專利名稱：從天然植物中藥有效成分中提取增加胃腸動(dòng)力制品藥物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥有效成份中提取增加胃腸動(dòng)力制品藥物的方法，屬于天然產(chǎn)物藥理活性和分離與提純天然原料藥方法。其商品名為“山白消食”。
背景技術(shù)：
對(duì)比藥品為大山楂丸。主要針對(duì)面色少華，不思飲食或厭食，甚至拒食；神疲懶言；脘腹脹滿，食后嘔吐；大便或溏或泄或兼大便不利；舌質(zhì)紅或淡，少苔或苔薄白，脈細(xì)弱。人們迫切希望新的產(chǎn)品問世。

發(fā)明內(nèi)容技術(shù)方案包括處方新工藝、工藝流程圖及各種毒理、藥理綜述。
技術(shù)解決方案是本發(fā)明的目的公開一種中藥有效成份中提取增加胃腸動(dòng)力制品藥物的方法及提供一種高純度的原料藥，是一種綠色藥物屬于天然產(chǎn)物藥理活性和分離。
山藥9.71％、白術(shù)9.71％、茯苓9.71％、大棗9.71％、山楂(焦)9.71％、雞內(nèi)金9.71％、何首烏9.71％、龍眼肉9.71％、牡蠣9.71％、枳實(shí)2.91％、當(dāng)歸4.85％、檳榔(焦)4.85％產(chǎn)物復(fù)方增加胃腸動(dòng)力制品，采用細(xì)心嚴(yán)格的條件下，應(yīng)用超臨界流體二氧化碳萃取劑，萃取12種天然產(chǎn)物的揮發(fā)油成份后，又用水煎煮再通過大孔樹脂樹脂吸附分離、純化，經(jīng)過在85℃條件下，噴霧干燥后，用氣相儀器進(jìn)行指痕圖譜定量測(cè)定后，制成標(biāo)準(zhǔn)的原料藥。進(jìn)行藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，12種天然產(chǎn)物復(fù)方增加胃腸動(dòng)力制品的藥理活性，達(dá)到了意想不到的結(jié)果。復(fù)方制品能顯著促進(jìn)小鼠的小腸運(yùn)動(dòng)，增加推進(jìn)率，且呈劑量依賴關(guān)系。復(fù)方制品對(duì)離體兔十二指腸的自律活動(dòng)呈抑制作用，加入復(fù)方制品時(shí)，有瞬時(shí)的張力上升，隨后即轉(zhuǎn)入抑制狀態(tài)，振幅減少，頻率減慢，且隨著劑量增加，抑制加深。復(fù)方制品對(duì)Ach引起的回腸攣縮有顯著的拮抗作用，使痙攣的腸肌張力恢復(fù)至正常水平，并能使腸節(jié)律收縮恢復(fù)。復(fù)方制品對(duì)氯化鋇引起的兔回腸攣縮呈顯著的抑制作用，可使攣縮的腸肌張力恢復(fù)正常，但節(jié)律性收縮恢復(fù)不顯著。復(fù)方制品能明顯拮抗腎上腺素所致的離體兔回腸收縮抑制，使其恢復(fù)自律收縮狀態(tài)。復(fù)方制品能顯著增加大鼠胃液分泌量，提高胃酸的酸度，增加總酸排出量，增強(qiáng)胃蛋白酶活性，并呈劑量依賴關(guān)系。
中藥有效成份中提取增加胃腸動(dòng)力制品藥物的方法采用先進(jìn)的大孔樹脂吸附有效成份并使用氣相指痕光譜定量，保證藥品的穩(wěn)定性和高質(zhì)量。
本發(fā)明的創(chuàng)造性通過臨床毒理、藥理來體現(xiàn)，在實(shí)質(zhì)審查時(shí)一并提供。


圖1 本發(fā)明的工藝流程圖。
圖2 復(fù)方制品對(duì)離體兔十二指腸自律活動(dòng)的影響。
圖3 復(fù)方制品對(duì)乙酰膽堿所致的兔回腸痙攣。
圖4 復(fù)方制品對(duì)氯化鋇所致的兔回腸痙攣的拮抗作用。
圖5 復(fù)方制品對(duì)腎上腺素所致的兔回腸抑制的拮抗作用。
其工藝流程描述如下(1)本發(fā)明處方山藥50g、白術(shù)50g、茯苓50g、大棗50g、山楂(焦)50g、雞內(nèi)金50g、何首烏50g、龍眼肉50g、牡蠣50g、枳實(shí)15g、當(dāng)歸25g、檳榔(焦)25g。
(2)溶劑①超臨界萃取溶劑為二氧化碳；②水。
(3)提取液棕紅色液體。
揮發(fā)油棕紅色油狀物。
(4)物理參數(shù)超臨界萃取的壓力為1～10MPa，溫度為20～50℃；水提取、樹脂吸附、噴霧干燥為常壓；其中，水提取的溫度為100℃，樹脂吸附的溫度為常溫；噴霧干燥的溫度為80～85℃。
(5)操作過程①12種藥材破碎成直徑1～2cm的小塊狀，然后用二氧化碳超臨界萃取裝置提取揮發(fā)油成分，得揮發(fā)油(1)。
②提取揮發(fā)油后的藥渣加3倍量水煎煮3小時(shí)，濾過，得濾液(2)；藥渣加2倍量水煎煮2小時(shí)，濾過，得濾液(3)；藥渣再加1倍量水煎煮1小時(shí)，濾過，得濾液(4)。
③合并濾液(2)、(3)、(4)，靜置，取上清液，得提取液(5)。
④將提取液(5)用大孔樹脂進(jìn)行吸附。
⑤用65％乙醇將吸附在樹脂上的化學(xué)成分洗脫到乙醇中，得洗脫液(6)。
⑥將洗脫液(6)進(jìn)得減壓回收，得濃縮液(7)。
⑦將濃縮液(7)進(jìn)行噴霧干燥。再加入揮發(fā)油(1)，得藥粉，即得。
其工藝是將12種天然產(chǎn)物復(fù)方原料，應(yīng)用超臨界流體二氧化碳萃取劑，萃取12種天然產(chǎn)物揮發(fā)油成分，將氣態(tài)二氧化碳與12種天然產(chǎn)物成分分離，精餾備用。將提取揮發(fā)油后原料，每100kg加水300kg、200kg、100kg，在100℃條件下分別提取3小時(shí)、2小時(shí)、1小時(shí)，合并水提取的濾液，靜置，取上清液，通過大孔樹脂填充的柱子，用大孔樹脂吸附，用65％乙醇，將吸附在大孔樹脂上的成分洗脫至乙醇中，與精餾備用液體合并，在85℃條件下，噴霧干燥后，用氣相層析儀器進(jìn)行指痕圖譜定量測(cè)定，并制成標(biāo)準(zhǔn)原料藥。
具體實(shí)施方式
山藥50g、白術(shù)50g、茯苓50g、大棗50g、山楂(焦)50g、雞內(nèi)金50g、何首烏50g、龍眼肉50g、牡蠣50g、枳實(shí)15g、當(dāng)歸25g、檳榔(焦)25g。
其工藝是將12種天然產(chǎn)物復(fù)方原料，應(yīng)用超臨界流體二氧化碳萃取劑，萃取12種天然產(chǎn)物揮發(fā)油成分，將氣態(tài)二氧化碳與12種天然產(chǎn)物成分分離，精餾備用。將提取揮發(fā)油后原料，每100kg加水300kg、200kg、100kg，在100℃條件下分別提取3小時(shí)、2小時(shí)、1小時(shí)，合并水提取的濾液，靜置，取上清液，通過大孔樹脂填充的柱子，用大孔樹脂吸附，用65％乙醇，將吸附在大孔樹脂上的成分洗脫至乙醇中，與精餾備用液體合并，在85℃條件下，噴霧干燥后，用氣相層析儀器進(jìn)行指痕圖譜定量測(cè)定，并制成標(biāo)準(zhǔn)原料藥。本發(fā)明的創(chuàng)造性通過毒理、藥理臨床來體現(xiàn)，實(shí)審時(shí)補(bǔ)充提供現(xiàn)簡(jiǎn)介如下
從天然植物中藥有效成份中提取增加胃腸動(dòng)力制品藥物的方法藥理作用山藥、白術(shù)、茯苓、大棗、山楂(焦)、雞內(nèi)金、何首烏、龍眼肉、牡蠣、枳實(shí)、當(dāng)歸、檳榔(焦)天然產(chǎn)物復(fù)方增加胃腸動(dòng)力制品(簡(jiǎn)稱復(fù)方制品)，主治小兒厭食、腹脹、食積不化等癥。進(jìn)行藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，其藥理活性如下一、對(duì)小鼠小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)的影響實(shí)驗(yàn)材料藥物復(fù)方制品小劑量為5g/kg，大劑量為10g/kg。
動(dòng)物小白鼠購自實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，雌雄兼用，體重20±2g。
實(shí)驗(yàn)方法取健康的小鼠，按體重和性別隨機(jī)分為空白對(duì)照組，一種中藥有效成份中提取增加胃腸動(dòng)力制品藥物的方法小、大劑量組每組10只。實(shí)驗(yàn)前，動(dòng)物禁食16h，不禁水。各組小鼠按上述劑量灌胃給藥，給藥后20min，灌胃給予印度墨汁0.2ml/只。待20min后，頸椎脫臼處死小鼠，立即剖腹，摘出小腸，測(cè)量幽門至回盲部和幽門至墨汁前沿的長(zhǎng)度，并計(jì)算出小腸推進(jìn)率(2)，比較給藥各組小腸推進(jìn)率與對(duì)照組有無顯著差異。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表1 復(fù)方制品對(duì)小鼠小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)的影響
由表1看出，復(fù)方制品能顯著促進(jìn)小鼠的小腸運(yùn)動(dòng)，增加小腸推進(jìn)率(P＜0.001)，且呈劑量依賴關(guān)系。
二、對(duì)家兔離體腸管運(yùn)動(dòng)的影響實(shí)驗(yàn)材料動(dòng)物大耳白兔，體重2～3kg，雌雄兼用。
儀器離體器官測(cè)定儀，DC-001型。
實(shí)驗(yàn)方法按Magnus氏指記離體兔十二指腸及回腸的方法，觀察藥物對(duì)離體腸管活動(dòng)的影響。將截為2～3cm的腸段，放入離體器官測(cè)定儀浴槽中，浴槽內(nèi)臺(tái)氏液容量為30ml，溫度為38±0.5℃。待腸管活動(dòng)穩(wěn)定后，加入所適藥物，描記藥物對(duì)腸管活動(dòng)的影響。其次，在觀察所試藥物拮抗乙酰膽堿(Ach)、氯化鋇(Bacl2)和腎上腺素(Adr)所致腸管平滑肌作用時(shí)，先將拮抗乙酰膽堿(0.5ML×10-5)或氯化鋇(5％0.5ml)或腎上腺素(0.15ml×10-4)加入浴槽中，待腸管反應(yīng)平穩(wěn)后，再加入所試藥物，觀察藥物的拮抗作用。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.對(duì)離體兔十二指腸自律活動(dòng)的影響表2 復(fù)方制品對(duì)離體兔十二指腸自律活動(dòng)的影響
如表2、圖2所示，復(fù)方制品對(duì)離體兔十二指腸的自律活動(dòng)呈抑制作用。向浴槽中加入藥物時(shí)，有瞬時(shí)的張力上升，隨后即轉(zhuǎn)入抑制狀態(tài)，振幅減小，頻率減慢，且隨著劑量增加，抑制加深。
2.對(duì)乙酰膽堿所致的兔回腸攣縮的影響表3 復(fù)方制品對(duì)拮抗乙酰膽堿所致的兔回腸攣縮的拮抗作用
從表3、圖3可看出，復(fù)方制品對(duì)拮抗乙酰膽堿引起的回腸攣縮有顯著的拮抗作用，使痙攣的腸肌張力恢復(fù)至正常水平，并能使腸節(jié)律收縮恢復(fù)。
3.對(duì)氯化鋇所致的兔回腸攣縮的影響表4 復(fù)方制品對(duì)氯化鋇引起的兔回腸攣縮的拮抗作用
從表4、圖4可見，復(fù)方制品對(duì)氯化鋇引起的兔回腸攣縮呈顯著的抑制作用，可使攣縮的腸肌張力恢復(fù)正常，但節(jié)律性收縮恢復(fù)不顯著。
4.對(duì)腎上腺素所致的兔回腸收縮抑制的影響表5 復(fù)方制品對(duì)腎上腺素引起的兔回腸收縮抑制的拮抗作用
如表5、圖5所示，復(fù)方制品能明顯拮抗腎上腺素所致的離體兔回腸收縮抑制，使其恢復(fù)自律收縮狀態(tài)。
三、對(duì)大鼠胃液分泌功能的影響實(shí)驗(yàn)材料藥物復(fù)方制品小劑量組給藥劑量為3.5g/kg，大劑量組為7.0g/kg。
脫脂奶粉動(dòng)物Wistar大鼠，雌雄兼用，體重150～200g。
實(shí)驗(yàn)方法取健康的大鼠，按體重和性別隨機(jī)分為空白對(duì)照，一種中藥有效成份中提取增加胃腸動(dòng)力制品藥物的方法小劑量、大劑量每組10只。各給藥組按上述劑量灌胃給藥，空白對(duì)照組灌服同體積蒸餾水，每日一次，連續(xù)7日。于末次給藥前，動(dòng)物禁食16h，不禁水。灌胃給藥后2h，乙醚麻醉，按Shay氏法進(jìn)行幽門解扎。術(shù)后動(dòng)物禁食禁水，5h后頸椎脫臼處死，收集胃液，離心，取上清液，測(cè)量胃液總量、總酸度、總酸排出量和胃蛋白酶活性。酸度測(cè)定采用酸堿滴定法，以酚酞作指示劑。胃蛋白酶測(cè)定按Lee氏凝乳試驗(yàn)改良法進(jìn)行(3)。方法如下將0.2M氯化鈣溶液5ml加入0.1M醋酸緩沖液95ml中，以該液溶解20g脫脂奶粉作基液。取基液5ml，加入以.05M枸榤酸緩沖液稀釋6倍胃液0.2ml，充分混合后，立即放入35.5℃溫浴中，時(shí)時(shí)傾斜管壁，觀察凝乳出現(xiàn)，計(jì)時(shí)。計(jì)算胃蛋白酶活性方法；在1分鐘凝固含牛乳的基液1ml的活性，作為1凝乳單位，以胃液1ml中的單位(U/ml)數(shù)表示。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表6 復(fù)方制品對(duì)大鼠胃液分泌功能的影響(X±SD)
與對(duì)照比較*P＜0.05，**P＜0.01從表6看出，復(fù)方制品能顯著增加大鼠胃液分泌量，提高胃酸的酸度，增加總酸排出量，增強(qiáng)胃蛋白酶活性，并呈劑量依賴關(guān)系。
討論與結(jié)論綜上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明1.復(fù)方制品能顯著加快小鼠的腸蠕動(dòng)速度，增加小腸推進(jìn)率；而對(duì)離體兔十二指腸則呈運(yùn)動(dòng)抑制，使自律收縮減小，頻率減慢，且隨劑量的增加，抑制作用加深。
2.復(fù)方制品能拮抗乙酰膽堿和氯化鋇引起的回腸平滑肌攣縮，使腸肌張力降低，自律收縮恢復(fù)，且有解痙作用；也能使由腎上腺素引起的回腸運(yùn)動(dòng)抑制恢復(fù)活動(dòng)。因此可以認(rèn)為，一種中藥有效成份中提取增加胃腸動(dòng)力制品藥物的方法對(duì)離體兔回腸運(yùn)動(dòng)功能有雙向調(diào)節(jié)作用，這可以解釋本制品既能治療腹脹，又可治療瀉泄等癥。
3.復(fù)方制品能顯著增加大鼠胃液分泌量，提高胃液的酸度，增加總酸排出量，增強(qiáng)胃蛋白酶活性。
一種中藥有效成份中提取增加胃腸動(dòng)力制品藥物的方法臨床研究治療小兒厭食、面色無華、精神不振等癥，為了驗(yàn)證臨床療效和藥理活性及考察其毒副作用進(jìn)行臨床試驗(yàn)，觀察病例治療組100例，臨床驗(yàn)證結(jié)果如下診斷標(biāo)準(zhǔn)消化功能紊亂癥食欲不振、腹脹、腹泄或嘔吐。
病例檢測(cè)項(xiàng)目用藥前后分別測(cè)量患兒凈體重(專人專秤)；檢測(cè)血常規(guī)、便常規(guī)及一般體檢，治療組與對(duì)照組分別做唾液淀粉酶活性檢測(cè)；治療組隨機(jī)選取60例做血常規(guī)、尿常規(guī)、肝功能檢查。
分組與投藥1.分組將受試對(duì)象按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為復(fù)方制品組100例和山楂組60例。
2.投藥試驗(yàn)組投藥(每次)；每日三次；對(duì)照組投藥用山楂。
試驗(yàn)要求詳細(xì)填寫觀察表，并記有病程記錄。記載治療前后體重、唾液淀粉酶活性、血尿常規(guī)、肝功能及主次癥詳細(xì)情況。
療效判定標(biāo)準(zhǔn)①痊愈食欲恢復(fù)正常，體重增加或恢復(fù)正常，肌膚充盈，大便正常，諸癥消失，唾液淀粉酶活性有顯著提高。
②顯效主要癥狀有明顯改善在二級(jí)以上(如食欲由拒食轉(zhuǎn)為欠佳)或一個(gè)主癥改變?cè)谝患?jí)，其它次癥全部消失者；唾液淀粉酶活性有明顯提高。
③有效兩個(gè)主要癥狀改善在一級(jí)以上，其它癥狀有所好轉(zhuǎn)者；唾液淀粉酶活性有所提高。
治療結(jié)果一、兩組臨床療效的比較表7 臨床療效統(tǒng)計(jì)表
**P＜0.01 *＜0.05根據(jù)臨床觀察結(jié)果，復(fù)方制品和山楂組Fructus Crataegi痊愈率分別為40.0％、21.6％，總顯效率分別為84.0％、48.2％，總有效率分別為97.0％、80.0％，經(jīng)X2檢驗(yàn)，P值分別＜0.01和＜0.05，有非常顯著性差異和顯著性差異，提示復(fù)方制品臨床療效優(yōu)于山楂組。
二、兩組厭食證主要癥狀的療效比較表8 兩組厭食證主要癥狀療效比較表
注與對(duì)照組比**P＜0.01、*P＜0.05 A——治療組 B——對(duì)照組根據(jù)臨床觀察結(jié)果，兩組藥物治療厭食、腹脹、大便不調(diào)等主要癥狀痊愈率之間有非常顯著性差異(P＜0.01)。對(duì)于治療大便不調(diào)，復(fù)方制品和山楂組的總有效率分別為94.0％、84.6％，組間差異顯著(P＜0.05)。其它無顯著差異，提示在治療厭食證厭食、腹脹、大便不調(diào)等各主要癥狀方面，復(fù)方制品均優(yōu)于山楂組。
三、兩組藥物對(duì)唾液淀粉酶活性及體重的影響表9 兩組藥物對(duì)唾液淀粉酶活性的影響(蘇木杰氏單位)
注與對(duì)照組比P＜0.05
表10 兩組藥物對(duì)體重的影響 單位kg
據(jù)統(tǒng)計(jì)，服用兩組藥物均可提高患兒的唾液淀粉酶活性，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理P＜0.05，增加體重的作用治療組略高于對(duì)照組，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無顯著性差異P＞0.05。提示該藥在一個(gè)療程內(nèi)尚無明顯地增加體重的作用。
四、毒副作用及不良反應(yīng)在治療期間，通過對(duì)60例治療組患者肝功及常規(guī)檢查，未出現(xiàn)任何毒副反應(yīng)亦未見有不良反應(yīng)，說明復(fù)方制品用藥安全可靠。
從天然植物中藥有效成份中提取增加胃腸動(dòng)力制品藥物的方法藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究本發(fā)明具有理脾和胃、消食化滯之功效，主治厭食、腹脹、食積不化、食前干噦、嘔吐或?yàn)a泄等癥。根據(jù)本方劑的功能主治，進(jìn)行了以下藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)。
一、對(duì)脾虛證小鼠體重和游泳時(shí)間的影響實(shí)驗(yàn)材料受試藥物本發(fā)明復(fù)方制品。
對(duì)照藥物大山楂丸由沈陽市天益堂藥廠生產(chǎn)，每丸9克。
動(dòng)物昆明種小白鼠購于沈陽第一制藥廠動(dòng)物室，雌雄兼用，體重20±2g。
實(shí)驗(yàn)方法選健康小鼠50只，按體重和性別隨機(jī)分為5組，每組10只。分為空白對(duì)照組、造型對(duì)照組，復(fù)方制品大、小劑量各一組和大山楂丸組。給藥前稱量小鼠體重一次。每日上午除空白對(duì)照組外，各組動(dòng)物灌胃給予1g/ml大黃煎劑0.6ml/只，每日一次，連續(xù)給藥10日，以造成脾虛模型小鼠。與此同時(shí)，每日下午復(fù)方制品組分別灌服口服液5g/kg和10g/kg；大山楂丸組灌服懸液20g/kg；造型對(duì)照組和空白對(duì)照組灌胃給予同體積蒸餾水，每日一次，連續(xù)10日。10日后，稱量各組小鼠體重，比較組間體重差異的顯著性。小鼠禁食16h后，將小鼠放入水溫20±0.1℃的水槽中，水深16cm，記錄小鼠沉下水底，不再浮起的時(shí)間，比較各組間小鼠耐勞的差異。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.對(duì)脾虛證小鼠體重的影響如表11所示，造型對(duì)照組與空白對(duì)照組比較，體重增長(zhǎng)顯著減少(P＜0.001)，基本處于停滯狀態(tài)。復(fù)方制品組與造型對(duì)照組比較，可顯著增加脾虛小鼠的體重(P＜0.001)，且呈劑量依賴性；等效量的大山楂丸雖也能使脾虛小鼠體重增加(P＜0.05)，但較復(fù)方制品作用弱，二者有顯著差異(P＜0.01)。
表11 復(fù)方制品對(duì)脾虛小鼠體重的影響
與造型對(duì)照組比較*P＜0.05，***P＜0.001 與大山楂丸組比較**P＜0.013.對(duì)脾虛證小鼠游泳時(shí)間的影響如表12所示，造型對(duì)照組與空白對(duì)照組比較，小鼠游泳時(shí)間顯著縮短(P＜0.05)。復(fù)方制品與造型對(duì)照組比較，可顯著延長(zhǎng)脾虛小鼠的游泳時(shí)間(P＜0.05)，且呈劑量依賴關(guān)系；大山楂丸組對(duì)脾虛小鼠游泳時(shí)間無明顯影響(P＞0.05)?？梢姡瑥?fù)方制品抗疲勞作用明顯優(yōu)于大山楂丸。
表12 復(fù)方制品對(duì)脾虛小鼠游泳時(shí)間的影響
二、對(duì)小鼠小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)的影響實(shí)驗(yàn)材料藥物復(fù)方制品小劑量為5g/kg，大劑量為10g/kg。大山楂丸藥劑量為20g/kg。
動(dòng)物昆明種小白鼠購自中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，雌雄兼用，體重20±2g。
實(shí)驗(yàn)方法取健康的小鼠40只，按體重和性別隨機(jī)分為空白對(duì)照組，復(fù)方制品小、大劑量組和大山楂丸4組，每組10只。實(shí)驗(yàn)前，動(dòng)物禁食16h，不禁水。各組小鼠按上述劑量灌胃給藥，給藥后20min，灌胃給予印度墨汁0.2ml/只。待20min后，頸椎脫臼處死小鼠，立即剖腹，摘出小腸，測(cè)量幽門至回盲部和幽門至墨汁前沿的長(zhǎng)度，并計(jì)算出小腸推進(jìn)率。比較給藥各組小腸推進(jìn)率與對(duì)照組有無顯著差異。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表13 復(fù)方制品對(duì)小鼠小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)的影響
由表13看出，復(fù)方制品能顯著促進(jìn)小鼠的小腸運(yùn)動(dòng)，增加小腸推進(jìn)率(P＜0.001)，且呈劑量依賴關(guān)系。大山楂丸也有相似孤作用(P＜0.001)二、對(duì)家兔體腸管運(yùn)動(dòng)的影響實(shí)驗(yàn)材料動(dòng)物大耳白兔，體重2～3kg，雌雄兼用，購于沈陽軍區(qū)軍事醫(yī)學(xué)研究所動(dòng)物室。
儀器離體器官測(cè)定儀，DC-001型，南京分析儀器廠生產(chǎn)。
實(shí)驗(yàn)方法按Magnus氏指記離體兔十二指腸及回腸的方法，觀察藥物對(duì)離體腸管活動(dòng)的影響。將截為2～3cm的腸段，放入離體器官測(cè)定儀浴槽中，浴槽內(nèi)臺(tái)氏液容量為30ml，溫度為38±0.5℃。待腸管活動(dòng)穩(wěn)定后，加入所適藥物，描記藥物對(duì)腸管活動(dòng)的影響。其次，在觀察所試藥物拮抗乙酰膽堿(Ach)、氯化鋇(Bacl2)和腎上腺素(Adr)所致腸管平滑肌作用時(shí)，先將拮抗乙酰膽堿(0.5ML×10-5)或氯化鋇(5％0.5ml)或腎上腺素(0.15ml×10-4)加入浴槽中，待腸管反應(yīng)平穩(wěn)后，再加入所試藥物，觀察藥物的拮抗作用。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.對(duì)離體兔十二指腸自律活動(dòng)的影響表14 復(fù)方制品對(duì)離體兔十二指腸自律活動(dòng)的影響
如表14所示，復(fù)方制品對(duì)離體兔十二指腸的自律活動(dòng)呈抑制作用。向浴槽中加入藥物時(shí)，有瞬時(shí)的張力上升，隨后即轉(zhuǎn)入抑制狀態(tài)，振幅減小，頻率減慢，且隨著劑量增加，抑制加深。大山楂丸亦呈相同的作用。
2.對(duì)乙酰膽堿所致的兔回腸攣縮的影響表15 復(fù)方制品對(duì)拮抗乙酰膽堿所致的兔回腸攣縮的拮抗作用
從表15可看出，復(fù)方制品對(duì)拮抗乙酰膽堿引起的回腸攣縮有顯著的拮抗作用，使痙攣的腸肌張力恢復(fù)至正常水平，并能使腸節(jié)律收縮恢復(fù)。大山楂丸也有相同作用。
3.對(duì)氯化鋇所致的兔回腸攣縮的影響表16 復(fù)方制品對(duì)氯化鋇引起的兔回腸攣縮的拮抗作用
從表16可見，復(fù)方制品對(duì)氯化鋇引起的兔回腸攣縮呈顯著的抑制作用，可使攣縮的腸肌張力恢復(fù)正常，但節(jié)律性收縮恢復(fù)不顯著。大山楂丸對(duì)氯化鋇所致的回腸攣縮，無明顯的拮抗作用。
4.對(duì)腎上腺素所致的兔回腸收縮抑制的影響表17 復(fù)方制品對(duì)腎上腺素引起的兔回腸收縮抑制的拮抗作用
如表17所示，復(fù)方制品能明顯拮抗腎上腺素所致的離體兔回腸收縮抑制，使其恢復(fù)自律收縮狀態(tài)。大山楂丸的此種作用，較復(fù)方制品強(qiáng)。
四、對(duì)大鼠胃液分泌功能的影響實(shí)驗(yàn)材料藥物復(fù)方制品小劑量組給藥劑量為3.5g/kg，大劑量組為7.0g/kg。大山楂丸組給藥劑量為8.0g/kg。
脫脂奶粉由沈陽市乳品公司提供。
動(dòng)物Wistar大鼠由沈陽軍區(qū)軍事醫(yī)學(xué)研究所提供，雌雄兼用，體重150～200g。
實(shí)驗(yàn)方法取健康的大鼠40只，按體重和性別隨機(jī)分為空白對(duì)照，復(fù)方制品小劑量、大劑量和大山楂丸4組，每組10只。各給藥組按上述劑量灌胃給藥，空白對(duì)照組灌服同體積蒸餾水，每日一次，連續(xù)7日，于末次給藥前，動(dòng)物禁食16h，不禁水。灌胃給藥后2h，乙醚麻醉，按Shay氏法進(jìn)行幽門解扎。術(shù)后動(dòng)物禁食禁水，5h后頸椎脫臼處死，收集胃液，離心，取上清液，測(cè)量胃液總量、總酸度、總酸排出量和胃蛋白酶活性。酸度測(cè)定采用酸堿滴定法，以酚酞作指示劑。胃蛋白酶測(cè)定按Lee氏凝乳試驗(yàn)改良法進(jìn)行。方法如下將0.2M氯化鈣溶液5ml加入0.1M醋酸緩沖液95ml中，以該液溶解20g脫脂奶粉作基液。取基液5ml，加入以0.05M枸酸緩沖液稀釋6倍胃液0.2ml，充分混合后，立即入入35.5℃溫浴中，時(shí)時(shí)傾斜管壁，觀察凝乳出現(xiàn)，計(jì)時(shí)。計(jì)算胃蛋白酶活性方法；在1分鐘凝因含牛乳的基液1ml的活性，作為1凝乳單位，以胃液1ml中的單位(U/ml)數(shù)表示。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表18 復(fù)方制品對(duì)大鼠胃液分泌功能的影響(X±SD)
*P＜0.05 **P＜0.01 與對(duì)照比較從天然植物中藥有效成份中提取增加胃腸動(dòng)力制品藥物的方法研究綜述一、與治療作用有關(guān)的主要藥效學(xué)試驗(yàn)研究根據(jù)本方劑的功能治療，我們進(jìn)行了如下藥效學(xué)研究復(fù)方制品以脾虛證小鼠體重和游泳時(shí)間的影響，對(duì)小鼠小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)的影響、對(duì)家兔離體腸管運(yùn)動(dòng)的影響，對(duì)大鼠胃液分泌功能的影響的研究，并與功能主治相似的大山楂丸進(jìn)行了對(duì)照，試驗(yàn)結(jié)果表明1.本發(fā)明能顯著增加脾虛小鼠體重，延長(zhǎng)脾虛小鼠的游泳時(shí)間，提示具有改善脾虛證小鼠全身善的顯著功效，復(fù)方制品的此種作用明顯優(yōu)于大山楂丸。
2.本發(fā)明能顯著加快小鼠的腸蠕動(dòng)速度，增加小腸推動(dòng)率；而對(duì)離體兔十二指腸則呈運(yùn)動(dòng)抑制，使自律收縮減小，頻率減慢，且隨劑量的增加，抑制作用加深。大山楂丸也相同作用。
3.復(fù)方制品能拮抗乙酰膽堿和氯化鋇引起的回腸平滑肌攣縮，使腸肌張力降低，自律收縮恢復(fù)，上有解痙作用；也能使由腎下腺素引起的回腸運(yùn)動(dòng)抱制恢復(fù)活動(dòng)。
因此可以認(rèn)為，健兒佳對(duì)離體兔回腸運(yùn)動(dòng)功能有雙向調(diào)節(jié)作用。這可以解釋本方劑治療腹脹，又可治療瀉泄等癥。
4.復(fù)方制品能顯著增加大鼠胃液分泌量，提高胃液的酸度，增加總數(shù)排出量，增強(qiáng)胃蛋酶活性，大山楂丸也有相似的作用。
二、動(dòng)物急毒、長(zhǎng)毒研究1.急毒研究在最大給藥量的前提下，一次給藥，LD不能測(cè)出，復(fù)方制品進(jìn)行一日最大耐受量測(cè)定，經(jīng)口灌胃本品206g/kg，小白鼠未發(fā)生中毒反應(yīng)和死亡現(xiàn)象，耐受量按公斤體重計(jì)算，相當(dāng)于人臨床日用藥量的1000倍以上，提示復(fù)方制品臨床用藥安全。
2.長(zhǎng)毒研究復(fù)方制品按4ml/kg和20ml/kg(相當(dāng)于臨床給藥劑量的8、40倍)灌胃給予大鼠，每日1次，連續(xù)給藥70天，大鼠無死亡，體重進(jìn)行性增長(zhǎng)，且給藥組較空白對(duì)照組增重快，血尿常規(guī)、肝腎功能均正常，主要臟器未現(xiàn)病理改變，說明本復(fù)方制品長(zhǎng)期給藥無毒，提示本品臨床用藥安全。
三、臨床研究根據(jù)臨床研究結(jié)果，提示復(fù)方制品具有理脾和胃，消食化滯之功效。適用于厭食；神疲懶言；空腹脹滿、食后嘔吐，大便不調(diào)，以及小兒先天秉不足后天體質(zhì)虛弱，智力鈍遲，骨軟發(fā)育不良等癥。并與大山楂丸進(jìn)行了組間對(duì)照研究，總有效率分別為97.0％、80.0％，組間有顯著性差異(P＜0.05)；總顯效率分別為84.4％、48.2％，組間有非常顯著差異(P＜0.001)，提示復(fù)方制品療效確切，且優(yōu)于大山楂丸。
在治療期間，通過對(duì)60例治療組患者肝功及常規(guī)檢查，未出現(xiàn)任何毒副反應(yīng)，說明復(fù)方制品臨床用藥安全可靠。
權(quán)利要求
1.一種中藥有效成份中提取增加胃腸動(dòng)力制品藥物的方法，其特征在于將以下12位天然產(chǎn)物山藥、白術(shù)、茯苓、大棗、山楂(焦)、雞內(nèi)金、何首烏、龍眼肉、牡蠣、枳實(shí)、當(dāng)歸、檳榔(焦)，采用先進(jìn)的大孔樹脂吸附有效成份，并使用氣相指痕光譜定量。其重量百分比為由山藥9.71％、白術(shù)9.71％、茯苓9.71％、大棗9.71％、山楂(焦)9.71％、雞內(nèi)金9.71％、何首烏9.71％、龍眼肉9.71％、牡蠣9.71％、枳實(shí)2.91％、當(dāng)歸4.85％、檳榔(焦)4.85％組成。將12種天然產(chǎn)物復(fù)方原料，應(yīng)用超臨界流體二氧化碳萃取劑，萃取12種天然產(chǎn)物揮發(fā)油成分，將氣態(tài)二氧化碳與12種天然產(chǎn)物成分分離，精餾備用。將提取揮發(fā)油后原料，每100kg加水300kg、200kg、100kg，在100℃條件下分別提取3小時(shí)、2小時(shí)、1小時(shí)，合并水提取的濾液，靜置，取上清液，通過大孔樹脂填充的柱子，用大孔樹脂吸附，用65％乙醇，將吸附在大孔樹脂上的成分洗脫至乙醇中，與精餾備用液體合并，在85℃條件下，噴霧干燥后，用氣相色譜器進(jìn)行指痕圖譜定量測(cè)定，制成粉劑原料藥；
2.按照權(quán)利要求所述1一種中藥有效成份中提取增加胃腸動(dòng)力制品藥物的方法，其特征在于所述的原料藥可以制備成片劑、合劑、丸劑、膠囊、口服液及針劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中藥有效成分中提取增加胃腸動(dòng)力制品藥物的方法，屬于天然產(chǎn)物藥理活性和分離與提純天然產(chǎn)物方法。其處方是山藥9.71％、白術(shù)9.71％、茯苓9.71％、大棗9.71％、山楂(焦)9.71％、雞內(nèi)金9.71％、何首烏9.71％、龍眼肉9.71％、牡蠣9.71％、枳實(shí)2.91％、當(dāng)歸4.85％、檳榔(焦)4.85％組成。積極效果是中藥有效成分中提取增加胃腸動(dòng)力制品藥物的方法采用先進(jìn)的大孔樹脂吸附有效成分并使用氣相指痕光譜定量，保證藥品的穩(wěn)定性和高質(zhì)量。
文檔編號(hào)A61P1/14GK1650896SQ200410001148
公開日2005年8月10日 申請(qǐng)日期2004年2月2日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月2日
發(fā)明者姜偉 申請(qǐng)人:姜偉