專利名稱：兒茶素在制備具有預(yù)防和/或治療全血細(xì)胞減少癥的產(chǎn)品中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，主要涉及從天然植物中提取得到的和/或化學(xué)合成中獲得的兒茶素(catechin)和其同分異構(gòu)體表兒茶素(epicatechin)的藥物新用途，具體涉及它們在制備治療全血細(xì)胞(包括白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板)減少癥藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
對于兒茶素的研究已有文獻報道，其中有關(guān)兒茶素的治療作用報道可以概括為抗癌、清除氧自由基、抗氧化、調(diào)節(jié)機體免疫、抗血小板聚集等作用[1-10]。但到目前為止，尚未見有關(guān)兒茶素或表兒茶素用于治療全血細(xì)胞(包括白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板)減少癥的藥物的應(yīng)用。
癌癥病人在放、化療過程中，由于大量的化學(xué)藥物以及射線對骨髓的損害，使得病人的造血功能受到嚴(yán)重抑制，全血細(xì)胞，包括白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板均有不同程度地下降；再生障礙性貧血等血液系統(tǒng)疾病患者，由于機體自身造血功能發(fā)生障礙，其全血細(xì)胞也會明顯減少。全血細(xì)胞減少會導(dǎo)致人體免疫力下降，抵抗力減弱，易發(fā)生嚴(yán)重感染、重度貧血、大出血等嚴(yán)重并發(fā)癥，對于癌癥患者，有時不得不因此中斷治療。目前臨床促進造血功能恢復(fù)的藥物治療方法是采用基因重組的造血細(xì)胞生長因子(如Epo、GM-CFS等)，但費用非常昂貴(患者需花費1-2萬元人民幣/月)，而且還有引起腫瘤及自身性免疫疾病的副作用，臨床使用受到較的的限制。因此，尋找具有我國特色促進骨髓造血功能的藥物具有十分重要的意義。
我們的研究表明，兒茶素(catechin)或表兒茶素(epicatechin)對于治療各種原因引起的全血細(xì)胞(包括白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板)減少癥具有較好的治療作用，而且資源豐富、價格合理、無任何毒副作用，發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供兒茶素(catechin)或表兒茶素(epicatechin)的一種新的醫(yī)療用途，即兒茶素在制備治療全血細(xì)胞(包括白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板)減少癥的藥物的應(yīng)用。
本發(fā)明的兒茶素或表兒茶素是一種藥物活性成分，按照常規(guī)的制劑工藝，可以以兒茶素為主活性組份，加入常規(guī)的賦性劑、調(diào)味劑、崩解劑、防腐劑、潤滑劑、濕潤劑、粘合劑、溶劑、增稠劑、增溶劑等藥物輔料，制成任何一種適合于臨床上使用的劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液體制劑、注射劑等。
由于本發(fā)明首次公開了兒茶素或表兒茶素治療全血細(xì)胞(包括白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板)減少癥的藥用作用，因此，將兒茶素或表兒茶素單獨或與其他活性組份或輔料配合制成藥劑，只要是該藥劑用于治療全血細(xì)胞(包括白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板)減少癥，均屬于本發(fā)明的保護范圍。
本發(fā)明的兒茶素或表兒茶素在制成任何一種劑型時，均具有治療全血細(xì)胞(包括白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板)減少癥的作用。任何藥劑，如果其組份中含有兒茶素或表兒茶素或僅以兒茶素或表兒茶素的單獨成分制備成藥，在其包裝或說明書等標(biāo)識上或者在其他任何宣傳品上只要注明或提示具有治療全血細(xì)胞(包括白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板)減少癥的作用，也屬于本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
本發(fā)明的兒茶素或表兒茶素是來源于民間常用的天然中草藥物雞血藤(Spatholobussuberectus Dunn)。因此，也可以將兒茶素或表兒茶素制成保健食品或保健藥品。將兒茶素或表兒茶素制成的保健食品或保健藥品，如果在其包裝或包裝或說明書等標(biāo)識上注明或提示具有治療全血細(xì)胞(包括白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板)減少癥的作用，也屬于本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
實施例1配方兒茶素125克、藥用淀粉875克將上述組份入攪拌機，充分?jǐn)嚢杌靹颍媚z囊機裝膠囊，每粒裝填1克，制得兒茶素膠囊1000粒，每粒膠囊含兒茶素125毫克。
實施例2兒茶素62.5克、蒸餾水1000毫升將兒茶素溶于蒸餾水中，充分混勻，用罐裝機裝入玻璃瓶中，每瓶裝10毫升，滅菌，制得兒茶素注射劑。
實施例3雞血藤活性成分兒茶素對骨髓抑制小鼠造血祖細(xì)胞增殖的作用材料和方法昆明種小鼠，雌雄各半，將小鼠隨機分為正常組、對照組(小鼠經(jīng)60CO γ射線全身亞致死量輻射后不給藥，)、兒茶素給藥組(三個劑量組，高劑量0.4mg.mL-1、中劑量0.08mg.mL-1、低劑量0.016mg.mL-1)。除正常組小鼠外，其余小鼠以60CO γ射線全身亞致死量輻射(照射率210.6倫/分；照射劑量400拉德；照射時間1分50.7秒)，于照射后當(dāng)天正常組和對照組口服無菌注射用水，兒茶素組口服各劑量，每日1次，連續(xù)給藥21天。在給藥后第3，7，14，21天時分別采尾靜脈血，用全自動血象分析儀測定各組動物的血象，并頸椎脫位法處死小鼠，收集股骨骨髓細(xì)胞培養(yǎng)。
粒單系祖細(xì)胞(CFU-GM)培養(yǎng)培養(yǎng)體系為RPIM-1640培養(yǎng)液、馬血清、GM-CSF。加骨髓有核細(xì)胞1×105mL-1，置于37℃水浴預(yù)熱15min，加入煮沸溶化的瓊脂(終濃度0.2％)混勻后每皿注入1.0mL，于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6天觀察CFU-GM計數(shù)，多于50個細(xì)胞為1個集落。
紅系祖細(xì)胞(CFU-E、BFU-E)培養(yǎng)培養(yǎng)體系為二巰基乙醇，L-谷氨酰胺，馬血清，EPO，BPA，rhIL-1，rhIL-3，rhIL-11。加骨髓有核細(xì)胞5×104.0.2mL-1，混勻后每孔加入0.2mL，同樣培養(yǎng)條件下于3天觀察CFU-E(多于8個細(xì)胞為1個集落)，7天觀察BFU-E(多于50個細(xì)胞為1個集落)。
巨核系祖細(xì)胞(CFU-Meg)培養(yǎng)培養(yǎng)體系為二巰基乙醇，L-谷氨酰胺，馬血清，EPO，BPA，rhIL-1，rhIL-3，rhIL-1 1。加骨髓有核細(xì)胞2×104.0.2mL-1，混勻后每孔加入0.2mL，同樣培養(yǎng)條件下于7天觀察CFU-Meg。
結(jié)果給予60COγ射線照射后，服用兒茶素的動物血象降低得到明顯的保護作用；另外，兒茶素組造血祖細(xì)胞培養(yǎng)的CFU-GM集落生長比較旺盛，而骨髓抑制對照組，無論是疏散型還是密集型CFU-GM集落形成的細(xì)胞數(shù)較少，只可以被定義為“叢”。對于BFU-E、CFU-E、CFU-Meg、CFU-Mix的觀察表明，雞血藤活性成份治療組顯微鏡下均可見到生長形態(tài)良好的集落，而骨髓抑制對照組未見到細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞呈現(xiàn)“自融”。(參見表和圖)表4-1.兒茶素對正常及骨髓抑制小鼠WBC、RBC、PLT動態(tài)觀察兒茶素治療組 骨髓抑制組正常組(n＝10) (n＝10) (n＝10)治 WBC(×109/L) 0.80±0.09*# 0.30±0.10* 12.32±1.98療 RBC(×1012/L)8.50±0.688.36±0.379.63±0.243d PLT(×109/L) 475.80±75.14 441.30±82.55 443.75±54.43治 WBC(×109/L) 3.42±0.96*# 0.92±0.34* 9.80±1.35療 RBC(×1012/L)7.11±0.456.73±0.72* 9.62±0.417d PLT(×109/L) 412.42±56.38 398.36±69.43 529.31±74.29治 WBC(×109/L) 4.67±1.04*# 1.71±0.39* 10.11±2.52療 RBC(×1012/L)6.14±0.23* 5.86±0.44* 8.81±1.0310d PLT(×109/L) 287.63±82.39*240.60±45.33*484.39±69.25治 WBC(×109/L) 6.92±0.79*# 4.04±1.58* 9.33±1.51療 RBC(×1012/L)6.36±0.37*# 4.45±1.24* 9.13±0.4014d PLT(×109/L) 333.34±52.09*# 193.87±37.91 467.00±36.24治 WBC(×109/L) 8.24±0.74# 5.20±1.67* 9.93±1.69療 RBC(×1012/L)7.67±0.56* 7.07±1.05* 8.74±0.4921d PLT(×109/L) 508.11±46.96#387.25±66.25 550.43±41.72*表示與正常組相比P＜0.01，#表示與骨髓抑制組相比P＜0.01。
兒茶素對各組小鼠造血祖細(xì)胞培養(yǎng)的影響第一次培養(yǎng) CFU-GM CFU-EBFU-E CFU-Meg CFU-Mix(集落數(shù)/105BMC)(集落數(shù)/5×104BMC) (集落數(shù)/5×104BMC)(集落數(shù)/2×104BMC) (集落數(shù)/2×104BMC)正常組 136.00±21.71 166.37±17.8120.71±3.019.42±3.1611.71±4.30骨髓抑制組 0.68±0.44* 12.38±3.97* 0.37±0.17*0.78±0.17* 0*兒茶素7天組8.80±3.05*#66.00±15.73*# 3.00±0.92*# 1.28±0.35*# 3.57±0.73*#第二次培養(yǎng)正常組 192.30±14.78 178.86±19.5021.88±6.2911.50±2.67 15.75±5.18骨髓抑制組 5.90±1.44* 44.12±7.45* 0.88±0.33*1.12±0.10* 1.38±0.15*兒茶素14天組 17.90±1.31*# 101.25±4.82*# 3.00±1.00*# 3.14±1.12*# 5.14±1.64*#第三次培養(yǎng)正常組 190.74±11.14 179.26±14.3059.62±6.8425.57±2.07 47.88±5.36骨髓抑制組 83.80±9.89*69.35±7.94* 11.71±1.50* 6.88±0.90* 19.00±2.61*兒茶素21天組 152.20±6.27*# 157.64±9.28*# 37.75±8.01*# 17.00±1.79*# 30.50±4.32*#*表示與正常組相比P＜0.01，#表示與骨髓抑制組相比P＜0.01。
結(jié)論研究結(jié)果表明，服用兒茶素的動物血象降低得到明顯的保護作用，效果好于陽性對照藥升白胺，骨髓抑制急性期(給藥后7天)時造血祖細(xì)胞內(nèi)在增殖活力是很低的，但兒茶素治療組祖細(xì)胞增殖活力仍明顯高于骨髓抑制小鼠組。由此可見，兒茶素在骨髓抑制急性期可緩解小鼠的造血祖細(xì)胞內(nèi)源性增殖缺陷。在骨髓抑制恢復(fù)期(給藥后14、21天)，骨髓抑制組小鼠的CFU-GM、BFU-E、CFU-E、CFU-Meg、CFU-Mix的數(shù)量均升高，兒茶素治療組的集落數(shù)量提高更為明顯，與骨髓抑制組比較有顯著性差異，說明其可以加速造血祖細(xì)胞增殖活力的恢復(fù)。此外，當(dāng)兒茶素的劑量高于臨床用量50倍時，動物未發(fā)生任何毒性反應(yīng)。
綜上所述，兒茶素不僅能夠增加照射后骨髓抑制小鼠造血干/祖細(xì)胞的數(shù)量，而且可以增加其增殖、分化的能力，從而彌補造血干/祖細(xì)胞由于輻射所致的量和質(zhì)的缺陷，最終使三系血細(xì)胞(WBC、RBC、PLT)水平恢復(fù)。
實施例4兒茶素對放、化療病人白細(xì)胞作用的觀察材料和方法將20例惡性腫瘤患者隨機分為兩組。實驗組10例。其中化療病人6例，放療病人4例。年齡32-68歲(平均45歲)。病種有食管癌、卵巢癌、乳腺癌；對照組10例，其中化療病人7例，放療病人3例。
放、化療前，查病人白細(xì)胞數(shù)作為起點基數(shù)。放、化療開始同時實驗組服用兒茶素125mg，每天3次，連服3周，對照組服用升白胺，全部患者于3、7、10、14、21日查血常規(guī)1次，觀察全血細(xì)胞(包括白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板)的下降率，最后計算平均下降率，與對照組相比較。組間比較采用t檢驗。
結(jié)果表1 白細(xì)胞遞減率(％)組別第3日 第7日 第10日 第14日第21日平均下降率實驗組 20 15 16 7 5 12.6對照組 32 30 29 161023.4
表2 紅細(xì)胞遞減率(％)組別 第3日 第7日 第10日 第14日 第21日平均下降率實驗組11 20 26 20 1217.8對照組13 30 35 50 2027表3 血小板遞減率(％)組別 第3日 第7日 第10日 第14日 第21日總下降率實驗組0 22 30 28 7.6 17.5對照組0.525 40 48 2928.5結(jié)論我們的研究表明，兒茶素可使放、化療及血液系統(tǒng)疾病病人全血細(xì)胞(包括白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板)的遞減率降低，使之維持在一定水平上，緩解造血祖細(xì)胞的內(nèi)源性增殖缺陷，可保證放、化療的順利進行。
兒茶素升高全血細(xì)胞(包括白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板)作用的原理古方記載雞血藤有“去淤血，生新血”之功效，它可活血化淤、補血養(yǎng)血，是臨床常用的活血補血藥物。我們的研究發(fā)現(xiàn)，兒茶素是雞血藤中含量最多、活性最強的單體化合物，可從多方面改善機體骨髓造血功能，刺激機體產(chǎn)生某些可以影響造血祖細(xì)胞增殖、分化的生物活性物質(zhì)，刺激造血祖細(xì)胞的增殖，從而從根本上緩解機體造血祖細(xì)胞的內(nèi)源性增殖缺陷，明顯降低血細(xì)胞減少的發(fā)生率和減少的幅度。
綜上所述，兒茶素能從根本刺激骨髓抑制小鼠造血干/祖細(xì)胞的數(shù)量，而且還可以增加其增殖、分化的能力，因此兒茶素用于各種原因引起的骨髓造血功能受到抑制而全血細(xì)胞減少的患者，如放、化療的癌癥病人及血液系統(tǒng)疾病的病人均有明顯治療作用。
參考文獻1中國專利公開號961956052中國專利公開號988117683中國專利公開號001123914中國專利公開號001163955中國專利公開號0180035權(quán)利要求
1.兒茶素在制備治療全血細(xì)胞減少癥產(chǎn)品中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中的兒茶素是指從天然植物中提取得到的和/或化學(xué)合成中獲得的兒茶素(catechin)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中的兒茶素包括兒茶素的同分異構(gòu)體表兒茶(epicatechin)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，全血細(xì)胞減少癥是指全血細(xì)胞減少白細(xì)胞減少、紅細(xì)胞減少和血小板減少的病癥。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中所指的全血細(xì)胞減少癥是指各種原因引起的骨髓造血功能受到抑制而全血細(xì)胞減少的患者，如放、化療的癌癥病人、再生障礙性貧血等血液系統(tǒng)疾病及各種原因引起的全血細(xì)胞減少癥。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中所說的產(chǎn)品是指治療全血細(xì)胞減少癥的藥品、保健藥品、保健食品和其他保健品。
全文摘要
本發(fā)明公開了兒茶素(catechin)和其同分異構(gòu)體表兒茶素(epicatechin)的藥物新用途，具體涉及它們在制備預(yù)防和/或治療全血細(xì)胞減少癥產(chǎn)品中的應(yīng)用。兒茶素(catechin)或表兒茶素(epicatechin)對于治療各種原因引起的全血細(xì)胞(包括白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板)減少癥具有較好的治療作用，其機制在于能夠增加骨髓造血功能抑制的小鼠的造血干/祖細(xì)胞數(shù)量，并增加其增殖、分化的能力，最終使三系血細(xì)胞(白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板)水平恢復(fù)。
文檔編號A61K31/352GK1485032SQ0213097
公開日2004年3月31日 申請日期2002年9月23日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月23日
發(fā)明者屏 劉, 劉屏, 陳若蕓, 陳孟莉, 崔艷君, 王東曉 申請人:中國人民解放軍總醫(yī)院, 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所