專利名稱：皮膚創(chuàng)傷愈合促進(jìn)劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及皮膚創(chuàng)傷愈合促進(jìn)劑，該促進(jìn)劑包含至少一種P物質(zhì)類似物或其可藥用鹽和胰島素樣生長因子作為活性成分。
但是，這類自身恢復(fù)需要較長時(shí)間才能達(dá)到康復(fù)，并且疼痛也會(huì)繼續(xù)。因此，需要對(duì)創(chuàng)傷部位施用創(chuàng)傷治療劑，積極促進(jìn)創(chuàng)傷愈合。
由于新的表皮和結(jié)締組織在創(chuàng)傷愈合過程中通過細(xì)胞的遷移和增殖形成，因此促進(jìn)或刺激參與創(chuàng)傷愈合之細(xì)胞的遷移、分化和增殖的藥物可以作為創(chuàng)傷治療劑。已知溶菌酶氯化物、血活素(solcoseryl)等是這類創(chuàng)傷治療劑。
但現(xiàn)有的創(chuàng)傷治療劑存在著治療劑對(duì)創(chuàng)傷愈合沒有足夠的促進(jìn)作用并且不能在短時(shí)間內(nèi)使創(chuàng)傷完全恢復(fù)的問題。據(jù)認(rèn)為，這些問題是由于這些治療劑對(duì)于作為創(chuàng)傷愈合過程中的重要因素的表皮的康復(fù)、膠原的合成、外周循環(huán)的改善、顆粒形成、血管生成等的貢獻(xiàn)較小。
P物質(zhì)類似物是由3-12個(gè)氨基酸組成的多肽，它們具體公開于美國專利3862114中，并且已知這些多肽具有降壓作用。作為P物質(zhì)類似物之一的P物質(zhì)是由神經(jīng)末端釋放和形成的多肽，它是由式Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2所示的11個(gè)氨基酸組成的多肽，并已知其表現(xiàn)血管擴(kuò)張、平滑肌收縮、促進(jìn)唾液腺分泌、利尿等作用。在眼科領(lǐng)域，有關(guān)于P物質(zhì)改善眼病中結(jié)膜杯形細(xì)胞的異常分泌的作用(WO 95/13087)、P物質(zhì)在炎癥如角膜炎中的動(dòng)力學(xué)(J.Jpn.Ophthalmol.Soc.，91，982-987(1987)；J.Jpn.Ophthalmol.Soc.，92，448-452(1988))等的報(bào)道。此外，日本專利申請(qǐng)?zhí)卦S公開17489/1998公開了Phe-Gly-Leu-Met-NH2(下文稱之為“FGLM”)，它是P物質(zhì)C末端一側(cè)的四肽，用作角膜疾病治療劑。
另一方面，胰島素樣生長因子是調(diào)節(jié)正常人體細(xì)胞生長的因子之一，如表皮生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子、血小板衍生的生長因子和轉(zhuǎn)化生長因子，它們可分為兩組，即胰島素樣生長因子-I(下文稱之為IGF-I)和胰島素樣生長因子-II(下文稱之為IGF-II)。據(jù)報(bào)道，IGF-I刺激甲狀腺細(xì)胞的增殖(J.Biol.Chem.，264，18485-18488(1989))，IGF-II調(diào)節(jié)肌肉的生長和分化(Hum.Mol.Genet.，3，1117-1121(1994))等。
但沒有關(guān)于P物質(zhì)類似物和胰島素樣生長因子對(duì)皮膚疾病作用的報(bào)道。
基于這些事實(shí)，為研究對(duì)表皮伸展的促進(jìn)作用和對(duì)皮膚創(chuàng)傷愈合的促進(jìn)作用，將P物質(zhì)類似物與胰島素樣生長因子結(jié)合并對(duì)表皮進(jìn)行藥理學(xué)試驗(yàn)是一個(gè)有趣的課題。
P物質(zhì)類似物的實(shí)例是Tyr-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2，Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2(P物質(zhì))，Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Tyr-Gly-Leu-Met-NH2，Tyr-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Gln-Met-NH2，Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2，Pro-Gln-Gln-Phe-Tyr-Gly-Leu-Met-NH2，Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2，Asp-Ala-Phe-Tyr-Gly-Leu-Met-NH2，Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2，Ala-Phe-Tyr-Gly-Leu-Met-NH2，Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2，Tyr-Phe-Gly-Leu-Met-NH2，Gly-Phe-Gly-Leu-Met-NH2，Phe-Gly-Leu-Met-NH2(FGLM)和Tyr-Gly-Leu-Met-NH2.
P物質(zhì)類似物的優(yōu)選實(shí)例是P物質(zhì)和FGLM。
P物質(zhì)類似物的氨基酸結(jié)構(gòu)有L-、D-和DL-形式的，它們均包括在本發(fā)明中。本發(fā)明的優(yōu)選形式是其中所有立體結(jié)構(gòu)均是L-形式的多肽。
P物質(zhì)類似物、P物質(zhì)和FGLM的可藥用鹽的實(shí)例是鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、草酸鹽、甲磺酸鹽和對(duì)甲苯磺酸鹽。
本發(fā)明的皮膚創(chuàng)傷愈合促進(jìn)劑可通過已廣泛使用的技術(shù)制備。其制劑形式的實(shí)例是軟膏劑、凝膠劑、泥敷劑、涂敷劑、洗劑、霜?jiǎng)婌F劑、氣霧劑、硬膏劑、混懸劑、乳液、片劑和丸劑，并且促進(jìn)劑也可通過選擇適宜的溶劑以液體制劑形式使用。為制備皮膚創(chuàng)傷愈合促進(jìn)劑，可根據(jù)劑型形式加入填充劑、賦形劑、基質(zhì)、崩解劑、松散填料、粘合劑、成膜劑、潤滑劑、著色劑、pH調(diào)節(jié)劑、增溶劑、助懸劑、緩沖劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、抗菌劑、表面活性劑、抗氧劑、分散劑、乳化劑、溶解試劑或增溶試劑等。
上述制劑的載體或基質(zhì)的實(shí)例是白軟石蠟、液體石蠟、凝固烴、鯨蠟醇、聚乙二醇、明膠、玉米淀粉、藻酸鈉、甲基纖維素、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、親水性塑性基質(zhì)、明膠、糊精、鯨蠟醇、硬脂醇、聚乙二醇、聚乙烯醇、甲氧基亞乙基-馬來酸酐共聚物、聚乙烯基醚、包含乙烯基吡咯烷酮作為聚合組分的聚合物和共聚物、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯扎氯胺、脂肪和油(如橄欖油、山茶油和豆油)、乳糖和水。
皮膚創(chuàng)傷愈合促進(jìn)劑中包含的各種P物質(zhì)類似物及其可藥用鹽的量為0.001-10％重量，優(yōu)選0.005-5％重量。皮膚創(chuàng)傷愈合促進(jìn)劑中包含的胰島素樣生長因子的量為0.0001-5％重量，優(yōu)選0.001-1％重量。
本發(fā)明提供了一種治療皮膚創(chuàng)傷的方法，該方法包括給需此治療的患者施用一種組合物，該組合物包含治療有效量的P物質(zhì)類似物或其可藥用鹽和胰島素樣生長因子以及可藥用添加劑。
本發(fā)明還提供P物質(zhì)類似物或其可藥用鹽和胰島素樣生長因子在制備皮膚創(chuàng)傷治療劑中的應(yīng)用。
本發(fā)明的皮膚創(chuàng)傷愈合促進(jìn)劑可以以各種形式施用，這取決于創(chuàng)傷的部位和創(chuàng)傷的程度。例如，當(dāng)促進(jìn)劑作為外用制劑使用時(shí)，只需將其直接涂抹、噴霧或涂敷到所需皮膚部位(創(chuàng)面)。
本發(fā)明的皮膚創(chuàng)傷愈合促進(jìn)劑的劑量可根據(jù)癥狀、年齡、劑型等適當(dāng)選擇。與胰島素樣生長因子聯(lián)合(混合)的P物質(zhì)類似物及其可藥用鹽的日常規(guī)劑量是0.01-5000mg，優(yōu)選0.1-1000mg，該劑量可一次性地或分?jǐn)?shù)次給藥。與至少一種P物質(zhì)類似物及其可藥用鹽聯(lián)合(混合)的胰島素樣生長因子的日常規(guī)劑量為0.001-1000mg，優(yōu)選0.01-500mg，該劑量可一次性地或分?jǐn)?shù)次給藥。本發(fā)明的皮膚愈合促進(jìn)劑每日可給藥一次至五次。
下面顯示了本發(fā)明的制劑實(shí)例和藥理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果。這些實(shí)施例不限制本發(fā)明的范圍，而旨在使本發(fā)明更清楚和易于理解。
制劑下面給出本發(fā)明的代表性制劑實(shí)例。
實(shí)施例1(軟膏劑A-1)100克中P物質(zhì) 100mgIGF-I 10mg液體石蠟 10g白軟石蠟 適量改變P物質(zhì)的量，可制備濃度為0.2％(w/w)(軟膏劑A-2)、0.5％(w/w)(軟膏劑A-3)和1.0％(w/w)(軟膏劑A-4)的軟膏劑。
實(shí)施例2(軟膏劑B-1)100克中FGLM 100mgIGF-I5mg液體石蠟 10g白軟石蠟 適量改變FGLM的量，可制備濃度為0.3％(w/w)(軟膏劑B-2)、1％(w/w)(軟膏劑B-3)和2％(w/w)(軟膏劑B-4)的軟膏劑。
實(shí)施例3(軟膏劑C-1)100克中FGLM 50mgIGF-I10mg抗壞血酸 3mg液體石蠟 10g親水性塑性基質(zhì) 適量改變FGLM的量，可制備濃度為0.3％(w/w)(軟膏劑C-2)、1％(w/w)(軟膏劑C-3)和3％(w/w)(軟膏劑C-4)的軟膏劑。
藥理學(xué)試驗(yàn)(1)對(duì)表皮伸展的作用對(duì)大鼠(Spraque-Dawley)施用過量的戊巴比妥，然后制備約2×4mm的耳組織切片。在60mm有蓋培養(yǎng)皿中加入18ml各包含表1中的試驗(yàn)藥物[P物質(zhì)、FGLM、IGF-I、P物質(zhì)+IGF-I和FGLM+IGF-I]的TCM 199培養(yǎng)基，并在每個(gè)有蓋培養(yǎng)皿中加入三片組織切片(12個(gè)樣品每組三份)。將組織切片在CO2培養(yǎng)箱(37℃，5％CO2)中培養(yǎng)24小時(shí)，將組織切片用乙醇-乙酸(體積比95∶5)固定以按照常規(guī)方法將每個(gè)組織切片制成三個(gè)組織部分。這些組織部分用蘇木精-曙紅進(jìn)行染色，然后測(cè)定超出切割表面的表皮細(xì)胞層的長度。將組織切片在與上述相同的條件下，使用不含試驗(yàn)藥物的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，作為對(duì)照。這些結(jié)果示于表1。表中的數(shù)值是12個(gè)樣品的平均值。
表1

(2)對(duì)皮膚創(chuàng)傷愈合的作用在乙醚吸入麻醉下，將溶于檸檬酸緩沖液的鏈脲霉素(70mg/kgBW)靜脈注射到大鼠(Wistar)尾部，以制備糖尿病大鼠(DM Rat)(每組5只大鼠)。將等量的僅僅是檸檬酸緩沖液靜脈注射到大鼠(Wistar)中，以制備非糖尿病大鼠(非DM Rat)(每組5只)。靜脈注射后四周，在乙醚吸入麻醉后，用剃刀剃凈所有大鼠的背部，并用脫毛膏脫去毛發(fā)。24小時(shí)后，使用直徑為5mm的皮膚活檢用環(huán)鋸在背部皮膚上以相等間隔制作五處全厚度(即表皮和真皮)傷口。證實(shí)出血，將表2和3中的各種軟膏劑涂敷在傷口上，每日一次。在每日一次涂敷軟膏劑之前，對(duì)背部傷口進(jìn)行照相，并測(cè)定它們的面積。表2顯示了非糖尿病大鼠(非DM Rat)的面積測(cè)定結(jié)果，表3顯示了糖尿病大鼠的面積測(cè)定結(jié)果(DM Rat)。這些表中的數(shù)值是5個(gè)樣品的平均值。
表2

表3

表1清楚地顯示出，即使單獨(dú)使用P物質(zhì)、FGLM或IGF-I培養(yǎng)組織切片，表皮的延伸長度幾乎與使用對(duì)照的情況一樣(沒有添加劑)，但當(dāng)組織切片在P物質(zhì)或FGLM與IGF-I共同存在下進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，延伸長度比單獨(dú)使用這些藥物時(shí)要長2-2.5倍(協(xié)同效果)。表2顯示含有P物質(zhì)和IGF-I的軟膏劑與其中單獨(dú)含有P物質(zhì)或IGF-I的軟膏劑相比顯著地促進(jìn)皮膚創(chuàng)傷愈合。表3顯示含有P物質(zhì)和IGF-I的軟膏劑對(duì)難治的糖尿病性大鼠(DM Rat)也表現(xiàn)出出色的作用。因此，聯(lián)合(混合)施用至少一種P物質(zhì)類似物(典型代表是P物質(zhì)和FGLM)或可藥用鹽與胰島素樣生長因子(典型代表是IGF-I)可通過這些藥物的增效作用有效促進(jìn)皮膚創(chuàng)傷的愈合，所述創(chuàng)傷是例如割裂、擦傷、外科手術(shù)切口、皮膚潰瘍(特別是難治的糖尿病患者的皮膚潰瘍)和燒傷。
工業(yè)實(shí)用性本發(fā)明提供了包含至少一種P物質(zhì)類似物或其可藥用鹽和胰島素樣生長因子作為活性成分的皮膚創(chuàng)傷愈合促進(jìn)劑。
權(quán)利要求
1.一種皮膚創(chuàng)傷愈合促進(jìn)劑，其包含P物質(zhì)類似物或其可藥用鹽和胰島素樣生長因子作為活性成分。
2.一種皮膚創(chuàng)傷愈合促進(jìn)劑，其包含0.001-10％重量的P物質(zhì)類似物或其可藥用鹽和0.0001-5％重量的胰島素樣生長因子作為活性成分。
3.一種皮膚創(chuàng)傷愈合促進(jìn)劑，其包含Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2、Phe-Gly-Leu-Met-NH2及其可藥用鹽中的至少一種和胰島素樣生長因子-I作為活性成分。
4.一種皮膚創(chuàng)傷愈合促進(jìn)劑，其包含0.001-10％重量的Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2、Phe-Gly-Leu-Met-NH2及其可藥用鹽的中至少一種和0.0001-5％重量的胰島素樣生長因子-I作為活性成分。
5.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的皮膚創(chuàng)傷愈合促進(jìn)劑，其中皮膚創(chuàng)傷是割裂、擦傷、外科手術(shù)切口、皮膚潰瘍或燒傷。
6.皮膚創(chuàng)傷愈合促進(jìn)劑，其中權(quán)利要求5中所述的皮膚潰瘍是糖尿病性皮膚潰瘍。
7.一種表皮伸展促進(jìn)劑，其包含P物質(zhì)類似物或其可藥用鹽和胰島素樣生長因子作為活性成分。
8.一種表皮伸展促進(jìn)劑，其包含0.001-10％重量的P物質(zhì)類似物或其可藥用鹽和0.0001-5％重量的胰島素樣生長因子作為活性成分。
9.一種治療皮膚創(chuàng)傷的方法，包括給需此治療的患者施用一種組合物，該組合物包含治療有效量的P物質(zhì)類似物或其可藥用鹽和胰島素樣生長因子，以及可藥用添加劑。
10.一種治療皮膚創(chuàng)傷的方法，包括給需此治療的患者施用一種組合物，該組合物包含治療有效量的Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2、Phe-Gly-Leu-Met-NH2及其可藥用鹽中的至少一種和胰島素樣生長因子-I，以及可藥用添加劑。
11.P物質(zhì)類似物或其可藥用鹽與胰島素樣生長因子在制備皮膚創(chuàng)傷治療劑中的應(yīng)用。
12.Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2、Phe-Gly-Leu-Met-NH2及其可藥用鹽中的至少一種與胰島素樣生長因子-I在制備皮膚創(chuàng)傷治療劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了皮膚創(chuàng)傷如割裂、擦傷、外科手術(shù)切口、皮膚潰瘍和燒傷的愈合促進(jìn)劑。Arg－Pro－Lys－Pro－Gln－Gln－Phe－Phe－Gly－Leu－Met－NH
文檔編號(hào)A61K38/07GK1455677SQ01815486
公開日2003年11月12日 申請(qǐng)日期2001年8月10日 優(yōu)先權(quán)日2000年8月10日
發(fā)明者西田輝夫, 中田勝彥, 中村雅胤 申請(qǐng)人:參天制藥株式會(huì)社, 西田輝夫