專利名稱：一種用于治療男性不育的復(fù)方組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于治療男性不育的復(fù)方組合物，尤其涉及一種由精氨酸與硫酸鋅組合的用于治療男性不育的復(fù)方組合物。
男性不育的原因雖然復(fù)雜，但以精子數(shù)目不足、精子質(zhì)量差最為突出和普遍，目前研究和生產(chǎn)提高男性精子數(shù)目和質(zhì)量的治療藥物比較小，人類精漿中游離氨基酸參與精子的代謝，是精子能量補(bǔ)充源，能促進(jìn)精子的活性。氨基酸又具有螯合作用，能結(jié)合有毒的金屬離子，對精子起保護(hù)作用。氨基酸還參與激素酶和其他活性物質(zhì)的合成。若氨基酸不足影響上述物質(zhì)的合成和更新，勢必導(dǎo)致精子生成障礙。最近有研究證實(shí)，精氨酸具有刺激垂體釋放促性腺激素的作用，口服精氨酸不僅可以改善精子的數(shù)量，而且可以提高精子的質(zhì)量，故可以作為治療精液量不足和少、弱、畸形精子癥所致的男性不育。因此現(xiàn)在市場上也由以精氨酸為主要成分的單方藥物，但治療效果不理想。
本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的它主要由精氨酸和硫酸鋅組成，精氨酸與硫酸鋅的比例是從4.62∶1至19.24∶1。
上述所述的精氨酸與硫酸鋅的比例可以是從4.62∶1至11∶1。
上述所述的精氨酸與硫酸鋅的比例可以是從13.47∶1至19.24∶1。
上述所述的精氨酸與硫酸鋅的比例可以是從11∶1至19.24∶1。
上述所述的精氨酸與硫酸鋅的比例可以是從6.6∶1至19.24∶1。
上述所述的精氨酸與硫酸鋅的比例可以是從9.44∶1至19.24∶1。
上述所述的精氨酸與硫酸鋅的比例可以是從4.62∶1至13.47∶1。
上述所述的精氨酸與硫酸鋅的比例可以是從6.6∶1至13.47∶1。
本實(shí)用新型與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)大大提高了精子的數(shù)量和質(zhì)量，即提高了精子的活動(dòng)率和活動(dòng)力，降低了精子畸形率，毒副性較小，相對于單方的精氨酸藥物和單方硫酸鋅藥物其治療效果更加好，詳細(xì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見實(shí)驗(yàn)1。
鋅對人體的健康影響十分重大，無論是嬰兒、兒童、青少年、成年人還是老年人，都不能缺鋅或失鋅，尤其是對性發(fā)育方面，更為突出。而在男性不育中，鋅對精子的數(shù)量、活力、活動(dòng)率、精子畸形及精液的液化等問題上，都起著極大的影響。
人類精漿中游離氨基酸參與精子的代謝，是精子能量補(bǔ)充源，能促進(jìn)精子的活性。氨基酸又具有螯合作用，能結(jié)合有毒的金屬離子，對精子起保護(hù)作用。氨基酸還參與激素酶和其他活性物質(zhì)的合成。若氨基酸不足影響上述物質(zhì)的合成和更新，勢必導(dǎo)致精子生成障礙。最近有研究證實(shí)，精氨酸具有刺激垂體釋放促性腺激素的作用，口服精氨酸不僅可以改善精子的數(shù)量，而且可以提高精子的質(zhì)量，故可以作為治療精液量不足和少、弱、畸形精子癥所致的男性不育。
本發(fā)明的制備方法如下1、依處方量稱取硫酸鋅及淀粉，兩者混合后進(jìn)行研磨，并過80目篩。
2、將精氨酸、磷酸氫鈣、微粉硅膠分別過60目篩，備用。
3、稱取磷酸氫鈣并分二次與步驟(1)的得到物質(zhì)充分混合均勻。
4、按處方量稱取精氨酸，并與步驟(3)得到的物質(zhì)充分混合均勻，最后加微粉硅膠混勻，過20目篩。
5、依理論粒重按膠囊生產(chǎn)工藝進(jìn)行操作即行。
用硫酸鋅加精氨酸組成的復(fù)方，用于治療男性不育癥患者，以提高精子數(shù)量和精子質(zhì)量。經(jīng)一系列的藥理、藥效、毒理等試驗(yàn)和臨床應(yīng)用后，證明療效比較理想，且復(fù)方優(yōu)于單方。因此，復(fù)方精氨酸膠囊的組方有充分的科學(xué)依據(jù)，應(yīng)用于男性不育治療有肯定的療效，且毒副作用非常小，對病患者是一個(gè)福音，將會(huì)生產(chǎn)巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
實(shí)驗(yàn)11.精氨酸、硫酸鋅單方和精安原方對正常雄性小鼠及CTX模型雄性小鼠的生精和提高精子質(zhì)量的影響精氨原方是由220mgD精氨酸和20mg的硫酸鋅組成的復(fù)方組合物。1.1目的在精安復(fù)方原方的基礎(chǔ)上探索不同劑量的精氨酸及硫酸鋅對雄性小鼠(包括正常小鼠和環(huán)磷酰胺引起的精子減少模型的小鼠)的生精作用、提高精子質(zhì)量及對雄性性器官的影響，尋找單方最佳劑量，為設(shè)計(jì)精安復(fù)方最佳配方提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。同時(shí)設(shè)“精安膠囊”原復(fù)方與單比較，從而獲取復(fù)方是否優(yōu)于單方的信息。1.2動(dòng)物與藥物1.2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性NIH種小鼠，體重18～25g，合格證號(hào)98A030，由廣東省醫(yī)用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.3試驗(yàn)方法1.3.1實(shí)驗(yàn)對照組和病理模型正常對照組1％羧甲基纖維素鈉組(0.4ml/10g體重)；陽性對照組(用甲基睪丸酮作陽性對照藥物依據(jù)甲基睪丸酮屬雄激素，能促進(jìn)男性性器官發(fā)育，可提高精子數(shù)量和活力[2、14、15]，文獻(xiàn)報(bào)道可見劑量為20mg/kg體重甲基睪丸酮作生精作用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的陽性對照藥物是成功的[7]。)病理模型用環(huán)磷酰胺(簡稱CTX)1.2.2實(shí)驗(yàn)藥物精氨酸(批號(hào)980701)，上?？颠_(dá)氨基酸廠產(chǎn)品。硫酸鋅(批號(hào)980103-1)，廣州化學(xué)試劑廠產(chǎn)品。精安膠囊(批號(hào)980701；精氨酸220mg和硫酸鋅20mg/膠囊；11∶1組合；以下稱精安原方)，中山市三才醫(yī)藥集團(tuán)提供。甲基睪丸酮片(批號(hào)980701甲)，上海中國信誼藥廠產(chǎn)品。臨用前把藥物研磨成粉末，用1％羧甲基纖維素鈉(用蒸餾水配制)配成所需其藥物濃度混懸液，上述灌胃的各藥在小鼠每次灌胃容量為0.4ml/10g體重。環(huán)磷酰胺(CTX；批號(hào)980607)，上海華聯(lián)制藥有限公司的產(chǎn)品。臨用前用注射用水配成2mg/ml的注射液。建立病理模型，依據(jù)是Schilky等發(fā)現(xiàn)，當(dāng)環(huán)磷酰胺的累計(jì)劑量達(dá)6～10g時(shí)可致無精，而較低劑量時(shí)可使生精功能降低[12、13]。附CTX模型建立方法預(yù)試的結(jié)果表明，CTX 20mg/kg ip，Qd，連續(xù)5天，可造成小鼠精子減少。但停止用藥后的21天，小鼠睪丸生精功能已有所恢復(fù)。與正常小鼠相比精子減少不明顯。為此，每天ipCTX 20mg/kg，連續(xù)用5天，以后每隔6天ipCTX 20mg/kg一次，連續(xù)給藥3次，可成功地建立小鼠精子減少模型。
1.3.2分組、給藥和解剖雄性小鼠180只，18～22g，隨機(jī)分18組。
1.3.2.1對正常雄性小鼠的影響第1組～第9組為正常小鼠，按表1.1的分組和劑量ig給藥，Qd×21d，在末次給藥后的第二天解剖各組實(shí)驗(yàn)小鼠。
表1.1正常小鼠分組和給藥劑量
1.3.2.2對CTX模型小鼠的影響第10組～第18組為CTX引起精子減少和質(zhì)量下降的模型小鼠(建立模型的方法見1.3.1)，每組分別ip(CTX)20mg/kg，Qd×5d，(各組在連續(xù)ipCTX 5天后，以后每隔6天ip CTX 20mg/kg一次，連續(xù)三次。)實(shí)驗(yàn)的第六天開始按表1.2的組別和劑量ig給藥，Qd×21d，在末次給藥后的第二天解剖各組實(shí)驗(yàn)小鼠。
表1.2 CTX模型小鼠分組和給藥劑量
1.3.3精子數(shù)、精子活動(dòng)率和精子活動(dòng)力及畸形率檢測方法[13、16～18]在末次給藥后的第二天將實(shí)驗(yàn)的雄性小鼠處死，取左側(cè)附睪稱重，參照Ficsor等人方法[16]，取左側(cè)附睪在含2ml磷酸緩沖生理鹽水的直徑5cm平皿中，剪碎制成精子懸液，置37±1℃水浴中15分鐘使其充分游離，然后將精子懸液一滴滴于玻片上，在室溫(20～25C)下，高倍鏡下觀察200個(gè)精子數(shù)，計(jì)算精子活動(dòng)百分率。另取0.1ml精液放入含1.9ml 5％碳酸氫鈉試管內(nèi)，搖勻，于計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)精子數(shù)。另取1滴精液于玻片上涂片，觀察精子形態(tài)并統(tǒng)計(jì)精子畸形百分率。1.3.4數(shù)據(jù)處理方法動(dòng)物體重、精子數(shù)和器官系數(shù)用t檢驗(yàn)，精子活動(dòng)率、精子活動(dòng)力、精子畸形率用x2檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果中比較各組的各項(xiàng)指標(biāo)，增加數(shù)或減少數(shù)的百分?jǐn)?shù)的計(jì)算方法是增加或減少的數(shù)占被比較數(shù)的百分?jǐn)?shù)。1.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果各組小鼠進(jìn)食、行為、體態(tài)均正常。
第1～9組(包括對照組及正常小鼠各給藥組)的小鼠體重增長正常(見表1-A)；毛色有光澤；睪丸大小正常(睪丸與附睪系數(shù)見表1-E)；精子數(shù)、活動(dòng)率、活動(dòng)力和精子畸形率(見表1-C)。
第10～18組(CTX模型組)小鼠體重增長情況(見表1-B)、睪丸大小均與對照組相似(睪丸與附睪系數(shù)見表1-F)，但毛色缺光澤，精子數(shù)、活動(dòng)率、活動(dòng)力和精子畸形率(見表1-D)。1.4.1對正常組實(shí)驗(yàn)小鼠精子和睪丸與附睪的影響(1)精安原方組(第9組)與對照組(第1組)相比，小鼠精子數(shù)增加35.4％(P＜0.05)，精子活動(dòng)率升高15.0％(P＜0.05)，3級(jí)精子活動(dòng)力升高5.0％(P＞0.05)。
(2)小鼠分別給予精氨酸280mg/kg(第2組)、430mg/kg(第3組)及660mg/kg(第4組)，小鼠精子數(shù)分別較對照組(第1組)增加3.0％、9.2％及16.9％。但與對照組相比，差異不顯著(P＞0.05)。各組精子活動(dòng)率及3級(jí)精子活動(dòng)力與對照組相似。提示單獨(dú)服用精氨酸對小鼠有生精作用，但其效果不如精安原方好。
(3)小鼠分別給予硫酸鋅46mg/kg(第5組)、70mg/kg(第6組)、108mg/kg(第7組)。與對照組(第1組)相比，各組精子數(shù)分別增加29.2％(P＜0.05)、30.8％(P＜0.05)、32.2％(P＜0.05)。各組精子活動(dòng)率及3級(jí)精子活動(dòng)力與對照組相似。提示單用硫酸鋅能明顯地劑量依賴性地促進(jìn)精子的生成，但其效果仍較精安原方略低。
(4)小鼠給予甲基睪丸酮(第8組)，與對照組(第1組)相比，小鼠精子數(shù)增加27.7％(P＜0.05)，精子活動(dòng)率升高10％(P＞0.05)，3級(jí)精子活動(dòng)力與對照組相似。
(5)給予不同劑量精氨酸，硫酸鋅或甲基睪丸酮能降低精子畸形率，但因?qū)φ战M小鼠畸形率很低(1.2±0.6％)，故意義不大。
(6)對正常小鼠，給予不同劑量精氨酸，硫酸鋅及精安原方、甲基睪丸酮對小鼠睪丸系數(shù)及附睪系數(shù)均無影響(P＞0.05)。1.4.2對CTX模型組損傷小鼠精子和睪丸與附睪的影響(1)1％羧甲基纖維素鈉+CTX組(第10組)與正常對照組(第1組)相比，小鼠精子數(shù)降低32.3％(P＜0.05)，精子活動(dòng)率降低30.2％(P＜0.01)，3級(jí)精子活動(dòng)率降低31.7％(P＜0.01)，精子畸形率增加66.7％(P＜0.01)。
(2)精安原方組(第18組)與CTX組(第10組)相比，精子數(shù)增加56.8％(P＜0.01)，精子活動(dòng)率升高53.5％(P＜0.01)，3級(jí)精子活動(dòng)率升高60.0％(P＜0.01)。
(3)小鼠分別給予精氨酸280mg/kg(第11組)、430mg/kg(第12組)及660mg/kg(第13組)后，精子數(shù)分別增加36.4％(P＜0.05)、40.9％(P＜0.05)、47.7％(P＜0.05)，精子活動(dòng)率升高12.2％(P＞0.05)、15.7％(P＞0.05)、20.5％(P＞0.05)，3級(jí)精子活動(dòng)力亦分別增加6.4％(P＞0.05)、11.4％(P＞0.05)、29.6％(P＞0.05)。
(4)小鼠分別給予硫酸鋅46mg/kg(第14組)、70mg/kg(第15組)、108mg/kg(第16組)后，精子數(shù)分別增加50.0％(P＜0.05)、52.3％(P＜0.05)、50.0％(P＜0.05)，精子活動(dòng)率升高27.2％(P＜0.05)、20.5％(P＞0.05)、15.4％(P＞0.05)。
(5)小鼠給予甲基睪丸酮(第16組)，精子數(shù)增加95.5％(P＜0.01)，精子活動(dòng)率升高52.3％(P＜0.01)。
(6)給予不同劑量精氨酸、硫酸鋅、精安原方、甲基睪丸酮后，小鼠精子畸形率均有所降低。各用藥組與CTX模型組即第10組比較，精子畸形率降低55.0％～80.0％(P＜0.01)。
(7)在小鼠CTX模型組(第10～18組)與對照組(第1組)相比，小鼠睪丸系數(shù)及附睪系數(shù)兩組相似(P＞0.05)。1.5小結(jié)(1)小鼠分別ig給予精氨酸280、430及660mg/kg對CTX引起精子減少模型小鼠有較明顯的促進(jìn)精子生成作用，基本呈現(xiàn)量效關(guān)系。分別使精子數(shù)增加36.4％(P＜0.05)、40.9％(P＜0.05)、47.7％(P＜0.05)。上述3個(gè)劑量精氨酸對正常雄性小鼠也有一定促進(jìn)精子生成作用，但其效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)不如對CTX模型小鼠好。對正常小鼠和CTX模型小鼠生精作用和提高精子質(zhì)量，精氨酸660mg/kg劑量的效果較其他的劑量為優(yōu)。
(2)雄性小鼠分別給予硫酸鋅46、70、108mg/kg后，顯示出生精作用和提高精子質(zhì)量，使正常小鼠精子數(shù)增加29.2～32.2％。使給CTX后小鼠精子數(shù)增加50.0～52.3％，對正常小鼠或給CTX小鼠精子活動(dòng)率亦有所增加。其中硫酸鋅46mg/kg的生精作用和提高精子質(zhì)量作用較其他較大劑量組相似，各組間差異不顯著(P＞0.05)。因此，硫酸鋅的劑量超過46mg/kg，未能進(jìn)一步增加小鼠精子數(shù)及精子活力。
(3)給予精安原方240mg/kg，能使正常小鼠及CTX模型小鼠的精子數(shù)分別增加35.4％(P＜0.05)及56.8％(P＜0.01)，精子活動(dòng)率亦分別增加15.0％(P＜0.05)及53.5％(P＜0.01)，3級(jí)精子活動(dòng)力分別增加5.0％(P＞0.05)及60.0％(P＜0.01)。此作用較單獨(dú)應(yīng)用精氨酸(280、430、660mg/kg)或硫酸鋅(46、70、108mg/kg)的效果更優(yōu)，但不一定是最佳效果。
(4)給予甲基睪丸酮20mg/kg體重后，對正常雄性小鼠及CTX模型小鼠均有明顯生精作用和提高精子質(zhì)量，精子數(shù)分別增加27.7％(P＜0.05)及95.5％(P＜0.01)，精子活動(dòng)率分別升高10.0％(P＞0.05)及52.3％(P＜0.01)。
(5)給予精氨酸、硫酸鋅、精安原方、甲基睪丸酮后，均能降低CTX所產(chǎn)生小鼠精子畸形率(P＜0.01)。
(6)精安原方、甲基睪丸酮對雄性小鼠的睪丸系數(shù)與副睪系數(shù)無影響。
本研究結(jié)果顯示，在生精和提高精子質(zhì)量方面，精氨酸和硫酸鋅單方對雄性小鼠有一定作用，對CTX模型小鼠生精和提高精子質(zhì)量更顯著。精氨酸最佳有效量為660mg/kg，硫酸鋅最佳有效量為46mg/kg。精安復(fù)方原方(精氨酸與硫酸鋅的組合)的生精作用和提高精子質(zhì)量作用較單獨(dú)應(yīng)用不同劑量的精氨酸或硫酸鋅強(qiáng)。精氨酸及硫酸鋅單方、精安原方和甲基睪丸酮對雄性小鼠的睪丸和副睪系數(shù)均無影響。
表1-A ig 精氨酸、硫酸鋅和精安原方對正常組實(shí)驗(yàn)小鼠體重的影響(x±SD；n＝10)組別0周1周2周3周4周1. 1％羧甲基纖維素鈉22.3±1.2 31.4±2.4 33.1±2.9 34.3±2.2 35.6±2.32. 精氨酸280mg/kg 22.2±1.3 31.1±2.2 33.2±2.3 33.9±2.4 34.6±2.4*3. 精氨酸430mg/kg 21.7±1.6 28.9±1.6 31.1±1.8 34.0±1.9 35.2±2.2*4. 精氨酸660mg/kg 21.9±1.1 31.1±1.4 31.9±2.5 32.6±3.2 33.7±3.2*5. 硫酸鋅46mg/kg22.2±1.9 29.5±2.2 32.6±2.5 34.0±2.5 33.9±3.3*6. 硫酸鋅70mg/kg22.5±2.1 28.3±3.1 30.9±3.1 33.9±3.1 35.3±1.5*7. 硫酸鋅108mg/kg 22.8±1.3 32.2±2.1 34.4±2.7 35.0±2.4 34.7±2.7*8. 甲基睪丸酮20mg/kg22.1±1.2 32.7±1.5 34.2±1.2 36.0±2.1 36.8±2.7*9. 精安原方240mg/kg 22.2±1.2 30.7±2.2 32.8±3.7 31.1±3.5 34.4±3.4**P＞0.05，與正常對照組相比表1-B ig 精氨酸、硫酸鋅和精安原方對CD(模型組損傷小鼠體重的影響(x±SD；n＝10)組別 0周 1周 2周 3周 4周10.CTX20mg/kg+1％羧甲基纖維素鈉22.1±1.7 28.7±2.630.6±4.633.7±3.735.2±3.6*11.CTX20mg/kg+精氨酸280mg/kg 22.0＝1.2 27.7±1.230.2±2.732.3±2.433.2±2.9*12.CTX20mg/kg-精氨酸430mg/kg 21.2＝1.0 29.1±2.430.5±3.032.9±3.034.0±3.3*13.CTX20mg/kg+精氨酸660g/kg21.8±1.6 28.6±1.121.4±1.433.0±1.834.5±2.7*14.CTX20mg/kg+硫酸鋅46mg/kg21.9±1.3 29.0±1.831.0±1.832.1±3.634.0±2.9*15.CTX20mg/kg+硫酸鋅70mg/kg22.0±1.5 28.7±2.531.0±2.331.0±2.332.9±1.9*16.CTX20mg/kg+硫酸鋅108mg/kg 21.7±1.1 29.4±1.333.1±1.434.8±1.734.6±2.2*17.CTX20mg/kg+甲基睪丸酮20mg/kg21.6±2.2 29.0±2.331.1±2.133.7±2.534.2±2.3*18.CTX20mg/kg+精安原方240mg/kg 21.9±1.2 29.3±2.131.9±3.232.6±2.332.6±3.2**P＞0.05，與表1-1的正常對照組相比表1-C ig精氨酸、硫酸鋅和精安原方對正常組實(shí)驗(yàn)小鼠精子的影響(x±SD；n＝10)精子數(shù) 活動(dòng)率 精子活動(dòng)力(％) 畸形率組別(×106/ml) (％) 3級(jí)(％) 2級(jí)(％)1級(jí)(％) (％)1 6.5±2.3 62.2±10.3 32.2±5.121.1±6.6 8.9±5.01.2±0.62 6.7±1.9 *60.3±7.6 * 31.7±4.7 * 18.8±4.3 * 9.8±4.4 *1.1±1.0 *3 7.1±1.9 *63.4±12.2* 32.5±6.1 * 20.3±9.9 * 1.0±7.0 *1.6±3.7 *4 7.6±1.8 *64.7±11.3* 30.6±4.2 * 22.2±7.3 * 11.9±6.3 *0.6±0.5 **5 8.4±1.6 ** 61.5±4.8 * 33.2±3.8 * 18.8±2.9 * 9.5±4.0 *0.6±0.7 **6 8.5±2.3 *62.0±11.3* 33.1±5.2 * 19.3±6.9 * 9.6±4.8 *0.7±1.2 **7 8.6±2.2 *63.0±16.8* 32.4±4.8 * 20.0±10.9 * 10.6±8.0 *0.9±0.5 **8 8.3±1.2 ** 68.4±12.6* 32.4±5.1 * 23.2±8.7 * 12.8±6.3 *0.6±0.6 **9 8.8±2.0 *71.5±9.1 * 33.7±4.4 * 24.9±4.0 * 12.9±5.2 *1.5±0.6 *與1組比較，*P＞0.05；**P＜0.05；1組1％羧甲基纖維素鈉；2組精氨酸280mg/kg；3組精氨酸430mg/kg；4組精氨酸660mg/kg；5組硫酸鋅46mg/kg；6組硫酸鋅70mg/kg；7組硫酸鋅108mg/kg；8組甲睪酮20mg/kg9組精安原方240mg/kg表1-D ig精氨酸、硫酸鋅和精安原方對CTX模型組損傷小鼠精子的影響(x±SDn＝10)精子數(shù)活動(dòng)率 精子活動(dòng)力(％) 畸形率組別(×106/ml) (％) 3級(jí)(％) 2級(jí)(％) 1級(jí)(％) (％)10 4.4±1.7 43.4±11.9 22.0±6.714.9±5.5 6.5±3.4 2.0±0.611 6.0±1.4 * 48.7±10.7 *23.4±6.9 * 16.0±3.6 *9.3±4.2 *0.8±0.6 ***12 6.2±1.9 * 50.2±9.7 *24.5±7.6 * 17.8±1.8 *7.9±3.4 *0.8±0.5 ***13 6.5±1.6 * 52.3±11.6 *28.5±7.0 * 15.4±6.6 *8.4±5.8 *0.6±0.6 ***14 6.6±1.6 **55.2±9.8 *28.6±6.3 * 17.1±6.5 *9.5±3.3 *0.9±1.0 ***15 6.7±2.3 * 52.3±10.7 *27.8±5.2 * 16.4±6.1 *8.1±4.0 *0.5±0.6 ***16 6.6±2.0 * 50.1±12.3 *27.8±6.3 * 14.1±6.0 *8.2±3.8 *0.7±0.7 ***17 8.6±1.3 *** 66.1±10.4 *** 32.5±2.7 ** 21.8±3.3 *** 11.9±6.7 ** 0.4±0.4 ***18 6.9±2.0 **66.6±11.1 *** 35.2±5.6 ** 20.5±5.1 ** 10.9±4.4 ** 0.6±0.8 ***與1組比較，*P＞0.05；**P＜0.05；***P＜0.0110組CTX 20mg/kg+1％羧甲基纖維素鈉11組CTX 20mg/kg+精氨酸280mg/kg12組CTX 20mg/kg+精氨酸430mg/kg13組CTX 20mg/kg+精氨酸660mg/kg14組CTX 20mg/kg+硫酸鋅46mg/kg；15組CTX 20mg/kg+硫酸鋅70mg/kg16組CTX 20mg/kg+硫酸鋅108mg/kg；17組CTX 20mg/kg+甲基睪丸酮20mg/kg18組CTX 20mg/kg+精安復(fù)方240mg/kg表1-E ig精氨酸、硫酸鋅和精安原方對正常組實(shí)驗(yàn)小鼠睪丸與附睪系數(shù)的影響(x±SD；n＝10)組別 睪丸系數(shù)附睪系數(shù)1.1％羧甲基纖維素鈉0.00273±0.000380.00098±0.000232.精氨酸280mg/kg 0.00279±0.00040* 0.00095±0.00017*3.精氨酸430mg/kg 0.00263±0.00037* 0.00088±0.00014*4.精氨酸660mg/kg 0.00291±0.00048* 0.00103±0.00019*5.硫酸鋅46mg/kg0.00279±0.00036* 0.00097±0.00010*6.硫酸鋅70mg/kg0.00262±0.00029* 0.00089±0.00011*7.硫酸鋅108mg/kg 0.00283±0.00028* 0.00096±0.00012*8.甲薹睪丸酮20mg/kg0.00275±0.000378* 0.00092±0.00009*9.精安原方240mg/kg 0.00273±0.00038* 0.00094±0.00007**P＞0.05，與正常對照組相比表l-F ig精氨酸、硫酸鋅和精安原方對CTX模型組損傷小鼠睪丸與附皋系數(shù)的影響(x±SD；n＝10)組別 睪丸系數(shù) 附睪系數(shù)lO.CTX20mg/kg+1％羧甲基纖維素鈉0.00292±0.00064* 0.00097±0.00016*11.CTX20mg/kg+精氨酸280mg/kg 0.00279±0.00035* 0.00101±0.00011*12.CTX20mg/kg+精氨酸430mg/kg 0.00270±0.00031* 0.00096±0.00013*13.CTX20mg/kg+精氨酸660mg/kg 0.00273±0.00078* 0.00098±0.00011*14.CTX20mg/kg+硫酸鋅46mg/kg0.00281±0.00028* 0.00097±0.00022*15.CTX20mg/kg+硫酸鋅70mg/kg0.00273±0.00044* 0.00101±0.00015*16.CTX20mg/kg+硫酸鋅108mg/kg 0.00266±0.00025* 0.00092±0.00013*17.CTX20mg/kg+甲基睪丸酮20mg/kg0.00266±0.00031* 0.00104±0.00017*18.CTX20mg/kg+精安原方240mg/kg 0.00273±0.00057* 0.00101±0.00017**P＞0.05，與表1-5的正常對照組相比實(shí)驗(yàn)22．不同劑量配比的精氨酸與硫酸鋅及精安原方對正常雄性小鼠及CTX模型小鼠的生精作用和提高精子質(zhì)量的影響2.1目的基于單方實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)，在正常雄性小鼠及CTX引起精子減少和質(zhì)量下降模型的雄性小鼠中，通過固定精氨酸的劑量并改變硫酸鋅的劑量及固定硫酸鋅的劑量并改變精氨酸的劑量，篩選出此兩藥生精作用和提高精子質(zhì)量的最佳配比，以確定生精作用和提高精子質(zhì)量最強(qiáng)的新精安復(fù)方組方。2.2動(dòng)物與藥物2.2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性NIH種小鼠，體重18～25g，合格證號(hào)98A030，由廣東省醫(yī)用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。2.2.2實(shí)驗(yàn)藥物精氨酸(批號(hào)980701)，上?？颠_(dá)氨基酸廠產(chǎn)品。硫酸鋅(批號(hào)980103-1)，廣州化學(xué)試劑廠產(chǎn)品。精安膠囊(批號(hào)980701；精氨酸220mg和硫酸鋅20mg/膠囊；11∶1組合；以下稱精安原方)，中山市三才醫(yī)藥集團(tuán)提供。甲基睪丸酮片(批號(hào)980701甲)，上海中國信誼藥廠產(chǎn)品。臨用前把藥物研磨成粉末，用1％羧甲基纖維素鈉(用蒸餾水配制)配成所需其藥物濃度混懸液，上述灌胃的各藥在小鼠每次灌胃容量為0.4ml/10g體重。環(huán)磷酰胺(CTX；批號(hào)980607)，上海華聯(lián)制藥有限公司的產(chǎn)品。臨用前用注射用水配成2 mg/ml的注射液。2.3實(shí)驗(yàn)方法2.3.1設(shè)計(jì)精安劑量的依據(jù)單方實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，分別ig精氨酸和硫酸鋅可在正常雄性小鼠和CTX模型小鼠在本實(shí)驗(yàn)條件下獲得不同程度的生精作用和提高精子質(zhì)量的作用，但單方的生精作用和提高精子質(zhì)量均弱于精安原方。本實(shí)驗(yàn)擬采用固定精氨酸劑量(660mg/kg)改變硫酸鋅劑量或固定硫酸鋅劑量(49mg/kg)改變精氨酸劑量組成多個(gè)復(fù)方，篩選出生精作用和提高精子質(zhì)量最強(qiáng)的最佳組合。2.3.2不同劑量的精氨酸與硫酸鋅組成的精安復(fù)方基于單方實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)，精氨酸與硫酸鋅相互組合成5個(gè)精安復(fù)方劑量組(組距0.7)，各組用藥劑量見表2-1，同時(shí)設(shè)精安原方組參予組方篩選。
表2-1 不同劑量的精氨酸與硫酸鋅組成的精安復(fù)方
2.3.3實(shí)驗(yàn)對照組及模型正常對照組1％羧甲基纖維素鈉組(0.4ml/10g)；陽性對照組甲基睪丸酮組(20mg/kg體重)；病理模型用CTX建立病理模型。附CTX引起的雄性小鼠精子減少和質(zhì)量下降病理模型的建立(按1.3.1節(jié)方法建立模型)2.3.4分組、給藥和解剖
NIH種雄性小鼠192只，20～25g，隨機(jī)均分16組，每組12只，各組體重分布大致相近。第1組～第8組為正常小鼠，第9～16組為CTX模型小鼠組，見表2-2。
第1組～第8組按表2-1劑量給藥，每天ig一次，連續(xù)21天。第9組～第16組按2.3.3節(jié)方法建立模型，各組ip CTX 20mg/kg，Qd，連續(xù)5天，實(shí)驗(yàn)的第六天開始按表2-1劑量給藥，每天ig一次，連續(xù)21天。每組每次灌胃給藥容量為0.4ml/10g體重。
在末次給藥后的第二天，處死各組小鼠，取出小鼠左側(cè)睪丸及附睪稱重，計(jì)算其臟器系數(shù)，并并取出左側(cè)附睪檢測各鼠精子數(shù)、精子活動(dòng)率和活動(dòng)力及畸形精子數(shù)。2.3.5精子數(shù)、精子活動(dòng)率和活動(dòng)力及畸形精子數(shù)檢測方法按1.3.3節(jié)方法。
表2-2 正常小鼠和CTX模型小鼠的分組
2.3.6數(shù)據(jù)處理方法動(dòng)物體重、精子數(shù)和器官系數(shù)用t檢驗(yàn)，精子活動(dòng)率、精子活動(dòng)力、精子畸形率用x2檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果中比較各組的各項(xiàng)指標(biāo)，增加數(shù)或減少數(shù)的百分?jǐn)?shù)的計(jì)算方法是增加或減少的數(shù)占被比較數(shù)的百分?jǐn)?shù)。2.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果各組實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)食、行為、體態(tài)均正常。
第1組～第8組(包括正常對照組和各給藥組)的小鼠體重(見表2-3)增長正常；毛色有光澤；睪丸大小正常(睪丸與附睪系數(shù)見表2-7)；精子數(shù)、活動(dòng)率、活動(dòng)力和精子畸形率見表2-5。第9組～第16組(CTX模型組)的小鼠體重(見表2-4)增長正常；毛色缺乏光澤；睪丸大小正常(睪丸與附睪系數(shù)見表2-8)；精子數(shù)、活動(dòng)率、活動(dòng)力和精子畸形率見表2-6。2.4.1對正常組實(shí)驗(yàn)小鼠精子的影響(1)第1組小鼠僅給1％羧甲基纖維素鈉，作為正常對照。精子數(shù)為7.4±1.0×106/ml，精子活動(dòng)率為58.0±5.7％，精子畸型率為0.6±0.3％。
(2)第2組(精安原方240mg/kg)小鼠給藥廠推薦精安原方，與對照組相比，精子數(shù)增加32.4％(P＞0.05)精子活動(dòng)率增加13.6％(P＞0.05)，提示精安原方對正常小鼠有生精作用和提高精子質(zhì)量。
(3)第3～7組(3組精氨酸660mg/kg硫酸鋅70mg/kg；4組精氨酸462mg/kg硫酸鋅70mg/kg；5組.精氨酸305.4mg/kg硫酸鋅70mg/kg；6組精氨酸660mg/kg硫酸鋅49mg/kg；7組精氨酸560mg/kg硫酸鋅34.3mg/kg)小鼠分別給予不同劑量配比的精氨酸加硫酸鋅。與對照組相比，各組小鼠精子數(shù)增加18.9～40.5％，精子活動(dòng)率升高1.0～18.3％。其中第6組(給精氨酸660mg/kg及硫酸鋅49mg/kg)的精子數(shù)與精子活動(dòng)率增加得最多，與對照組比較分別增加40.5％(P＜0.05)及18.3％(P＞0.05)，高于精安原方組，其他組(3、4、5、7組)小鼠所給予的精氨酸或硫酸鋅的劑量均不同于第6組，但它們的生精效果都不如第6組好。第6組小鼠的精子數(shù)較甲基睪丸酮組略高(P＞0.05)。由此可見，對正常小鼠，精安組方以精氨酸660mg/kg配以硫酸鋅49mg/kg，促進(jìn)精子生成和提高精子質(zhì)量作用最強(qiáng)，這是精安最佳的生精組方。
(4)第8組(甲基睪丸酮20mg/kg)小鼠給甲基睪丸酮，與對照組相比，精子數(shù)增加31.1％(P＜0.01)，精子活動(dòng)率增加13.5％(P＞0.05)，提示甲基睪丸酮能促進(jìn)正常小鼠精子的生成和改善精子質(zhì)量。
(5)給不同配方精安復(fù)方或甲基睪丸酮的小鼠畸形率與對照組相似。2.4.2對CTX模型組損傷小鼠精子的影響(1)第9組(CTX模型)每天灌予1％羧甲基纖維素鈉。與對照組相比，該組小鼠精子數(shù)降低35.1％(P＜0.05)，精子活動(dòng)率降低32.1％(P＜0.05)，精子畸形率增加866.7％(P＜0.01)，提示用CTX制作雄性小鼠睪丸生精功能受抑制的模型成功。
(2)第10組(CTX模型；精安原方240mg/kg)ig精安原方，與第9組(CTX模型)相比，精子數(shù)增加70.8％(P＜0.01)，精子活動(dòng)率增加40.9％(P＜0.05)，精子畸形率降低24.1％(P＜0.05)提示有明顯的促進(jìn)精子生成并提高精子質(zhì)量的作用。在用CTX抑制小鼠睪丸后，精安原方能使其功能恢復(fù)正常。
(3)第11～15組(CTX模型；11組CTX 20mg/kg精氨酸660mg/kg+硫酸鋅70mg/kg；12組CTX 20mg/kg+精氨酸462mg/kg+硫酸鋅70mg/kg；13組CTX 20mg/kg+精氨酸305.4mg/kg+硫酸鋅70mg/kg；14組CTX 20mg/kg+精氨酸660mg/kg+酸鋅49mg/kg；15組CTX 20mg/kg+精氨酸660mg/kg+硫酸鋅34.3mg/kg；)小鼠，分別給予不同劑量配比的精氨酸和硫酸鋅。與第9組相比，各組小鼠精子數(shù)增加31.3～104.2％，精子活動(dòng)率升高48.5～69.0％，3級(jí)精子活動(dòng)力增加44.2％～62.2％(P＜0.01)，精子畸形率降低25.9～34.5％(P＜0.05)，其中第14組(給精氨酸660mg/kg及硫酸鋅49mg/kg)的精子數(shù)與精子活動(dòng)率增加得最多，分別增加104.2％(P＜0.01)及69.0％(P＜0.01)，較精安原方組的精子數(shù)與精子活動(dòng)率分別高19.5％(P＜0.05)與20.0％(P＜0.01)。其中精子數(shù)的增加甚至比正常對照組還高32.4％(P＜0.05)比甲基睪丸酮組還高22.5％(P＜0.05)。其他組(11、12、13、15組)小鼠所給予的精氨酸或硫酸鋅的劑量不同于第14組，但它們的生精效果都不如第14組好。第14組小鼠精子畸形率的降低(34.5％)亦較其他組更顯著。由此可見，精安組方中以精氨酸660mg/kg配以硫酸鋅49mg/kg(精氨酸∶硫酸鋅＝13.47∶1)的生精作用和提高精子質(zhì)量最強(qiáng)，降低精子畸形率效果最好，這是精安最佳的生精組方。
(4)第16組(CTX 20mg/kg+甲基睪丸酮20mg/kg)小鼠與第9組相比，精子數(shù)增加66.7％(P＜0.01)，精子活動(dòng)率增加51.8％(P＜0.05)，精子畸形率降低25.9％(P＜0.05)提示CTX抑制小鼠睪丸后，甲基睪丸酮能便其生精功能恢復(fù)正常。2.4.3對正常組和CTX模型組實(shí)驗(yàn)小鼠睪丸與附睪的影響分別給予正常小鼠及CTX模型小鼠予各種配方的精安復(fù)方或甲基睪丸酮，各組小鼠睪丸及附睪系數(shù)與對照組相比并無差別(P＞0.05)(見表2-7和表2-8)。2.5小結(jié)(1)給正常小鼠予不同劑量配比的精氨酸與硫酸鋅灌胃，能增加精子數(shù)18.9～40.5％。其中精氨酸660mg/kg加硫酸鋅49mg/kg組使小鼠精子數(shù)增加40.5％(P＜0.05)。提示該配方(精氨酸∶硫酸鋅＝13.47∶1)的精安復(fù)方能促進(jìn)小鼠精子的生成。其他組雖亦使小鼠精子數(shù)有所增加，但與對照組差異不顯著(P＞0.05)。各種配方精安復(fù)方對正常小鼠精子活動(dòng)率與畸形率無明顯影響(P＞0.05)。
(2)不同劑量配比的精氨酸及硫酸鋅的精安復(fù)方均能恢復(fù)由于給予CTX而抑制的小鼠睪丸生精功能。其中精氨酸660mg/kg加硫酸鋅49mg/kg的配方效果最佳。與僅給CTX組(第9組)相比，它使精子數(shù)增加104.2％(P＜0.01)，較正常對照組高32.4％(P＜0.05)，較甲基睪丸酮組高22.5％(P＜0.05)。本組精子活動(dòng)率亦增加69.0％(P＜0.01)。其他組的生精作用和提高精子質(zhì)量不如本組。本組精子畸形率亦降低得最多(34.5％，P＜0.05)提示精氨酸660mg/kg加硫酸鋅49mg/kg是促使CTX精子減少模型小鼠生精作用和提高精子質(zhì)量的最佳組方。
(3)甲基睪丸酮20mg/kg/天使正常小鼠精子數(shù)增加31.1％(P＜0.01)，精子活動(dòng)率升高13.5％(P＞0.05)。甲基睪丸酮亦能恢復(fù)由于給予CTX而抑制的小鼠睪丸生精功能，與僅給CTX組相比，它使精子數(shù)增加66.7％(P＜0.01)，精子活動(dòng)率增加51.8％(P＜0.05)，精子畸形率亦降低25.9％(P＜0.05)。
(4)各種劑量配比不同的精安復(fù)方及甲基睪丸酮對正常小鼠及CTX模型小鼠的睪丸及附睪系數(shù)均無影響。
(5)精安各復(fù)方對小鼠體重及生殖器官系數(shù)無影響。
本研究結(jié)果顯示，對正常雄性小鼠及用CTX制作的精子減少模型的雄性小鼠，通過固定精氨酸的劑量并改變硫酸鋅劑量及固定硫酸鋅的劑量并改變精氨酸的劑量，確定丁精安復(fù)方生精作用和提高精子質(zhì)量最強(qiáng)的新組方為精氨酸660mg/kg及硫酸鋅49mg/kg。兩藥生精作用和提高精子質(zhì)量的最佳劑量配比為13.47∶1。這新組方優(yōu)于精安原方。表2-3.ig不同劑量配比的精氨酸、硫酸鋅對正常組小鼠體重(g)的影響(x±SD；n＝12)組 別 0周 1周 2周3周 4周1.羧甲基纖維素鈉 27.8±2.229.7±2.430.9±2.1 30.4±3.0 30.4±3.42.精安原方(240mg/kg) 28.4±1.330.2±1.330.5±0.9 31.0±1.4 30.9±2.3*3.精氨酸660mg/kg硫酸鋅70mg/kg 27.6±2.331.1±2.132.3±1.9 33.6±2.7 33.8±3.5*4.精氨酸462mg/kg硫酸鋅70mg/kg 28.0±1.831.1±1.831.4±1.8 32.3±2.4 32.7±2.9*5.精氨酸305.4mg/kg硫酸鋅70mg/kg27.3±2.029.2±3.729.4±4.2 28.7±4.6 27.8±4.4*6.精氨酸660mg/kg硫酸鋅49mg/kg 27.6±2.829.6±2.629.9±4.1 31.6±4.5 32.3±3.6*7.精氨酸660mg/kg硫酸鋅34.3mg/kg26.5±2.429.1±2.329.7±3.2 31.2±4.1 32.2±4.0*8.甲基睪丸酮20mg/kg27.9±1.630.7±2.031.5±2.4 33.6±2.4 34.0±2.6**P＞0.05，與正常對照組相比表2-4. ig不同劑量配比的精氨酸、硫酸鋅對CTX模型組小鼠體重(g)的影響(x±SD；n＝12)組 別0周 1周 2周 3周 4周9.CTX20mg/kg羧甲基纖維素鈉 27.2±2.3 27.8±2.9 28.6±4.0 31.0±4.7 29.3±3.6*10.CTX20mg/kg精安原方240mg/kg 27.1±1.9 29.0±2.2 29.8±2.2 30.9±2.9 30.2±2.8*11.CTX20mg/kg精氨酸660mg/kg硫酸鋅70mg/kg 27.8±1.6 28.9±2.5 29.1±3.1 31.6±3.2 31.8±2.9*12.CTX20mg/kg精氨酸462mg/kg硫酸鋅70mg/kg 26.8±2.4 26.4±2.3 25.7±3.3 27.4±3.9 28.9±3.1*13.CTX20mg/kg精氨酸305.4mg/kg硫酸鋅70mg/kg 27.4±1.1 28.3±1.9 28.5±1.6 30.7±2.0 30.3±2.5*14 CTX20mg/kg精氨酸660mg/kg硫酸鋅49mg/kg 27.5±1.2 27.1±1.3 29.4±1.6 28.9±2.5 27.6±2.4*15.CTX20mg/kg精氨酸660mg/kg硫酸鋅34.3mg/kg 27.0±1.8 26.2±1.4 27.7±1.3 29.0±2.0 29.2±2.8*16.CTX20mg/kg甲基睪丸酮20mg/kg 28.0±2.3 28.6±2.0 30.8±2.7 32.7±2.4 32.6±3.3**P＞0.05，與正常對照組相比表2-5. ig不同劑量配比的精氨酸、硫酸鋅對正常組小鼠精子的影響(x±SD；n＝12)組 精子活動(dòng)力精子數(shù)(×106/ml) 活動(dòng)率(％) 精子畸形率(％)別3級(jí) 2級(jí) 1級(jí)1 7.4±1.0 58.0±5.7 33.8±8.8 17.4±5.56.9±4.00.6±0.32 9.8±1.3 **65.9±5.4 *36.9±5.9 *20.1±4.38.9±2.80.6±0.2 *3 9.6±1.3 **58.4±11.8 *31.8±6.5 *18.6±3.88.0±3.70.6±0.1 *4 9.8±1.8 **61.4±9.1 *33.0±9.4 *21.5±5.76.9±3.21.0±1.3 *5 8.8±1.7 * 62.5±6.9 *34.4±5.3 *19.8±2.88.3±2.30.8±0.5 *6 10.4±2.6*** 68.6±9.1 *** 37.4±5.9 ** 21.4±3.69.8±3.70.5±0.1 *7 9.6±1.6 * 59.4±10.8 *32.3±6.9 *18.1±3.29.1±2.70.6±0.2 *8 9.7±1.8 *** 65.8±6.9 ** 37.9±5.2 ** 20.0±3.17.9±3.00.7±0.2 *與1組比較，*P＞0.05**P＜0.05；***P＜0.011組1％羧甲基纖維素鈉0.5ml/10g；2組精安原方(240mg/kg)；3組精氨酸660mg/kg硫酸鋅70mg/kg；4組精氨酸462mg/kg硫酸鋅70mg/kg；5組.精氨酸305.4mg/kg硫酸鋅70mg/kg；6組精氨酸660mg/kg硫酸鋅49mg/kg；7組精氨酸660mg/kg硫酸鋅34.3mg/kg；8組甲基睪丸酮20mg/kg。
表2-6. ig不同劑量配比的精氨酸、硫酸鋅對CTX模型組小鼠精子的影響(x±SD；n＝12)組精子活動(dòng)力別 精子數(shù)(×106/ml) 活動(dòng)率(％)3級(jí)2級(jí) 1級(jí) 精子畸形率(％)9 4.8±2.3 39.4±8.3 21.7±5.3 12.1±4.0 5.7±3.2 5.8±1.7108.2±2.0***55.5±7.8**29.3±5.9*16.9±3.2 9.0±4.0 4.4±1.2**117.3±1.2***62.6±6.8*32.0±4.7*20.5±3.0 10.1±3.04.0±1.7**127.4±2.2**63.5±7.1*33.5±5.7*18.8±2.9 11.5±3.5 4.2±1.9**136.3±1.3*62.0±7.8*35.2±3.0*19.5±4.3 9.0±3.1 4.3±1.7**149.8±1.5***66.6±7.2***5.2±3.0*21.0±3.010.4±4.5 3.8±1.7**158.5±2.9***58.5±9.5*31.3±6.7*18.2±4.4 9.0±3.9 4.1±2.1**168.0±2.2***59.8±5.0**33.8±5.4*19.7±3.5 6.3±3.8 4.3±1.1**與1組比較，*P＞0.05；**P＜0.05； ***P＜0.01；與9組比較，*P＞0.05；**P＜0.05；***P＜0.019組CTX 20mg/kg+1％羧甲基纖維素鈉；10組CTX 20mg/kg+精安原方240mg/kg；11組CTX 20mg/kg精氨酸660mg/kg硫酸鋅70mg/kg；12組CTX 20mg/kg精氨酸462mg/kg硫酸鋅70mg/kg；13組CTX 20mg/kg精氨酸305.4mg/kg硫酸鋅70mg/kg；14組CTX 20mg/kg 精氨酸660mg/kg硫酸鋅49mg/kg；15組CTX 20mg/kg精氨酸660mg/kg硫酸鋅34.3mg/kg；16組CTX20mg/kg甲基睪丸酮20mg/kg表2-7 ig不同劑量配比的精氨酸和硫酸鋅對正常組小鼠睪丸、附睪系數(shù)的影響(x±SD；n＝12)組別 睪丸系數(shù) 附睪系數(shù)1.1％羧甲基纖維素鈉 0.00313±0.00052 0.00111±0.000212.精安原方(240mg/kg)0.00302±0.00028*0.00099±0.00011*3.精氨酸660mg/kg硫酸鋅70mg/kg 0.00299±0.00044*0.00093±0.00014*4.精氨酸462mg/kg硫酸鋅70mg/kg 0.00306±0.00039*0.00102±0.00012*5.精氨酸305.4mg/kg硫酸鋅70mg/kg 0.00324±0.00065*0.00100±0.00019*6.精氨酸660mg/kg硫酸鋅49mg/kg 0.00296±0.00038*0.00102±0.00012*7.精氨酸660mg/kg硫酸鋅34.3mg/kg 0.00290±0.00026*0.00101±0.00014*8.甲基睪丸酮20mg/kg 0.00293±0.00034*0.00102±0.00008**P＞0.05，與正常對照組相比表2-8ig不同劑量配比的精氨酸和硫酸鋅對CTX模型組小鼠睪丸、附睪系數(shù)的影響(x±SD；n＝12)組別睪丸系數(shù) 附睪系數(shù)9.CTX20mg/kg1％羧甲基纖維素鈉 0.00298±0.00049*0.00110±0.00020*10.CTX20mg/kg精安原方240mg/kg 0.00287±0.00026*0.00100±0.00017*11.CTX20mg/kg精氨酸660mg/kg酸酸鋅70mg/kg 0.00277±0.00029*0.00101±0.00013*12.CTX20mg/kg精氨酸462mg/kg硫酸鋅70mg/kg 0.0031±0.00035* 0.00116±0.00022*13CTX20mg/kg精氨酸305.4mg/kg硫酸鋅70mg/kg 0.00272±0.00024*0.00106±0.00011*14CTX20mg/kg精氨酸660mg/kg硫酸鋅49mg/kg0.00319±0.00050*0.00112±0.00015*15.CTX20mg/kg精氨酸660mg/kg硫酸鋅34.3mg/kg 0.00308±0.00063*0.00106±0.00016*16.CTX20mg/kg甲基睪丸酮20mg/kg———— 0.00279±0.00030*0.00099±0.00010**P＞0.05，與正常對照組相比實(shí)驗(yàn)3毒性試驗(yàn)14.1摘要精安膠囊由精氨酸和硫酸鋅(ZnSO2.7H2O)組成，是白色粉末，溶于水。本實(shí)驗(yàn)用NIH小鼠經(jīng)口作急性毒性試驗(yàn)，結(jié)果其LD50為6268.9mg/kg，95％可信限為5758.2～6825.0mg/kg。
14.2試驗(yàn)?zāi)康挠^察NIH小鼠經(jīng)口灌胃給予精氨酸和硫酸鋅(ZnSO2.7H2O)原料粉所產(chǎn)性毒性反應(yīng)和死亡情況，為進(jìn)一步的毒性試驗(yàn)提供依據(jù)。
14.3受試物14.3.1名稱精安膠囊原料粉由精氨酸和硫酸鋅(ZnSO2.7H2O)按13.47∶1配成由中山市三才醫(yī)藥集團(tuán)公司提供。硫酸鋅批號(hào)990601藥用級(jí)，廣東臺(tái)山新寧制藥廠出品精氨酸批號(hào)991011，藥用級(jí)，上海康達(dá)氨基酸廠出品14.4動(dòng)物14.4.1來源，種屬由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的NIH小鼠(合格證號(hào)99A030)14.4.2體重18～22克14.4.3性別雌雄各半14.4.4動(dòng)物數(shù)50只14.4.5禁食時(shí)間實(shí)驗(yàn)前禁食12小時(shí)14.5劑量14.5.1 組距0.8514.5.2劑量設(shè)計(jì)根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，設(shè)計(jì)8479.6mg/kg，7207.5mg/kg，6126.6mg/kg，5207.6mg/kg，4426.4mg/kg為試驗(yàn)的5個(gè)劑量組進(jìn)行測試。
14.5.3途徑經(jīng)口灌胃14.6實(shí)驗(yàn)方法按(13.47∶1)比例稱取精氨酸和硫酸鋅(ZnSO2.7H2O)混合，用37℃溫水溶解，配成所需濃度，按體重0.4ml/10g經(jīng)口一次灌胃給予。
14.7觀察指標(biāo)14.7.1觀察期14天14.7.2毒性反應(yīng)NIH小鼠經(jīng)口給予精氨酸和硫酸鋅(ZnSO2.7H2O)溶液后，8479.6mg/kg，7207.5mg/kg，6126.6mg/kg三個(gè)劑量組的動(dòng)物出現(xiàn)活動(dòng)減慢，1小時(shí)后出現(xiàn)伏臥，呼吸緩慢的癥狀，4～5個(gè)小時(shí)后大部分動(dòng)物死亡。5207.6mg/kg，4426.4mg/kg二個(gè)劑量組經(jīng)口給予精氨酸和硫酸鋅(ZnSO4.7H2O)溶液后，活動(dòng)稍微減慢，部分動(dòng)物在給藥后的48小時(shí)內(nèi)死亡，所有存活動(dòng)物大部分在給藥后第三天恢復(fù)正常飲食及活動(dòng)，觀察期內(nèi)見個(gè)別動(dòng)物死亡(見表3)，動(dòng)物無異常癥狀出現(xiàn)。
表3精安膠囊原料粉小鼠LD50試驗(yàn)動(dòng)物死亡情況組別動(dòng)物數(shù) 每天死亡動(dòng)物數(shù)(只) 動(dòng)物死亡總數(shù)(mg/kg) (只) 1236-14(天) (只)8476.6109 97207.51081 96126.61041 55207.6101 14426.410014.8結(jié)果按經(jīng)口灌胃給予精氨膠囊原料粉計(jì)算，LD50為6268.9mg/kg，95％可信限為5758.2～6825.0mg/kg，根據(jù)化學(xué)物質(zhì)的急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，屬實(shí)際無毒級(jí)。(見∠D50計(jì)算報(bào)告) LD50計(jì)算報(bào)告01-3-20試驗(yàn)藥物精安膠囊給藥方式灌胃 劑量組數(shù)5算法Bliss法試驗(yàn)動(dòng)物NIH小鼠 劑量單位mg/kg自然死亡率0.0精度0.001LD50計(jì)算列表(第3輪)動(dòng) 死死 實(shí)驗(yàn) 預(yù)期 預(yù)期 工作 回歸分給藥 對數(shù) 物 亡亡 機(jī)率 機(jī)率 死亡 機(jī)率 權(quán)重機(jī)率回歸組劑量 劑量 數(shù) 數(shù)率 單位 單位率單位 系數(shù)單位誤差X Y E1 8476.63.928 10 9 0.900 6.282 6.844 0.967 5.918 0.168 6.844 0.000362 7207.53.858 10 9 0.900 6.282 5.856 0.804 6.203 0.486 5.855 0.000443 6126.53.787 10 5 0.500 5.000 4.865 0.446 5.001 0.632 4.865 0.000514 5207.63.717 10 1 0.100 3.718 3.874 0.130 3.732 0.396 3.874 0.000595 4426.43.646 10 0 0.000 - 2.883 0.017 2.480 0.107 2.883 0.00066如圖l所示，將不同劑量與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡率對應(yīng)描繪成曲線圖。加權(quán)回歸方程 第1輪 ＝13.933X-47.896(r＝0.962，Emax＝0.173)第2輪 ＝14.037X-48.298(r＝0.945，Emax＝0.0201)第3輪 ＝14.038X-48.302(r＝0.943，Emax＝0.000663)數(shù)據(jù)異質(zhì)性檢驗(yàn)X2＝2.401p＝0.494(p＞0.05，異質(zhì)性無顯著意義)回歸系數(shù)標(biāo)準(zhǔn)誤Sb＝3.203回歸顯著性系數(shù)g＝0.200(g＞0.10，應(yīng)采用經(jīng)Feiller精確校正的結(jié)果)各種死亡率的LD值及其95％可信限(mg/kg)死亡率 未作Feiller校正 Feller精確校正％ X Sx LD95％CL X Sx LD95％CL1 3.631 0.041 4277.2 3552.7-5149.43.590 0.051 3890.8 3097.3-4887.65 3.680 0.031 4783.0 4152.0-5509.93.651 0.038 4474.3 3768.5-5312.3103.706 0.027 5076.7 4503.3-5723.13.683 0.032 4820.3 4175.2-5565.1503.797 0.017 6264.3 5805.7-6759.03.797 0.019 6268.9 5758.2-6825.0903.888 0.027 7729.6 6842.3-8732.03.911 0.032 8152.9 7042.7-9438.1953.914 0.032 8204.2 7105.8-9472.53.944 0.039 8783.4 7376.3-10458.8993.963 0.042 9174.5 7601.8-11072.5 4.004 0.051 10100.5 8015.7-12727.7如圖2所示，將經(jīng)過FEILLER精確校正后不同劑量與機(jī)率單位對應(yīng)描繪成曲線圖。LD50CALC2.0版
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權(quán)利要求
1.一種用于治療男性不育的復(fù)方組合物，其特征在于它主要由精氨酸和硫酸鋅組成，精氨酸與硫酸鋅的比例是從4.62∶1至19.24∶1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于治療男性不育的復(fù)方組合物，其特征在于精氨酸與硫酸鋅的比例是從4.62∶1至11∶1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于治療男性不育的復(fù)方組合物，其特征在于精氨酸與硫酸鋅的比例是13.47∶1至19.24∶1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于治療男性不育的復(fù)方組合物，其特征在于精氨酸與硫酸鋅的比例是11∶1至19.24∶1。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于治療男性不育的復(fù)方組合物，其特征在于精氨酸與硫酸鋅的比例是6.6∶1至19.24∶1。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于治療男性不育的復(fù)方組合物，其特征在于精氨酸與硫酸鋅的比例是9.44∶1至19.24∶1。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于治療男性不育的復(fù)方組合物，其特征在于精氨酸與硫酸鋅的比例是4.62∶1至13.47∶1。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于治療男性不育的復(fù)方組合物，其特征在于精氨酸與硫酸鋅的比例是6.6∶1至13.47∶1。
全文摘要
一種用于治療男性不育的復(fù)方組合物，它主要由精氨酸和硫酸鋅組成，精氨酸與硫酸鋅的比例是從4.62∶1至19.24∶1，它大大提高了精子的數(shù)量和質(zhì)量，即提高了精子的活動(dòng)率和活動(dòng)力，降低了精子畸形率，毒副性較小，相對于單方的精氨酸藥物和單方硫酸鋅藥物其治療效果更加好。
文檔編號(hào)A61P15/00GK1457799SQ0211523
公開日2003年11月26日 申請日期2002年5月12日 優(yōu)先權(quán)日2002年5月12日
發(fā)明者陳建昌, 盧洪安 申請人:中山市三才醫(yī)藥集團(tuán)有限公司