專利名稱：新的羥基環(huán)己烯基苯基羧酰胺保胎催產(chǎn)素受體拮抗劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用作競(jìng)爭(zhēng)性催產(chǎn)素受體拮抗劑的新的三環(huán)羥基羧酰胺，以及它們的制備方法，利用這些化合物的治療方法和藥物組合物。
本發(fā)明的化合物是在哺乳動(dòng)物中，特別是在人類中的有用治療劑。更具體地說(shuō)，它們可用于預(yù)防和/或抑制早產(chǎn)、用于抑制在剖腹產(chǎn)之前的足月分娩，有利于向醫(yī)療設(shè)備的抗分娩運(yùn)送和用于治療痛經(jīng)。這些化合物也用于在農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物中改善生育率，增強(qiáng)存活率和發(fā)情期同步化。
背景技術(shù)：
早產(chǎn)是產(chǎn)期死亡和發(fā)病的主要原因。幼兒死亡率引人注目地隨增加的妊娠時(shí)期而降低。過(guò)早地出生的嬰兒的存活率從24周的20％增加到30周的94％。此外，與過(guò)早出生的嬰兒護(hù)理有關(guān)的成本非常高。盡管在近40年來(lái)已經(jīng)開(kāi)發(fā)出許多用于早產(chǎn)治療的藥劑，但早產(chǎn)和低出生重量嬰兒的發(fā)生率保持相對(duì)無(wú)變化。因此對(duì)早產(chǎn)的安全和有效治療的開(kāi)發(fā)仍然未滿足需要。
當(dāng)前使用的保胎(子宮弛緩)藥劑包括β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑，如利托君，它適度地有效抑制早產(chǎn)，但有母親血壓過(guò)低，心動(dòng)過(guò)速和新陳代謝的副作用。幾種其它藥劑已經(jīng)用于抑制早產(chǎn)，包括其它β2腎上腺素能激動(dòng)劑(間羥叔丁腎上腺素，舒喘寧)、硫酸鎂、NSAIDs(消炎痛)、和鈣通道阻斷劑。同感在于這些藥劑沒(méi)有一種是非常有效的；沒(méi)有臨床證據(jù)顯示這些化合物可延長(zhǎng)妊娠超過(guò)7天(Johnson，Drugs，45，684-692(1993))。此外，它們的安全情況是不理想的。副作用包括呼吸消沉和心動(dòng)停止(硫酸鎂)、血液動(dòng)力學(xué)效應(yīng)(鈣通道阻斷劑)、動(dòng)脈導(dǎo)管的過(guò)早閉合和羊水過(guò)少(NSAIDs；前列腺素合酶抑制劑)。因此，用于早產(chǎn)治療的更安全和更有效及更好的患者可容許性的藥劑仍然未滿足需要。關(guān)于安全的具體要求包括沒(méi)有或具有低心動(dòng)過(guò)速速率，有限的焦慮，改進(jìn)的胎兒安全，和較少的，如果有的話，相反心血管效應(yīng)的產(chǎn)品。
所關(guān)心的一個(gè)目標(biāo)是子宮中的催產(chǎn)素受體，而選擇性催產(chǎn)素受體拮抗體已經(jīng)建議為理想的保胎藥劑。盡管還沒(méi)有清楚地確定催產(chǎn)素(OT)在分娩中的準(zhǔn)確作用，有證據(jù)強(qiáng)烈地說(shuō)明它可在人分娩開(kāi)始和進(jìn)行中起決定性的作用(Fuchs等，Science 215，1396-1398(1982)；Maggi等，J.Clin.Endocrinol.Metab.70，1142-1154(1990)；Akerlund，Reg.Pept.45，187-191(1993)；Akerlund，Int.Congr.Symp.Semin.Ser.內(nèi)分泌學(xué)的進(jìn)展，3，657-660(1993)；Akerlund等，催產(chǎn)素(oxytocin)，R.Ivell和J.Russel著，Plenum Press，紐約，595-600頁(yè)(1995))。催產(chǎn)素受體拮抗體的初步臨床試驗(yàn)支持以下概念，即OT受體的阻斷降低了子宮的子宮肌層活性和延遲分娩開(kāi)始(Akerlund等，Br.J.Obst.Gynaecol.94，1040-1044，(1987)；Andersen等，Am.J.Perinatal.6，196-199(1989)；Melin，Reg.Pept.45，285-288(1993))。因此，選擇性催產(chǎn)素拮抗劑被預(yù)期阻斷在足孕時(shí)主要在子宮中產(chǎn)生的催產(chǎn)素的主要效果，比用于早產(chǎn)治療的現(xiàn)有療法更有效。依靠在子宮中對(duì)受體的直接作用，也能預(yù)期催產(chǎn)素拮抗劑具有較少的副作用和改進(jìn)的安全情況。
以下現(xiàn)有技術(shù)參考文獻(xiàn)描述了肽催產(chǎn)素拮抗劑Hruby等，垂體神經(jīng)部肽的結(jié)構(gòu)-活性相互關(guān)系，肽分析，合成和生物學(xué)，Udenfriend和Meienhofer著，Academic Press，紐約，卷8，77-207(1987)；Pettibone等，內(nèi)分泌學(xué)，125，217(1989)；Manning等，加壓素和催產(chǎn)素的受體特異性激動(dòng)劑和拮抗劑的合成和一些用途，J.Recept.Res.，13，195-214(1993)；Goodwin等，催產(chǎn)素拮抗劑阿托西班在治療早產(chǎn)中的劑量范圍研究，Obstet.Gynecol.，88，331-336(1996)。由于它們也顯示加壓素拮抗劑活性，因此肽催產(chǎn)素拮抗劑缺乏口腔活性，許多這些肽是非選擇性拮抗劑。Bock等[J.Med.Chem.33，2321(1990)]，Pettibone等.[J.Pharm.Exp.Ther.256，304(1991)]，和Williams等[J.Med.Chem.，35，3905(1992)]報(bào)導(dǎo)了有效的六肽催產(chǎn)素拮抗劑，它還在結(jié)合到V1和V2受體中顯示弱的加壓素拮抗活性。
各種非肽催產(chǎn)素拮抗劑和/或催產(chǎn)素/加壓素(AVP)拮抗劑近來(lái)由如下文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)Pettibone等，Endocrinology，125，217(1989)；Yamamura等，Science，252，572-574(1991)；Evans等，J.Med.Chem.，35，3919-3927(1992)；Pettibone等，J.Pharmacol.Exp.Ther，264，308-314(1992)；Ohnishi等，J.Clin.Pharmacol.33，230-238，(1993)；Evans等，J.Med.Chem.36，3993-4006(1993)；Pettibone等，Drug Dev.Res.30，129-142(1993)；Freidinger等，在肽模擬設(shè)計(jì)中的一般策略對(duì)催產(chǎn)素拮抗劑的應(yīng)用，Perspect Med.Chem.，179-193(1993)，Ed.B.Testa，Verlag，Basel，Switzerland；Serradeil-Legal，J.Clin.Invest，92，224-231(1993)；Williams等，J.Med.Chem.37，565-571(1994)；Williams等，Bioorg.Med.Chem.2，971-985(1994)；Yamamura等，Br.J.Pharmacol.，105，546-551(1995)；Pettibone等，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)和生物學(xué)中的進(jìn)步395，601-612(1995)；Williams等，J.Med.Chem.38，46344636(1995)；Hobbs等，Biorg.Med.Chem.Lett.5，119(1995)；Williams等，Curr.Pharm.Des.2，41-58(1996)；Freidinger等，Medicinal Research Reviews，17，1-16(1997)；Pettibone等，Biochem.Soc.Trans.25(3)，1051-1057(1997)；Bell等，J.Med.Chem.41，2146-2163(1998)；Kuo等，Bioorg.Med.Chem.Lett.8，3081-3086(1998)；Williams等，Biorg.Med.Chem.Lett.9，1311-1316(1999)。
某些喹諾酮衍生物和二環(huán)氮雜由Ogawa等在WO94/01113(1994)中公開(kāi)為催產(chǎn)素和加壓素拮抗劑；苯并噁嗪酮由Sparks等在WO97/25992(1997)中公開(kāi)為催產(chǎn)素和加壓素受體拮抗劑；Williams等在WO96/22775(1996)中公開(kāi)了哌啶催產(chǎn)素和加壓素受體拮抗劑；Bock等在U.S.專利5,665,719(1997)中公開(kāi)了用作催產(chǎn)素和加壓素受體拮抗劑的苯并噁嗪酮和苯并嘧啶酮哌啶；用作催產(chǎn)素和加壓素受體拮抗劑的哌嗪和螺哌啶由Evans等在U.S.專利5,670,509(1997)和由Bock等在U.S.專利5,756,504(1998)中公開(kāi)；Bell等在UK專利申請(qǐng)，GB2326639A(1998)中公開(kāi)了哌嗪催產(chǎn)素受體拮抗劑；Bell等在UK專利申請(qǐng)，GB2 326 410A(1998)中公開(kāi)了苯并噁嗪酮和喹啉酮催產(chǎn)素和加壓素受體拮抗劑；Bell等在U.S.專利5,756,497(1998)中公開(kāi)了苯并噁嗪酮催產(chǎn)素和加壓素受體拮抗劑；Matsuhisa等在WO98/39325(1998)中公開(kāi)了作為催產(chǎn)素拮抗劑的二氟四氫苯并氮雜衍生物；Ogawa等在U.S.專利5,753,644(1998))中公開(kāi)了具有加壓素和催產(chǎn)素拮抗劑活性的雜環(huán)雙酰胺。
Trybulski等在U.S.專利5,880,122(1999)中公開(kāi)了具有加壓素拮抗劑活性的吡咯并苯并二氮雜雙酰胺的3-羧酰胺衍生物；具有加壓素和催產(chǎn)素受體拮抗劑活性的雙環(huán)噻吩并氮雜由Albright等在WO96/22294(1996)和U.S.專利5,654,297(1997)中公開(kāi)；和具有加壓素和催產(chǎn)素受體拮抗劑活性的三環(huán)苯并氮雜由Albright等U.S.專利5,849,735(1998)中公開(kāi)。
Albright等在WO96/22282A1(1996)中廣泛公開(kāi)了三環(huán)苯并氮雜拮抗劑。
Venkatesan等在U.S.專利5,521,173(1996)，WO96/22292(1996)和U.S.專利5,780,471(1998)中廣泛公開(kāi)了具有加壓素和催產(chǎn)素拮抗劑活性的三環(huán)苯并氮雜。
通過(guò)以高親合力和選擇性結(jié)合于催產(chǎn)素受體，因此防止催產(chǎn)素結(jié)合到它的受體上和在體內(nèi)發(fā)揮它的生物和藥物效應(yīng)，而用作有效催產(chǎn)素拮抗劑的化合物可用于早產(chǎn)的治療和/或預(yù)防和/或抑制，用于抑制在剖腹產(chǎn)足月之前的分娩，有利于向醫(yī)療設(shè)備的抗分娩運(yùn)送。它們也可在給定的哺乳動(dòng)物中產(chǎn)生避孕，催產(chǎn)素拮抗劑已經(jīng)顯示為抑制催產(chǎn)素刺激的黃體部分激素(LH)從垂體細(xì)胞的釋放(Rettori等，Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.94，2741-2744(1997)；Evans等，J.Endocrinol.，122，107-116(1989)；Robinson等，J.Endocrinol.125，425-432(1990))。
催產(chǎn)素拮抗劑具有緩和由催產(chǎn)素在哺乳動(dòng)物中誘導(dǎo)的子宮收縮的能力，因此也可用于治療痛經(jīng)，以月經(jīng)期間疼痛為特征的癥狀。(Akerlund，Int.Congr.Symp.Semin.Ser.，內(nèi)分泌學(xué)的進(jìn)展3，657-660(1993)；Akerlund，Reg.Pept.45，187-191(1993)；Melin，Reg.Pept45，285-288(1993))。原發(fā)性痛經(jīng)與排卵周期數(shù)有關(guān)，它是婦科患者最通常的抱怨。子宮肌層的高收縮性和對(duì)子宮的降低血流被認(rèn)為是原發(fā)性痛經(jīng)癥狀的病因因素(Akerlund，Acta Obstet.Gynecol.Scand.66，459-461(1987)。特別地，由加壓素和催產(chǎn)素的小子宮動(dòng)脈的血管收縮被認(rèn)為產(chǎn)生組織缺血和疼痛(Jovanovic等，Br.J.PharmacoL 12，1468-1474(91997)；Chen等，Eur.J.Pharmacol.376，25-51(1999))。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在受精后，對(duì)農(nóng)畜的給藥催產(chǎn)素受體拮抗劑通過(guò)阻斷導(dǎo)致胚胎死亡的催產(chǎn)素誘導(dǎo)的溶黃體而提高生育率(Hickey等，WO96/09824 A1(1996)，Sparks等，WO97/25992 A1(1997)；Sparks等，U.S.專利5,726,172 A(1998))。因此，催產(chǎn)素受體拮抗劑可用于家畜飼養(yǎng)業(yè)以控制分娩的定時(shí)和初生仔畜的分娩，導(dǎo)致提高的存活率。它們也可通過(guò)防止催產(chǎn)素誘導(dǎo)的黃體退化和通過(guò)延遲發(fā)情期而用于發(fā)情同步化(Okano，J.Reprod.Dev.42(Suppl.)，67-70(1996))。此外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)催產(chǎn)素受體拮抗劑在乳牛中抑制催產(chǎn)素誘導(dǎo)的排乳方面具有有力的效果(Wellnitz等，Journal of Dairy Research 66，1-8(1999))。
用于加壓素結(jié)合到它的受體上競(jìng)爭(zhēng)者的化合物用于涉及哺乳動(dòng)物中加壓素紊亂的疾病狀態(tài)的治療或預(yù)防，該疾病包括血管舒張和aquaresis(無(wú)水利尿)，治療高血壓和抑制血小板凝聚。它們也用于充血性心力衰竭，硬化與腹水的治療，用于抗利尿激素不合適分泌的綜合癥(SIADH)。此外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)加壓素受體拮抗劑用于治療內(nèi)耳的干擾和疾病，特別是涉及梅尼埃爾氏疾病的疾病(Zenner等，WO99/24051-A2(1999))；和用于眼睛循環(huán)障礙，特別是眼內(nèi)高血壓或青光眼和視覺(jué)障礙如近視的預(yù)防和治療(Ogawa等，WO99/38533-A1(1999))。
發(fā)明概述本發(fā)明包括選自通式(I)的那些的新化合物 其中 是 或 R1和R2獨(dú)立地選自氫、(C1-C6)烷基、鹵素、氰基、三氟甲基、羥基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、-OCF3、(C1-C6)烷氧基羰基、-NHCO[(C1-C6)烷基]、羧基、-CONH2、-CONH(C1-C6)烷基或-CON[(C1-C6)烷基]2；R3是選自氫、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、羥基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、-CO(C1-C6)烷基或鹵素的取代基；R4由部分B-C組成；其中B選自基團(tuán) 或
和C選自 或 其中A是CH或N；R5，R6，R7和R8獨(dú)立地選自氫、(C1-C6)烷基、(C1-C6)低級(jí)烷氧基、(C1-C6)烷基羰基、(C2-C6)鏈烯基、(C2-C6)鏈炔基、(C1-C6)烷基、羥基(C1-C6)烷基、低級(jí)烷氧基(C1-C6)烷基、(C2-C7)酰氧基、(C3-C8)環(huán)烷基、甲?；?、(C3-C8)環(huán)烷基羰基、羧基、低級(jí)烷氧基羰基、(C3-C8)環(huán)烷基氧基羰基、芳基低級(jí)烷氧基羰基、氨基甲?；?、-O-CH2-CH＝CH2、鹵素、包括三氟甲基的鹵代低級(jí)烷基、-OCF3、-S(低級(jí)烷基)、-OC(O)N[低級(jí)烷基]2、-CONH(低級(jí)烷基)、-CON[低級(jí)烷基]2、低級(jí)烷基氨基、二(低級(jí)烷基)氨基、低級(jí)烷基二(低級(jí)烷基)氨基、羥基、氰基、三氟甲基硫、硝基、氨基、低級(jí)烷基磺?；?、氨基磺?；⒌图?jí)烷基氨基磺酰基、苯基、萘基、或 R9選自氫、(C1-C6)烷基、低級(jí)烷氧基羰基、-CON[(C1-C6)烷基]2、氰基；或任選被鹵素或(C1-C6)烷氧基取代的芳基；R10表示1-2個(gè)取代基，其獨(dú)立地選自氫、(C1-C6)烷基、[(C1-C6)烷基]2、羰基、 疊氮基、氨基、-NH[低級(jí)烷基]、-N[低級(jí)烷基]2、氨基羰基低級(jí)烷基、苯二甲酰亞氨基、氰基、鹵素、硫代低級(jí)烷基、芳氧基、芳硫基、任選被1-3個(gè)選自(C1-C6)低級(jí)烷基、烷氧基或鹵素的取代基取代的芳基；羥基、低級(jí)烷氧基、-OSO2R32或OP’，其中P’是叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、羰基低級(jí)烷基、羰基三氟低級(jí)烷基、芳基低級(jí)烷基、芳基羰基、甲氧基甲基或甲硫基甲基；其前提是當(dāng)R10表示2個(gè)取代基時(shí)，2個(gè)取代基可連接在一起與和它們相連的環(huán)己烯環(huán)一起形成雙環(huán)體系，所述雙環(huán)體系包括但不限于雙環(huán)[3.2.1]辛-2-烯或(6，6-二甲基)-雙[3.1.1]庚-2-烯；和R獨(dú)立地選自任何如下基團(tuán) 其中R11選自氫、(C1-C6)烷基、(C7-C12)芳基烷基，其中芳基部分任選地由低級(jí)烷氧基取代，或任何如下基團(tuán) 或 R12選自任何如下基團(tuán)
或 R13和R14獨(dú)立地選自氫、(C1-C6)烷基或(C7-C12)芳基烷基；R15是氫或(C1-C6)烷基；R16是羥基、(C1-C6)烷氧基、或OP，其中P是羥基保護(hù)基團(tuán)，該保護(hù)基團(tuán)定義為在合成程序期間提供相對(duì)于不需要的反應(yīng)的臨時(shí)保護(hù)并可選擇性除去的基團(tuán)。通常的羥基保護(hù)基團(tuán)包括，但不限于，叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、乙酰基、三氟乙酰基、芐基、苯甲?；?、甲氧基甲基、甲硫基甲基，和本領(lǐng)域已知的其它基團(tuán)(參見(jiàn)Greene等，有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)，第3版，John Wiley & Sons，紐約(1999))；R17選自氫、(C1-C6)低級(jí)烷基或(C7-C12)芳基低級(jí)烷基；R18選自-N[低級(jí)烷基]2、或-N[芳基低級(jí)烷基]2； 或 R19是氫、或(C1-C6)烷基、或R27；R20選自(C1-C6)烷基、-COR16、-CONH[低級(jí)烷基]、-CON[低級(jí)烷基]2；R21是任選由1-3個(gè)選自羥基、(C1-C6)烷氧基、芳氧基低級(jí)烷基、或鹵素的取代基取代的芳基；R22表示1-4個(gè)獨(dú)立地選自氫或(C1-C6)烷基的取代基；R23選自
R24是(C1-C6)烷基或芳基(C1-C6)烷基；R25和R26結(jié)合在一起表示1-4個(gè)獨(dú)立地選自如下的取代基R16、R27、(C1-C6)烷基、[(C1-C6)烷基]2、-CONH[低級(jí)烷基]、-CON[低級(jí)烷基]2、R30、 或 條件是至少一個(gè)取代基不是(C1-C6)烷基、-[(C1-C6)烷基]2、-CONH[低級(jí)烷基]或-CON[低級(jí)烷基]2；和進(jìn)一步條件是R25和R26可以結(jié)合在一起以形成任選被一個(gè)或多個(gè)選自R16或R27的取代基取代的5或6元飽和環(huán)；R27和R28選自羥基(C1-C6)烷基、低級(jí)烷氧基(C1-C6)烷基、或(C1-C6)烷基OP，其中P是羥基保護(hù)基團(tuán)，該保護(hù)基團(tuán)定義為在合成程序期間提供相對(duì)于不需要的反應(yīng)的臨時(shí)保護(hù)并可選擇性除去的基團(tuán)。通常的羥基保護(hù)基團(tuán)包括，但不限于，叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、乙?；⑷阴；?、芐基、苯甲?；?、甲氧基甲基、甲硫基甲基和本領(lǐng)域已知的其它基團(tuán)(參見(jiàn)Greene等，有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)，第3版，John Wiley & Sons，紐約(1999))；R29表示1-4個(gè)獨(dú)立選自R16或R27的取代基；R30是 或 R31是氫或(C1-C6)烷基；X和Y是CH或N；p是0-1的整數(shù)；q是2-4的整數(shù)；r是0-3的整數(shù)；
s是0-2的整數(shù)；和t是1-2的整數(shù)；及其可藥用鹽，或其前藥形式。
其中，本發(fā)明的更優(yōu)選化合物是如下通式的化合物 其中 是 R1和R2獨(dú)立地選自氫、(C1-C6)烷基、鹵素、氰基、三氟甲基、羥基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)低級(jí)烷氧基、-OCF3、(C1-C6)烷氧基羰基、-NHCO[(C1-C6)低級(jí)烷基]、羧基、-CONH2、-CONH(C1-C6)烷基或-CON[(C1-C6)烷基]2；R3是選自氫、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、羥基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、-CO(C1-C6)烷基或鹵素的取代基；R4由部分B-C組成；其中B選自基團(tuán) 或
和C定義為 或 其中A是CH或N；R5，R6，R7和R8獨(dú)立地選自氫、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷基羰基、(C2-C6)鏈烯基、(C2-C6)鏈炔基、(C1-C6)烷基、羥基(C1-C6)烷基、低級(jí)烷氧基(C1-C6)烷基、(C2-C7)酰氧基、(C3-C8)環(huán)烷基、甲酰基、(C3-C8)環(huán)烷基羰基、羧基、低級(jí)烷氧基羰基、(C3-C8)環(huán)烷基氧羰基、芳基低級(jí)烷氧基羰基、氨基甲?；?、-O-CH2-CH＝CH2、鹵素、鹵代低級(jí)烷基、三氟甲基、-OCF3、-S(低級(jí)烷基)、-OC(O)N[低級(jí)烷基]2、-CONH(低級(jí)烷基)、-CON[低級(jí)烷基]2、低級(jí)烷基氨基、二低級(jí)烷基氨基、低級(jí)烷基二(低級(jí)烷基)氨基、羥基、氰基、三氟甲基硫、硝基、氨基、低級(jí)烷基磺?；被酋；虻图?jí)烷基氨基磺酰基；R9選自氫、(C1-C6)烷基、烷氧基羰基、-CON[(C1-C6)烷基]2、氰基；R10表示1-2個(gè)取代基，其獨(dú)立地選自氫、(C1-C6)烷基、[(C1-C6)烷基]2、羰基、疊氮基、氨基、-NH[低級(jí)烷基]、-N[低級(jí)烷基]2、氨基羰基低級(jí)烷基、苯二甲酰亞氨基、氰基、鹵素、硫代低級(jí)烷基、芳氧基、芳硫基、羥基、低級(jí)烷氧基、-OSO2R32或OP’，其中P’是叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、羰基低級(jí)烷基、羰基三氟低級(jí)烷基、芳基低級(jí)烷基、芳基羰基、甲氧基甲基或甲硫基甲基；和R獨(dú)立地選自任何如下基團(tuán)
其中R11選自氫、(C1-C6)烷基、(C7-C12)芳基烷基，其中芳基部分任選地由低級(jí)烷氧基或任何如下基團(tuán)取代 或 R12選自任何如下基團(tuán)
或 R13和R14獨(dú)立地選自氫、(C1-C6)烷基或(C7-C12)芳基烷基；R16是羥基、(C1-C6)烷氧基、或OP，其中P是羥基保護(hù)基團(tuán)，該保護(hù)基團(tuán)定義為在合成程序期間提供對(duì)于不需要的反應(yīng)的臨時(shí)保護(hù)并可選擇性除去的基團(tuán)。通常的羥基保護(hù)基團(tuán)包括，但不限于，叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、乙?；⑷阴；?、芐基、苯甲?；⒓籽趸谆?、甲硫基甲基，和本領(lǐng)域已知的其它基團(tuán)(參見(jiàn)Greene等，有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)，第3版，John Wiley & Sons，紐約(1999))；R17選自氫、(C1-C6)烷基或(C7-C12)芳基烷基；R18選自-N[(C1-C6)烷基]2、 或 R19是氫或R27；R20選自-COR16、-CONH[(C1-C6)烷基]、-CON[(C1-C6)烷基]2；R21是任選由1-3個(gè)選自羥基或(C1-C6)烷氧基的取代基取代的芳基；R23選自 R24是(C1-C6)烷基或芳基(C1-C6)烷基；R25和R26一起表示1-4個(gè)獨(dú)立地選自如下的取代基R16、R27、(C1-C6)烷基、[(C1-C6)烷基]2、-CONH[(C1-C6)烷基]、-CON[(C1-C6)烷基]2、R30、 或 條件是至少一個(gè)取代基不是(C1-C6)烷基、-[(C1-C6)烷基]2、-CONH[低級(jí)烷基]或-CON[低級(jí)烷基]2；和進(jìn)一步條件是R25和R26可以結(jié)合在一起形成任選被一個(gè)或多個(gè)選自R16或R27的取代基取代的5或6元飽和環(huán)；R27和R28選自羥基(C1-C6)烷基、低級(jí)烷氧基(C1-C6)低級(jí)烷基、或(C1-C6)烷基OP，其中P是羥基保護(hù)基團(tuán)，該保護(hù)基團(tuán)定義為在合成程序期間提供對(duì)于不需要的反應(yīng)的臨時(shí)保護(hù)并可選擇性除去的基團(tuán)。通常的羥基保護(hù)基團(tuán)包括，但不限于，叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、乙酰基、三氟乙?；?、芐基、苯甲?；?、甲氧基甲基、甲硫基甲基和本領(lǐng)域已知的其它基團(tuán)(參見(jiàn)Greene等，有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)，第3版，John Wiley & Sons，紐約(1999))；R29表示1-4個(gè)獨(dú)立選自R16或R27的取代基；R30是 或 R31是氫或(C1-C6)烷基；R32選自(C1-C6)烷基、三氟低級(jí)烷基或任選被低級(jí)烷基取代的芳基；X和Y是CH或N；p是0-1的整數(shù)；q是2-4的整數(shù)；r是0-3的整數(shù)；s是0-2的整數(shù)；和t是1-2的整數(shù)；及其可藥用鹽，或其前藥形式。
本發(fā)明的優(yōu)選化合物包括1-[[[10-[5-氯-4-(1-環(huán)己-1-烯-1-基)-2-甲氧基苯甲?；鵠-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基]羰基]甲基氨基]-1-脫氧-D-葡糖醇；10-(5-氯-4-環(huán)己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲酰基)-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酸；10-(5-氯-4-環(huán)己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲?；?-N-甲基-N-[(2S，3R，4R，5R)-2，3，4，5，6-五甲氧基己基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酰胺；10-(5-氯-4-環(huán)己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲?；?-N-[((4S，5S)-5-{(R)-羥基[(4R)-2-氧代-1，3-二氧戊環(huán)-4-基]甲基}-2-氧代-1，3-二氧戊環(huán)-4-基)甲基]-N-甲基-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酰胺；10-(5-氯-4-環(huán)己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲?；?-N-(2，3-二羥基丙基)-N-甲基-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酰胺；10-[4-(環(huán)己-1-烯-1-基)-3-甲基-苯甲?；鵠-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基]羰基]甲基氨基]-1-脫氧-D-葡糖醇；2，2，2-三氯-1-[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基]-甲酮；10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酸；10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基苯甲?；?-N-((2S)-2-{(4R，5R)-5-[(1R)-1，2-二羥基乙基]-2-氧代-1，3-二氧戊環(huán)-4-基}-2-羥基乙基)-N-甲基-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酰胺；10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基苯甲?；?-N-[((4S，5S)-5-{(R)-羥基[(4R)-2-氧代-1，3-二氧戊環(huán)-4-基]甲基}-2-氧代-1，3-二氧戊環(huán)-4-基)甲基]-N-甲基-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酰胺；10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基苯甲?；?-N-甲基-N-[(2S，3R，4R，5R)-2，3，4，5，6-五甲氧基己基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酰胺；
(2S)-2-{[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羰基]-氨基}-3-(4-羥基-苯基)-丙酸乙酯；(2S)-2-{[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基)-3-甲基-苯甲?；鵠-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基}羰基}-氨基}-3-(4-羥基-苯基)-丙酸；(2S)-2-{[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羰基]-氨基}-3-羥基-丙酸甲酯；(2R)-2-{[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羰基]-氨基}-3-羥基-丙酸甲酯；(2S)-2-{[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羰基]-氨基}-3-羥基-丙酸；(2R)-2-{[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲酰基)-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羰基]-氨基}-3-羥基-丙酸；10-[4-(3，4-二氫-萘-1-基)-3-甲基-苯甲?；鵠-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基]羰基]甲基氨基]-1-脫氧-D-葡糖醇；10-[4-(3，4-二氫-萘-1-基)-3-甲基-苯甲?；鵠-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酸；{10-[4-(3，4-二氫-萘-1-基)-3-甲基-苯甲?；鵠-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基}-3-羧酸雙(2-羥基-乙基)-酰胺；和{10-[4-(1-環(huán)己烯-1-基)-3-甲基苯甲?；鵠-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基}[4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪基]甲酮；或其可藥用的鹽形式。
作為基團(tuán)或基團(tuán)，如烷氧基、芳基烷基或芳烷基的部分的烷基的例子是1-6個(gè)碳原子或1-4個(gè)碳原子的碳鏈，如甲基、乙基、丙基和丁基。
本文使用的與碳鏈，如烷氧基、烷基、鏈炔基、鏈烯基等相關(guān)的術(shù)語(yǔ)“低級(jí)”理解為表示含有至多6個(gè)碳原子，如1-6、2-6的那些基團(tuán)。鹵素是指氟、氯、溴或碘。環(huán)烷基，不管單獨(dú)使用或作為結(jié)合部分的一部分，表示3-8個(gè)碳原子，優(yōu)選3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基。
作為基團(tuán)或基團(tuán)(如芳基烷基、芳烷基、芳氧基)的部分的術(shù)語(yǔ)芳基包括6-10個(gè)碳原子的碳環(huán)芳族基團(tuán)，如苯基或萘基。術(shù)語(yǔ)?；?-7個(gè)碳原子的基團(tuán)，如(C1-C6烷基)羰基。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，根據(jù)R1，R2，R3，R4和R的定義，本發(fā)明的一些化合物可包含一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱中心，可因此產(chǎn)生對(duì)映體和非對(duì)映體。本發(fā)明包括所有的立體異構(gòu)體，包括單個(gè)的非對(duì)映體和拆分的，對(duì)映體純的R和S立體異構(gòu)體，以及外消旋物，和R和S立體異構(gòu)體的所有其它混合物，及其具有指示的活性的可藥用鹽。旋光異構(gòu)體可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員用已知的標(biāo)準(zhǔn)程序以純形式獲得。也應(yīng)理解本發(fā)明包括所有可能的區(qū)域異構(gòu)體、E-Z異構(gòu)體、內(nèi)型-外型異構(gòu)體及其具有指示的活性的混合物。這樣的異構(gòu)體可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員用已知的標(biāo)準(zhǔn)分離程序以純形式獲得。本領(lǐng)域技術(shù)人員也應(yīng)理解，根據(jù)R5，R6，R8，R9和R10的定義，由于位阻旋轉(zhuǎn)，本發(fā)明的一些化合物可以是手性的，并產(chǎn)生阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體，它們可由本領(lǐng)域技術(shù)人員用標(biāo)準(zhǔn)程序以純形式拆分和獲得。同樣包括在本發(fā)明中的是本發(fā)明化合物的所有多形體和水合物。
發(fā)明詳述本發(fā)明包括上述化合物以及包括與一種或多種藥用載體或賦形劑結(jié)合或聯(lián)合的一種或多種本發(fā)明化合物的藥物組合物。特別地，本發(fā)明提供藥物組合物，其包括在藥用載體或賦形劑中的治療有效量的一種或多種本發(fā)明化合物。
本發(fā)明也包括治療哺乳動(dòng)物，優(yōu)選人的癥狀的方法，該癥狀是由催產(chǎn)素拮抗劑活性治療或減輕的，包括但不限于，治療或預(yù)防早產(chǎn)、痛經(jīng)，在哺乳動(dòng)物中，優(yōu)選在人中抑制所需的剖腹產(chǎn)分娩之前的分娩。方法包括向需要其的哺乳動(dòng)物給用治療有效且非毒性量的一種或多種本發(fā)明化合物。
本發(fā)明也包括本發(fā)明化合物與一種或多種用于治療疾病，例如早產(chǎn)、痛經(jīng)和在剖腹產(chǎn)之前停止分娩的藥劑的結(jié)合物。更具體地說(shuō)，本發(fā)明的化合物可以與有效量的用于治療或預(yù)防早產(chǎn)、痛經(jīng)或抑制在剖腹產(chǎn)分娩之前的分娩的其它保胎藥劑，包括β-腎上腺素能激動(dòng)劑、鈣通道阻斷劑、前列腺素合成抑制劑、其它催產(chǎn)素拮抗劑(如阿托西班)、硫酸鎂、乙醇、和用于治療該疾病的其它藥劑結(jié)合有效地給藥。本發(fā)明被理解為包括本發(fā)明的化合物與其它保胎藥劑與在哺乳動(dòng)物中用于早產(chǎn)，痛經(jīng)治療，和抑制剖腹產(chǎn)分娩之前分娩的任何藥物組合物的任何結(jié)合物的所有同時(shí)或交互治療。
組合物優(yōu)選適于靜脈內(nèi)(丸劑和輸液兩者)和口服給藥。然而，它們可適于其它給藥方法，該方法包括向需要保胎藥劑的人或農(nóng)畜的皮下、腹膜內(nèi)或肌內(nèi)給藥。
本發(fā)明的化合物可以衍生自非毒性可藥用酸或堿的鹽的形式使用。這些鹽包括但不限于如下物質(zhì)與無(wú)機(jī)酸，如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸和，如視情況而定，有機(jī)酸如乙酸、草酸、檸檬酸、酒石酸、琥珀酸、馬來(lái)酸、苯甲酸、苯磺酸、富馬酸、蘋(píng)果酸、甲磺酸、雙羥萘酸和對(duì)甲苯磺酸的鹽。其它鹽包括與堿金屬或堿土金屬，如鈉、鉀、鈣或鎂，或與有機(jī)堿的鹽，包括季銨鹽。化合物也可以酯、氨基甲酸酯和其它常規(guī)前藥形式使用，前藥一般是本發(fā)明化合物的功能衍生物，它們?nèi)菀自隗w內(nèi)轉(zhuǎn)化成活性部分。這意味著包括采用本發(fā)明化合物或采用沒(méi)有具體公開(kāi)，但在給藥后在體內(nèi)轉(zhuǎn)化成本發(fā)明化合物的化合物治療上述各種癥狀。同樣包括的是本發(fā)明化合物的代謝產(chǎn)物，其定義為在將這些化合物引入生物系統(tǒng)時(shí)產(chǎn)生的活性種。
當(dāng)本發(fā)明的化合物用于以上用途時(shí)，它們可以與一種或多種可藥用賦形劑或載體，例如溶劑，稀釋劑等結(jié)合，并可以采用如片劑、膠囊(包括定時(shí)釋放和持久釋放的制劑)、丸劑、可分散性粉劑、粒劑，或包含例如，0.05-5％懸浮劑的懸浮液、包含例如約10-50％糖的糖漿劑、和酏劑等形式口服給藥，或采用無(wú)菌注射液、在等滲介質(zhì)中包含約0.05-5％懸浮劑的懸浮液或乳液形式胃腸外給藥。這樣的藥物制劑可包含，例如約25-約90wt％與載體結(jié)合的活性成分，更通常地約5wt％-60wt％。
采用的活性成分的有效劑量可根據(jù)使用的特定化合物或鹽，給藥方式，患者的年齡，重量，性別和醫(yī)療狀況，所治療病態(tài)的嚴(yán)重性而變化。普通熟練的醫(yī)師，獸醫(yī)或臨床醫(yī)師可容易地確定和指定防止，對(duì)抗或阻止癥狀進(jìn)展的藥劑的有效量。然而，一般情況下，當(dāng)以約0.5-約500mg/Kg哺乳動(dòng)物體重的日劑量下給藥本發(fā)明的化合物，優(yōu)選以一天兩到四次的分劑量給藥，或以持續(xù)釋放形式給藥時(shí)，獲得令人滿意的結(jié)果。對(duì)于大多數(shù)的哺乳動(dòng)物，總的日劑量為約0.5-100mg，優(yōu)選0.5-80mg/Kg。適于內(nèi)用的劑型在含有固體或液體藥用載體的充分混合物中包括約0.05-500mg活性化合物?？梢哉{(diào)節(jié)此劑量制度以提供最佳的治療應(yīng)答。例如，可以每天給藥幾個(gè)分劑量或如由治療狀況的緊急所示可以按比例地減少劑量。
這些活性化合物可以口服以及由靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下途徑給藥。固體載體包括淀粉、乳糖、磷酸二鈣、微晶纖維素、蔗糖和高嶺土，而如對(duì)于活性成分的本質(zhì)和所需的特定給藥形式是適當(dāng)?shù)哪菢?，液體載體包括無(wú)菌水、聚乙二醇、甘油、非離子型表面活性劑和食用油，如玉米油、花生油和芝麻油?？梢杂欣匕ㄍǔＳ糜谒幬锝M合物制備的助劑，如增香劑、著色劑、防腐劑和抗氧劑，例如維生素E、抗壞血酸、BHT和BHA。
也可以胃腸外或腹膜內(nèi)給藥這些活性化合物?？梢栽诤线m地與表面活性劑如羥丙基纖維素混合的水中，作為游離堿或可藥用鹽制備這些活性化合物的溶液或懸浮液。也可以在甘油、液體聚乙二醇及其在油中的混合物中制備分散體。在普通的貯存和使用狀況下，這些制劑包含防腐劑以防止微生物的生長(zhǎng)。
適于注射用途的藥物形式包括無(wú)菌水溶液或分散體和用于無(wú)菌的注射液或分散體臨時(shí)制備的無(wú)菌粉末。在任何場(chǎng)合，劑型必須是無(wú)菌的和必須是流體以達(dá)到容易注射能力的程度。它必須在制造和貯存條件下是穩(wěn)定的和必須對(duì)抗微生物，如細(xì)菌和真菌的污染作用而保藏。載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，包含，例如水、乙醇(如甘油、丙二醇、和液體聚乙二醇)、其合適的混合物和植物油。
此外，可以使用適于鼻內(nèi)輸送的載體鼻內(nèi)給藥，或使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的經(jīng)皮皮膚貼劑經(jīng)皮給藥本發(fā)明的活性化合物。當(dāng)使用經(jīng)皮輸送系統(tǒng)時(shí)，劑量給藥是連續(xù)的而不是以單一或分開(kāi)日劑量。也可以采用脂質(zhì)體輸送系統(tǒng)的形式給藥本發(fā)明的化合物，其中從各種磷脂形成脂質(zhì)體脂雙分子層。
本發(fā)明的化合物也可以通過(guò)使用載體提供，如結(jié)合了活性化合物的單克隆抗體。本發(fā)明的化合物也可以結(jié)合到作為藥物載體的可溶性聚合物上或結(jié)合到用于達(dá)到活性藥劑受控釋放的可生物降解聚合物上。
同樣根據(jù)本發(fā)明，提供本發(fā)明化合物的生產(chǎn)方法。
本發(fā)明的方法根據(jù)以下列出的通用方法的一種制備本發(fā)明的化合物。
如方案I所示可以方便地制備通式(I)的化合物，其中 R、R3和R4由上述所定義。
方案I 根據(jù)以上優(yōu)選的方法，將其中 R3和R4如上所定義的通式(1)的三環(huán)二氮雜，在有機(jī)堿，如N，N-二異丙基乙胺(Hunig堿)存在下，在非質(zhì)子有機(jī)溶劑，如二氯甲烷中，在從-10℃到室溫的溫度下與全鹵代烷酰鹵，優(yōu)選三氯乙酰氯反應(yīng)，以得到通式(2)的所需三氯乙酰基中間體。隨后在有機(jī)溶劑，如四氫呋喃或丙酮中，在從-10℃到室溫的溫度下，采用含水堿，如氫氧化鈉水解(2)得到通式(3)的中間體酸。為隨后與通式(5)的伯或仲胺、羥胺或肼的偶合，可以采用幾種方式完成羧酸(3)的所需活化。因此，(3)可以通過(guò)如下方式轉(zhuǎn)化成通式(4，J＝COCl或COBr)的酰鹵，優(yōu)選氯化物或溴化物以純物質(zhì)或在無(wú)機(jī)堿，如碳酸鉀存在下，或在有機(jī)堿，如吡啶、4-(二甲基氨基)吡啶或叔胺，如三乙胺存在下，在非質(zhì)子溶劑，如二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺或四氫呋喃中，在從-5℃到50℃的溫度下，與亞硫酰氯(亞硫酰溴)或草酰氯(草酰溴)或本領(lǐng)域已知的相似試劑反應(yīng)，以得到中間體?；苌?4)。隨后在化學(xué)計(jì)量的Hunig堿存在下，在非質(zhì)子溶劑，如二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺或四氫呋喃中，在從室溫到溶劑回流溫度的溫度下，酰氯(酰溴)(4，J＝COCl或COBr)與通式(5)適當(dāng)取代的伯或仲胺偶合得到通式(I)的所需化合物，其中 R，R3和R4如上所定義。
或者，?；镔|(zhì)可以是相應(yīng)羧酸的混合酸酐，如根據(jù)Inanaga等，Chem.Soc.Jpn.52，1989(1979)的方法，在非質(zhì)子有機(jī)溶劑，如二氯甲烷中用2，4，6-三氯苯甲酰氯處理通式(3)的所述酸而制備。在非質(zhì)子溶劑，如二氯甲烷中，在從室溫到溶劑回流溫度的溫度下，用通式(5)適的當(dāng)取代的伯或仲胺處理通式(4)的該混合酐得到通式(I)的所需化合物，其中 R，R3和R4如上所定義。
或者，可以通過(guò)如下方式有效地進(jìn)行通式(3)羧酸的酰胺化在非質(zhì)子溶劑，如二氯甲烷中用三光氣處理所述酸，隨后在有機(jī)堿，如Hunig堿存在下，在-10℃-室溫的溫度下，活化中間體與通式(5)的適當(dāng)取代的伯或仲胺反應(yīng)。
其中 R，R3和R4如上所定義的通式(I)的本發(fā)明化合物的另一種優(yōu)選制備方法由如下操作組成在1-羥基苯并三唑存在下，用活化試劑，如N，N-二環(huán)己基碳二亞胺或1-乙基-3-(3-二甲基氨基-丙基)碳二亞胺鹽酸鹽處理通式(3)的酸，隨后優(yōu)選在有機(jī)堿，如Hunig堿和催化數(shù)量4-(二甲基氨基)吡啶存在下，在非質(zhì)子溶劑，如二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺或四氫呋喃中，在-10℃-室溫的溫度下，活化中間體與通式(5)的適當(dāng)取代的伯或仲胺反應(yīng)。
在另一種優(yōu)選的方法中，可以在非質(zhì)子溶劑，如二氯甲烷或四氫呋喃中，在-10℃-溶劑回流溫度的溫度下，通過(guò)用其它活化劑，如N，N’-羰基二咪唑的處理，活化所述酸(3)。隨后中間體活化的咪唑化物與通式(5)的適當(dāng)取代的伯或仲胺反應(yīng)得到通式(I)的所需化合物，其中 R，R3和R4如上所定義。
或者，可以在有機(jī)堿，如Hunig堿存在下，在溶劑，如N，N-二甲基甲酰胺中，在-10℃-室溫的溫度下，通過(guò)使用羥基苯并三唑四甲基脲鎓六氟磷酸鹽作為偶合劑，有效地進(jìn)行通式(5)的適當(dāng)取代伯或仲胺與通式(3)的所述酸偶合，以良好的分離收率和純度得到通式(I)的所需化合物，其中 R，R3和R4如上所定義。
相關(guān)的偶合劑，如二苯基磷酰基疊氮化物、氰基膦酸二乙酯、苯并三唑-1-基-氧基-三-(二甲基氨基)鏻六氟磷酸鹽和文獻(xiàn)中已知已經(jīng)用于肽合成中形成酰胺鍵的所有其它試劑，也可用于通式(I)化合物的制備，其中 R，R3和R4如上所定義。
作為替代方案，通式(2)的中間體3-三鹵代甲基酮直接與通式(5)的適當(dāng)取代伯或仲胺反應(yīng)也得到通式(I)的所需化合物，其中 R，R3和R4如上所定義。
根據(jù)與R，R3和R4基團(tuán)的相容性，和與通式(1)的三環(huán)二氮雜的反應(yīng)性，最終選擇從中間體羧酸(3)選擇制備通式(I)化合物的方法。
方案I的(I)的另一種優(yōu)選制備方法顯示于方案II。在非質(zhì)子溶劑，如二氯甲烷中，優(yōu)選在有機(jī)堿如三乙胺存在下，通式(1)的三環(huán)二氮雜與雙光氣反應(yīng)，隨后由獲得的?；虚g體與通式(5)適當(dāng)取代的伯或仲胺反應(yīng)以得到通式(I)的所需化合物，其中 R，R3和R4如上所定義。
方案II 其中R4是如上定義的方案(I)的通式(1)三環(huán)二氮雜可以如方案III所示方便地制備。
方案III 因此，在無(wú)機(jī)堿，如碳酸鉀存在下，或在有機(jī)堿，如吡啶、4-(二甲基氨基)吡啶或叔胺，例如三乙胺或N，N-二異丙基乙，在非質(zhì)子溶劑，如二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺或四氫呋喃存在下，在-5℃-50℃的溫度下，采用適當(dāng)取代的?；瘎绶减｛u，優(yōu)選通式(7，J＝COCl或COBr)的適當(dāng)取代的酰氯(或酰溴)，其中R4根據(jù)與本反應(yīng)方案的相容性而最終選擇，處理通式(6)的三環(huán)二氮雜，得到通式(1)的中間體，其中R4如上所定義。
或者，通式(7)的?；镔|(zhì)可以是相應(yīng)羧酸的混合酸酐，例如根據(jù)Inanaga等，Bull.Chem.Soc.Jpn.，52，1989(1979)的方法，在非質(zhì)子的有機(jī)溶劑，如二氯甲烷中，用2，4，6-三氯苯甲酰氯處理該酸制備。在溶劑，如二氯甲烷中和在有機(jī)堿，如4-(二甲基氨基)吡啶存在下，在0℃-溶劑回流溫度的溫度下，用通式(6)三環(huán)二氮雜處理通式(7)的所述混合酸酐得到方案III的中間體?；苌?1)。
最終根據(jù)與R4基團(tuán)的相容性和與通式(6)三環(huán)二氮雜的反應(yīng)性選擇通式(7)的?；虚g體。
其中R4由部分B-C組成，其中B是(a)和C是(c)的方案III的通式(7)的所需中間體可以方便地由方案IV中所示的方法制備。因此，在Pd(0)催化劑存在下，在無(wú)機(jī)鹽(如LiCl)存在或不存在下，其中P是羧酸保護(hù)基團(tuán)，優(yōu)選P＝烷基或芐基，M＝I、A，R5，R6和R7如上所定義的通式(8)的適當(dāng)取代的芳基(雜芳基)碘化物(溴化物)與通式(9，W＝Sn(三烷基)3，優(yōu)選Sn(n-Bu)3)的芳基(雜芳基)三(烷基)錫(IV)衍生物反應(yīng)，其中R8，R9根據(jù)其與現(xiàn)有反應(yīng)方案的相容性最終選擇，以得到中間體酯(10)。隨后用水解、氫解或本領(lǐng)域已知的相似方法使羧酸解掩蔽，隨后進(jìn)行中間體酸(11)的活化得到適于與通式(6)三環(huán)二氮雜偶合的通式(19)的所需中間體，其中A，R5，R6，R7，R8，R9和R10如上所定義。
方案IV 可以由類似于方案IV中例示的方法，通過(guò)采用適當(dāng)取代的萘基、二氫萘基或二氫喹啉基中間體替換通式(8和9)的中間體，制備方案III的通式(7)所需中間體，其中R4由部分B-C組成，其中B是(a)和C是(d)或B是(b)和C是(c)或(d)。
或者，可以在鈀催化劑，如乙酸鈀(II)或四(三苯基膦)鈀(0)和有機(jī)堿，如三乙胺或無(wú)機(jī)堿，如碳酸鈉(鉀或銫)存在下，加入或者沒(méi)有加入四丁基溴化(碘化)銨，在溶劑混合物，如甲苯-乙醇-水、丙酮-水、水或水-乙腈中，在室溫-溶劑回流溫度的溫度下，通過(guò)碘化物(溴化物、氯化物、三氟甲磺酸鹽)(8，M＝I、Br、Cl或OTf)與通式(9，優(yōu)選W＝B(OH)2)適當(dāng)取代的硼衍生物的Suzuki偶合，制備方案IV的通式(10)的所需中間體，其中R4由部分B-C組成，其中B是(a)和C是(c)(Suzuki，Pure &Appl Chem.66，213-222(1994)，Badone等，J.Org.Chem.62，7170-7173(1997))。根據(jù)反應(yīng)物和取代基的本質(zhì)，選擇用于鹵化物和硼酸中間體的Suzuki偶合的準(zhǔn)確條件。類似地可以在溶劑，如二噁烷，N，N-二甲基甲酰胺或二甲基亞砜中，在磷酸鉀和Pd(0)催化劑存在下，從溴化物(8，M＝Br)和硼酸(9)制備方案IV的通式(10)的所需中間體。
或者，通式(9，W＝Br、I、OTf)的碘化物(溴化物或三氟甲磺酸酯)與通式(8，M＝ B(OH)2、或SnBu3)雙(頻那酮合)二硼[硼酸或三烷基錫(IV)]衍生物的交叉偶合反應(yīng)得到通式(10)的所需中間體，以方案IV的方式將該中間體轉(zhuǎn)化成(I)。
可以采用類似的方式，通過(guò)采用適當(dāng)取代的萘基、二氫萘基或二氫喹啉基中間體替換通式(8和9)的中間體制備方案IV的通式(10)所需中間體，其中R4由部分B-C組成，其中B是(a)和C是(d)，或B是(b)和C是(c)或(d)。
方案IV的通式(8，M＝Br或I)的所需適當(dāng)取代的芳基(雜芳基)鹵化物是市售的或是本領(lǐng)域中已知的或可以容易地以定量的收率和高純度通過(guò)如下方式得到相應(yīng)取代的苯胺(8，P＝H、烷基或芐基，M＝NH2)的重氮化作用，隨后基本上根據(jù)Street等，J.Med.Chem.36，1529(1993)，和Coffen等，J.Org.Chem.49，296(1984)的方法，使中間體重氮鹽在含水酸性介質(zhì)中分別與碘和碘化鉀或溴化銅(I)的反應(yīng)(March，AdvancedOrganic Chemistry，第3版，第647-648頁(yè)，John Wiley & Sons，New York(1985))。
或者，可以方便地如方案V所示，根據(jù)Ishiyama等，Tetr.Lett.38，3447-3450(1997)和Giroux等，Tetr.Lett.38，3841-3844(1997)的一般方法，通過(guò)使通式(13，A＝CH)的適當(dāng)取代的頻那酮合硼烷，其中R9和R10最終根據(jù)其與本反應(yīng)方案的相容性選擇，與通式(14，Y＝OTf)的芳基三氟甲磺酸酯或芳基鹵化物(14，Y＝Br、I)的交叉偶合反應(yīng)，其中R5，R6和R7如上所定義，隨后進(jìn)行通式(15)中間體腈的堿性或酸性水解(參見(jiàn)March，Advanced Organic Chemistry，第3版，John Wiley & Sons，NewYork，第788頁(yè)(1985))，制備方案IV的通式(11，A＝CH)的所需中間體，其中R4由部分B-C組成，其中B是(a，A＝CH)和C是(c，A＝CH)。
方案V 或者，通式(12，W＝Br、I或OTf)的碘化物(溴化物或三氟甲磺酸酯)與通式(14， B(OH)2或SnBu3)雙(頻那酮合)二硼[硼酸或三烷基錫(IV)]衍生物反應(yīng)得到通式(15)的所需中間體，以方案V的方式將該中間體轉(zhuǎn)化成(6)。
可以采用類似的方式，通過(guò)用適當(dāng)取代的萘基或二氫萘基中間體替換通式(13和14)的中間體，制備方案IV的通式(11)的所需中間體，其中R4由部分B-C組成，其中B是(a，A＝CH)和C是(d)，或B是(b)和C是(c)或(d，A＝CH)。
根據(jù)Ishiyama等，J.Org.Chem.60，7508-7510(1995)和Giroux等，Tetr.Lett.38，3841-3844(1997)的所述方法，方便地由二硼酸(16)的頻那醇酯與適當(dāng)取代的鏈烯基鹵化物，優(yōu)選溴化物或碘化物(12，X＝Br、I)或鏈烯基三氟甲磺酸酯(12，X＝OTf)的鈀催化交叉偶合反應(yīng)制備方案V通式(13)的所需硼酸酯。
或者可以由方案VI中所示的方法制備方案IV通式(1)的所需化合物，其中R4由部分B-C組成，其中B是(a)和C是(c)。
方案VI 因此，使用任何上述方法，用適當(dāng)取代的?；瘎?，如鹵代芳酰(雜芳酰)鹵，優(yōu)選通式(17，J＝COCl或COBr，X＝I)的碘(溴)芳酰(雜芳酰)氯(溴)，其中R5，R6和R7如上所定義，處理通式(6)的三環(huán)二氮雜以制備方案VI的通式(18)的?；虚g體。
或者，通式(17)的酰化物質(zhì)可以是相應(yīng)羧酸的混合酸酐。根據(jù)上述方法，用通式(6)的三環(huán)二氮雜處理通式(17)的所述混合酸酐得到中間體酰化衍生物(18)。
最終根據(jù)與A和R5，R6和R7基團(tuán)的相容性和它與通式(6)三環(huán)二氮雜的反應(yīng)性選擇通式(17)的酰化中間體。
在催化劑，如四(三苯基膦)鈀(0)存在下，在非質(zhì)子有機(jī)溶劑，如甲苯或N，N-二甲基甲酰胺中，在室溫-150℃的溫度下，(18，X＝I)與適當(dāng)取代的有機(jī)錫試劑，如三烷基錫(IV)衍生物，優(yōu)選通式(9，W＝SnBu3)的三正丁基錫(IV)衍生物，其中R9和R10根據(jù)它們與本反應(yīng)方案的相容性選擇，進(jìn)行Stille偶合反應(yīng)(參見(jiàn)Farina等，J.Org.Chem，59，5905(1994)和引用的參考文獻(xiàn))得到通式(1)的所需化合物，其中 A，R3，R5，R6，R7，R7，R9和R10如上所定義。
或者，在溶劑混合物，如甲苯-乙醇-水中，和在Pd(0)催化劑和堿如，碳酸鈉存在下，在室溫-溶劑回流溫度的溫度下，通式(18，X＝Cl，Br或I)的化合物與通式(9，W＝B(OH)2)的適當(dāng)取代的硼酸反應(yīng)，其中R9和R10根據(jù)它們與本反應(yīng)方案的相容性選擇，得到通式(1)的所需化合物，其中 A，R3，R5，R6，R7，R8，R9和R10如上所定義。
或者通式(18，X＝Br或I)的化合物與式(16)的雙(頻那酮合)乙硼烷在催化劑，例如二氯-[1，1’-二(二苯基膦?；?二茂鐵]鈀(II)二氯甲烷加合物和乙酸鉀存在下，在非質(zhì)子溶劑，如二甲基亞砜中，在室溫-100℃的溫度下進(jìn)行交叉偶合反應(yīng)得到式(18， )的中間體。隨后在堿，例如含水碳酸鈉存在下，在非質(zhì)子溶劑，如N，N-二甲基甲酰胺中，在室溫-溶劑的回流溫度的溫度下，(18)與式(9，W＝OTf)的合適取代的三氟甲烷磺酸酯反應(yīng)得到式(1)的所需化合物，其中 A，R3，R5，R6，R7，R8，R9和R10如上所定義。
方案VI(X＝I，Br；J＝COCl或COBr)的通式(17)的優(yōu)選取代的芳酰(雜芳酰)氯(溴)，其中A，R5，R6和R7如上所定義，是市售的，或是本領(lǐng)域已知的，或可以容易地由類似于已知化合物文獻(xiàn)中那些方法制備。
方案VI的通式(9，W＝Sn(烷基)3，烷基＝正丁基)的中間體是市售的，或可以如方案VII所示，用通式(20)的相應(yīng)溴代原料，其中R9和R10基于它們?cè)诜磻?yīng)方案中的相容性選擇，通過(guò)首先將它們與正丁基鋰反應(yīng)，隨后通過(guò)中間體鋰化的物質(zhì)與氯化三烷基(優(yōu)選三甲基或三正丁基)錫(IV)反應(yīng)而方便地制備。
方案VII 通式(9，W＝B(OH)2)的優(yōu)選取代的硼酸是市售的，或是本領(lǐng)域已知的，或可以容易地由類似于已知化合物文獻(xiàn)中的方法制備。
可以用類似的方式，通過(guò)用適當(dāng)取代的萘基、二氫萘基或二氫喹啉基中間體替換通式(17和9)的中間體，制備方案VI的通式(1)所需化合物，其中R4由部分B-C組成，其中B是(a)和C是(d)，或B是(b)和C是(c)或(d)。
或者如方案VIII所示，適當(dāng)取代的芳酰(雜芳酰)鹵，優(yōu)選通式(21，J＝COCl)的芳酰(雜芳酰)氯，其中A，R5，R6和R7如上所定義，與通式(6)的三環(huán)二氮雜反應(yīng)以得到通式(22)的中間體溴化物。隨后在Pd(0)催化劑，如四(三苯基膦)鈀(0)和氯化鋰存在下，(22)與雙烷基錫試劑(優(yōu)選雙-(三正丁基)錫(IV))反應(yīng)，得到通式(23)的氫化錫中間體。在Pd(0)催化劑，如四(三苯基膦)鈀(0)和氯化鋰存在下，三正丁基錫(IV)衍生和(23)與通式(24，M＝溴或碘)適當(dāng)取代的鏈烯基鹵化物的進(jìn)一步反應(yīng)，其中R9，和R10基于它們與本反應(yīng)方案的相容性最終選擇，得到通式(1)的所需化合物，其中R4由部分B-C組成，其中B是(a)和C是(c)，和 A，R5，R6，R7，R9和R10如上所定義。
方案VIII 可以用類似的方式，通過(guò)用適當(dāng)取代的萘基、二氫萘基或二氫喹啉基中間體替換通式(21和24)的中間體，制備方案VIII的通式(1)所需化合物，其中R4由部分B-C組成，其中B是(a)和C是(d)，和B是(b)和C是(c)或(d)。
制備其中 R3，R5，R6和R7如上所定義，R4由部分B-C組成，其中B是(a，A＝CH)和C是(c)，和R10是羥基、烷氧基、OP’、疊氮基、苯二甲酰亞氨基、氰基、苯氧基、硫代苯氧苯和相關(guān)的親核基團(tuán)的方案I的化合物的優(yōu)選方法示于方案IX中。
根據(jù)優(yōu)選方法，式(25)的合適取代的二氮雜環(huán)己烯酮通過(guò)在氯化鈰(III)存在下，在羥基溶劑，例如甲醇中，在-78℃-室溫的溫度下，用金屬氫化物，優(yōu)選硼氫化鈉還原轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的環(huán)己烯醇(26)。(26)的羥基官能團(tuán)隨后通過(guò)轉(zhuǎn)化為離去基團(tuán)(28，L＝離去基團(tuán))，優(yōu)選對(duì)甲苯磺酸酯、甲磺酸酯、三氟甲磺酸酯、磷酸酯等活化。離去基團(tuán)用親核試劑，例如疊氮化物、鄰苯二甲酰基亞胺、氰化物、鹵化物、苯酚、碳或硫親核試劑等SN2置換，得到所需的化合物(1)，其中 R3是如上定義的，R4由部分B-C組成，其中B是(a，A＝CH)和C是(c)，R5，R6，R7，R9和R10如上所定義。
或者，根據(jù)方案X，式(26)的手性環(huán)己烯醇通過(guò)手性HPLC分離成式(28)和(29)的各自旋光對(duì)映體，每個(gè)旋光對(duì)映體可單獨(dú)活化，用以方案IX的方法進(jìn)行親核試劑的SN2置換。

或者，式(28)和(29)的手性環(huán)己烯醇通過(guò)在非質(zhì)子溶劑，如四氫呋喃中，分別在手性助劑，如(S)-四氫-1-甲基-3，3-二苯基-1H，3H-吡咯并[1，2-c][1，3，2]oxazaborole(硼雜噁唑)或(R)-四氫-1-甲基-3，3-二苯基-1H，3H-吡咯并[1，2-c][1，3，2]oxazaborole存在下，在室溫用硼烷-四氫呋喃絡(luò)合物不對(duì)稱還原式(25)的環(huán)己烯酮得到。
其中R4由部分B-C組成，其中B是(a)和C是(d)或B是(b)或(c)， A，R，R3，R5，R6和R7如上所定義，和其中R9和R10基于它們與本反應(yīng)方案的相容性最終選擇的方案I的式(1)化合物的優(yōu)選制備方法還如方案XI所示，使用方案VI的式(17)?；瘎┻M(jìn)行酰胺中間體(31)的?；?br> 方案XI
或者，其中R4由部分B-C組成，其中B是(a)和C是(c)， A，R，R3，R5，R6和R7如上所定義，和其中R9和R10基于它們與本反應(yīng)方案的相容性最終選擇的方案I的式(1)的優(yōu)選化合物還以方案VIII的方式，通過(guò)如方案XII所示，使用式(21)?；瘎┻M(jìn)行方案XI的酰胺中間體(31)的酰化制備。
方案XII 根據(jù)如下方法測(cè)試本發(fā)明的主題化合物的生物活性。
在表達(dá)人加壓素V1a亞類受體的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞膜中加壓素的結(jié)合受體源由人加壓素V1a亞類受體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO細(xì)胞)從BioSignal Inc.，1744 rue Williams，蒙特利爾，魁北克，加拿大獲得或從M.Thibonnier，Case Western Reserve University School ofMedicine，Cleveland，OH獲得。
A.細(xì)胞的傳代和擴(kuò)增在T-150燒瓶中在無(wú)菌條件下，在F-12營(yíng)養(yǎng)素混合物(HAM)與L-谷氨酰胺(Gibco Cat.#11765-054)的細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)中，該介質(zhì)包含15mMHEPES(Gibco Cat.#15630-080)、1％抗生素/抗霉菌素(每500mLF-12加入5mL 100×，Gibco Cat.#15240-062)、250μg/mL Zeocin(每500mLF-12加入1.25mL的100mg/mL Invitrogen R-250-01)和10％胎兒牛血清(合格的，熱失活的，Gibco Cat.#16140-063)，使從M.Thibonnier獲得的由人加壓素V1a亞類受體轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞(pZeoSV載體)生長(zhǎng)到融合(大約＞90％)。由吸出而除去介質(zhì)和將細(xì)胞用10mLHank平衡鹽液(GibcoCat.#14175-095)洗滌。將所述鹽溶液吸出而除去和將細(xì)胞用5mL胰蛋白酶-EDTA(0.05％胰蛋白酶，0.53mM EDTA-4Na，Gibco Cat.#25300-070)消化1分鐘。將胰蛋白酶吸出而除去和將細(xì)胞由放液而取出。將細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)(如對(duì)于1∶30分裂的加30mL)立即加入和充分混合以使胰蛋白酶失活。將1mL分離的細(xì)胞加入到包含新鮮細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)的新培養(yǎng)瓶中(如每個(gè)T-150燒瓶加入25ml)，并溫和地混合。將細(xì)胞在37℃下在5％CO2中培育。以3-4天間隔(或適當(dāng)?shù)?改變介質(zhì)。細(xì)胞在7-8天內(nèi)生長(zhǎng)到融合(大約＞75％-95％)。所有步驟在無(wú)菌條件下進(jìn)行。
B.膜制備將該細(xì)胞用Hank平衡鹽液溫和地洗滌兩次(如每個(gè)T-150燒瓶使用10mL)。將過(guò)量溶液除去和將細(xì)胞在無(wú)酶細(xì)胞解離緩沖劑(如每個(gè)T-150燒瓶使用8mLHank基，Gibco Cat.#13150-016)洗滌15-30分鐘，直到細(xì)胞松散。將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到保持在冰浴中的離心管(50mL)中。所有隨后的步驟在4℃下進(jìn)行。將離心管在300×g下離心15min(在SORVAL，型號(hào)RT 6000 D，1380rpm，使用50ml離心管的轉(zhuǎn)子)。將上清液拋棄和在均化緩沖劑(包含0.25M蔗糖和1mM EDTA的10mHTris-HCl，pH7.4)中懸浮細(xì)胞，保證緩沖劑的體積為細(xì)胞小球體積的約十倍。將該細(xì)胞傾入離心管(50mL)和用Polytron在第6檔均化10秒。將勻漿轉(zhuǎn)移至Potter-Elvjehm均化器和用3沖程均化。將勻漿在1500×g下在4℃離心10min(使用SORVAL，型號(hào)RT 6000 D，3100rpm，使用50mL離心管的轉(zhuǎn)子)。拋棄小球。將上清液在100,000×g下在4℃離心60min(Beckman L 8-80M超速離心機(jī)；對(duì)于50mL離心管使用70Ti型轉(zhuǎn)子，以37,500rpm旋轉(zhuǎn)；對(duì)于15mL離心管使用80Ti型轉(zhuǎn)子，38,000rpm，或用45Ti型轉(zhuǎn)子，35,800rpm)。將上清液拋棄和將小球在3-4mL三羥甲基氨基甲烷(Tris)緩沖液(50mM TRIS-HCl，pH7.4)中懸浮。由Bradford或Lowry方法測(cè)定蛋白質(zhì)含量。將膜懸浮液的體積用膜緩沖劑(包含0.1％BSA和0.1mM PMSF的50mM Tris-HCl)調(diào)節(jié)，以得到3.0mg/mL(或適當(dāng)?shù)?蛋白質(zhì)。將該膜在-70℃下等分和貯存。
C.放射性配體結(jié)合試驗(yàn)在96孔格式的微量滴定板的孔中，加入90、110或130μL(以組成200μL的最終體積)測(cè)定緩沖劑，該緩沖劑包含50mM的Tris-HCl(pH7.4)、BSA(熱失活的，無(wú)蛋白酶)、0.1％的5mM MgCl2、1mg％抑肽酶、1mg％亮肽素、2mg％1，10-菲咯啉、10mg％胰蛋白酶抑制劑和0.1mM PMSF。在實(shí)驗(yàn)日加入抑制劑。將各組分在室溫下混合，然后保持在冰浴中，隨后調(diào)節(jié)pH到7.4。
向每個(gè)孔中加入20μL未標(biāo)記的Manning配體(以得到用于標(biāo)準(zhǔn)曲線的0.1-10nM和用于非特異性結(jié)合的1000nM的最終濃度)或在50％DMSO中的試驗(yàn)化合物(如0.1-1000nM的最終濃度或適當(dāng)?shù)?或作為載體對(duì)照物的50％DMSO。加入20μL的50％DMSO用于Manning和其它肽配體和因此調(diào)節(jié)測(cè)試緩沖液的體積。
向每個(gè)孔中加入50μL冷凍的膜懸浮液，該懸浮液應(yīng)在使用之前即刻解凍和在測(cè)定緩沖液中稀釋到要求的濃度(如需要相當(dāng)于25-50μg蛋白質(zhì)/孔)。將在測(cè)定緩沖液中的20μL 8nM[3H]Manning配體加入，該配體在使用之前制備，和在室溫下培育60min，在機(jī)械振動(dòng)機(jī)上先搖動(dòng)該板15min。通過(guò)板內(nèi)容物的快速過(guò)濾使孵化停止，隨后使用細(xì)胞收集器(Tomtek and Printed濾墊-B濾紙)，用冰冷緩沖劑(50mMTris-HCl，pH7.4)洗滌。將濾紙徹底地干燥(7-12min，在微波爐中)和用MeltiLexB/H熔融閃爍蠟板浸漬，和在β-板閃爍計(jì)數(shù)器中對(duì)放射性計(jì)數(shù)。
在表達(dá)人加壓素V2亞類受體的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞膜中加壓素的結(jié)合受體源由人加壓素V2亞類受體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO細(xì)胞)從M.Thibonnier，Case Western Reserve University School ofMedicine，Cleveland，OH獲得。
A.細(xì)胞的傳代和擴(kuò)增在T-150燒瓶中在無(wú)菌條件下，在F-12營(yíng)養(yǎng)素混合物(HAM)與L-谷氨酰胺(Gibco Cat.#11765-054)的細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)中，該介質(zhì)包含15mMHEPES(Gibco Cat.#15630-080)、1％抗生素/抗霉菌素(每500mLF-12加入5mL 100×，Gibco Cat.#15240-062)、250μg/mL Zeocin(每500mLF-12加入1.25mL的100mg/mL Invitrogen R-250-01)和10％胎兒牛血清(合格的，熱失活的，Gibco Cat.#16140-063)，使從M.Thibonnier獲得的由人加壓素V2亞類受體轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞(pZeoSV載體)生長(zhǎng)到融合(大約＞90％)。由吸出而除去介質(zhì)和將細(xì)胞用10mLHank平衡鹽液(GibcoCat.#14175-095)洗滌。將該鹽溶液吸出而除去和將細(xì)胞用5mL胰蛋白酶-EDTA(0.05％胰蛋白酶，0.53mM EDTA-4Na，Gibco Cat.#25300-070)消化1min。將胰蛋白酶吸出而除去和將細(xì)胞由放液而取出。將細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)(如對(duì)于1∶30分裂的加入30mL)立即加入和充分混合以使胰蛋白酶失活。將1mL分離的細(xì)胞加入到包含新鮮細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)的新培養(yǎng)瓶中(如每個(gè)T-150燒瓶加入25ml)，并溫和地混合。將細(xì)胞在37℃下在5％CO2中培育。以3-4天間隔(或適當(dāng)?shù)?更換介質(zhì)。細(xì)胞在7-8天內(nèi)生長(zhǎng)到融合(大約＞75％-95％)。所有步驟在無(wú)菌條件下進(jìn)行。
B.膜制備
將所述細(xì)胞用Hank平衡鹽液溫和地洗滌兩次(如每個(gè)T-150燒瓶使用10mL)。將過(guò)量溶液除去和將細(xì)胞在無(wú)酶細(xì)胞解離緩沖劑(如每個(gè)T-150燒瓶使用8mLHank基，Gibco Cat.#13150-016)洗滌15-30分鐘，直到細(xì)胞松散。將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到保持在冰浴中的離心管(50mL)中。所有隨后的步驟在4℃下進(jìn)行。將離心管在300×g下離心15min(SORVAL，型號(hào)RT 6000 D，1380rpm，使用50ml離心管用的轉(zhuǎn)子)。將上清液拋棄和在均化緩沖劑(包含0.25M蔗糖和1mM EDTA的10mH Tris-HCl，pH7.4)中懸浮細(xì)胞，以確保緩沖劑的體積為細(xì)胞小球體積的約十倍。將所述細(xì)胞傾入離心管(50mL)和用Polytron在第6檔均化10sec。將勻漿轉(zhuǎn)移至Potter-Elvjehm均化器和用3沖程均化。將勻漿在1500×g下在4℃離心10min(使用SORVAL，型號(hào)RT 6000 D，3100rpm，使用50mL離心管的轉(zhuǎn)子)。拋棄小球。將上清液在100,000×g下在4℃離心60min(Beckman L 8-80M超速離心機(jī)；對(duì)于50mL離心管使用70Ti型轉(zhuǎn)子，以37,500rpm旋轉(zhuǎn)；對(duì)于15mL離心管使用80Ti型轉(zhuǎn)子，38,000rpm，或用45Ti型轉(zhuǎn)子，35,800rpm)。將上清液拋棄和將小球在3-4M1 Tris緩沖液(50mM TRIS-HCl，pH7.4)中懸浮。由Bradford或Lowry方法測(cè)定蛋白質(zhì)含量。將膜懸浮液的體積用膜緩沖劑(包含0.1％BSA和0.1mM PMSF的50mM Tris-HCl)調(diào)節(jié)，以得到3.0mg/mL(或適當(dāng)?shù)?蛋白質(zhì)。將該膜在-70℃下等分和貯存。
C.放射性配體結(jié)合試驗(yàn)在96孔格式的微量滴定板的孔中，加入90、110或130μL(以組成200μL的最終體積)測(cè)定緩沖劑，該緩沖劑包含50mM的Tris-HCl(pH7.4)、BSA(熱失效的，無(wú)蛋白酶)、0.1％的5mM MgCl2、1mg％抑肽酶、1mg％亮肽素、2mg％1，10-菲咯啉、10mg％胰蛋白酶抑制劑和0.1mM PMSF。在實(shí)驗(yàn)日加入抑制劑。將各組分在室溫下混合，和然后保持在冰浴中，隨后調(diào)節(jié)pH到7.4。
向每個(gè)孔中加入20μL未標(biāo)記的精氨酸加壓素(AVP)(以得到用于標(biāo)準(zhǔn)曲線的0.1-10nM和用于非特異性結(jié)合的1000nM的最終濃度)或在50％DMSO中的試驗(yàn)化合物(如0.1-1000nM的最終濃度或適當(dāng)?shù)?或作為載體對(duì)照物的50％DMSO。對(duì)于加壓素和其它肽配體，加入20μL的50％DMSO和相應(yīng)調(diào)節(jié)測(cè)試緩沖液的體積。
向每個(gè)孔中加入50μL冷凍的所述膜懸浮液，該懸浮液應(yīng)在使用之前即刻解凍和在測(cè)定緩沖液中稀釋到要求的濃度(如需要相當(dāng)于25-50μg蛋白質(zhì)/孔)。加入在測(cè)定緩沖液中的20μL 8nM[3H]精氨酸加壓素配體，該配體在使用之前制備，和在室溫下培育60min，在機(jī)械振動(dòng)機(jī)上先搖動(dòng)該板15min。通過(guò)該板內(nèi)容物的快速過(guò)濾使孵化停止，隨后使用細(xì)胞收集器(Tomtek and Printed濾墊-B濾紙)，用冰冷緩沖劑(50mM Tris-HCl，pH7.4)洗滌。將濾紙徹底地干燥(7-12min，在微波爐中)和用MeltiLex B/H熔融閃爍蠟板浸漬，和在β-板閃爍計(jì)數(shù)器上計(jì)數(shù)放射性。
在表達(dá)人催產(chǎn)素受體的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞膜中催產(chǎn)素的結(jié)合受體源由人催產(chǎn)素受體穩(wěn)定地轉(zhuǎn)染的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO細(xì)胞)(參見(jiàn)Rohto Pharmaceutical Co.Ltd.，大阪，日本的Tanizawa等人，U.S.專利5,466,584(1995))從M.Thibonnier，Case Western Reserve UniversitySchool of Medicine，Cleveland，OH獲得。
A.細(xì)胞的傳代與擴(kuò)增在T-150燒瓶中在無(wú)菌條件下，在F-12營(yíng)養(yǎng)素混合物(HAM)與L-谷氨酰胺(Gibco Cat.#11765-054)的細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)中，該介質(zhì)包含15mMHEPES(Gibco Cat.#15630-080)、1％抗生素/抗霉菌素(每500mLF-12加入5mL 100×，Gibco Cat.#1 5240-062)，400μg/mL Geneticin(每500mL F-12加入4mL的50mg/mL)和10％胎兒牛血清(合格的，熱失活的，Gibco Cat.#16140-063)，使從M.Thibonnier獲得的由人催產(chǎn)素受體轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞(pcDNA3.1載體)生長(zhǎng)到融合(大約＞90％)。吸出而除去介質(zhì)和將所述細(xì)胞用10mLHank平衡鹽液(Gibco Cat.#14175-095)洗滌。將該鹽溶液吸出而除去和將細(xì)胞用5mL胰蛋白酶-EDTA(0.05％胰蛋白酶，0.53mM EDTA-4Na，Gibco Cat.#25300-070)消化1min。將胰蛋白酶吸出而除去和將所述細(xì)胞由放液而取出。立即加入細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)(如對(duì)于1∶30分裂的加30mL)并充分混合以使胰蛋白酶失活。將1mL分離的細(xì)胞加入到包含新鮮細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)的新培養(yǎng)瓶中(如每個(gè)T-150燒瓶加入25ml)，和溫和地混合。將細(xì)胞在37℃在5％CO2中培育。以3-4天間隔(或適當(dāng)?shù)?更換介質(zhì)。細(xì)胞在7-8天內(nèi)生長(zhǎng)到融合(大約＞75％-95％)。所有步驟在無(wú)菌條件下進(jìn)行。
B.膜制備將所述細(xì)胞用Hank平衡鹽液溫和地洗滌兩次(如每個(gè)T-150燒瓶使用10mL)。將過(guò)量溶液除去和將細(xì)胞在無(wú)酶細(xì)胞解離緩沖劑(如每個(gè)T-150燒瓶使用8mLHank基，Gibco Cat.#13150-016)洗滌15-30分鐘直到細(xì)胞松散。將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到保持在冰浴中的離心管(50mL)中。所有隨后的步驟在4℃下進(jìn)行。將離心管在300×g下離心15min(SORVAL，型號(hào)RT 6000 D，1380rpm，使用50ml離心管的轉(zhuǎn)子)。將上清液拋棄和在均化緩沖劑(包含0.25M蔗糖和1mM EDTA的10mH Tris-HCl，pH7.4)中懸浮細(xì)胞，以確保緩沖劑的體積為細(xì)胞小球體積的約十倍。將該細(xì)胞傾入離心管(50mL)和用Polytron在設(shè)定第6檔均化10sec。將勻漿轉(zhuǎn)移至Potter-Elyjehm均化器和用3沖程均化。將勻漿在1500×g下在4℃離心10min(使用SORVAL，型號(hào)RT 6000 D，3100rpm，使用50mL離心管的轉(zhuǎn)子)。拋棄小球。將上清液在100,000×g下在4℃下離心60min(Beckman L 8-80M超速離心機(jī)；對(duì)于50mL離心管使用70Ti型轉(zhuǎn)子，以37,500rpm旋轉(zhuǎn)；對(duì)于15mL離心管使用80Ti型轉(zhuǎn)子，38,000rpm，或用45Ti型轉(zhuǎn)子，35,800rpm)。將上清液拋棄和將小球在3-4mL Tris緩沖液(50mM TRIS-HCl，pH7.4)中懸浮。由Bradford或Lowry方法預(yù)計(jì)蛋白質(zhì)含量。將膜懸浮液的體積用膜緩沖劑(包含0.1％BSA和0.1mM PMSF的50mM Tris-HCl)調(diào)節(jié)，以得到3.0mg/mL(或適當(dāng)?shù)?蛋白質(zhì)。將膜在-70℃下等分和貯存。
C.放射性配體結(jié)合測(cè)定在96孔格式的微量滴定板的孔中，加入90、110或130μL(以組成200μL的最終體積)測(cè)定緩沖劑，該緩沖劑包含50mM的Tris-HCl(pH7.4)、BSA(熱失活的，無(wú)蛋白酶)、0.1％的5mM MgCl2、1mg％抑肽酶、1mg％亮肽素、2mg％1，10-菲咯啉、10mg％胰蛋白酶抑制劑和0.1mM PMSF。在實(shí)驗(yàn)日加入抑制劑。將各組分在室溫下混合，然后保持在冰浴中，隨后調(diào)節(jié)pH到7.4。
向每個(gè)孔中加入20μL未標(biāo)記的催產(chǎn)素(以得到用于標(biāo)準(zhǔn)曲線的0.1-10nM和用于非特異性結(jié)合的1000nM的最終濃度)或在50％DMSO中的試驗(yàn)化合物(如0.1-1000nM的最終濃度或適當(dāng)?shù)?或作為載體對(duì)照物的50％DMSO。對(duì)于催產(chǎn)素和其它肽配體，加入20μL 50％DMSO，和相應(yīng)調(diào)節(jié)測(cè)試緩沖液的體積。
向每個(gè)孔中加入50μL冷凍的所述膜懸浮液，該懸浮液應(yīng)在使用之前即刻解凍和在測(cè)定緩沖液中稀釋到要求的濃度(如需要相當(dāng)于25-50μg蛋白質(zhì)/孔)。加入在測(cè)定緩沖液中的20μL 8nM[3H]催產(chǎn)素，該測(cè)定緩沖液在使用之前制備，和在室溫下培育60min，在機(jī)械振動(dòng)機(jī)上先搖動(dòng)該板15min。通過(guò)該板內(nèi)容物的快速過(guò)濾使孵化停止，隨后使用細(xì)胞收集器(Tomtek and Printed濾墊-B濾紙)，用冰冷緩沖劑(50mMTris-HCl，pH7.4)洗滌。將濾紙徹底地干燥(7-12min，在微波爐中)和用MeltiLex B/H熔融閃爍蠟板浸漬，和在β-板閃爍計(jì)數(shù)器中計(jì)數(shù)放射性。
結(jié)合數(shù)據(jù)報(bào)導(dǎo)為在確定濃度下的抑制百分比，或如果計(jì)算IC50的話，報(bào)導(dǎo)為納摩爾濃度。
本發(fā)明代表性化合物這些試驗(yàn)的結(jié)果見(jiàn)表1。
表1對(duì)由人加壓素V1a受體亞型，人加壓素V2受體亞型和人催產(chǎn)素受體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞系的膜結(jié)合
*在表達(dá)人加壓素V1a和V2亞型受體和人催產(chǎn)素受體的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞膜中的結(jié)合給出以下實(shí)施例用于舉例說(shuō)明而不是限制本發(fā)明。
實(shí)施例11-[[[10-[5-氯-4-(1-環(huán)己-1-烯-1-基)-2-甲氧基苯甲?；鵠-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基]羰基]甲基氨基]-1-脫氧-D-葡糖醇步驟A.4-氨基-5-氯-2-甲氧基-苯甲酸甲酯將4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸(50.0g，248mmol)懸浮在甲醇(500mL)中，漿狀物冷卻到0℃，隨后在20分鐘內(nèi)滴加亞硫酰氯(54.3mL，744mmol)。最初透明的溶液轉(zhuǎn)變?yōu)榘咨珣腋∫?，將反?yīng)溶液溫?zé)岬绞覝兀瑪嚢?小時(shí)。蒸發(fā)甲醇，得到的漿狀物懸浮在乙醚(1L)中。過(guò)濾固體，用乙醚充分漂洗得到標(biāo)題化合物鹽酸鹽(50.9g)。將鹽懸浮在1N氫氧化鈉中，劇烈攪拌30分鐘。過(guò)濾并用水充分漂洗得到標(biāo)題化合物游離堿，為白色固體。熔點(diǎn)136-137℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.57(s，1H)，6.43(s，1H)，6.14(s，2H)，3.71(s，3H)，3.67(s，3H)。
C9H10ClNO3分析計(jì)算值C 50.13，H 4.67，N 6.50，測(cè)量值C 49.85，H 4.46，N 6.65MS[(+)-APCI，m/z]216[M+H]+。C9H11ClNO3計(jì)算值216.0428。
步驟B.5-氯-4-碘-2-甲氧基-苯甲酸甲酯將步驟A的4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸甲酯(5.00g，23.2mmol)懸浮在水(52mL)中，加入濃硫酸(13mL)。得到的懸浮液冷卻到-1℃，以保持溫度低于0℃的速率加入亞硝酸鈉(1.76g，25.5mmol)在水(10mL)中的溶液，產(chǎn)生透明黃色溶液。隨后滴加在水(50mL)中的碘化鉀(4.23g，25.5mmol)和碘(3.24g，12.8mmol)，在0℃攪拌反應(yīng)物1.5小時(shí)。反應(yīng)混合物溫?zé)岬绞覝兀靡宜嵋阴ヌ崛?。合并的提取物依次?M含水硫代硫酸鈉、1N氫氧化鈉和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾和濃縮，此時(shí)產(chǎn)物結(jié)晶。得到的橙色晶體懸浮在石油醚中，過(guò)濾并真空干燥得到標(biāo)題化合物(6.38g)，熔點(diǎn)72-73℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.72(s，1H)，7.66(s，1H)，3.83(s，3H)，3.77(s，3H)。
C9H8ClIO3分析計(jì)算值C 33.11，H 2.47；測(cè)量值C 33.21，H 2.23。
MS[(+)-APCI，m/z]327[M+H]+；C9H9ClIO3計(jì)算值326.9285。
步驟C.5-氯-4-碘-2-甲氧基-苯甲酸將步驟B的5-氯-4-碘-2-甲氧基苯甲酸甲酯(3.00g，9.19mmol)和氫氧化鈉(1.10g，27.6mmol)在甲醇(92mL)中的混合物回流12小時(shí)。將反應(yīng)物冷卻到室溫，蒸發(fā)溶劑。殘余物溶解在1N氫氧化鈉(75mL)中，溶液用乙醚洗滌，棄去有機(jī)洗滌物。水相用2N鹽酸酸化，用乙醚提取。合并的提取物用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾和濃縮得到羧酸(2.64g)橙色結(jié)晶，熔點(diǎn)150-151℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ13.03(br，1H)，7.70(s，1H)，7.63(s，1H)，3.82(s，3H).
C8H6ClIO3分析計(jì)算值C 30.75，H 1.94，測(cè)量值C 31.28，H 1.78。
MS[(-)-APCI，m/z]311[M-H]-.C8H5ClIO3計(jì)算值310.8972。
步驟D.(5H，11H-苯并[e]吡咯并[1，2-a][1，4]二氮雜-10-基)-(5-氯-4-碘-2甲氧基-苯基)-甲酮向步驟C的5-氯-4-碘-2-甲氧基苯甲酸(0.900g，2.88mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(6.7mL，86.4mmol)在無(wú)水二氯甲烷(14.4mL)的混合物中滴加草酰氯(0.263mL，3.02mmol)?；旌衔锛訜峄亓?小時(shí)，冷卻到室溫，蒸發(fā)至干。加入新鮮的無(wú)水二氯甲烷(25mL)，濃縮得到的溶液，真空干燥殘余物。由此得到的粗酰氯和10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜(0.584g，3.17mmol)在無(wú)水二氯甲烷(14.4mL)中混合依次，加入N，N-二異丙基乙胺(0.447mL，3.46mmol)。在室溫?cái)嚢?8小時(shí)后，反應(yīng)混合物用二氯甲烷(15mL)稀釋，依次用1N鹽酸、1N氫氧化鈉和鹽水洗滌。用無(wú)水碳酸鎂干燥，過(guò)濾和濃縮得到粗標(biāo)題酰胺，由乙醚重結(jié)晶得到1.23g淺橙色結(jié)晶，熔點(diǎn)191-192℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.60-7.28(m，3H)，7.14-7.01(m，3H)，6.79(s，1H)，5.95(s，1H)，5.89(t，1H)，5.15(br，4H)，3.56(s，3H).
C20H16ClIN2O2分析計(jì)算值C 50.18，H 3.37，N 5.85.測(cè)量值C50.47，H 3.28，N 5.74.
MS(EI，m/z)478[M]+.C20H16ClIN2O2計(jì)算值477.9946。
步驟E.(10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-10-基)-[5-氯-2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼雜環(huán)戊烷(dioxaborolan)-2-基)-苯基]-甲酮將步驟D的(5H，11H-苯并[e]吡咯并[1，2-a][1，4]二氮雜-10-基)-(5-氯-4-碘-2-甲氧基-苯基)-甲酮(0.500g，1.04mmol)，雙(頻那酮合)乙硼烷(0.289g，1.14mmol)，乙酸鉀(0.306g，3.12mmol)和二氯[1，1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]鈀(II)二氯甲烷加合物(0.025g，0.031mmol)在無(wú)水二甲基亞砜(5.2mL)中混合，加熱到80℃過(guò)夜。冷卻反應(yīng)混合物至室溫，用乙酸乙酯稀釋，用水和鹽水洗滌。有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，用己烷稀釋，通過(guò)硅膠柱過(guò)濾。濃縮濾液至油狀物，其由乙醚/石油醚(-20℃)結(jié)晶得到標(biāo)題化合物(0.430g)白色結(jié)晶固體，熔點(diǎn)92-98℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.48-7.36(m，2H)，7.12-7.03(m，4H)，6.79(s，1H)，5.95(m，1H)，5.89(t，1H)，5.20(br，4H)，3.48(br，3H)，1.26(s，12H).
C26H28BClN2O4分析計(jì)算值C 56.22，H 5.89，N 5.85，測(cè)量值C56.23，H 5.63，N 6.24.
MS[(+)-ESI，m/z]479[M+H]+.C26H29BClN2O4計(jì)算值479.1910。
步驟F.10-(5-氯-4-環(huán)己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲酰基)-10，11-二氫-5H吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜將步驟E的(10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-10-基)-[5-氯-2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼雜環(huán)戊烷-1-基)-苯基]-甲酮(0.220g，0.459mmol)，環(huán)己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯(0.116g，0.505mmol)和二氯[1，1’-雙(二苯基頻那酮合)二茂鐵]鈀(II)二氯甲烷加合物(0.011g，0.014mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(2.3mL)中混合。加入含水碳酸鈉(2m，1.15mL，2.30mmol)，反應(yīng)物加熱至60℃2小時(shí)。在冷卻到室溫后，反應(yīng)混合物用乙酸乙酯稀釋，用水和鹽水洗滌。有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾和濃縮。經(jīng)快速硅膠柱色譜法，用在己烷中的30-40％乙酸乙酯的溶劑梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物(0.140g)油狀物。將油狀物溶解在乙醚/石油醚中濃縮得到白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.38(d，2H)，7.11(t，1H)，7.06-7.00(m，2H)，6.79(s，1H)，6.57(s，1H)，5.95(s，1H)，5.89(t，1H)，5.55(s，1H)，5.24-4.60(m，4H)，3.52(s，3H)，2.13-2.09(m，4H)，1.68-1.57(m，4H).
C26H25ClN2O2+0.03C4H10O分析計(jì)算值C 71.76，H 5.79，N 6.44.測(cè)量值C 71.66，H 5.59，N 6.10。
MS[(+)-APC，m/z]433[M+H]+.C26H26ClN2O2計(jì)算值433.1684。
步驟G.10-(5-氯-4-環(huán)己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酸將步驟F的10-(5-氯-4-環(huán)己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜(0.300g，0.693mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.127mL，0.728mmol)溶解在無(wú)水二氯甲烷(2.8mL)。滴加三氯乙酰氯(0.116mL，1.04mmol)，反應(yīng)物在室溫下攪拌3小時(shí)?；旌衔镉靡宜嵋阴ハ♂專?N鹽酸、1N氫氧化鈉和鹽水稍稍。有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，用己烷(50mL)稀釋，通過(guò)硅膠過(guò)濾，用在己烷中的30％乙酸乙酯洗脫。濃縮濾液得到粗三氯乙酸鹽(0.360g)，將該物質(zhì)溶解在丙酮(4.2mL)和2.5N氫氧化鈉(0.750mL)中。反應(yīng)物在室溫下攪拌4小時(shí)，隨后用1N鹽酸(50mL)，用乙醚提取。有機(jī)相用1N氫氧化鈉提取，合并的堿性提取物用2N鹽酸酸化。水相用乙醚提取，提取物用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾和濃縮得到標(biāo)題化合物(0.280g)白色固體，熔點(diǎn)192℃(分解)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.34(br，1H)，7.42(br，1H)，7.25(d，1H)，7.07(t，1H)，6.98(t，1H)，6.93(d，1H)，6.72(d，1H)，6.54(br，1H)，6.10(d，1H)，5.90-4.60(m，5H)，3.47(br，3H)，2.14-2.09(m，4H)，1.65-1.57(m，4H).
C27H25ClN2O4分析計(jì)算值C 67.99，H 5.28，N 5.87，測(cè)量值C67.71，H 5.23，N 5.49。
MS[(-)-APCI，m/z]475[M-H]-.C27H24ClN2O4計(jì)算值475.1426。
步驟H.1-[[[10-[5-氯-4-(1-環(huán)己-1-烯-1-基)-2-甲氧基苯甲?；鵠-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基]羰基]甲基氨基]-1-脫氧-D-葡糖醇將步驟G的10-(5-氯-4-環(huán)己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酸(0.120g，0.252mmol)，N-甲基-D-葡糖胺(0.059g，0.302mmol)，1-羥基苯并三唑(0.037g，0.277mmol)和1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(0.053g，0.277mmol)在無(wú)胺的N，N-二甲基甲酰胺(1.0mL)中混合，隨后加入N，N-二異丙基乙胺(0.066mL，0.378mmol)。反應(yīng)物在室溫下攪拌12小時(shí)，隨后用乙酸乙酯稀釋，用1N鹽酸、1N氫氧化鈉和鹽水洗滌。合并有含水洗滌物用氯化鈉飽和，用乙酸乙酯提取。合并有機(jī)相，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾和濃縮。殘余物用快速硅膠柱色譜法純化，用在氯仿中的10％甲醇洗脫，得到0.110g標(biāo)題化合物白色固體。
1H NMR(DMSO-d6+D2O；400MHz)δ7.46-7.29(m，2H)，7.07(t，1H)，6.96(t，1H)，6.90(d，1H)，6.50(s，1H)，6.31(s，1H)，6.01(s，1H)，5.52(s，1H)，5.22(s，2H)，3.90(br，2H)，3.61-3.34(m，9H)，3.05(br，3H)，2.11-2.05(m，4H)，1.61-1.50(m，4H).
C34H40ClN3O8分析計(jì)算值C 62.43，H 6.16，N 6.42，測(cè)量值C62.25，H 6.41，N 6.15。
MS[(+)-ESI，m/z]654[M+H]+.C34H41ClN3O8計(jì)算值654.2584。
實(shí)施例210-(5-氯-4-環(huán)己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲酰基)-N-甲基-N-[(2S，3R，4R，5R)-2，3，4，5，6-五甲氧基己基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酰胺將實(shí)施例1的1-[[[10-[5-氯-4-(1-環(huán)己-1-烯-1-基)-2-甲氧基苯甲酰基]-10，11-二氫-5H吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基]羰基]甲基氨基]-1-脫氧-D-葡糖醇(0.140g，0.214mmol)溶解在無(wú)水四氫呋喃(2.1mL)中，加入氫化鈉(0.051g，2.14mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柚钡綒怏w逸出停止(約15分鐘)，隨后加入甲基碘(0.266mL，4.28mmol)。在室溫下攪拌72小時(shí)后，反應(yīng)物用飽和含水氯化銨(50mL)驟冷，用乙酸乙酯提取。合并的提取物用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾和濃縮。殘余物用快速硅膠柱色譜法純化，用在氯仿中的5％甲醇洗脫得到0.140g標(biāo)題化合物白色固體。
1H NMR(DMSO-d6+D2O；400MHz)δ41-7.30(m，2H)，7.08(t，1H)，6.99(t，1H)，6.94(d，1H)，6.54(s，1H)，6.29(d，1H)，6.04(s，1H)，5.55(s，1H)，5.29(br，2H)，3.68-3.10(m，29H)，2.13-2.09(m，4H)，1.64-1.58(m，4H).
C39H50ClN3O8分析計(jì)算值C 64.67，H 6.96，N 5.80，測(cè)量值C64.68，H 7.01，N 5.71。
MS[(+)-APCI，m/z]724[M+H]+，C39H51ClN3O8計(jì)算值724.3367。
實(shí)施例310-(5-氯-4-環(huán)己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲?；?-N-[((4S，5S)-5-{(R)羥基[(4R)-2-氧代-1，3-二氧戊環(huán)-4-基]甲基}-2-氧代-1，3-二氧戊環(huán)-4-基)甲基]-N-甲基-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酰胺將實(shí)施例1的1-[[[10-[5-氯-4-(1-環(huán)己-1-烯-1-基)-2-甲氧基苯甲?；鵠-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基]羰基]甲基氨基]-1-脫氧-D-葡糖醇(0.190g，0.290mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.202mL，1.16mmol)溶解在無(wú)水二氯甲烷(5.8mL)中，溶液冷卻到0℃。加入N，N’-羰基二咪唑(0.094g，0.580mmol)，反應(yīng)物在0℃攪拌1小時(shí)，隨后溫?zé)岬绞覝?，持續(xù)攪拌1.5小時(shí)。溶液用二氯甲烷稀釋，用0.1N鹽酸和飽和含水碳酸氫鈉洗滌。有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾和濃縮。殘余物用快速硅膠柱色譜法純化，用在氯仿中的0-10％甲醇的溶劑梯度洗脫，得到0.190g標(biāo)題化合物白色部分結(jié)晶固體，熔點(diǎn)163-176℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.50-7.31(m，2H)，7.08(t，1H)，7.02(t，1H)，6.94(d，1H)，6.57(br，1H)，6.40(d，1H)，6.36(br，1H)，6.07(d，1H)，5.55(br，1H)，5.39-5.20(m，4H)，4.96-4.90(m，1H)，4.87(q，1H)，4.74(br，1H)，4.57(t，1H)，4.41(dd，1H)，4.05-3.98(m，2H)，3.82-3.79(m，1H)，3.49(br，3H)，3.15(s，3H)，2.14-2.08(m，4H)，1.69-1.57(m，4H)。
C36H36ClN3O10分析計(jì)算值C 61.23，H 5.14，N 5.95，測(cè)量值C60.84，H 5.05，N 5.79。
MS[(+)-ESI，m/z]706[M+H]+，728[M+Na]+；C36H37ClN3O10計(jì)算值706.2169。
實(shí)施例410-(5-氯-4-環(huán)己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲?；?-N-(2，3-二羥基丙基)-N-甲基-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酰胺將實(shí)施例1步驟G的10-(5-氯-4-環(huán)己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酸(0.370g，0.776mmol)，3-甲基氨基-1，2-丙二醇(0.098g，0.931mmol)，1-羥基苯并三唑(0.115g，0.854mmol)和1-[3-二甲基氨基]丙基]-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(0.164g，0.854mmol)在無(wú)胺N，N-二甲基甲酰胺(3.9mL)中混合，隨后加入N，N-二異丙基乙胺(0.202mL，1.16mmol)。反應(yīng)物在室溫下攪拌12小時(shí)，隨后用乙酸乙酯稀釋，用1N鹽酸、1N氫氧化鈉和鹽水洗滌。合并的含水洗滌物用氯化鈉飽和，用乙酸乙酯提取。合并的有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾和濃縮。殘余物用快速硅膠柱色譜法純化，用在氯仿中的0-5％甲醇的溶劑梯度洗脫，得到0.400g標(biāo)題化合物，白色結(jié)晶固體，熔點(diǎn)155-157℃。
1H NMR(DMSO-d6+D2O；400MHz)δ7.44-7.27(m，2H)，7.07(t，1H)，6.96(t，1H)，6.89(d，1H)，6.49(s，1H)，6.28(d，1H)，6.01(s，1H)，5.51(s，1H)，5.20(br，2H)，4.744.58(m，2H)，3.82(br，1H)，3.62-3.32(m，7H)，3.04(br，3H)，2.09-2.05(m，4H)，1.601.53(m，4H).
C31H34ClN3O5分析計(jì)算值C 66.01，H 6.08，N 7.45；測(cè)量值C 65.69，H 5.99，N 7.34。
MS[(+)-ESI，m/z]564[M+H]+.C31H35ClN3O5計(jì)算值564.2267。
實(shí)施例510-[4-(環(huán)己-1-烯-1-基)-3-甲基-苯甲酰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基]羰基]甲基氨基]-1-脫氧-D-葡糖醇步驟A.(10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-10-基)-(4-溴-3-甲基-苯基)-甲酮0.20水合物向4-溴-3-甲基苯甲酸(21.5g，100mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(0.251mL，3.00mmol)在無(wú)水二氯甲烷(200mL)中的攪拌混合物中滴加草酰氯(9.16mL，105mmol)，混合物加熱回流1.5小時(shí)，隨后冷卻到室溫，蒸發(fā)溶劑。加入新鮮的無(wú)水二氯甲烷(200mL)，濃縮得到的溶液，真空干燥殘余物。得到的粗酰氯和10，11二氫-5H-吡咯并[1，2-c][1，4]苯并二氮雜(17.5g，95.0mmol)在無(wú)水二氯甲烷(200mL)中混合，加入N，N-二異丙基乙胺(19.2mL，110mmol)。在室溫?cái)嚢?8小時(shí)后，反應(yīng)混合物用1N鹽酸、1N氫氧化鈉和鹽水洗滌。有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，睡濃縮得到粗酰胺，將其在乙酸乙酯中重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物淺橙色結(jié)晶(34.8g)，熔點(diǎn)175-176℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.45(dd，1H)，7.38(d，1H)，7.33(d，1H)，7.18(dt，1H)，7.10(t，1H)，6.92(s，1H)，6.90(s，1H)，6.82(t，1H)，5.94(s，1H)，5.91(t，1H)，5.27-4.80(br，4H)，2.22(s，3H).
C20H17BrN2O+0.20H2O分析計(jì)算值C 62.42，H 4.56，N 7.28，測(cè)量值C 62.43，H 4.60，N 7.24.
MS[(+)-ESI，m/z]381[M+H]+.C20H18BrN2O計(jì)算值381.0598。
步驟B.(10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-10-基)-[3-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)-苯基]-甲酮與0.12乙酸乙酯的溶劑化物將步驟A的(10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-10-基)-(4-溴-3-甲基-苯基)-甲酮(20.0g，52.5mmol)，雙(頻那酮合)乙硼烷(14.7g，57.8mmol)，乙酸鉀(15.5g，158mmol)和二氯[1，1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]鈀(II)二氯甲烷加合物(1.29g，1.58mmol)在無(wú)水二甲基亞砜(263mL)中混合，加熱到80℃18小時(shí)。將反應(yīng)物冷卻到室溫，加入附加的催化劑(1.29g，1.58mmol)和雙(頻那酮合)乙硼烷(3.33g，13.1mmol)。重新在80℃加熱18小時(shí)，將反應(yīng)混合物冷卻到室溫，用乙酸乙酯(500mL)稀釋，用硅膠過(guò)濾。濾液用水和鹽水洗滌，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，用己烷稀釋用硅膠柱過(guò)濾。濾液濃縮至油狀物，加入戊烷，使產(chǎn)物結(jié)晶。過(guò)濾灰白色結(jié)晶，真空干燥得到18.4g標(biāo)題化合物，熔點(diǎn)190-193℃。
1NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.45(dd，1H)，7.39(d，1H)，7.18-7.06(m，3H)，6.98(d，1H)，6.91(br，1H)，6.81(t，1H)，5.94(br，1H)，5.91(t，1H)，5.33-4.60(br，4H)，2.32(s，3H)，1.25(s，12H).
C26H29BN2O3+0.12C4H8O2分析計(jì)算值C 72.46，H 6.88，N 6.38，測(cè)量值C 70.80，H 6.83，N 6.06。
MS[(+)-ESI，m/z]429[M+H]+.C26H30BN2O3計(jì)算值429.2348.
步驟C.(10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-10-基)-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯基)-甲酮將步驟B的(10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-10-基)-[3-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)-苯基]-甲酮(3.50g，8.17mmol)，環(huán)己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯(2.26g，9.80mmol)和二氯[1，1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]鈀(II)二氯甲烷加合物(0.200g，0.245mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(40.9mL)中混合。加入含水碳酸鈉(2M，20.5mL，40.9mmol)，反應(yīng)物加熱到60℃過(guò)夜。在冷卻到室溫后，反應(yīng)混合物用乙酸乙酯稀釋，有機(jī)層用水和鹽水洗滌。有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾和濃縮。殘余物溶解在熱乙酸乙酯/石油醚(1∶1)中得到2.52g標(biāo)題化合物淺棕色結(jié)晶，熔點(diǎn)182-183℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.47(dd，1H)，7.21-7.10(m，3H)，6.93(d，2H)，6.83(d，1H)，6.81(t，1H)，5.93-5.91(m，2H)，5.43(m，1H)，5.26(br，2H)，5.20-4.80(br，2H)，2.11(s，3H)，2.09-2.05(m，4H)，1.67-1.56(m，4H).
C26H26N2O+0.15H2O分析計(jì)算值C 81.07，H 6.88，N 7.27，測(cè)量值C 81.03，H 6.86，N 7.24。
MS[(+)-ESI，m/z]383[M+H]+。C26H27N2O計(jì)算值383.2128。
步驟D.2，2，2-三氯-1-[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基]-甲酮將步驟C的(10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-10-基)-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯基)-甲酮(1.03g，2.69mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.937mL，5.38mmol)溶解在無(wú)水二氯甲烷(13.5mL)中，滴加三氯乙酰氯(0.901mL，8.07mmol)。反應(yīng)物在室溫下攪拌3小時(shí)，蒸發(fā)溶劑。殘余物用乙酸乙酯稀釋，通過(guò)硅膠柱過(guò)濾。濾液用0.1N鹽酸、飽和含水碳酸氫鈉和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾和濃縮。殘余物由乙酸乙酯/己烷結(jié)晶得到1.41g標(biāo)題化合物白色結(jié)晶，熔點(diǎn)149-150℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.46-7.43(m，2H)，7.21-7.16(m，2H)，7.12(dt，1H)，6.95-6.90(m，2H)，6.85(d，1H)，6.34(d，1H)，5.95(br，2H)，5.44(m，1H)，5.27(br，2H)，2.12(s，3H)，2.10-2.05(m，4H)，1.68-1.55(m，4H).
C28H25Cl3N2O2分析計(jì)算值C 63.71，H 4.77，N 5.31，測(cè)量值C63.35，H 4.62，N 5.24。
MS[(+)-ESI，m/z]527.2[M+H]+，C28H26Cl3N2O2計(jì)算值527.1058.
步驟E.10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酸將步驟D的2，2，2-三氯-1-[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲酰基)-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基]-甲酮(0.700g，1.33mmol)溶解在丙酮(8.9mL)，隨后加入2.5N氫氧化鈉(1.60mL，3.99mmol)。反應(yīng)物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，用2N鹽酸酸化。酸性混合物用乙醚提取，有機(jī)相用1N氫氧化鈉提取。合并的堿性提取物用2N鹽酸酸化，用乙醚提取。提取物用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾和濃縮。殘余物由乙醚重結(jié)晶得到0.450g標(biāo)題化合物白色結(jié)晶，193℃(分解)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.31(s，1H)，7.35(dd，1H)，7.17-7.13(m，2H)，7.07(dt，1H)，6.91(dd，1H)，6.85(t，2H)，6.75(d，1H)，6.08(d，1H)，5.92(br，2H)，5.43(m，1H)，5.14(br，2H)，2.11(s，3H)，2.10-2.05(m，4H)，1.67-1.55(m，4H).
C27H26N2O3分析計(jì)算值C 76.03，H 6.14，N 6.57，測(cè)量值C 75.71，H 6.16，N 6.48.
MS[(-)-ESI，m/z]425.2[M-H]-，C27H25N2O3計(jì)算值425.1862。
步驟F.10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲酰基)-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基]羰基]甲基氨基]-1-脫氧-D-葡糖醇半水合物將步驟E的10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酸(0.530g，1.24mmol)，N-甲基-D-葡糖胺(0.291g，1.49mmol)，1-羥基苯并三唑(0.184g，1.36mmol)和1-[3-二甲基氨基]丙基]-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(0.261g，1.36mmol)在無(wú)胺N，N-二甲基甲酰胺(5.0mL)中混合，隨后加入N，N-二異丙基乙胺(0.324mL，1.86mmol)。反應(yīng)物在室溫下攪拌16小時(shí)，隨后用乙酸乙酯稀釋，用1N鹽酸、1N氫氧化鈉和鹽水洗滌。合并的含水洗滌物用氯化鈉飽和，用乙酸乙酯提取。合并有機(jī)相，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾和濃縮。殘余物用快速硅膠柱色譜法純化，用8∶1.8∶0.2氯仿∶甲醇∶水洗脫得到0.700g標(biāo)題化合物白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.41(dd，1H)，7.17-7.13(m，2H)，7.08(t，1H)，6.91-6.82(m，3H)，6.34(s，1H)，5.99(s，1H)，5.43(m，1H)，5.35(m，2H)，4.91(d，1H)，4.51(s，1H)，4.40-4.32(m，3H)，3.92(br，1H)，3.57-3.34(m，7H)，3.06(br，3H)，2.11(s，3H)，2.10-2.05(m，4H)，1.67-1.55(m，4H).
C34H41N3O7+0.50H2OC 66.65，H 6.91，N 6.86，測(cè)量值C 66.40，H 6.80，N 6.76.
MS[(+)-APCI，m/z]603.9[M+H]+，C34H42N3O7計(jì)算值604.3028.
實(shí)施例610-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基苯甲?；?-N-((2S)-2-{(4R，5R)-5-[(1R)-1，2-二羥基乙基]-2-氧代-1，3-二氧戊環(huán)-4-基}-2-羥基乙基)-N-甲基-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酰胺將實(shí)施例5的10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲酰基)-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酸甲基-[(2S，3R，4R，5R)-2，3，4，5，6-五羥基-己基]酰胺(0.190g，0.315mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.110mL，0.315mmol)溶解在無(wú)水二氯甲烷(6.3mL)中，溶液冷卻到0℃，加入N，N’-羰基二咪唑(0.051g，0.315mmol)，反應(yīng)物在0℃攪拌1小時(shí)，隨后溫?zé)岬绞覝?，持續(xù)攪拌12小時(shí)。溶液用乙酸乙酯稀釋，用水、0.1N鹽酸和鹽水洗滌。有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾和濃縮。殘余物用快速硅膠柱色譜法純化，用乙酸乙酯洗脫得到0.140g標(biāo)題化合物，為白色部分結(jié)晶固體，熔點(diǎn)166-175℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.42(d，1H)，7.17-7.13(m，2H)，7.08(t，1H)，6.92-6.82(m，3H)，6.35(d，1H)，6.05-6.02(m，1H)，5.76(d，1H)，5.55-5.50(m，1H)，5.435.37(m，3H)，4.93-4.90(m，1H)，4.73-4.69(m，2H)，3.90(br，1H)，3.79(br，1H)，3.59(br，1H)，3.49-3.24(m，3H)，3.10(s，3H)，2.11(s，3H)，2.08-2.05(m，4H)，1.65-1.57(m，4H).
C35H39N3O8分析計(jì)算值C 66.76，H 6.24，N 6.67，測(cè)量值C 66.53，H 6.24，N 6.41。
MS[(+)-ESI，m/z]630.2[M+H]+，C35H40N3O8計(jì)算值630.2817.
實(shí)施例710-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基苯甲?；?-N-[((4S，5S)-5-{(R)-羥基[(4R)-2-氧代-1，3-二氧戊環(huán)-4-基]甲基}-2-氧代-1，3-二氧戊環(huán)-4-基)甲基]-N-甲基-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酰胺將實(shí)施例5的10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酸甲基-[(2S，3R，4R，5R)-2，3，4，5，6-五羥基-己基]酰胺(0.160g，0.265mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.185mL，1.06mmol)溶解在無(wú)水二氯甲烷(5.3mL)中，溶液冷卻到0℃。加入N，N’-羰基二咪唑(0.086g，0.530mmol)，反應(yīng)物在0℃攪拌1小時(shí)，隨后溫?zé)岬绞覝?，持續(xù)攪拌0.75小時(shí)。溶解用乙酸乙酯稀釋，用水、0.1N鹽酸和鹽水洗滌。有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾和濃縮。殘余物用快速硅膠柱色譜法純化，用乙酸乙酯洗脫得到0.170g標(biāo)題化合物白色粉末，熔點(diǎn)162-168℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.40(d，1H)，7.17-7.14(m，2H)，7.08(t，1H)，6.93-6.82(m，3H)，6.40(d，1H)，6.35(d，1H)，6.05(d，1H)，5.43-5.34(m，3H)，4.96-4.93(m，1H)，4.87(q，1H)，4.75(s，1H)，4.57(t，1H)，4.42(t，1H)，4.05-3.98(m，2H)，3.81(dd，1H)，3.16(s，3H)，2.11(s，3H)，2.08-2.05(m，4H)，1.66-1.57(m，4H).
C36H37N3O9分析計(jì)算值C 65.94，H 5.69，N 6.41，測(cè)量值C 66.17，H 6.01，N 6.36MS[(+)-ESI，m/z]656.1[M+H]+.C36H38N3O9計(jì)算值656.2609。
實(shí)施例810-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基苯甲?；?-N-甲基-N-[(2S，3R，4R，5R)-2，3，4，5，6-五甲氧基己基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酰胺將實(shí)施例5的10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酸甲基-[(2S，3R，4R，5R)-2，3，4，5，6-五羥基-己基]酰胺(0.112g，0.186mmol)溶解在無(wú)水四氫呋喃(1.9mL)中，加入氫化鈉(0.074g，1.86mmol)。反應(yīng)物在室溫下攪拌，直到氣體逸出停止(約30分鐘)，隨后加入碘甲烷(0.232mL，3.72mmol)。持續(xù)攪拌72小時(shí)，反應(yīng)混合物用飽和含水氯化銨(30mL)驟冷。產(chǎn)物用乙酸乙酯提取，合并的提取物用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾和濃縮。殘余物用快速硅膠柱色譜法純化，用在氯仿中的0-5％甲醇的溶劑梯度洗脫，得到0.100g標(biāo)題化合物白色固體，熔點(diǎn)68-83℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.38(d，1H)，7.17-7.14(m，2H)，7.08(t，1H)，6.92-6.82(m，3H)，6.31(d，1H)，6.01(d，1H)，5.43(s，1H)，5.37(s，2H)，5.26-4.85(br，2H)，3.69(br，2H)，3.58-3.54(m，1H)，3.39-3.24(m，20H)，3.11(s，3H)，2.11(s，3H)，2.08-2.05(m，4H)，1.67-1.56(m，4H).
C39H51N3O7分析計(jì)算值C 69.52，H 7.63，N 6.24，測(cè)量值C 69.02，H 7.66，N 6.02.
MS[(+)-APCI，m/z]674.4[M+H]+.C39H52N3O7計(jì)算值674.4512。
實(shí)施例9(2S)-2-{[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羰基]-氨基}-3-(4-羥基-苯基)-丙酸乙酯將實(shí)施例5步驟E的10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酸(0.240g，0.563mmol)，L-酪氨酸乙酯鹽酸鹽(0.157g，0.676mmol)，1-羥基苯并三唑(0.084g，0.619mmol)1-[3-二甲基氨基]丙基]-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(0.119g，0.619mmol)在無(wú)胺N，N-二甲基甲酰胺(2.25mL)中混合，隨后加入(0.294mL，1.69mmol)。反應(yīng)物在室溫下攪拌36小時(shí)，隨后用乙酸乙酯稀釋，用水、1N鹽酸、飽和含有碳酸氫鈉和鹽水洗滌。合并的含水洗滌物用氯化鈉飽和，用乙酸乙酯提取。合并的有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾和濃縮。殘余物用快速硅膠柱色譜法純化，用在己烷中的50％乙酸乙酯洗脫，隨后由乙醚和石油醚中沉淀得到0.207g標(biāo)題化合物白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.20(s，1H)，8.31(d，1H)，7.17(d，1H)，7.10-6.99(m，5H)，6.88-6.78(m，3H)，6.68-6.63(m，3H)，6.03(d，1H)，5.85-5.60(br，2H)，5.42(m，1H)，5.25-4.90(br，2H)，4.55-4.49(m，1H)，4.10(q，2H)，3.02-2.89(m，2H)，2.10(s，3H)，2.08-2.04(m，4H)，1.67-1.56(m，4H)，1.16(t，3H).
C38H39N3O5+0.15C4H10O分析計(jì)算值C 72.58，H 6.25，N 6.68，測(cè)量值C 72.31，H 6.63，N 6.39。
MS[(+)-APCI，m/z]618.3[M+H]+，C38H40N3O5計(jì)算值618.2968.
實(shí)施例10(2S)-2-{[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基)-3-甲基-苯甲酰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基-羰基]-氨基}-3-(4-羥基-苯基)-丙酸將實(shí)施例9的(2S)-2-{[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羰基]-氨基}-3-(4-羥基-苯基)-丙酸乙酯(0.120g，0.199mmol)溶解在丙酮(1.3mL)中，隨后加入2.5N氫氧化鈉(0.239mL，0.597mmol)中。反應(yīng)物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，隨后用1N鹽酸酸化。酸性反應(yīng)混合物用乙醚提取，合并的有機(jī)相用1N氫氧化鈉提取。合并的含水提取物用2N鹽酸酸化，用乙醚提取。合并的提取物用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾和濃縮得到0.110g標(biāo)題化合物白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.64(br，1H)，9.18(s，1H)，8.18(d，1H)，7.17(d，1H)，7.12-7.06(m，4H)，7.01(dt，1H)，6.88-6.78(m，3H)，6.66-6.62(m，3H)，6.02(d，1H)，5.85-5.60(br， 2H)，5.42(m，1H)，5.20-4.95(br，2H)，4.53-4.48(m，1H)，3.03(dd，1H)，2.88(dd，1H)，2.10(s，3H)，2.08-2.04(m，4H)，1.67-1.54(m，4H).
C36H35N3O5+0.20C4H10OC 71.53，H 5.84，N 6.95，測(cè)量值C 71.28，H 5.84，N 6.76。
MS[(+)-APCI，m/z]590.1[M+H]+，C36H36N3O5計(jì)算值590.2658。
實(shí)施例11(2S)-2-{[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羰基]-氨基}-3-羥基-丙酸甲酯將實(shí)施例5步驟E的10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酸(0.300g，0.703mmol)，L-絲氨酸甲酯鹽酸鹽(0.131g，0.844mmol)，1-羥基苯并三唑(0.104g，0.773mmol)1-[3-二甲基氨基]丙基]-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(0.148g，0.773mmol)在無(wú)胺N，N-二甲基甲酰胺(2.8mL)中混合，隨后加入N，N-二異丙基乙胺(0.307mL，1.76mmol)。反應(yīng)物在室溫?cái)嚢?2小時(shí)，隨后用乙酸乙酯稀釋，用水、1N鹽酸、1N氫氧化鈉和鹽水洗滌。合并的含水洗滌物用氯化鈉飽和，用乙酸乙酯提取。合并的有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾和濃縮。殘余物用快速硅膠柱色譜法純化，用在氯仿中的10％甲醇洗脫，得到0.330g標(biāo)題化合物淺黃色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.10(d，1H)，7.30(dd，1H)，7.14-7.10(m，2H)，7.03(dt，1H)，6.90-6.78(m，4H)，6.07(d，1H)，6.00-5.65(br，2H)，5.42(m，1H)，5.25-4.95(br，3H)，4.52-4.47(m，1H)，3.76(d，2H)，3.66(s，3H)，2.10(s，3H)，2.10-2.05(m，4H)，1.671.56(m，4H).
C31H33N3O5+0.10H2O分析計(jì)算值C 70.33，H 6.32，N 7.94，測(cè)量值C 70.05，H 6.44，N 7.66。
MS[(+)-APCI，m/z]528.3[M+H]+，C31H34N3O5計(jì)算值528.2498。
實(shí)施例12(2R)-2-{[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羰基]-氨基}-3-羥基-丙酸甲酯0.25水合物將實(shí)施例5步驟E的10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲酰基)-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酸(0.300g，0.703mmol)，D-絲氨酸甲酯鹽酸鹽(0.131g，0.844mmol)，1-羥基苯并三唑(0.104g，0.773mmol)1-[3-二甲基氨基]丙基]-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(0.148g，0.773mmol)在無(wú)胺N，N-2甲基甲酰胺(2.8mL)中混合，隨后加入N，N-二異丙基乙胺(0.307mL，1.76mmol)。反應(yīng)物在室溫?cái)嚢?2小時(shí)，隨后用乙酸乙酯稀釋，用水、1N鹽酸、1N氫氧化鈉和鹽水洗滌。合并的含水洗滌物用氯化鈉飽和，用乙酸乙酯提取。合并的有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾和濃縮。殘余物用快速硅膠柱色譜法純化，用在氯仿中的10％甲醇洗脫，得到0.320g標(biāo)題化合物淺黃色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.10(d，1H)，7.30(dd，1H)，7.14-7.10(m，2H)，7.03(dt，1H)，6.90-6.78(m，4H)，6.07(d，1H)，6.00-5.65(br，2H)，5.42(m，1H)，5.25-4.95(br，3H)，4.52-4.47(m，1H)，3.76(d，2H)，3.66(s，3H)，2.10(s，3H)，2.10-2.05(m，4H)，1.671.56(m，4H).
C31H33N3O5+0.25H2O分析計(jì)算值C 69.97，H 6.35，N 7.90.FoundC 69.63，H 6.25；N 7.72.
MS[(+)-APCI，m/z]528.3[M+H]+，C31H34N3O5計(jì)算值528.2498.
實(shí)施例13(2S)-2-{[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羰基]-氨基}-3-羥基-丙酸將實(shí)施例12的(2S)-2-{[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羰基]-氨基}-3-羥基-丙酸甲酯(0.260g，0.493mmol)溶解在丙酮(3.3mL)中，隨后加入2.5N氫氧化鈉(0.590mL，1.48mmol)。反應(yīng)物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，用1N鹽酸酸化，用乙醚提取。合并的醚相用1N氫氧化鈉提取，堿性提取物用2N鹽酸酸化。酸化的提取物用乙醚提取，合并的提取物用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾和濃縮，得到0.210g標(biāo)題化合物白色粉末。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.60(br，1H)，7.94(d，1H)，7.31(dd，1H)，7.14(s，1H)，7.11(dt，1H)，7.03(dt，1H)，6.88(dd，1H)，6.84-6.81(m，2H)，6.77(d，1H)，6.06(d，1H)，6.00-5.75(br，2H)，5.43(m，1H)，5.25-4.90(m，3H)，4.46-4.41(m，1H)，3.76(d，2H)，2.11(s，3H)，2.10-2.05(m，4H)，1.67-1.55(m，4H)。
C30H31N3O5+0.50H2O分析計(jì)算值C 68.95，H 6.17，N 8.04，測(cè)量值C 68.77，H 6.33，N 8.01。
MS[(-)-ESI，m/z]512.4[M-H]-，C30H30N3O5計(jì)算值512.2192.
實(shí)施例14(2R)-2-{[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羰基]-氨基}-3-羥基-丙酸將實(shí)施例13的(2R)-2-{[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲酰基)-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羰基]-氨基}-3-羥基-丙酸甲酯(0.260g，0.493mmol)溶解在丙酮(3.3mL)中，隨后加入2.5N氫氧化鈉(0.590mL，1.48mmol)。反應(yīng)物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，用1N鹽酸酸化，用乙醚提取。合并的醚相用1N氫氧化鈉提取，堿性提取物用2N鹽酸酸化。酸化的提取物用乙醚提取，合并的提取物用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾和濃縮，得到0.250g標(biāo)題化合物白色粉末。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)12.60(br，1H)，7.94(d，1H)，7.31(dd，1H)，7.14(s，1H)，7.11(dt，1H)，7.03(dt，1H)，6.88(dd，1H)，6.84-6.81(m，2H)，6.77(d，1H)，6.06(d，1H)，6.00-5.75(br，2H)，5.43(m，1H)，5.25-4.90(m，3H)，4.46-4.41(m，1H)，3.76(d，2H)，2.11(s，3H)，2.10-2.05(m，4H)，1.67-1.55(m，4H)，C30H31N3O5+0.50H2O分析計(jì)算值C 68.95，H 6.17，N 8.04，測(cè)量值C 68.93，H 6.40，N 7.92。
MS[(-)-ESI，mlz]512.4[M-H]-，C30H30N3O5計(jì)算值512.2192.
實(shí)施例1510-[4-(3，4-二氫-萘-1-基)-3-甲基-苯甲?；鵠-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基]羰基]甲基氨基]-1-脫氧-D-葡糖醇半水合物步驟A.(10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-10-基)-[4-(3，4-二氫-萘-1-基)-3-甲基-苯基]-甲酮將實(shí)施例5步驟B的(10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-10-基)-[3-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)-苯基]-甲酮(0.760g，1.89mmol)，3，4-二氫-萘-1-基三氟甲磺酸酯(0.579g，2.08mmol)和二氯[1，1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]鈀(II)二氯甲烷加合物(0.0460g，0.0567mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(9.5mL)中混合。加入含水碳酸鈉(2m.4.73mL，9.45mmol)，加熱到60℃3小時(shí)。在冷卻到室溫后，混合物用乙酸乙酯稀釋，用水和鹽水洗滌。有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾和濃縮，殘余物用快速硅膠柱色譜法純化，用在己烷中的30％乙酸乙酯洗脫。由石油醚重結(jié)晶得到0.740g標(biāo)題化合物白色結(jié)晶。熔點(diǎn)108℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.46(d，1H)，7.22-6.91(m，9H)，6.93(s，1H)，6.22(d，1H)，5.95(s，1H)，5.92(t，1H)，5.84(t，1H)，5.30(br，4H)，2.77(t，2H)，2.35-2.32(m，2H)，1.88(s，3H).
C30H26N2O+0.16C6H14+0.30H2O分析計(jì)算值C 82.68，H 6.46，N6.23，測(cè)量值C 82.47，H 6.63，N 6.05。
MS[(+)-APCI，m/z]431[M+H]+，C30H27N2O計(jì)算值431.2128.
步驟B.10-[4-(3，-二氫-萘-1-基)-3-甲基-苯甲?；鵠-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酸將步驟A的(10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-10-基)-[4-(3，4-二氫萘-1-基)-3-甲基-苯基]-甲酮(0.830g，1.93mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.672mL，3.86mmol)溶解在無(wú)水二氯甲烷(9.7mL)中，滴加三氯乙酰氯(0.646mL，5.79mmol)，反應(yīng)物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。混合物用乙酸乙酯稀釋，用含水碳酸氫鈉、1N鹽酸和鹽水洗滌。有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，用己烷稀釋，通過(guò)硅膠過(guò)濾，用在己烷中的30％乙酸乙酯洗脫。濃縮濾液得到粗三氯乙酸酯，將其溶解在丙酮(12.9mL)中，用2.5N氫氧化鈉(2.32mL，5.79mmol)處理。反應(yīng)物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，用1N鹽酸(75mL)稀釋，用乙醚提取。合并的有機(jī)相用1N氫氧化鈉提取，合并的堿性提取物用2N鹽酸酸化，引起沉淀物形成。過(guò)濾沉淀，用水充分漂洗，干燥得到0.910g標(biāo)題化合物淺黃色粉末，熔點(diǎn)150-153℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.31(br，1H)，7.34(dd，1H)，7.19-7.00(m，7H)，6.92(d，1H)，6.87(d，1H)，6.75(d，1H)，6.23(d，1H)，6.10(d，1H)，5.95(br，2H)，5.85(t，1H)，5.19(br，2H)，2.78(t，2H)，2.34(br，2H)，1.88(s，3H).
C31H26N2O3+1.50H2O分析計(jì)算值C 74.23，H 5.83，N 5.58，測(cè)量值C 73.94，H 5.45，N 5.14。
MS[(+)-APCI，m/z]475[M+H]+，C31H27N2O3計(jì)算值475.2018。
步驟C.10-[4-(3，4-二氫-萘-1-基)-3-甲基-苯甲?；鵠-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基]羰基]甲基氨基]-1-脫氧-D-葡糖醇將步驟B的10-[4-(3，4-二氫-萘-1-基)-3-甲基-苯甲酰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酸(0.340g，0.716mmol)，N-甲基-D-葡糖胺(0.168g，0.859mmol)，1-羥基苯并三唑(0.106g，0.788mmol)和1-[3-二甲基氨基]丙基]-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(0.151g，0.788mmol)溶解在無(wú)胺N，N-二甲基甲酰胺(2.9mL)中，隨后加入N，N-二異丙基乙胺(0.186mL，1.07mmol)。反應(yīng)物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)，隨后用乙酸乙酯稀釋，用水、1N鹽酸、1N氫氧化鈉和鹽水洗滌。合并的含水洗滌物用氯化鈉飽和，用乙酸乙酯提取。合并的有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾和濃縮。殘余物用快速硅膠柱色譜法純化，用在氯仿中的10-50％的甲醇梯度洗脫，得到0.410g標(biāo)題化合物白色固體。
1H NMR(DMSO-d6+D2O；400MHz)δ7.38(d，1H)，7.17-6.96(m，8H)，6.91-6.85(m，2H)，6.33(br，1H)，6.18(d，1H)，6.02(br，1H)，5.81(t，1H)，5.31(br，2H)，3.90(br，1H)，3.57-3.31(m，6H)，3.04(br，3H)，2.74(t，2H)，2.36-2.25(m，2H)，1.84(s，3H).
C38H41N3O7+0.50H2O分析計(jì)算值C 69.07，H 6.41，N 6.36，測(cè)量值C 68.77，H 6.54，N 6.31。
MS[(+)-APCI，m/z]652[M+H]，C38H42N3O7計(jì)算值652.3028。
實(shí)施例16{10-[4-(3，4-二氫萘-1-基)-3-甲基-苯甲?；鵠-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基}-3-羧酸雙-(2-羥基-乙基)-酰胺將實(shí)施例15步驟B的10-[4-(3，4-二氫-萘-1-基)-3-甲基-苯甲?；鵠-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酸(0.150g，0.316mmol)，雙(2-羥基乙基)胺(0.040g，0.379mmol)，1-羥基苯并三唑(0.047g，0.348mmol)和1-[3-二甲基氨基]丙基]-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(0.067g，0.348mmol)在無(wú)胺N，N-二甲基甲酰胺(1.3mL)中混合，隨后加入N，N-二異丙基乙胺(0.083mL，0.474mmol)。反應(yīng)物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)，隨后用乙酸乙酯稀釋，用1N鹽酸、飽和含水碳酸氫鈉和鹽水洗滌。合并的含水洗滌物用氯化鈉飽和，用乙酸乙酯提取。合并有機(jī)相，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾和濃縮。殘余物用快速硅膠柱色譜法純化，用在氯仿中的7％甲醇洗脫得到0.160g標(biāo)題化合物白色固體。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.37(dd，1H)，7.19-7.00(m，7H)，6.92(d，1H)，6.88(d，1H)，6.29(d，1H)，6.23(d，1H)，6.02(d，1H)，5.84(t，1H)，5.32(s，2H)，5.31-4.98(br，2H)，4.81(t，2H)，3.55(br，8H)，2.78(t，2H)，2.32(br，2H)，1.88(s，3H)。
C35H35N3O4+0.50H2O分析計(jì)算值C 73.66，H 6.36，N 7.36，測(cè)量值C 73.42，H 6.28，N 7.41。
MS[(+)-ESI，m/z]562[M+H]+，579[M+Na]+，C35H36N3O4計(jì)算值562.2708。
實(shí)施例17{10-[4-(1-環(huán)己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲?；鶀-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基][4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪基]甲酮用實(shí)施例5步驟H的方法，用1-(2羥基乙基)-哌嗪?；瘜?shí)施例5步驟E的10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酸制備。
MS[ESI(+)，m/z]539.96[M+H]+，C33H39N4O3計(jì)算值539.3022。
權(quán)利要求
1.式(I)化合物 其中 是 R1和R2獨(dú)立地選自氫、(C1-C6)烷基、鹵素、氰基、三氟甲基、羥基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、-OCF3、(C1-C6)烷氧基羰基、-NHCO[(C1-C6)烷基]、羧基、-CONH2、-CONH(C1-C6)烷基或-CON[(C1-C6)烷基]2；R3是選自氫、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、羥基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、-CO(C1-C6)烷基或鹵素的取代基；R4由部分B-C組成；其中B選自基團(tuán) 或 和C定義為 或 其中A是CH或N；R5，R6，R7和R8獨(dú)立地選自氫、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷基羰基、(C2-C6)鏈烯基、(C2-C6)鏈炔基、羥基(C1-C6)烷基、低級(jí)烷氧基(C1-C6)烷基、(C2-C7)酰氧基(C1-C6)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、甲?；?、(C3-C8)環(huán)烷基羰基、羧基、低級(jí)烷氧基羰基、(C3-C8)環(huán)烷基氧羰基、芳基低級(jí)烷氧基羰基、氨基甲?；?O-CH2-CH＝CH2、鹵素、包括三氟甲基的鹵代低級(jí)烷基、-OCF3、-S(低級(jí)烷基)、-OC(O)N[低級(jí)烷基]2、-CONH(低級(jí)烷基)、-CON[低級(jí)烷基]2、低級(jí)烷基氨基、二-低級(jí)烷基氨基、低級(jí)烷基二-低級(jí)烷基氨基、羥基、氰基、三氟甲基硫、硝基、氨基、低級(jí)烷基磺?；被酋；⒌图?jí)烷基氨基磺?；?、苯基、萘基或 R9選自氫、(C1-C6)烷基、低級(jí)烷氧基羰基、-CON[(C1-C6)烷基]2、氰基；或任選被鹵素或(C1-C6)烷氧基取代的芳基；R10表示1-2個(gè)取代基，其獨(dú)立地選自氫、(C1-C6)烷基、低級(jí)烷基羰基、 疊氮基、氨基、-NH[低級(jí)烷基]、-N[低級(jí)烷基]2、氨基羰基低級(jí)烷基、苯二甲酰亞氨基、氰基、鹵素、硫代低級(jí)烷基、芳氧基、芳硫基、任選被1-3個(gè)選自(C1-C6)烷基、低級(jí)烷氧基或鹵素的取代基取代的芳基；羥基、低級(jí)烷氧基、-OSO2R32或OP’，其中P’是叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、羰基低級(jí)烷基、羰基三氟低級(jí)烷基、芳基低級(jí)烷基、芳基羰基、甲氧基甲基或甲硫基甲基；其前提是當(dāng)R10表示2個(gè)取代基時(shí)，2個(gè)取代基可連接在一起與和它們連接的環(huán)己烯環(huán)一起形成C7-C12雙環(huán)體系，所述C7-C12雙環(huán)體系包括但不限于，雙環(huán)[3.2.1]辛-2-烯或(6，6-二甲基)-雙環(huán)[3.2.1]庚-2-烯；和R獨(dú)立地選自任何如下基團(tuán) 其中R11選自氫、(C1-C6)烷基、(C7-C12)芳基烷基，其中芳基部分任選地由低級(jí)烷氧基取代，或選自如下基團(tuán) 或 R12選自任何如下基團(tuán) 或 R13和R14獨(dú)立地選自氫、(C1-C6)烷基或(C7-C12)芳基烷基；R15是氫或(C1-C6)烷基；R16是羥基、(C1-C6)烷氧基、或OP，其中P是羥基保護(hù)基團(tuán)；R17選自氫、(C1-C6)烷基或(C7-C12)芳基烷基；R18選自-N[低級(jí)烷基]2、或-N[芳基低級(jí)烷基]2； 或 R19是氫或(C1-C6)烷基或R27；R20選自(C1-C6)烷基、-COR16、-CONH[低級(jí)烷基]、-CON[低級(jí)烷基]2；R21是任選由1-3個(gè)選自羥基、(C1-C6)烷氧基、芳氧基低級(jí)烷基或鹵素的取代基取代的芳基；R22表示1-4個(gè)獨(dú)立地選自氫或(C1-C6)低級(jí)烷基的取代基；R23選自 R24是(C1-C6)烷基或芳基(C1-C6)烷基；R25和R26一起表示1-4個(gè)獨(dú)立地選自如下的取代基R16、R27、(C1-C6)烷基、-CONH[低級(jí)烷基]、-CON[低級(jí)烷基]2、R30、 或 條件是至少一個(gè)取代基不是(C1-C6)烷基、-[(C1-C6)烷基]2、-CONH[(C1-C6)烷基]或-CON[(C1-C6)烷基]2；和進(jìn)一步條件是R25和R26可以結(jié)合在一起形成任選被一個(gè)或多個(gè)選自R16或R27的取代基取代的5或6元飽和環(huán)；R27和R28選自羥基(C1-C6)低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基(C1-C6)低級(jí)烷基、或(C1-C6)低級(jí)烷基OP，其中P是羥基保護(hù)基團(tuán)；R29表示1-4個(gè)獨(dú)立選自R16或R27的取代基；R30是 或 R31是氫或(C1-C6)低級(jí)烷基；X和Y是CH或N；p是0-1的整數(shù)；q是2-4的整數(shù)；r是0-3的整數(shù)；s是0-2的整數(shù)；和t是1-2的整數(shù)；及其可藥用鹽，或其前藥形式。
2.下式的化合物 其中 是 或 R1和R2獨(dú)立地選自氫、(C1-C6)烷基、鹵素、氰基、三氟甲基、羥基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、-OCF3、(C1-C6)烷氧基羰基、-NHCO[(C1-C6)低級(jí)烷基]、羧基、-CONH2、-CONH(C1-C6)烷基或-CON[(C1-C6)烷基]2；R3是選自氫、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、羥基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、-CO(C1-C6)烷基或鹵素的取代基；R4由部分B-C組成；其中B選自基團(tuán) 或 和C定義為 或 其中A是CH或N；R5，R6，R7和R8獨(dú)立地選自氫、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷基羰基、(C2-C6)鏈烯基、(C2-C6)鏈炔基、羥基(C1-C6)烷基、低級(jí)烷氧基(C1-C6)烷基、(C2-C7)酰氧基(C1-C6)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、甲酰基、(C3-C8)環(huán)烷基羰基、羧基、低級(jí)烷氧基羰基、(C3-C8)環(huán)烷基氧羰基、芳基低級(jí)烷氧基羰基、氨基甲?；?O-CH2-CH＝CH2、鹵素、包括三氟甲基的鹵代低級(jí)烷基、-OCF3、-S(低級(jí)烷基)、-OC(O)N[低級(jí)烷基]2、-CONH(低級(jí)烷基)、-CON[低級(jí)烷基]2、低級(jí)烷基氨基、二-低級(jí)烷基氨基、低級(jí)烷基二-低級(jí)烷基氨基、羥基、氰基、三氟甲基硫、硝基、氨基、低級(jí)烷基磺?；?、氨基磺酰基或低級(jí)烷基氨基磺?；?；R9選自氫、(C1-C6)烷基、低級(jí)烷氧基羰基、-CON[(C1-C6)烷基]2或氰基；R10表示1-2個(gè)取代基，其獨(dú)立地選自氫、(C1-C6)烷基、低級(jí)烷基羰基、疊氮基、氨基、-NH[低級(jí)烷基]、-N[低級(jí)烷基]2、氨基羰基低級(jí)烷基、苯二甲酰亞氨基、氰基、鹵素、硫代低級(jí)烷基、芳氧基、芳硫基、羥基、低級(jí)烷氧基、-OSO2R32或OP’，其中P’是叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、羰基低級(jí)烷基、羰基三氟低級(jí)烷基、芳基低級(jí)烷基、芳基羰基、甲氧基甲基或甲硫基甲基；和R獨(dú)立地選自任何如下基團(tuán) 其中R11選自氫、(C1-C6)烷基、(C7-C12)芳基烷基，其中芳基部分任選地由低級(jí)烷氧基取代，或任何如下基團(tuán) 或 R12選自任何如下基團(tuán) 或 R13和R14獨(dú)立地選自氫、(C1-C6)烷基或(C7-C12)芳基烷基；R16是羥基、(C1-C6)烷氧基、或OP，其中P是羥基保護(hù)基團(tuán)；R17選自氫、(C1-C6)烷基或(C7-C12)芳基烷基；R18選自-N[(C1-C6)烷基]2、 或 R19是氫或R27；R20選自-COR16、-CONH[(C1-C6)烷基]、-CON[(C1-C6)烷基]2；R21是任選由1-3個(gè)選自羥基或(C1-C6)烷氧基的取代基取代的芳基；R23選自 R24是(C1-C6)烷基或芳基(C1-C6)烷基；R25和R26一起表示1-4個(gè)獨(dú)立地選自如下的取代基R16、R27、(C1-C6)烷基、-CONH[(C1-C6)低級(jí)烷基]、-CON[(C1-C6)烷基]2、R30、 或 條件是至少一個(gè)取代基不是(C1-C6)烷基、-[(C1-C6)烷基]2、-CONH[低級(jí)烷基]或-CON[低級(jí)烷基]2；和進(jìn)一步條件是R25和R26可以結(jié)合在一起形成任選被一個(gè)或多個(gè)選自R16或R27的取代基取代的5或6元飽和環(huán)；R27和R28選自羥基(C1-C6)烷基、低級(jí)烷氧基(C1-C6)烷基、或(C1-C6)烷基OP，其中P是羥基保護(hù)基團(tuán)；R29表示1-4個(gè)獨(dú)立選自R16或R27的取代基；R30是 或 R31是氫或(C1-C6)烷基；R32選自(C1-C6)烷基、三氟低級(jí)烷基或任選被低級(jí)烷基取代的芳基；X和Y是CH或N；p是0-1的整數(shù)；q是2-4的整數(shù)；r是0-3的整數(shù)；s是0-2的整數(shù)；和t是1-2的整數(shù)；及其可藥用鹽，或其前藥形式。
3.權(quán)利要求1的化合物，其選自1-[[[10-[5-氯-4-(1-環(huán)己-1-烯-1-基)-2-甲氧基苯甲?；鵠-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基]羰基]甲基氨基]-1-脫氧-D-葡糖醇；10-(5-氯-4-環(huán)己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲酰基)-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酸；10-(5-氯-4-環(huán)己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲?；?-N-甲基-N-[(2S，3R，4R，5R)-2，3，4，5，6-五甲氧基己基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酰胺；10-(5-氯-4-環(huán)己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲酰基)-N-[((4S，5S)-5-{(R)-羥基[(4R)-2-氧代-1，3-二氧戊環(huán)-4-基]甲基}-2-氧代-1，3-二氧戊環(huán)-4-基)甲基]-N-甲基-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酰胺；或10-(5-氯-4-環(huán)己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲酰基)-N-(2，3-二羥基丙基)-N-甲基-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酰胺；或其可藥用的鹽形式。
4.權(quán)利要求1的化合物，其選自10-[4-(環(huán)己-1-烯-1-基)-3-甲基-苯甲?；鵠-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基]羰基]甲基氨基]-1-脫氧-D-葡糖醇；2，2，2-三氯-1-[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基]-甲酮；10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酸；10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基苯甲?；?-N-((2S)-2-{(4R，5R)-5-[(1R)-1，2-二羥基乙基]-2-氧代-1，3-二氧戊環(huán)-4-基}-2-羥基乙基)-N-甲基-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酰胺；或10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基苯甲酰基)-N-[((4S，5S)-5-{(R)-羥基[(4R)-2-氧代-1，3-二氧戊環(huán)-4-基]甲基}-2-氧代-1，3-二氧戊環(huán)-4-基)甲基]-N-甲基-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酰胺；或其可藥用的鹽形式。
5.權(quán)利要求1的化合物，其選自10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基苯甲?；?-N-甲基-N-[(2S，3R，4R，5R)-2，3，4，5，6-五甲氧基己基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酰胺；(2S)-2-{[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羰基]-氨基}-3-(4-羥基-苯基)-丙酸乙酯；(2S)-2-{[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基)-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基]羰基]-氨基}-3-(4-羥基-苯基)-丙酸；(2S)-2-{[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羰基]-氨基}-3-羥基-丙酸甲酯；或(2R)-2-{[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲酰基)-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羰基]-氨基}-3-羥基-丙酸甲酯；或其可藥用的鹽形式。
6.權(quán)利要求1的化合物，其選自(2S)-2-{[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羰基]-氨基}-3-羥基-丙酸；(2R)-2-{[10-(4-環(huán)己-1-烯-1-基-3-甲基-苯甲?；?-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羰基]-氨基}-3-羥基-丙酸；10-[4-(3，4-二氫-萘-1-基)-3-甲基-苯甲?；鵠-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基]羰基]甲基氨基]-1-脫氧-D-葡糖醇；10-[4-(3，4-二氫-萘-1-基)-3-甲基-苯甲?；鵠-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-羧酸；{10-[4-(3，4-二氫-萘-1-基)-3-甲基-苯甲酰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基}-3-羧酸雙-(2-羥基-乙基)-酰胺；或{10-[4-(1-環(huán)己烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基}[4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪基]甲酮；或其可藥用的鹽形式。
7.一種在哺乳動(dòng)物中治療被催產(chǎn)素拮抗劑活性治療或減緩的疾病的方法，該方法包括向需要治療的哺乳動(dòng)物給用制藥有效量的權(quán)利要求1-6的任何一項(xiàng)的化合物或其可藥用的鹽或其前藥形式。
8.權(quán)利要求7的方法，其中被催產(chǎn)素拮抗劑活性治療或減緩的疾病是痛經(jīng)。
9.權(quán)利要求7的方法，其中被催產(chǎn)素拮抗劑活性治療或減緩的疾病是子宮內(nèi)膜炎。
10.一種在哺乳動(dòng)物中治療或預(yù)防早產(chǎn)的方法，該方法包括向需要治療或預(yù)防的哺乳動(dòng)物給用制藥有效量的權(quán)利要求1-6的任何一項(xiàng)的化合物或其可藥用的鹽或其前藥形式。
11.一種在哺乳動(dòng)物中在剖腹產(chǎn)分娩前抑制分娩的方法，該方法包括向需要抑制的哺乳動(dòng)物給用制藥有效量的權(quán)利要求1-6的任何一項(xiàng)的化合物或其可藥用的鹽或其前藥形式。
12.一種藥物組合物，其含有權(quán)利要求1-6的任何一項(xiàng)的化合物或其可藥用的鹽或其前藥形式和可藥用的載體或賦形劑。
全文摘要
本發(fā)明提供取代的10，11－二氫－5H－苯并[e]－吡咯并－[1，2－a][1，4]二氮雜和9，10－二氫－4H－3a，5，9－三氮雜－苯并[f]甘菊環(huán)化合物以及利用這些化合物治療和/或預(yù)防和/或抑制可由催產(chǎn)素拮抗劑活性治療或減緩的疾病的方法和藥物組合物，包括預(yù)防和/或抑制早產(chǎn)、抑制在剖腹產(chǎn)足月之前的分娩和治療痛經(jīng)。這些化合物還可用于提高農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物的生育率、改善存活率和發(fā)情期的同步化。
文檔編號(hào)A61P43/00GK1501929SQ02808026
公開(kāi)日2004年6月2日 申請(qǐng)日期2002年4月11日 優(yōu)先權(quán)日2001年4月12日
發(fā)明者阿米德·阿圖羅·法伊利, 威廉·詹寧斯·桑德斯, 尤金·約翰·特雷布爾斯基, 約翰 特雷布爾斯基, 詹寧斯 桑德斯, 阿米德 阿圖羅 法伊利 申請(qǐng)人:惠氏公司