗原性或免疫原性劑是濃縮的，并且控制其釋放。在另一種實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的佐劑可以起著刺激劑的作用，即，能刺激抗原呈遞細(xì)胞，并最終導(dǎo)致廣泛的有效免疫反應(yīng)的分子。刺激劑的非限定性例子包括來自諸如C.Parvum的有機(jī)體的表面抗原和植物提取物。在另一種實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的佐劑是免疫原或抗原定向分子，例如，有助于使免疫原性或抗原性制劑集中在免疫抗原呈遞細(xì)胞(APCs)的表面上，并因此增強(qiáng)它們的攝取,包括，但不局限于諸如抗體和a2-巨球蛋白的分子。表III.佐劑*確定給人類施用的佐劑。其中，只有鋁鹽，病毒顆粒，和MF-59是在美國被批準(zhǔn)作為許可銷售的疫苗制劑的佐劑。<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>可用于本發(fā)明方法的佐劑能刺激體液和/或細(xì)胞介導(dǎo)的免疫性，包括CD4+和CD8+介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的佐劑的非限定性例子包括殼聚糖，它們的衍生物和類似物(通過幾丁質(zhì)的脫乙?；苌年栯x子多糖；)；細(xì)菌產(chǎn)生的產(chǎn)物，如單磷酸脂A(MPL;主要來自明尼蘇達(dá)沙門氏菌的脂多糖的衍生物)；CpG基序(來自細(xì)菌質(zhì)粒DNA,它通常被以合成寡核苷酸的形式使用；包括由未甲基化CpG基序組成的免疫刺激序列，它在哺乳動物DNA中是不常見的)；霍亂毒素的解毒的突變體(CT;來自Virbriocholorea)和熱不穩(wěn)定性毒素(LT;來自大腸桿菌)；奈瑟氏腦膜炎菌血清型b的外膜蛋白；二甲基雙十八烷基溴化銨(DDA);細(xì)胞因子(例如，IL-12,IL-6,GM-SF，IL-4，IL-7);三薛系化合物糖苷或皂苷，它們的衍生物和類似物(來自皂樹肥急草；智利皂樹皮；皂苷通過與膽固醇相互作用嵌入細(xì)胞膜，形成孔，能促進(jìn)抗原通過細(xì)胞膜的轉(zhuǎn)運(yùn))；3-Q-脫乙酰-4'-單磷酸脂A(3D-MLA)，曱?；?蛋氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸(fMLP);和IL-1P163-171肽("Sclavo肽")。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及將殼聚糖用作本發(fā)明的皮膚疫苗制劑的添加劑。本發(fā)明涉及所有殼聚糖衍生物，類似物，以及它的變體(有關(guān)綜迷參見VanderUbben等，2001,EuropeanJournalofPharmaceuticalSciences,14:201-7;Dodane等，1998，Pharm.Sci.Tech.Today,1:246-53;這兩篇文獻(xiàn)都以全文形式收作本文參考)。殼聚糖是線性多糖，它是由重復(fù)的P(l-4連接的)N-乙酰-D-葡糖胺和D-葡糖胺單位形成的，并且是由從曱殼類的甲殼中獲得的幾丁質(zhì)部分脫乙酰化產(chǎn)生的。殼聚糖是可商購的，通常是通過對幾丁質(zhì)進(jìn)行非均勻堿性水解，以得到具有隨機(jī)分布的其余的乙酰部分的產(chǎn)物。用于完成。殼聚糖的性質(zhì)在某種程度上取決于脫乙酰化程度和分子量。本發(fā)明涉及使用具有不同脫乙?；潭鹊臍ぞ厶?，以便獲得需要的生物學(xué)反應(yīng)，例如，在真皮內(nèi)區(qū)室中的增強(qiáng)了的免疫反應(yīng)，改變殼聚糖的乙?；潭葘儆诒绢I(lǐng)域技術(shù)人員的知識范圍。大部分商業(yè)化殼聚糖包括具有不同分子量和具有不同濃度的成分N-乙酰-D-葡糖胺和D-葡糖胺基的一群殼聚糖分子，它們都屬于本發(fā)明的范圍。已知?dú)ぞ厶堑拿庖邔W(xué)特性與N-乙酰-D-葡糖胺和D-葡糖胺基之間的比例相關(guān)。可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法改變N-乙酰-D-葡糖胺和D-葡糖胺基的比例，以便獲得理想的生物學(xué)反應(yīng)，例如，在真皮內(nèi)區(qū)室中的增強(qiáng)了的免疫反應(yīng)。業(yè)已披露了殼聚糖在免疫學(xué)上的應(yīng)用，例如，參見，Iida等，1994Vaccine5:270-273;Nishimura等，1984Vaccine2(99):94-100;這兩份文獻(xiàn)的內(nèi)容都以它們的全文形式收作本文參考。用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的殼聚糖可以具有佐劑、滲透促進(jìn)劑、粘膜附著性物質(zhì)、生物附著性物質(zhì)或它們的組合的一種或多種特性。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及涉及將皂苷，它的衍生物和類似物用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中。皂樹皂苷是三萜烯糖苷的混合物，它是從皂樹肥皂素的樹皮中提取的。很久以來它們都被認(rèn)為是免疫刺激劑，可以用作疫苗佐劑，例如，參見，Campbell和Peerbaye,1992，Res.Immunol.143(5):526-530，和業(yè)已凈皮用作佐劑的多種商業(yè)化復(fù)合皂苷提取物，它們都屬于本發(fā)明的范圍。本發(fā)明包括所有商業(yè)化皂苷型佐劑。用于制備皂苷型佐劑的方法屬于本領(lǐng)域技術(shù)人員的知識范圍。皂樹皂苷的非限定性例子包括QS-7,QS-17,QS-18,和QS-21(還可以表示為QA-7，QA-17，QA-18，和QA-21)，它們都可用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中。業(yè)已發(fā)現(xiàn)皂樹皂苷，特別是QS-7，QS-17，QS-18,和QS-21是抗體反應(yīng)的良好刺激劑，因此，特別適用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑。皂苷的免疫佐劑效應(yīng)取決于劑量，該劑量可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法確定。用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的佐劑的其他例子包括25-二羥基維生素D3(calcitrol)，calcitinin-基因調(diào)控肽，脫氫表雄酮(DHEA),N-乙酰葡糖胺1-(PI-4)-N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-谷酰胺(GMDP)/二曱基雙十八烷(dioctadecyla)或二硬脂酰溴化銨(DDA)/鋅L-脯氨酸，胞壁酰二肽(MDP)，N-乙酰葡糖胺(Acetylglucopaminyl)-(PI-4)-N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-谷酰胺(GMDP)，N-乙酰胞壁酰-L-蘇氨酰-D-異谷酰胺(蘇氨酰-MDP)，N-乙酰-L-丙氨酰-雙谷氨酰胺(Disoglutaminyl)-1^-丙氨酸-2-(1，2-二棕櫚酰-sn-甘油-3-(羥基-磷酰氧基)乙胺單鈉鹽(MTP-PE)，Nac-Mur-L-Ala-D-Gln-0CH3，Nac-Mur-IXThr-D-isoGln-sii-甘油二棕櫚酰，Nac-Mur-D-Ala-D-isoGln-sn-甘油二棕櫚酰，1-(2-甲基丙基)IH-咪唑[4,5-c]會啉-4-artnine，4-氨基-otec-二甲基-2-乙氧基甲基-IH-咪唑[4，5c]喹啉-l-乙醇，N-乙酰-葡糖胺-N-乙酰胞壁酰-L-Ala-D-isoGlu-L-Ala-二棕櫚酸甘油(DTP-GDP)，N-乙酰葡糖胺-N-乙酰胞壁酰-L-A1a-D-isoG1u-L-A1a-二棕櫚酰丙酰胺(DTP-PPP)，Y干擾素，7-烯丙基-8-氧鳥氨酸，聚-腺苷酸-聚-尿苷酸復(fù)合物，MIP-la，MlP-3a，RANTES;鄰苯二甲酸二丁酯和鄰苯二甲酸二丁酯類寸以物。可用于本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的賦形劑包括，例如，糖類和多元醇?？梢运幱玫妮d體，稀釋劑，和其他賦形劑的例子披露于以下文獻(xiàn)中Remington'sPharmaceuticalSciences(MackPub.Co.,N.J.，現(xiàn)行版；以上所有文獻(xiàn)都被以全文形式收作本文參考)。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑可以包括滲透促進(jìn)劑。在本文中，"滲透促進(jìn)劑"是在添加到本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中時(shí)能夠使所述免疫原性或抗原性制劑透過生物膜或增強(qiáng)透過作用，從而增強(qiáng)免疫原性或抗原性制劑的吸收的任何分子。滲透促進(jìn)劑的非限定性例子包括各種分子量的殼聚糖，如殼聚糖和N，0-羧甲基殼聚糖；聚-L-精氨酸；脂肪酸，如月桂酸；膽酸鹽，如脫氧膽酸鹽，乙醇酸鹽，膽酸鹽，?；悄懰猁}，?；敲撗跄懰猁}，和甘脫氧膽酸鹽；梭鏈孢酸的鹽，如牛黃二氬梭鏈孢酸鹽；聚氧化乙烯山梨聚糖，如TweenTM20和TweenTM80;十二烷基硫酸鈉；聚氧化乙烯-9-月桂基醚(Laureth9);EDTA;檸檬酸；水楊酸鹽；辛酸/癸酸甘油酯；辛酸鈉；癸酸鈉；月桂酸鈉；甘草亭酸鈉；甘草酸二鉀；甘草次酸氫琥珀酸，二鈉鹽(Carbenoxolone);乙酰肉堿，如棕櫚酰肉堿；環(huán)糊精；和磷脂酰，如溶血磷脂酰膽堿。優(yōu)選的是，滲透促進(jìn)劑選自下列一組殼聚糖，脂肪酸，聚乙烯山梨醇和辛酸/癸酸甘油酯。除了佐劑和/或滲透促進(jìn)劑之外，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑還可以包括其他添加劑。例如，本發(fā)明的真皮內(nèi)制劑可以包括蛋白穩(wěn)定劑，例如，海藻糖，蔗糖，甘氨酸，甘露糖，白蛋白，甘油。在某些實(shí)施方案中，將抗原-穩(wěn)定溶質(zhì)，通常是蛋白-穩(wěn)定溶質(zhì)摻入本發(fā)明的皮膚疫苗制劑。諸如蔗糖的蛋白-穩(wěn)定溶質(zhì)的使用不僅有助于保護(hù)和/或穩(wěn)定本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中的抗原性或免疫原性劑(特別是當(dāng)抗原性或免疫原性劑是蛋白時(shí)更是如此)，而且還能夠操縱該制劑的特性，例如，液體-凝膠轉(zhuǎn)變。例如，添加某些蛋白-穩(wěn)定溶劑使得該制劑能夠體-凝膠轉(zhuǎn)變溫度的條件;表:出、需要的熱誘"導(dǎo)的液體-凝膠J二，'特別是當(dāng)使用優(yōu)選的聚烷氧基亞烴基嵌段共聚物時(shí)。因此，可以拓寬膠凝劑的工作濃度范圍，并且改變轉(zhuǎn)變溫度。不過，通過向本發(fā)明的皮膚疫苗制劑中導(dǎo)入蛋白-穩(wěn)定溶質(zhì)，可以操縱轉(zhuǎn)變溫度，同時(shí)還能降低形成凝膠所需要摻入的膠凝劑的濃度。就此而言，優(yōu)選的蛋白-穩(wěn)定劑是糖類，例如蔗糖。5.4真皮內(nèi)疫苗制劑的制備本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑可以通過能夠得到穩(wěn)定的，無菌的，可注射制劑的任何方法制備。優(yōu)選的是，用于制備本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑的方法包括提供所述分子，例如，膠凝劑的溶液；提供抗原性或免疫原性劑的溶液；混合所述分子的溶液和抗原性或免疫原性劑的溶液，以形成接種物，例如，要注射到真皮內(nèi)區(qū)室的溶液；并且在將該制劑施用到對象體內(nèi)之前混合所得到的混合物大約1小時(shí)。優(yōu)選，混合是在低于膠凝劑的液體-凝膠轉(zhuǎn)變溫度的溫度下進(jìn)行的。在具體實(shí)施方案中，當(dāng)所述膠凝劑是聚合物時(shí)，該聚合物可以溶解在水溶液中，例如水，溫度低于該聚合物的液體-凝膠轉(zhuǎn)變溫度，并且其濃度是這樣的，即在高于液體-凝膠轉(zhuǎn)變溫度時(shí)，可以形成明膠狀基質(zhì)。用于測定本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑的聚合物濃度的典型方法可以包括以下步驟制備聚合物的含水母液，例如，用組織培養(yǎng)級水制備；然后優(yōu)選通過機(jī)械攪拌，例如磁力攪拌，在低于液體-凝膠轉(zhuǎn)變溫度的溫度下，例如，在水上在4C下培養(yǎng)所述溶液；將該溶液的pH調(diào)整到生理pH，在7.0-7.4的范圍內(nèi)，優(yōu)選調(diào)整到7.2;對該溶液進(jìn)行滅菌，優(yōu)選通過過濾滅菌，例如，使用0.2微米的GelmanAcrodiscPFSyringeFilter#4187滅菌；在37C下，例如，將它放入37C的水浴中培養(yǎng)所述溶液；并且肉眼監(jiān)測所述溶液。具體地講，肉眼監(jiān)測所述溶液的黏度。優(yōu)選的是，所述溶液在5分鐘以內(nèi)或更少時(shí)間內(nèi)膠凝。在某些實(shí)施方案中，所述溶液在20分鐘以內(nèi)或更少，15分鐘以內(nèi)或更少，IO分鐘以內(nèi)或更少時(shí)間內(nèi)膠凝。如果所述溶液不能在上述時(shí)間范圍內(nèi)膠凝的話，就調(diào)整聚合物的濃度，以使用更高濃度百分比的聚合物。調(diào)節(jié)聚合物的濃度，使所述溶液優(yōu)選在37'C下在20分鐘以內(nèi)或更少，在IO分鐘以內(nèi)或更少，優(yōu)選在5分鐘以內(nèi)或更少時(shí)間內(nèi)膠凝，這是通過肉眼檢查確定的。形成聚合物溶液的最佳濃度取決于在上面的5.1.1節(jié)中所討論的特定聚合物。用于本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑中的聚合物濃度可以為至少10%(w/v),至少10%(w/v)，至少15°/"w/v)，至少20%(w/v)，至少25%(w/v)，或至少30%(w/v)。用于本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑中的聚合物濃度優(yōu)選是聚合物的水溶液膠凝的濃度，即，在生理溫度，例如，37X:，在20分鐘以內(nèi)或更少，優(yōu)選在IO分鐘以內(nèi)或更少，最優(yōu)選在5分鐘以內(nèi)或更少時(shí)間內(nèi)形成半固體至固體二維或三維基質(zhì)。優(yōu)選的是，聚合物的水溶液膠凝的濃度同樣是本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑的治療效力增強(qiáng)的濃度，正如使用本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的標(biāo)準(zhǔn)方法所確定的，例如，通過對抗原性或免疫原性劑的抗體反應(yīng)，以及與，例如，僅包括抗原性或免疫原性劑的對照制劑的抗體反應(yīng)的比較來確定。在一種實(shí)施方案中，所述抗原性或免疫原性劑溶解在含有聚合物的水溶液中，以便形成穩(wěn)定的，無菌的，可注射制劑。另外，所述抗原性或免疫原性劑可以是顆粒物，并且溶解在聚合溶液中，以便形成穩(wěn)定的，無菌的，可注射制劑。為了增強(qiáng)本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑的性能，所述抗原性或免疫原性劑應(yīng)當(dāng)均勻地分散在整個(gè)明膠狀基質(zhì)中，這一目的可以通過在低于聚合物的液體-凝膠轉(zhuǎn)變溫度的溫度下，將抗原性或免疫原性劑溶解在包括所述聚合物的溶液中而實(shí)現(xiàn)，以便一旦溫度升高，所述抗原性或免疫原性劑就均勻地分散并且包埋在明膠狀基質(zhì)中。在其他實(shí)施方案中，當(dāng)所述分子是粘膜或生物附著性分子時(shí)，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑中的粘膜或生物附著性分子的濃度可以為0.1%(w/v)-1%(w/v)，0.1%(w/v)-5%(w/v)，或0.1%(w/v)-10%(w/v)。用于本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑中的粘膜或生物附著性分子的濃度優(yōu)選是能增強(qiáng)本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑的治療效力的濃度，例如，通過對抗原性或免疫原性劑的抗體反應(yīng)，并且相對例如，僅包括抗原性或免疫原性劑的對照制劑的抗體反應(yīng)確定。用于本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑中的抗原性或免疫原性劑的用量可以根據(jù)抗原性或免疫原性劑的化學(xué)性質(zhì)和效力而改變。通常，用于本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑中的抗原性或免疫原性劑的起始濃度是采用常規(guī)施用途徑，例如，肌內(nèi)注射時(shí)用于誘導(dǎo)需要的免疫反應(yīng)的常用濃度。然后例如用稀釋劑稀釋來調(diào)整的本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑中抗原性或免疫原性劑的濃度，以便獲得有效的保護(hù)性免疫反應(yīng)，正如使用本領(lǐng)域所公知和本文所披露的標(biāo)準(zhǔn)方法所確定的。用于本發(fā)明的真皮內(nèi)疫濃度的60%，優(yōu)選50%，更優(yōu)選40%。5.5表皮疫苗制劑的制備本發(fā)明的表皮疫苗制劑可以通過能得到穩(wěn)定的，無菌制劑的任何方法制備，如本領(lǐng)域所公知的并且披露于以下文獻(xiàn)中的方法申請日分別為2001年10月29日，2001年11月27日，2000年5月22日，和2002年10月29日的美國臨時(shí)專利申請?zhí)?0/330,713，60/333，162和美國專利申請流水號09/576，643，美國申請流水號10/282，231中所披露的，以上所有文獻(xiàn)都以它們的全文形式收作本文參考。它們特別是能夠以干燥粉末，凝膠，溶液，懸浮液，和乳脂形式遞送。所述疫苗制劑能夠以任何藥理學(xué)上可接受的形式遞送到皮膚的表皮區(qū)室中。在一種實(shí)施方案中，所述疫苗制劑被涂在皮膚上，并且隨后移動摩擦器械或反復(fù)摩擦皮膚和所述物質(zhì)。優(yōu)選的是，使用能產(chǎn)生理想結(jié)果的最低數(shù)量的摩擦。特定疫苗制劑的合適的摩擦量的確定屬于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員的常識。在另一種實(shí)施方案中，所述疫苗制劑可以在涂敷之前以干燥形式涂在遞送裝置的研磨表面上。在該實(shí)施方案中，將重構(gòu)的液體涂在遞送部位的皮膚，并且將制劑-涂敷的摩擦器械放置在皮膚的重構(gòu)液體的部位。然后移動或反復(fù)摩擦皮膚，以便使疫苗制劑溶解在皮膚表面上的重構(gòu)液體中，并且在摩擦的同時(shí)給藥。另外，所述重構(gòu)液體可以容納在摩擦器械中，并且釋放，以便在所述器械放置在皮膚上用于摩擦?xí)r溶解疫苗制劑。業(yè)已發(fā)現(xiàn)，某些疫苗制劑還能夠以明膠形式涂在摩擦器械上。5.6施用真皮內(nèi)疫苗制劑本發(fā)明涉及將本文所披露的和解釋的疫苗制劑優(yōu)選通過直接和選擇性地靶定真皮內(nèi)空間真皮內(nèi)遞送到對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室的方法，。一旦按照上文所述方法制備了真皮內(nèi)疫苗制劑，通常將接種物轉(zhuǎn)移到用于真皮內(nèi)遞送的注射器械，例如，注射器中。優(yōu)選的是，所迷接種物在制備l小時(shí)之內(nèi)施用到對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室。本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑是使用披露于以下文獻(xiàn)中的任何真皮內(nèi)器械和方法施用的美國專利申請?zhí)?9/417，671，申請?jiān)粸?999年10月14曰；09/606，909，申請日為2000年6月29日；09/893，746，申請日為2001年6月29日；10/028，989,申請日為2001年12月28日；10/028，988，申請日為2001年12月28日；或國際公開號EP10922444，公開日為2001年4月18日；WO01/02178，公開日為2002年1月10日；和WO02/02179，^S開日為2002年1月10日；以上所有文獻(xiàn)的內(nèi)容都以全文形式收作本文參考。在圖8-10中示出了典型的器械。本發(fā)明通過專一性地和選擇性地，優(yōu)選直接地耙定真皮內(nèi)空間提高了本文所披露的疫苗制劑的臨床應(yīng)用和治療效力。真皮內(nèi)疫苗制劑可以作為推注或通過輸液遞送到真皮內(nèi)空間。本發(fā)明人業(yè)已意外地發(fā)現(xiàn)，將本文所討論和解釋的疫苗制劑遞送到皮膚，提供了對所述疫苗制劑的有效的和/或改善了的反應(yīng)。本發(fā)明的疫苗制劑在施用到真皮內(nèi)區(qū)室時(shí)，在真皮內(nèi)空間具有改善了的吸附和/或細(xì)胞吸收。業(yè)已發(fā)現(xiàn)，按照本發(fā)明的方法遞送的疫苗制劑的免疫學(xué)反應(yīng)與常規(guī)遞送途徑，例如肌內(nèi)途徑的反應(yīng)相當(dāng)或更好。本發(fā)明提供了改善本發(fā)明的疫苗制劑對存在于皮膚中的免疫細(xì)胞，例如，抗原呈遞細(xì)胞的可利用性的方法，以便通過精確地耙定真皮內(nèi)空間，實(shí)現(xiàn)對疫苗制劑的抗原-特異性免疫反應(yīng)。優(yōu)選的是，本發(fā)明的方法能夠通過真皮內(nèi)途徑施用更小劑量的真皮內(nèi)疫苗制劑。所述真皮內(nèi)施用方法包括微型操作針-型注射，和輸液系統(tǒng)或任何能精確靶定真皮內(nèi)空間的其他裝置。真皮內(nèi)施用方法不僅包括微型器械-型注射裝置，而且還包括其他遞送方法，如將液體或粉末以無針發(fā)射注射，Mantoux-型真皮內(nèi)注射，通過微型器械的強(qiáng)化離子電滲，和液體，固體，或其他劑型直接沉積到皮膚中的形式遞送到真皮內(nèi)空間。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑是使用真皮內(nèi)Mantoux型注射施用到對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室中的，例如，參見，F(xiàn)lynn等，1994,Chest106:1463-5，以上文獻(xiàn)被以全文形式收作本文參考。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑是使用以下典型方法遞送到對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室中的。將按照在5.4節(jié)中披露的方法制備的真皮內(nèi)疫苗制劑吸入注射器，例如，帶有20號針的1mL無乳膠注射器；在裝載注射器之后，換上30號針用于真皮內(nèi)施用。對象皮膚，例如，小鼠的皮膚以盡可能淺的角度接近，使針的斜面向上，并且將皮膚拉緊。然后用5-IO秒鐘時(shí)間將注射體積緩慢推入，形成典型的"水泡"，并且隨后緩慢取出針。優(yōu)選的是，僅使用一個(gè)注射部位。更優(yōu)選的是，注射體積不超過lOOjaL，這是部分由于以下事實(shí)，較大的注射體積可能增加向周圍組織空間，例如，皮下空間的溢出。本發(fā)明涉及采用單一的或多個(gè)針的陣列的常規(guī)注射針，導(dǎo)管或所有已知類型的微型操作針的使用。在本文中，術(shù)語"針"意在包括所有這樣的針樣結(jié)構(gòu)。在本文中，術(shù)語"微型操作針"意在包括小于大約30號結(jié)構(gòu)，當(dāng)這種結(jié)構(gòu)是圓柱形時(shí)，通常大約31-50號的針。因此術(shù)語微型操作針?biāo)ǖ姆侵谓Y(jié)構(gòu)具有相當(dāng)?shù)闹睆剑⑶野ㄥF形，矩形，八邊形，楔形，和其他幾何形狀。本發(fā)明的疫苗制劑的真皮內(nèi)遞送可以使用發(fā)射流體注射器械，粉末噴射遞送器械，壓電，電動，電磁協(xié)助的遞送器械，氣體協(xié)助的遞送器械，它們能直接刺入皮膚，以便將本發(fā)明的疫苗制劑直接注射到皮膚空間的目標(biāo)位置。將本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑導(dǎo)向真皮內(nèi)空間的實(shí)際方法并不重要，只要它能刺入皮膚到達(dá)真皮內(nèi)空間的理想目標(biāo)深度，而又不穿過它就行。實(shí)際的最佳透深會根據(jù)對象皮膚的厚度而改變。在大多數(shù)場合下，刺入皮膚的深度為大約0.5-2mm。無論使用何種真皮內(nèi)器械和遞送方法，真皮內(nèi)疫苗制劑優(yōu)選將本發(fā)明的疫苗制劑導(dǎo)入至少0.3mm的深度，更優(yōu)選至少0.5腿至最多不超過2.5mm，更優(yōu)選不超過2.0mm，最優(yōu)選不超過1.7mm的深度。本發(fā)明的方法包括使用上文所披露的遞送器械，它將針的出口放置在真皮內(nèi)空間的合適深度上，并且控制液體遞送的體積和速度，將所述制劑精確遞送到需要的部位，而又不會泄露。本發(fā)明涉及微型操作針的器械的使用，其長度足以刺入真皮內(nèi)空間("穿入深度")，并且出口位于真皮內(nèi)空間的一定深度("出口深度")上，它使得皮膚可以密封在針周圍，克服傾向于迫使遞送的制劑流向皮膚表面的反壓力。一般，針長度不超過大約2mm，優(yōu)選大約300jjm-2mm,最優(yōu)選大約500ym-lmm。在針插入皮膚時(shí)，針出口通常位于大約250pm-2mm的深度上，優(yōu)選位于大約750mm-l.5mm的深度上，最優(yōu)選位于大約l腿的深度上。針出口的外露的高度，和針出口在真皮內(nèi)空間的深度影響皮膚在針周圍的密封程度。就是說，在較大深度上，具有較大暴露高度的針出口仍然能有效密封，而具有相同暴露高度的出口在放入真皮內(nèi)空間的淺的深度時(shí)不能有效密封。通常，針出口的暴露高度在大約O-大約1mm，優(yōu)選O-大約300pm范圍內(nèi)。暴露高度為O的針出口沒有斜面，并且位于針的頂端。在這種場合下，出口的深度與針的刺入深度相同。針出口通過斜面形成或通過穿過針側(cè)面具有可測定的暴露高度的開口形成。在某些實(shí)施方案中，所述疫苗制劑是在緊靠角質(zhì)層下面的目標(biāo)深度上遞送的，并且包括表皮和淺真皮，例如，大約0.025mm-大約2.5mm。為了靶定皮膚中的特定細(xì)胞，優(yōu)選的目標(biāo)深度取決于要靶定的特定細(xì)胞和特定對象的皮膚厚度。例如，為了靶定人類皮膚的皮膚空間的朗罕氏細(xì)胞，遞送需要至少部分包括在人體上通常為大約0.025mm-大約0.2mm的表皮組織深度。在某些實(shí)施方案中，當(dāng)所述疫苗制劑需要系統(tǒng)循環(huán)時(shí)，優(yōu)選的目標(biāo)深度應(yīng)當(dāng)為至少大約0.4咖，最優(yōu)選的是至少大約0.5mm，深度最多不超過大約2.5mm，更優(yōu)選不超過大約2.0mm,最優(yōu)選不超過大約1.7mm。將疫苗制劑主要導(dǎo)向真皮網(wǎng)織層的較大的深度和/或進(jìn)入較下面的部分，通常認(rèn)為是不太理想的。本發(fā)明提供了將疫苗制劑遞送到對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室的改進(jìn)方法，包括以下步驟提供藥物遞送器械，例如，在圖8-10中所示出的器械，包括具有前端針尖的套管針，套管針是與容納在藥物遞送器械中的制劑流體連通的，它還包括位于套管針周圍的限制器部分，所述限制器部分包括皮膚接合表面，使套管針的針頂端從限制器部分上延伸超過皮膚接合表面的距離相當(dāng)于大約0.5mm-大約3.0mm，并且套管針具有相對限制器部分的皮膚接合表面的平面取向的固定角度，將針頂端插入動物皮膚，并且使皮膚表面與限制器部分的皮膚接合表面接合，以便限制器部分的皮膚接合表面限制套管針頂端刺入動物皮膚的真皮層，并且通過套管針頂端將所述制劑從藥物遞送器械排入對象皮膚。另外，在其他優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及選擇對象皮膚上的注射部位，清洗對象皮膚上的注射部位，然后將本發(fā)明的疫苗制劑從藥物遞送器械排入對象皮膚。另外，所述方法包括用本發(fā)明的疫苗制劑填充藥物遞送器械。另外，所述方法包括將限制器部分的皮膚接合表面壓在對象皮膚上，并且施加壓力，以便拉緊對象皮膚，并且在注射疫苗制劑之后將套管針從皮膚中取出。另外，將所述前端插入皮膚的步驟還可以限定為將所述前端插入皮膚的深度為大約1.0mm-大約2.Omm，最優(yōu)選插入皮膚的深度為1.5mm±0.2-0.3mm。圖8-10示出了本發(fā)明的真皮內(nèi)方法的具體實(shí)施方案。在所述方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，將前端插入對象皮膚的步驟還可以限定為以大約15度的大體上垂直于皮膚的角度將所述前端插入皮膚，所述角度最優(yōu)選相對皮膚成90度角。在大約5度范圍內(nèi)，并且相對皮膚接合表面的方向的固定角度被進(jìn)一步限定為大體上垂直的。在所述優(yōu)選實(shí)施方案中，所述限制器包圍在套管針周圍，具有大體上平面狀的扁平皮膚接合表面。另外，所述藥物遞送器械包括具有針筒和容納在針筒中的柱塞桿的注射器，并且所述柱塞杵可以下壓，以便將遞送器械中的物質(zhì)通過套管針的前端排出，例如，參見圖7-10。在優(yōu)選實(shí)施方案中，進(jìn)一步限定通過以下方法將疫苗制劑從遞送器械中排出用第一只手抓住皮下注射器針，并且用第二只手的食指按壓柱塞桿，并且通過用第一只手抓住皮下注射器針，用第二只手的拇指按壓皮下注射器針的柱塞桿將疫苗制劑從遞送器械中排出，將前端插入動物皮膚的步驟可進(jìn)一步限定為用限制器按壓動物皮膚。另外，所述方法還可以包括將針組件結(jié)合在注射器針筒頂端的步驟，所述針組件包括套管針和限制器，在連接針組件之前通過從針筒頂端去掉蓋子露出針筒頂端的步驟。另外，將針前端插入對象皮膚的步驟可進(jìn)一步限定為同時(shí)用第一只手抓住皮下注射器針，并且將限制器按壓在動物皮膚上，以便張緊動物皮膚，并且通過用第一只手的食指按壓柱塞桿排出物質(zhì)，或通過用第一只手的拇指按壓柱塞桿排出所述物質(zhì)。所述方法還包括在將所述物質(zhì)注射到對象皮膚后將套管針的前端從對象皮膚中取出。另外，所述方法包括將前端插入皮膚優(yōu)選到大約1.0咖-大約2.0咖的深度，最優(yōu)選1.5mm±0.2-0.3mm的深度。優(yōu)選的是，在插入套管針24之前(參見圖8-10)，選擇并且清洗對象皮膚上的注射部位。在選擇并且清洗所述部位之后將套管針24的前端40插入對象皮膚，插入角度大體上為90度，直到皮膚接合表面42接觸皮膚。皮膚接合表面42防止套管針42穿透皮膚的真皮層，并且將疫苗制劑注射到皮下層。在套管針42插入皮膚時(shí)，對所述疫苗制劑進(jìn)行真皮內(nèi)注射。疫苗制劑可預(yù)先填充到注射器60中，在進(jìn)行注射之前填充并且保存?？梢允褂眠M(jìn)行注射的若干種變化形式的方法，這取決于個(gè)體的喜好和注射器類型。在任何場合下，在套管針42的刺入深度最優(yōu)選不超過大約1.5mm，因?yàn)槠つw接合表面42能阻止任何進(jìn)一步刺入。另外，在進(jìn)行真皮內(nèi)注射期間，套管針42的前端40包埋在皮膚的真皮層中，這導(dǎo)致了在注射本發(fā)明的疫苗制劑期間具有合適的反壓力。該反壓力可以在76psi的級別上。為了通過由用戶施加在注射器的柱塞桿66上的最小的力達(dá)到該壓力，優(yōu)選具有小內(nèi)徑的注射器管60，如0，183英寸(4.65mm)或更小。因此，本方法包括選擇用于注射的注射器，它具有足夠?qū)挾鹊膬?nèi)徑，以便產(chǎn)生在疫苗制劑從注射器中排出以便完成注射時(shí)足以克服真皮層的反壓力的力。另夕卜，由于皮內(nèi)注射通常是用要注射的小體積的疫苗制劑進(jìn)行的，即，不超過0.5ml，優(yōu)選大約0.1ml，優(yōu)選具有小內(nèi)徑的注射器管60，以便縮小靜區(qū)，這種靜區(qū)有可能導(dǎo)致在注射完成之后保留在塞子70和注射器肩部之間被浪費(fèi)的物質(zhì)。另外，由于在0.1ml級別上的小體積的疫苗制劑，優(yōu)選具有小內(nèi)徑的注射器管，以便降低在插入塞子的過程中在物質(zhì)液面高度和塞子70之間的空氣頂部空間。另外，小的內(nèi)徑增強(qiáng)了檢查和觀察注射器針筒中疫苗制劑的體積的能力。用于實(shí)施本發(fā)明的真皮內(nèi)施用包括將疫苗制劑以推注和輸液遞送方式遞送到對象，優(yōu)選哺乳動物，最優(yōu)選人體內(nèi)。推注劑量是用較短的時(shí)間以一個(gè)體積單位形式遞送的單一劑量，遞送時(shí)間通常小于大約IO分鐘。輸液施用包括以特定的速度施用流體，該速度可以是恒定的或可變的，用相對較長的時(shí)間，通常超過大約IO分鐘施用。將所述制劑真皮內(nèi)遞送到真皮內(nèi)空間可以是被動的，不對要遞送的制劑施加外部壓力或其他驅(qū)動方式，和/或主動的，施加壓力或其他驅(qū)動方式。優(yōu)選的壓力發(fā)生裝置的例子包括泵，注射器，彈性膜，氣體壓力，壓電，電動，電磁泵送或貝氏彈簧或墊圏或它們的組合。如果需要的話，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑的遞送速度可以通過所述壓力發(fā)生裝置可變地控制。按照本發(fā)明遞送或施用的疫苗制劑包括用可以藥用的稀釋劑制備的它的溶液，懸浮液，凝膠，顆粒物，如微米和納米顆粒，這些顆粒是懸浮的或分散的，以及它的原位形成的媒介物。本發(fā)明還涉及改變本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑遞送的目標(biāo)深度。遞送真皮內(nèi)疫苗制劑的目標(biāo)深度可以由醫(yī)生手工控制，或者借助或不借助于指示器，以便指示何時(shí)達(dá)到了需要的深度。不過，優(yōu)選的是，用于本發(fā)明的器械具有用于控制刺入皮膚到達(dá)真皮內(nèi)空間的理想深度的結(jié)構(gòu)裝置。遞送的目標(biāo)深度可以用在以下文獻(xiàn)中披露的任何方法改變美國專利申請?zhí)?9/417，671，申請日為1999年10月14日；09/606，909，申請日為2000年6月29日；09/893，746，申請日為2001年6月29日；10/028，989，申請日為2001年12月28日；10/028,988，申請日為2001年12月28日；或國際公開號EP10922444，公開日為2001年4月18日；WO01/02178,公開日為2002年1月10日；和WO02/02179，公開日為2002年1月10日；以上所有文獻(xiàn)的內(nèi)容都被全文收作本文參考。本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑的劑量取決于制劑中的抗原性或免疫原性劑。真皮內(nèi)疫苗制劑的劑量可以用本領(lǐng)域所公知的標(biāo)準(zhǔn)免疫學(xué)方法確定，例如，通過首先確定能有效誘導(dǎo)預(yù)防性或治療性免疫反應(yīng)的劑量，通過與僅僅由抗原性或免疫原性劑組成的制劑，而沒有本文所披露的分子的對照制劑相比較，測定抗原特異性免疫球蛋白的血清效價(jià)。最優(yōu)選的是，所述有效劑量是在用于人體模型之前在動物模型上確定的。最優(yōu)選的是，最佳劑量是用其皮膚厚度大體上接近人皮膚厚度的動物，例如豬來確定的。本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑還可以根據(jù)劑量方案施用，例如，初次施用所述疫苗制劑，隨后進(jìn)行強(qiáng)化施用。在具體實(shí)施方案中，第二個(gè)劑量的疫苗制劑是在首次施用之后從兩周到一年的任何時(shí)間施用的，優(yōu)選從一到六個(gè)月施用的。另外，笫三個(gè)劑量可以在第二個(gè)劑量之后施用，并且在首次施用之后三個(gè)月到兩周，甚至更長時(shí)間施用，優(yōu)選四-六個(gè)月，或六個(gè)月至一年。不過，在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，不需要強(qiáng)化免疫接種。本發(fā)明的疫苗制劑是使用本領(lǐng)域所公知或披露于以下文獻(xiàn)中的任何器械和方法施用的W001/02178，公開日為2002年1月10日；和WO02/02179，公開日為2002年1月10日，美國專利號6，494，865，授權(quán)日為2002年12月17日和美國專利號6，569，143授權(quán)日為2003年5月27日，以上所有文獻(xiàn)的內(nèi)容都被全文收作本文參考。優(yōu)選的是，用于本發(fā)明方法的真皮內(nèi)施用的器械具有用于控制刺入皮膚到真皮內(nèi)空間的合適深度的結(jié)構(gòu)裝置。這一目的通常是通過與真皮介入裝置的軸相關(guān)的加寬的部分或套管實(shí)現(xiàn)的，它可以是支撐結(jié)構(gòu)或平臺形式的，針連接在它上面。作為真皮介入裝置的微型操作針的長度在生產(chǎn)期間可以方便地改變，并且通常以小于2mm的長度生產(chǎn)。微型操作針同樣是非常尖銳的，并且具有非常小的型號，以便進(jìn)一步減輕在注射或輸液期間的疼痛和其他感覺。在本發(fā)明中它們可以作為單個(gè)的腔體微型操作針使用或?qū)⒍鄠€(gè)微型操作針以線形陣列或二維陣列形式組裝或生產(chǎn)，以便提高遞送速度或增加在特定時(shí)間內(nèi)遞送物質(zhì)的量。所述針可以從末端，側(cè)面或兩側(cè)排出它的物質(zhì)。微型操作針可以結(jié)合在多種器械上，如支架和外殼上，它們還可用于限制刺入的深度。本發(fā)明的真皮介入裝置還可以配置容器或其他部件，以便在通過壓力遞送或泵送藥物或其他物質(zhì)之前容納所述物質(zhì)。另外，容納真皮介入裝置的器械可以從外部與所述其他部件連接。真皮內(nèi)給藥方法包括微型操作針-型注射和輸液系統(tǒng)或任何其他裝置，以便精確地靶定真皮內(nèi)空間。真皮內(nèi)給藥方法不僅包括微型器械-型注射裝置，而且還包括將流體或粉末通過無針發(fā)射注射方式注射到真皮內(nèi)空間，Mantoux-型皮內(nèi)注射的其他遞送方法，通過微型器械的強(qiáng)化離子電滲，和直接將液體，固體，或其他劑型沉積到皮膚中。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了藥物遞送器械，包括用于進(jìn)行皮內(nèi)注射的針組件。所述針組件具有能夠結(jié)合在能預(yù)先填充的容器上的接頭，如注射器等。所迷針組件是由接頭支撐的，并且具有淺的空間的主體，其前端延伸通過所述接頭。限制器環(huán)繞所述針，并且從所述接頭向針的前端延伸。所述限制器具有適合容納在諸如人的動物皮膚的皮膚接合表面。針前端從皮膚接合表面上突出一定距離，以便限制器限制針能夠刺入動物皮膚的深度。在具體實(shí)施方案中，用于本發(fā)明方法的皮下注射器針組件包括實(shí)施本發(fā)明方法所必需的部件，涉及將疫苗制劑遞送到對象皮膚，優(yōu)選人類對象皮膚的改進(jìn)方法，包括以下步驟提供包括套管針的藥物遞送器械，它具有針前端，并且套管針與容納在藥物遞送器械中的物質(zhì)流體連通，并且包括包圍套管針的限制器部分，并且所述限制器部分包括皮膚接合表面，使套管針的針頂端從限制器部分上延伸超過皮膚接合表面的距離等于大約0.5mm-大約3.0mm，并且套管針具有相對限制器部分的皮膚接合表面平面的固定取向角度，將針頂端插入動物皮膚，并且使皮膚表面與限制器部分的皮膚接合表面結(jié)核，以便限制器部分的皮膚接合表面限制套管針頂端刺入動物皮膚的真皮層，并且通過套管針頂端將所述物質(zhì)從藥物遞送器械排放到動物皮膚中。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及如圖8-圖IO所示的藥物遞送器械，圖中示出了藥物遞送器械的例子，可將它用于實(shí)施本發(fā)明的方法，用于完成圖8-10所示的皮內(nèi)注射。在圖8-10中示出的器械IO包括針組件20，它可以連接在注射器管60上?？梢允褂玫钠渌问降倪f送器械，包括在以下文獻(xiàn)中所披露類型的注射筆美國專利號5，279，586，美國專利申請流水號09/027，607和PCT申請?zhí)朩O00/09135，以上文獻(xiàn)的內(nèi)容被以全文形式收作本文參考。針組件20包括支撐套管針24的針座22。限制器26接納針座22的至少一部分，以便限制器26大體上環(huán)繞套管針24，正如在圖9中所示出的。針座22的一端30能夠固定在注射器的容器32上?？梢允褂枚喾N類型的注射器容納要按照本發(fā)明的方法進(jìn)行真皮內(nèi)遞送的物質(zhì)，使用設(shè)計(jì)的針組件，下面提供幾種例子。針座22的相反一端優(yōu)選包括延長部分34，它鑲嵌容納在限制器26內(nèi)的對接表面36上。優(yōu)選在限制器26上提供多個(gè)肋38，以,便提供結(jié)構(gòu)完整性，并且有利于操作針組件20。通過適當(dāng)設(shè)計(jì)所述組件的尺寸，針24前端或頂端40和限制器26上的皮膚接合表面42之間的距離"d"可以進(jìn)行嚴(yán)格控制。距離"d"優(yōu)選在大約0.5mm-大約3.0mm范圍，最優(yōu)選大約1.5mm±0.2mm-O.3mm。當(dāng)套管針24的前端40延伸超過皮膚接合表面42的距離在所述范圍內(nèi)時(shí)，能確保皮內(nèi)注射，因?yàn)獒槻荒苓M(jìn)一步刺入動物超過動物的典型真皮層的深度。通常，外皮層，表皮的厚度為50-200jum，而真皮，皮膚的內(nèi)層和較厚層的厚度為1.5-3.5mm。在真皮層下面依次為皮下組織(有時(shí)又被稱作下真皮層)和肌肉組織。參見圖9,限制器26包括開口44,套管針24的前端40從它里面突出。開口44和前端40之間的空間關(guān)系可以根據(jù)特定場合的要求控制。在所示出的實(shí)施方案中，皮膚接合表面42通常是平面或扁平的，并且是連續(xù)的，以便能夠?qū)⑨樈M件20穩(wěn)定放置在動物皮膚上。盡管沒有具體說明，但優(yōu)選具有大體上為平面的皮膚接合表面42，包括肋形式的突出部分或凹槽形式的凹陷部分，以便增強(qiáng)穩(wěn)定性或有利于將針防護(hù)罩安裝在針頂端40上。另外，沿限制器26側(cè)面分布的肋38可以延伸超過皮膚接合表面42的平面。無論皮膚接合表面42的形狀或輪廓如何，優(yōu)選的實(shí)施方案包括足夠的大體上為平面的或扁平的表面面積，該面積與皮膚接觸，以便促進(jìn)注射器相對對象皮膚的穩(wěn)定化。在最優(yōu)選實(shí)施方案中，所述皮膚接合表面42有利于保持注射器相對皮膚表面大體上成垂直方向，并且有利于在注射期間在皮膚上施加壓力。因此，在所述優(yōu)選實(shí)施方案中，限制器具有至少5mm的尺寸或外徑。主要尺寸取決于用途和包裝限制，不過常見直徑低于15mm或更優(yōu)選為11-12mm。重要的是，盡管圖8和9示出了兩件式組件，其中，針座22是獨(dú)立于限制器26的，用于本發(fā)明的器械并不局限于這種結(jié)構(gòu)。用一塊塑料材料整體制成針座22和限制器26是圖8和9所示例子的替代方案。另外，可以將針座22粘合或以其他方式固定在限制器26的如圖8所示位置上，以便針組件20在組裝時(shí)形成一個(gè)整體。采用針座22和限制器26，提供了可以生產(chǎn)真皮內(nèi)針的優(yōu)點(diǎn)。優(yōu)選的針尺寸是小號皮下注射器針，通常為30號或31號針。使用這種戰(zhàn)。限制器26和針座22有利于使用總體長度大于針的有效長度的針24，所述有效長度在注射期間能刺入個(gè)體的組織。采用本發(fā)明所設(shè)計(jì)的針組件，改善了生產(chǎn)，因?yàn)樵谏a(chǎn)和組裝過程中可以操縱更大長度的針，同時(shí)仍然能獲得完成皮內(nèi)注射的短針的優(yōu)點(diǎn)。圖9表示固定在諸如注射器60的藥物容器，以便形成器械10的針組件20。正如本領(lǐng)域所公知的，大體上為筒狀的注射器主體62可以用塑料或玻璃制成。注射器主體62提供了用于容納在注射期間要施用的物質(zhì)的容器64。正如本領(lǐng)域所公知的，柱塞桿66具有位于一端的用手驅(qū)動的凸緣68，而在相反一端具有塞子70。柱塞桿66在容器64中的手工運(yùn)動，迫使容器64中的物質(zhì)從針的末端40根據(jù)需要排出。針座22能夠以多種已知方式固定在注射器主體62上。在一種例子中，在注射器主體62的針座22的內(nèi)部和出口部分72之間提供了干涉配合。在另一種例子中，提供了常規(guī)的Luer配合結(jié)構(gòu)，以便將針座22固定在注射器60的末端。正如從圖10中可以看出的，這樣設(shè)計(jì)的針組件能方便地適應(yīng)多種常規(guī)注射器類型。本發(fā)明提供了皮內(nèi)針形注射器，它可適應(yīng)于多種注射器類型，因此，本發(fā)明提供了有利于批量生產(chǎn)并且組裝皮內(nèi)針的顯著優(yōu)點(diǎn)。在插入套管針24之前，選擇并且清洗在動物皮膚上的注射部位。在選擇并且清洗所述部位之后，將套管針24的前端40插入動物皮膚，插入角度大體上為90度，直到皮膚接合表面42接觸皮膚。皮膚接合表面42能防止套管針42穿過皮膚的真皮層，并且將物質(zhì)注射到皮下層。在將套管針42插入皮膚時(shí)，對所述物質(zhì)進(jìn)行真皮內(nèi)注射?？梢詫⑺鑫镔|(zhì)預(yù)填充到注射器60中，在進(jìn)行注射之前填充，并且保存在里面。根據(jù)個(gè)體偏好和注射器類型，可以使用若干種不同的方法進(jìn)行注射。在任何場合下，套管針42的刺入深度最優(yōu)選不超過大約1.5mm，因?yàn)槠つw接合表面42阻止了任何進(jìn)一步的刺入。另外，在使用皮內(nèi)注射期間，套管針42的前端40被包埋在皮膚的真皮層中，這導(dǎo)致了在注射物質(zhì)期間產(chǎn)生合理大小的反壓力。該反壓力可以在76psi的級別上。為了使必須由用戶施加在注射器的柱塞桿66上的最小的力達(dá)到該壓力，優(yōu)選使用具有小內(nèi)徑的注射器管60，如0.183英寸(4.65mm)或更小。因此，本發(fā)明的方法包括選擇用于注射的注射器，其內(nèi)徑的寬度足以產(chǎn)生足夠克服在將物質(zhì)從注射器中排出進(jìn)行注射時(shí)真皮層的反壓力。另外，由于皮內(nèi)注射通常是使用要注射的小體積的物質(zhì)進(jìn)行的，即，在不超過0.5ml,優(yōu)選大約0.1ml的等級上，優(yōu)選具有小內(nèi)徑的注射器管60，以便縮小靜區(qū)，所述靜區(qū)可能在注射結(jié)束之后導(dǎo)致浪費(fèi)的物質(zhì)滯留在注射的塞子70和肩部之間。另外，由于具有O.lml級別上的小體積的物質(zhì)，優(yōu)選具有小內(nèi)徑的注射器管，以便縮小在插入塞子的過程中位于物質(zhì)液面和塞子70之間的空氣頂部空間。另外，小內(nèi)徑增強(qiáng)了檢查并且觀察注射器針筒中的物質(zhì)體積的能力。參見圖8-10，可以用第一只手112抓住注射器60，并且用第二只手116的食指114按壓柱塞桿66。另外，參見圖8-10，可以用第二只手116的拇指118按壓柱塞桿66，同時(shí)用第一只手抓住注射器60。在上述每一種變化形式中，都按壓動物皮膚，并且通過皮膚接合表面42張緊在限制器26上。笫一只手112或第二只手116都不接觸皮膚。業(yè)已證實(shí)其他變化形式能有效進(jìn)行本發(fā)明的皮內(nèi)注射。這種變化包括用同一只手抓握注射器60，并且用這只手按壓柱塞桿66。圖9表示用第一只手112抓握注射器60，同時(shí)用第一只手112的拇指120按壓柱塞桿。這種變化形式包括用第二只手114張緊皮膚，同時(shí)進(jìn)行注射。另外，參見圖10,抓握部分是顛倒的，并且用第一只手112的食指122按壓柱塞桿，同時(shí)用第二只手116張緊皮膚。不過，據(jù)信，這種對皮膚的手工張緊是最必要的，并且僅僅體現(xiàn)了從使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)的習(xí)慣中產(chǎn)生的變化形式。在上述每一種變化形式中，套管針24僅被插入動物皮膚大約1.5mm。在進(jìn)行注射之后，將套管針24從皮膚中取出，并且以合適的方式處理注射器60和針組件20。將每一種變化形式用于臨床試驗(yàn)，以便確定針組件20和本發(fā)明的皮內(nèi)注射方法的效果。器械。所使用的器械的性質(zhì)并不重要，只要它能刺入對象皮膚到接:層部分的目標(biāo)深度，而又不穿過它就行。優(yōu)選的是，所述器械刺入皮膚的深度至少為大約2mm,至深度不超過大約3mm，最優(yōu)選的是，不超過大約2.5mm。5.7表皮疫苗制劑的施用表皮施用方法包括本領(lǐng)域公知的用于精確靶定表皮區(qū)室的任何方法和器械，如在以下文獻(xiàn)中所披露的方法和器械美國臨時(shí)專利申請?zhí)?0/330,713，60/333，162和美國專利申請流水號09/576，643，美國申請流水號10/282，231,申請日分別為2001年10月29日，2001年11月27日，和2000年5月22日，和2002年10月29日，以上所有文獻(xiàn)都以它們的全文形式收作本文參考。本發(fā)明涉及精確靶定表皮空間的微型摩擦器械。這種器械可以具有實(shí)心或空心微型凸起。所述微型凸起的長度可以高達(dá)500pm。合適的微型凸起部分的長度為大約50-500jnm。優(yōu)選的是，所述微型凸起的長度為大約50-300jjm，更優(yōu)選在大約150-250Mm范圍內(nèi)，最優(yōu)選180-220um。可用于本發(fā)明方法中的微型研磨器械優(yōu)選是能夠摩擦皮膚的器械，如在11-16中所示出的器械。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述器械能夠摩擦皮膚，以便刺入角而又不刺入角質(zhì)層。在本文中，"刺入"表示進(jìn)入角質(zhì)層而又不完全穿過角質(zhì)層和進(jìn)入相鄰的層。這并非是說角質(zhì)層不能夠完全穿透，以便暴露皮膚底層的界面。另一方面，穿刺表示完全通過角質(zhì)層，并且進(jìn)入角質(zhì)層下面的相鄰的層。在本文中，術(shù)語"摩擦"表示去掉至少一部分角質(zhì)層，以便提高皮膚的滲透性，而又不導(dǎo)致過度的皮膚刺激或破壞皮膚對傳染性制劑的屏障。在本文中，術(shù)語"摩損"表示破壞皮膚外層，例如，通過剮擦或摩擦，形成具有破壞的角質(zhì)層的部位。它與"穿孔"不同，穿孔會產(chǎn)生穿過角質(zhì)層的獨(dú)立的孔，在這些孔之間具有未破壞的角質(zhì)層部分。優(yōu)選的是，用于本發(fā)明方法中的表皮遞送的器械刺入，但不刺穿角質(zhì)層。要通過本發(fā)明的方法施用的疫苗制劑可以在摩擦之前，在摩擦的同時(shí)，或摩擦之后施用。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用于將疫苗制劑遞送到患者皮膚中的方法，包括以下步驟參見圖IIB，用所述制劑涂敷患者外皮層或微型研磨機(jī)2，并且使微型研磨機(jī)2在患者皮膚上移動，以便提供摩擦，留下足以使所述制劑能夠進(jìn)入患者的活的表皮的皺紋。由于微型研磨機(jī)2的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，微型研磨機(jī)2的前緣首先拉伸患者皮膚，然后微型研磨機(jī)2的上表面摩擦外側(cè)防護(hù)制劑e,以便進(jìn)入患者體內(nèi)。在初次摩擦外部保護(hù)性皮層之后，微型研磨機(jī)2的尾端和前緣可以摩擦所述摩擦過的部位的表面，使所述制劑進(jìn)入所述摩擦過的皮膚部位，從而改善它的醫(yī)學(xué)效果。參見圖IIB，12A和12B，微型研磨機(jī)2包括底座4，研磨表面5可以安裝在它上面。另外，研磨表面可以與所述底部形成一體，并且作為單一的兩個(gè)部分的部件進(jìn)行生產(chǎn)。優(yōu)選的是，底座4是整體模制件。在一種實(shí)施方案中，底座4被設(shè)計(jì)成具有蘑菇樣冠4b，它是向上彎曲的，并且在頂部截短。底座4的頂部通常是扁平的，將研磨表面5安裝在它上面，或者與它一體化。另外，截短的頂部可以具有凹槽，用于容納研磨表面5。在所有實(shí)施方案中，研磨表面5包括具有一系列微型凸起的平臺，這些突起延伸到截短的頂部上面。在微型研磨機(jī)的另一種實(shí)施方案中，手柄，底座和研磨表面可以彼此一體化，并且作為單一的三個(gè)部分的器械生產(chǎn)。將微型研磨機(jī)2放在對象身體上，使微型研磨機(jī)2通過對象皮膚運(yùn)動，施加足夠的壓力，以便使研磨表面5能夠打開對象的外部保護(hù)性皮膚或角質(zhì)層。施加在底座上的向內(nèi)的壓力，導(dǎo)致微型研磨機(jī)2被壓入對象皮膚。因此，優(yōu)選的是，傾斜的蘑菇樣冠4b的高度足以防止在使用微型研磨機(jī)2時(shí)所使用的物質(zhì)流到表面4c上。正如下面將要說明的，研磨表面5包括一系列微型凸起。手柄6連接在底座4上，或者可以與底座4一體化。參見圖12A，手柄的上端6a在底座4的內(nèi)側(cè)周向側(cè)壁4a之間可以是搭扣配合或摩擦配合。另外，參見圖11A和12A，手柄6可以用膠粘貼(例如，用環(huán)氧樹脂)到底座4的下側(cè)4c上。另外，所述手柄和底座可以作為一件兩個(gè)部分的部件同時(shí)生產(chǎn)(例如，注模)。手柄的直徑可以小于底座的直徑或可以具有與底座類似的直徑，底座4的下表面4c可以與蘑菇樣冠4b平齊，或者延伸超過蘑菇樣冠。手柄6的下端6b可以比手柄6的軸6c寬或者可以具有與軸類似的直徑。下端6b可以包括凹痕6d，它被用作施用所述物質(zhì)并且移動微型研磨機(jī)2的人放置拇指的部位。另外，在手柄6的外側(cè)設(shè)置突出部分8,以便幫助用戶在使手柄通過患者皮膚運(yùn)動時(shí)牢固地抓住手柄6。正如在圖12B中的圖11B的剖視圖所示出的，下端6b可以是筒狀的。參見圖12A,微型研磨機(jī)2可以用透明材料制成。在筒狀下端6b的兩側(cè)設(shè)置凹痕6d，以便幫助使用微型研磨機(jī)2的人抓住它。就是說，微型研磨機(jī)2的運(yùn)動可以通過手或手指實(shí)現(xiàn)。微型研磨機(jī)的手柄6和底座4優(yōu)選是用塑料和類似材料模制的。微型研磨機(jī)2優(yōu)選是廉價(jià)生產(chǎn)的，以便整個(gè)微型研磨機(jī)和研磨表面在一位患者身上用過之后可以丟棄。設(shè)計(jì)研磨表面5，以便當(dāng)微型研磨機(jī)2通過患者皮膚移動時(shí)，所產(chǎn)生的摩擦刺入角質(zhì)層。研磨表面5可以用需要的制劑涂敷，以便遞送到患者的活的表皮中。為了獲得理想的摩擦，微型研磨機(jī)2應(yīng)當(dāng)至少通過患者皮膚一次?？梢匝亟惶娴姆较蚰Σ粱颊咂つw。本發(fā)明微型研磨機(jī)的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，使得所述制劑能夠更有效地吸收，從而可以將較少的制劑涂在患者皮膚上或涂在研磨表面5上。研磨表面5可以用希望遞送到患者體內(nèi)的制劑涂敷。在一種實(shí)施方案中，所述制劑可以是分散在研磨表面5上的粉末。在另一種實(shí)施方案中，要遞送的制劑可以在涂敷之前直接涂在患者皮膚上，并且在患者皮膚上移動微型研磨機(jī)2。參見圖13,本發(fā)明的微型研磨器械10包括大體上為平面的主體或研磨表面支撐裝置12，它具有從支撐裝置下表面上突出的多個(gè)微型凸起14。所述支撐裝置通常具有足以將底座表面連接在微型研磨器械上的厚度，以便使得所述器械能夠方便地操縱，參見圖HE,12A和12B。另外，可以將不同的手柄或抓握裝置連接或集成在研磨表面支撐裝置12的上表面上，研磨表面支撐裝置12的尺寸可以根據(jù)微型凸起的長度，特定面積上的微型凸起的數(shù)量和要施用到患者體內(nèi)的制劑的量而改變。通常，研磨表面支撐裝置12的表面積為大約l-4cm2。在優(yōu)選實(shí)施方案中，研磨表面支撐裝置12的表面積為大約lcm2。參見圖13，14，14A和15，微型凸起14從研磨表面支撐裝置12的表面上突出，并且大體上垂直于研磨表面支撐裝置12的平面。在所示出的實(shí)施方案中，微型凸起排列成多行和多列，并且優(yōu)選間隔均勻的距離。微型凸起14具有大體上為棱錐形狀，側(cè)面16延伸到頂部18。所示出的側(cè)面16從剖面上看具有大體上的凹入形狀，并且形成了從研磨表面支撐裝置12延伸到頂部18的弧形表面。在所示出的實(shí)施方案中，微型凸起是有具有大體上相同的形狀和尺寸的四個(gè)側(cè)面16組成的。參見圖14A和15，微型凸起14的每一個(gè)側(cè)面16具有相對側(cè)邊，它與相鄰的側(cè)邊接近，并且構(gòu)成從研磨表面支撐裝置12上延伸出來的切邊22。切邊22形成了大體上為三角形或梯形的刮擦表面，與側(cè)面16形狀相當(dāng)。在其他實(shí)施方案中，微型凸起14可以具有更少或更多的側(cè)面。微型凸起14優(yōu)選止于平頭頂端18。一般，頂端18大體上扁平的，并且平行于支撐裝置14。當(dāng)所述頂端是扁平的時(shí)候，微型凸起的總長度不會刺入皮膚。因此，微型凸起的長度大于刺入皮膚的微型凸起的總深度。頂端18優(yōu)選構(gòu)成了明晰的，鋒利的邊緣20，在這里，它與側(cè)面16擬合。邊緣20大體上平行于研磨表面支撐裝置12延伸，并且形成另一個(gè)切邊。在其他實(shí)施方案中，邊緣20可以是略微圓形的，以便形成從側(cè)面16到頂端18的順暢的過度。優(yōu)選的是，微型凸起是截頭錐形或截頭棱錐形形狀的。微型研磨器械10和微型凸起可以用塑料材料制成，這種材料不會與施用的物質(zhì)起反應(yīng)。例如，正如本領(lǐng)域所公知的，合適塑料材料的非排他性的例子包括，聚乙烯，聚丙烯，聚酰胺，聚苯乙烯，聚酯，和聚碳酸酯。另外，微型凸起可以用金屬制成，如不銹鋼，鵠鋼，鎳合金，鉬，鉻，鈷，鈦，以及它們的合金，或用其他材料，如硅，陶瓷，和玻璃聚合物制成。余屬微型凸起可以用各種技術(shù)加工，類似于顯微機(jī)械加工。微型凸起還可以通過硅片的照相平版印刷蝕刻加工，使用本領(lǐng)域所公知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。它們還可以通過鑄模工藝在塑料上加工，例如，參見美國專利申請流水號10/193，317，申請?jiān)粸?002年7月12日，該文獻(xiàn)被收作本文參考。微型凸起的長度和厚度是根據(jù)要施用的特定物質(zhì)和使用所述器械的角質(zhì)層部位的厚度選擇的。優(yōu)選的是，微型凸起基本上刺入角質(zhì)層，而又不會刺穿或穿過角質(zhì)層。微型凸起的長度可以高達(dá)大約500ym。合適的微型凸起為大約50-500jam。優(yōu)選的是，微型凸起的長度為大約50-大約300um,更優(yōu)選在大約150-250jam范圍內(nèi)，最優(yōu)選180-220nm。在所示出的實(shí)施方案中，微型凸起具有大體上的棱錐形形狀，并且垂直于所述器械的平面。這種形狀的特殊優(yōu)點(diǎn)是，能確保在需要的深度上進(jìn)行摩擦。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述微型凸起是實(shí)心部件，在其他實(shí)施方案中，所述微型凸起可以中空的。參見圖12和15，微型凸起優(yōu)選是以行和列的形式均勻地分開的，并且形成陣列，用于在摩擦期間接觸皮膚并且刺入角質(zhì)層。微型凸起改變。通常，成行的微型凸起是分開的，以便提供每亳米(mm)大約2-大約IO個(gè)的密度。一般，行和列是以大體上與所述陣列上的微型凸起的間距相等的距離隔開的，以便提供大約4-大約100個(gè)微型凸起/咖2的密度。在另一種實(shí)施方案中，所述微型凸起可以排列成圓形形狀。在另一種實(shí)施方案中，所述微型凸起可以排列成隨機(jī)形狀。當(dāng)排列成行和列時(shí)，微型凸起的中心之間的距離優(yōu)選至少為微型凸起長度的兩倍。在一種優(yōu)選實(shí)施方案中，微型凸起中心之間的距離是微型凸起長度110ym的兩倍。還包括更寬的間距，高達(dá)3，4，5以及更多種類的微型凸起的長度。另外，如上文所述，微型凸起的形狀可以是這樣的，使得微型凸起的高度可以超過凸起將要進(jìn)入皮膚的深度。截頭錐形或截頭棱錐形微型凸起的扁平的上表面的寬度為大約10-100，優(yōu)選30-70，最優(yōu)選35-50pm。在皮膚上準(zhǔn)備遞送部位的方法包括將微型研磨機(jī)放置在患者皮膚28的需要的部位。將微型研磨機(jī)輕輕地壓在皮膚上，然后在皮膚上移動。微型研磨機(jī)的沖程長度可以根據(jù)遞送部位的需要的尺寸而改變，該尺寸是由需要的遞送的部位決定的。選擇遞送部位的尺寸，以便獲得希望的結(jié)果，并且可以根據(jù)要遞送的物質(zhì)，以及物質(zhì)的形式改變。例如，遞送部位可以覆蓋大的部位，用于治療皮滲或皮膚病。一般，微型研磨機(jī)移動大約2-15厘米(cm)。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，移動微型研磨機(jī)，以便產(chǎn)生表面積為大約4cm2-大約300cm2的摩擦部位。然后將微型研磨機(jī)從皮膚上抬起，以便暴露出研磨部位，并且將合適的遞送器械，骨貼或局部制劑施用在所述摩擦部位。另外，要施用的物質(zhì)可以在摩擦之前或在摩擦的同時(shí)涂在皮膚表面上。對角質(zhì)層的摩擦程度取決于在運(yùn)動期間所施加的壓力和微型研磨機(jī)重復(fù)的次數(shù)。在一種實(shí)施方案中，在第一次通過之后，將微型研磨機(jī)從皮膚上抬起，并且返回到大體上相同的起始位置，并且定位。然后使微型研磨機(jī)沿相同的方向再次運(yùn)動，并且移動相同的距離。在另一種實(shí)施方案中，讓微型研磨機(jī)沿交替的方向反復(fù)通過相同的部位，而在進(jìn)行第一次通過之后不將它從皮膚上抬起。一般，用微型研磨機(jī)進(jìn)行兩次或兩次以上研磨。在其他實(shí)施方案中，微型研磨機(jī)可以僅沿相同的方向來回掃動，以網(wǎng)格狀形式，以圓形形式，或以某些其他形式進(jìn)行掃動，掃動的次數(shù)足以將角質(zhì)層磨損到能增強(qiáng)所需物質(zhì)遞送的合適深度。微型研磨機(jī)通過皮膚28沿一個(gè)方向的線性運(yùn)動，去掉了某些組織，以便形成槽26，這些槽被皮膚28上的峰27分開，大體上與每一行微型凸起相當(dāng)，參見圖16。微型凸起的邊緣20，22和平頭頂端18提供了刮擦或摩擦動作，以便去掉一部分角質(zhì)層，在皮膚上形成槽或皺紋，而不是簡單地切割作用。微型凸起14的平頭頂端18的邊緣刮擦并且去掉槽26底部的某些組織，使得它們保持開放，從而使得所述物質(zhì)進(jìn)入所述槽，以便被身體吸收。優(yōu)選的是，微型凸起14具有足夠的長度，以便刺入角質(zhì)層，并且形成具有足夠深度的槽26，以便可以吸收涂在摩擦部位上的物質(zhì)，而又不會引起患者疼痛或不必要的不適。優(yōu)選的是，槽26不會刺穿，但是可能延伸通過角質(zhì)層。棱錐形微型凸起14的邊緣22形成了從研磨表面支撐裝置12延伸到頂部18的切邊。與研磨表面支撐裝置12相鄰的邊緣22形成了微型凸起之間的刮擦表面，它能刮擦和摩擦由槽26之間的皮膚形成的凸起27。在所述槽之間形成的凸起27—般受到輕微的摩擦。本領(lǐng)域已知的用于摩擦破壞角質(zhì)層的任何器械都可用于本發(fā)明的方法。例如，這些器械包括顯微機(jī)電(MEMS)器械，具有一系列短的微型操作針或微型凸起，砂紙樣器械，和刮刀等。將本發(fā)明的表皮疫苗制劑導(dǎo)入表皮空間的具體方法并不重要，只要它能刺入對象皮膚到達(dá)理想的目標(biāo)深度就行。所討論的微型研磨機(jī)將首先將本發(fā)明的制劑放置到0.0-0.025mm的皮膚深度上，并且優(yōu)選不超過角質(zhì)層。5.8測定疫苗制劑的效力本發(fā)明涉及用于測定皮膚疫苗制劑的方法，可使用本領(lǐng)域所公知的或本文所披露的任何標(biāo)準(zhǔn)方法測定。用于測定本發(fā)明的皮膚疫苗制劑效力的特定方法可以是體外型測定方法或體內(nèi)型測定方法，包括基于動物的測定方法。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及在樣品，例如，定量對本發(fā)明的皮膚疫苗制劑應(yīng)。優(yōu)選的是，將通過本發(fā)明的皮膚疫苗制劑刺激的體液免疫反應(yīng)與從施用了對照制劑的類似對象獲得的對照樣品進(jìn)行比較，所述對照制劑例如，僅舍有抗原性或免疫原性劑。用于測定體液免疫反應(yīng)的測定方法為本領(lǐng)域所公知，例如，參見Coligan等,(eds.)，1997，CurrentProtocolsinImmunology,JohnWiley和Sons,Inc.,Section2.1?？梢杂帽绢I(lǐng)域所公知的標(biāo)準(zhǔn)方法檢測和/或定量體液免疫反應(yīng)，這些方法包括，但不局限于ELISA測定。優(yōu)選的是，體液免疫反應(yīng)是通過檢測和/或定量能專一性原性劑的抗體的量和未處理過的對象體內(nèi)的抗體的量相比來測定的。ELISA測定可用于測定從用本發(fā)明的制劑處理的對象體內(nèi)獲得的樣品的總抗體效價(jià)。在其他實(shí)施方案中，ELISA測定可用于通過本領(lǐng)域所公知的方法測定同種型專一性抗體的含量。ELISA型測定包括制備抗原，用所述抗原對96孔微量滴定板的孔進(jìn)行涂敷，添加對與諸如酶促底物(例如，辣根過氧化酶或堿性磷酸酶)的可檢測化合物綴合的抗原專一的抗體到所述孔中，培養(yǎng)一定的時(shí)間，并且檢測所述抗原的存在。在ELISA測定中，抗體不一定與可檢測化合物綴合；相反，可以將與可檢測化合物綴合的笫二種抗體(它能識別第一種抗體)添加到所述孔中。另外，除了用抗原對所述孔進(jìn)行包衣之外，還可以將抗體涂在所述孔上。在這種場合下，在將感興趣的抗原添加到包衣過的孔中之后，可以添加與可檢測化合物綴合的第二種抗體。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的，可以改變所述參數(shù)，以便增強(qiáng)檢測信號和本領(lǐng)域所公知的ELISAs的其他變量。有關(guān)ELISAs的進(jìn)一步討論，參見，例如，Ausubel等，eds，1994，CurrentProtocolsinMolecularBiology,Vol.1,JohnWiley&Sons,Inc.,NewYorkat11.2.1。在具體實(shí)施方案中，當(dāng)所述疫苗制劑包括流感抗原時(shí)，本領(lǐng)域所公知的用于檢測和/或定量對流感抗原的抗體反應(yīng)的任何方法都屬于本發(fā)明方法的范圍。用于測定流感抗原引起的抗體反應(yīng)的典型方法包括以下步驟將流感抗原用于對微量滴定板(Nunc平板)進(jìn)行包衣；將來自用本發(fā)明的流感疫苗制劑處理過的對象的血清添加到所述平板上；將抗血清添加到平板上，并且培養(yǎng)足夠的時(shí)間，以便形成復(fù)合物，即，血清中的抗體和抗原之間的復(fù)合物。然后用本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)方法檢測所述復(fù)合物。有關(guān)測定流感特異性抗體反應(yīng)的典型測定方法參見，例如，Newman等，1997，Mechanismofaging&Development,93:189-203;Katz等，2000，Vaccine,18:2177-87;Todd等，(BrownandHaaheim編輯)，1998inModulationoftheimmuneresponsetoVaccineAntigens,Dev.Biol.Stand.Basel,Karger，92:341-51;Kendal等,1982，inConceptsandProceduresforLaboratory-basedInfluenzaSurveillance,Atlanta:CDC,B17-35;Rowe等，1999，JClin.Micro.37:937-43;Todd等，1997，Vaccine15:564-70;WHOCollaboratingCentersforReferenceandResearchonInfluenza,inConceptsandProceduresforLaboratory—basedInfluenzaSurveillance,1982，p.B-23;以上所有文獻(xiàn)的內(nèi)容都被全文收作本文參考。在具體實(shí)施方案中，對本發(fā)明的流感疫苗制劑的抗體反應(yīng)包括將流感抗原，例如，來自A/PR8/34菌株的抗原(特別是純化的/失活的甲型流感PR384，濃度為2mg/mL，購自CharlesRiverSPAFAS)作為測試抗原涂敷在微量滴定板(例如，96孔ImmunoPlato,具有MaxiSorpTM表面)。所述包衣溶液優(yōu)選包括3.8pg/mL的流感抗原，它存在于pH9.6的碳酸鹽緩沖液中(SigmaChemicalCompany)。通過在371C下培養(yǎng)大約1小時(shí)讓所述抗原對平板表面進(jìn)行包衣。隨后，用封閉溶液，例如，含有Tween20(PBS-TW20)和5%(w/v)脫脂干奶的磷酸鹽緩沖溶液封閉所述平板。用所述封閉緩沖液在37"C下將所述平板再培養(yǎng)2小時(shí)。然后用PBS-TW20洗滌平板表面至少2次。此時(shí)，分析業(yè)已施用了本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑的對象，例如小鼠的血清樣品。讓一級抗體，例如血清中的抗體在37C下與包衣過的和封閉的平板一起培養(yǎng)1小時(shí)。用PBS-TW20洗滌平板3次，并且添加抗小鼠辣根過氧化酶綴合物的混合物。在37。C下將HRP二級抗體混合物放在所述平板上再培養(yǎng)l小時(shí)。洗滌平板，并且添加TMB底物，以便產(chǎn)生顏色。在黑暗中讓所述顏色顯示30分鐘。通過添加0.5M硫酸終止顏色的顯現(xiàn)。在450nm波長下，在例如TECANSUNRISE平板讀數(shù)儀上對平板進(jìn)行讀數(shù)。在另一種具體實(shí)施方案中，當(dāng)所述疫苗制劑包括流感抗原時(shí)，本領(lǐng)域公知的用于檢測和/或定量具有紅血球凝集活性的抗體水平的任何方法都屬于本發(fā)明的范圍。紅血球凝集抑制測定是基于流感病毒凝聚紅血球的能力，和特異性HA抗體抑制凝聚的能力進(jìn)行的。本領(lǐng)域所公知的紅血球凝聚抑制測定任何方法都屬于本發(fā)明的范圍，如參見Newman等，1997，MechanismofAging&Development,93:189-203;Kendal等，1982，inConceptsandProceduresforLaboratory-basedInfluenzaSurveillance,Atlanta:CDC,B17-35;以上所有文獻(xiàn)的內(nèi)容都被全文收作本文參考。典型的紅血球凝聚抑制測定方法包括以下步驟將來自用本發(fā)明的流感疫苗制劑處理過的對象的血清添加到微量滴定板上；將含有8個(gè)HA單位的HI-抗原性制劑添加到所述平板上；通過輕輕敲打所述平板充分混合所述成分，并且在41C下培養(yǎng)大約1小時(shí)；將紅血球懸浮液，例如，0.5%雞紅血球添加到所述微量滴定板上，并且通過輕輕敲打平板充分混合有關(guān)成分；在4'C下進(jìn)一步培養(yǎng)所述平板，直到細(xì)胞對照(對照含有鹽水和cRBC)表現(xiàn)出正常沉積的扣狀物。優(yōu)選的是，血清樣品用抑制劑，如神經(jīng)氨酸酶或高碘酸鉀處理，以便抑制血清因子的非專一性凝聚抑制作用。HI效價(jià)被確定為最高的稀釋比例，此時(shí)，抑制了紅血球凝聚作用。這一目的是通過傾斜平板，并且觀察以與對照細(xì)胞相同的速度流動的細(xì)胞流的撕裂形狀完成的。5.9預(yù)防性和治療性用途本發(fā)明提供了治療和預(yù)防方法，該方法包括給對象，優(yōu)選哺乳動物，最優(yōu)選人施用本發(fā)明的皮膚疫苗制劑(包括真皮內(nèi)和表皮疫苗制劑)，用于治療，控制或緩解與疾病或失調(diào)，特別是傳染性疾病或癌癥相關(guān)的癥狀。所述對象優(yōu)選是哺乳動物，如非靈長類動物，例如，牛，豬，馬，貓，犬，大鼠，和靈長類動物，例如，猴子，如獼猴和人類。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述對象是人。本發(fā)明涉及用于在對象體內(nèi)免疫和/或引起免疫反應(yīng)的方法，包括將單一劑量的本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑真皮內(nèi)遞送對象，優(yōu)選人體內(nèi)。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一次或多次強(qiáng)化免疫接種。本發(fā)明的用方法的抗體反應(yīng)水平方面特別有效。例如，本發(fā)明的真皮內(nèi)疫苗制劑可以導(dǎo)致抗體反應(yīng)，包括產(chǎn)生一種或多種類型的抗體，如IgM，IgG，和/或IgA。本發(fā)明涉及用于在對象體內(nèi)免疫和/或引起免疫反應(yīng)的方法，包括將一個(gè)劑量的本發(fā)明的表皮疫苗制劑表皮遞送到對象，優(yōu)選人體內(nèi)。最優(yōu)選的是，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑能刺激系統(tǒng)性免疫反應(yīng)，它能使所述對象對至少一種病原體免疫，本發(fā)明的皮膚疫苗制劑可以提供系統(tǒng)性，局部或黏膜或它們的組合的免疫性。5.9.1目標(biāo)疾病本發(fā)明涉及皮膚疫苗遞送系統(tǒng)，包括表皮和真皮內(nèi)遞送系統(tǒng)，用于在對象，優(yōu)選人體內(nèi)治療和/或預(yù)防傳染性疾病。能夠用本發(fā)明的方法治療或預(yù)防的傳染性疾病是由傳染性劑引起的，包括，但不局限于病毒，細(xì)菌，真菌，原生動物，蠕蟲，和寄生蟲。業(yè)已在人體中發(fā)現(xiàn)并且可以通過本發(fā)明的疫苗遞送系統(tǒng)治療的病毒的例子包括，但不局限于逆轉(zhuǎn)錄病毒科(例如，人免疫缺陷病毒，如HIV-1(又被稱作HTLV-III，LAV或HTLV-III/LAV，或HIV-III;以及其他分離物，如HIV-LP);小RNA病毒科(例如，脊髓灰質(zhì)炎病毒，甲型肝炎病毒；腸道病毒，人柯薩奇病毒，鼻病毒，艾柯病毒)；Calciviridae(例如，能導(dǎo)致胃腸炎的菌林)；Togaviridae(例如，馬腦炎病毒，風(fēng)疹病毒)；黃病毒科(例如，登革熱病毒，腦炎病毒，黃熱病病毒；冠狀病毒(例如，冠狀病毒)；棒狀病毒科(例如，水泡性口膜炎病毒，狂犬病病毒)；Filoviridae(例如，埃博拉病毒；副黏病毒(例如，副流感病毒，腮腺炎病毒，麻滲病毒，呼吸道合胞病毒)；正黏病毒科(例如，流感病毒)；Bungaviridae(例如，Hantaanviruses,bungaviruses,phleboviruses和Nairoviruses)jArenaviridae(例如，出血熱病毒)；腸孤病毒科(例如，呼腸孤病毒，環(huán)狀病毒和輪狀病毒)；Birnaviridae;肝病毒科(乙型肝炎病毒)；細(xì)小病毒科(細(xì)小病毒)；Papovaviridae(乳頭瘤病毒，多瘤病毒)；腺病毒科(大部分腺病毒)；皰疹病毒科(單純皰疹病毒(HSV)1和2，7jc痘帶狀皰滲病毒，巨細(xì)胞病毒(CMV)，皰滲病毒；Poxviridae(天花病毒，牛痘病毒，痘病毒)；和Iridoviridae(例如，非洲豬瘟病毒)；和非典型病毒(例如，海綿狀腦炎的病原劑，5肝炎的病原劑(它被認(rèn)為是乙型肝炎病毒的缺陷型衛(wèi)星)。非甲，非乙肝炎的病原劑(l型-內(nèi)部傳播的；2型-腸胃外傳播的，例如，丙型肝炎)；諾沃克及相關(guān)病毒，和astroviruses。在動物和人體內(nèi)導(dǎo)致傳染性疾病，并且可以用本發(fā)明的遞送系統(tǒng)和方法治療和/或預(yù)防的逆轉(zhuǎn)錄病毒包括簡單的逆轉(zhuǎn)錄病毒和復(fù)雜的逆轉(zhuǎn)錄病毒。簡單的逆轉(zhuǎn)錄病毒包括B-型逆轉(zhuǎn)錄病毒，C-型逆轉(zhuǎn)錄病毒和D-型逆轉(zhuǎn)錄病毒的亞型。B-型逆轉(zhuǎn)錄病毒的例子是小鼠乳腺瘤病毒(醒TV)。C-型逆轉(zhuǎn)錄病毒包括亞型C-型A類(包括勞氏肉瘤病毒(RSV)，禽類白血病病毒(ALV)，和禽類成髓細(xì)胞瘤病毒(AMV))和C-型B類(包括鼠白牟病病毒(MLV)，貓白血病病毒(FeLV)，鼠肉瘤病毒(MSV)，長臂猿白血病病毒(GALV)，脾壞死病毒(SNV),網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病毒(RV)和猿肉瘤病毒(SSV))。D-型逆轉(zhuǎn)錄病毒包括梅-帕猴病毒(MPMV)和猿逆轉(zhuǎn)錄病毒l型(SRV-1)。復(fù)雜的逆轉(zhuǎn)錄病毒包括'隄病毒，T-細(xì)胞白血病病毒和泡沫病毒。'隄病毒包括HIV-1，不過還包括HIV-2,SIV，綿羊髓鞘脫落病毒，貓免疫缺陷病毒(FIV),和馬傳染性貧血病毒(EIAV)。T-細(xì)胞白血病病毒包括HTLV-1，HTLV-II，猿T-細(xì)胞白血病病毒(STLV)，和牛白血病病毒(BLV)。泡沫病毒包括人泡沫病毒(HFV)，猿泡沫病毒(SFV)和牛泡沫病毒(BFV)。作為脊推動物抗原的RNA病毒的例子包括，但不局限于以下抗原呼腸孤病毒科的成員，包括正呼腸孤病毒屬(哺乳動物和禽逆轉(zhuǎn)錄病毒的多種血清型)，環(huán)狀病毒屬(藍(lán)舌病病毒，Eugenangee病毒，克米羅沃病毒，非洲馬痙病毒，和科洛拉多蜱傳熱病毒)，輪狀病毒屬(人輪狀病毒，內(nèi)布拉斯加牛腹瀉病毒，鼠輪狀病毒，猿輪狀病毒，?；蚓d羊輪狀病毒，禽輪狀病毒)；小RM病毒科，包括腸道病毒屬(脊髓灰質(zhì)炎病毒，柯薩奇病毒A和B，entericcytopathichumanorphan(ECHO)病毒，甲型肝炎病毒，猿腸道病毒，鼠腦脊髓炎(ME)病毒，脊髄灰質(zhì)炎病毒muris，牛腸道病毒，豬腸道病毒，Cardiovirus屬(腦心肌炎病毒(EMC)，門戈病毒)，鼻病毒屬(人鼻病毒包括至少113種亞型；其他鼻病毒)，Apthovirus屬(口蹄疫(FMDV);Calciviridae科，包括豬病毒7jc泡滲，SanMiguel海獅病毒，貓小RNA病毒和Norwalk病毒.'Togaviridae科，包括A病毒屬(東方馬腦炎病毒，Semliki森林病毒，辛德畢斯病毒，切昆貢亞熱病毒，(TNyong-Nyong病毒，羅斯河病毒，委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒，西方馬腦炎病毒)，黃病毒屬(蚊子傳播黃熱病病毒，登革熱病毒，日本腦炎病毒，St.Louis腦炎病毒,MurrayValley腦炎病毒,西尼羅河病毒，庫寧病毒，中歐蜱傳播病毒，遠(yuǎn)東蜱傳播病毒，科薩努爾森林病毒，跳躍病病毒，Powassan病毒,鄂木斯克出血熱病毒)，Rubivirus屬(風(fēng)滲病毒)，Pestivirus屬(粘膜病病毒，豬霍亂病毒，邊界病病毒)；Bunyaviridae科，包括Bunyvirus屬(Bunyamwera和相關(guān)病毒，加利福尼亞腦炎型病毒)，Phlebovirus屬(白蛉熱西西里病毒，裂谷熱病毒)，Nairovirus屬(克里米出血熱病毒，內(nèi)羅畢綿羊病病毒)，和Uukuvirus屬(Uukuniemi和相關(guān)病毒)；正粘病毒科，包括流感病毒屬(甲型流感病毒，很多人類亞型)；豬流感病毒，和禽及馬流感病毒；乙型流感(很多人類亞型)，和丙型流感(可能的獨(dú)立的屬)；副粘病毒科，包括副粘病毒屬(副流感病毒1型，仙臺病毒，血細(xì)胞吸附病毒，副流感病毒2-5,新城雞痙病毒，腮腺炎病毒)，麻滲病毒屬(麻滲病毒，亞急性硬化泛腦炎病毒，瘟熱病毒，牛痘病毒)，肺炎病毒屬(呼吸道合胞病毒(RSV)，牛呼吸道合胞病毒和小鼠肺炎病毒)；森林病毒，辛德畢斯病毒，切昆貢亞熱病毒，0'Nyong-Nyong病毒，羅斯河病毒，委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒，西方馬腦炎病毒)，黃病毒屬(蚊子傳播黃熱病病毒，登革熱病毒，日本腦炎病毒，St.Louis腦炎病毒，MurrayValley腦炎病毒，西尼羅河病毒，庫寧病毒，中歐蜱傳播病毒，遠(yuǎn)東蜱傳播病毒，Kyasanur森林病毒，迢匕躍病病毒，Powassan病毒，鄂木斯克出血熱病毒)，風(fēng)滲病屬(風(fēng)滲病毒)，Pestivirus屬(粘膜病病毒，豬霍亂病毒，邊界病病毒)；Bunyaviridae科，包括Bunyvirus屬(Bunyamwera和相關(guān)病毒，加利福尼亞腦炎型病毒)，Phlebovirus屬(白蛉熱西西里病毒，裂谷熱病毒)，Nairovirus屬(克里米出血熱病毒，內(nèi)羅畢綿羊病病毒)，和Uukuvirus屬(Uukuniemi和相關(guān)病毒)；正粘病毒科，包括流感病毒屬(甲型流感病毒，很多人類亞型)；豬流感病毒，和禽及馬流感病毒；乙型流感(很多人類亞型)，和丙型流感(可能的獨(dú)立的屬)；副粘病毒科，包括副粘病毒屬(副流感病毒1型，仙臺病毒，血細(xì)胞吸附病毒，副流感病毒2-5，新城雞瘕病毒，腮腺炎病毒)，麻滲病毒屬(麻滲病毒，亞急性硬化泛腦炎病毒，痙熱病毒，牛痙病毒)，肺炎病毒屬(呼吸道合胞病毒(RSV)，牛呼吸道合胞病毒和小鼠肺炎病毒)；棒狀病毒科，Vesiculovirus屬(VSV)，錢迪普拉病毒，F(xiàn)landers-HartPark病毒)，狂犬病病毒屬(狂犬病病毒)，魚棒狀病毒，和兩種可能的棒狀病毒(馬爾堡病毒和埃博拉病毒)；沙粒病毒科，包括淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(LCM),Tacaribe病毒復(fù)合物，和拉沙病毒；Coronoaviridae科，包括傳染性支氣管炎病毒(IBV)，小鼠肝炎病毒，人腸冠狀病毒，和貓傳染性腹膜炎(貓冠狀病毒)。具有脊推動物抗原的典型RNA病毒包括，但不局限于痘病毒科，正痘病毒屬(重型天花，類天花，猴痘，牛痘，水牛痘，野兔痘，缺肢畸形)，Leporipoxvirus屬(粘液瘤，纖維瘤)，麻雀痘病毒屬(鳥痘，其他禽痘病毒)，Capripoxvirus屬(綿羊痘，山羊痘)，Suipoxvirus屬(豬痘)，副痘病毒屬(傳染性postular皮炎病毒，假牛痘，牛丘滲性口內(nèi)炎病毒)；Iridoviridae科(非洲豬瘟病毒，青蛙病毒2和3，魚的Lymphocystis病毒)；皰滲病毒科，包括ot-皰滲病毒(單純皰滲1和2型，水痘帶狀皰疹，馬流產(chǎn)病毒，馬皰滲病毒2和3，假狂犬病毒，傳染性牛角膜結(jié)膜炎病毒，傳染性牛鼻氣管炎病毒，貓鼻氣管炎病毒，傳染性喉氣管炎病毒)，B-皰疹病毒(人巨細(xì)胞病毒和嚙齒類動物的巨細(xì)胞病毒)；Y-皰滲病毒(愛波斯坦-巴爾病毒(EBV)，馬立克氏病病毒，Herpessaimiri，Herpesvirusateles，Herpesvirussylvilagus，豚鼠皰滲病毒，Lucke肺瘤病毒)；腺病毒科，包括乳腺病毒屬(人類亞型A，B，C，D,E和未分類的；猿腺病毒(至少23種血清型)，傳染性犬肝炎，和牛，豬，綿羊，青蛙和很多其他物種的腺病毒，禽腺病毒屬(禽腺病毒)；和不可培養(yǎng)的腺病毒；Papoviridae科，包括乳頭瘤病毒屬(人乳頭瘤病毒，牛乳頭瘤病毒，Shope兔乳頭瘤病毒，和其他物種的多種致病性乳頭瘤病毒)，多瘤病毒屬(多瘤病毒，猿成空泡劑(SV-40)，兔成空泡劑(RKV)，K病毒，BK病毒，JC病毒，和其他靈長類多瘤病毒，如嗜淋巴乳頭瘤病毒)；細(xì)小病毒科，包括腺相關(guān)病毒屬，細(xì)小病毒屬(貓全白細(xì)胞減少病毒，牛細(xì)小病毒，犬細(xì)小病毒，阿留申貂病病毒等)。最后，DNA病毒可以包括不屬于上述科的病毒，如苦魯病和克雅氏病病毒，以及慢性傳染性神經(jīng)致病劑?？梢杂帽景l(fā)明的方法治療或預(yù)防的細(xì)菌感染或疾病是由以下細(xì)菌引起的包括，但不局限于在它的生命周期中具有細(xì)胞內(nèi)階段的細(xì)菌，如分枝桿菌屬(例如，結(jié)核分枝桿菌，M.bovis，M.avium,M.leprae,或M.africanum)，立克次氏體,支原體，衣原體，和legionella。所涉及的細(xì)菌感染的其他例子包括，但不局限于由革蘭氏陽性桿菌屬導(dǎo)致的感染(例如，李斯特氏菌，芽孢桿菌屬，如炭疽桿菌，丹毒絲菌)，革蘭氏陰性桿菌屬(例如，巴爾通氏體，布魯氏菌，Campylobacter，腸細(xì)菌，埃希氏菌，弗朗西斯氏菌，嗜血桿菌，克雷伯氏菌，Morganella，變形桿菌，Providencia，假單胞菌，沙門氏菌，沙雷氏菌，志賀氏菌，弧菌，和耶爾森氏菌)，螺旋菌(例如，包柔氏螺旋體菌，包括Borreliaburgdorferi,它能導(dǎo)致萊姆病)，厭氧細(xì)菌(例如，放線菌和梭菌)，革蘭氏陽性和陰性球菌，腸球菌，鏈球菌，肺炎球菌，葡萄球菌，奈瑟氏菌。傳染性細(xì)菌的具體例子包括，但不局限于幽門螺桿菌，Boreliaburgdorferi,Legionellapneumophi1ia,結(jié)核分枝桿菌，M.avium,M.intracelare，M.kansaii，M.gordonae，金黃色葡萄球菌，淋病奈瑟氏菌，奈瑟氏腦膜炎菌，單細(xì)胞李斯特氏菌，釀膿鏈球菌(A型鏈球菌)，無乳鏈球菌(B型鏈球菌)，綠色鏈球菌，糞鏈球菌，Streptococcusbovis，肺炎鏈球菌，流感嗜血桿菌，炭疽桿菌,白喉?xiàng)U菌，rhusiopathiae丹毒絲菌，perfringers梭菌，破傷風(fēng)桿菌，產(chǎn)氣腸細(xì)菌，肺炎克雷伯氏菌，Pasturellamultocida，F(xiàn)usobacteriumnucleatum,念珠狀鏈桿菌，蒼白密螺旋體，細(xì)弱密螺旋體，鉤端螺旋體，立克次氏體，和以色列放線菌?？梢酝ㄟ^本發(fā)明的方法治療或預(yù)防的真菌疾病包括，但不局限于曲霉病，隱球菌病，孢子絲菌病，球孢子菌病，副球孢子菌病，組織胞漿菌病，芽生菌病，接合菌病，和念珠菌病?？梢酝ㄟ^本發(fā)明的方法治療或預(yù)防的寄生蟲病包括，但不局限于，阿米巴病，癡疾，利什曼原蟲，球蟲目，賈第蟲病，似隱孢菌病，弓形體病，和錐蟲病。還包括由各種蠕蟲引起的感染，例如，但不局限于鮰蟲病，鉤蟲病，鞭蟲病，類圓線蟲病，toxoccariasis，旋毛蟲病,盤尾絲蟲病。絲蟲和惡絲蟲病。還涉及由各種吸蟲引起的感染，例如，但不局限于血吸蟲病，肺吸蟲病，和支睪吸蟲病。導(dǎo)致上述疾病的寄生蟲可以根據(jù)它們是在細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外進(jìn)行分類。在本文中，"細(xì)胞內(nèi)寄生蟲"是它的整個(gè)周期都在細(xì)胞內(nèi)的寄生蟲。人類細(xì)胞內(nèi)寄生蟲的例子包括利什曼原蟲，瘧原蟲，克氏錐蟲，鼠弓形體，巴貝西蟲，和旋毛蟲。在本文中，"細(xì)胞外寄生蟲"是它的整個(gè)生命周期都在細(xì)胞外的寄生蟲。能夠感染人體的細(xì)胞外寄生蟲包括痢疾內(nèi)變形蟲，蘭伯氏賈第蟲，Enterocytozoonbieneusi，Naegleria和Acanthamoeba以及大部分蠕蟲。另一種類型的寄生蟲被確定為主要是細(xì)胞外的，但是在它們生命周期的關(guān)鍵階段具有專性的細(xì)胞內(nèi)存在。這種寄生蟲在本文中被稱作"專性的細(xì)胞內(nèi)寄生蟲"。這些寄生蟲的大部分生命或作為小部分的生命是在細(xì)胞外環(huán)境中度過的，不過，在它們的生命周期中都具有至少一個(gè)專性的細(xì)胞內(nèi)階段。后一種類型的寄生蟲包括Trypanosomrhodesiense和Trypanosomagambiense，Isosporaspp.，Cryptosporidiumspp，艾美蟲，Neosporaspp.，肉孢子蟲，和裂體吸蟲。本發(fā)明還涉及治療和/或預(yù)防癌癥的真皮疫苗制劑，包括，但不局限于新生瘤，肺瘤，轉(zhuǎn)移瘤，或以不受控制的細(xì)胞生長為特征的任何疾病或失調(diào)。例如，但不局限于與上面所列舉的癌和腫瘤抗原相關(guān)的癌和胂瘤，可以用本發(fā)明的皮膚疫苗制劑治療和/或預(yù)防。6.實(shí)施例6.1制備普盧蘭尼克S和/或粘膜附著性物質(zhì)的母液，并且測定它們的膠凝特性普盧蘭尼克F127:普盧蘭尼克F127(本文稱之為F127)是從BASFCorporationMountOlive,NJ.購買的。在初步實(shí)驗(yàn)中，20%(w/v)的F127在37X:下形成凝膠。因此，將足夠的F127放入weighboat中，以便制備2(^(w/v)母液。將無菌的并且含有少量內(nèi)毒素的組織培養(yǎng)級水用于水合F127。在水上攪拌該混合物，直到溶液澄清，并且用稀鹽7jc將pH調(diào)整到7.2，然后通過0.2M瓜的GelmanAcrodiscPFSyringeFilter#4187過濾。將該溶液放入37C的水浴中，在這里，所述溶液馬上形成凝膠。普盧蘭尼克F127和生物附著性物質(zhì)提供了含有F127(大約10%w/v)和粘膜附著性物質(zhì)的透明溶液(pH7.2)。然后通過O.2jamGelmanAcrodiscPFSyringeFilter#4187對該溶液進(jìn)行過濾。將該溶液放入37X:的水浴中，在這里所述溶液顯著變稠，通過肉眼可以，見察到。明股明股來自牛皮(SigmaChemicalCompany,CatalogG9391)并且含有少量內(nèi)毒素。將足夠的明膠粉末分配到weighboat中，以便用組織培養(yǎng)級水制備O.5%(w/v)母液；將pH調(diào)整到7.2，并且通過0.2pmGelmanAcrodiscPFSyringeFilter#4187進(jìn)行滅菌過濾。甲基纖維素曱基纖維素是從SigmaChemicalCompany購買的，CatalognumberM—0555。將足夠的粉末分酉己至!]weighboat中，以<更在組織培養(yǎng)級水中制備l.375%(w/v)的母液；將pH調(diào)整到7.2，并且通過0.2ymGelmanAcrodiscPFSyringeFilter#4187進(jìn)行滅菌過濾。普盧蘭尼克F127和羧曱基纖維素羧曱基纖維素是從SigmaChemicalCompany購買的(CatC—9481)。用纟且織培養(yǎng)級水制備2.5%(w/v)的溶液；將pH調(diào)整到7.2，并且通過0.2jamGelmanAcrodiscPFSyringeFilter#4187進(jìn)行滅菌過濾。用組織培養(yǎng)級水制備20%w/v的F127溶液；并且與羧甲基纖維素溶液混合；在冰上攪拌該混合物，直到溶液澄清，將pH調(diào)整到7.2,并且通過O.2nmGelmanAcrodiscPFSyringeFilter#4187進(jìn)行滅菌過濾。6.2制備流感病毒疫苗接種物用于初步篩選普盧蘭尼克F127:在免疫之前大約1小時(shí)，將以下成分分配到Nunc小瓶中進(jìn)行混合125卩L的流感病毒疫苗和在6.1節(jié)中制備的375nL的F127母液。F127在用于免疫的溶液(接種物)中的最終濃度為大約15%。所述接種物在放入371C的水浴時(shí)很容易變稠，不過，它不會形成明膠。每一只動物接受lOOja1的接種物，即接受l/10th的人類小兒劑量。普盧蘭尼克F127和生物附著性物質(zhì)在免疫之前大約1小時(shí)，將以下成分分配到Nunc小瓶中進(jìn)行混合125juL的流感病毒疫苗和375|uL按6.1節(jié)所述制備的母液。F127/粘膜附著性物質(zhì)在用于免疫的溶液(接種物)的濃度為由買主收到的原始母液的大約75%(v/v)。所述接種物在放入37C的水浴時(shí)很容易變稠，不過它不會形成明膠。每一只動物接收100pl的接種物，即接受l/10'h的人類小兒劑量。明膠在免疫之前大約1小時(shí)，將以下成分分配到Nunc小瓶中進(jìn)行混合125nL的流感病毒疫苗和50pL的按6.1節(jié)所述制備的母液和325mL的無菌Hanks緩沖鹽溶液。最終的接種物為大約0.0625%w/v明膠，以便流感病毒疫苗成分占0.0125%(w/v)，而Sigma明膠添加劑為0.05%w/v。每一只動物接收100nl的接種物，即便接受l/10th的人類小兒劑量。曱基纖維素在免疫之前大約1小時(shí)，將以下成分分配到Nunc小瓶中進(jìn)行混合175jjL的流感病毒疫苗和280jiL按6.1節(jié)所述制備的母液，和245juL的無菌Hanks緩沖鹽溶液。最終的接種物為大約0.55%w/v甲基纖維素。每一只動物接受100pi的接種物，即接受l/10th的人類小兒劑量。普盧蘭尼克F127和羧曱基纖維素在免疫之前大約l小時(shí)，將以下成分分配到Nunc小瓶中進(jìn)行混合175u1的流感病毒疫苗和262.5jiL的按6.1.1節(jié)所述制備的F127母液，和262.5jjL按6.1節(jié)所述制備的羧甲基纖維素母液。最終的接種物為大約7.5%w/vF127和0.9°/。w/v羧曱基纖維素。每一只動物接受lOOnl的接種物，即接受l/10th的人類小兒劑量。對照制劑對照流感病毒疫苗制劑包括存在于375jiL的無菌Hanks緩沖鹽溶液中的125nL的流感病毒疫苗。6.2.1制備用于測定終點(diǎn)效價(jià)的流感病毒疫苗接種物曱基纖維素在免疫之前大約1小時(shí)，將以下成分分配到Nunc小瓶中進(jìn)行混合175nL的流感病毒疫苗和來自甲基纖維素母液的一定體積，以便使最終濃度為0.18%w/v甲基纖維素。每一只動物接受100jLil的接種物，即接受l/10th的人類小兒的流感病毒疫苗劑量。6.2.2制備用于DRAIZE評分的流感病毒疫苗接種物曱基纖維素制備1ml的接種物，以便流感病毒疫苗成分占體積的50%，并且最終接種物濃度為0.18%w/v曱基纖維素。約克郡豬接受3個(gè)獨(dú)立的200yl的流感病毒疫苗-甲基纖維素接種物的水泡。6.3給小鼠真皮內(nèi)施用流感病毒疫苗接種物用真皮內(nèi)Mantoux方法將上文所述和所制備的流感病毒疫苗制劑遞送到Balb/c小鼠的真皮內(nèi)區(qū)室。所使用的Balb/c小鼠為4-8周大，并且是從CharlesRiver實(shí)驗(yàn)室獲得的。所述接種物制備在制備之后1小時(shí)內(nèi)施用。所述接種物制劑在每一種場合下用20號針吸入到lmL的無乳膠注射器中。在裝載注射器之后，換上30號針，以便進(jìn)行真皮內(nèi)施用。小鼠皮膚以盡可能小的角度接近，使針的斜面朝上，并且將皮膚拉緊。然后用5-10秒時(shí)間緩慢推壓注射體積，以便形成典型的"水泡"，并且隨后將針緩慢取出。只使用了一個(gè)注射部位。注射體積不超過IOOmL，這在某種程度上是由于以下事實(shí)較大的注射體積可能增加溢出到周圍的組織空間中，例如，皮下空間的風(fēng)險(xiǎn)。將小鼠背部的下部至中部用于注射。在注射之前用Conair電動剃須刀對小鼠進(jìn)行干燥脫毛。在接受流感病毒疫苗注射之前大約15分鐘，每只小鼠接受真皮內(nèi)注射的克他命/曱苯噻嗪/乙酰丙嗪混合物用以鎮(zhèn)靜。在施用之后馬上，施用之后24小時(shí)，以及施用之后3周監(jiān)測動物的局部和系統(tǒng)性中毒癥狀。用上述任意一種制劑都沒有發(fā)現(xiàn)局部或系統(tǒng)中毒的癥狀。6.4給豬真皮內(nèi)施用流感病毒疫苗接種物約克郡豬是從Archer農(nóng)場獲得的，體重為20-30千克。用異氟烷對約克郡豬進(jìn)行麻醉，以便完成所述方法。在給藥之前對注射部位進(jìn)行干燥脫毛并且清洗。每只動物接受3次重復(fù)的給藥，使用31號x1.5mm的空心針。6.5測定流感病毒疫苗效力為了測定對按上述方法制備的流感病毒疫苗制劑的抗體反應(yīng)，使用了以下ELISA測定。將存在于pH9.6的碳酸鹽緩沖液(購自Sig邁aChemicalCompany)中的濃度為2mg/mL的曱型流感PR384純化的/失活的抗原(來自CharlesRiverSPAFAS)用作測試抗原。用所述測試抗原涂敷微量滴定板(96—孑LImmunoPlate,具有MaxiSorp表面)。通過在37t:下培養(yǎng)大約1小時(shí)，用所述抗原對所述平板的表面進(jìn)行包衣。然后，用封閉溶液，含有Tween20(PBS-TW20)和5%(w/v)脫脂干奶的磷酸緩沖的鹽溶液封閉所述平板。在37T下用封閉緩沖液再培養(yǎng)所述平板2小時(shí)。然后用PBS-TW20洗滌平板表面兩次。合并來自測試或?qū)φ战M的每只小鼠的血清，并且以1:123和1:370的稀釋比例測定合并的血清。在37C下用一級抗體與包衣的和封閉的平板一起培養(yǎng)1小時(shí)。用PBS-TW20洗滌平板3次，并且添加抗小鼠辣根過氧化酶綴合物的混合物。HRP綴合物庫包括5種綴合物SigmaA4416,SouthernBiotech1090-05，SouthernBiotech1070-05，SouthernBiotech1080-05和SouthernBiotech1100-05。所有綴合物都以1:15，000的稀釋比例存在于最終混合物中。在37n下讓HRP二級抗體混合物在所述平板上再培養(yǎng)1小時(shí)。洗滌所述平板，并且添加TMB底物，以便顯色，讓顏色在黑暗中顯現(xiàn)30分鐘。通過添加0.5M硫酸終止顯色。在450nm波長下對平板進(jìn)行讀數(shù)，使用TECANSUNRISE平板讀數(shù)儀。用于測定終點(diǎn)效價(jià)的ELISA是以與上文所述相同的方式進(jìn)行的，不過采用了更多的稀釋比例(1:100，1:200，1:400，1:800,1:1600，1:3200，1:6400)。在圖6中作圖的效價(jià)值是通過發(fā)現(xiàn)內(nèi)插數(shù)據(jù)曲線與3x的非免疫值的內(nèi)插曲線的交點(diǎn)測定的。結(jié)果圖1-5表示用流感病毒疫苗對小鼠進(jìn)行免疫之后對上述各種流感病毒疫苗制劑的血清抗體反應(yīng)。血清是在免疫之后20-22天之內(nèi)獲得的。在每一種場合下，通過上述ELISA測定在1:123的稀釋比例下對甲型流感抗原的血清反應(yīng)。參見圖1-5，含有普盧蘭尼克F127,明膠，甲基纖維素和羧甲基纖維素與F127組合的流感病毒疫苗制劑，導(dǎo)致了與單獨(dú)使用流感病毒疫苗相比抗體血清反應(yīng)的增強(qiáng)。最重要的是，用上述接種物制劑增強(qiáng)的抗體反應(yīng)與真皮內(nèi)區(qū)室兼容，因?yàn)橛蒙鲜鋈我恢苿┒紱]有觀察到陰性皮膚結(jié)果。另外，用于本發(fā)明的真皮內(nèi)流感疫苗制劑的分子業(yè)已被批準(zhǔn)臨床使用，例如，甲基纖維素和普盧蘭尼克F127,表明所述疫苗制劑可用于人體。圖6表示在用流感病毒疫苗對小鼠免疫之后上述各種流感病毒疫苗制劑的血清抗體反應(yīng)。其中，在圖1-5中所示出的數(shù)據(jù)是通過分析來自特定測試或?qū)φ战M的動物的血清庫得到的。圖6的數(shù)據(jù)提供了單個(gè)動物反應(yīng)。P-值小于0.05表明接受甲基纖維素補(bǔ)充的流感病毒疫苗的動物的群體平均效價(jià)的顯著改變。圖7表示包括甲基纖維素和甲基纖維素與流感病毒疫苗的接種物與真皮組織兼容，這是在給藥之后l小時(shí)，6小時(shí)和24小時(shí)對施用部位進(jìn)行監(jiān)測的結(jié)果。本文所披露并且要求保護(hù)的發(fā)明并不局限于由本文所披露的具體實(shí)施方案所限定的范圍，因?yàn)檫@些實(shí)施方案是用于說明本發(fā)明的若干方面的。任何等同的實(shí)施方案都被認(rèn)為屬于本發(fā)明的范圍。實(shí)際上，除了本文所示出的和所披露的之外，對本發(fā)明的各種改進(jìn)對閱讀以上說明的本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的。這種改進(jìn)同樣被認(rèn)為屬于所述權(quán)利要求書的范圍。在本申請中，引用了不同的文獻(xiàn)。這些文獻(xiàn)的內(nèi)容被以全文形式出于各種目的收作本申請的參考。權(quán)利要求1.一種用于施用到對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室的真皮內(nèi)疫苗制劑，包括抗原性或免疫原性劑和一種分子，其中，所述分子能增強(qiáng)免疫反應(yīng)。2.—種用于施用到對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室的真皮內(nèi)疫苗制劑，包括抗原性或免疫原性劑、膠凝劑和粘膜附著性分子，其中，所述免疫反應(yīng)被增強(qiáng)了。3.—種用于施用到對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室的真皮內(nèi)疫苗制劑，包括抗原性或免疫原性劑、膠凝劑和生物附著性分子，其中，所述免疫反應(yīng)被增強(qiáng)了。4.如權(quán)利要求1-3中任意一項(xiàng)的真皮內(nèi)疫苗制劑，其中，所述制劑不是脂質(zhì)體或膠束。5.如權(quán)利要求2的真皮內(nèi)疫苗制劑，其中，所述膠凝劑是普盧蘭尼克F127，而所述粘膜附著性分子是羧甲基纖維素。6.如權(quán)利要求3的真皮內(nèi)疫苗制劑，其中，所述膠凝劑是普盧蘭尼克F127，而所述生物附著性分子是羧甲基纖維素。7.—種真皮內(nèi)疫苗制劑，包括抗原性或免疫原性劑和膠凝劑。8.如權(quán)利要求7的真皮內(nèi)疫苗制劑，其中，所述膠凝劑是發(fā)生熱誘導(dǎo)的物理轉(zhuǎn)變的聚合物，其在所述制劑的溫度提高到超過由第一溫度和第二溫度組成的溫度范圍時(shí)，從液體轉(zhuǎn)變成凝膠。9.如權(quán)利要求8的真皮內(nèi)疫苗制劑，其中，所述物理轉(zhuǎn)變不包括脂質(zhì)體或膠束。10.如權(quán)利要求8的真皮內(nèi)疫苗制劑，其中，所述第一溫度為1-20而所述第二溫度為25-37X:。11.如權(quán)利要求8的真皮內(nèi)疫苗制劑，其中，所述從液體到凝膠的物理轉(zhuǎn)變是在生理溫度下逸行的。12.如權(quán)利要求11的真皮內(nèi)疫苗制劑，其中，所述生理溫度低于40°C。13.如權(quán)利要求8的真皮內(nèi)疫苗制劑，其中，所述聚合物是聚氧化烯嵌段共聚物。14.如權(quán)利要求13的真皮內(nèi)疫苗制劑，其中，所述聚氧化烯嵌段共聚物包括第一種聚氧化烯的至少一個(gè)嵌段和第二種聚氧化烯的至少一個(gè)嵌段。15.如權(quán)利要求14的真皮內(nèi)疫苗制劑，其中，所述第一種聚氧化烯是聚氧化乙烯，而第二種聚氧化烯是聚氧化丙烯。16.如權(quán)利要求8的真皮內(nèi)疫苗制劑，其中，所述聚合物選自下列一組普盧蘭尼克F127，普盧蘭尼克F68,普盧蘭尼克F108，普盧蘭尼克F87，普盧蘭尼克L81,普盧蘭尼克L92，普盧蘭尼克LlOl，普盧蘭尼克L121，普盧蘭尼克L122，普盧蘭尼克L141，PlurinicL180，和普盧蘭尼克L185。17.如權(quán)利要求1-3中任意一項(xiàng)的真皮內(nèi)疫苗制劑，其中，所述抗原性或免疫原性劑是來自動物、植物、細(xì)菌、原生動物、寄生蟲、病毒或它們的組合的抗原。，18.如權(quán)利要求1-3中任意一項(xiàng)的真皮內(nèi)疫苗制劑，其中，所述抗原性或免疫原性劑是胂瘤特異性抗原。19.如權(quán)利要求l-3中任意一項(xiàng)的真皮內(nèi)疫苗制劑，其中，所述所述制劑包括至少兩種抗原性或免疫原性劑。20.—種用于施用到對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室的真皮內(nèi)疫苗制劑，包括抗原性或免疫原性劑和粘膜附著性物質(zhì)。21.—種用于施用到對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室的真皮內(nèi)疫苗制劑，包括抗原性或免疫原性劑和生物附著性物質(zhì)。22.如權(quán)利要求20的真皮內(nèi)疫苗制劑，其中，所述粘膜附著性物質(zhì)選自下列一組聚卡波非、carobopol、卡波姆、殼聚糖、外源凝集素、甲基纖維素、羧曱基纖維素、藻酸鈉、明膠、果膠、阿拉伯膠和聚維酮。23.如權(quán)利要求21的真皮內(nèi)疫苗制劑，其中，所述生物附著性物質(zhì)選自下列一組聚卡波非、carobopol、卡波姆、殼聚糖、外源凝集素、甲基纖維素、羧曱基纖維素、藻酸鈉、明膠、果膠、阿拉伯膠和聚維酮。24.如權(quán)利要求1-3中任意一項(xiàng)的真皮內(nèi)疫苗制劑，還包括至少一種添加劑。25.如權(quán)利要求24的真皮內(nèi)疫苗制劑，其中，所述添加劑選自下列一組佐劑、賦形劑、雖定劑、滲透促進(jìn)劑、粘膜附著性分子和生物附著性分子。26.如權(quán)利要求25的真皮內(nèi)疫苗制劑，其中，所述佐劑是選自下列一組的佐劑單磷酸類脂A(MPL);包括CpG基序的寡核苷酸、DDA、細(xì)胞因子、皂苷、熱休克蛋白、MF-59、明礬鹽和磷酸鈣。27.—種用于施用到對象皮膚的皮膚區(qū)室的皮膚疫苗制劑，包括抗原性或免疫原性劑和一種分子，其中，所述分子能增強(qiáng)所述免疫反應(yīng)。28.—種用于施用到對象皮膚的皮膚區(qū)室的皮膚疫苗制劑，包括抗原性或免疫原性劑、膠凝劑和粘膜附著性分子，其中，所述免疫反應(yīng)被增強(qiáng)了。29.—種用于施用到對象皮膚的皮膚區(qū)室的皮膚疫苗制劑，包括抗原性或免疫原性劑、膠凝劑和生物附著性分子，其中，所述免疫反應(yīng)被增強(qiáng)了。30.如權(quán)利要求27-29中任意一項(xiàng)的皮膚疫苗制劑，其中，所述制劑不是脂質(zhì)體或膠束。31.如權(quán)利要求29的皮膚疫苗制劑，其中，所述膠凝劑是普盧蘭尼克F127，而所述粘膜附著性分子是羧甲基纖維素。32.如權(quán)利要求29的皮膚疫苗制劑，其中，所述膠凝劑是普盧蘭尼克F127,而所述生物附著性分子是羧甲基纖維素。33.包括抗原性或免疫原性劑和膠凝劑的皮膚疫苗制劑。34.如權(quán)利要求33的皮膚疫苗制劑，其中，所述膠凝劑是發(fā)生熱誘導(dǎo)的物理轉(zhuǎn)變的聚合物，當(dāng)所述制劑的溫度提高到超過由第一溫度和第二溫度組成的溫度范圍時(shí)，它從液體轉(zhuǎn)變成凝膠。35.如權(quán)利要求34的皮膚疫苗制劑，其中，所述物理轉(zhuǎn)變不包括脂質(zhì)體或膠束。36.如權(quán)利要求34的皮膚疫苗制劑，其中，所述第一溫度為1-20'C，而所述笫二溫度為25-37匸。37.如權(quán)利要求34的皮膚疫苗制劑，其中，所述從液體到凝膠的物理轉(zhuǎn)變是在生理溫度下進(jìn)行的。38.如權(quán)利要求34的皮膚疫苗制劑，其中，所述生理溫度低于40r。39.如權(quán)利要求34的皮膚疫苗制劑，其中，所述聚合物是聚氧化烯嵌段共聚物。40.如權(quán)利要求39的皮膚疫苗制劑，其中，所述聚氧化烯嵌段共聚物包括第一種聚氧化烯的至少一個(gè)嵌段和第二種聚氧化烯的至少一個(gè)嵌段。41.如權(quán)利要求39的皮膚疫苗制劑，其中，所述第一種聚氧化烯是聚氧化乙烯，而第二種聚氧化烯是聚氧化丙烯。42.如權(quán)利要求34的皮膚疫苗制劑，其中，所述聚合物選自下列一組普盧蘭尼克F127，普盧蘭尼克F68，普盧蘭尼克F108,普盧蘭尼克F87，普盧蘭尼克L81，普盧蘭尼克L92,普盧蘭尼克LlOl，普盧蘭尼克L121,普盧蘭尼克L122，普盧蘭尼克L141，PlurinicL180,和普盧蘭尼克L185。43.如權(quán)利要求27-29中任意一項(xiàng)的皮膚疫苗制劑，其中，所述抗原性或免疫原性劑是來自動物、植物、細(xì)菌、原生動物、寄生蟲、病毒或它們的組合的抗原。44.如權(quán)利要求27-29中任意一項(xiàng)的皮膚疫苗制劑，其中，所述抗原性或免疫原性劑是腫瘤特異性抗原。45.如權(quán)利要求27-29中任意一項(xiàng)的皮膚疫苗制劑，其中，所述制劑包括至少兩種抗原性或免疫原性劑。46.—種用于施用到對象皮膚的皮膚區(qū)室的皮膚疫苗制劑，包括抗原性或免疫原性劑和粘膜附著性物質(zhì)。47.—種用于施用到對象皮膚的皮膚區(qū)室的皮膚疫苗制劑，包括抗原性或免疫原性劑和生物附著性物質(zhì)。48.如權(quán)利要求46的皮膚疫苗制劑，其中，所述粘膜附著性物質(zhì)選自下列一組聚卡波非、carobopol、卡波姆、殼聚糖、外源凝集素、曱基纖維素、羧甲基纖維素、藻酸鈉、明膠、果膠、阿拉伯膠和聚維酮。49.如權(quán)利要求47的皮膚疫苗制劑，其中，所述生物附著性物質(zhì)選自下列一組聚卡波非、carobopol、卡波姆、殼聚糖、外源凝集素、甲基纖維素、羧甲基纖維素、藻酸鈉、明膠、果膠、阿拉伯膠和聚維酮。50.如權(quán)利要求27-29中任意一項(xiàng)的皮膚疫苗制劑，還包括至少一種添力口劑。51.如權(quán)利要求50的皮膚疫苗制劑，其中，所述添加劑選自下列一組佐劑、賦形劑、穩(wěn)定劑、滲透促進(jìn)劑、粘膜附著性分子和生物附著性分子。52.如權(quán)利要求51的皮膚疫苗制劑，其中，所述佐劑是選自下列一組的佐劑單磷酸類脂A(MPL)、包括CpG基序的寡核苷酸、DDA、細(xì)胞因子、皂苷、熱休克蛋白、MF-59、明礬鹽和磷酸鈣。53.—種用于施用到對象皮膚的表皮內(nèi)區(qū)室的表皮疫苗制劑，包括抗原性或免疫原性劑和一種分子，其中，所述分子能增強(qiáng)所述免疫反應(yīng)。54.—種用于施用到對象皮膚的表皮區(qū)室的表皮疫苗制劑，包括抗原性或免疫原性劑、膠凝劑和粘膜附著性物質(zhì)，其中，所述免疫反應(yīng)被增強(qiáng)了。55.—種用于施用到對象皮膚的表皮區(qū)室的表皮疫苗制劑，包括抗原性或免疫原性劑、膠凝劑和生物附著性分子，其中，所述免疫反應(yīng)被增強(qiáng)了。56.如權(quán)利要求27-29中任意一項(xiàng)的表皮疫苗制劑，其中，所述制劑不是脂質(zhì)體或膠束.57.如權(quán)利要求54的表皮疫苗制劑，其中，所述膠凝劑是普盧蘭尼克F127,而所述粘膜附著性分子是羧甲基纖維素。58.如權(quán)利要求54的表皮疫苗制劑，其中，所述膠凝劑是普盧蘭尼克F127，而所述生物附著性分子是羧甲基纖維素。59.—種表皮疫苗制劑，包括抗原性或免疫原性劑和膠凝劑。60.如權(quán)利要求59的表皮疫苗制劑，其中，所述膠凝劑是發(fā)生熱誘導(dǎo)的物理轉(zhuǎn)變的聚合物，當(dāng)所述制劑的溫度提高到超過由第一溫度和第二溫度組成的溫度范圍時(shí)，所述聚合物從液體轉(zhuǎn)變成凝膠。61.如權(quán)利要求60的表皮疫苗制劑，其中，所述物理轉(zhuǎn)變不包括脂質(zhì)體或膠束。62.如權(quán)利要求60的表皮疫苗制劑，其中，所述第一溫度為1-20X:，而所述第二溫度為25-37TC。63.如權(quán)利要求60的表皮疫苗制劑，其中，所述從液體到凝膠的物理轉(zhuǎn)變是在生理溫度下進(jìn)行的。64.如權(quán)利要求60的表皮疫苗制劑，其中，所述生理溫度低于40n。65.如權(quán)利要求60的表皮疫苗制劑，其中，所述聚合物是聚氧化烯嵌段共聚物。66.如權(quán)利要求65的表皮疫苗制劑，其中，所述聚氧化烯嵌段共聚物包括第一種聚氧化烯的至少一個(gè)嵌段和第二種聚氧化烯的至少一個(gè)嵌段。67.如權(quán)利要求66的表皮疫苗制劑，其中，所述第一種聚氧化烯是聚氧化乙烯，而第二種聚氧化烯是聚氧化丙烯。68.如權(quán)利要求60的表皮疫苗制劑，其中，所述聚合物選自下列一組普盧蘭尼克F127,普盧蘭尼克F68，普盧蘭尼克F108，普盧蘭尼克F87，普盧蘭尼克L81，普盧蘭尼克L92，普盧蘭尼克LlOl，普盧蘭尼克L121，普盧蘭尼克L122，普盧蘭尼克L141，PlurinicL180，和普盧蘭尼克L185。69.如權(quán)利要求53-55中任意一項(xiàng)的表皮疫苗制劑，其中，所述抗原性或免疫原性劑是來自動物、植物、細(xì)菌、原生動物、寄生蟲、病毒或它們的組合的抗原。70.如權(quán)利要求53-55中任意一項(xiàng)的表皮疫苗制劑，其中，所述抗原性或免疫原性劑是腫瘤特異性抗原。71.如權(quán)利要求53-55中任意一項(xiàng)的表皮疫苗制劑，其中，所述制劑包括至少兩種抗原性或免疫原性劑。72.—種用于施用到對象皮膚的真皮區(qū)室的表皮疫苗制劑，包括抗原性或免疫原性劑和粘膜附著性物質(zhì).73.—種用于施用到對象皮膚的真皮區(qū)室的表皮疫苗制劑，包括抗原性或免疫原性劑和生物附著性物質(zhì)。74.如權(quán)利要求72的表皮疫苗制劑，其中，所述粘膜附著性物質(zhì)選自下列一組聚卡波非、carobopol、卡波姆、殼聚糖、外源凝集素、曱基纖維素、羧曱基纖維素、藻酸鈉、明膠、果膠、阿拉伯膠和聚維酮。75.如權(quán)利要求73的表皮疫苗制劑，其中，所述生物附著性物質(zhì)選自下列一組聚卡波非、carobopol、卡波姆、殼聚糖、外源凝集素、甲基纖維素、羧甲基纖維素、藻酸鈉、明膠、果膠、阿拉伯膠和聚維酮。76.如權(quán)利要求53-55中任意一項(xiàng)的表皮疫苗制劑，還包括至少一種添加劑。77.如權(quán)利要求76的表皮疫苗制劑，其中，所述添加劑選自下列一組佐劑、賦形劑、穩(wěn)定劑、滲透促進(jìn)劑、粘膜附著性分子和生物附著性分子。78.如權(quán)利要求77的表皮疫苗制劑，其中，所述佐劑是選自下列一組的佐劑單磷酸類脂A(MPL)、包括CpG基序的寡核苷酸、DDA、細(xì)胞因子、皂苷、熱休克蛋白、MF-59、明礬鹽和磷酸鈣。79.—種用于將疫苗制劑施用到對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室的方法，所述方法包括將含有抗原性或免疫原性劑和一種分子的疫苗制劑施用到真皮內(nèi)區(qū)室，其中，所述分子能增強(qiáng)所述制劑對免疫細(xì)胞的呈遞。80.—種用于將疫苗制劑施用到對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室的方法，其中，所述制劑包括抗原性或免疫原性劑和一種分子，所述方法包括用小號針將所述制劑遞送到真皮內(nèi)區(qū)室，所述針的長度足以刺入真皮內(nèi)區(qū)室，并且出口的深度位于真皮內(nèi)區(qū)室內(nèi)，以便所述制劑沉積到1-2mm真皮內(nèi)區(qū)室的深度上，并且所述分子能增強(qiáng)所述制劑對真皮內(nèi)區(qū)室的免疫細(xì)胞的呈遞。81.如權(quán)利要求80的方法，其中，當(dāng)所述針插入皮膚時(shí)，所述出口深度為大約500jam-2mm。82.如權(quán)利要求80的方法，其中，當(dāng)所述針插入皮膚時(shí)，所述出口$罙度為大約750jim-l.5mm。83.如權(quán)利要求80的方法，其中，所述針的長度為大約300um—2mni。84.如權(quán)利要求80的方法，其中，所述針的長度為大約500jim-lmm。85.—種用于將疫苗制劑施用到對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室的方法，所皮內(nèi)區(qū)室。86.—種用于將疫苗制劑施用到對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室的方法，所述方法包括將含有抗原性或免疫原性劑和粘膜附著性物質(zhì)的疫苗制劑施用到真皮內(nèi)區(qū)室。87.—種用于將疫苗制劑施用到對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室的方法，所述方法包括將含有抗原性或免疫原性劑和一種分子的疫苗制劑施用到真皮內(nèi)區(qū)室，其中，所述分子能增強(qiáng)所述制劑對免疫細(xì)胞的呈遞。88.—種用于將疫苗制劑施用到對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室的方法，所皮內(nèi)區(qū)室。89.—種用于將疫苗制劑施用到對象皮膚的真皮內(nèi)區(qū)室的方法，所述方法包括將含有抗原性或免疫原性制劑和粘膜附著性物質(zhì)的疫苗制劑施用到真皮內(nèi)區(qū)室。90.—種用于真皮內(nèi)遞送包括抗原性制劑和一種分子的疫苗制劑的方法，其中，所述分子能增強(qiáng)對所述抗原性制劑的免疫反應(yīng)，并且其中所述疫苗制劑沉積在1-2mm的深度。91.一種用于表皮遞送包括抗原性制劑和一種分子的疫苗制劑的方法，其中，所述分子能增強(qiáng)對所述抗原性制劑的免疫反應(yīng)，并且，其中，所述疫苗制劑沉積在大約0-250jam的深度。92.如權(quán)利要求85-89中任意一項(xiàng)的方法，還包括通過小號針遞送所述制劑，所述針的長度足以刺入真皮內(nèi)區(qū)室，并且出口位于真皮內(nèi)區(qū)室的深度，以便制劑沉積在l-2mm的真皮內(nèi)區(qū)室深度。93.—種將疫苗制劑施用到對象皮膚的表皮區(qū)室的方法，其中，所述制劑包括抗原性或免疫原性劑和一種分子，所述方法包括使用微型研磨器械將所述制劑遞送到表皮區(qū)室，其中，所述微型研磨器械包括微型凸起，其長度足以刺入皮膚的角質(zhì)層。94.如權(quán)利要求21的真皮內(nèi)疫苗制劑，其中，所述生物附著性物質(zhì)選自下列一組聚卡波非、carobopol、卡波姆、殼聚糖、外源凝集素、甲基纖維素、羧甲基纖維素、藻酸鈉、明膠、果膠、阿拉伯膠和聚維酮。全文摘要本發(fā)明涉及皮膚疫苗制劑，它被設(shè)計(jì)成將免疫原性組合物定向遞送到皮膚的皮膚區(qū)室，包括真皮內(nèi)和表皮區(qū)室。本發(fā)明的皮膚疫苗制劑包括抗原性或免疫原性劑和至少一種分子，例如，化學(xué)制劑，它能增強(qiáng)抗原性或免疫原性劑向真皮內(nèi)區(qū)室或表皮區(qū)室的免疫細(xì)胞的呈遞和/或可利用性，導(dǎo)致了增強(qiáng)的免疫反應(yīng)。本發(fā)明的皮膚疫苗制劑具有增強(qiáng)了的效力，因?yàn)樵趯⒖乖曰蛎庖咴詣┻f送到真皮內(nèi)區(qū)室或表皮區(qū)室時(shí)，對存在于它里面的免疫細(xì)胞具有增強(qiáng)了的呈遞和/或可利用性。所述皮膚疫苗制劑增強(qiáng)了的效力導(dǎo)致了在一個(gè)真皮內(nèi)或表皮劑量之后產(chǎn)生治療有效的免疫反應(yīng)，所用抗原性或免疫原性劑的劑量比常規(guī)更低，并且沒有必要進(jìn)行強(qiáng)化免疫。文檔編號A61K31/716GK101115472SQ200480017751公開日2008年1月30日申請日期2004年5月12日優(yōu)先權(quán)日2003年5月12日發(fā)明者G·蔣,K·馬爾,P·洛朗,R·坎貝爾,V·沙利文申請人:貝克頓·迪金森公司