剝離各臟器，稱重，并計算臟器指數(shù)。
[006引結(jié)果
[0069] 實驗期間無小鼠死亡，根據(jù)實驗安排進(jìn)行相關(guān)檢測。
[0070] -般情況
[0071] 給藥期間及停藥觀察期間，各組小鼠在體重、體溫等基礎(chǔ)體征，無明顯異常，兩組 比較，無統(tǒng)計學(xué)差異，外觀正常，無崎形，皮毛色澤正常，精神狀態(tài)良好，各天然孔干凈，無異 常分泌物，自主活動正常，無異常行為。
[0072] 臟器檢查及理化檢測
[0073] 根據(jù)實驗要求，在觀察期后，予10%水合氯醒麻醉，腹主動脈取血處死，打開腹腔， 觀察各臟器情況，各組小鼠臟器排列正常，無粘連，無出血，所取血液做理化檢測，各組小鼠 血常規(guī)無異常，肝功、腎功檢查無異常，剝離各臟器，稱重，計算臟器指數(shù)，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，無 統(tǒng)計學(xué)差異，兩組同期進(jìn)行比較，統(tǒng)計學(xué)無差異。
[0074] 結(jié)論
[0075] 通過小鼠急性毒性試驗，小鼠給藥量為52.5g/kg/d，而無明顯毒副作用，可W認(rèn)為 藥物是安全的。通過本實驗可W證實，本發(fā)明中藥在急性毒性試驗中，無急性毒性反應(yīng)，無 遲發(fā)毒性，基本可W認(rèn)為是安全的。
[0076] 長期毒性試驗
[0077] 實驗動物:SPF級，昆明小鼠，40只，20±2g，雌雄各半，由青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物實驗中 屯、提供。
[007引受試藥物
[0079] 實驗組:本發(fā)明實施例1制備的藥物粉末1，水溶解配成生藥含量1.15g/ml、0.85g/ 1111、0.55邑/1111的溶液，4°〇保存?zhèn)溆?。對照組:灌胃生理鹽水，其余條件同本發(fā)明藥物組。
[0080] 實驗方法 [0081 ] 分組
[0082] 取SPF級，昆明小鼠40只，雌雄各半，飼養(yǎng)于青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物實驗中屯、，適應(yīng)性飼 養(yǎng)一周。按隨機(jī)數(shù)表法，將小鼠分為2組，分別是對照組10只、高劑量組10只、中劑量組10只、 低劑量組10只，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)。
[0083] 給藥方法
[0084] 實驗前，各組小鼠禁食不禁水12h，對照組灌胃蒸饋水0.2ml/20g體重，2次/日，高、 中、低劑量組，分別灌胃本發(fā)明實施例1制備的藥物粉末1.0 g/ml、0.75g/ml、0.5g/ml， 0.2ml/20g體重，2次/日，給藥間隔化。連續(xù)給藥14天，停藥觀察7天。
[00化]觀察指標(biāo) [00化]一般情況
[0087] 觀察給藥期間及停藥觀察期間，各組小鼠的一般情況，如發(fā)育情況(體溫、體重、屯、 率），皮毛情況，精神狀態(tài)，各天然孔情況，自主活動情況。
[0088] 臟器檢查及理化檢測
[0089] 根據(jù)實驗要求，給藥期間出現(xiàn)動物死亡，立即解剖，觀察各臟器情況，剝離各臟器， 稱重，并計算臟器指數(shù)，屯、臟取血理化檢測；如無死亡，則根據(jù)實驗要求，在觀察期后，予 10 %水合氯醒麻醉，打開腹腔，觀察各臟器情況，腹主動脈取血處死，做理化檢測，剝離各臟 器，稱重，并計算臟器指數(shù)。
[0090] 結(jié)果
[0091] 實驗期間無小鼠死亡，根據(jù)實驗安排進(jìn)行相關(guān)檢測。
[0092] -般情況
[0093] 給藥期間及停藥觀察期間，各組小鼠在體重、體溫等基礎(chǔ)體征，無明顯異常，兩組 比較，無統(tǒng)計學(xué)差異，外觀正常，無崎形，皮毛色澤正常，精神狀態(tài)良好，各天然孔干凈，無異 常分泌物，自主活動正常，無異常行為。
[0094] 臟器檢查及理化檢測
[00M]根據(jù)實驗要求，在觀察期后，予10%水合氯醒麻醉，腹主動脈取血處死，打開腹腔， 觀察各臟器情況，各組小鼠臟器排列正常，無粘連，無出血，所取血液做理化檢測，各組小鼠 血常規(guī)無異常，肝功、腎功檢查無異常，剝離各臟器，稱重，計算臟器指數(shù)，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，無 統(tǒng)計學(xué)差異，兩組同期進(jìn)行比較，統(tǒng)計學(xué)無差異。
[0096] 結(jié)論
[0097]通過本實驗可W證實，本發(fā)明中藥在長期毒性試驗中，無蓄積毒性，無遲發(fā)毒性， 基本可W認(rèn)為是安全的，故臨床使用是安全的。
[009引實施例2藥物粉末2
[0099] 將淫羊蕾23g、黃精28g、巧實18g、麻黃13g、碟不食草23g、沙苑子28g、連翅18g、± 黨參38g、水檐13g、山藥28g、牡丹皮23g、白附片13g、天文草18g、炙甘草23g、芒黃骨13g、小 蕓木18g、山苦草13g和草木犀18g分別粉碎，送入攬拌機(jī)中混合均勻，每100g混合物，加入 600g的水，煮沸4小時，過濾，獲得第一濾液，100g混合物獲得的濾渣再次加入300g的水，再 次煮沸2小時，過濾，獲得第二濾液，將第一濾液和第二濾液混合，濃縮除去水溶劑，粉碎，干 燥，獲得干燥的粉末。
[0100] 實施例3藥物粉末3
[0101] 將淫羊蕾27g、黃精32g、巧實22g、麻黃17g、碟不食草27g、沙苑子32g、連翅22g、± 黨參42g、水檐17g、山藥32g、牡丹皮27g、白附片17g、天文草22g、炙甘草27g、芒黃骨17g、小 蕓木22g、山苦草17g和草木犀22g分別粉碎，送入攬拌機(jī)中混合均勻，每100g混合物，加入 600g的水，煮沸4小時，過濾，獲得第一濾液，100g混合物獲得的濾渣再次加入300g的水，再 次煮沸2小時，過濾，獲得第二濾液，將第一濾液和第二濾液混合，濃縮除去水溶劑，粉碎，干 燥，獲得干燥的粉末。
[0102] 實施例4飼料I
[0103] 將實施例1制備的藥物粉末400g、食鹽400g、蛋氨酸鋒lOOg、賴氨酸lOOg、維生素 A200g、維生素E200g、乙氧基哇嘟300g均勻混合，混合時間為3分鐘，混合后通過制粒機(jī)制成 直徑3mm顆粒，制粒在55°C下真空干燥，將玉米28kg、豆巧15kg、魚粉3kg混合均勻后粉碎，將 粉碎好的原料進(jìn)行混合，混合時間為5分鐘，通過制粒機(jī)制成直徑2mm顆粒，然后在50°C下真 空干燥，將前面制成的顆粒進(jìn)行混合，混合時間為5分鐘，得到顆粒料成品。
[0104] 比較例1飼料2
[0105] 將淫羊蕾25g、黃精40g、巧實30g、麻黃15g、碟不食草20g、沙苑子25g、連翅35g、± 黨參30g、水檐20g、山藥25g、牡丹皮20g、刺五加35g、白仙茅15g、扭肚藤15g、四葉草20g、馬 尾連15g、桑寄生30g、山大黃20g、南沙參25g和益智15g分別粉碎至40目，混合在一起，然后 將其放入體積為藥材量的10倍并且體積濃度為90 %的乙醇溶液中，采用回流提取法，提取3 次，每次提取時間為化，提取溫度為75°C，將提取溶液混合、過濾后收集濾液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 儀上濃縮，除去乙醇溶劑，干燥，粉碎，獲得免疫制劑，將該制備的免疫制劑30g和憐酸氨巧 20g、食鹽lOg、復(fù)合微量元素添加劑優(yōu)利保2g、復(fù)合維生素添加劑優(yōu)維素5g、賴氨酸Ig和蛋 氨酸Ig均勻混合，混合時間為3分鐘，混合后通過制粒機(jī)制成直徑2mm顆粒，制粒在50°C下真 空干燥，將玉米550g、豆巧lOOg、魚粉80g、小麥130g混合均勻后粉碎，將粉碎好的原料進(jìn)行 混合，混合時間為5分鐘，通過制粒機(jī)制成直徑2mm顆粒，然后在50°C下真空干燥，將前面制 成的顆粒進(jìn)行混合，混合時間為5分鐘，得到顆粒料成品。
[0106] 抗病毒試驗
[0107] 主要試劑及儀器
[0108] 細(xì)胞生長液，低糖DMEM，CIBCO產(chǎn)品，加10 %新生小牛血清（青島泛海生物有限公 司），每100mL營養(yǎng)液加10000IU的的青霉素和鏈霉素。
[0109] 細(xì)胞維持液，除新生小牛血清為2%外，其余同細(xì)胞生長液。
[0110] MTT，3-(4,6-二甲基嚷挫-2-xl)-2,5-乙苯基-四挫漠鹽，Amresco公司產(chǎn)品。
[0111] 二甲基亞諷(DMSO)，分析純，上海凌縫化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品。
[0112] DC3022型酶聯(lián)免疫檢測儀，國營華東電子管廠產(chǎn)品。
[011引藥物準(zhǔn)備
[0114]實施例1制備的藥物粉末1，加水溶解至生藥含量60mg/ml，0.22皿微孔濾膜過濾除 菌。經(jīng)預(yù)試驗測定對Marc-145細(xì)胞的最大安全濃度為6.Omg/ml，用細(xì)胞維持液4倍比稀釋成 6000、1500、375、93.75iig/ml 4個濃度，4°C保存?zhèn)溆谩?br>[011引病毒準(zhǔn)備
[0116] 豬繁殖與呼吸綜合征病毒，本實驗室-20°C保存，臨用前37°C解凍后，用細(xì)胞維持 液稀釋成IOOTCI化0備用。
[0117] 試驗方法
[0118] 在96孔板上接種Marc-145細(xì)胞，培養(yǎng)24h形成單層后，分別采用先加藥物后加病 毒、先加病毒后加藥物、藥物與病毒解育后加3種方式。即先加藥物，解育化后加入病毒液； 先加病毒，解育化后除去病毒液再加入藥物；藥物和病毒解育化后加入到細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng) 72h，按MTT吸收法用酶聯(lián)免疫檢測儀測定各孔OD570值，作為藥物對抗病毒感染細(xì)胞的指標(biāo)。 OD值越大，抗病毒效果越好。
[0119] 數(shù)據(jù)處理
[0120] 計量資料采用X±S表示，組間比較采用X2檢驗，所有資料均采用SPSS12.0統(tǒng)計