專利名稱：在獸醫(yī)學(xué)和人類醫(yī)學(xué)中用于預(yù)防和治療皮膚真菌病的新疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含有皮膚真菌疫苗株的新疫苗，其在皮膚真菌病的免疫預(yù)防和治療中的用途，以及該疫苗的制備方法。本發(fā)明的疫苗可被應(yīng)用于獸醫(yī)學(xué)和人類醫(yī)學(xué)。
目前，在獸醫(yī)學(xué)中，許多疫苗用于預(yù)防和治療皮膚真菌病，這些疫苗是活疫苗或者滅活疫苗，CS 160324，PL 156844，SU 1734762，GB 2025222，SU 955570，SU 955571，SU 548947，SU 835446，RU2013444，RU 2013445，EP 393371，DE 9218921 U1，PL 100958，US 4229434，US 5277904，US 5284652，CS 201481，CS 246791，CS 261460，CZ 279278和CZ 279982等對(duì)其進(jìn)行了描述。這些出版物中描述的所有疫苗都是通過(guò)腸胃外應(yīng)用。在絕大多數(shù)情況下，是通過(guò)肌肉施用，極少通過(guò)皮下施用。由于腸胃外應(yīng)用可能引起被接種的有機(jī)體產(chǎn)生過(guò)敏性(anaphylactic)或過(guò)敏樣(anaphylactoid)反應(yīng)的危險(xiǎn)(Gudding R.and Naess B.，Amer.J.Vet.Res.47，1986，2415-2417，給牛接種疫苗來(lái)抵抗疣狀毛癬菌(Trichophyton verrucosum)引起的癬菌病)，因此，迄今為止所制備的疫苗都不被應(yīng)用在人類醫(yī)學(xué)中。因此，首要的是迫切需要一種也可以應(yīng)用于人類醫(yī)學(xué)的疫苗。
發(fā)明詳述首先，本發(fā)明涉及一種含有皮膚真菌疫苗株的新疫苗，及其在皮膚真菌病的免疫預(yù)防和治療中的用途。
本發(fā)明的疫苗可在獸醫(yī)學(xué)和人類醫(yī)學(xué)中應(yīng)用。在本發(fā)明中，將被處理的獸醫(yī)學(xué)中所述溫血?jiǎng)游?，具體地包括馴養(yǎng)的和生產(chǎn)性的家畜。
在本發(fā)明中，皮膚真菌病被理解為一種由皮膚真菌引發(fā)的皮膚及其附器(adnexa)的疾病。
本發(fā)明涉及一種含有至少一種皮膚真菌疫苗株的疫苗。
在本發(fā)明中，皮膚真菌其中包括毛癬菌屬(Trichophyton)、小孢子菌屬(Microsporum)、表皮癬菌屬(Epidermophyton)、節(jié)皮菌屬(Arthroderma)和矮小菌屬(Nannizzia)等真菌。
特別優(yōu)選的疫苗株是毛癬菌屬。具體地，菌株優(yōu)選為疣狀毛癬菌CCM F-765(a1)、疣狀毛癬菌CCM 8166(a2)、須癬毛癬菌(Trichophyton mentagrophytes)CCM 8290(a3)和紅色毛癬菌(Trichophyton rubrum)CCM 8291(a4)。上述疣狀毛癬菌CCM F-765(a1)和疣狀毛癬菌CCM 8166(a2)菌株培養(yǎng)物由申請(qǐng)人最早分別于1984年11月5日和1993年2月23日保藏在Masaryk大學(xué)的捷克微生物保藏中心(CCM)，Tvrdeho 14，60200布爾諾，保藏號(hào)分別為CCM F-765和CCM 8166。分別在1992年12月14日和2002年7月22日，這些保藏變更成依照布達(dá)佩斯條約規(guī)定的保藏，上述須癬毛癬菌CCM 8290(a3)和紅色毛癬菌CCM 8291(a4)菌株培養(yǎng)物于2001年7月23日分別以保藏號(hào)CCM 8290和CCM 8291依照布達(dá)佩斯條約規(guī)定在那里進(jìn)行保藏。
含有上述毛癬菌屬的疫苗株中至少兩種的組合的疫苗是另一種優(yōu)選實(shí)施方式。上述四種疫苗株中的三種的組合是特別優(yōu)選的。在這種情況下，終產(chǎn)物中的各種疫苗株a1∶a2∶a3∶a4的比例為0或2-10∶0或1-5∶0或5-30∶0或2-10，或者0或1-10∶0或1-2∶0或3-30∶0或1-3，或者0或1-10∶0或1-5∶0或3-30∶0或1-10是特別優(yōu)選的。
當(dāng)用于獸醫(yī)學(xué)時(shí)，a1∶a2∶a3的比例為2∶1∶5或者10∶1∶30的實(shí)施方式或者單獨(dú)使用a1(疣狀毛癬菌CCM F-765)都是特別優(yōu)選的。
當(dāng)用于人類醫(yī)學(xué)時(shí)，a1∶a2∶a3∶a4的比例為4∶2∶10∶3或者10∶1∶30∶2，以及a1∶a3∶a4的比例為1∶3∶1或者a2∶a4的比例為1∶2的實(shí)施方式或者單獨(dú)使用a4(紅色毛癬菌CCM 8291)都是特別優(yōu)選的。
而且，如果終產(chǎn)物中疫苗株的營(yíng)養(yǎng)體型(vegetative form)的總數(shù)至少為1mio/mL則是優(yōu)選的?？倲?shù)至少為5mio/mL是特別優(yōu)選的，總數(shù)至少為10mio/mL是最優(yōu)選的。
終產(chǎn)物的pH范圍是3.0-10.0，在這種情況下，適宜的緩沖系統(tǒng)是本領(lǐng)域技術(shù)人員通常熟知的，例如醋酸鹽或碳酸鹽緩沖系統(tǒng)，或者生理上可接受的有機(jī)或無(wú)機(jī)酸如檸檬酸、乙酸或者鹽酸都是可用的。優(yōu)選的pH范圍是6.0-8.0，在這種情況下，使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的具有不同成分的磷酸緩沖系統(tǒng)。
當(dāng)用于人類醫(yī)學(xué)時(shí)，甲醛的總含量為0.02％或更少，當(dāng)用于獸醫(yī)學(xué)時(shí)，甲醛的總含量為0.05％或更少。在滅活之后具有這個(gè)含量不會(huì)帶來(lái)生理上的問(wèn)題，也是法律法規(guī)允許的，而且它還具有抗感染功能，對(duì)預(yù)防和治療具有輔助作用。如果需要，可以在甲醛中加入其他物質(zhì)，或者用其他物質(zhì)替代甲醛。除了特別適宜的甲醛之外，可以采用化學(xué)手段或者物理方法，例如β-propionolactone、二元乙烯亞胺(binaryethylenimine)和乙酸。
甲醛的總含量小于0.02％或0.05％是特別優(yōu)選的。
本發(fā)明的疫苗可以通過(guò)腸胃外施用，例如通過(guò)肌肉、皮下或者經(jīng)表皮(epicutaneously)施用。在人類醫(yī)學(xué)中應(yīng)用時(shí)，經(jīng)表皮的應(yīng)用，即施用和涂抹(distribution)到皮膚上，是特別優(yōu)選的。特別地，腳趾間區(qū)域是人類身體其它部位的皮膚霉菌的主要源頭，在此區(qū)域進(jìn)行經(jīng)表皮應(yīng)用是優(yōu)選的。上文已經(jīng)說(shuō)明，通過(guò)經(jīng)表皮應(yīng)用可以使可能威脅生命的過(guò)敏或過(guò)敏樣反應(yīng)的危險(xiǎn)最小化。
而且，由于疫苗的腸胃外應(yīng)用通常需要注射，而采用經(jīng)表皮途徑不需要注射，因此其具有了更多優(yōu)點(diǎn)。由于病人不必忍受疼痛和不再擔(dān)驚受怕，因此可提高病人的依從性。無(wú)疑，在獸醫(yī)學(xué)中應(yīng)用時(shí)，實(shí)施治療的人員不需要擔(dān)心動(dòng)物會(huì)出現(xiàn)危險(xiǎn)性的恐懼和疼痛反應(yīng)。
本發(fā)明的另一方面，提供一種制備本發(fā)明的抗皮膚真菌病的疫苗的方法，該方法被描述如下將疫苗株分別培養(yǎng)在含有糖類和有機(jī)氮的適當(dāng)組合物的瓊脂培養(yǎng)基中，任選地調(diào)節(jié)pH值，在25-29℃溫度范圍內(nèi)和無(wú)菌條件下，繁殖10到30天，直到任選地形成營(yíng)養(yǎng)體型。然后，將菌株在0.1％甲醛水溶液中勻漿，得到的懸浮液在18-26℃下滅活至少24-36小時(shí)。勻漿化過(guò)程的操作應(yīng)當(dāng)是絕大部分孢子從菌絲體上分離，而不破壞它們的表面結(jié)構(gòu)。在測(cè)定完?duì)I養(yǎng)體型的數(shù)量之后，各種菌株任選地相互混合，加入磷酸緩沖液，或者可任選地使用其它緩沖生理鹽溶液，使得所有疫苗株?duì)I養(yǎng)體型的總數(shù)至少為1mio/mL，優(yōu)選地，疫苗為至少5mio/mL，pH在3.0到10之間，優(yōu)選地在6.0到8.0之間，用于人類醫(yī)學(xué)的疫苗中，在滅活后存在的甲醛的量為0.02％或者更少，用于獸醫(yī)學(xué)的疫苗中為0.05％或者更少。
在本發(fā)明中，終產(chǎn)物中疫苗株a1∶a2∶a3∶a4混合物對(duì)應(yīng)的比例為0或2-10∶0或1-5∶0或5-30∶0或2-10，其中，上述混合比例和各種菌株是特別優(yōu)選的。
本發(fā)明的疫苗的具有廣泛的抗原成分，已經(jīng)檢測(cè)到本發(fā)明疫苗與同屬菌株之間的免疫反應(yīng)及其與其它毛癬菌屬，如犬小孢子菌屬(Microsporum Canis)或馬屬毛癬菌屬(Trichophyton equinum)之間的交叉反應(yīng)。
下文將描述本發(fā)明的特別優(yōu)選實(shí)施例。但是，這僅僅是用于說(shuō)明而不是限制本發(fā)明。
制備和應(yīng)用實(shí)施例實(shí)施例1用于獸醫(yī)學(xué)的疫苗的制備及其應(yīng)用培養(yǎng)和繁殖毛癬菌屬疫苗株，所用的培養(yǎng)基含有1.2％瓊脂，5.0％糖類和0.3％有機(jī)氮。
培養(yǎng)基在蒸汽高壓滅菌器中，80-100kPa的超高壓下，滅菌20-30分鐘。調(diào)節(jié)pH值為6.0-7.0之后，在培養(yǎng)瓶底部覆蓋一些培養(yǎng)基，并在上述條件下再次滅菌。待瓊脂固化后并保持無(wú)菌狀態(tài)，將疫苗株懸浮液分別地接種到含有培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中。接種時(shí)，使用疫苗株(CCM F-765，CCM 8166和CCM 8290)的凍干培養(yǎng)物或者現(xiàn)配的接種培養(yǎng)物。每毫升各種接種培養(yǎng)物中含有至少1.5mio的活CFU。疫苗株接種培養(yǎng)物涂布在培養(yǎng)基的表面。在25-29℃溫度下培養(yǎng)10-30天，直到獲得營(yíng)養(yǎng)體型的最適宜生成。當(dāng)真菌抗原產(chǎn)量很高時(shí)，將培養(yǎng)物從培養(yǎng)基表面取出，在0.1％甲醛水溶液中勻漿。用勻漿器進(jìn)行勻漿時(shí)，使絕大部分的孢子從菌絲體上分離，而不破壞其表面結(jié)構(gòu)。形成的混合懸浮液的等分試樣分別過(guò)濾到存儲(chǔ)容器中，在18-26℃溫度下存放24小時(shí)來(lái)滅活疫苗株。然后，在Bürker細(xì)胞計(jì)數(shù)室中測(cè)定各種疫苗株?duì)I養(yǎng)體型的數(shù)量。每毫升疫苗的含量達(dá)到41mio。各種疫苗株按一定方式混合，使得在最終疫苗制備物中，疣狀毛癬菌CCMF-765∶疣狀毛癬菌CCM 8166∶須癬毛癬菌CCM 8290的比例為2∶1∶5。甲醛含量為0.05％。通過(guò)加入磷酸緩沖生理鹽溶液，制備物的pH被調(diào)節(jié)為6.0。
按這種方法制備的疫苗，檢測(cè)其無(wú)菌狀態(tài)以及營(yíng)養(yǎng)體型的數(shù)量，并用于接種感染毛癬菌病的牛。兩次肌肉接種，每次劑量為5ml，并且在第二次接種后的14天內(nèi)兩頭患病的牛得到治愈。
鑒于使用免疫生物學(xué)制備物所取得的結(jié)果—在本發(fā)明的治療通常需要1-3個(gè)月—效果是驚人的。
實(shí)施例2用于獸醫(yī)學(xué)的疫苗的制備及其應(yīng)用培養(yǎng)疫苗株，使用瓊脂含量為1.3％，糖類含量為10.0％和有機(jī)氮含量為0.5％的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基在蒸汽高壓滅菌器中，120kPa的超高壓下滅菌兩次，每次30分鐘。培養(yǎng)基的pH值為6.6。培養(yǎng)基中接種菌株疣狀毛癬菌CCM F-765懸浮液，培養(yǎng)溫度維持在25-26℃。培養(yǎng)15天后，培養(yǎng)物在0.1％甲醛溶液中勻漿。在22℃溫度下滅活36小時(shí)后，加入磷酸緩沖生理鹽溶液。在最終疫苗溶液中，甲醛含量為0.04％，pH為7.3，疫苗株?duì)I養(yǎng)體型的數(shù)量為22mio/mL。
該疫苗溶液在牛上進(jìn)行試驗(yàn)，具有很好的保護(hù)作用。
實(shí)施例3用于獸醫(yī)學(xué)的疫苗的制備及其應(yīng)用制備方法與實(shí)施例1相似。菌株疣狀毛癬菌CCM F-765，疣狀毛癬菌CCM 8166和須癬毛癬菌CCM8290的比例是10∶1∶30。甲醛含量為0.04％，pH被調(diào)節(jié)為8.0，每毫升疫苗中所有疫苗株的營(yíng)養(yǎng)體型的總數(shù)為80.0mio。
用1月齡小牛進(jìn)行疫苗溶液可耐受度(tolerability)的測(cè)試，10mL疫苗溶液經(jīng)肌肉施與5頭小牛的臀部，在接種疫苗前24小時(shí)、接種疫苗時(shí)、接種疫苗后4小時(shí)以及隨后4天內(nèi)，測(cè)定小牛的直腸溫度。疫苗是可耐受的，全部小牛的體溫維持在生理值的范圍內(nèi)。接種免疫的小牛沒(méi)有出現(xiàn)意外的局部或者后效應(yīng)反應(yīng)。
實(shí)施例4用于人類醫(yī)學(xué)的疫苗的制備及其應(yīng)用疫苗株在含有1.5％瓊脂、15.0％糖類和1.0％有機(jī)氮的培養(yǎng)基中繁殖。培養(yǎng)基在水蒸汽高壓滅菌器中、80-100kPa的超高壓下滅菌兩次，每次25分鐘。接種、疫苗株的培養(yǎng)、勻漿、滅活和營(yíng)養(yǎng)體型數(shù)量的測(cè)定都按實(shí)施例1描述的方式操作。疫苗株疣狀毛癬菌CCM F-765，紅色毛癬菌CCM 8291和須癬毛癬菌CCM 8290按1∶1∶3的比例混合。
制備的懸浮液用一定量的磷酸緩沖生理鹽溶液混合，使得所含甲醛的最終濃度為0.02％，終產(chǎn)物中含有的營(yíng)養(yǎng)體型的總數(shù)為10mio。根據(jù)緩沖液的成分，pH值調(diào)節(jié)到6.0-8.0之間。
在測(cè)定營(yíng)養(yǎng)體型的數(shù)量、甲醛濃度和pH之后，在自愿者身上進(jìn)行該疫苗的含菌狀況和對(duì)人危害性的測(cè)試。為此，每周使用該疫苗3次，用量為10mL，將疫苗涂抹到腳趾之間的皮膚上。
沒(méi)有檢測(cè)到對(duì)人有害的副作用。
而且，將疫苗通過(guò)經(jīng)表皮在牛上施用兩次，為了試驗(yàn)?zāi)康?，這些牛感染了毛癬菌病。與沒(méi)有接種疫苗的牛相比，接種疫苗的牛大約提前1周成功治愈，證實(shí)了這種方法制備的本發(fā)明的疫苗的治療效果。
實(shí)施例5用于人類醫(yī)學(xué)的疫苗的制備疫苗株紅色毛癬菌CCM 8291在具有實(shí)施例2所述成分的培養(yǎng)基中，26-28℃下培養(yǎng)18天。在0.1％甲醛溶液中勻漿的培養(yǎng)物在26℃溫度下滅活24小時(shí)。將滅活的懸浮液和磷酸緩沖生理鹽溶液混合后，pH為6.8，甲醛含量為0.015％，疫苗株?duì)I養(yǎng)體型的數(shù)量達(dá)到11mio/mL。
用疫苗溶液在小牛身上進(jìn)行攻擊試驗(yàn)。與沒(méi)有用疫苗處理的作為對(duì)照的牛相比，進(jìn)行兩次經(jīng)表皮接種免疫的小牛能夠有效防止試驗(yàn)性的毛癬菌病的感染實(shí)施例6用于人類醫(yī)學(xué)的疫苗的制備疫苗溶液由不同含量的兩種皮膚真菌菌株疣狀毛癬菌CCM F-765和須癬毛癬菌CCM8290制備得到。用于培養(yǎng)的培養(yǎng)基含有1.5％瓊脂、8.0％糖類和0.8％蛋白胨。培養(yǎng)基在蒸汽殺菌器中，120kPa的超高壓下滅菌兩次，每次30分鐘。培養(yǎng)基分別地接種所述疫苗株的懸浮液，每毫升接種物濃度為1.0mio。接種后，在25-27℃下培養(yǎng)10天，培養(yǎng)物在0.01％甲醛溶液中以10,000轉(zhuǎn)/分勻漿2-3分鐘。隨后，懸浮液在18℃溫度下避光存放72小時(shí)來(lái)滅活疫苗株。通過(guò)培養(yǎng)基上的培養(yǎng)試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)菌株的滅活情況。用磷酸緩沖生理鹽溶液來(lái)稀釋滅活的懸浮液，使得甲醛含量為0.018％，pH為7.17，疫苗株的營(yíng)養(yǎng)體型的數(shù)量為15.8mio/mL。
在兔子身上測(cè)試疫苗的危害性。將3mL疫苗溶液肌肉注射到骨盆肌，任何兔子都沒(méi)有出現(xiàn)意外的局部反應(yīng)或者常規(guī)生理狀況(generalcondition)的變化。
實(shí)施例7用于人類醫(yī)學(xué)的疫苗的制備疫苗株疣狀毛癬菌CCM 8166和紅色毛癬菌CCM 8291在具有成分為1.2％瓊脂、10.0％糖類和0.5％蛋白胨的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。這些物質(zhì)在高壓滅菌器的水中，在與實(shí)施例6相同的條件下殺菌。在28-29℃下培養(yǎng)30天后，得到的培養(yǎng)物在0.01％甲醛溶液中勻漿，在24℃下滅活24小時(shí)。疫苗中存在的疣狀毛癬菌CCM 8166和紅色毛癬菌CCM 8291的比例為1∶2。加入具有不同磷酸氫二鈉含量的磷酸緩沖生理鹽溶液，將pH調(diào)節(jié)到6.0-8.0之間。每毫升疫苗溶液中營(yíng)養(yǎng)體型的數(shù)量為5mio。
在連續(xù)3天內(nèi)，將疫苗溶液通過(guò)經(jīng)表皮施與3頭小牛的已經(jīng)刮毛和具搔痕的、面積為10×10cm的皮膚上，每頭牛5mL疫苗溶液。所有牛都沒(méi)有出現(xiàn)局部或者接種免疫后的反應(yīng)。
實(shí)施例8用于人類醫(yī)學(xué)的疫苗的制備及其應(yīng)用培養(yǎng)基按實(shí)施例2制備。接種、培養(yǎng)和培養(yǎng)物的勻漿都與實(shí)施例1相似。用于制備疫苗的4種疫苗株具有如下比例疣狀毛癬菌CCMF-765∶疣狀毛癬菌CCM 8166∶須癬毛癬菌CCM 8290∶紅色毛癬菌CCM 8291＝4∶2∶10∶3。
每毫升中疫苗株的營(yíng)養(yǎng)體型的總數(shù)量為75mio，甲醛含量為0.015％。加入具有不同含量磷酸氫二鈉的磷酸緩沖生理鹽溶液后，pH調(diào)節(jié)到6.0-8.0之間。
疫苗溶液通過(guò)經(jīng)表皮進(jìn)行測(cè)試，在連續(xù)3天內(nèi)將2mL疫苗溶液施與兩名自愿者的腳趾之間的區(qū)域。疫苗是無(wú)害的，沒(méi)有引起意外的局部或者與常規(guī)生理狀況有關(guān)的臨床變化。
實(shí)施例9用于人類醫(yī)學(xué)的疫苗的制備及其應(yīng)用疫苗溶液按實(shí)施例8制備，不同之處僅在于菌株a1∶a2∶a3∶a4的比例為10∶1∶30∶2，以及溶液的pH為6.9。
治療時(shí)，將疫苗溶液施與腳趾之間的感染部位以及提示具有霉菌病的臨床病變的左腳大腳趾；未能分離得到其病原體。在連續(xù)3天內(nèi)，將2mL疫苗溶液涂抹到被感染的皮膚上，每天一次，在第三次使用后的第7天，皮膚上可以觀察到康復(fù)的跡象。
毫無(wú)疑問(wèn)，通過(guò)以上描述和實(shí)施例可以知曉，本發(fā)明因而是一種在獸醫(yī)學(xué)和人類醫(yī)學(xué)中用于免疫預(yù)防和治療皮膚真菌病的高效和容易應(yīng)用的疫苗。用于獸醫(yī)學(xué)時(shí)，本發(fā)明的疫苗可以通過(guò)腸胃外，特別是通過(guò)肌肉和皮下，以及通過(guò)經(jīng)表皮施用。而且，用于人類醫(yī)學(xué)時(shí)，本發(fā)明的疫苗特別優(yōu)選地以適當(dāng)?shù)姆绞?，例如用無(wú)菌的噴射安瓿(spray ampoule)噴射到人的皮膚上，通過(guò)經(jīng)表皮施用。
因此，在人類醫(yī)學(xué)中使用的用于經(jīng)表皮應(yīng)用的抗皮膚真菌病的疫苗首次被提供。通過(guò)經(jīng)表皮應(yīng)用，排除了可能威脅生命的過(guò)敏或過(guò)敏樣反應(yīng)的危險(xiǎn)。
權(quán)利要求
1.一種疫苗，含有至少一種下列疫苗株a1)疣狀毛癬菌(Trichophyton verrucosum)CCM F-765，a2)疣狀毛癬菌(Trichophyton verrucosum)CCM 8166，a3)須癬毛癬菌(Trichophyton mentagrophytes)CCM 8290，和a4)紅色毛癬菌(Trichophyton rubrum)CCM 8291。
2.權(quán)利要求1的疫苗，其中在終產(chǎn)物中各種疫苗株a1∶a2∶a3∶a4的比例是0或2-10∶0或1-5∶0或5-30∶0或2-10。
3.權(quán)利要求1的疫苗，其中在終產(chǎn)物中各種疫苗株a1∶a2∶a3∶a4的比例是0或1-10∶0或1-2∶0或3-30∶0或1-3。
4.權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的疫苗，其中在終產(chǎn)物中疫苗株a1∶a2∶a3的比例是2∶1∶5或10∶1∶30。
5.權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的疫苗，其中在終產(chǎn)物中疫苗株a1∶a3∶a4的比例是1∶3∶1。
6.權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的疫苗，其中在終產(chǎn)物中疫苗株a2∶a4的比例是1∶2。
7.權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的疫苗，其中在終產(chǎn)物中疫苗株a1∶a2∶a3∶a4的比例是4∶2∶10∶3或10∶1∶30∶2。
8.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的疫苗，其特征在于每毫升疫苗中所有疫苗株?duì)I養(yǎng)體型的總數(shù)至少為1mio。
9.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的疫苗，其特征在于每毫升疫苗中所有疫苗株?duì)I養(yǎng)體型的總數(shù)至少為5mio。
10.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的疫苗，其特征在于每毫升疫苗中所有疫苗株?duì)I養(yǎng)體型的總數(shù)至少為10mio。
11.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的疫苗，其特征在于所述終產(chǎn)物的pH在3.0-10.0范圍內(nèi)。
12.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的疫苗，其特征在于所述終產(chǎn)物的pH在6.0-8.0范圍內(nèi)。
13.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的疫苗，含有少于0.05％的甲醛。
14.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的疫苗，含有少于0.02％的甲醛。
15.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的疫苗用于經(jīng)表皮應(yīng)用。
16.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的疫苗在人類醫(yī)學(xué)中的用途。
17.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的疫苗在獸醫(yī)學(xué)中的用途。
18.至少一種疫苗株a1)疣狀毛癬菌CCM F-765，a2)疣狀毛癬菌CCM 8166，a3)須癬毛癬菌CCM 8290，和a4)紅色毛癬菌CCM 8291在制備用于人或者動(dòng)物的皮膚真菌病的免疫預(yù)防或治療的疫苗中的用途。
19.所述疫苗株中的至少兩種的權(quán)利要求18的用途。
20.所述疫苗株中的至少三種的權(quán)利要求18的用途。
21.權(quán)利要求18至20中任一項(xiàng)的用途，其中所述疫苗株的比例是權(quán)利要求2-7中任一項(xiàng)的比例。
22.權(quán)利要求18至21中任一項(xiàng)的用途，其中疫苗通過(guò)經(jīng)表皮施用。
23.一種制備抗皮膚真菌病疫苗的方法，包括a)以適當(dāng)組合物中的瓊脂培養(yǎng)基作為培養(yǎng)基，所述瓊脂培養(yǎng)基含有糖類或有機(jī)氮，任選地在期間調(diào)節(jié)pH之后，在25-29℃溫度范圍內(nèi)和無(wú)菌條件下分別地培養(yǎng)待混合的疫苗株10-30天，直到最佳地生成營(yíng)養(yǎng)體型，b)隨后在0.1％甲醛水溶液中勻漿，其中絕大部分的孢子從菌絲體上分離而不破壞其表面結(jié)構(gòu)，c)將所形成的懸浮液中的菌株在18-26℃溫度下滅活至少24-36小時(shí)，d)調(diào)節(jié)所述疫苗株之間的比例，e)調(diào)節(jié)疫苗株的數(shù)量為至少1mio/mL最終制備物，f)調(diào)節(jié)pH到3.0-10.0范圍，和g)調(diào)節(jié)甲醛的剩余含量，任選地隨后替代甲醛。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含有皮膚真菌疫苗株的疫苗、其用于皮膚真菌病的免疫預(yù)防和治療的用途、以及制備該疫苗的適當(dāng)方法。
文檔編號(hào)A61P31/00GK1545417SQ02814914
公開(kāi)日2004年11月10日 申請(qǐng)日期2002年7月29日 優(yōu)先權(quán)日2001年7月27日
發(fā)明者阿洛伊斯·里布尼卡爾, 約瑟夫·丘邁拉, 弗拉迪米爾·費(fèi)爾扎爾, 利博爾·比特納, 埃夫任·魏格爾, 丘邁拉, 比特納, 魏格爾, 米爾 費(fèi)爾扎爾, 阿洛伊斯 里布尼卡爾 申請(qǐng)人:拜耳維塔股份公司, 瑞姆斯?fàn)柊⑵潈?nèi)米泰爾股份公司