專利名稱：一種頸椎通絡膠囊的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種頸椎通絡膠囊及其制備方法。
背景技術：
頸椎病是指因頸椎退行性變引起頸椎管或椎間孔變形、狹窄，刺激、壓迫頸部脊髓、神經(jīng)根、交感神經(jīng)造成其結(jié)構(gòu)或功能性損害所引起的臨床表現(xiàn)。此病多見于40歲以上患者。根據(jù)病理變化，頸椎病可分為五型(1)脊髓型；(2)神經(jīng)根型；(3)椎動脈型；(4)交感神經(jīng)型；(5)混合型。
頸椎病的病因一般為(1)先天因素，如先天性頸椎管狹窄、先天性頸椎畸形等；(2)慢性勞損；(3)急性損傷。病理變化一般為頸椎間盤退行性變，纖維環(huán)彈力減退而向四周膨出或髓核疝出可壓迫神經(jīng)根、脊髓、椎動脈；椎間隙狹窄，椎體邊緣骨質(zhì)增生，黃韌帶肥厚、變性，使神經(jīng)根管及椎管容積變小，小關節(jié)及鉤突關節(jié)退行性變致小關節(jié)脫位可造成頸椎退行性滑脫。脊髓型頸椎病表現(xiàn)為四肢無力、僵硬、肌張力高、腱反射亢進，可引出病理反射；神經(jīng)根型頸椎病表現(xiàn)為頸部僵硬、活動受限，上肢放射痛、麻木、淺感覺遲鈍、肌力減退、反射弱；椎動脈型頸椎病表現(xiàn)為頭痛、頭暈等腦血管痙攣癥狀及眩暈、惡心、耳嗚、視物不清等腦缺血癥狀；交感神經(jīng)型頸椎病出現(xiàn)霍納氏綜合癥、心動過速或過緩、雙上肢及頭面部血管痙攣或擴張，肢體少汗或多汗；混合型頸椎病有上述兩種以上的臨床表現(xiàn)。
目前，國內(nèi)外治療頸椎病的方法很多，常見的有手術和藥物治療等療法。手術療法具有一定的危險性，增加了病人的痛苦；現(xiàn)有的用于治療頸椎病的藥物，其療效差、毒性作用大。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術問題是克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種用于治療神經(jīng)根性頸椎病的頸椎通絡膠囊及其制備方法，該膠囊療效好、毒性作用小。
本發(fā)明所采用的技術方案是一種頸椎通絡膠囊，它的內(nèi)容物主要是由下列重量份的原料藥制成桂枝166.6份白芍 500份制草烏 200份威靈仙 500份 莪術 500份僵蠶266.7份葛根666.7份牛蒡子500份黃芪500份磁石1000份 續(xù)斷 500份其制備方法包括下列步驟(1)取所述重量配比的桂枝粉碎成細粉，備用；(2)取所述重量配比的葛根粉碎成粗粉，分別加8倍、6倍量75％乙醇回流提取二次，第一次2小時，第二次1.5小時，合并回流提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度為1.30～1.35(70℃)的稠膏，備用；(3)取所述重量配比白芍、制草烏、威靈仙、莪術、僵蠶、牛蒡子、黃芪、磁石、續(xù)斷加水煎煮提取二次，第一次3小時，第二次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.10～1.15(70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量達70％，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，備用；(4)合并所述步驟(2)、(3)制得的稠膏，加入所述步驟(1)制得的桂枝細粉，混勻，在65℃下干燥，粉碎成細粉，加入適量淀粉，混勻，分裝膠囊。
本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明的頸椎通絡膠囊的內(nèi)容物主要是由桂枝、白芍、制草烏、威靈仙、莪術、僵蠶、葛根、牛蒡子、黃芪、磁石、續(xù)斷作原料藥制成，它具有溫經(jīng)通絡、活血止痛的功能，對頸椎病治療效果效好、毒性作用小，特別適于治療寒瘀阻絡型神經(jīng)根性頸椎病。
以下通過試驗例來進一步闡述本發(fā)明所述的頸椎通絡膠囊的有益效果試驗例一、頸椎通絡膠囊主要藥效學試驗摘要頸椎通絡膠囊功能溫經(jīng)通絡，活血止痛；主治神經(jīng)根性頸椎病(屬寒瘀阻絡型)。經(jīng)動物實驗證實，頸椎通絡膠囊對急性實驗性頸椎神經(jīng)根炎模型大鼠血漿6-酮-前列腺素F1α(6-K-PGF1α)含量明顯增加，對其模型大鼠血漿血栓素B2(TXB2)含量明顯降低；對化學物質(zhì)—醋酸所致動物疼痛模型，及對熱板刺激所致動物疼痛模型，均具有明顯的鎮(zhèn)痛作用；對二甲苯致小鼠耳腫，對冰醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性增強，對角叉菜膠所致大鼠足腫及小鼠足腫的急性炎癥，對棉球所致大鼠肉芽腫的慢性炎癥，對炎癥模型大鼠炎癥局部組織(小鼠足部)內(nèi)前列腺素E2(PGE2)的含量增多等，均有明顯的對抗作用；對急性實驗性血瘀證模型大鼠血流變性具有明顯的改善作用，對該模型大鼠血小板聚集功能有明顯的抑制作用。以上各項實驗結(jié)果均能說明頸椎通絡膠囊對急性炎癥滲出過程、慢性炎癥組織增生過程，均有明顯的抑制作用；對化學刺激及熱板刺激誘發(fā)的疼痛均具有明顯的抑制作用；并且具有良好的活血化瘀作用，為臨床應用提供科學依據(jù)。
實驗目的采用清潔級標準化動物進行主要藥效學作用的實驗，證實頸椎通絡膠囊(頸椎通絡)的溫經(jīng)通絡、活血止痛的功效，為臨床檢驗提供實驗依據(jù)。
1 頸椎通絡膠囊對頸神經(jīng)根炎模型大鼠血漿6-酮-前列腺素F1α(6-K-PGF1a)、血栓素(TXB2)含量的影響1.1 實驗材料1.1.1 藥物受試藥為頸椎通絡膠囊，口服膠囊劑型，每粒裝0.4g，合生藥5.3g，由珠海星光制藥有限公司提供，批號20011222，臨床擬定成人日用量為(每日3次，每次5粒，每粒裝0.4g，成人體重按60kg計算)0.10g/kg，合生藥1.325g/kg。實驗時用蒸餾水配制成14％、7.0％、3.5％不同濃度的混懸液，以10ml/kg體重灌胃給藥。陽性對照藥——伸筋丹膠囊(伸筋丹)由威海人生藥業(yè)集團股份有限公司提供，批號020105，每粒裝0.15g，口服膠囊劑型，成人日用量(每日3次，每次5粒，每粒0.15g，成人體重按60kg計算)0.0375g/kg；實驗時將伸筋丹內(nèi)容物用蒸餾水配制成2.6％的混懸液以10ml/kg體重灌胃給藥。戊巴比妥鈉由廣東佛山市醫(yī)藥公司提供，批號981012。6-酮-前列腺素F1α(6-K-PGF1α)及血栓素B2(TXB2)放射免疫試劑盒由北京東州生物制品研究所提供，批號20020901。
1.1.2 實驗動物大鼠wistar，體重220～230g，雌雄各半，由貴陽醫(yī)學院實驗動物中心提供，清潔級，合格動物，合格證號0200021。
1.1.3 主要儀器3-9型血流變學、微循環(huán)、紅細胞變形系列儀器，由成都麥塞科貿(mào)公司提供。
1.2 實驗方法與結(jié)果1.2.1 模型制作模擬頸神經(jīng)根炎模型大鼠制作的方法如下造模型之前用8％硫化鋇溶液脫毛劑外涂大鼠頸部脫毛后，逐只以3％戊巴比妥鈉0.1ml/100g體重腹腔注射(ip)麻醉，俯臥固定于動物小手術臺上，頸部皮膚常規(guī)備皮消毒后鋪洞巾，以第2胸椎脊突為標記，以頸7為中心，沿棘突縱形切開皮膚1.5cm及皮下組織，用尖刀銳性分離頸突兩側(cè)的肌肉，暴露橫突以上椎板，用眼科剪刀剪斷頸6、7兩側(cè)橫突以上椎板，暴露出椎管內(nèi)的脊髓，用神經(jīng)剝離子將脊髓推向一側(cè)，各顯露出雙側(cè)頸6、7神經(jīng)根，將浸有福爾馬林的定量濾紙片貼放在頸6、7神經(jīng)腋下，仔細止血，逐層縫合，無菌包扎，制作頸神經(jīng)根炎模型手術完畢。
1.2.2 實驗分組及給藥另取10只正常大鼠做空白對照組，與手術后的大鼠均常規(guī)飼養(yǎng)；觀察3天；除因手術失誤致死之大鼠外，按表1所示分組，空白對照組及模型組灌胃給予蒸餾水10ml/kg體重，頸椎通絡膠囊組及伸筋丹組按表1劑量灌胃給藥，容量同空白對照組，每日一次，連續(xù)14次。
1.2.3 測定6-K-PGF1α、TXB2含量采用放射免疫測定法測定6-K-PGF1 α、TXB2含量。末次藥后24h，經(jīng)股靜脈取空腹血5ml(按6-K-PGF1α及TXB2放射免疫試劑盒說明要求防凝)。分離血漿，測定6-K-PGF1α及TXB2含量(報告單位貴陽中醫(yī)學院附屬醫(yī)院一附院血流變研究室)。結(jié)果見表1。
由表1可見頸椎通絡膠囊大劑量組能使頸神經(jīng)根炎模型大鼠血漿中6-K-PGF1α含量明顯增多，與空白對照組、模型組、頸椎通絡膠囊中、小劑量組及伸筋丹組比較，差異非常顯著，P＜0.01；頸椎通絡膠囊中、小劑量組、伸筋丹組均有升高趨勢。頸椎通絡膠囊大、中劑量組，均可使血漿中TXB2含量降低，與空白對照組近似，優(yōu)于伸筋丹，與模型組相比差異顯著P＜0.05；伸筋丹和小劑量組作用不明顯。
前列腺素I2(PGI2)具有很強的擴血管及抗血小板聚集的作用；但是PGI2極不穩(wěn)定，難以精確測定。而6-K-PGF1α是PGI2較穩(wěn)定的存在酶裂解產(chǎn)物，可用6-K-PGF1α放射免疫分析法分析PGI2的定量；6-K-PGF1α含量增加，即表明血漿中PGI2也增多，表明頸椎通絡膠囊擴血管、抗血小板聚集作用增強。而TXA2是花生四烯酸(AA)重要代謝產(chǎn)物之一，具有誘導血小板聚集，降低CAMP含量，收縮血管作用；但也不穩(wěn)定，很快水解成TXB2；而測定TXB2方法較簡便、靈敏高，所以用放免方法測定血漿TXB2能代表TXA2含量。
由表1可見，頸椎通絡膠囊能使6-K-PGF1α含量增多，TXB2含量減少，使頸神經(jīng)根部毛細血管通透性降低，減輕局部水腫發(fā)生的程度及血液凝聚狀態(tài)。瘀血減少，血流通暢，溫經(jīng)通絡，活血止痛，消除瘀血；符合中醫(yī)通則不痛、痛則不通、“治痛必治瘀”的理論。該結(jié)果表明頸椎通絡膠囊溫經(jīng)通絡，活血化瘀作用的機理。
表1對頸神經(jīng)根炎模型大鼠血漿內(nèi)6-K-PGF1α、TXB2含量的影響(x±s)劑量動物數(shù)6-K-PGF1αTXB2組別(g/kg)(只)(pg/ml) (pg/ml)空白對照組- 10 746.48±540.0 1173.4±142.0#病理模型組- 10 554.00±282.401323.9±133.6頸椎通絡(大) 1.4010 3584.90±3033.0**##ΔΔs1163.5±126.3#頸椎通絡(中) 0.7010 1506.10±1977.0 1186.8±143.5#頸椎通絡(小) 0.3510 1257.50±1028.6 1228.8±238.0伸筋丹膠囊0.2610 550.49±157.601233.4±238.0注各組與空白對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01各組與模型組比較#P＜0.05 ##P＜0.01各組與伸筋丹比較ΔP＜0.05 ΔΔP＜0.01
頸椎通絡膠囊大劑量組與小劑量組比較 sp＜0.052 頸椎通絡膠囊抗炎作用2.1 實驗材料2.1.1 藥物受試藥物頸椎通絡膠囊由珠海星光制藥有限公司提供，批號20011222，口服膠囊劑型，每粒裝0.4g，含生藥5.3g，每1g膠囊內(nèi)容物合生藥13.25g，臨床成人日用劑量(每日3次，每次5粒，每粒裝0.4g，成人體重按60kg計)為0.10g/kg，合生藥1.325g/kg；陽性對照藥——伸筋丹膠囊由威海人生藥業(yè)集團股份有限公司提供，批號020105，每粒裝0.15g，口服膠囊劑型，成人日用量為(一日三次，一次5粒，成人體重按60kg計算)0.0375g/kg；醋酸，由重慶南方化學試劑廠提供，批號921102；伊文思蘭，由上海化學試劑站經(jīng)銷，批號821102；角叉菜膠，由遼寧省藥物研究所提供，批號860304；二甲苯，由上?；瘜W試劑廠提供，批號9610120。
2.1.2 實驗動物小鼠昆明種系，清潔級，體重20±2g，♀♂兼用；大鼠wistar，清潔級，體重210～230g，♀♂各半；均由貴陽醫(yī)學院實驗動物中心提供，實驗動物質(zhì)量合格證書號為NO200200018。
2.1.3 主要實驗儀器JN-A型精密扭力天平、TMP-1型上皿式電子稱，由湖南儀表廠生產(chǎn)；定時鐘由上海第三鐘表廠生產(chǎn)。VIS型721分光光度計，由上海第三分析儀器廠生產(chǎn)；游標卡尺，由上海醫(yī)療器械廠生產(chǎn)；DU-70紫外分光光度計，由成都貝克曼公司提供。
2.2 實驗方法與結(jié)果2.2.1 頸椎通絡膠囊對二甲苯誘發(fā)小鼠耳腫抑制作用取小鼠110只，隨機分為5組，即空白對照組(對照組)灌胃(po)，給予蒸餾水20ml/kg；頸椎通絡膠囊大、中、小劑量組，劑量分別為成人日用藥量20倍、10倍、5倍，即2.0g、1.0g、0.5g/kg；將頸椎通絡膠囊內(nèi)容物用蒸餾水配制成10％、5％、2.5％濃度的混懸液，給予po；陽性對照藥伸筋丹膠囊(伸筋丹)組，將伸筋丹膠囊內(nèi)容物，用蒸餾水配制成1.85％混懸液po，容量均同空白對照組20ml/kg，每日1次，連續(xù)3d(天)；末次藥后60、120min，以二甲苯0.03ml/只分別涂于各鼠右耳的前后兩面，左耳作對照，15min后將各鼠右、左耳剪下，取相同部位以直徑為8mm的打孔器取下右、左兩耳片，分別稱重(mg)，計算各鼠耳腫脹度(右耳-左耳重量)mg，并計算各鼠耳腫脹抑制率。結(jié)果見表2。
從表2可見不同批次實驗頸椎通絡膠囊組小鼠耳腫脹度均比空白對照組明顯減輕，藥后1h抗炎作用比2h作用強；大、中劑量組與伸筋丹作用近似。即表明頸椎通絡膠囊對二甲苯致小鼠急性炎癥于藥后1h即可產(chǎn)生明顯抑制作用，該作用可延續(xù)2h之久。
表2頸椎通絡膠囊抑制二甲苯致小鼠耳腫脹作用(x±s)給藥1h 給藥2h劑量組別(g/kg) 動物數(shù)腫脹度 抑制率動物數(shù) 腫脹度 抑制率(只) (mg) ％ (只)(mg) (％)對照組 -1015.0±1.71 -11 10.83±2.33 -頸椎通絡2.0 105.6±1.28***63 116.28±1.90***42膠囊(大)頸椎通絡1.0 1010.3±3.01***31 116.19±2.00**22膠囊(中)頸椎通絡0.5 1011.6±4.1*23 11 8.20±2.22*24膠囊(小)伸筋丹膠囊 0.37 107.2±2.1***52 117.43±1.97**35注各給藥組與對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.0012.2.2 頸椎通絡膠囊對小鼠腹腔毛細血管通透性增強的影響取小鼠50只，隨機分組，給藥同實驗項目2.2.1；末次藥后1h，逐只尾靜脈注射(尾iv)2％伊文思蘭溶液0.1ml/10g體重，立即腹腔注射(ip)0.6％醋酸溶液0.2ml/只；20min斷頭處死小鼠；向小鼠逐只ip蒸餾水5ml，輕輕揉小鼠腹部，剖開腹腔收集腹腔液體，將這些液體分別注入試管，置于離心機以1000r/min離心5min；取上清液3ml，用721型分光光度計比色，于波長590nm處讀取光密度(0D)。各組OD值經(jīng)統(tǒng)計學處理，進行組間t檢驗。
結(jié)果見表3。
從表3可見頸椎通絡膠囊大、中、小劑量組OD值均明顯低于空白對照組；與伸筋丹作用近似，表明各給藥組對化學物質(zhì)醋酸誘發(fā)小鼠腹腔毛細血管通透性增強具有明顯的抑制作用。提示頸椎通絡膠囊具有明顯抑制急性炎癥作用。
表3頸椎通絡膠囊抑制醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增強作用(x±s)劑量動物數(shù) 光密度組別(g/kg) (只) (OD)對照組 - 10 0.4989±0.1322頸椎通絡膠囊(大)2.010 0.1868±0.0530***頸椎通絡膠囊(中)1.010 0.2265±0.0444***頸椎通絡膠囊(小)0.510 0.2955±0.0637***伸筋丹膠囊 0.37 10 0.2014±0.0637***注各給藥組與對照組比較，**P＜0.01 ***＜0.0012.2.3 頸椎通絡膠囊對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹抑制作用大鼠50只♀♂各半，隨機分成5組，每組10只。首先用游標卡尺常規(guī)測定各組大鼠右后足跖厚度(mm)，同時分別稱重，po給藥，劑量按表4所示，每日1次，連續(xù)3次；末次藥后立即以1％角叉菜膠0.1ml/只注射于大鼠右后足跖部皮下，誘發(fā)足跖炎癥；測定致炎后1h、2h、4h、8h大鼠右后足跖厚度，計算足腫脹度，同時經(jīng)統(tǒng)計學處理，進行組間t檢驗。結(jié)果見表4。
由表4可見頸椎通絡膠囊大、中、小劑量均能非常顯著的抑制角叉菜膠所致大鼠足跖亞急性炎癥，腫脹度比同時限對照組及伸筋丹組低，且顯效快，持續(xù)時間長達8h之久，腫脹抑制率比對照組及伸筋丹組明顯增高。
表4頸椎通絡膠囊對角叉菜膠誘發(fā)大鼠足腫脹的抑制作用(x±s n＝10)劑量 足腫脹度mm 腫脹抑制率(％)組別 (g/kg) 1h 2h 4h 8h 1h 2h 4h 8h對照組 - 2.29±0.26 2.82±0.46 2.97±0.563.06±0.31 - ---頸椎通絡1.401.09±0.4***2.23±0.32***2.49±0.30*2.34±0.27*52 21 16 24膠囊(大)頸椎通絡0.701.43±0.48***2.28±0.6**2.35±0.57*2.57±0.67*38 19 21 16膠囊(中)頸椎通絡0.351.89±0.22**2.20±0.43*2.63±0.43*2.64±0.42*18 22 11 14膠囊(小)伸筋丹膠囊 0.262.09±0.55 2.46±0.45 2.45±0.33*2.52±0.34*9 13 18 18注各給藥組與對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***＜0.0012.2.4 頸椎通絡膠囊對角叉菜膠致小鼠足腫抑制作用昆明種系小鼠100只，隨機分成5組，按表5所示藥物、劑量po給藥，每日一次，連續(xù)4次；末次藥后1h以1％角叉菜膠生理鹽水溶液0.05ml/只注射于各鼠右后足跖部皮下致炎，于致炎后2h、4h分別取出各組小鼠10只，剪取各鼠左、右兩足(以后肢長毛與短毛交界處為剪足標準)分別稱重(mg)，計算各鼠腫脹度后，剝皮剪碎放入5ml生理鹽水30min，濾過，取濾液3ml置于DU-70紫外分光光度計比色杯中，于波長278nm處測定前列腺素E2(PGE2)含量光密度(OD)值，將OD值數(shù)據(jù)統(tǒng)計學處理，進行組間t檢驗，結(jié)果見表5。
由表5可見頸椎通絡膠囊大、中劑量及伸筋丹灌胃給藥后2小時，對角叉菜膠所致小鼠足跖炎癥具有明顯的抑制作用；小劑量組及藥后4小時作用不明顯；而各給藥組均可使小鼠炎癥局部的PGE2含量明顯減少；說明頸椎通絡膠囊抗炎作用與其抑制PGE2合成和釋放有密切關系。PGE2在體內(nèi)是一種致炎物質(zhì)，頸椎通絡膠囊使PGE2含量減少，是該制劑抗炎作用的依據(jù)。
表5頸椎通絡膠囊對角叉菜膠致小鼠足腫脹抑制作用(x±s n＝10)劑量足腫脹度(mg) PGE2含量組別(g/kg)藥后2h 藥后4h(pg)對照組 - 96.3±16.23106.15±25.87 0.3382±0.035頸椎通絡膠囊2.062.0±17.80***86.31±15.610.1637±0.060***(大)頸椎通絡膠囊1.080.3±13.54*88.31±15.610.1751±0.096***(中)頸椎通絡膠囊0.586.80±12.30 89.42±23.340.1104±0.027***(小)伸筋丹膠囊 0.37 77.00±17.68*85.42±1 8.00 0.0915±0.023***注各給藥組與對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.0012.2.5 頸椎通絡膠囊對大鼠棉球肉芽腫組織增生抑制作用♂wistar大鼠50只，逐只以麻醉乙醚進行吸入麻醉，雙側(cè)腹股部剪毛常規(guī)消毒皮膚，切開約0.5cm，將預先準備的含有青霉素800u的10mg無菌干棉球埋入切口，縫合皮膚切口；正常飼養(yǎng)2天，將棉球未脫落的大鼠50只，隨機分成5組，分別稱重后，按表6所示藥物、劑量po給藥8天，每天一次；第9天打開切口將棉球連同周圍組織合并取出，分別稱濕重，減去原棉球10mg干重，其差值為該鼠的肉芽組織濕重(mg)；烘干后再分別稱重，即為肉芽腫干重，計算抑制率；經(jīng)統(tǒng)計學處理，進行組間t檢驗。結(jié)果見表6。
由表6可見頸椎通絡膠囊大、中劑量組對大鼠棉球肉芽組織增生具有明顯的抑制作用，與伸筋丹作用近似，表明頸椎通絡膠囊對慢性炎癥具有明顯的抑制作用；頸椎通絡膠囊小劑量抑制作用不明顯，具有量—效正相關關系。
表6頸椎通絡膠囊對大鼠棉球肉芽腫增生抑制作用(x±s n＝10)棉球肉芽腫重量(mg) 抑制率％劑量組別(g/kg)濕重 干重 濕重干重對照組 - 104.7±14.6 31.1±4.5 - -頸椎通絡膠1.40 82.9±18.8**25.4±3.5**21 19囊(大)頸椎通絡膠0.70 88.2±10.3**26.6±3.4**16 18囊(中)頸椎通絡膠0.35 100.2±15.1 29.3±6.9 4 6囊(小)伸筋丹膠囊0.26 90.3±10.4*26.2±3.6**11 16注各給藥組與對照組比較*P＜0.05 **P＜0.013 頸椎通絡膠囊鎮(zhèn)痛作用3.1 實驗材料3.1.1 藥物 受試藥頸椎通絡膠囊(由珠海星光制藥有限公司提供，批號20011222，口服膠囊劑型)，每粒裝0.4g，合生藥5.3g，臨床成人日用量為0.10g/kg(合生藥1.325g/kg)，實驗時用蒸餾水配制成不同濃度混懸液置冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?。陽性對照藥——伸筋丹膠囊，由威海人生藥業(yè)集團股份有限公司提供，批號020105，臨床成人日用量為0.0375g/kg，實驗時用蒸餾水配制成1.85％濃度，冰箱保存?zhèn)溆?。醋酸，由重慶南方化學試劑廠提供，批號921102，實驗時用生理鹽水配制成0.6％醋酸溶液。
3.1.2 動物昆明種系小鼠，體重20±2g，♀♂兼用，由貴陽醫(yī)學院實驗動物中心提供健康清潔級小鼠，合格證No0200015。
3.1.3 主要儀器GJ-8402型熱板測痛儀，由浙江寧海白石電子醫(yī)藥儀器廠生產(chǎn)；計時器，由上海鐘表廠三廠生產(chǎn)。
3.2 實驗方法與結(jié)果3.2.1 頸椎通絡膠囊對化學物質(zhì)刺激誘發(fā)疼痛反應的抑制作用昆明種小鼠100只，隨機分組，po給藥，劑量均按表7所示。一次給藥后0.5h及2h時，分別以0.6％醋酸0.2ml/只ip，立即記錄各組各鼠各時限疼痛反應——扭體反應潛伏期(min)及扭體反應次數(shù)(15min內(nèi))；經(jīng)統(tǒng)計學處理，進行組間t檢驗。結(jié)果見表7。
由表7可見頸椎通絡膠囊具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，與對照組比較在給藥后0.5h及2h時小鼠扭體反應潛伏期均明顯延長，扭體反應次數(shù)均明顯減少；表明頸椎通絡膠囊po給藥0.5h即可產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用，該作用可延續(xù)2h之久。頸椎通絡膠囊大劑量組鎮(zhèn)痛作用最強，優(yōu)于伸筋丹。
表7頸椎通絡膠囊對醋酸致小鼠疼痛反應鎮(zhèn)痛作用(扭體法)(x±s n＝10)藥后0.5h扭體反應 藥后2h扭體反應劑量組別 15min內(nèi)扭(g/kg) 潛伏期 潛伏期 15min扭體次數(shù)體次數(shù)(min)(min)(次)(次)對照組 - 4.45±1.05 31.9±5.13 3.71±1.45 30.4±4.12頸椎通絡膠 2.0 7.75±2.30***15.3±6.39***6.80±2.38**12.7±4.72***囊(大)頸椎通絡1.0 6.08±1.69*23.0±6.96**6.08±1.84**22.6±6.08**膠囊(中)頸椎通絡0.5 6.25±2.47*18.8±4.18***5.84±2.70*22.2±8.04*膠囊(小)伸筋丹膠0.37 6.54±2.48*19.4±5.68***6.94±2.43**24.9±6.72*囊注各給藥組均與對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.0013.2.2 頸椎通絡膠囊對熱板致小鼠疼痛反應的抑制作用昆明種系♀性小鼠，體重20±2g；預先采用GJ-8402型熱板測痛儀，在熱板溫度為55±0.5℃時測定小鼠(以舔后足為痛指標)痛閾值，取痛閾值為5～30秒的小鼠50只，隨機分為5組同上述實驗項目4.2.1；逐只測定正常時(給藥前0時)痛閾值，按表8所示po給藥后30、60、90min時，用上述方法分別測定各組各鼠痛閾值并計算鎮(zhèn)痛百分率(％)。結(jié)果見表8。
從表8可見頸椎通絡膠囊大、中、小劑量組均能提高小鼠痛閾值，表明該制劑具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，藥后30min即起效，并能延續(xù)90min之久，大、中劑量組與對照組比較P＜0.001，小劑量組30min、60min鎮(zhèn)痛作用與對照組比較P＜0.05，90min時P＜0.01，給藥前與給藥后比較大劑量組P＜0.001，中劑量及小劑量組90minP＜0.01，小劑量組在30、60min時P＜0.05；伸筋丹組對熱刺激無明顯的鎮(zhèn)痛作用。
表8頸椎通絡膠囊對熱板刺激致小鼠疼痛反應抑制作用(x±s n＝10)組別 劑量 痛閾值(s) 鎮(zhèn)痛率％g/kg 0min30min 60min 90min 30min 60min 90min對照組 -13.7±4.5714.4±5.0 16.6±5.7015.7±3.4 - - -頸椎通絡膠 2.0 15.2±6.2938.7±10.9***ΔΔΔ43.4±14.1***ΔΔΔ47.8±14.1***ΔΔ154.6 185.5 214.5囊(大)頸椎通絡膠 1.0 16.6±6.4038.0±12.5***ΔΔ40.5±13.9***ΔΔ37.3±11.0***ΔΔ128.9 143.9 124.7囊(中)頸椎通絡膠 0.5 14.7±4.5028.8±16.4*Δ32.0±16.9*Δ31.0±12.6**ΔΔ95.9 117.7 110.9囊(小)伸筋丹膠囊 0.37 17.2±3.9019.9±4.3 21.2±8.8017.3±5.015.7 23.3 0.58注各給約組與對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001各組給藥前與給藥后相比較ΔP＜0.05ΔΔP＜0.01ΔΔΔP＜0.0014 頸椎通絡膠囊活血化瘀作用4.1 實驗材料4.1.1 藥物 受試藥頸椎通絡膠囊批號為2001122，口服膠囊劑型，每粒裝0.4g，由珠海星光制藥有限公司提供，成人日用量為(每日3次，每次5粒，0.4g/粒，成人體重按每60kg計算)0.10g/kg(合生藥1.325g/kg)，實驗用成人日用量的14倍、7倍、3.5倍，即1.40g、0.70g、0.35g/kg。實驗時用蒸餾水配制成14.0％、7.0％、3.5％不同濃度的混懸液，po給藥，容量為10ml/kg。陽性藥對照組——伸筋丹，實驗時用成人等效劑量(成人用量的7倍)0.26g/kg，用蒸餾水配制成2.6％的伸筋丹混懸液po給藥，容量同上。0.1％腎上腺素(Adr)注射液由上海制劑公司提供，批號20010212。
4.1.2 實驗動物wistar大鼠250～280g，♀♂兼用，由貴陽醫(yī)學院實驗動物中心提供的清潔級動物，合格證0200020。
4.1.3 主要儀器3-9型血流變學、微循環(huán)、紅細胞變形系列儀器，由成都麥賽科貿(mào)公司提供。
4.2 實驗方法與結(jié)果4.2.1 頸椎通絡膠囊對急性實驗性血瘀證模型大鼠血液流變性影響取wistar大鼠60只，隨機分為空白對照組，血瘀模型組，頸椎通絡膠囊大、中、小劑量組，伸筋丹組；每組10只，♀♂各半，按表9所示藥物、劑量po給藥；空白對照組及血瘀模型組以蒸餾水po 10ml/kg，每日1次，連續(xù)8次。第9天藥后1h除空白對照組外，其余各組均以0.1％Adr0.08ml/100g體重皮下注射，2h后將各鼠浸入冰水中，5min后取出，又一次皮下注射0.1％Adr0.08ml/100g體重制作血瘀證模型大鼠；常規(guī)管理，禁食不禁飲；次晨取各組大鼠空腹血5ml，肝素防凝，測定各鼠血液流變學指標(報告單位貴陽中醫(yī)學院附屬醫(yī)院一附院血流變室)。結(jié)果見表9。
由表9可見各給藥組大鼠全血粘度、血漿粘度、紅細胞比重明顯降低，紅細胞電泳明顯加快；除伸筋丹組外，其余各組紅細胞聚集指數(shù)明顯降低；除頸椎通絡膠囊小劑量組對紅細胞沉降率有減慢趨勢外，其余各組紅細胞沉降率明顯減慢；表明頸椎通絡膠囊具有活血化瘀作用，其作用優(yōu)于伸筋丹。全血粘度降低，組織血流加快，微循環(huán)血流瘀滯減輕，無疑對頸椎病變部位產(chǎn)生有利作用。
表9頸椎通絡膠囊對急性實驗性血瘀證模型大鼠血液流變性影響(x±s n＝10)劑量 全血粘度(mpa·s) 血漿粘度 血小板紅細胞 紅細胞沉紅細胞聚 紅細胞電泳組別 (g/kg 相對粘度 聚集 比容降率300l/s 115l/s1.00l/s 集指數(shù) 時間(s)) mpa·s(％) (％) (mm/h)空白對照組- 3.71±0.38***4.29±0.45***1254±1.29***1.89±0.16 1.97±0.17*6.66±0.56**18.67±6.1244.3±8.8*7.43±1.72**20.63±3.83**血瘀模型組- 4.94±0.445.65±0.5016.70±1.45 2.24±0.11 2.20±0.20 7.46±0.67 18.88±5.1955.0±9.48 11.40±2.7815.07±2.96大劑量組 1.403.65±0.31***4.18±0.35***1253±132***1.96±0.11**1.86±0.14***6.29±0.47***19.22±7.8443.8±8.47*1±1.22**19.60±3.13**中劑量組 0.703.99±0.33***4.55±0.38***1337±1.09***2.09±0.12**1.91±0.17**6.44±0.57**16.89±5.8643.11±8.12**7.99±1.31**19.82±4.66*小劑量組 0.353.97±0.26***4.27±0.27***14.82±1.87*2.00±0.17**1.90±0.10***6.40±0.34***19.67±5.4844.11±4.94**9.90±1.71 19.22±5.13*伸筋丹組 0.264.10±0.79**4.70±0.90**13.85±2.66**1.97±0.20**207±0.247.00±0.82 21.11±7.1344.22±5.93**9.24±0.96*19.52±2.57**注各組與血瘀模型組比較*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001，各給藥組與對照組比較各項指標均無明顯差異P＞0.05
表10頸椎通絡膠囊對急性血瘀證模型大鼠血小板聚集功能抑制作用(x±s n＝10)劑量組別Ht1Ht3Ht5HtmGt1Gt3Gt5GtmQjjd(g/kg)空白對照組 - 18.2±6.40***21.4±6.96**21.0±5.68**30.2±15.2*0.083±0.075***0.12±0.064***0.12±0.07 0.245±0.170.29±0.262.0±2.22血瘀模型組 - 28.4±4.28 29.3±3.97 29.4±7.04 2.8±4.81 0.20±0.05 0.22±0.03 0.19±0.09 0.30±0.05 0.46±0.342.7±1.84大劑量組1.4016.2±4.86***17.8±6.32***18.0±6.61**323±9.44**0.089±0.06***0.14±0.06**0.11±0.05*0.29±0.17 0.39±0.183.41±1.04中劑量組0.7017.3±6.14***21.4±4.10***19.7±4.50**30.2±11.5**0.09±0.06***0.13±0.05***0.11±005*0.28±0.13 0.41±0.163.23±1.58小劑量組0.3519.7±3.54***19.8±4.00***19.9±4.00**30.9±10.1**0.10±0.05****0.10±0.05***0.10±0.05*0.23±0.11 0.42±0.403.08±1.0伸筋丹組0.2618.3±5.20***19.11±4.17***192±3.50***28.7±6.18***0.09±0.06***0.10±0.04***0.11±0.06*0.22±0.07**0.35±0.152.87±0.62注各組與模型組比較*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001；各給藥組與空白對照組比較各項指標均無明顯差異P＞0.05。
4.2.2 頸椎通絡膠囊對急性實驗性血瘀證模型大鼠血小板聚集功能抑制作用wistar大鼠60只，隨機分組、給藥、制作急性實驗性血瘀模型大鼠均同上述實驗項目4.2.1；分別取空腹血5ml測定血小板聚集功能(報告單位貴陽中醫(yī)學院附屬醫(yī)院一附院血流變室)。結(jié)果見表10。
由表10可見血瘀模型大鼠1、3、5分鐘血小板聚集率(Ht1、Ht3、Ht5)、最大聚集值(Htm)及1、3、5分鐘聚集強度(Gt1、Gt3、Gt5)明顯升高；最大聚集強度(Gtm)、解集率(QJ)、聚集陡度(jd)有升高趨勢，表明血瘀證模型建立。而頸椎通絡膠囊能使血小板聚集功能明顯降低，各項指標與空白對照組比較差異極顯著；表明頸椎通絡膠囊各劑量組灌胃給藥，對血小板聚集功能具有明顯的抑制作用，該作用與伸筋丹相近。
5 結(jié)語經(jīng)主要藥效學實驗結(jié)果表明，頸椎通絡膠囊能夠提高實驗性頸神經(jīng)根炎模型大鼠血漿6-K-PGF1α及降低血漿TXB2含量；因此，可以認為該制劑能使頸神經(jīng)根部位血管擴張，血流通暢，瘀血減少，活血通絡，消腫止痛。頸椎通絡膠囊對二甲苯致小鼠耳腫，醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增強，角叉菜膠致大鼠、小鼠足腫，及棉球致肉芽腫均具有明顯的抑制作用，且重現(xiàn)性好；使局部組織PGE2含量明顯減少；對化學物質(zhì)及熱板刺激誘發(fā)的疼痛均有明顯的鎮(zhèn)痛作用，且持續(xù)時間久；頸椎通絡膠囊能夠明顯的改善急性實驗性血瘀證模型大鼠血液流變性，抑制血瘀模型大鼠血小板聚集，表明該制劑具有明顯的活血化瘀作用。以上實驗結(jié)果為臨床試用提供科學依據(jù)，頸椎通絡膠囊適用于寒瘀阻絡型神經(jīng)根性頸椎病。
試驗例二、頸椎通絡膠囊急性毒性試驗摘要觀察口服給藥途徑，測定頸椎通絡膠囊最大給藥量試驗。結(jié)果表明小鼠口服頸椎通絡膠囊內(nèi)容物水混懸液，最大給藥量為28g/kg，合生藥371g/kg，相當于成年人每日用藥量280倍。所以，可以認為臨床擬定成人口服給藥劑量0.10g/kg(合生藥1.325g/kg)體重是安全的；因此本品可以提供臨床試用。
目的觀察頸椎通絡膠囊短期口服給予動物后，所產(chǎn)生的毒性反應及死亡情況，或最大給藥劑量，或推算臨床成人用量安全倍數(shù)，綜合評價該藥物的安全性。
1 實驗材料1.1 受試藥物 頸椎通絡膠囊(由珠海星光制藥有限公司提供)，批號20011222，口服膠囊劑型，每1g膠囊內(nèi)容物合生藥13.25g，臨床擬定成人日用劑量為(每日3次，每次5粒，每粒裝0.4g，成人體重按60kg計算)0.10g/kg，合生藥1.325g/kg。
1.2 實驗動物 昆明種小鼠，清潔級，體重20±2g，♀♂各半，由貴陽醫(yī)學院實驗動物中心提供。合格證號0200015。先予飼養(yǎng)3天適應環(huán)境，第4天進行實驗。
1.3 實驗藥物的制備將受試藥物膠囊內(nèi)容物用蒸餾水配制成棕色混懸液，濃度為0.35g/ml，合生藥4.6375g/ml；放于冰箱內(nèi)存放備用。
2 實驗方法2.1 預試實驗 取小鼠6只，以頸椎通絡膠囊混懸液最大濃度0.35g/ml(合生藥4.6375g/ml)、最大容積0.4ml/10g體重，給予小鼠14g/kg(合生藥185.5g/kg)頸椎通絡膠囊內(nèi)容物混懸液一次灌胃，相當于成年人每日劑量0.10g/kg(合生藥1.325g/kg)的140倍。觀察7天，不引起小鼠死亡，不能測出藥物的半數(shù)致死量(LD50)，故進行本制劑最大給藥量正式試驗。
2.2 正式實驗昆明種小鼠20只，♀♂各半，體重20±2g，禁食不禁水12小時，于24h內(nèi)給予小鼠0.35g/ml(合生藥4.6375g/ml)的頸椎通絡膠囊內(nèi)容物混懸液0.4ml/10g體重灌胃2次，給藥量共計28g/kg(合生藥371g/kg)，按體重計算此劑量相當于成年人每日劑量0.10g/kg(合生藥1.325g/kg)的280倍，給藥后將小鼠常規(guī)飼養(yǎng)7天，逐日觀察小鼠表現(xiàn)。
3 實驗結(jié)果小鼠藥后7天內(nèi)除給藥后動物出現(xiàn)短暫的活動減少，不喜啃咬，攝食減少外，未見動物出現(xiàn)毒性反應及死亡現(xiàn)象。此結(jié)果表明24小時內(nèi)給予小鼠2次灌胃頸椎通絡膠囊28g/kg(合生藥371g/kg)，觀察7天不引起動物死亡。按體重計算，即小鼠能耐受頸椎通絡膠囊的劑量(371g生藥/kg)，相當于成人每日劑量0.10g/kg(1.325g生藥/kg)的280倍，而不致死亡。據(jù)文獻報道“一般認為按體重計算小鼠最大耐受量相當于人用量100倍以上則較為安全，可以提供臨床試用”。因此可以認為頸椎通絡膠囊口服給藥對動物的急性毒性甚小，表明應用較安全，故可為臨床試用提供試驗依據(jù)。
4 結(jié)語受藥物濃度和容積的限制，對小鼠1次灌胃給藥無法測出LD50。經(jīng)最大給藥量測定，1日內(nèi)分2次給予小鼠灌胃給藥，其最大給藥量相當于臨床用藥量的280倍；故可認為本品的急性毒性低，臨床擬定成人每日服用量0.10g/kg(合生藥1.325g/kg)體重是安全的，可以提供臨床試用。
試驗例三、頸椎通絡膠囊長期毒性試驗資料及文獻資料摘要大鼠連續(xù)給予5.0g、3.0g、1.5g/kg體重，合生藥66.25g、39.75g、19.875g/kg三種劑量——分別為成人日用劑量0.10g/kg(合生藥1.325g/kg)的50倍、30倍、15倍——頸椎通絡膠囊混懸液灌胃12周及停藥2周。三種劑量給藥組與給予蒸餾水灌胃的空白對照組比較，各組大鼠體重、進食量均逐日增長，無明顯差異。各組大鼠行為、活動、皮毛、大小便、血液細胞、血液生化(肝、腎功能)無異常變化。各組大鼠主要器官心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺指數(shù)無明顯差異；各主要臟器心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺及性腺器官等，病理組織檢查未見異常。
1 目的觀察較大劑量，較長時間連續(xù)給予大鼠重復灌胃頸椎通絡膠囊12周對大鼠所產(chǎn)生毒性反應，嚴重程度及首先出現(xiàn)的癥狀；毒性反應的靶器官及恢復和發(fā)展情況，確定無毒反應劑量，為擬定成人應用安全劑量提供依據(jù)。
2 實驗材料2.1 藥物 頸椎通絡膠囊由珠海星光制藥有限公司提供，批號20011222，口服膠囊劑，每粒裝0.4g，合生藥5.3g，每1g膠囊內(nèi)容物合生藥13.25g，成人日用量為(每日3次，每次5粒，0.4g/粒，成人體重按60kg計)0.10g/kg(合生藥1.325g/kg)體重。頸椎通絡膠囊內(nèi)容物為棕色粉末，實驗時用蒸餾水配制成不同濃度混懸液，冰箱保存?zhèn)溆谩?br>
2.2 動物wistar大鼠80只，♀♂各半，體重100~120g，由貴陽醫(yī)學院實驗動物中心提供，合格證號200200018。
2.3 主要儀器SC-970全自動血細胞分析儀，貝肯公司瑞士生產(chǎn)；日立7170A全自動生化分析儀，美國柯達生產(chǎn)。
2.4 實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計以X±S表示，進行組間t檢驗。
3 實驗方法3.1 實驗條件給藥前后的大鼠均每籠單性別群養(yǎng)，每籠同性別5只大鼠，飼以全價顆粒飼料由貴陽醫(yī)學院實驗動物中心提供，自由飲水，室溫20～25℃，濕度55％～65％。
3.2 分組和劑量取wistar大鼠80只，隨機分為4組，每組20只，♀♂各半，分別作為高、中、低頸椎通絡膠囊3種劑量組及空白對照組(對照組)。給藥組劑量分別為5.0g、3.0g、1.5g/kg，各合生藥66.25g、39.75g、19.875g/kg，分別為臨床成人日用量0.10g/kg(合生藥1.325g/Kg)體重的50倍、30倍、15倍。實驗前將頸椎通絡膠囊內(nèi)容物用蒸餾水配制成33％、20％、10％的頸椎通絡膠囊混懸液，置于冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?。灌胃容積均為15ml/kg體重。
3.3 給藥途徑及方法因為頸椎通絡膠囊臨床用藥途徑是口服給藥，所以各組均灌胃給藥，每日上午8時動物空腹時灌胃一次，連續(xù)12周；每周稱動物體重一次，根據(jù)動物體重增長變化調(diào)整給藥劑量。
3.4 試驗周期實驗總周期為14周，前12周為給藥時間，后2周為停藥恢復時間，首先觀察給藥12周期間動物有無毒性反應，每組取半數(shù)動物處死，測定以下各項指標，觀察動物反應，其余半數(shù)動物停藥飼養(yǎng)2周后，同上述方法檢測各項指標，觀察動物停藥的恢復狀況。
4 檢查項目4.1 一般觀察 進食量、體重、外觀形態(tài)體征、行為活動、大便性狀等，發(fā)現(xiàn)中毒動物立即隔離重點觀察，發(fā)現(xiàn)死亡或瀕死動物即刻尸檢。
4.2 檢測項目 連續(xù)給藥12周，末次藥后24小時，稱大鼠體重后，每組動物各取10只，♀♂各半，股靜脈取血進行測試血液細胞學、血液生化學指標后將動物處死，立即剖取各鼠主要器官心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺分別稱重，計算器官系數(shù)。另取性腺器官子宮、卵巢、輸卵管、睪丸、附睪、精囊腺，及心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺，于同一部位取材浸泡于10％甲醛溶液固定，進行石蠟包埋，切片，HE染色，置光學顯微鏡觀察并與對照組比較；首先對比檢查高劑量組與對照組動物組織切片，觀察器官組織形態(tài)變化。血液學檢查指標紅細胞(RBC)計數(shù)、紅細胞體積(HCT)、紅細胞平均體積(MCV)、血紅蛋白(Hgb)、血紅蛋白平均量(MCH)、血小板(PLT)、白細胞(WBC)計數(shù)、淋巴細胞(LY)、粒細胞(GR)、單核細胞(MO)。血液生化學(肝、腎功能)檢查指標總膽固醇(CHOL)、尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(AST)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLQ)、ALB/GLO比值(A/G)、堿性磷酸酶(AKP)含量。
4.3 指標觀察時間 每天全面觀察所有實驗動物的一般狀況，動物活動行為，大便性狀，外觀體征，飼料夜耗量；每周稱體重一次，給藥12周，末次藥后24小時及停藥2周恢復期末各進行一次各項指標的全面檢查。
5 實驗結(jié)果5.1 頸椎通絡膠囊對大鼠一般情況的影響 在頸椎通絡膠囊連續(xù)給藥12周及停藥2周內(nèi)，各給藥組與對照組比較觀察，動物活動、行為、飲食、大便、毛發(fā)光澤情況相似，未見明顯異常變化。在同一時間內(nèi)大鼠攝食量雄性鼠比雌性鼠稍有增加，但無明顯差異。
結(jié)果見表1-1、表1-2。
5.2 頸椎通絡膠囊對大鼠體重的影響 實驗結(jié)果見表2-1、表2-2、表2-3、表2-4。
從表內(nèi)可見，頸椎通絡膠囊高、中、低三種劑量對大鼠連續(xù)給藥不同時間后的體重，與對照組比較，其差異無統(tǒng)計學意義(P均＞0.05)；但雄鼠體重比雌鼠體重增長略高。即實驗結(jié)果表明頸椎通絡膠囊在較大劑量，較長療程(12周)用藥及停藥2周對大鼠生長發(fā)育(體重增長)無毒性影響。
5.3 頸椎通絡膠囊對大鼠血液細胞學影響 實驗結(jié)果見表3-1、表3-2。
從表中可見頸椎通絡膠囊高、中、低3種劑量對大鼠連續(xù)給藥12周及停藥2周，對大鼠的血液細胞學均未見顯著影響，各給藥組動物RBC、Hgb、PCT、WBC等數(shù)值與對照組的數(shù)值接近；與對照組相比，經(jīng)統(tǒng)計學處理P均＞0.05，因此可以認為頸椎通絡膠囊較大劑量、較長時間(12周)給藥及停藥2周，對大鼠的造血功能無毒性影響。
5.4 頸椎通絡膠囊對大鼠血液生化學(肝功、腎功)的影響 實驗結(jié)果見表4-1、表4-2。
從表中可見頸椎通絡膠囊高、中、低3種劑量對大鼠連續(xù)給藥12周及停藥2周，大鼠的肝功能及腎功能各項生化指標數(shù)值分別與對照組相應數(shù)值相比較，未見明顯差異，P均＞0.05。故表明頸椎通絡膠囊較大劑量連續(xù)用藥12周及停藥2周，對大鼠肝功能、腎功能均無毒性作用。
5.5 頸椎通絡膠囊對大鼠主要器官系數(shù)的影響 實驗結(jié)果見表5-1、表5-2。
從表中可見頸椎通絡膠囊高、中、低3種劑量對大鼠連續(xù)給藥12周及停藥2周，大鼠重要器官(心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺)重量系數(shù)的數(shù)值與對照組均相近。經(jīng)統(tǒng)計學處理，各給藥組各項指標數(shù)值與對照組比較，其差異均無顯著性(P均＞0.05)。表明較大劑量長期(12周)灌胃及停藥2周，對大鼠器官重量系數(shù)無明顯影響。
5.6 頸椎通絡膠囊對大鼠主要器官組織的病理形態(tài)的影響 對頸椎通絡膠囊連續(xù)給藥12周及停藥2周的兩批次，殺取各組大鼠的心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺等臟器，并相同部位取材，用10％甲醛溶液浸泡固定；將對照組與高劑量組大鼠隨機抽查6只鼠的器官制作組織切片，進行病理學檢查。結(jié)果被抽查動物的器官各種結(jié)構(gòu)正常，細胞染色均勻，無明顯改變。
由于上述病理結(jié)果未見到高劑量組各器官毒理學病理變化，故對中、低劑量組未進行器官組織切片檢查，而只保存器官組織標本。
表1-1頸椎通絡膠囊對雌性大鼠日平均攝食量的影響(g/天/只X±s)用次 空白對照組 高劑量組 中劑量組 低劑量組112.71±1.1112.57±1.8112.14±1.3512.14±1.35215.71±2.1415.71±2.1415.43±1.7215.14±1.68321.57±1.5021.43±1.6222.00±2.1622.57±2.82423.14±2.6722.14±1.9523.71±2.6725.00±1.29525.94±1.4625.40±1.4225.17±1.5125.41±1.88626.14±1.6826.43±1.9026.14±1.7727.71±3.35728.00±3.0028.14±3.9828.00±3.1628.14±3.02829.0.0±3.87 29.71±4.3929.57±6.2930.57±6.45930.14±3.1330.57±4.7630.71±5.7431.14±6.5410 31.43±3.2132.14±4.1032.86±4.6732.86±4.1311 33.43±3.2633.71±3.9933.43±3.6934.00±3.9612 34.57±1.9934.00±2.3835.57±2.5135.14±3.2413 36.10±3.7235.40±3.7037.28±2.8836.14±3.7814 37.00±1.6036.20±1.7040.40±2.2837.00±2.00注各給藥組與對照組同一周次攝食量比較P均＞0.05，隨周次延長，攝食量逐漸增多。1～12周為給藥期間n＝10；13～14周為停藥期間n＝5表1-2頸椎通絡膠囊對雄性大鼠日平均攝食量的影響(g/天/只X±s)周次 空白對照組 高劑量組 中劑量組 低劑量組113.43±1.2714.00±1.4114.00±1.1513.71±1.11217.14±1.2116.57±1.9017.14±1.3517.57±1.72323.71±1.3824.29±1.1124.43±1.7224.00±2.16425.29±1.1125.14±1.3425.57±1.9225.00±1.29526.00±2.3827.17±3.2927.27±3.2926.74±1.54626.71±1.1129.29±2.5628.00±3.3729.86±5.11730.25±3.3330.71±3.5030.29±4.9631.00±6.19831.14±3.2932.00±4.8331 43±6.0232.43±4.76932.57±2.6433.14±5.3033.29±5.7733.29±5.7710 36.14±1.7735.14±2.5536.00±2.4535.71±3.2511 37.86±1.5736.43±2.2337.71±1.9836.14±2.1212 40.14±2.4837.57±2.5138.00±2.1637.14±2.1213 40.14±2.8839.86±2.9040.14±2.5039.60±1.9814 41.28±2.5640.86±4.4643.30±5.2244.44±4.28注各給藥組與對照組同一周次攝食量比較P均＞0.05，隨周次延長，攝食量逐漸增多。1～12周為給藥期間攝食量n＝10；13～14周為停藥期間攝食量n＝5
表2-1頸椎溫通膠囊連續(xù)給藥12周對雌性大鼠體重增長的影響(體重g X±s n＝10)周次對照組 高劑量組中劑量組低劑量組1111.2±9.48 113.1±6.24 109.6±7.78 111.9±6.572128.8±8.73 133.2±8.09 127.1±5.74 131.3±9.793145.7±8.12 149.9±8.97 141.9±4.65 145.4±8.934161.5±13.75165.0±11.55162.8±7.74 165.3±14.225175.0±22.14176.5±10.81172.3±7.27 175.1±12.026188.7±11.83189.0±11.74186.1±12.70189.2±14.337201.3±10.79198.1±11.33201.3±12.82203.8±16.058219.3±14.43213.5±14.92215.6±12.17227.5±21.379240.5±19.07229.1±13.45231.3±14.02236.7±12.5110 256.0±18.97244.8±14.54246.3±14.34250.4±13.3811 272.9±12.41262.3±12.87270.7±16.86263.9±13.4612 292.9±13.21277.1±12.64280.7±16.86281.5±16.79注各給藥組在各給藥時間的體重分別與對照組比較均無明顯差異，P均＞0.05。
表2-2頸椎通絡膠囊連續(xù)給藥12周后停藥2周對雌性大鼠體重增長影響(體重g X±s n＝5)周次對照組 高劑量組中劑量組 低劑量組1304.0±10.75299.0±11.40299.2±11.32327.0±18.232313.0±18.91322.2±10.18322.0±17.89317.0±21.97注各組在停藥2周期間體重無明顯差異P均＞0.05。
表2-3頸椎通絡膠囊連續(xù)給藥12周對雄性大鼠體重增長的影響(體重g X±s n＝10)周次對照組高劑量組 中劑量組 低劑量組1116.5±6.92 113.1±6.01 114.8±6.56 116.0±7.752133.4±7.78 133.5±7.84 133.7±8.31 135.0±7.823153.0±7.04 151.9±8.62 152.7±5.12 153.0±7.154170.8±10.57173.0±12.06171.9±9.75 168.6±7.285182.1±10.35187.5±13.59186.0±10.07185.9±10.026189.0±12.66199.9±14.98203.5±11.33205.5±17.077208.9±16.43214.1±14.49223.1±11.57224.4±22.448221.0±20.39227.9±12.24239.6±14.70238.5±27.899241.0±18.38242.7±15.67258.9±15.86258.8±31.3510 261.0±18.83257.5±14.22276.6±18.43278.1±31.4311 282.5±16.20270.9±14.87292.1±16.14292.3±32.0712 302.0±10.78298.6±15.60311.8±21.96308.5±31.23注各給藥組在各給藥時間的體重分別與對照組比較均無明顯差異，P均＞0.05。
表2-4頸椎通絡膠囊連續(xù)給藥12周后停藥2周對雄性大鼠體重增長的影響(體重g X±s n＝5)周次對照組 高劑量組 中劑量組 低劑量組1321.6±10.68313.6±17.46320.2±21.64338.0±18.232336.2±14.37349.0±20.43335.6±39.11348.2±28.17注各組在停藥2周期間體重無明顯差異P均＞0.05。
表3-1頸椎通絡膠囊連續(xù)給藥12周對大鼠血液細胞學影響(X±s n＝10)劑量RBC HCT MCVHgb MCH PLTWBC LyMO GR組別g/kg×1012/L ％ f1g/L Pg×109/L ×109/L％ ％ ％對照組 - 7.31±0.61 41.66±3.3 57.0±1.49 138.8±7.3218.9±0.5723.1±261.88.97±3.7967.1±10.62 3.4±0.97 29.6±7.52頸椎通 5.07.83±0.67 43.56±4.1155.5±1.72 149.1±10.42 19.1±0.99750.3±232.6 9.67±2.6274.0±6.7732±1.0322.8±6.29絡膠囊頸椎通 3.07.47±0.87 45.59±5.0356.5±2.07 149.2±15.53 18.5±0.53687.2±96.07 10.63±3.79 71.9±7.193.0±0.82 25.1±6.79絡膠囊頸椎通 1.57.69±0.84 44.58±4.8555.8±1.55 146.4±12.43 18.4±0.63825.4±211.24 11.4±2.6972.4±4.673.4±0.84 24.2±5.07絡膠囊注各給藥組大鼠血液細胞學指標數(shù)值分別與對照組相應指標數(shù)值比較P均＞0.05表3-2頸椎通絡膠囊連續(xù)給藥12周停藥2周對大鼠血液細胞學影響(X±s n＝10)劑RBC HCT MCV HgbMCH PLTWBC Ly MO GR組別 量×1012/L ％f1 g/L Pg ×109/L ×109/L％ ％ ％g/kg對照組- 7.55±0.56 43.39±3.46 57.5±1.96 144.1±7.89 19.1±1.10 769.4±168.9 20.06±6.3669.5±6.703.6±0.9726.9±6.12頸椎通 5.07.40±0.67 41.99±3.77 56.8±1.55 137.0±9.85 18.6±0.70 720.1±89.19 21.53±7.6664.2±8.373.8±1.0332.1±8.81絡膠囊頸椎通 3.07.52±0.93 42.30±5.71 56.1±1.37 146.2±14.8 19.3±1.06 881.6±203.2 17.96±4.8966.9±10.13 3.9±0.7428.4±10.25絡膠囊頸椎通 1.57.45±0.55 42.19±3.09 56.7±0.95 140.8±14.0218.8±0.92 747.0±192.7 18.07±5.2366.0±11.44 3.4±0.8430.1±11.55絡膠囊注各給藥組大鼠血液細胞學指標數(shù)值分別與對照組相應指標數(shù)值比較P均＞0.05
表4-1頸椎通絡膠囊連續(xù)給藥12周對大鼠血液生化學(肝、腎功能)指標的影響(X±s n＝10)劑量CHOL BUN CreA ALTAST TPALB GCO AKP組別 A/Gg/kg mmol/L mmol/L μmol/L U/Lu/L g/L g/L g/L U/L對照組- 1.22±0.32 9.15±1.97 29.8±3.6534.7±162315.3±65.62 75.69±4.81 32.1±2.3443.53±5.350.76±0.13469.1±82.76頸椎通絡 5.01.25±0.34 10.61±1.21 29.5±4.0978.1±21.1 267.2±67.376.6±4.6531.5±2.8045.03±2.970.69±0.07482.8±79.20頸椎通絡 3.01.42±0.20 10.45±1.37 29.6±3.5078.3±14.5 354.2±120.5 75.77±4.38 34.7±2.9647.00±3.340.73±0.09407.6±149.33頸椎通絡 1.51.27±0.28 10.25±3.27 33.3±12.23 77.0±18.4 286.8±43.46.09±3.5933.4±3.6143.09±4.860.78±0.10431.8±124.82注各給藥組各項指標數(shù)值分別與對照組相應指標數(shù)值比較P均＞0.05表4-2頸椎通絡膠囊連續(xù)給藥12周后停藥2周對大鼠血液生化學(肝、腎功能)指標的影響(X±s n＝10)劑量 CHOL BUN Crea ALT AST TP ALB GCO AKP組別A/Gg/kg mmol/L mmol/L μmol/LU/L u/Lg/Lg/L g/L U/L對照組- 1.62±0.389.38±2.0541.8±13.97 62.0±15.5364.2±66.12 89.6±5.2235.9±3.3750.9±5.43 0.68±0.11 337.4±74.8頸椎通絡 5.01.58±0.237.93±1.2236.9±4.0765.1±16.8321.1±50.52 87.14±6.84 36.6±5.1850.6±3.84 0.73±0.11 301.8±119.8膠囊頸椎通絡 3.01.51±0.349.05±2.1838.4±4.7269.7±135 3159±57.6785.9±5.5934.8±2.2751.1±4.98 0.69±0.07 311.7±39.1膠囊頸椎通絡 1.51.56±0.209.04±213 35.1±2.8763.5±15.7320.5±58.61 83.38±5.43 34.1±3.3648.3±4.85 0.71±0.12 283.6±55.3膠囊注各給藥組各項指標數(shù)值分別與對照組相應指標數(shù)值比較P均＞0.05
表5-1頸椎通絡膠囊連續(xù)給藥12周對大鼠主要器官重量系數(shù)的影響(X±s n＝10 g/100g體重)劑量組別心肝 脾 肺 腎 腎上腺 胸腺g/kg對照組 - 0.315±0.043.68±0.680.396±0.06 0.750±0.100.720±0.050.03±0.007 0.012±0.001頸椎通絡5.00.313±0.043.72±0.490.399±0.11 0.671±0.130.715±0.070.03±0.004 0.013±0.003膠囊頸椎通絡3.00.321±0.023.66±0.400.350±0.05 0.790±0.150.677±0.120.03±0.007 0.010±0.004膠囊頸椎通絡1.50.323±0.053.59±0.710.390±0.09 0.741±0.140.731±0.070.03±0.005 0.010±0.002膠囊注各給藥組各指標數(shù)值分別與對照組相應指標數(shù)值比較P均＞0.05表5-2頸椎通絡膠囊連續(xù)給藥停藥2周對大鼠主要器官重量系數(shù)的影響(X±s n＝10 g/100g體重)劑量組別 心 肝 脾 肺 腎 腎上腺 胸腺g/kg對照組- 0.351±0.043.453±0.22 0.370±0.07 0.659±0.050.567±0.17 0.033±0.012 0.014±0.002頸椎通絡膠5.0 0.52±0.07 3.457±0.58 0.384±0.08 0.692±0.060.563±0.13 0.034±0.016 0.013±0.003囊頸椎通絡膠3.0 0.350±0.103.429±0.13 0.368±0.13 0.661±0.160.631±0.10 0.032±0.006 0.012±0.002囊頸椎通絡膠1.5 0.332±0.023.310±0.42 0.364±0.07 0.672±0.130.634±0.05 0.032±0.080.014±0.003囊注各給藥組各指標數(shù)值分別與對照組相應指標數(shù)值比較P均＞0.05
5 結(jié)語經(jīng)大鼠長期毒性試驗結(jié)果表明，以頸椎通絡膠囊5.0g、3.0g、1.5g/kg(分別合生藥66.25g、39.75g、19.875g/kg)體重3種劑量——分別為臨床擬定成人日用量0.10g/kg(合生藥1.325g/kg)體重的50倍、30倍、15倍，每日一次，連續(xù)12周對大鼠灌胃給藥，以及停藥后2周，與灌胃蒸餾水的對照組比較各種劑量給藥對大鼠的一般狀態(tài)(外觀形態(tài)、活動、大便形狀等)、生長發(fā)育(體重增長)、造血功能(血液細胞學)、肝功能、腎功能(血液生化學)、重要器官重量系數(shù)等，均未發(fā)現(xiàn)有明顯的毒性作用；經(jīng)病理學檢查證明，高劑量組與對照組比較觀察對大鼠心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺，以及子宮、卵巢、輸卵管、睪丸、附睪、精囊腺等性腺器官組織均未發(fā)現(xiàn)明顯的毒性損傷變化。所以，可以認為較大劑量，較長療程服用頸椎通絡膠囊的毒性較低，臨床擬定成人日用劑量是安全的，因此該制劑可以提供臨床試用。
具體實施例方式
實施例本發(fā)明的膠囊，其內(nèi)容物主要是由下列重量的原料藥制成桂枝166.6g 白芍 500g制草烏 200g威靈仙 500g莪術 500g僵蠶266.7g葛根666.7g 牛蒡子500g黃芪500g磁石1000g 續(xù)斷 500g以上原料藥制成膠囊1000粒。
其制備方法包括下列步驟(1)所述重量的桂枝粉成細粉，備用；(2)取所述重量的葛根粉碎成粗粉，分別加8倍、6倍量75％乙醇回流提取二次，第一次2小時，第二次1.5小時，合并回流提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度為1.30～1.35(70℃)的稠膏，備用；(3)取所述重量白芍、制草烏、威靈仙、莪術、僵蠶、牛蒡子、黃芪、磁石、續(xù)斷加水煎煮提取二次，第一次3小時，第二次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.10～1.15(70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量達70％，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，備用；(4)合并所述步驟(2)、(3)制得的稠膏，加入所述步驟(1)制得的桂枝細粉，混勻，在65℃下干燥，粉碎成細粉，加入適量淀粉，混勻，分裝成膠囊1000粒。
權(quán)利要求
1.一種頸椎通絡膠囊，其特征在于，它的內(nèi)容物主要是由下列重量份的原料藥制成桂枝 166.6份白芍 500份制草烏200份威靈仙500份 莪術 500份僵蠶 266.7份葛根 666.7份牛蒡子500份黃芪 500份磁石 1000份 續(xù)斷 500份
2.一種權(quán)利要求1所述的頸椎通絡膠囊的制備方法，其特征在于，它包括下列步驟(1)取所述重量配比的桂枝粉碎成細粉，備用；(2)取所述重量配比的葛根粉碎成粗粉，分別加8倍、6倍量75％乙醇回流提取二次，第一次2小時，第二次1.5小時，合并回流提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度為1.30～1.35(70℃)的稠膏，備用；(3)取所述重量配比白芍、制草烏、威靈仙、莪術、僵蠶、牛蒡子、黃芪、磁石、續(xù)斷加水煎煮提取二次，第一次3小時，第二次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.10～1.15(70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量達70％，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，備用；(4)合并所述步驟(2)、(3)制得的稠膏，加入所述步驟(1)制得的桂枝細粉，混勻，在65℃下干燥，粉碎成細粉，加入適量淀粉，混勻，分裝膠囊。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種頸椎通絡膠囊及其制備方法，旨在提供一種療效好、毒性作用小的治療頸椎病的膠囊。該膠囊的內(nèi)容物主要是由桂枝、白芍、制草烏、威靈仙、莪術、僵蠶、葛根、牛蒡子、黃芪、磁石、續(xù)斷作原料藥制成，它具有溫經(jīng)通絡、活血止痛的功能。本發(fā)明適于治療神經(jīng)根性頸椎病。
文檔編號A61P19/00GK1600350SQ03146950
公開日2005年3月30日 申請日期2003年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月26日
發(fā)明者陳和亮 申請人:珠海星光制藥有限公司