專利名稱：一種用于肺部給藥的干擾素粉霧劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種高效干擾素粉霧劑配方及其制備方法。尤其是可經(jīng)過(guò)口腔或鼻腔吸入后在鼻腔、口腔、氣管和肺部吸收而發(fā)揮藥效的干擾素粉霧劑配方及其制備方法。
背景技術(shù)：
干擾素(interferon，INF)是動(dòng)物細(xì)胞在誘生劑的刺激作用下產(chǎn)生的一種高活性多功能的細(xì)胞因子，具有很強(qiáng)的抗病毒活性，而且一種干擾素能夠抑制多種病毒的增殖，在醫(yī)學(xué)上是一類廣譜的抗病毒藥物。干擾素可治療肝炎、流行性感冒等常見病毒性疾病，也有抗癌細(xì)胞增殖的作用，并已應(yīng)用于乳腺癌、骨髓癌等多種癌癥的治療。
由于蛋白多肽類藥物極易失活，所以絕大多數(shù)為注射給藥，例如干擾素α-2b治療肝炎，每周注射給藥3-5次，因而具有以下難以克服的缺點(diǎn)患者適應(yīng)性差、針頭感染的危險(xiǎn)性、高昂的費(fèi)用等；加之干擾素的水溶液中常使用人血清白蛋白(HSA)作為穩(wěn)定劑，因而不免有污染和傳播疾病的潛在危險(xiǎn)；患者注射后常伴有發(fā)熱、寒顫、肌肉痛等副作用，也可能與注射給藥有關(guān)，因此干擾素的臨床應(yīng)用極大地受到了限制。
鑒于蛋白類藥物的胃腸道給藥遲遲未能突破技術(shù)上的障礙，肺部給藥則是比較理想的替代給藥途徑。肺部給藥具有下列優(yōu)點(diǎn)1、肺部的酶比消化道少得多，主要是一些肺表面活性物質(zhì)；2、吸收面積高達(dá)140m2；3、血流量大，達(dá)到5000mL/min；4、肺泡為單層細(xì)胞，其表面是一層半透膜，肺泡壁比毛細(xì)血管壁還要薄，厚度小于0.1μm，通透性好，蛋白大分子易于透過(guò)；5、繞過(guò)了肝臟的首過(guò)效應(yīng)；6、患者順應(yīng)性好，特別適用于需進(jìn)行長(zhǎng)期治療的病人；7、藥物吸收迅速，給藥后起效快；8、藥物吸收后直接進(jìn)入體循環(huán)，達(dá)到全身治療的目的；9、起局部治療作用時(shí)，給藥劑量明顯降低，毒副作用小。
肺部吸入給藥的劑型常見的有氣霧劑、粉霧劑和噴霧劑。但噴霧劑中作為動(dòng)力源的氟氯烷類拋射劑可破壞大氣的臭氧層，對(duì)環(huán)境構(gòu)成極大的威脅；氣霧劑須采用超聲波霧化吸入器，把干擾素溶于生理鹽水中，霧化吸入，由于設(shè)備價(jià)格昂貴，操作復(fù)雜，臨床使用受到了限制。中國(guó)專利CN1073119C批準(zhǔn)授權(quán)了美國(guó)吸入治療系統(tǒng)公司申請(qǐng)的“干擾素干粉配方的方法及組合物”發(fā)明專利，該發(fā)明的干粉配方中采用人血清白蛋白作為干擾素溶液的穩(wěn)定劑來(lái)制備粉霧劑，因而不免有污染和傳播疾病的潛在危險(xiǎn)。目前，越來(lái)越多的生物制品在可能的條件下，盡量不使用人血清白蛋白作為保護(hù)劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，提供一種含有干擾素的粉霧劑，經(jīng)肺部給藥，從而為患者提供注射給藥外的另一種給藥途徑。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種治療支氣管及肺部局部疾病的干擾素制劑。
本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供一種不含拋射劑的可吸入給藥的干擾素經(jīng)肺給藥制劑，從而避免使用氟氯烷烴類對(duì)環(huán)境造成的破壞和拋射劑對(duì)口腔及呼吸道產(chǎn)生的刺激性。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種不含吸收促進(jìn)劑的干擾素粉霧劑。這就防止了因長(zhǎng)期使用吸收促進(jìn)劑對(duì)肺部產(chǎn)生損害。
本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種不含人血清白蛋白(HSA)的干擾素吸入制劑。人血清白蛋白的來(lái)源如果控制不好容易造成血液病的傳播，因而從根本上杜絕了此類疾病的發(fā)生。
本發(fā)明還有一個(gè)目的就是公開了用于肺部給藥的干擾素粉霧劑的制備方法，經(jīng)大量的實(shí)驗(yàn)研究，制備出了粒徑適中、密度小、霧化性能好，而且不易吸濕的干擾素粉霧劑。
眾所周知，良好的粉體學(xué)性質(zhì)對(duì)干粉吸入劑的成敗和質(zhì)量保證具有重要意義，其中最為重要的是顆粒的表面形態(tài)、粉末的粒徑及粒徑分布、流動(dòng)性、堆密度、敲密度、霧化性能、吸濕性和荷電性。粒徑對(duì)沉積部位有著直接影響小于0.5μm時(shí)，隨氣流呼出；1-5μm時(shí)，沉積于肺泡；4-7μm時(shí)，沉積于氣道；大于7μm時(shí)，沉積于口咽部。因此粒徑最好是控制在2-4μm的范圍內(nèi)，不應(yīng)超過(guò)0.5-6μm的范圍。顆粒表面形態(tài)和粉末密度與細(xì)粉在氣體中飛行時(shí)的順應(yīng)性直接相關(guān)，密度越小，越容易隨著氣體飛行流動(dòng)。粉末的流動(dòng)性對(duì)于藥物含量的均一性和藥粉的填裝也產(chǎn)生影響。粉霧劑由于藥粉粒徑小、比表面積大，極易吸潮而聚集成塊，用藥時(shí)不易分散從而影響到療效。
根據(jù)粉霧劑的以上特點(diǎn)，需要對(duì)藥粉的粒徑、密度、霧化性能和吸濕性加以重點(diǎn)考慮。
本發(fā)明要解決的技術(shù)難題主要有以下幾個(gè)方面(1).在不加入人血清白蛋白作為保護(hù)劑的情況下，保持干擾素在與一定輔料制成固態(tài)粉末過(guò)程中的穩(wěn)定性。(2).選擇與干擾素配伍的載體，使得到的干擾素粉末粒徑適中、密度小、霧化性能好，而且不易吸濕。具有較好的粉體學(xué)性質(zhì)。
為解決上述任務(wù)，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種用于肺部給藥的干擾素粉霧劑，其特征在于由下列物質(zhì)按重量百分比組成干擾素0.0002％-0.8％；稀釋劑70％-97.9％；活性保護(hù)劑0.01％-5％；分散性助劑0％-25％；保持pH值4-9范圍的緩沖鹽體系。
其中干擾素粉霧劑組成中不含人血白蛋白和吸收促進(jìn)劑。所述干擾素包括重組人干擾素α-2a、重組人干擾素α-2b、重組干擾素β及重組干擾素γ。主要是指重組人干擾素α-2a、重組人干擾素α-2b。
緩沖劑如枸櫞酸-枸櫞酸鈉、磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉、枸櫞酸-磷酸氫二鈉、抗壞血酸-抗壞血酸鈉等緩沖體系，優(yōu)選的是含枸櫞酸或枸櫞酸鈉的pH調(diào)節(jié)劑。緩沖體系的適當(dāng)選擇對(duì)于緩解肺部的刺激性和提高干擾素的穩(wěn)定性都有不可忽視的作用。
賴氨酸、2-羥丙基-β-環(huán)糊精、大豆卵磷脂、羥丙基甲基纖維素都是很有用的活性保護(hù)劑，它們可以使IFN在干燥過(guò)程中保持較高的活性。
有用的稀釋劑主要指的是一些碳水化合物，如D-甘露糖、山梨糖、乳糖、海藻糖、棉籽糖、糊精、甘露醇、木糖醇等。優(yōu)選的碳水化合物是乳糖和甘露醇。適宜的稀釋劑還包括氨基酸，如甘氨酸、亮氨酸、蘇氨酸等。他們主要是起到一種稀釋劑的作用，作為干擾素的賦型劑。另外，他們對(duì)干擾素粉霧劑的粉體學(xué)也產(chǎn)生影響。
適宜的分散性助劑包括酪氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸等，優(yōu)選的是亮氨酸。分散性助劑能提高粉末的分散性和隨氣體流動(dòng)的順應(yīng)性，從而增加粉末的可吸入部分，使之有更多的量沉積于肺部。
一種用于肺部給藥的干擾素粉霧劑的制備方法，其特征在于包括下列步驟按一定配比將干擾素、緩沖鹽、稀釋劑、活性保護(hù)劑、分散性助劑混合，配制成固含量為0.03-9％的干擾素液相組合物。然后如下操作
將液相組合物通過(guò)適當(dāng)方法揮去水分使成干燥固體，然后氣流粉碎成平均粒徑小于10μm大小適宜的顆粒；或?qū)⒁合嘟M合物通過(guò)適當(dāng)方法揮去水分使成干燥固體，然后用球磨機(jī)研磨成平均粒徑小于10μm大小適宜的顆粒；或?qū)⒁合嘟M合物采用噴霧干燥，制得平均粒徑小于10μm的顆粒。
本發(fā)明中所謂“液相組合物”或“液相組成“指的是一種以水為主要分散介質(zhì)的、比較均勻的、能自由流動(dòng)的體系，可以是溶液、混懸液、乳狀液，也可以指別的以水為主要介質(zhì)的膠體分散體系。所謂揮去水分的“適當(dāng)方法”包括噴霧干燥、冷凍干燥、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、真空干燥等，也可以是自然放干。所謂“干“是指含水量按重量計(jì)低于10％，通常為5％以下，更好的是3％以下，最好是低于1.5％。
這種高效價(jià)的干擾素粉霧劑經(jīng)歷了液相組成的干燥過(guò)程。在干燥過(guò)程中，干擾素分散于一種緩沖鹽液相體系，干擾素的濃度按重量計(jì)濃度為0.0002％-0.8％，較好為0.0002％-0.2％，優(yōu)選為0.002％-0.1％的溶液。
該液相組成是一種緩沖體系，其pH值控制在4-9之間，優(yōu)選的是5-8，最好pH值在6-7.3之間。所加入緩沖鹽體系的量，以調(diào)節(jié)液相組成pH的范圍來(lái)確定。該液相組成還含有一種能保持干擾素在干燥過(guò)程中穩(wěn)定的活性保護(hù)劑，如賴氨酸、2-羥丙基-β-環(huán)糊精、大豆卵磷脂、羥丙基甲基纖維素等，其濃度按重量計(jì)為0.01％-5％，較好為0.01％-1％，優(yōu)選的是0.03％-0.3％。
該液相組成還含有一種稀釋劑，如D-甘露糖、山梨糖、乳糖、海藻糖、棉籽糖、糊精、甘露醇、木糖醇等。優(yōu)選的碳水化合物是乳糖和甘露醇。適宜的稀釋劑還包括氨基酸，如甘氨酸、亮氨酸、蘇氨酸等。其濃度按重量計(jì)為70％-97.9％。
該液相組成中，根據(jù)需要可以加入或不加入分散性助劑，如酪氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸等，優(yōu)選的是亮氨酸，其濃度為0％-25％，優(yōu)選的是0％-15％。
該液相組成中還可含有其他物質(zhì)，如存在于干擾素原料中的鹽或防腐劑等。將上述固含量為0.03％-9％的液相組成制成干燥物。
采用噴霧干燥時(shí)對(duì)噴霧方法和霧化器的噴嘴沒(méi)有特殊的限制。建議使用能夠產(chǎn)生微粒直徑適于鼻腔、口咽部或肺部給藥的干燥粉末的噴嘴。
對(duì)用于使溶液霧化的氣體和干燥噴霧物質(zhì)的氣體都沒(méi)有特殊的限制，建議使用空氣或別的惰性氣體如氮?dú)?。用于干燥噴霧物質(zhì)的氣體，其入口溫度或出口溫度應(yīng)控制到不使干擾素失活的溫度。進(jìn)口氣體的溫度范圍約為60℃-180℃，優(yōu)選的是約70℃-140℃。出口氣體的溫度約為30℃-140℃，優(yōu)選的是30℃-80℃。鑒于干擾素在55℃開始滅活，約70℃時(shí)幾乎全部滅活，用噴霧干燥法制得的活性保留在70％以上、甚至90％以上是非常令人驚奇的。
干燥粉末在吸入器中應(yīng)能易于分散，隨后可供病人吸入到達(dá)肺部，也就是說(shuō)該粉是能被吸入的。因而微粒的粒徑應(yīng)小于10微米，較好的是小于5微米。通常粒徑分布約為0.1-5微米，最好是約為2-4微米。
干燥粉末的敲擊密度通常為1.5g/cm3以下，較好的是0.8g/cm3以下，更好的是0.6g/cm3以下。敲擊密度越小，則大粒徑的微粒越容易進(jìn)入肺泡部位。比如敲擊密度小于0.3g/cm3時(shí)，粒徑為9微米以上的粉末也有可能進(jìn)入肺泡。
干燥粉末的含水量應(yīng)能使微粒在吸入過(guò)程中易于分散形成粉霧。水分通常為8％以下，較好為5％以下，進(jìn)一步還可以達(dá)到3％以下，最好是低于1.5％。
微粒的表面可以是光滑的，也可以是粗糙的；微粒的形狀可以是球狀，也可以是長(zhǎng)方體或別的形狀。但是大多數(shù)噴霧干燥粉末的微粒都是表面光滑的球狀。
通過(guò)將溶液中的填充劑減少到最少用量來(lái)制備高效價(jià)的干擾素粉末，以減少高劑量給藥的用藥次數(shù)是可以達(dá)到的。
本發(fā)明的干擾素可與適于吸入給藥或肺部給藥的藥物載體或賦形劑結(jié)合。這些載體可在噴霧干燥前與干擾素結(jié)合。即將載體加到原料溶液中，形成均一的溶液、乳劑或混懸液，經(jīng)噴霧干燥形成均勻粉末。此時(shí)的載體一方面起到賦形劑或稀釋劑的作用；另一方面也可用于提高干擾素粉霧劑的穩(wěn)定性；還可用于增加粉末的分散性；還可以用于提高粉末的抗?jié)裥浴?br> 另一種也可以是將干擾素與載體分別制成干粉形式后再混合。載體微粒的大小是可以選擇的，以用于增加干擾素粉末的操作性能。比如可以將干擾素噴干粉與粒徑為0.5-10微米的載體混合，用來(lái)提高粉末的流動(dòng)性或分散性。這種粒徑與干擾素噴干粉末大小相似，乳糖、甘露醇、亮氨酸、甚至微粉硅膠、滑石粉和硬脂酸鎂都是可以選用的，優(yōu)選的載體是乳糖和亮氨酸。但是更常用的載體微粒大小為25-200微米，優(yōu)選的是25-100微米，此時(shí)載體主要是用來(lái)稀釋藥物或者加快制造和粉末填充的過(guò)程。這種粒徑比干擾素噴干粉大得多的載體物質(zhì)，優(yōu)選的是大小為上述范圍的結(jié)晶乳糖。
干擾素與一定的載體干燥形成的粉末，可以單獨(dú)裝填于吸入裝置、也可以與別的載體粉末混合后再一起裝填于吸入裝置。這種吸入裝置的劑量容器可以是明膠膠囊或羥丙基甲基纖維素膠囊或塑料膠囊，也可以使用鋁箔塑料薄片制成的囊泡。這種吸入器既可以是單劑量的也可以是多劑量的。
本發(fā)明的粉霧劑具有如下的優(yōu)點(diǎn)1、以呼吸觸發(fā)給藥裝置，不需要患者將裝置的觸發(fā)與吸氣協(xié)調(diào)起來(lái)，方便了用藥，特別適合兒童及老人患者；2、不含推進(jìn)劑，因而不涉及環(huán)境危害問(wèn)題；3、粉霧劑比液體噴霧劑具有較高的化學(xué)穩(wěn)定性和微生物穩(wěn)定性；4、不含防腐劑及酒精等溶劑，對(duì)病變粘膜無(wú)刺激性；5、給藥劑量大，尤其適用于多肽和蛋白類藥物的給藥。


圖1卵磷脂為保護(hù)劑時(shí)噴霧干燥得的電鏡掃描圖；圖22-羥丙基-β-環(huán)糊精(HPCD)為保護(hù)劑時(shí)噴霧干燥得的電鏡掃描圖；圖3賴氨酸為保護(hù)劑時(shí)噴霧干燥得的電鏡掃描圖；圖4羥丙基甲基纖維素為保護(hù)劑時(shí)噴霧干燥得的電鏡掃描圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的描述，但這些實(shí)施例并非對(duì)本發(fā)明的限制。
實(shí)施例1-5主要是說(shuō)明幾種穩(wěn)定劑對(duì)干擾素在噴霧干燥中的活性保護(hù)作用；實(shí)施例6-8主要闡述填充劑以及分散性助劑對(duì)噴霧干燥粉末吸濕性的影響；實(shí)施例9-11主要例析了干擾素粉霧劑的沉積性能；實(shí)施例12-13主要介紹了不同于噴霧干燥的干燥方法和粉碎方法。
實(shí)施例1本實(shí)施例闡述一種加入卵磷脂作為活性保護(hù)劑制備高活性的干擾素噴霧干燥粉末方法。
用作噴霧干燥的液相，其組成是枸櫞酸0.38mg/ml、磷酸氫二鈉3.8mg/ml、大豆卵磷脂1.34mg/ml、乳糖66.7mg/ml、每毫升乳狀液含干擾素α-2b約4萬(wàn)國(guó)際單位，測(cè)得溶液pH值為7.05。所得乳狀液用Buchi minispray dryer B-191進(jìn)行噴霧干燥(下同，不再提及)，噴霧條件如下溶液溫度 6℃-8℃進(jìn)口溫度 110℃出口溫度 70℃-80℃噴嘴空氣流速 500l/h噴液速度 1.8ml/min
一旦溶液噴完，降低進(jìn)口溫度，使出口溫度維持在60℃-70℃左右約10分鐘，對(duì)干擾素噴霧干燥粉末進(jìn)行二次干燥，進(jìn)一步降低含水量。
噴霧干燥粉末形態(tài)見圖1。由圖可見，微粒呈球形，粒徑不太均勻，從0.6微米到16微米不等；粒子表面不光滑，有許多凹陷的小坑；顆粒中空。
用細(xì)胞病變抑制法測(cè)定干擾素的活性。采用Hep-2/VSV系統(tǒng)檢測(cè)干擾素的生物學(xué)活性，由標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)算出樣品的效價(jià)。噴霧干燥后，干擾素的活性與噴霧干燥前比為108％。表明大豆卵磷脂對(duì)干擾素具有很好的穩(wěn)定作用。
實(shí)施例2本實(shí)施例闡述一種加入HPCD作為活性保護(hù)劑制備高活性的干擾素噴霧干燥粉末方法。
用作噴霧干燥的液相，其組成是枸櫞酸0.076mg/ml、枸櫞酸鈉1.8mg/ml、磷酸氫二鈉0.76mg/ml、HPCD 0.67mg/ml、乳糖66.7mg/ml、每毫升溶液含干擾素α-2a約20萬(wàn)國(guó)際單位，測(cè)得溶液pH值為6.92。
噴霧條件如下溶液溫度4℃-6℃進(jìn)口溫度110℃出口溫度60℃-70℃噴嘴氮?dú)饬魉?70l/h噴液速度2.1ml/min噴槍冷凝系統(tǒng)開一旦溶液噴完，降低進(jìn)口溫度，使出口溫度維持在60℃-70℃左右約10分鐘，對(duì)干擾素噴霧干燥粉末進(jìn)行二次干燥，進(jìn)一步降低含水量。
噴霧干燥粉末形態(tài)見圖2。由圖可見，微粒呈球形，粒徑不太均勻，從0.4微米到10微米不等；粒子表面比較光滑，僅有不明顯的凹陷；顆粒也是中空的。
用細(xì)胞病變抑制法測(cè)定干擾素的活性。采用Hep-2/VSV系統(tǒng)檢測(cè)干擾素的生物學(xué)活性，由標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)算出樣品的效價(jià)。噴霧干燥后，干擾素的活性與噴霧干燥前比為128％。表明HPCD對(duì)干擾素具有很好的穩(wěn)定作用。
實(shí)施例3本實(shí)施例闡述一種以賴氨酸作為穩(wěn)定劑制備高活性的干擾素噴霧干燥粉末方法。
用作噴霧干燥的液相，其組成是枸櫞酸0.38mg/ml、磷酸氫二鈉3.8mg/ml、賴氨酸0.67mg/ml、乳糖66.7mg/ml、每毫升乳狀液含干擾素α-2a約4萬(wàn)國(guó)際單位，測(cè)得溶液pH值為6.81。
噴霧條件如下溶液溫度 7℃-9℃進(jìn)口溫度 110℃出口溫度 60℃-70℃噴嘴空氣流速 500l/h噴液速度 1.8ml/min一旦溶液噴完，降低進(jìn)口溫度，使出口溫度維持在60℃-70℃左右約10分鐘，對(duì)干擾素噴霧干燥粉末進(jìn)行二次干燥，進(jìn)一步降低含水量。
噴霧干燥粉末形態(tài)見圖3。由圖可見，微粒呈球形，粒徑比較均勻，從0.8微米到12微米不等；粒子表面比較光滑，僅有不明顯的凹陷；顆粒也是中空的。
用細(xì)胞病變抑制法測(cè)定干擾素的活性。采用Hep-2/VSV系統(tǒng)檢測(cè)干擾素的生物學(xué)活性，由標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)算出樣品的效價(jià)。噴霧干燥后，干擾素的活性與噴霧干燥前比為120％。表明賴氨酸對(duì)干擾素具有很好的穩(wěn)定作用。
實(shí)施例4本實(shí)施例闡述一種以羥丙基甲基纖維素為活性保護(hù)劑制備高活性的干擾素噴霧干燥粉末方法。
用作噴霧干燥的液相，其組成是枸櫞酸0.38mg/ml、磷酸氫二鈉3.8mg/ml、羥丙基甲基纖維素1.33mg/ml、乳糖66.7mg/ml、每毫升溶液含干擾素α-2b約4萬(wàn)國(guó)際單位。
噴霧條件如下溶液溫度6℃-8℃進(jìn)口溫度110℃出口溫度70℃-80℃噴嘴空氣流速500l/h噴液速度1.8ml/min一旦溶液噴完，降低進(jìn)口溫度，使出口溫度維持在60℃-70℃左右約10分鐘，對(duì)干擾素噴霧干燥粉末進(jìn)行二次干燥，進(jìn)一步降低含水量。
用細(xì)胞病變抑制法測(cè)定干擾素的活性。采用Hep-2/VSV系統(tǒng)檢測(cè)干擾素的生物學(xué)活性，由標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)算出樣品的效價(jià)。噴霧干燥后，干擾素的活性與噴霧干燥前比為116％。表明羥丙基甲基纖維素對(duì)干擾素具有很好的穩(wěn)定作用。
噴霧干燥粉末形態(tài)見圖4。由圖可見，微粒形狀很不規(guī)則，粒徑比較均勻，從0.3微米到4微米不等；粒子表面有許多深度凹坑和塌陷。
實(shí)施例5本實(shí)施例闡述一種以十二烷基硫酸鈉為穩(wěn)定劑制備高活性的干擾素噴霧干燥粉末方法。
用作噴霧干燥的液相，其組成是枸櫞酸0.38mg/ml、磷酸氫二鈉3.8mg/ml、十二烷基硫酸鈉0.13mg/ml、乳糖66.7mg/ml、每毫升溶液含干擾素α-2b約8萬(wàn)國(guó)際單位。
噴霧條件如下溶液溫度 6℃-8℃進(jìn)口溫度 110℃出口溫度 70℃-80℃噴嘴空氣流速 500l/h噴液速度 1.8ml/min一旦溶液噴完，降低進(jìn)口溫度，使出口溫度維持在60℃-70℃左右約10分鐘，對(duì)干擾素噴霧干燥粉末進(jìn)行二次干燥，進(jìn)一步降低含水量。
用細(xì)胞病變抑制法測(cè)定干擾素的活性。采用Hep-2/VSV系統(tǒng)檢測(cè)干擾素的生物學(xué)活性，由標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)算出樣品的效價(jià)。噴霧干燥后，干擾素的活性與噴霧干燥前比為95％。表明十二烷基硫酸鈉對(duì)干擾素具有很好的穩(wěn)定作用。實(shí)施例1-5所述的噴霧干燥粉末都具有較強(qiáng)的吸濕性，這大大限制了粉霧劑的應(yīng)用。因而考慮用另一種填充劑甘露醇替代乳糖，對(duì)比二者的吸濕性能。
實(shí)施例6本實(shí)施例主要闡述以乳糖為填充劑時(shí)噴霧干燥粉末的吸濕性用作噴霧干燥的液相，其組成是枸櫞酸0.09mg/ml、枸櫞酸鈉1.8mg/ml、乳糖14mg/ml。每毫升乳狀液含干擾素α-2α約10萬(wàn)國(guó)際單位。
噴霧條件如下溶液溫度 6℃-8℃進(jìn)口溫度 110℃出口溫度 70℃-80℃噴嘴空氣流速 800l/h噴液速度 2.4ml/min
一旦溶液噴完，降低進(jìn)口溫度，使出口溫度維持在60℃-70℃左右約10分鐘，對(duì)干擾素噴霧干燥粉末進(jìn)行二次干燥，進(jìn)一步降低含水量。
粒徑及形態(tài)觀察用普通光學(xué)顯微鏡對(duì)噴霧干燥粉末的粒徑和形態(tài)進(jìn)行觀察。具體操作是取約1毫克粉末，均勻分散于載玻片上，使微粒之間少有重疊或接觸。放大倍數(shù)為目鏡10倍，物鏡100倍。結(jié)果表明微粒是大小基本均勻的卵圓形，平均粒徑約1.1微米。
吸濕性試驗(yàn)精密稱取約0.3克樣品，平鋪于一敞口玻璃瓶底部，于相對(duì)濕度75％條件下放置，并于24小時(shí)、72小時(shí)后取出觀察粉末外觀，精密稱重，算出吸濕百分比。結(jié)果為24小時(shí)后吸濕量為6.1％，72小時(shí)后為11.8％。樣品性狀結(jié)塊，搖之不散，重重敲擊也不能從瓶底掉下。
堆密度與敲擊密度的測(cè)定堆密度和敲擊密度的測(cè)定稱取大約3克的樣品，小心倒入10毫升量筒中，使無(wú)明顯孔隙，讀取體積，用質(zhì)量除以體積就得到堆密度；再用粉體物性測(cè)定儀測(cè)定敲擊密度，具體地說(shuō)從振動(dòng)幅度為3厘米、使之敲擊約1000下，待體積無(wú)明顯減少時(shí)讀取敲擊體積，用質(zhì)量除以敲擊體積就得到敲擊密度。測(cè)得堆密度為0.26mg/cm3、敲擊密度為0.49mg/ml。
實(shí)施例7本實(shí)施例主要闡述以甘露醇為填充劑時(shí)噴霧干燥粉末的吸濕性用作噴霧干燥的液相，其組成是枸櫞酸0.09mg/ml、枸櫞酸鈉1.8mg/ml、甘露醇14mg/ml。每毫升溶液含干擾素α-2b約10萬(wàn)國(guó)際單位。
噴霧條件如下溶液溫度6℃-8℃進(jìn)口溫度100℃出口溫度65℃-75℃噴嘴空氣流速800l/h噴液速度4.5ml/min一旦溶液噴完，降低進(jìn)口溫度，使出口溫度維持在60℃-70℃左右約10分鐘，對(duì)干擾素噴霧干燥粉末進(jìn)行二次干燥，進(jìn)一步降低含水量。
粒徑及形態(tài)觀察方法同實(shí)施例6，結(jié)果表明得到的微粒比實(shí)施例6的粉末大小更均勻，而且形態(tài)更加圓整，平均粒徑約1.2微米。
吸濕性試驗(yàn)方法同實(shí)施例6，結(jié)果為24小時(shí)后吸濕量為2.8％，72小時(shí)后為1.7％。樣品性狀結(jié)塊，搖之不散，輕輕磕之成塊狀掉下，捻之成粉狀。
堆密度與敲擊密度的測(cè)定方法同實(shí)施例6，測(cè)得堆密度為0.21mg/cm3、敲擊密度為0.40mg/ml。
取適當(dāng)將實(shí)施例6和實(shí)施例7的樣品進(jìn)行差熱分析，發(fā)現(xiàn)乳糖在噴霧干燥后沒(méi)有明顯的吸熱峰，表明干燥乳糖基本上以無(wú)定形存在；而甘露醇在噴霧干燥前后的吸熱峰變化不大，表明噴霧干燥的甘露醇基本上仍然以結(jié)晶為主。這就有可能解釋了實(shí)施例7的樣品比實(shí)施例6的樣品具有更好抗?jié)裥缘脑颉?br> 實(shí)施例8本實(shí)施例主要闡述以甘露醇為填充劑、以亮氨酸為分散性助劑的噴霧干燥粉末的吸濕性用作噴霧干燥的液相，其組成是枸櫞酸0.09mg/ml、枸櫞酸鈉1.8mg/ml、甘露醇14mg/ml、L-亮氨酸1.01mg/ml。每毫升乳狀液含干擾素α-2b約80萬(wàn)國(guó)際單位。
噴霧條件如下溶液溫度 6℃-8℃進(jìn)口溫度 100℃出口溫度 65℃-75℃噴嘴空氣流速 800l/h噴液速度 4.5ml/min一旦溶液噴完，降低進(jìn)口溫度，使出口溫度維持在60℃-70℃左右約10分鐘，對(duì)干擾素噴霧干燥粉末進(jìn)行二次干燥，進(jìn)一步降低含水量。
粒徑及形態(tài)觀察方法同實(shí)施例6，結(jié)果表明得到的微粒大小均勻，而且形態(tài)圓整，平均粒徑約1.1微米。
吸濕性試驗(yàn)方法同實(shí)施例6，結(jié)果為24小時(shí)后吸濕量為2.6％，72小時(shí)后為1.4％。樣品性狀結(jié)塊，搖之不散，但輕輕磕之即成松散的粉末，比不加分散性助劑時(shí)更易分散。
堆密度與敲擊密度的測(cè)定方法同實(shí)施例7，測(cè)得堆密度為0.22mg/cm3、敲擊密度為0.42mg/ml。噴霧干燥粉末在囊殼中的粘連方法同實(shí)施例6，求得粉末殘留于膠囊的量為3.9％。
實(shí)施例9本實(shí)施例闡述一種以賴氨酸為保護(hù)劑，制備高活性的、并具有較高的體外沉積率的干擾素噴霧干燥粉末方法。
用作噴霧干燥的液相，其組成是枸櫞酸0.09mg/ml、枸櫞酸鈉1.8mg/ml、甘露醇14mg/ml、L-亮氨酸1.01mg/ml、賴氨酸0.36mg/ml，每毫升溶液含干擾素α-2a約100萬(wàn)國(guó)際單位。
噴霧條件如下溶液溫度 6℃-8℃進(jìn)口溫度 100℃出口溫度 65℃-75℃噴嘴空氣流速 800l/h噴液速度 4.5ml/min效價(jià)測(cè)定鑒于細(xì)胞病變抑制法測(cè)定干擾素的活性影響因素較多，測(cè)定結(jié)果偏差加大，而且檢測(cè)周期長(zhǎng)，因而利用夾心法ELISA測(cè)定干擾素的效價(jià)。選用兩種單克隆抗體，一種作為包被抗體，另一種單克隆抗體標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶作為結(jié)合物，催化底物顯色。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出待檢樣品的含量或者效價(jià)。該法周期短，重復(fù)性好，適于大批量樣品的檢測(cè)。噴霧干燥后，干擾素的活性與噴霧干燥前比為93.6％，表明在噴霧干燥過(guò)程中干擾素的活性是能保持的。
粒徑及形態(tài)觀察方法同實(shí)施例6，結(jié)果表明微粒是大小基本均勻的球形，聚集并不嚴(yán)重，平均粒徑1.4微米。
堆密度和敲擊密度的測(cè)定方法同實(shí)施例6，結(jié)果堆密度為0.341g/cm3；敲擊密度為0.720g/cm3。
沉積實(shí)驗(yàn)將噴霧干燥粉末直接裝入明膠膠囊(粉末)，也可以與25-100微米的乳糖載體適量混合后再裝入明膠膠囊(載體-明膠)或者羥丙基甲基纖維素膠囊(載體-羥丙基甲基纖維素)，按中國(guó)藥典2000年版二部附錄X H進(jìn)行沉積測(cè)定。用空白接受液清洗一級(jí)沉積瓶、模擬喉部以及模擬頸部的內(nèi)表面，合并接受液，定容；用空白接受液清洗導(dǎo)入下部錐形瓶的導(dǎo)管的內(nèi)、外壁，洗液與下層接受液合并，定容；打開試驗(yàn)用過(guò)的膠囊，用滴管吸取接受液沖洗膠囊囊殼的內(nèi)外壁，定容。按照上述效價(jià)測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定，沉積結(jié)果見表1。
表1.賴氨酸為保護(hù)劑時(shí)沉積結(jié)果

加速試驗(yàn)將噴霧干燥粉末與25-100微米的乳糖載體適量混合后再裝入明膠膠囊，置40℃、75％ RH環(huán)境中，48小時(shí)后取出，觀察粉末性狀的變化，結(jié)果粉末結(jié)成一塊，但是輕輕擠壓則散。按沉積實(shí)驗(yàn)操作測(cè)定分散性，結(jié)果一級(jí)沉積為63.0％，二級(jí)沉積為29.6％，囊殼殘留為7.3％。
實(shí)施例10本實(shí)施例闡述一種以HPCD為保護(hù)劑，制備高活性的、并具有較高的體外沉積率的干擾素噴霧干燥粉末方法。
用作噴霧干燥的液相，其組成是枸櫞酸0.09mg/ml、枸櫞酸鈉1.8mg/ml、甘露醇14mg/ml、L-亮氨酸1.01mg/ml、HPCD 0.4mg/ml，每毫升溶液含干擾素α-2b約100萬(wàn)國(guó)際單位。
按實(shí)施例9進(jìn)行噴霧干燥、效價(jià)測(cè)定、粒徑及形態(tài)觀察、堆密度和敲擊密度的測(cè)定、沉積實(shí)驗(yàn)和加速試驗(yàn)。干擾素的活性與噴霧干燥前比為98.0％，表明HPCD也是一種高效的穩(wěn)定劑。微粒形態(tài)多為圓形，大小比較均一，聚集不是太嚴(yán)重。沉積結(jié)果見表2。
表2.HPCD為保護(hù)劑時(shí)沉積結(jié)果

加速試驗(yàn)結(jié)果，粉末性狀由可流動(dòng)的粉末變?yōu)榻Y(jié)成一塊，但是輕輕擠壓則散。按沉積實(shí)驗(yàn)測(cè)定分散性，結(jié)果一級(jí)沉積為70.5％，二級(jí)沉積為23.6％，囊殼殘留為5.8％。
實(shí)施例11本實(shí)施例闡述一種以大豆卵磷脂為穩(wěn)定劑，制備高活性的干擾素噴霧干燥粉末方法。
用作噴霧干燥的液相，其組成是枸櫞酸0.09mg/ml、枸櫞酸鈉1.8mg/ml、乳糖14mg/ml。每毫升乳狀液含干擾素α-2α約10萬(wàn)國(guó)際單位。
按實(shí)施例9進(jìn)行噴霧干燥、效價(jià)測(cè)定、粒徑及形態(tài)觀察。干擾素的活性與噴霧干燥前比為98.7％，表明在噴霧干燥過(guò)程中干擾素的活性幾乎沒(méi)有受到破壞。形態(tài)多為橢圓形，少數(shù)極不規(guī)則，粒徑大小相差較大，聚集較為嚴(yán)重。平均粒徑為1.1微米將噴霧干燥粉末與25-100微米的乳糖載體適量混合后再裝入明膠膠囊，
按按實(shí)施例9進(jìn)行沉積實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表3。
表3.大豆卵磷脂為保護(hù)劑時(shí)的沉積結(jié)果

由沉積結(jié)果可知，噴霧干燥粉末的粒徑及粒徑分布、微粒的形態(tài)以及微粒間的聚集性，都極大地影響著粉末的沉積性能。
實(shí)施例12本實(shí)施例闡述一種以旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥、以氣流粉碎法進(jìn)行粉碎，用以制備高活性的干擾素粉末方法。
用作旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥的液相，其組成是枸櫞酸0.38mg/ml、磷酸二氫鈉2.59mg/ml、乳糖142mg/ml、大豆卵磷脂0.043mg/ml，每毫升溶液含干擾素α-2b約31萬(wàn)國(guó)際單位。
將上述液相體系在40℃、真空度進(jìn)行減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去水分，得到干燥固體，然后氣流粉碎。
干擾素的活性保留為處理前的108.7％，表明在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)或氣流粉碎過(guò)程中干擾素的活性幾乎沒(méi)有受到破壞。形態(tài)基本為圓形，少數(shù)極不規(guī)則，粒徑大小比較均勻，聚集較為嚴(yán)重。平均粒徑為5.1微米。
將氣流粉碎后的干燥粉末與25-100微米的乳糖載體適量混合后再裝入明膠膠囊，按實(shí)施例9進(jìn)行沉積實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表4。
表4.氣流粉碎粉末的沉積結(jié)果

實(shí)施例13本實(shí)施例闡述一種以旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法干燥、以球磨機(jī)進(jìn)行粉碎，用以制備較高活性的干擾素粉末方法。
用作旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥的液相，其組成是枸櫞酸0.38mg/ml、磷酸二氫鈉2.59mg/ml、乳糖142mg/ml、HPCD 0.043mg/ml，每毫升溶液含干擾素α-2b約40萬(wàn)國(guó)際單位。
將上述液相體系在40℃、真空度進(jìn)行減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去水分，得到干燥固體，然后用球磨機(jī)粉碎。
干擾素的活性保留為處理前的78.9％，表明在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)或球磨粉碎過(guò)程中干擾素的活性幾乎沒(méi)有受到破壞。形態(tài)基本不太規(guī)則，粒徑大小比較懸殊，聚集較為嚴(yán)重。平均粒徑為10.1微米。
將粉碎后的干燥粉末與25-100微米的乳糖載體適量混合后再裝入明膠膠囊，按實(shí)施例9進(jìn)行沉積實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表5。
表5.氣流粉碎粉末的沉積結(jié)果

盡管本發(fā)明結(jié)合它的專門的實(shí)施例已做了詳細(xì)的描述，但是很明顯對(duì)本技術(shù)領(lǐng)域的熟練人來(lái)說(shuō)仍能做出各種各樣的變化和改進(jìn)，都不會(huì)偏離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種用于肺部給藥的干擾素粉霧劑，其特征在于由下列物質(zhì)按重量百分比組成干擾素 0.0002％-0.8％；稀釋劑 70％-97.9％；活性保護(hù)劑 0.01％-5％；分散性助劑 0％-25％；保持pH值4-9范圍的緩沖鹽體系。
2.如權(quán)利要求1所述干擾素粉霧劑，其特征在于干擾素粉霧劑的組成中不含人血白蛋白和吸收促進(jìn)劑。
3.如權(quán)利要求1所述干擾素粉霧劑，其中，所述干擾素是重組人干擾素α-2a、重組人干擾素α-2b、重組干擾素β及重組干擾素γ。
4.如權(quán)利要求3所述干擾素粉霧劑，其中，干擾素是指重組人干擾素α-2a、重組人干擾素α-2b。
5.如權(quán)利要求1所述干擾素粉霧劑，其中，活性保護(hù)劑是賴氨酸、2-羥丙基-β-環(huán)糊精、大豆卵磷脂。
6.如權(quán)利要求1所述干擾素粉霧劑，其中，稀釋劑是甘露醇、木糖醇、乳糖、海藻糖、棉籽糖、亮氨酸、蘇氨酸、甘氨酸。
7.如權(quán)利要求1所述干擾素粉霧劑，其中，緩沖鹽體系為枸櫞酸-枸櫞酸鈉、磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉、枸櫞酸-磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉-枸櫞酸鈉、抗壞血酸-抗壞血酸鈉。
8.如權(quán)利要求1所述干擾素粉霧劑，其中，分散性助劑包括酪氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸。
9.一種用于肺部給藥的干擾素粉霧劑的制備方法，其特征在于，按一定配比將干擾素、緩沖鹽、稀釋劑、活性保護(hù)劑、分散性助劑混合，配制成固含量為0.03-9％的干擾素液相組合物。然后如下操作(1)、將液相組合物通過(guò)適當(dāng)方法揮去水分使成干燥固體，然后氣流粉碎成平均粒徑小于10μm大小適宜的顆粒；或(2)、將液相組合物通過(guò)適當(dāng)方法揮去水分使成干燥固體，然后用球磨機(jī)研磨成平均粒徑小于10μm大小適宜的顆粒；或(3)、將液相組合物采用噴霧干燥，制得平均粒徑小于10μm的顆粒。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于肺部給藥的干擾素粉霧劑及其制備方法，其中以0.0002％－0.8％干擾素、配以相應(yīng)的藥用輔料組成干擾素的液相組合物，采用適當(dāng)方法，特別是噴霧干燥法，制成穩(wěn)定高效的干擾素粉霧劑。本發(fā)明中所采用的活性保護(hù)劑，保證了干擾素的活性在干燥過(guò)程中幾乎沒(méi)有受到破壞，起到了很好的穩(wěn)定性作用。本發(fā)明的干擾素粉霧劑組成中不含人血白蛋白和吸收促進(jìn)劑，避免了人血清白蛋白帶來(lái)血液病污染的問(wèn)題，同時(shí)也防止了因長(zhǎng)期使用吸收促進(jìn)劑對(duì)肺部產(chǎn)生的損害。
文檔編號(hào)A61K38/21GK1672731SQ20041001879
公開日2005年9月28日 申請(qǐng)日期2004年3月26日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月26日
發(fā)明者江榮高, 劉衡, 王春龍, 楊穎 申請(qǐng)人:天津藥物研究院