專利名稱：維力波糖在制備治療糖尿病患者的高脂血癥藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及維力波糖的應(yīng)用，具體地說涉及維力波糖在制備治療糖尿病并發(fā)癥藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
維力波糖(valibose)(化學(xué)名(+)-(1S，2S，3S，4R，5R)-1-氨基-5-羥甲基-N-2-(1，3-二羥丙基)-2，3，4-環(huán)己三醇)在美國(guó)專利US 4,701,559中已被公開，其結(jié)構(gòu)式[I]為 維力波糖是一種α-葡萄糖苷酶抑制劑，口服后能競(jìng)爭(zhēng)拮抗性地抑制腸道內(nèi)雙糖類水解酶(α-葡萄糖苷酶)，從而延緩了糖類的消化和吸收，進(jìn)而改善餐后高血糖。餐后高血糖會(huì)使胰島素的分泌和胰島素的作用出現(xiàn)障礙，使糖代謝進(jìn)一步惡化，因此糾正餐后高血糖對(duì)于防止糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)展是非常重要的。
高脂血癥可分為原發(fā)性高脂血癥與繼發(fā)性高脂血癥。糖尿病等疾病引起者為繼發(fā)性高脂血癥，其它的則稱為原發(fā)性高脂血癥。糖尿病患者的高脂血癥是由糖尿病導(dǎo)致的或伴隨糖尿病發(fā)生的高脂血癥。糖尿病為發(fā)生高脂血癥較多的疾病。糖尿病患者無論是胰島素依賴型糖尿病(IDDM，I型)，還是非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM，II型)，高脂血癥均極為常見。據(jù)報(bào)道，在大規(guī)模新診未治的NIDDM中，高脂血癥占43％。
糖尿病性脂代謝紊亂，以血清甘油三酯增高最明顯，膽固醇輕度增高。高脂血癥常見的幾種高血脂變化表現(xiàn)有(1)高甘油三酯(TG)血癥血清甘油三酯水平增高；(2)高膽固醇(TC)血癥血清總膽固醇水平增高；(3)混合型高脂血癥血清總膽固醇與甘油三酯水平均增高；(4)低高密度脂蛋白(HDL-C)血癥血清高密度脂蛋白膽固醇水平減低(劉瑞杰等，《高脂血癥和相關(guān)疾病》，北京科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，1999年，第75頁)。
研究發(fā)現(xiàn)，個(gè)體空腹甘油三酯的濃度越高，其餐后高脂血癥的程度越嚴(yán)重。而糖尿病患者的胰島素抵抗造成脂負(fù)荷后機(jī)體甘油三酯高反應(yīng)，其餐后高脂血癥的程度更加嚴(yán)重，這也可以增加其冠心病的危險(xiǎn)性。高甘油三酯血癥可導(dǎo)致胰腺血管脂肪栓塞或胰腺脂肪變化。有人發(fā)現(xiàn)急性胰腺炎患者血中分解脂蛋白的脂蛋白脂酶顯著降低，造成血脂升高，胰腺血管脂肪栓塞，胰腺缺血壞死；血液粘稠度增加，導(dǎo)致胰腺血液循環(huán)障礙，胰腺缺血缺氧；胰腺毛細(xì)血管內(nèi)高濃度甘油三酯被脂肪酶大量分解，產(chǎn)生大量游離脂肪酸，引起毛細(xì)血管栓塞或血管內(nèi)膜損傷。因此應(yīng)高度重視高甘油三酯血癥，應(yīng)積極治療，防止胰腺的損害。
糖尿病大血管病變是指主動(dòng)脈、冠狀動(dòng)脈、腦基底動(dòng)脈、腎動(dòng)脈、頸動(dòng)脈等動(dòng)脈的粥樣硬化。高脂血癥是引起動(dòng)脈粥樣硬化，從而導(dǎo)致冠心病、腦血管意外，最終導(dǎo)致糖尿病患者死亡的主要因素。臨床資料證實(shí)，糖尿病患者的高脂血癥并發(fā)各種血管疾病的發(fā)生率均明顯上升。在國(guó)際研究動(dòng)脈硬化中，發(fā)現(xiàn)糖尿病患者比非糖尿病患者的動(dòng)脈硬化增加，脂肪條紋的范圍擴(kuò)大，明顯的硬化病變伴有纖維斑塊、鈣化和血管狹窄。在脂代謝中，甘油三酯及游離脂肪酸對(duì)動(dòng)脈硬化形成居重要地位。85％以上糖尿病患者血漿中血脂濃度增高，易致動(dòng)脈硬化而日益引起人們的重視。因此在糖尿病患者治療過程中，糾正高脂血癥，使其降至正常范圍，進(jìn)而預(yù)防糖尿病性大血管疾病的發(fā)生，顯得極為重要。通常，糖尿病經(jīng)過血糖控制，高脂血癥可部分緩解，但血脂一般不能降至正常，故需進(jìn)行藥物治療。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供維力波糖在制備治療糖尿病患者的高脂血癥藥物中的應(yīng)用。
根據(jù)本發(fā)明的目的，本發(fā)明所述的維力波糖既可通過改善糖代謝，控制血糖，以部分緩解糖尿病引起的高脂血癥的癥狀；又可通過降低血膽固醇和甘油三酯的水平，降低心臟指數(shù)，來改善和糾正各種類型糖尿病患者的高脂血癥患者的脂代謝異常，且具有很好的用藥安全性，從而可以用于治療糖尿病患者的高脂血癥。
本發(fā)明所述的維力波糖可以降低糖尿病患者的高脂血癥患者的血膽固醇和甘油三酯的水平，改善和糾正脂代謝異常，因此還可以進(jìn)一步用于預(yù)防糖尿病患者的高脂血癥引起的糖尿病大血管病變，如動(dòng)脈硬化、冠心病和腦血管病變等。
本發(fā)明所述糖尿病患者的高脂血癥是由糖尿病導(dǎo)致的或伴隨糖尿病發(fā)生的高脂血癥。
本發(fā)明所述糖尿病患者的高脂血癥包括高甘油三酯(TG)血癥、高膽固醇(TC)血癥、混合型高脂血癥和低高密度脂蛋白(HDL-C)血癥。
進(jìn)一步的，本發(fā)明所述糖尿病患者的高脂血癥為高甘油三酯(TG)血癥或混合型高脂血癥。
更進(jìn)一步的，本發(fā)明所述糖尿病患者的高脂血癥為高甘油三酯(TG)血癥。
以維力波糖為藥效成分，添加藥學(xué)上可接受的藥用輔料并通過本領(lǐng)域的常規(guī)方法可以制備用于本發(fā)明的藥物制劑。本藥物制劑的劑型可以是口服給藥的劑型諸如片劑、膠囊(包括硬膠囊、軟膠囊、腸溶膠囊和微囊)、粉劑、顆粒劑和糖漿劑；非口服給藥的劑型諸如注射劑、栓劑、丸劑、凝膠劑和貼劑。除這些常規(guī)劑型外，還可以將口服的速釋固體制劑(例如片劑、顆粒劑等)和用于口服或非口服給藥的緩釋制劑(片劑、顆粒、精細(xì)顆粒、丸劑、膠囊、糖漿、乳劑、懸浮液、溶液)用于本發(fā)明，通過常規(guī)方法也可以制備這些制劑。本發(fā)明中的制劑可以是包衣或未包衣的形式，視需要而定。本發(fā)明特別優(yōu)選的是將維力波糖用于口服給藥的劑型。
本發(fā)明中的藥用輔料包括用于固體制劑的賦形劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑、穩(wěn)定劑、發(fā)泡劑、包衣劑等，或用于半固體制劑、液體制劑的溶劑、增溶劑、懸浮劑、等滲劑、緩沖劑、潤(rùn)膚劑、乳化劑等，此外，也可以根據(jù)需要使用其它藥用添加劑諸如防腐劑、抗氧化劑、著色劑、甜味劑和調(diào)味劑等。
根據(jù)所治療的對(duì)象、劑型、給藥方法等可以對(duì)本發(fā)明藥物制劑的劑量進(jìn)行合適的選擇。對(duì)于人的口服給藥來說，將劑量進(jìn)行這樣一種選擇使得維力波糖的有效量通常為1mg～500mg/60kg體重/天，優(yōu)選5mg～30mg/60kg體重/天，特別優(yōu)選7.5mg～15mg/60kg體重/天。就口服緩釋劑型而言，應(yīng)以活性組分的量/天在上述劑量范圍內(nèi)的方式給藥。就非口服給藥而言，其給藥劑量取決于劑型?？傊?，所述的劑量要足以使所述劑型表現(xiàn)出與口服制劑相同功效的藥物有效量。
為了更好地理解本發(fā)明的本質(zhì)，下面結(jié)合附圖，通過對(duì)本發(fā)明較佳實(shí)施方式的描述，詳細(xì)說明但不限制本發(fā)明。
附圖的簡(jiǎn)要說明

圖1為維力波糖對(duì)STZ糖尿病大鼠心臟指數(shù)的影響Nor為正常大鼠組，Con為STZ糖尿病大鼠對(duì)照組，維力波糖(0.4mg)、維力波糖(0.9mg)、維力波糖(1.6mg)為維力波糖給藥組，劑量分別為0.4mg/kg體重、0.9mg/kg體重、1.6mg/kg體重；與對(duì)照組Con比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；n＝8-10圖2為經(jīng)口灌胃維力波糖對(duì)雄性小鼠體重變化曲線圖3為經(jīng)口灌胃維力波糖對(duì)雌性小鼠體重變化曲線圖4為經(jīng)口灌胃維力波糖對(duì)雄性大鼠體重變化曲線圖5為經(jīng)口灌胃維力波糖對(duì)雌性大鼠體重變化曲線圖6為腹腔注射維力波糖對(duì)雄性小鼠體重變化曲線圖7為腹腔注射維力波糖對(duì)雌性小鼠體重變化曲線圖8為腹腔注射維力波糖對(duì)雄性大鼠體重變化曲線圖9為腹腔注射維力波糖對(duì)雌性大鼠體重變化曲線具體實(shí)施方式
在以下藥效學(xué)試驗(yàn)和急性毒性試驗(yàn)中所使用的維力波糖均為由深圳太太藥業(yè)有限公司提供的結(jié)晶形態(tài)維力波糖，其具體制備方法及物理性質(zhì)的測(cè)定結(jié)果如下I、制備方法1、原料Validamine的制備原料Validamine可以由現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)中公開的方法制備，例如.J.Antibiotics 2457-58，1971和Chem.Lctt.，1989，725-728(Harii，s.j.T.Iwasa& Y.Kameda)中描述的方法，本發(fā)明的制備工藝中，原料Validamine的制備是通過由井崗霉素A(購自浙江錢江生物化學(xué)有限公司，含量60％)經(jīng)水解得到validoxylamine A，再由validoxylamineA與N-溴代丁二酰亞胺(NBS)反應(yīng)，得到validamine。反應(yīng)式如下 井崗霉素A Validoxylamine A Validoxylamine A Validamine Valienamine將反應(yīng)產(chǎn)物用CG-50NH4+弱酸型陽離子樹脂柱，0.1N氨水洗脫分離得到純的Validamine和Valienamine。
2、結(jié)晶形態(tài)維力波糖的制備反應(yīng)式如下 Validamine Schiff 維力波糖在2600毫升無水甲醇(分析純)中，加入Validamine104克(587毫摩爾)、1，3二羥基丙酮82.3克(FRUKA 97％，886毫摩爾)、冰醋酸10.4毫升、氰基硼氫化鈉76.5克(營(yíng)口三征化工有限公司97％，1.18摩爾)，回流反應(yīng)6小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，蒸除甲醇，加水500毫升，用2N HCl酸化至pH1.5，再用NaOH中和至pH6。分別經(jīng)過PURLITE C100H+型強(qiáng)酸型陽離子樹脂柱(水/0.5N氨水)、YD CG-50 NH4+弱酸型陽離子樹脂柱(0.1N氨水)、HZ-202OH-強(qiáng)堿型陰離子樹脂柱(H2O)，TLC跟蹤檢測(cè)(展開劑正丁醇∶甲醇∶氯仿∶氨水＝5∶4∶2∶5；顯色劑0.2％茚三酮乙醇溶液；Rf＝0.46(validamine)；Rf＝0.52(valibose))。合并茚三酮呈陽性與Valibose對(duì)照品Rf值相同的組分，減壓濃縮至干，用乙醇溶解，加晶種析晶，得93克。收率63.1％，mp88-89℃。
II、結(jié)晶形態(tài)維力波糖物理性質(zhì)測(cè)定通過對(duì)上述制備方法獲得的結(jié)晶形態(tài)維力波糖進(jìn)行核磁共振分析和元素分析發(fā)現(xiàn)，所獲得的結(jié)晶形態(tài)維力波糖與無定形維力波糖粉末得到了完全相同的結(jié)果，表明本試驗(yàn)獲得的維力波糖與美國(guó)專利US 4,701,559中已被公開的維力波糖具有完全相同的化學(xué)結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)式均為(+)-(1S，2S，3S，4R，5R)-1-氨基-5-羥甲基-N-2-(1，3-二羥丙基)-2，3，4-環(huán)己三醇)。
1、核磁共振分析儀器Varian 500結(jié)果1H-NMR(D2O，500MHZ)δ1.32(1H，ddt，J＝3，1.5，15)，1.80-1.87(1H，m)，1.92(1H，dt，J＝3，15)，2.78(1H，m，J＝5.5)，3.15(1H，dd，J＝3.5)，3.25(1H，dd，J＝10.5).3.50-3.55(2H，m)，3.57(2H，t，J＝4.5)，3.62(2H，t，J＝5.5)，3.65(1H，dd，J＝5，11.5)，3.72(1H，dd，J＝3.5，11)；13C-NMR(D2O，75MHZ)δ28.61，38.97，55.63，59.28，61.31，62.70，63.19，73.91，74.21，75.342、元素分析(C10H21NO6)儀器德國(guó)ELEMENTAR公司vario EL元素分析儀計(jì)算值(％)C，47.80；H，8.42；N，5.57實(shí)測(cè)值(兩次)(％)C，47.90/47.84；H，8.56/8.57；N，5.41/5.45
藥效學(xué)試驗(yàn)實(shí)施例1以維力波糖為受試藥物，考察了維力波糖對(duì)鏈脲霉素糖尿病大鼠血脂(包括甘油三酯、膽固醇和游離脂肪酸)和心臟指數(shù)的影響。
在鏈脲霉素(STZ)糖尿病大鼠喂食高糖飼料的長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)中(5周)，維力波糖極顯著的降低了血甘油三酯的水平，同時(shí)降低了血膽固醇的水平，對(duì)血游離脂肪酸水平無影響，此外還顯著降低了心臟指數(shù)，表明維力波糖具有改善糖尿病性脂代謝異常的作用，可用于糖尿病相關(guān)并發(fā)癥的預(yù)防和治療。
一、試驗(yàn)材料(一)試驗(yàn)藥物1、維力波糖化學(xué)合成的化合物，由深圳太太藥業(yè)有限公司提供(制備方法如上所述)。批號(hào)為20030801，分子量251，外觀呈白色粉末，純度為99.8％，實(shí)驗(yàn)時(shí)用去離子水配制成所需濃度。
(二)試驗(yàn)動(dòng)物1、鏈脲霉素(streptozotocin，簡(jiǎn)稱STZ)糖尿病大鼠正常SD大鼠腹腔注射鏈脲霉素58mg/kg(以pH4.0檸檬酸緩沖液配制)，72小時(shí)后預(yù)測(cè)血糖，選用血糖在250-450mg/dl的大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組。
2、正常大鼠正常雄性SD大鼠，140-160g，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證編號(hào)SCXK(京)2002-0003，飼養(yǎng)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所二級(jí)動(dòng)物房。
二、試驗(yàn)方法根據(jù)α-葡萄糖苷酶抑制劑的作用機(jī)理特點(diǎn)，并結(jié)合維力波糖預(yù)試驗(yàn)研究結(jié)果，選取四組鏈脲霉素(STZ)糖尿病大鼠，每組10只。對(duì)照組以高蔗糖飼料(蔗糖∶基礎(chǔ)飼料＝1∶1)喂養(yǎng)，其余三組分別飼以含不同劑量維力波糖(0.4mg/kg體重、0.9mg/kg體重、1.6mg/kg體重給藥組，為實(shí)驗(yàn)結(jié)束后根據(jù)該組每天平均攝食量計(jì)算所得)的高蔗糖飼料(0.4mg/100g料、1mg/100g料、2.5mg/100g料)，同時(shí)設(shè)一組正常大鼠(n＝10)飼以正常飼料作為正常動(dòng)物組，以上各組均自由攝食飲水，三周后取血測(cè)血脂(血甘油三酯、血膽固醇和血游離脂肪酸)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，斷頭處死動(dòng)物，稱體重、心臟重量。
三、試驗(yàn)結(jié)果1、維力波糖對(duì)STZ糖尿病大鼠血脂的影響高血糖動(dòng)物常伴有脂質(zhì)代謝異常，表現(xiàn)為膽固醇、甘油三酯及游離脂肪酸等異常升高。血脂用酶方法測(cè)定，膽固醇和甘油三酯試劑盒購自北京中生生物工程技術(shù)公司，游離脂肪酸試劑盒購自日本東京第一化學(xué)藥品株式會(huì)社。
結(jié)果見表1。結(jié)果表明維力波糖在三個(gè)給藥劑量下均對(duì)血甘油三酯水平有降低作用，且維力波糖1.6mg/kg體重給藥組的血甘油三酯水平極顯著的低于對(duì)照組；同時(shí)維力波糖0.9mg/kg體重給藥組的血膽固醇水平低于對(duì)照組；而維力波糖在三個(gè)劑量下均對(duì)血游離脂肪酸水平?jīng)]有影響。
表1 維力波糖對(duì)STZ糖尿病大鼠血脂的影響(X±SD)

與Con比較，*P＜0.05；n＝9-10；Nor為正常大鼠組，Con為STZ糖尿病大鼠對(duì)照組，其他為維力波糖給藥組2、維力波糖對(duì)STZ糖尿病大鼠心臟指數(shù)的影響心臟指數(shù)是用于表征心臟功能的參數(shù)。動(dòng)物長(zhǎng)期處于高甘油三酯的狀態(tài)下，其可囤積在心臟周圍，造成心臟肥大，心臟指數(shù)升高。
結(jié)果見圖2。結(jié)果表明，維力波糖1.6mg/kg體重給藥組的動(dòng)物心臟指數(shù)顯著低于對(duì)照組。
四、試驗(yàn)結(jié)論STZ糖尿病大鼠長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)(5周)結(jié)果表明，維力波糖給藥組動(dòng)物血甘油三酯和膽固醇水平均有不同程度的降低(表1)，心臟指數(shù)顯著降低(圖1)，說明維力波糖有利于糖尿病動(dòng)物脂代謝的改善。STZ糖尿病大鼠喂食高糖飼料可加速糖尿病大鼠高脂血癥的發(fā)生與發(fā)展，表現(xiàn)為對(duì)照組血脂水平升高、心臟肥大，而維力波糖給藥組表現(xiàn)為血脂水平降低，心臟指數(shù)減小三個(gè)劑量下，血甘油三酯水平均低于對(duì)照組，且劑量為1.6mg/kg體重時(shí)表現(xiàn)為極顯著的降低；劑量為0.9mg/kg體重時(shí)，血膽固醇水平低于對(duì)照組；劑量為1.6mg/kg體重時(shí)，糖尿病大鼠的心臟指數(shù)顯著降低。說明維力波糖有利于延緩和改善糖尿病患者的高脂血癥，尤其是高甘油三酯血癥和混合型高脂血癥的發(fā)生和發(fā)展，進(jìn)而可以用于預(yù)防糖尿病大血管病變。
維力波糖的急性毒性試驗(yàn)實(shí)施例2以維力波糖為試驗(yàn)藥物，進(jìn)行了大、小鼠急性毒性試驗(yàn)。在試驗(yàn)中，觀察了維力波糖單次給予大鼠、小鼠所產(chǎn)生的急性毒性反應(yīng)和死亡情況，分別得出大鼠、小鼠經(jīng)口灌胃給藥和腹腔注射給藥的最大耐受劑量。結(jié)果表明健康清潔級(jí)SD大鼠和ICR小鼠分別單次經(jīng)口灌胃(po)和腹腔注射(ip)給予維力波糖，大、小鼠在整個(gè)試驗(yàn)期間均無明顯異常反應(yīng)。經(jīng)口灌胃(po)給予維力波糖的最大耐受劑量為大鼠＞5g/kg；小鼠＞7.5g/kg。腹腔注射給予維力波糖的最大耐受劑量為大鼠＞3g/kg；小鼠＞4.5g/kg。
一、試驗(yàn)材料(一)試驗(yàn)藥物1、維力波糖，化學(xué)合成的化合物，白色結(jié)晶粉末，極易溶于水，極易吸潮，冰箱冷藏(外加干燥劑)。含量99.5％，水分1.34％，熔點(diǎn)88～89℃，批號(hào)20030801，由深圳太太藥業(yè)有限公司提供(制備方法如上所述)。
2、蒸餾水(自制)，供藥物配制用。
(二)試驗(yàn)動(dòng)物健康SD大鼠，清潔級(jí)，80只，雌雄各半，體重130-150g；健康ICR小鼠，清潔級(jí)，80只，雌雄各半，體重19-21g；由浙江省試驗(yàn)動(dòng)物中心供應(yīng)，動(dòng)物質(zhì)量合格證醫(yī)動(dòng)字第22-2001001號(hào)。飼養(yǎng)于全封閉清潔級(jí)動(dòng)物房?jī)?nèi)，溫度20-22℃，相對(duì)濕度50-60％，光照12小時(shí)暗，12小時(shí)明，中央空調(diào)集中通風(fēng)8-15次/小時(shí)。喂飼全價(jià)營(yíng)養(yǎng)顆粒飼料，由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼料生產(chǎn)基地供應(yīng)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料合格證醫(yī)動(dòng)字第22-2001001號(hào)。飲水為城市自來水用凈水器過濾后裝入消毒過的飲水瓶中自由飲用。
二、試驗(yàn)方案1、劑量組別經(jīng)口灌胃 腹腔注射大鼠5g/kg 大鼠3g/kg小鼠7.5g/kg 小鼠4.5g/kg以上劑量臨用時(shí)用蒸餾水配成所需濃度的溶液，供大鼠、小鼠經(jīng)口灌胃、腹腔注射用。
2、劑量確定依據(jù)(1)經(jīng)口灌胃根據(jù)預(yù)試全活劑量，大鼠5g/kg、小鼠7.5g/kg；(2)腹腔注射根據(jù)預(yù)試全活劑量，大鼠3g/kg、小鼠4.5g/kg；(3)根據(jù)國(guó)家新藥臨床前研究指導(dǎo)原則的有關(guān)規(guī)定確定。
3、給藥途徑經(jīng)口灌胃(po)、腹腔注射(ip)兩個(gè)途徑。
4、給藥容量小鼠po、ip0.5ml/20g體重；大鼠po、ip2.0ml/100g體重。
5、試驗(yàn)方法根據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局《藥品非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范》和參考中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥政局《新藥(西藥)臨床前研究指導(dǎo)原則》“急性毒性試驗(yàn)”方法要求進(jìn)行。
取上述符合試驗(yàn)要求的清潔級(jí)大鼠、小鼠各80只，雌雄各半，分別按體重隨機(jī)分成四組，即經(jīng)口灌胃(po)維力波糖給藥組和溶劑對(duì)照組，腹腔注射維力波糖給藥組和溶劑對(duì)照組。每組20只，雌雄各半。給藥前不禁水12小時(shí)以上(前一天晚上十八點(diǎn)三十分始禁食，次日上午九點(diǎn)前給藥)。給藥容量為小鼠每20g體重0.5ml、大鼠每100g體重2.0ml。給藥后即刻觀察動(dòng)物的反應(yīng)情況，包括動(dòng)物外觀、行為活動(dòng)、精神狀態(tài)、食欲、大小便及其顏色、皮毛、鼻、眼、口有無異常分泌物以及死亡情況，死亡動(dòng)物及時(shí)尸檢，若肉眼觀察有病變臟器則進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。給藥第一天每隔30分鐘到1小時(shí)觀察1次，以后每天觀察并稱體重一次，連續(xù)觀察10天，記錄動(dòng)物毒性反應(yīng)及死亡分布情況。以體重變化、反應(yīng)情況，綜合評(píng)價(jià)試驗(yàn)結(jié)果，分別得出維力波糖對(duì)大鼠、小鼠單次經(jīng)口灌胃和腹腔注射的最大耐受劑量。若出現(xiàn)死亡，則進(jìn)行急性半數(shù)致死量(LD50)的測(cè)定，列表表示。
三、試驗(yàn)結(jié)果1、經(jīng)口灌胃最大耐受劑量測(cè)定雌雄小鼠單次經(jīng)口灌胃(po)給予維力波糖7.5g/kg劑量，雌雄大鼠單次經(jīng)口灌胃(po)給予維力波糖5g/kg劑量，給藥后即刻和在整個(gè)試驗(yàn)期間觀察均未出現(xiàn)任何異常反應(yīng)，也未出現(xiàn)動(dòng)物死亡。雖雌性小鼠在給藥后第1、2、4天和雄性小鼠給藥后第1、2天的平均體重輕于相應(yīng)時(shí)間的對(duì)照組(p＜0.01、0.05)，但每鼠的活動(dòng)正常，并且其它時(shí)間及雌雄大鼠整個(gè)試驗(yàn)期間的平均體重均隨試驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，與相應(yīng)時(shí)間的對(duì)照組相同(p＞0.05)，詳見表2、表3、表4、表5和圖2、圖3、圖4、圖5。
表2 小鼠經(jīng)口灌胃給予維力波糖最大耐受量測(cè)定結(jié)果

表3 小鼠經(jīng)口灌胃給予維力波糖最大耐受量測(cè)定體重(g)變化情況(X±SD)


與相應(yīng)時(shí)間的對(duì)照組相比較*P＜0.01、△P＜0.05。
表4 大鼠經(jīng)口灌胃給予維力波糖最大耐受量測(cè)定結(jié)果

表5 大鼠經(jīng)口灌胃給予維力波糖最大耐受量測(cè)定體重(g)變化情況(X±SD)


2、腹腔注射最大耐受劑量測(cè)定雌雄小鼠單次腹腔注射(ip)給予維力波糖4.5g/kg劑量，雌雄大鼠單次腹腔注射(ip)給予維力波糖3g/kg劑量，給藥后即刻和在整個(gè)試驗(yàn)期間觀察均未出現(xiàn)任何異常反應(yīng)，也未出現(xiàn)動(dòng)物死亡。雖雄性小鼠在給藥后第9、10天的平均體重輕于相應(yīng)時(shí)間的對(duì)照組(p＜0.01、0.05)，雌性小鼠在給藥后第1、2天和雌性大鼠給藥后第10天的平均體重輕于相應(yīng)時(shí)間的對(duì)照組(p＜0.01、0.05)。但每鼠的活動(dòng)正常，并且其它時(shí)間及雌雄大鼠整個(gè)試驗(yàn)期間的平均體重均隨試驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，與相應(yīng)時(shí)間的對(duì)照組相同(p＞0.05)，詳見表6、表7、表8、表9和圖6、圖7、圖8、圖9。
觀察期結(jié)束后處死動(dòng)物尸檢肉眼觀察，各劑量組動(dòng)物均未見臟器異常變化。
表6 小鼠腹腔注射 給予維力波糖最大耐受量測(cè)定結(jié)果

表7 小鼠腹腔注射給予維力波糖最大耐受量測(cè)定體重(g)變化情況(X±SD)


與相應(yīng)時(shí)間的對(duì)照組相比較*P＜0.01、△P＜0.05。
表8 大鼠腹腔注射給予維力波糖最大耐受量測(cè)定結(jié)果

表9 大鼠腹腔注射給予維力波糖最大耐受量測(cè)定體重(g)變化情況(X±SD)


與相應(yīng)時(shí)間的對(duì)照組相比較*P＜0.01。
四、試驗(yàn)結(jié)論根據(jù)以上試驗(yàn)結(jié)果和表6～13的情況，在本試驗(yàn)劑量條件下，健康清潔級(jí)SD大鼠和ICR小鼠分別單次經(jīng)口灌胃(po)和腹腔注射(ip)給予維力波糖，大、小鼠在整個(gè)試驗(yàn)期間均無明顯異常反應(yīng)。大鼠、小鼠分別單次經(jīng)口灌胃(po)給予維力波糖的最大耐受劑量為大鼠＞5g/kg，小鼠＞7.5g/kg。大鼠、小鼠分別單次腹腔注射(ip)給予維力波糖的最大耐受劑量為大鼠＞3g/kg，小鼠＞4.5g/kg。
人體用藥劑量確定的依據(jù)本研究中，按照本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的常規(guī)方法來確定用藥劑量。首先用小鼠粗略地探索維力波糖的中毒劑量或致死劑量，然后用小于中毒量的劑量作為應(yīng)用劑量，由此確定小鼠的最小有效劑量約為2mg/kg；由上述急性毒性試驗(yàn)結(jié)果可知，大鼠、小鼠分別單次經(jīng)口灌胃(po)給予維力波糖的最大耐受劑量為大鼠＞5g/kg，小鼠＞7.5g/kg，大鼠、小鼠分別單次腹腔注射(ip)給予維力波糖的最大耐受劑量為大鼠＞3g/kg，小鼠＞4.5g/kg，由此可推測(cè)出維力波糖用于人體的劑量范圍會(huì)很寬，具有很高的用藥安全性；又由上述藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果可知，在試驗(yàn)所采用的劑量范圍(0.4～1.6mg/kg體重)內(nèi)，維力波糖改善鏈脲霉素(STZ)糖尿病大鼠高脂血癥的作用隨劑量的加大而增強(qiáng)。
用藥劑量的確定還考慮到維力波糖的藥代試驗(yàn)結(jié)果，該藥以AUC0-t平均值計(jì)算，在1.0mg.kg-1劑量下大鼠灌胃給藥后的絕對(duì)生物利用度平均為15.26％；以AUC0-t平均值計(jì)算，在0.297mg·kg-1劑量下犬灌胃給藥后的絕對(duì)生物利用度為26.27％，因此預(yù)計(jì)維力波糖在體內(nèi)有20％左右的血漿結(jié)合和吸收，理論用量將增加20％左右。
綜合考慮以上試驗(yàn)結(jié)果，并按人用藥量小白鼠、大白鼠用藥量為1∶25-50的常用比例進(jìn)行換算，確定維力波糖人體口服用藥劑量范圍時(shí)還考慮到患者臨床用藥時(shí)的順應(yīng)性。由此確定維力波糖人體口服用藥劑量為1mg～500mg/60kg體重/天，優(yōu)選5mg～30mg/60kg體重/天，特別優(yōu)選7.5mg～15mg/60kg體重/天。就口服緩釋劑型而言，應(yīng)以活性組分的量/天在上述劑量范圍內(nèi)的方式給藥。就非口服給藥而言，其給藥劑量取決于劑型。如以口服量為100時(shí)，皮下注射量30-50，肌肉注射量為25-30，靜脈注射量為25?？傊?，所述的劑量要足以使所述劑型表現(xiàn)出與口服制劑相同功效的藥物有效量。
口服藥物制劑實(shí)施例3I處方 1000片的含量維力波糖2.5g乳糖112.5g羥丙基甲基纖維素適量交聚維酮2.4g硬脂酸鎂1.2g歐巴代 適量原料藥維力波糖按照前述方法制備，其他輔料為市售購買商品。
II制法將各原輔料均過80目篩，按處方分別準(zhǔn)確稱量；用75％乙醇配制羥丙基甲基纖維素溶液作為粘合劑；將維力波糖與部分乳糖在適宜容器中按倍倍稀釋法混合均勻，然后同剩余量乳糖、處方量交聚維酮混合，再加粘合劑混合后，過20目篩制濕顆粒；將濕顆粒放入熱風(fēng)循環(huán)烘箱中，溫度控制在55-65℃，烘至含水分1.5-2.0％，用20目篩整粒；將制好的顆粒，加處方量硬脂酸鎂混合后壓片；用包衣材料歐巴代配制包衣液，將素片進(jìn)行包衣。
以上對(duì)本發(fā)明較佳實(shí)施方式的描述并不限制本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本發(fā)明作出各種改變或變形，只要不脫離本發(fā)明的精神，均應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的范圍。
權(quán)利要求
1.維力波糖在制備治療糖尿病患者的高脂血癥藥物中的應(yīng)用。
2.權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述糖尿病患者的高脂血癥為高甘油三酯血癥或混合型高脂血癥。
3.權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述糖尿病患者的高脂血癥為高甘油三酯血癥。
4.權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述維力波糖為口服給藥劑型。
5.權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述維力波糖的給藥劑量范圍為1mg～500mg/60kg體重/天。
6.權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述維力波糖的給藥劑量范圍為1mg～30mg/60kg體重/天。
7.權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于所述維力波糖的給藥劑量范圍為7.5mg～15mg/60kg體重/天。
全文摘要
本發(fā)明公開了維力波糖在制備治療糖尿病患者的高脂血癥藥物中的應(yīng)用。維力波糖能改善糖尿病患者的高脂血癥的癥狀，如降低血甘油三酯和膽固醇的水平、降低心臟指數(shù)，有利于延緩糖尿病患者的高脂血癥的發(fā)生和發(fā)展，可用于糖尿病患者的高脂血癥的治療，進(jìn)而可用于糖尿病大血管病變的預(yù)防。
文檔編號(hào)A61P3/06GK1768757SQ200410088809
公開日2006年5月10日 申請(qǐng)日期2004年11月4日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月4日
發(fā)明者常弘杰, 朱嘉蓉, 馮開東 申請(qǐng)人:深圳太太藥業(yè)有限公司