專利名稱：苦參總堿及其制劑在獸藥的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從植物中提取的生物總堿在治療禽畜細(xì)菌感染的藥物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)日益趨向于規(guī)模化、集約化。為防止和治療集中飼養(yǎng)的禽畜因細(xì)菌感染致病，現(xiàn)階段普遍做法是在禽畜飼料中大量使用抗生素類藥物，或采用其它合成類的抗菌藥物。例如中國(guó)發(fā)明專利99111531.7公開的一種適用于禽畜類流行性疾患的獸藥，就是用含有廣譜抗生素和抗病毒的藥物，按一定比例組配，產(chǎn)生綜合的抗菌、消炎、抗病毒作用，用于細(xì)菌、病毒混合感染的禽畜類治療。但由于多年大量使用抗生素的原因，使許多的致病菌產(chǎn)生耐藥性，而致防病、治病的效果變劣，同時(shí)大量使用抗生素的做法會(huì)在動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生抗生素殘留，殘留于禽畜體內(nèi)的抗生素又會(huì)通過食品鏈轉(zhuǎn)入人體內(nèi)富集，既可能直接對(duì)人體健康造成負(fù)面影響，也可能通過環(huán)境和食物鏈的作用間接對(duì)人體或環(huán)境，造成潛在危害。因此，現(xiàn)階段各國(guó)在食品進(jìn)口時(shí)檢疫、分析的一個(gè)主要項(xiàng)目就是檢查食品中抗生素的含量。
為解決動(dòng)物食品中抗生素殘留的問題，選擇生物制品，特別是由植物中提取的生物堿作為禽畜使用的藥物是獸藥發(fā)展的趨勢(shì)。
中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)00136883.4公開了一種用豆科植物中的苦豆子籽經(jīng)水煮、發(fā)酵后得到的液體和固體以及其混合物作為治療牲畜因細(xì)菌感染至病的獸藥。從該專利文件公開的內(nèi)容來看，其藥物生產(chǎn)周期過長(zhǎng)，生產(chǎn)工藝可能較難控制，其藥物成份中的雜質(zhì)難以去除，而且所制藥物的穩(wěn)定性較差，且保存時(shí)間過短，估計(jì)其保存條件相對(duì)可能會(huì)較為復(fù)雜。另外該專利申請(qǐng)僅以苦豆子的果實(shí)作為原料，這使其應(yīng)用受到一定的限制，并帶來資源的浪費(fèi)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是提供一種新的從植物中提取的總堿作為治療禽畜類細(xì)菌感染的炎癥的藥物，在本發(fā)明中同時(shí)提供了這種新獸藥的制備方法。
本發(fā)明的藥物是從豆科植物中的苦參(民間俗稱為苦豆子)的根、莖或籽中用醇提取的總生物堿，根據(jù)相關(guān)的分析表明，在總生物堿中苦參總堿占80％以上(以苦參堿C12H24N2O計(jì))，此外還有一些其它的生物堿成份，如氧化苦參堿、槐胺堿、槐果堿、槐定堿、苦豆堿等。
本發(fā)明的制備方法是將干燥的苦參根或莖或籽粉碎為粗粉，再將此粗粉置入乙醇中浸泡提取苦參堿，所得液體經(jīng)過濾后進(jìn)行蒸餾或減壓蒸餾，在蒸餾產(chǎn)物中加入鹽酸，調(diào)其pH值為3～4，再將其用乙醚進(jìn)行洗滌，經(jīng)洗滌的產(chǎn)物中加入碳酸鈉，調(diào)其pH值為7左右后，再用氯仿進(jìn)行萃取，所得產(chǎn)物中加入乙醇進(jìn)行重結(jié)晶，再將結(jié)晶體烘干提苦參總堿。
本發(fā)明可以為注射用針劑，也可以為拌飼的粉劑，還可以做成水溶液作為灌注藥物。
由于本發(fā)明采用醇提、洗滌、萃取等工藝，使其制品的純度得以提高，這種高純度的制品既便于后期的藥物生產(chǎn)，而且也可大大延長(zhǎng)其穩(wěn)定性。經(jīng)試驗(yàn)表明，本發(fā)明所用苦參總堿結(jié)晶品化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，經(jīng)常規(guī)放置二年后，其結(jié)構(gòu)和藥效未發(fā)生改變。
經(jīng)相應(yīng)的體外試驗(yàn)、毒性試驗(yàn)和臨床藥效試驗(yàn)表明，本發(fā)明對(duì)金葡球菌、大腸埃希菌、銅綠假單細(xì)胞菌、類炭疽桿菌等均有抑制作用，對(duì)有些細(xì)菌的抑菌效果更為顯著，特別是防治雞白痢的效果明顯。
本發(fā)明是將一種植物中的有效成分應(yīng)用于禽畜病的治療，安全可靠且有不易產(chǎn)生耐藥性的特點(diǎn)，同時(shí)因苦參堿在動(dòng)物體內(nèi)代謝較快，不會(huì)產(chǎn)生在動(dòng)物體內(nèi)殘留的不足。由于本發(fā)明所用的原料既可以是果實(shí)，也可以是植物的根、或莖，因此來源較為廣泛，而且可以充分利用資源。
具體實(shí)施例方式
以下對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)解說本發(fā)明的制備方法將豆科植物苦參的干燥根或工莖或籽粉碎成粗粉(一般粉碎到數(shù)十目即可)，將粗粉在常溫下用98％乙醇浸泡18小時(shí)，然后過濾，濾液減壓蒸餾回收乙醇，殘余物用2％HCl調(diào)節(jié)pH3～4，乙醚洗滌兩次后，用5％碳酸鈉調(diào)節(jié)為pH7，再用氯仿進(jìn)行提取，提取液進(jìn)行蒸餾處理，回收氯仿，殘余物再用98％乙醇重結(jié)晶，將結(jié)晶體烘干，得到成品，再將成品經(jīng)過滅菌、分裝待用。
本發(fā)明的成品晶體作為獸藥使用時(shí)可以將其溶于水中作為肌肉注射液，也可以將其做成粉末拌飼喂服，也可以將其溶于水中直接喂服，還可以將其的水溶液作為灌注藥物，對(duì)牛、豬、羊等進(jìn)行子宮、腸道或乳房進(jìn)行灌注治療。
以下提供本發(fā)明相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及試驗(yàn)結(jié)果(一)穩(wěn)定性試驗(yàn)選取重結(jié)晶、干燥好的苦參總堿白色粉末六個(gè)批號(hào)，進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)。采用常規(guī)分析試劑和高效液相色譜分別測(cè)定。常規(guī)分析試劑按苦參總堿質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)操作，高效液相色譜儀為北京分析儀器廠生產(chǎn)?，F(xiàn)測(cè)苦參總堿含量與兩年后的試驗(yàn)結(jié)果見表1。
結(jié)果表明，苦參總堿結(jié)晶化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，放置二年，結(jié)構(gòu)未改變，其藥效也未發(fā)生變化。
(二)體外抗菌試驗(yàn)采用瓊脂平皿稀釋法測(cè)定最低抑菌濃度(MIC)。將苦參總堿和慶大霉素以不同濃度分別加入平皿中，傾入定量溶化的瓊脂，與藥物混勻?？鄥⒖倝A的終濃度分別為40、30、20、15、10、5、2.5mg/ml，慶大霉素終濃度分別為32、16、8、4、2、1、0.5、0.25μg/ml，慶大霉素MIC≥8μg/ml為耐藥，≤4μg/ml為敏感。
試驗(yàn)菌用營(yíng)養(yǎng)肉湯稀釋成0.5麥?zhǔn)蠞舛?約1.5億/ml)，接種量約105/點(diǎn)，接種后置35℃培養(yǎng)18h，觀察結(jié)果。以無菌生長(zhǎng)平皿的最小藥物濃度為最低抑菌濃度。并采用試管肉湯稀釋法測(cè)定pH、細(xì)菌接種量和血清濃度對(duì)MIC的影響。實(shí)驗(yàn)所用臨床分離的致病菌203株和污染食品中分離的類炭疽病菌3株，經(jīng)臨床藥敏實(shí)驗(yàn)證明，絕大數(shù)菌株對(duì)兩種以上的抗生素耐藥。從慶大霉素的MIC結(jié)果也可以看出，絕大數(shù)試驗(yàn)菌對(duì)慶大霉素耐藥。苦參總堿及其對(duì)照藥物慶大霉素對(duì)試驗(yàn)菌的MIC試驗(yàn)結(jié)果見表2。

上述試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明對(duì)上述試驗(yàn)菌均有體外抑制作用，20mg/mL濃度時(shí)對(duì)上述試驗(yàn)菌的抑制率為79.6％。
最低殺菌濃度(MBC)采用試管肉湯稀釋法和活菌計(jì)數(shù)法檢測(cè)。選用一定出MIC的金葡球菌、大腸埃希菌、銅綠假單細(xì)胞菌、福氏志賀菌各4株，類炭疽桿菌2株作為試驗(yàn)菌。將未見細(xì)菌生長(zhǎng)各管的培養(yǎng)液分別吸取0.1mL種入不含藥的瓊脂平皿中，35℃培養(yǎng)18h觀察結(jié)果。平皿上菌落數(shù)＜5個(gè)的最低藥物濃度為最低殺菌濃度。試驗(yàn)結(jié)果顯示，本發(fā)明對(duì)金葡球菌、大腸埃希菌、福氏志賀菌、銅綠假單細(xì)胞菌及類炭疽桿菌的MBC分別為100、100、100、＞150、30mg/mL。當(dāng)PH為9時(shí)，本發(fā)明對(duì)大腸埃希菌ATCC的MIC降至5mg/mL。類炭疽桿菌接種量增大，MIC也隨之增大。金葡球菌、大腸埃希菌和銅綠假單細(xì)胞菌的接種量對(duì)MIC的影響不顯著。培養(yǎng)基中含人血清濃度對(duì)MIC影響不明顯。
(三)小白鼠毒性試驗(yàn)經(jīng)對(duì)昆明系小白鼠進(jìn)行的相關(guān)毒性試驗(yàn)表明，苦參堿對(duì)小鼠的致死量在97mg/kg(最小致死劑量)～180mg/kg(最大致死劑量)。這表明苦參總堿是一種低毒性藥物。
有關(guān)的試驗(yàn)和文獻(xiàn)介紹表明苦參堿是一種具有強(qiáng)親水性和脂溶性的高分子物質(zhì)，經(jīng)注射進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)后主要分布于內(nèi)臟器官，在動(dòng)物的肝、脾的腎臟中分布濃度較高，而在腦組織、脂肪和肌肉中檢查不出來，其消除半衰期為76分鐘，組織吸收和代謝過程很快，經(jīng)注射后苦參堿在24小時(shí)從尿液中排出。這說明苦參總堿在動(dòng)物體內(nèi)不大容易殘留。
(四)臨床藥效研究對(duì)300只患雞白痢的雛雞以0.8％本發(fā)明的水溶液作飲水治療，治療一天后治理，第二天繼續(xù)治療一天，治愈率為93.9％。對(duì)200只患雞白痢的雛雞以拌飼0.3％濃度治療，治愈率為93.3％。預(yù)防雞白痢則以0.1％濃度本發(fā)明拌于飼料中喂至15日齡。統(tǒng)計(jì)死亡率，計(jì)算保護(hù)率，同時(shí)選出部分雞做對(duì)比試驗(yàn)，對(duì)300只雞做雞白痢檢出試驗(yàn)。結(jié)果預(yù)防率達(dá)96％以上，其中預(yù)防組保護(hù)率96％，對(duì)照組72％，保護(hù)率提高24％，設(shè)100只雞以痢特靈作對(duì)照，預(yù)防組比對(duì)照組的保護(hù)率高2.8％。對(duì)300只試驗(yàn)雞用雞白痢檢查液檢查，雞白痢檢出雞31只，雞白痢檢出率10.3％試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明用于防治雞白痢效果顯著。
在對(duì)家畜進(jìn)行的相關(guān)試驗(yàn)結(jié)果表明與前述的家禽試驗(yàn)結(jié)果類似。
權(quán)利要求
1.一種用苦參總堿作為主要成份的獸藥。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的獸藥，其特征是藥物的劑型為注射的針劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的獸藥，其特征是藥物的劑型為口服的粉劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的獸藥，其特征是藥物的劑型為口服的水溶劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的獸藥，其特征是藥物的劑型為灌注的水溶劑。
6.作為獸藥的苦參總堿的提取方法，將苦參的根或莖或籽粉碎為粗粉，再將粗粉置入乙醇中浸泡提取，所得液體經(jīng)過濾后進(jìn)行蒸餾或減壓蒸餾，在蒸餾產(chǎn)物中加入鹽酸調(diào)其pH值為3～4，再將其用乙醚進(jìn)行洗滌，經(jīng)洗滌的產(chǎn)物中加入碳酸鈉調(diào)其pH值為7左右后，再用氯仿進(jìn)行萃取，所得產(chǎn)物中加入乙醇進(jìn)行重結(jié)晶，再將結(jié)晶體烘干得苦參總堿。
全文摘要
本發(fā)明涉及從豆科植物的苦參中提取的苦參總堿在治療禽畜細(xì)菌感染的藥物的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K31/4353GK1579397SQ0314397
公開日2005年2月16日 申請(qǐng)日期2003年8月6日 優(yōu)先權(quán)日2003年8月6日
發(fā)明者陸樹林, 梁劍平, 蘇建華 申請(qǐng)人:甘肅綠舟生態(tài)科技有限責(zé)任公司