專利名稱：施用鐵治療不安腿綜合征的組合物的制作方法
背景不安腿綜合征受不安腿綜合征(RLS；也稱作Ekbom′s綜合征)嚴重折磨的受害者，實際上不能保持坐著或者甚至不能靜止地站立。需要保持運動靜止和受限制的認知刺激的活動，如乘坐運輸工具(汽車、飛機、火車等)或者參加較長時間的會議、演講、電影或其它演出，變得很困難，如果可能的話。由于這些在夜里變得更嚴重的感覺的折磨，RLS患者發(fā)現(xiàn)睡眠實際上是不可能的，繼而降低了他們的生活質(zhì)量。運動的迫切要求，其隨著休息時間的增加而增強，可能會通過運動完全消失，如步行。然而，一旦運動停止，癥狀又重新出現(xiàn)，強度增強。如果強迫RLS患者躺著靜止不動，癥狀將繼續(xù)發(fā)展象一個負重的彈簧，最后腿將不隨意的運動，癥狀立即就緩解。如果患者試圖保持躺著，那么將觀察到腿有節(jié)奏的或半有節(jié)奏的運動(Pollmacher和Schulz1993)。這些運動被稱作清醒狀態(tài)的運動障礙(DWA)(Hening等，1986)或者更普通地，清醒狀態(tài)的周期性肢體運動(PLMW)。
臨床上，當符合4個診斷標準時提示是RLS(1)迫切要求運動肢體(通常是腿)的感覺；(2)運動不安以降低感覺；(3)當在休息時，癥狀重新出現(xiàn)或者惡化；和(4)在發(fā)生RLS癥狀或癥狀嚴重時晝夜節(jié)律顯著改變；也就是說，癥狀在晚上和夜間惡化(Allen和Earley 2001a)。由Willis在1685年首先認識，RLS一直被誤解并與睡眠中周期性肢體動作(PLMS；其可能是RLS的一部分，但是不能定義RLS)、周期性肢體運動障礙(PLMD；睡眠障礙)和夜間(或睡眠)肌痙攣相混淆(Allen和Earley 2001a)。
在RLS中鐵和多巴胺濃度是緊密相關(guān)的因素在RLS中腦內(nèi)鐵缺乏和多巴胺合成降低是重要因素(Ekbom1960，Nordlander 1953)。多巴胺是在腦內(nèi)合成的神經(jīng)遞質(zhì)，其對于正確的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)功能是必需的。在多巴胺的合成中，鐵是酪氨酸羥化酶的輔因子，其是多巴胺代謝中的限速步驟(Cooper等，1991)。多巴胺能系統(tǒng)中的鐵似乎在RLS病理生理學中是一個重要的成分(Chesson AL等，1999，Ekbom 1960，Hening等，1999，Montplaisir等，1991)。
因為鐵是多巴胺合成中酪氨酸羥化酶的輔因子，因此多巴胺減少。當向腦中有過量鐵的大鼠施用鰲合物(結(jié)合金屬如鐵的物質(zhì)，使它們成為生理上不能利用的)時，它們有效減少多巴胺和多巴胺周轉(zhuǎn)(Ward等，1995)。鐵缺乏的動物中的研究也已經(jīng)證明多巴胺受體(Ben-Shachar等，1985，Ward等，1995)，多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白功能和受體密度降低而細胞外多巴胺升高(Erikson等，2000，Nelson等，1997)。大鼠中所觀察到的這些情況也在RLS患者中觀察到。例如，在基底神經(jīng)節(jié)中觀察到多巴胺受體減少(Staedt等，1995，Turjanski等，1999)。RLS患者腦脊液(CSF)鐵蛋白(一種重要的鐵貯藏蛋白)低于正常的65％并且CSF轉(zhuǎn)鐵蛋白(血液和體液中的鐵轉(zhuǎn)運蛋白)高于正常三倍，盡管在RLS和對照中鐵蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白的血清水平正常(Earley等，2000)。鐵濃度在整個腦內(nèi)有不同；RLS患者在黑質(zhì)和腦的殼部分中鐵較少，兩者都是多巴胺合成的位置。(Allen等，2001)?？傊?，鐵蛋白水平降低表明RLS嚴重(O′Keeffe等，1994，Sun等，1998)。這些觀察資料表明腦轉(zhuǎn)運或貯藏鐵的能力在特發(fā)性RLS(沒有明顯原因的RLS)中異常。
表1目前不安腿綜合征(RLS)治療的副作用1
治療RLS當前對RLS的治療是不同的并且受不良副作用(見表1)煩擾。治療包括施用多巴胺激動劑(促進產(chǎn)生多巴胺的物質(zhì))、其它多巴胺能試劑、苯二氮卓類、阿片制劑和抗驚厥劑。在由繼發(fā)情況導致的RLS病例中，如妊娠、腎疾病的終末階段、紅細胞生成素(EPO)治療和鐵缺乏，除去這種情況，如分娩或者常規(guī)補充鐵的治療，至少在一些疾病中可減少或消除癥狀(Allen和Earley 2001a)。然而，由非繼發(fā)情況導致的RLS(“特發(fā)性”RLS)，提出了更大的治療挑戰(zhàn)。
多巴胺能劑如左旋多巴通常提供有效的最初治療，但是隨著繼續(xù)使用，在約80％的RLS患者中發(fā)生耐受和癥狀增加(Allen和Earley1996)；這種并發(fā)癥對于多巴胺激動劑也常見(Earley和Allen 1996，Silber等，1997)。其它供選擇的藥物，苯二氮卓類、阿片制劑和抗驚厥劑不是與多巴胺劑一樣有效(Chesson AL等，1999，Hening等，1999)。盡管它們的治療方案有變化，但是由于副作用和有限的療效，15-20％的患者發(fā)現(xiàn)所有的藥物治療都是不充分的(Earley和Allen1996)。
由于鐵和多巴胺合成之間的聯(lián)系，施用鐵似乎對提高體內(nèi)鐵貯存量將是一種簡單并安全的治療。顯而易見的選擇是口服施用鐵，因為這種施用方式是簡單和便宜的。實際上，鐵缺乏的RLS患者對口服補充鐵劑反應(yīng)顯著(Ekbom1960，O′Keeffe等，1994)。然而，在血清鐵蛋白水平正常的RLS患者中，口服鐵治療的好處不利地降低到基線血清鐵蛋白水平在開始治療時鐵蛋白水平越高，這種好處就越不顯著(O′Keeffe等，1994)。這種提高鐵貯存量的方法是無效的，因為腸上皮控制鐵吸收，不對多巴胺合成反應(yīng)，但對血清鐵水平反應(yīng)(Conrad等，1999)。因此，鐵的口服劑量是無效的，并且不耐受。當血清鐵蛋白水平正常時為了增加體內(nèi)鐵的貯存量，需要使用繞過腸上皮控制的方法。例如，在慢性疾病引起的貧血中，鐵吸收和轉(zhuǎn)運受到顯著損害，被提高的血清鐵蛋白水平不再準確地反映體內(nèi)所貯存的鐵的水平。同樣地在慢性疾病所導致的貧血中，向喪失的系統(tǒng)遞送適當?shù)蔫F用于紅細胞生成的唯一有效的方法是通過靜脈內(nèi)施用。
靜脈內(nèi)施用鐵對于血清鐵蛋白水平正常的那些RLS患者來說繞過了通過口服施用鐵的問題和無效，實際上，靜脈內(nèi)施用右旋糖酐鐵溶液，如INFeD0(Watson Pharma，Inc.；Corona，CA(具有平均表觀分子量165,000g/摩爾，大約±10％的范圍)，和Dexferrum(American Regent Inc.，Shirley，NY)(共同稱作“IDI”)成功地治療RLS。然而，劑量很高(1000mg/施用)；或者高于通常用于治療其它情況時所用劑量的大約2到10倍。盡管IDI給一些RLS患者帶來了希望，但是其也帶來明顯的缺點不僅劑量很高，而且在約1.7％的人群中右旋糖酐引起過敏反應(yīng)(Fishbane等，1996)，一種威脅生命的情況；患過敏反應(yīng)的那些人中有大約50％以下的人死亡。
概述在第一個方面，本發(fā)明是一種治療不安腿的方法，包括施用受治療者鐵釋放率比IDI高的鐵復合物。在至少2,000μg/dl的濃度測定鐵釋放率。
在第二個方面，本發(fā)明是一種治療不安腿的方法，包括施用受治療者通過氧化鋁柱試驗，在3438μg/dl的濃度時鐵釋放率至少115g/dl的鐵復合物。
在第三個方面，本發(fā)明是一種治療不安腿的方法，包括施用IDI，改良包括用釋放率比IDI更高的鐵復合物代替IDI。
在第四個方面，本發(fā)明是一種試劑盒，包括釋放率高于IDI的鐵復合物組合物、注射器，以及用于注射器的針頭。在至少2,000μg/dl的濃度測定鐵釋放率。
附圖描述

圖1顯示使用葡萄糖酸鐵(也稱作溶于蔗糖中的葡萄酸鐵鈉復合物或Ferrlecit；Watson Pharma，Inc.；Corona，CA)、蔗糖鐵(Venofer(蔗糖鐵注射劑USP)American Regent Inc.；Shirley，NY)、右旋糖酐鐵(INFeD；Watson Pharma，Inc.)，和其它右旋糖酐鐵(Dexferrum；American Regent Inc.)的靜脈注射制劑，血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合的鐵相對于所添加鐵量的變化(Δ鐵)。X軸，所添加的元素鐵(μg/dl)；Y軸，Δ鐵(μg/dl)。
詳述本發(fā)明利用鐵釋放率高于IDI的鐵復合物在較低劑量時對于RLS的治療具有與IDI同樣效果的發(fā)現(xiàn)。當靜脈施用時這些鐵復合物避免與IDI相關(guān)的過敏反應(yīng)的危險，這種過敏反應(yīng)是由于存在抗其它鐵復合物中不存在的右旋糖酐部分的抗體，而且由于較高的釋放率，可降低治療劑量。
這種鐵復合物的一個實例是Venofer(蔗糖鐵注射劑USP)，一種過敏性樣反應(yīng)的發(fā)生率為0.0046％的蔗糖鐵復合物(即，20,000人中有一個人發(fā)生；IDI的過敏反應(yīng)的發(fā)生率為1.7％，或者幾乎100個人中有兩個人發(fā)生)。然而，釋放率高于IDI的任何鐵復合物都是有效的RLS治療劑。
用于治療RLS的鐵組合物鐵復合物是含有(II)或(III)氧化狀態(tài)的鐵的化合物，其與有機化合物復合。這些包括鐵聚合物復合物、鐵碳水化合物復合物，以及鐵aminoglycosan復合物。這些復合物可買到，或者具有公知的合成法(見，例如，(Andreasen和Christensen 2001，Andreasen和Christensen 2001，Geisser等，1992，Groman和Josephson 1990，Groman等，1989))。
鐵碳水化合物復合物的實例包括鐵單簡糖復合物、鐵寡糖復合物，以及鐵多糖復合物，如蔗糖鐵、多聚異麥芽糖鐵(右旋糖酐鐵)、多聚麥芽糖鐵(糊精鐵)、葡萄糖酸亞鐵、山梨糖醇鐵、氫化右旋糖酐鐵，其可進一步與其它化合物復合，如山梨糖醇、檸檬酸和葡糖酸(例如糊精-山梨糖醇-檸檬酸鐵復合物和蔗糖-葡糖酸鐵復合物)，以及它們的混合物。
鐵aminoglycosan復合物的實例包括硫酸軟骨素鐵、硫酸皮膚素鐵、硫酸角質(zhì)素鐵，其可進一步與其它化合物復合以及它們的混合物。
鐵聚合物復合物的實例包括透明質(zhì)酸鐵復合物、鐵蛋白復合物，以及它們的混合物。鐵蛋白復合物包括鐵蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白，以及具有氨基酸取代的鐵蛋白或轉(zhuǎn)鐵蛋白，以及它們的混合物。優(yōu)選的，鐵復合物具有至少30,000的分子量，更優(yōu)選地通過HPLC/CPG測定的30,000到100,000(如在Geisser等1992中所描述的)。優(yōu)選地，鐵復合物的大小最大為0.1微米，更優(yōu)選地0.035到0.1微米，通過過濾測定。
最優(yōu)選的鐵復合物是蔗糖鐵(蔗糖鐵注射劑USP，Venofer)。這種組合物也避免與較小糖分子，尤其是葡萄糖酸相關(guān)的毒性問題，其具有很高的鐵釋放率。蔗糖鐵組合物用最佳鐵釋放率平衡這些毒性問題。
測定鐵復合物鐵釋放率本發(fā)明利用可在較低劑量有效施用鐵釋放率比IDI高的鐵復合物的發(fā)現(xiàn)。IDI的鐵釋放率是69.5-113.5μg/dl。在本發(fā)明中，鐵復合物在至少2000μg/dl，包括2000、3000、3500、5000、和10,000μg/dl的濃度時必須具有至少115μg/dl的釋放率。優(yōu)選地，至少120μg/dl，更優(yōu)選地，至少140μg/dl?？蓪嵤﹥蓚€試驗測定鐵釋放率，如Esposito等(2000)和由Jacobs等(1990)所述。
“鰲合劑試驗”(Esposito等，2000)候選鐵復合物的釋放率是候選復合物將鐵捐贈給脫鐵運鐵蛋白或鐵鰲合劑，如去鐵胺的能力。為了檢測這種轉(zhuǎn)移，可使用探針熒光素-轉(zhuǎn)鐵蛋白(Fl-Tf)和熒光素-去鐵胺(Fl-DFO)，一旦結(jié)合到鐵上其遭受淬滅(Breuer和Cabantchik 2001)。簡而言之，該方法包括用10mM草酸鹽將鐵從血清中動員出來并且將其轉(zhuǎn)移到金屬傳感器(metallosensor)熒光素化脫鐵運鐵蛋白(Fl-aTf)。在試驗中存在鎵以避免不穩(wěn)定的血漿鐵結(jié)合樣品中未標記的脫鐵運鐵蛋白。不穩(wěn)定的血漿鐵的值來自熒光素化脫鐵運鐵蛋白的熒光信號淬滅的值。可使用例如，96孔板和平板閱讀器，在485/538nm激發(fā)/發(fā)射濾波器對(增益＝25)測量熒光。
“氧化鋁柱試驗”(Jacobs等，1990)在這個試驗中，將樣品(血清和候選的鐵組合物)通過氧化鋁柱以吸收有機的和藥物結(jié)合的鐵，然后收集洗脫液并重構(gòu)到預先選擇的體積(例如，1.5ml)，最終的鐵濃度使用化學分析器，如Hitachi 717化學分析器進行測定。使用Ferrozine試劑，其包括去污劑、檸檬酸和硫脲的緩沖液、抗壞血酸鹽，以及ferrozine。這個試驗是一種非蛋白化(proteinizing)的方法，其中去污劑使脂血樣品澄清，緩沖液將pH降低到＜2.0以便從轉(zhuǎn)鐵蛋白中以Fe3+的形式釋放鐵，抗壞血酸鹽將Fe3+還原成Fe2+，ferrozine與Fe2+反應(yīng)形成有色復合物，在560nm處通過分光光度法進行測量。這個結(jié)果來自從實驗樣品讀數(shù)中減去對照(空白)樣品的值，結(jié)果記做ΔTf-結(jié)合的鐵(μg/dl)。
藥學組合物在許多情況中，鐵復合物可作為包括鐵復合物和溶解該復合物的緩沖液的簡單組合物施用。然而，可添加其它產(chǎn)品，如果期望的話，使鐵輸送、保藏最大化，或者優(yōu)化特定的輸送方法。
“藥學可接受的載體”包括與藥物施用相容的任何和所有溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗菌和抗真菌劑、等張和吸收延遲劑等(Gennaro2000)。優(yōu)選的這種載體或稀釋劑的實例包括，但不限于，水、鹽、Ringer′s乳酸溶液和葡萄糖溶液。也可將補充的活性化合物摻入到組合物中。對于靜脈內(nèi)施用，優(yōu)選將Venofer在生理鹽水中稀釋到大約2-5mg/ml。藥物溶液的體積是基于每個患者的安全體積，由醫(yī)學專業(yè)人員決定。
全面考慮將用于施用的本發(fā)明的鐵復合物組合物制成與打算的施用途徑，如靜脈內(nèi)注射相容的形式。用于腸胃外、真皮內(nèi)或皮下應(yīng)用的溶液和懸液可包括無菌稀釋劑，如注射用水、鹽溶液、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶劑；抗菌劑如苯甲醇或羥苯甲酸甲酯；抗氧化劑如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；緩沖液如醋酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽，以及調(diào)整張力的試劑如氯化鈉或葡萄糖。pH可用酸或堿調(diào)整，如鹽酸或氫氧化鈉。制劑可裝入安瓿、一次性注射器或者由玻璃或塑料制成的多倍劑量小瓶中。
適于注射的藥物組合物包括用于臨時制備無菌可注射溶液或分散體的無菌水溶液或分散體。對于靜脈內(nèi)施用，合適的載體包括生理鹽水、抑菌水、CREMOPHOR ELTM(BASF；Parsippany，N.J.)或磷酸緩沖鹽(PBS)。組合物必需是無菌的，并且應(yīng)當是流體以便可使用注射器施用。這種組合物在生產(chǎn)和貯藏期間應(yīng)當是穩(wěn)定的并且一定抗微生物，如細菌和真菌污染保藏。載體可以是分散介質(zhì)，含有例如，水、多元醇(如甘油、丙二醇、和液體聚乙二醇)，以及其它相容的，合適的混合物。各種抗菌劑和抗真菌劑，例如，苯甲醇、對羥基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、酚、抗壞血酸，和硫柳汞，可能含有微生物污染。組合物中可包括等張劑如糖、多元醇、如甘露醇、山梨醇，和氯化鈉。可延遲吸收的組合物包括如單硬脂酸鋁和明膠的試劑。
可通過將溶于適當溶劑中的所需量的鐵復合物與如所需的單一或組合成分混合，隨后通過滅菌制備無菌可注射的溶液。制備用于制備無菌可注射溶液的無菌固體的方法包括真空干燥和冷凍干燥以產(chǎn)生含有鐵復合物和任何其它所期望成分的固體。
全身施用全身施用可以是經(jīng)粘膜或經(jīng)皮。對于經(jīng)粘膜或經(jīng)皮施用，可選擇能滲透靶屏障的滲透劑。經(jīng)粘膜的滲透劑包括，去污劑、膽鹽、以及梭鏈孢酸衍生物。鼻噴霧劑或栓劑可用于經(jīng)粘膜施用。對于經(jīng)皮施用，將活性化合物制成軟膏、油膏、凝膠，或乳膏。
載體活性化合物可與保護化合物避免被從體內(nèi)迅速清除的載體一起制備，如控制釋放的制劑，包括植入物和微囊化的施用系統(tǒng)?？墒褂蒙锟山到獾幕蛏锵嗳莸木酆衔?，如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐類、聚乙二醇酸(polyglycolic acid)、膠原、聚原酸酯，和聚乳酸。這樣的材料可從ALZA公司(Mountain View，CA)和NOVA Pharmaceuticals，Inc.(Lake Elsinore，CA)買到，或者通過本領(lǐng)域技術(shù)人員制備。
藥物組合物的試劑盒鐵復合物組合物可被包括在試劑盒、容器、包或分液器中，與施用說明一起。當本發(fā)明是以試劑盒提供時，組合物的不同組分可被包裝在獨立的容器中，如安瓿或小瓶，使用前直接混合。組分的這種獨立包裝可允許長期貯藏而不損失組分的活性。
試劑盒也可包括獨立容器中的便于完成特殊試驗的試劑，如診斷試驗。
容器可在任何種類的容器中提供試劑盒中所包括的試劑，以便保持不同組分的壽命并且不被容器的材料吸附或改變。例如，密封的玻璃安瓿或小瓶可包含在中性非反應(yīng)性氣體，如氮氣下包裝的冷凍干燥的鐵復合物或緩沖液。安瓿可由任何合適的材料構(gòu)成，如玻璃，有機聚合物，如聚碳酸酯、聚苯乙烯等，陶瓷，金屬或者典型地用于容納試劑的任何其它材料。合適容器的其它實例包括由相似物質(zhì)制造的瓶，如安瓿，和由用箔作襯里的內(nèi)部構(gòu)成的包袋，如鋁或合金。其它容器包括試管、小瓶、燒瓶、瓶、注射器等。容器可具有無菌入口部分，如一種具有可被皮下注射器針頭刺穿的塞子的瓶。其它的容器可具有被很容易地移去的膜分隔的兩個隔室，一旦去除，允許組分混合?？梢迫サ哪た梢允遣Ａ?、塑料、橡膠等。
指導性材料試劑盒也可與指導性材料一起提供。使用說明可被印在紙或其它物質(zhì)上，和/或在可讀的電子介質(zhì)上提供，如軟盤、CD-ROM、DVD-ROM、微型盤、SACD、Zip盤、錄象帶、錄音帶等。詳細的使用說明可能不與試劑盒物理結(jié)合；相反，使用者可在由試劑盒的生產(chǎn)商或經(jīng)銷商指定的國際互聯(lián)網(wǎng)站上獲得指導，或者以電子郵件方式提供使用說明。
用鐵釋放率比IDI高的組合物治療RLS的方法用鐵釋放率高于IDI的鐵復合物組合物治療RLS的方法包括施用該復合物，在預先確定的時間間隔施用劑量或者對RLS癥狀的出現(xiàn)和再現(xiàn)作出劑量調(diào)整。總的來說，劑量取決于施用的途徑。優(yōu)選的施用途徑是靜脈內(nèi)輸入；然而，某些鐵化合物可肌肉內(nèi)施用如右旋糖酐鐵。然而，任何途徑都是可接受的，只要鐵能從鐵復合物中迅速釋放(比靜脈內(nèi)施用的IDI更迅速)，這樣可治療RLS癥狀。
適當?shù)膭┝克酵ǔ⑹敲縿┝考s10mg到1000mg元素鐵，其可以單劑量或多劑量施用，特別地每次施用至少1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、75.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0、400.0、500.0、600.0、750.0、800.0、900.0、1000.0、和2000.0毫克元素鐵，而且直到每次給藥最大耐受劑量(MTD)。優(yōu)選地，劑量水平將是每劑量約0.1到1000mg；最優(yōu)選地每劑量約100mg到約500mg。化合物可以各種方案施用(見實施例3)。
例如，以單劑量(以1.5-5mg鐵/ml生理鹽水)施用RLS患者含有1000mg元素鐵的可靜脈內(nèi)注射的蔗糖鐵復合物(Venofer)。單次靜脈內(nèi)治療將延長癥狀緩解的時間，大約2到12個月(Nordlander1953)，盡管認為緩解的時間可能較短或較長。如果期望的話，可通過使用MRI測量CSF鐵蛋白(和其它鐵相關(guān)的蛋白)和腦內(nèi)鐵貯藏量監(jiān)控輸入后CNS中鐵狀態(tài)的改變。使用標準的主觀的(例如，患者日記、等級表)和客觀的(例如，P50、SIT、腿活動計)方法測量臨床狀態(tài)，評價RLS患者的輸入后變化。如果期望的話，為了更好地評價RLS癥狀改善的程度，在治療前，大約治療后兩周，以及12個月后或者當癥狀重新出現(xiàn)時，獲取CSF和血清鐵的值，腦內(nèi)鐵的MRI測量值以及睡眠和固定試驗的全部臨床評價。治療后每月獲取臨床等級，腿活動計記錄和血清鐵蛋白。CSF鐵蛋白變化也可用于評價癥狀消失的程度。在實施例2和其中所引用的參考資料中提供更多的細節(jié)。
施用的頻率取決于每個患者的反應(yīng)和所給元素鐵的量。合適的施用方案將是每周一次到每18個月一次，更優(yōu)選地每兩個月到12個月一次，或者任何時間間隔之間，如每兩個月一次和一天，3、4、5、6、7、8、9、10和11個月一次?？蛇x擇地，可特定施用鐵復合物，也就是說，由于癥狀再次出現(xiàn)，只要實施的醫(yī)學專業(yè)人員注意安全預防。
然而，應(yīng)當被理解的是，對于任何特定患者來說具體的劑量和施用頻率可變化，取決于各種因素，包括所使用的鐵復合物的活性、該復合物的代謝穩(wěn)定性和作用時間、年齡、體重、總的健康狀況、性別、飲食、施用的方式和時間、排泄率、藥物組合、特定疾病的嚴重性，以及宿主正在接受的治療。
實施例提供下列實施例用于舉例說明本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員可很容易地對本發(fā)明的組合物和方法進行無關(guān)緊要的改動。實施例不意味著以任何方式限制本發(fā)明。
實施例1鐵釋放率靜脈內(nèi)鐵劑先經(jīng)過細胞內(nèi)攝入，加工以及可控制的釋放，間接地將鐵捐贈給轉(zhuǎn)鐵蛋白。然而，靜脈內(nèi)鐵劑的許多不利的反應(yīng)是劑量相關(guān)的，劑量限制的并且隨試劑的種類而變化的證據(jù)支持可能也發(fā)生直接捐贈的假說。靜脈內(nèi)施用足夠劑量的鐵可使鐵結(jié)合能力短暫地過飽和，這些試劑它們直接捐贈鐵的潛力可變化。
體外測定候選鐵復合物(葡萄糖酸鐵(也稱作溶于蔗糖中的葡萄酸鐵鈉復合物，F(xiàn)errlecit))的靜脈注射制劑、蔗糖鐵(蔗糖鐵注射劑USP，Venofer)以及右旋糖酐鐵(INFeD和Dexferrum)的兩種可獲得的制劑將鐵捐贈給血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白的能力。將鐵劑的系列稀釋液加到新鮮血清中，通過氧化鋁柱除去鐵-糖復合物，測定得到的洗脫液中轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合的鐵。
這種測定用比色分析血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合的鐵，可靠地排除了鐵劑和無機鐵的干擾(Jacobs和Alexander 1990)。
腸胃外鐵制劑使用5ml安瓿中12.5mg/ml的溶于蔗糖的葡萄糖酸鐵復合物，F(xiàn)errlecit(Watson Pharmaceuticals，Inc，Corona，CA)、蔗糖鐵(5ml小瓶中20mg/ml，蔗糖鐵注射劑USP，Venofer；AmericanRegent Inc.，Shirley，NY)以及右旋糖酐鐵的兩種制劑(INFeD；Watson Pharmaceuticals，Inc，Corona，CA；和Dexferrum；AmericanRegent Inc.，Shirley，NY；兩者都是在2ml小瓶中，100mg/ml)。
對于每個實驗，在同一天檢查在所有實驗濃度的所有試劑。對于鐵劑的每個濃度，在使用的那一天配制等摩爾貯存液，在0.9％ NaCl中連續(xù)稀釋(≤1∶10)。
實驗的鐵濃度靜脈內(nèi)推注125mg葡萄糖酸鐵(1900μg/dl；(無名的2001))、100mg蔗糖鐵(3,000μg/dl(Danielson等，1996))或者100mg右旋糖酐鐵(3,080到3,396μg/dl，文獻上的數(shù)據(jù)，American Regent Inc.，Shirley，NY)后，我們在預計包括試劑的最大血漿濃度(Cmax)的范圍中檢查鐵制劑的濃度。
測定轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合的鐵使用Jacobs等的方法測定血清轉(zhuǎn)鐵蛋白所結(jié)合的鐵的量(Jacobs和Alexander 1990)。將0.1ml貯存的鐵制劑溶液加到1.5ml新鮮匯集的血清中并孵育5分鐘。將樣品通過2.0g氧化鋁柱以吸收有機的和藥物結(jié)合的鐵，收集洗脫液并重構(gòu)到1.5ml的總體積，使用Hitachi 717化學分析器(Boehringer Mannheim Corporation；Indianapolis，IN)測定最終的鐵濃度。使用Hitachi指定的ferrozine試劑(Boehringer)，其包括去污劑、檸檬酸和硫脲的緩沖液、抗壞血酸鹽，以及ferrozine。簡要地，這是一種非蛋白化(non-proteinizing)的方法，其中去污劑使脂血樣品澄清，緩沖液將pH降低到＜2.0以便從轉(zhuǎn)鐵蛋白中以Fe3+的形式釋放鐵，抗壞血酸鹽將Fe3+還原成Fe2+，ferrozine與Fe2+反應(yīng)形成有色復合物，在560nm處通過分光光度法進行測量。這個結(jié)果來自從實驗樣品讀數(shù)中減去對照(空白)樣品(0.1ml 0.9％NaCl加上1.5ml血清，不添加鐵劑)的值，結(jié)果記做ΔTf-結(jié)合的鐵(μg/dl)。
觀察到下列結(jié)果，并且在下面的表2中和以圖示在圖1中(X軸，所添加的元素鐵(μg/dl)；Y軸，Δ鐵(μg/dl)；G，葡萄糖酸鹽；S，蔗糖；D，dexferrum；I，INFeD)表示(1)柱提取除去所有靜脈內(nèi)鐵劑的無血清樣品中＞99％的可檢測到的鐵；(2)Δ鐵隨著每種所添加的試劑的量而增加；和(3)在四種試劑中，Δ鐵反應(yīng)以劑量相關(guān)的方式不同。
表2
實施例2診斷和評價RLS癥狀和監(jiān)控治療的試驗提供下列試驗以幫助評價RLS的診斷和治療。醫(yī)療從業(yè)者將選擇適于每個特定患者的那些試驗。在許多情況中，監(jiān)控RLS的診斷標準將足以評價治療功效。
診斷因素當符合四個診斷標準時提示是RLS(1)迫切要求運動肢體(通常是腿)的感覺；(2)運動不安以降低感覺；(3)當在休息時，癥狀重新出現(xiàn)或者惡化；和(4)在發(fā)生RLS癥狀或癥狀嚴重時晝夜節(jié)律顯著改變；也就是說，癥狀在晚上和夜間惡化(Allen和Earley 2001a)。
Johns Hopkins RLS嚴重程度表(JHRLSS)(Allen and Earley2001b)這種四點表(0-3對應(yīng)于無癥狀到癥狀嚴重)基于通常發(fā)生RLS癥狀那天的時間?；谶@個表的嚴重程度可來自有組織的診斷性的臨床面談(見下面)；這個表最常用于描述特性，不作為治療結(jié)果的衡量標準。
有組織的診斷性的臨床面談和診斷性調(diào)查表這些是由經(jīng)過訓練的人員或患者(自我管理的)用于描繪RLS癥狀學的標準的，生效的工具?？上驖撛诘腞LS患者詢問的類型和問題參考表3。
表3有組織的診斷性的臨床面談和診斷性調(diào)查表
睡眠-RLS日志(Earley等，1998)這個日志由RLS患者保存并在臨床醫(yī)生要求的時間期間當發(fā)生RLS癥狀和睡眠時進行記錄。
CNS和血液鐵狀態(tài)取樣(腰椎穿刺和血液樣本方法)腰椎穿刺是使用無菌技術(shù)在L4/L5或L5/S1腰椎間隙之間進行。以1ml等分試樣收集10ml CSF。使用標準技術(shù)從這些樣品中測定鐵、鐵蛋白ceruloplasm和轉(zhuǎn)鐵蛋白濃度。
在腰椎穿刺的時候，也采集10ml血液。然后將血清用于測定鐵、鐵蛋白、總鐵結(jié)合力(TIBC)、鐵飽和度百分率(％Sat)以及轉(zhuǎn)鐵蛋白受體濃度。這些變量是測定體內(nèi)總鐵貯存量的最準確的血液指標。
對于許多患者，如果考慮到腰椎穿刺中所包括的危險，血液取樣可能足以監(jiān)控治療成功并且是期望的。
多導睡眠圖(PSG)夜晚的PSGs提供直接測量睡眠效率和NREM睡眠中每小時PLMS的數(shù)目。這兩種測量可用作嚴重程度的主要依賴的測量方法。也可根據(jù)Rechtschaffen和Kales標準(Rechtschaffen和Kales 1968)憑視覺對睡眠進行評分，可使用公認的標準(Force 1993)對PLMS評分。
根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)中公知的方法(Montplaisir等，1998)獲得連續(xù)兩個晚上的完整標準的臨床多導睡眠圖。通常監(jiān)視的時間是23:00到07:00。
建議的固定試驗(SIT)(Montplaisir等1986，Pelletier等1992，Montplaisir等1998)受治療者躺下，腿露出來，上身傾斜60°。通過EEG監(jiān)視受治療者以防止它們睡著，脛骨前肌上的EMG記錄腿部運動。要求受治療者不要活動1小時。在這個期間，將發(fā)生運動，運動的數(shù)量與RLS嚴重程度相關(guān)。通常監(jiān)視的時間是08:00-09:00，16:00-17:00和22:00-23:00。
腿活動計/監(jiān)視器(LAM)可用LAM獲得腿活動的移動記錄。LAM測定PLMS/小時，與PSGs相比對于患失眠癥或PLMS的患者有±5％的誤差(Gorny等1986)。對于臨床醫(yī)師希望評價的每個任意時期，LAMs日常佩帶至少3個連續(xù)夜晚。
腦內(nèi)鐵的MRI測量(Allen等2001)簡要地，根據(jù)已知的方法(Gelman等1999)，使用GE 1.5T信號系統(tǒng)(General Electric，Milwaukee，WI)上FID和回聲的梯度回聲取樣(GESFIDE)序列，從一次掃描中獲得松弛率R2*和R2的多切片測量值。
重建R2*和R2圖象作為NIH圖象1.61中的單一，多切片“堆”，公眾區(qū)NIH圖象程序(由美國國立衛(wèi)生院開發(fā)，可從國立衛(wèi)生院獲得)。顯示在R2*圖象上含鐵結(jié)構(gòu)的切片。然后由兩名受過訓練的研究人員通過手工獨立地追蹤該結(jié)構(gòu)，對于區(qū)域顯示最好的切片使用標準的解剖學準則。將左右兩個半球的松弛率平均。然后從R2*和R2的差異中計算R2′。
實施例3施用Venofer和其它鐵復合物(預測的)Venofer的劑量可由醫(yī)學專業(yè)人員根據(jù)體重、疾病嚴重程度、以及每個患者對藥物的個體反應(yīng)進行調(diào)整。根據(jù)表4靜脈內(nèi)施用Venofer或其它鐵復合物。
例如，1000mg Venofer作為單次靜脈內(nèi)劑量施用RLS患者。單次靜脈內(nèi)治療將延長RLS癥狀緩解的時間，大約2-12個月，盡管認為緩解的時間可能更短或更長。如果期望的話，可使用CNS和血液鐵試驗監(jiān)控輸入后CNS中鐵狀態(tài)的改變(見實施例2)。使用標準的主觀的(例如，患者日記、等級表)和客觀的(例如，P50、SIT、腿活動計，見實施例2)方法測量臨床狀態(tài)，評價RLS患者的輸入后變化。如果期望的話，為了更好地評價RLS癥狀改善的程度，在治療前，大約治療后兩周，以及再次在12個月后或者當癥狀重新出現(xiàn)時，測定CSF和血清鐵的值，以及腦內(nèi)鐵的那些值，獲取睡眠和固定試驗的全部臨床評價。
施用前，在生理鹽水中將Venofer[以5ml中100mg元素鐵(20mg/ml提供]稀釋到2-5mg/ml。然后通過自由流動的外周或中心靜脈內(nèi)輸入施用該溶液。藥物溶液的體積是基于每個患者的安全體積，由醫(yī)學專業(yè)人員確定。
對于直接注射，可在2分鐘期間施用100mg以及在5分鐘期間施用200mg。一周后，或者根據(jù)需要一旦再次出現(xiàn)RLS癥狀時重復注射。
表4 向RLS患者施用Venofer的實例
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1.一種治療不安腿綜合征的方法，其包括向受治療者施用鐵釋放率高于IDI的鐵復合物，其中鐵釋放率在至少2,000μg/dl的濃度下測定。
2.權(quán)利要求1的方法，其中施用是腸胃外施用。
3.權(quán)利要求1的方法，其中施用的鐵量是100mg到2000mg。
4.權(quán)利要求1的方法，進一步包括再次出現(xiàn)至少一種不安腿綜合征的癥狀時第二次施用所述的鐵復合物。
5.權(quán)利要求1的方法，進一步包括第一次施用后4天到12個月后，第二次施用所述的鐵復合物。
6.權(quán)利要求1的方法，其中鐵復合物是蔗糖鐵。
7.權(quán)利要求6的方法，其中蔗糖鐵是蔗糖鐵注射劑USP。
8.一種治療不安腿綜合征的方法，其包括施用給受治療者通過氧化鋁柱試驗測定的，在3438μg/dl濃度時鐵釋放率至少115μg/dl的鐵復合物。
9.權(quán)利要求8的方法，其中釋放率是至少120μg/dl。
10.權(quán)利要求8的方法，其中釋放率是至少140μg/dl。
11.權(quán)利要求8的方法，其中施用是靜脈內(nèi)施用。
12.權(quán)利要求8的方法，其中施用的鐵量是100mg到2000mg。
13.權(quán)利要求8的方法，進一步包括再次出現(xiàn)至少一種不安腿綜合征的癥狀時第二次施用所述的鐵復合物。
14.權(quán)利要求8的方法，進一步包括第一次施用后4天到12個月后，第二次施用所述的鐵復合物。
15.權(quán)利要求9的方法，其中鐵量是100mg到2000mg。
16.權(quán)利要求10的方法，其中鐵量是100mg到2000mg。
17.在治療不安腿綜合征的方法中，包括施用IDI，改良包括用釋放率高于IDI的鐵復合物取代IDI。
18.權(quán)利要求17的方法，其中鐵復合物是蔗糖鐵。
19.一種試劑盒，其包括釋放率高于IDI的鐵復合物組合物，注射器，和用于注射器的針頭，其中鐵釋放率在至少2,000μg/dl的濃度下測定。
20.權(quán)利要求19的試劑盒，其中鐵復合物是蔗糖鐵。
全文摘要
一種治療不安腿綜合征的方法，包括施用受治療者釋放率高于IDI的鐵復合物。鐵釋放率在至少2,000μg/dl的濃度下測定。
文檔編號A61P21/00GK1771044SQ03826097
公開日2006年5月10日 申請日期2003年5月13日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月14日
發(fā)明者M·J·赫勒內(nèi)克, R·A·朗格, F·B·奧爾德哈姆, M·L·托卡斯 申請人:維福(國際)股份公司