專利名稱：肝病保護劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及肝病保護劑。更詳細地說，它涉及含香菇菌絲體提取物的肝病保護劑。
香菇很早就被認為對多種疾病和癥狀有治療作用，但只在最近的時間內(nèi)，對其某些藥理學功效作了描述。已報道了香菇菌絲體提取物具有多種功效，包括抑制腫瘤形成及抑制移植的腫瘤細胞在大腸和肝臟的生長，增加腫瘤形成實驗中大鼠和小鼠的存活率(N.Sugan等人，癌癥通訊(Cancer letter)271，1985；Y.Suzuki等人；日本結(jié)腸直腸學雜志(Journal Japan Society of Coloproctology；43178，1990等)；促有絲分裂的活性(T.Tabata等人，免疫藥理學，2557，1992，Y.Hibino等人，免疫藥理學(Immuno pharma cology)，2877，1994等)；促進抗體產(chǎn)生，并增強其抑制由ADCC(抗體依賴的細胞介導(dǎo)的細胞毒性)引起的免疫性肝細胞損害的效應(yīng)(Y.Mizoguchi等人，肝膽胰研究雜志(Journalof Heroto-Billary-Pancreatic Study)，15127，1987)；以及植物激素效應(yīng)，如促進生根或作物生長(M.Mitsuhashi-Kato等人，植物細胞生理(Plant cell Physiol.)26221，1985)，或者抗植物病毒效應(yīng)(Y.Komuro等人，日本農(nóng)林漁業(yè)部植物病毒研究組的報告，1977)。
本發(fā)明旨在進一步解釋香菇菌絲體提取物的藥理學作用，并推斷其在制藥或保健應(yīng)用方面的新用途。

發(fā)明內(nèi)容
作為為解決上述問題進行的具體研究的一個結(jié)果，本發(fā)明的獲得是以發(fā)現(xiàn)香菇菌絲體提取物顯示明顯的肝病防護作用為基礎(chǔ)的。
相應(yīng)地，本發(fā)明提供的藥物誘導(dǎo)型肝病保護劑中含有香菇菌絲體提取物。
本發(fā)明的藥物誘導(dǎo)型肝病保護劑可以是一種組合物形式，用于治療和/或預(yù)防藥物誘導(dǎo)型肝病，該組合物包含香菇菌絲體提取物和任選的藥學可接受載體。
本發(fā)明的藥物誘導(dǎo)型肝病保護劑可以是食物的形式或飲料的形式，這些形式并沒有限制性。
本發(fā)明還提供了一種保護免受藥物誘導(dǎo)型肝臟損傷的方法，其中包括香菇菌絲體提取物的施用。
另外，本發(fā)明也提供香菇菌絲體提取物用于制備藥物誘導(dǎo)型肝病保護劑的用途。
附圖簡述

圖1顯示的是香菇菌絲體提取物體外肝病保護試驗的結(jié)果，使用的是原代培養(yǎng)的大鼠肝細胞。
圖2顯示的是香菇菌絲體提取物體內(nèi)肝病保護試驗的結(jié)果，使用的是CCl4誘導(dǎo)的大鼠肝損傷模型。
圖3顯示的是香菇菌絲體提取物對藥物誘導(dǎo)型肝病患者的肝保護試驗結(jié)果。
本發(fā)明的優(yōu)選實施方案本發(fā)明的藥物誘導(dǎo)型肝病保護劑所用的香菇菌絲體提取物是指通過壓碎和分解固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)的香菇菌種生長的菌絲體獲得提取物，優(yōu)選的是在水和酶的存在下，壓碎和分解含香菇菌絲體的固體培養(yǎng)基而獲得的提取物。
此處所用香菇菌絲體提取物最好由如下操作獲得，但不限于該操作，香菇菌種在以蔗渣和去脂稻糠為基礎(chǔ)的固體培養(yǎng)物上培養(yǎng)，長出菌絲體，然后含生長的菌絲體之固體培養(yǎng)基經(jīng)脫木質(zhì)處理使30％(重量)或更少的物質(zhì)能透過12目篩網(wǎng)。向脫木質(zhì)處理的固體培養(yǎng)物中加入水和選自以下的一種或多種酶纖維素酶，蛋白酶或葡糖苷酶，而固體培養(yǎng)基的溫度保持在30-55℃。所述固體培養(yǎng)物在上述酶的存在下壓碎研細，使至少70％(重量)的蔗渣纖維能透過12目篩網(wǎng)。然后，溫度升高至95℃，使酶失活并滅菌，得到的懸液經(jīng)過濾則成為香菇菌絲體提取物。香菇菌絲體提取物可直接用于本發(fā)明的保護劑，但也可以濃縮且凍干成粉末保存，以便于用于不同的劑型。凍干后的粉末是灰色、吸濕的，并具有特殊的味道和氣味。
由此獲得的香菇菌絲體提取物通過酚-硫酸方法檢測含15-50％，最好為20-40％(w/w)的碳水化合物，通過Lowry方法檢測含10-40％，最好為13-30％(w/w)的蛋白質(zhì)，以沒食子酸為標準品用10-40％，最法檢測，其含1-5％，最好為2.5-3.5％(w/w)的多酚。香菇菌絲體提取物還含(但不限于)約0.1％的脂肪，約0.4％的纖維和約20％的灰分。
香菇菌絲體提取物中糖組成(％)的一個例子如下木糖15.2，阿拉伯糖8.2，甘露糖8.4，葡萄糖39.4，半乳糖5.4，半乳糖胺12.0，葡糖醛酸11.3。但隨培養(yǎng)條件或其他因素的不同，糖組成也會改變。
在所有下列實驗中，香菇菌絲體提取物均顯示明顯的藥物誘導(dǎo)性肝病的保護作用用大鼠肝細胞的體外實驗，用CCL4誘導(dǎo)大鼠肝病的體內(nèi)實驗和對藥物誘導(dǎo)型肝病患者的實驗。
本發(fā)明中的保護劑可用于由下列抗生素引起的肝病頭孢烯類抗生素(如頭孢沙定、頭孢呋辛鈉、拉他頭孢鈉)，氨基糖甙類抗生素(如硫酸阿米卡星)，抗腫瘤藥(如阿柔比星)，抗酸細菌抗生素(如利福平)，四環(huán)素，大環(huán)酯類抗生素，青霉素；中樞神經(jīng)藥劑如退熱藥，鎮(zhèn)痛藥和消炎藥(如阿斯匹林)，鎮(zhèn)靜劑(如，氯噁唑侖)，抗癲癇類藥(如丙戊酸鈉)，全身麻醉劑(如氟烷)，鎮(zhèn)靜催眠藥(如苯巴比妥)，普通感冒藥，循環(huán)系統(tǒng)藥如抗心律失常藥(如，吲哚洛爾)，血管舒張藥(如曲區(qū)地爾)，循環(huán)系統(tǒng)藥(如鹽酸尼卡地平)，抗高血壓藥(如鹽酸柳胺羥胺)，抗血管硬化藥(如氯貝特)，抗代謝類藥如喃氟啶；激素類藥如磷雌氮芥，磺胺類藥如磺胺甲噁唑；抗結(jié)核藥如異煙肼；合成抗菌藥如諾氟沙星；以及所說的環(huán)境類激素如雙酚類、鄰苯二甲酸酯，氯乙烯單體，壬酸酯和醇類，因此本發(fā)明中的保護劑可用作治療或/和預(yù)防藥物誘導(dǎo)的肝病的組合物，其中含香菇菌絲體提取物和任選的藥學可接受載體。
它們最好的給藥途徑是口服給藥，但也可以通過靜脈、皮下或其他途徑給藥。適用于口服給藥的劑型包括片劑、膠囊、粉末、顆粒、溶液、糖漿等。但并不限于此。
藥學可接受的載體包括合適的賦形劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、調(diào)味劑、著色劑、增溶劑、增懸劑，包衣劑或本領(lǐng)域已知的其他成分，但并不限于此。
由醫(yī)生、藥劑師或營養(yǎng)學家根據(jù)病人年齡，體重和身體狀況，給藥途徑和其他因素可決定本發(fā)明中保護劑的劑量。該劑量并不嚴格限制，因為本發(fā)明的保護劑所含的香菇菌絲體提取物非常安全，可用作食物，但一般劑量范圍是以香菇菌絲體粉末算每日40mg-6g，最好為400mg-1.8g，它可與造成肝病的藥物一起施用。
本發(fā)明的保護劑也可以食物的形式提供。優(yōu)選的食物形式包括顆粒、面條、糖果、膠凍、甜餅等。本發(fā)明的保護劑還可以飲料的形式提供。這些食物或飲料中除含香菇菌絲體提取物外，可含維生素，礦物質(zhì)，如鈣、食用纖維如聚氨基葡萄糖，蛋白質(zhì)如大豆提取物，脂肪如licithin，糖類如乳糖。
然而，下列實施例進一步說明本發(fā)明并不局限于以上的范圍，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可對其進行不同改變和修飾，這些改變和修飾同樣包括在本發(fā)明中。
然后，這種含培養(yǎng)基的混合物在可變速齒輪泵中循環(huán)，固體培養(yǎng)基在齒輪作用下壓碎研細，持續(xù)約200分鐘，使約80％(重量)的蔗渣纖維可透過12目篩網(wǎng)。含培養(yǎng)基物的混合物被壓碎研細的同時，上述混合基的溫度逐漸升高。然后，含培養(yǎng)基的混合物繼續(xù)加熱至90℃并保持30分鐘。加熱至90℃是為了保證酶失活和滅菌。得到的含培養(yǎng)基的混合物經(jīng)60目的紗網(wǎng)過濾得到香菇菌絲體提取液，該液體經(jīng)濃縮然后轉(zhuǎn)化為凍干的粉末。實施例2用原代培養(yǎng)的肝細胞進行體外實驗1)大鼠肝細胞的分離和原代培養(yǎng)從大鼠(雄性Wistar大鼠，6-8周齡)分離肝細胞，并在37℃下5％CO2條件下培養(yǎng)過夜。
2)用CCl4和待測物處理肝細胞步驟1)中制備的肝細胞用500ml無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時，培養(yǎng)基中含不同濃度的CCl4(DMSO溶液肝病誘導(dǎo)劑)和待測物(香菇菌絲體提取物或?qū)φ瘴镔|(zhì))3)測定GOT活性培養(yǎng)上清液轉(zhuǎn)移至Eppendorf管中，在室溫10000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘。用GOT試劑(Ligui Tech Got IFCC來自Boehringer Mannheim)檢測該上清液中GOT活性。以不含任何待測物質(zhì)的培養(yǎng)上清液中平均的GOT活性為基準，通過計算各培養(yǎng)上清液中GOT活性百分比，評估肝病程度。結(jié)果見圖1。
如圖1顯示，香菇菌絲體提取物有保護肝臟免受損害的作用。實施例3用CCl4誘導(dǎo)的大鼠肝病體內(nèi)實驗制備香菇菌絲體提取物顆粒，其中含20％的香菇菌絲體提取粉末(剩余部分為乳糖)。大鼠口服給藥7天檢查其對CCl4誘導(dǎo)肝病的保護作用。施用香菇菌絲體提取物顆粒后，腹膜內(nèi)注射CCl4誘導(dǎo)肝病，然后從腹腔動脈采血，測定血清的GOT和GPT，結(jié)果如圖2所示。
如圖2顯示，香菇菌絲體提取物有保護肝臟免受損害的作用。實施例4對患藥物誘導(dǎo)的肝病患者的實驗兩名由化療引起肝病的患者(均并發(fā)肺結(jié)核)每日接受6g香菇菌絲體提取物顆粒(含20％的香菇菌體提取物粉末，其余為乳糖)，持續(xù)4周。連續(xù)施用引起肝病的藥物(乙胺丁醇、異煙肼、利福平)。4周后檢測病人外周血中GOT和GDP水平。結(jié)果如圖3所示。兩位患者的GOP和GPT水平均下降至正常范圍內(nèi)。未發(fā)現(xiàn)有副作用。
工業(yè)用途本發(fā)明中的藥物誘導(dǎo)型肝病保護劑含香菇菌絲體提取物，可用于預(yù)防或治療藥物引起的肝病。本發(fā)明中的保護劑適用于大范圍的工業(yè)用途，因為它們可與引起肝病的藥物共用，并且沒有任何副作用，可安全使用。
權(quán)利要求
1.一種含香菇菌絲體提取物的針對藥物誘導(dǎo)型肝病保護劑。
2.呈組合物形式的權(quán)利要求1的用于治療和/或預(yù)防藥物誘導(dǎo)型肝病保護劑，其中含香菇菌絲體提取物和任選地藥學可接受載體。
3.權(quán)利要求1或2中的保護劑用于口服給藥。
4.呈食物形式的權(quán)利要求1的保護劑。
5.呈飲料形式的權(quán)利要求1的保護劑。
6.一種保護免受藥物誘導(dǎo)型肝病的方法，包括施用香菇菌絲體提取物。
7.香菇菌絲體提取物用于制備藥物誘導(dǎo)型肝病保護劑的用途。
全文摘要
含香菇菌絲體提取物的藥物誘導(dǎo)型肝病保護劑。
文檔編號A23L2/52GK1332632SQ99815186
公開日2002年1月23日 申請日期1999年11月26日 優(yōu)先權(quán)日1998年11月27日
發(fā)明者藤村勝行, 山口康代, 杉野玲子, 白銀英樹, 竹內(nèi)豐實 申請人:小林制藥株式會社, 長岡均