專(zhuān)利名稱：:一種真菌發(fā)酵物飼料添加劑及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種真菌發(fā)酵物飼料添加劑及其制備方法和應(yīng)用。技術(shù)背景目前，我國(guó)農(nóng)藥、獸藥、存在安全隱患的飼料添加劑不合理應(yīng)用、濫用以及環(huán)境污染現(xiàn)象非常嚴(yán)重，畜禽產(chǎn)品中農(nóng)藥、獸藥普遍嚴(yán)重超標(biāo)，由此引發(fā)的一系列事件不勝枚舉。在食品和動(dòng)物詞料中使用轉(zhuǎn)基因等基因工程新技術(shù)也受到質(zhì)疑，甚至利用現(xiàn)代技術(shù)生產(chǎn)出的合成氨基酸、維生素以及其它飼料添加劑也在某些生產(chǎn)體系中被禁用。研制和開(kāi)發(fā)來(lái)源于純天然的綠色環(huán)保的飼料添加劑是目前的熱點(diǎn)。近年來(lái)，應(yīng)用有益微生物進(jìn)行飼料添加劑的開(kāi)發(fā)和生產(chǎn)，為飼料添加劑提供了一條新發(fā)展途徑，為食品工業(yè)、飼料工業(yè)和畜禽飼養(yǎng)提供了一種健康、無(wú)毒、無(wú)污染的選擇。冬蟲(chóng)夏草(Cordycepssiiiensis)是一種名貴的傳統(tǒng)中藥，具有很高的藥用價(jià)值。據(jù)報(bào)道，從天然蟲(chóng)草中分離出蝙蝠蛾擬青霉(Paecilomyceshepialid)，蝙蝠蛾蛀霉(Scytalidiumhepiali)，冬蟲(chóng)夏草頭孢菌(Cephalosporiumdongchongxiacao),中國(guó)被毛孢(Hirsutellasinensis)等多種真菌?？蒲腥藛T發(fā)現(xiàn)從天然蟲(chóng)草分離獲得的真菌發(fā)酵得到的人工蟲(chóng)草菌絲體在有效成分、藥理活性和臨床作用等方面與冬蟲(chóng)夏草具有很大的相似性。蟲(chóng)草菌絲體中除含有蟲(chóng)草多糖外，還有氨基酸、微量元素、D-甘露醇和麥角甾醇、核苷類(lèi)、維生素類(lèi)、蕈糖、硬脂酸等物質(zhì)，具有廣泛的藥理活性，其活性涉及到免疫系統(tǒng)、心腦血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、肝臟和腎臟功能等方面。目前已有多種來(lái)源于蟲(chóng)草菌絲體的藥品和保健品上市。目前對(duì)蟲(chóng)草菌絲體的研究都僅著眼于藥品或保健食品的開(kāi)發(fā)，在國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)上，尚未見(jiàn)利用蟲(chóng)草菌絲體做飼料添加劑的相關(guān)產(chǎn)品。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種來(lái)源于有益真菌，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，安全的飼料添加劑，及其制備工藝和應(yīng)用。為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種真菌發(fā)酵物飼料添加劑，其特征在于所述真菌發(fā)酵物是蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物。蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物飼料添加劑的制備工藝，其特征在于包括下述步驟(1)菌種制備將自冬蟲(chóng)夏草中分離的蝙蝠蛾擬青霉菌株經(jīng)離子束誘變后得到的高產(chǎn)菌株接種到專(zhuān)用斜面培養(yǎng)基中，24—26'C下培養(yǎng)7天，待產(chǎn)生大量的孢梗束后，得液體搖瓶菌種；所述專(zhuān)用斜面培養(yǎng)基配方為4%葡萄糖，1%馬鈴薯(煮汁后兩層紗布過(guò)濾)、1%蛋白胨，PH6.3;(2)搖瓶培養(yǎng)將所述步驟(1)中得到的液體搖瓶菌種接入裝有加入消泡劑的搖瓶種子培養(yǎng)基的三角瓶，24—26。C下，置于旋轉(zhuǎn)式搖床(170rpm)上振蕩培養(yǎng)72—120h，即得到可作為一級(jí)種子罐的液體種子；所述搖瓶種子培養(yǎng)基配方為.-4%葡萄糖，1%蛋白胨，PH6.0—7.0;(3)—級(jí)種子罐發(fā)酵種子罐內(nèi)加入液體培養(yǎng)基和消泡劑，滅菌冷卻后將所述步驟(2)中得到的液體種子接入培養(yǎng)，接種量5—10%，罐溫24-26i:，通氣量1:0.5(V/V'min),罐壓4.9一7.5x104Pa，經(jīng)36—72h通氣培養(yǎng)，菌種大量產(chǎn)孢達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，得到種子培養(yǎng)液；所述液體培養(yǎng)基配方為3.0%白砂糖，2.0%黃豆粉，0.1%KH2PO4;(4)發(fā)酵罐發(fā)酵:發(fā)酵罐內(nèi)加入發(fā)酵用培養(yǎng)基和消泡劑，滅菌冷卻后，從一級(jí)種子罐內(nèi)將所述步驟(3)中得到的種子液接入發(fā)酵罐，接種量5—10%，通氣培養(yǎng)，罐溫24—26°C，攪拌轉(zhuǎn)速150r/m，通氣量l:0.4—0.5(V/V'min)，罐壓4.903xl04Pa，培養(yǎng)時(shí)間72-96h，得到用于固體發(fā)酵的發(fā)酵液；所述的發(fā)酵用培養(yǎng)基配方為3.0%白砂糖，2.0%黃豆粉，0.1%KH2PO4，0.1%MgSO4;(5)固體培養(yǎng)發(fā)酵固體發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至室溫，接入所述步驟(4)中得到的發(fā)酵液，接種量5—10%，保持培養(yǎng)基含水量為60-65%;接種后放置于淺盤(pán)，料厚2-3cm，在人工模擬環(huán)境培養(yǎng)室中，分期管理，0-12h，24-26°C，RH85%,13-72h，24-26°C，RH85%，并進(jìn)行通風(fēng)；73-168h，24-26°C，RH90%以上，通風(fēng)；待物料內(nèi)外均長(zhǎng)滿菌絲；所述的固體發(fā)酵培養(yǎng)基配方為60%玉米粉，35%豆粕，PH6.3—6.5;(6)烘干、粉碎、后處理將步驟5所得菌絲和培養(yǎng)基在55'C烘干，在無(wú)菌工作間進(jìn)行粉碎、過(guò)100目篩后進(jìn)行包裝，檢驗(yàn)，合格即得所述蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物飼料添加劑。上述步驟(2)中500ml三角瓶裝200ml所述加入消泡劑的搖瓶種子培養(yǎng)基，接入二支試管的上逸步驟(1)中得到的液體搖瓶菌種。上述步驟(3)和(4)所述的滅菌過(guò)程是指通入熱蒸汽加熱到12rc，13-15xl(^Pa壓力下，30min;歩驟(5)所述的滅菌過(guò)程是指固體發(fā)酵培養(yǎng)基加入滅菌鍋，通入熱蒸汽加熱到121°C，13-15xl04Pa壓力下，間歇式滅菌二次，每次lh。來(lái)源于蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物的詞料添加劑在制備動(dòng)物飼料中的應(yīng)用，其特征在于所述動(dòng)物飼料中含有0.05~0.5%所述來(lái)源于蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物的詞料添加劑。本發(fā)明的有益效果是研究表明，蟲(chóng)草菌絲體中有動(dòng)物所需的多種氨基酸、蛋白質(zhì)、脂肪，以及蟲(chóng)草素、蟲(chóng)草腺苷、核苷酸、麥角甾醇、多糖、甘露醇等多種營(yíng)養(yǎng)和活性成分。經(jīng)過(guò)多批次的動(dòng)物飼喂試驗(yàn)，結(jié)果證實(shí)僅在飼料中添加0.25%的蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物，就能提高動(dòng)物日增重，顯著促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，提高詞料轉(zhuǎn)化率，提高動(dòng)物生產(chǎn)性能和抗病能力。由于動(dòng)物抗病力增強(qiáng)，抗生素等藥物的使用大大減少，不僅提高的動(dòng)物產(chǎn)品的安全性，有效改善目前畜禽養(yǎng)殖業(yè)抗生素濫用的現(xiàn)狀，而且減少了養(yǎng)殖戶購(gòu)買(mǎi)獸藥的支出，節(jié)約了動(dòng)物養(yǎng)殖的成本，提高養(yǎng)殖戶的收顯。蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物還可提高禽畜肉類(lèi)的品質(zhì)。試驗(yàn)證明，少量蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物即可顯著提高動(dòng)物肌肉中的蛋白質(zhì)、總氨基酸、人體必需氨基酸、風(fēng)味氨基酸含量。另外，肌內(nèi)脂肪在豬肉食用品質(zhì)中占具重要地位，它與肌肉的風(fēng)味、多汁性和嫩度有關(guān)。在一定范圍內(nèi)，肌肉中脂肪含量越多，肉的多汁性越好，因?yàn)橹境旧懋a(chǎn)生潤(rùn)滑作用外，還能刺激口腔釋放唾液。研究發(fā)現(xiàn)蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物能顯著提高商品肉雞和豬肌肉中粗脂肪的含量，從而改善肌肉風(fēng)味，提高其肌肉品質(zhì)，滿足人們對(duì)高品質(zhì)肉類(lèi)產(chǎn)品的要求。蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物作為動(dòng)物飼料添加劑的應(yīng)用還為新的高品質(zhì)畜禽品種的開(kāi)發(fā)提供了有利條件。另外蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物無(wú)毒無(wú)害，更具有減輕飼料對(duì)詞養(yǎng)環(huán)境的污染的獨(dú)特作用，是一種真正意義上的綠色功能型詞料添加劑。作為詞用微生物添加劑研發(fā)的代表，蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物飼料添加劑的推廣和應(yīng)用，不僅能帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)效益、生態(tài)效益和綠色漁牧產(chǎn)品，還必將給整個(gè)飼料行業(yè)帶來(lái)一場(chǎng)新的變革。蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物具有很高的生物活性，但如果添加到動(dòng)物基礎(chǔ)飼料中的量過(guò)少，起不到應(yīng)有的作用；添加的量過(guò)多，由于量效關(guān)系已達(dá)平衡，不僅不能取得更好的效果，實(shí)際上是一種浪費(fèi)，給養(yǎng)殖戶造成不必要的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。本發(fā)明公開(kāi)了蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物作為飼料添加劑添加到動(dòng)物基礎(chǔ)飼料中的優(yōu)選比例，使蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物的有益作用和合理的飼料成本之間達(dá)到平衡。本發(fā)明公開(kāi)的蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物制備方法所用菌株，是分離自冬蟲(chóng)夏草的蝙蝠蛾擬青霉(Pflec//ow_ycw/印/a/W)經(jīng)過(guò)離子束誘變，嚴(yán)格篩選所得，產(chǎn)量高，性能穩(wěn)定，但菌株基因并沒(méi)有發(fā)生突變。發(fā)酵工藝流程簡(jiǎn)單。經(jīng)過(guò)反復(fù)的試驗(yàn)和摸索，才使發(fā)酵各步所用的培養(yǎng)基具有配方簡(jiǎn)單、原料廉價(jià)易得的優(yōu)點(diǎn)。經(jīng)過(guò)數(shù)十次的全控溫?fù)u床和300升發(fā)酵罐及全自動(dòng)人工氣候室固體發(fā)酵培養(yǎng)的試驗(yàn)證明，本發(fā)明所述的蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物制備方法產(chǎn)率高，產(chǎn)品質(zhì)量易控。中國(guó)專(zhuān)利(公開(kāi)號(hào)CN1331413C)公開(kāi)了蟬擬青霉發(fā)酵物的制備方法，但所用菌種與本發(fā)明完全不同。中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)(公開(kāi)號(hào)CN1215754A)公開(kāi)了蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物的制備方法，但是該方法菌種的獲得、培養(yǎng)基和生產(chǎn)工藝與本發(fā)明不同。另外，在發(fā)酵過(guò)程中嚴(yán)格消毒，確保發(fā)酵產(chǎn)物無(wú)污染。因此，用本發(fā)明制備的蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物完全適于應(yīng)用于飼料工業(yè)。圖1是蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物飼料添加劑的制備工藝流程圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作具體說(shuō)明。實(shí)施例一一種蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物飼料添加劑的制備工藝如圖1所示，具體說(shuō)明如下1、菌種制備將自冬蟲(chóng)夏草中分離的蝙蝠蛾擬青霉(尸tfe"7owycw/^/7/"/zW)經(jīng)離子束誘變后得到的高產(chǎn)菌株接種到專(zhuān)用斜面培養(yǎng)基中，24—26'C下培養(yǎng)7天，待產(chǎn)生大量的孢梗束后，得液體搖瓶菌種。專(zhuān)用斜面培養(yǎng)基配方為4%葡萄糖，1%馬鈴薯(煮汁后兩層紗布過(guò)濾)、1%蛋白胨，其余為水，PH6.3。2、搖瓶培養(yǎng)將步驟1得到的液體搖瓶菌種接入裝有種子培養(yǎng)基的三角瓶中，二支試管的所述液體搖瓶菌種接入一只裝有200ml搖瓶種子培養(yǎng)基的500ml三角瓶中，搖瓶種子培養(yǎng)基中加入消泡劑，24—26r下，置于旋轉(zhuǎn)式搖床(170rpm)上振蕩培養(yǎng)72—120h，即得到可作為一級(jí)種子罐的液體種子。所用搖瓶種子培養(yǎng)基配方為4%葡萄糖，1%蛋白胨，其余為水，PH6.0—7.0。3、一級(jí)種子罐發(fā)酵扣除滅菌過(guò)程中的冷凝水，然后按配方在種子罐內(nèi)加入液體培養(yǎng)基的原料和消泡劑，通入熱蒸汽加熱到12TC,13-15xl(^Pa壓力下，30min;滅菌冷卻后將步驟2得到的液體種子接入培養(yǎng)，接種量5—10%，罐溫624-26°C，通氣量1:0.5(V/V'min)，罐壓4.9—7.5><104Pa，經(jīng)36—72h通氣培養(yǎng)，菌種大量產(chǎn)孢達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，得到種子培養(yǎng)液。所用液體培養(yǎng)基配方為3.0%白砂糖，2.0%黃豆粉，0.1%KH2PO4，其余為水。4、發(fā)酵罐發(fā)酵扣除滅菌過(guò)程中的冷凝水，然后按配方在發(fā)酵罐內(nèi)加入發(fā)酵用培養(yǎng)基原料和消泡劑，通入熱蒸汽加熱到121°C,13-15xl04Pa壓力下，30min;滅菌冷卻后，從一級(jí)種子罐內(nèi)將步驟3得到的種子液接入發(fā)酵罐，接種量5—10%，通氣培養(yǎng)，罐溫24—26'C，攪拌轉(zhuǎn)速150r/m，通氣量l:0.4—0.5(V/Vmin)，罐壓4.9xlO"Pa，培養(yǎng)時(shí)間72-96h，得到用于固體發(fā)酵的發(fā)酵液。所用發(fā)酵用培養(yǎng)基配方為3.0%白砂糖，2.0%黃豆粉，0.1%KH2PO4，0.1%MgSO4,其余為水。5、固體培養(yǎng)發(fā)酵固體發(fā)酵培養(yǎng)基加入立式圓形壓力滅菌鍋，通入熱蒸汽加熱到12TC，13-15xlO"Pa壓力下，間歇式滅菌二次，每次lh;冷卻至室溫，接入步驟4得到的發(fā)酵液，接種量5—10%，保持培養(yǎng)基含水量為60-65%。接種后放置于淺盤(pán)，料厚2-3cm，在人工模擬環(huán)境培養(yǎng)室中，分期管理，0-12h，25°C，RH85%;13-72h，25°C，RH85%，并進(jìn)行通風(fēng)；73-168h，25°C，RH90%以上，通風(fēng)。待物料內(nèi)外均長(zhǎng)滿菌絲。所用固體發(fā)酵培養(yǎng)基配方為60%玉米粉，35%豆粕，PH6.3—6.5。6、烘干、粉碎、后處理將步驟5所得菌絲和培養(yǎng)基在55'C烘干，在無(wú)菌工作間進(jìn)行粉碎、過(guò)100目篩后進(jìn)行包裝，檢驗(yàn)，合格即得到蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物飼料添加劑。上述步驟(2)、(3)和(4)中所用的消泡劑為聚氧丙烯氧化乙烯甘油醚，用量為培養(yǎng)基總量的0.03%。實(shí)施例二采用實(shí)施例一所述方法制備三批檢驗(yàn)合格的蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物詞料添加劑，其主要技術(shù)參數(shù)見(jiàn)表1。_表1三批蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物技術(shù)參數(shù)_~"蝙蝠蛾擬青霉接種量飼料添加劑產(chǎn)量產(chǎn)率％~~活性成分含量15%67%66%29%27%70%70%30%310%75%73%32%實(shí)施例三蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物促進(jìn)肉雞生長(zhǎng)試驗(yàn)1、材料與方法1.1試驗(yàn)動(dòng)物與分組于合肥正旺公司選擇1日齡增壽青腳麻雞3600只，公母比例各半，體重(39.8±1.5g)。經(jīng)觀察6h無(wú)異常，然后將其隨機(jī)分成2組，每組分3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)為600只。1.2試驗(yàn)動(dòng)物閂糧組成與營(yíng)養(yǎng)試驗(yàn)飼料原料玉米、大豆粕、小麥麩、菜籽粕、磷酸氫鈣符合國(guó)家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(GB/13078-2001〕的要求。參照國(guó)家肉雞的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)(NY/T33-1986)和NRC(1994〉家禽詞養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計(jì)日糧，F(xiàn)-旺公司自行加工配置，蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物按照0.25%和0%(對(duì)照組)比例添加到基礎(chǔ)曰糧(日糧中不添加任何藥物添加齊J)中并攪拌混勻，經(jīng)測(cè)定變異系數(shù)小于8%。1.3肉雞飼養(yǎng)試驗(yàn)日期與管理所有試驗(yàn)雞均飼養(yǎng)于同一個(gè)雞舍內(nèi)，用塑料網(wǎng)分割成6個(gè)小區(qū)。由專(zhuān)人負(fù)責(zé)，地面平養(yǎng)，育雛期每平方米30只，育成期(48周齡)每平方米12只。用料桶人工飼喂，自由采食。用飲水器自由飲水。育雛第一周室溫控制在3rC32'C，以后每周降低23°C，四周后保持在23~25°C。第一周24h光照，以后自然光照。定期進(jìn)行疫苗的免疫接種，試驗(yàn)期為56d。1.4免疫10日齡時(shí)，試驗(yàn)雞同時(shí)進(jìn)行新城疫疫苗(批號(hào)0510168)免疫，疫苗由乾元浩南京生物藥廠生產(chǎn)；禽流感疫苗(Hs亞型HI抗原)免疫，批號(hào)20060212，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院哈爾濱獸醫(yī)研究所提供。2、蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物對(duì)仔雞全期增重效果及飼料轉(zhuǎn)化效率的影響具體試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2:表2蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物對(duì)肉仔雞生產(chǎn)性能的影響組別飼喂天數(shù)初重(g/只)末重(g/只)日增重(g/只)曰均耗料(g,只)飼料轉(zhuǎn)化率(%)試驗(yàn)組5639.71±1.411120.86±87.25a18.25±0.60a48.37±1.802.63±0.12a對(duì)照組5640.40±1.43950.91±154.2216.26±0.8450.91±2.953.23±0.17注a:與對(duì)照組比較，P<0.05。由表中結(jié)果可以看出在飼料中添加蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物飼喂肉用增壽青腳麻雞，添加0.25%能有效地提高其增重效果，試驗(yàn)組的日增重與空白對(duì)照組差8異達(dá)顯著水平(P0.05)，比對(duì)照組日增重提高了12.23%。另外日糧中添加0.25%培養(yǎng)物能顯著改善飼料的轉(zhuǎn)化率，與對(duì)照組相比差異亦達(dá)顯著水平(P<0.05)。實(shí)施例四蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)試驗(yàn)驗(yàn)1、試驗(yàn)動(dòng)物與分組選擇21日齡斷奶、體重基本一致的健康杜-長(zhǎng)-大三元雜交商品代豬96頭，隨機(jī)分為2組，每組6個(gè)重復(fù)，每重復(fù)8頭，各組體重差異不顯著(PX).05)。7d預(yù)試期，30d試驗(yàn)期。飼料用合肥華杰畜禽公司的飼料配方和飼料為基礎(chǔ)日糧(日糧中不添加任何藥物添加劑)。蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物在基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上以0.25%的添加量添加，對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧。2、蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響結(jié)果見(jiàn)表3。表3蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物促進(jìn)對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響組別初均重末均重日耗料日增重料重比_(kg/頭)(kg/頭)(kg/頭)(g/頭)_i式驗(yàn)組8.84±0.8226.35±1.940.924583.23±68a1.63±0.17對(duì)f^纟fl8.84±0.8724.23±2.860.863512.48±381.68±0.12注a:與對(duì)照組比較，P<0.05。從表3中可以看出經(jīng)過(guò)30d的試驗(yàn)，試驗(yàn)組仔豬日增重與對(duì)照組相比差異顯著(p<0.05)。試驗(yàn)組仔豬日增重比對(duì)照組髙13.86%。實(shí)驗(yàn)期間發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)物組共有11頭次仔豬腹瀉,對(duì)照組為26頭次，試驗(yàn)和對(duì)照組相比腹瀉率降57.7%?？梢?jiàn)該飼料添加劑能明顯提高日增重、降低斷奶仔豬腹瀉率。實(shí)施例五蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物對(duì)肉雞肌肉品質(zhì)的影響1、材料試驗(yàn)用肉雞是56日齡青腳土雜商品肉雞。以添喂蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物的土雜肉仔雞組為試驗(yàn)組，添加量為0.25%;日糧中未添加蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物喂養(yǎng)的雞組為空白對(duì)照組。隨機(jī)從各組抽取公、母雞各5羽，經(jīng)放血屠宰去皮，隨即取相同部位單位面積皮下脂肪稱重，另取相同部位新鮮胸肌、腿肌肉，凍存待分析。2、檢測(cè)方法2.1常規(guī)成分分析依據(jù)GB6435-86，測(cè)定水分；依據(jù)GB6438-86，測(cè)定灰分；依據(jù)GB6433-86，測(cè)定蛋白質(zhì)；依據(jù)GB6434-86，測(cè)定粗脂肪的含量。2.2氨基酸分析樣品在11CTC下鹽酸水解24h，用日立835-50型氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定其中17種氨基酸含量。另將樣品經(jīng)5mo1/LNaOH水解，用島津RF-540型熒光光度計(jì)測(cè)定色氨酸的含量。2.3無(wú)機(jī)元素分析Fe、Mn采用原子吸收光譜法，參照GB/T12396-1990。Ca:原子吸收光譜法，參照GB/T12398-1990。Zn:原子吸收光譜法，參照GB/T5009.14-1996。Cu:原子吸收光譜法，參照GB/T5009.13-1996。Se:釆用GB/T12399-1996的原子熒光法。2.4數(shù)據(jù)處理與分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用DPS(V3.01)專(zhuān)業(yè)版數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。3、結(jié)果與分析3.1肌肉中一般營(yíng)養(yǎng)成分的分析結(jié)果結(jié)果見(jiàn)表4表4肉雞肌肉中一般營(yíng)養(yǎng)成分的含量(％)組別水分含量蛋白質(zhì)含量肌間脂肪量灰分含量胸試驗(yàn)組71.27±0.7326,51±0.63a2.29±0.I6a1.12±0.09肌對(duì)昭八、、組71.42±0.4524.68±0.821.66±0.151.14±0.06腿試驗(yàn)組72.19士0.8824.83±0.51a1.91±0.08a1.15±0.09肌對(duì)昭組72.30±1.0922.81±0.611.46±0.151.17±0.03注a:與對(duì)照組比較，P<0.05。由表4的結(jié)果可知，日糧中添加0.25。/。的蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物不影響土雜商品肉雞肌肉中水分和灰分的含量，但能顯著提高肉雞胸肌和腿肌中蛋白質(zhì)的含量(P〈0.05)，含量分別增加6.76%和8.19%;同時(shí)亦發(fā)現(xiàn)日糧中添加蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物可顯著提高肉仔雞胸肌和腿肌中粗脂肪的含量，與對(duì)照組相比差異性顯著(P〈0.05)。3.2氨基酸的分析結(jié)果結(jié)果見(jiàn)表5。表5肉雞肌肉中氨基酸成分的分析結(jié)果(％)試驗(yàn)組對(duì)照組'貧基酸胸肌腿肌胸肌腿肌天冬氨酸M1.763跳01511.7511±0細(xì)51.6823±0.01121雄0士0扁1絲氨酸0.9711±0.01900.9640±0.00950,8550±0.01410.8200±0.0236谷氨酸M2.9505±0.02942.9323±0.01662.8530±0.02912.7597±0.0363甘氨酸"1.1530±0.06011.2177±0.0490U113士0.0367U310土0.0105組氨酸0.8671±0.02110.8597±0.00250細(xì)3±0.00710.9303±0細(xì)9精氨酸1.6451±0.07501.5890±0.01201.5903士0細(xì)11.5527±0.0421蘇氨酸A1.0614±0.02321.0870±0.04331.0167±0.01150.9460±0.0223丙氨酸"1,4131±012941.3607±0.02081.2813±0.01861.2880±0.0142脯氨酸0.8884±0.01300.8850士0.0n00.7833±0.01250.7410±0.0201半胱氨酸2.1220±0.02910.1993±0.00970.2081±0.00560.2147±0.0159酪氨酸0.8391±0.02210.8380±0.03160.8157±0.01250細(xì)7±0.0050纈氨酸A1.1464±0.06241.313±0.03701.017]±0.00361.0023±0.0116蛋氨酸A0.6644土0.02H0.6587士0.02310.6153±0.01160.6107±0.0142賴氨酸Al麓4土0扁21.6593±0.04501.6520±0.06991,6873±0.0400異亮氨酸A1.2031±0.11541.0200±0細(xì)41.0610±0.02740.9507±0.0383亮氨酸A1.8651±0.02941.8210土0.0H51.8167士0廁91.7207±0.0125苯丙氨酸A1.0112±0.01710.8367±0.03150.9726±5.10460.9273±0.0241色氨酸40.2741±0.01010.2507±0.01630.2483±0.02020.2273±0.0081TAA23.6396±0.2646a21.2413±0.134020.5403±0.083819.9203±0.2285EAA8.7277±0.1686b8.3113±0.09348.1784±0.06397.8438±0.0223FAA7.2797±0.1655b7.2613±0.06486.9213±0.04486.7552±0.0398注EAA，表示人體必需氨基酸；TAA，表示總氨基酸含量；FAA，表示風(fēng)味氨基酸；A表示人體必需氨基酸；AA表示風(fēng)味氨基酸；a:與對(duì)照組比，PO.05;b:與對(duì)照組比，P<0.01。表5表明，蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物不僅能顯著提高肉雞肌肉中氨基酸的總含量(P<0.05)，并且能顯著提高土雜商品肉雞胸肌和腿肌中人體必需氨基酸和風(fēng)味氨基酸的含量(p〈o.oi;i，與對(duì)照組相比胸肌中人體必需氨基酸和風(fēng)味氨基酸含量分別提高6,72%和5.13%，腿肌中含量分別提高5.96°/。和7.49%。3.3肉雞肌肉中無(wú)機(jī)量元素含量的分析結(jié)果結(jié)果見(jiàn)表6表6肉雞肌肉中無(wú)機(jī)微量元素的含量(mg/kg)試驗(yàn)組對(duì)照組元素組成胸肌腿肌胸肌腿肌鈣(Ca)122.55±3.59a139.41士2.47U8.44士3,01138.64±1.69銅(Cu)1.31±0.161.23±0.24126±0.231.27±0,15鐵(Fe)26.16±1.1031.23±1.9725.24±0.5831.12±0.56鋅(Zn)47.36±0.9845.58±1.3446.19±0.5245.83±1.02曬(Se)0.25±0.040.26±0.050.26±0.060.27±0.05錳(Mn)1.71土0.31.68±0.121.64±0.01.58±0.05注a:與對(duì)照組比較，P<0.05從表6可以看出蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物能明顯提高肉雞胸肌中鈣的含量(P<0.05)，但不影響肉雞肌肉中其它微量無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)元素的含量(PX).05)。實(shí)施例六蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物對(duì)豬肌肉品質(zhì)的影響1、材料試驗(yàn)用豬由合肥華杰畜禽養(yǎng)殖公司提供，豬是120日齡杜-長(zhǎng)-大三元雜交商品代豬。以添喂蝙蝠蛾擬青霉培養(yǎng)物飼料添加劑組為試驗(yàn)組，添加量為0.25%;日糧中未添加蝙蝠蛾擬青霉添加劑喂養(yǎng)的豬為空白對(duì)照組。隨機(jī)從各組抽取公、母各5頭，經(jīng)放血屠宰去皮，隨即取新鮮胸肌、腿肌肉，凍存待分析。2、檢測(cè)方法2.1常規(guī)成分分析依據(jù)GB6435-86，測(cè)定水分；依據(jù)GB6438-86，測(cè)定灰分；依據(jù)GB6433-86，測(cè)定蛋白質(zhì)；依據(jù)GB6434-86，測(cè)定粗脂肪的含量。2.2氨基酸分析樣品在11CTC下鹽酸水解24h，用日立835-50型氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定其中17種氨基酸含量。另將樣品經(jīng)5mo1/LNaOH7K解，用島津RF-540型熒光光度計(jì)測(cè)定色氨酸的含量。2.3無(wú)機(jī)元素分析Fe、Mn采用原子吸收光譜法，參照GB/T12396-1990。Ca:原子吸收光譜法，參照GB/T12398-1990。Zn:原子吸收光譜法，參照GB/T5009.14-1996。Cu:原子吸收光譜法，參照GB/T5009.13-1996。Se:采用GB/Tl2399-1996的原子熒光法。2.4數(shù)據(jù)處理與分析12實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用DPS(V3.01)專(zhuān)業(yè)版數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。3、結(jié)果與分析3.1豬肌肉中一般營(yíng)養(yǎng)成分的分析結(jié)果，結(jié)果見(jiàn)表7表7豬肌肉中一般營(yíng)養(yǎng)成分的含量(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>由表7的結(jié)果可知，日糧中添加0.25%的蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物不影響商品豬肌肉中水分、灰分和粗蛋白的含量(PX).05)，但能顯著提高豬背最長(zhǎng)肌和半腱肌中粗脂肪的含量(P〈0.05)，粗脂肪含量分別提高61.28%和60.21%。3.2豬肌肉中氨基酸含量分析結(jié)果，見(jiàn)表8表8豬肌肉中氨基酸成分的分析結(jié)果(％)氨基酸STST天冬氨酸"1.,7098±0..03291.■7677±0.,02411.,6421±0.,05311,.7102±0.,0541絲氨酸0.,7429±0..03210.,7446±0.,01870.,7224±0.,01320,.7923±0.■0632谷氨酸^3.■0242±0,.04412,,9543±0..02762..7102土0.,0322,.7231±0..0123甘氨酸^0.,8721±0.,02270.,8764±0.,04110.,7243±0.,03450.,8512±0,.0671組氨酸0.,8123±0.,05410.,7632±0.,03190.671〗±0.0260.,799±0.,0515精氨酸1.,2732±0,■03761.,2659±0.,03411.,0433±0..03181',]546±0,,0431蘇氨酸A0..7923±0,.02640,.7598±0,.02370,.7143士0,.03190.7245±0.,0289丙氨酸"1,.0526±0.05410.9876±0..01320,.9523±0,.05490.9735±0.0674脯氨酸0,.4932±0.06420.4187±0,07610,.4933±0,.04780.4926±0.0326半胱氨酸0..1387±0.02140.1422±0.,01320,.1454±0.06710.1388±0.0132酪氨酸0.6923±0.03420.6873±0..06520,.6123±0,.07620.6432±0.0598纈氨酸A1.0389±0,.03280.9843±0.03980,.9131±0,.04310.9542±0..0554蛋氨酸40,.6098±0,,03990,.6293±0,.02630,.5234±0,.06310.5987±0,.0427賴氨酸41,.6213±0.04171,.4785±0,.03771.,2463±0,.07621,.6326±0.,0531異亮氨酸A0,,9834±0.06510,,9743±0,.03410.,9324±0,.05380,.8542士0.,0472亮氨酸A1..5213士0.04511,.5365±0,.02881..2632±0,.051]1.4137±0,.0328苯丙氨酸A1..0243±0.07611,.0135±0.03170,.8944±0,.03290.9323士0,.0732色氨酸A0.1789±0.01280.2317±0,.01210,.1455±0.031]0,1645±0,■0297TAA18.4026±0.7634a17.9841±0.443116.3493士0.512817.4741±0.4177EAA7.7702±0.2101a7.6079±0.18756.6326±0.16597.2747±0.1733FAA6.6587±0.1281a6.5860±0.55376.0289±0.14116.2580±0.1721注EAA，表示人體必需氨基酸；TAA，表示總氨基酸含量；FAA，表示風(fēng)味氨基酸；A表示人體必需氨基酸；AA表示風(fēng)味氨基酸；a:與對(duì)照組比較，P<0.05。表8的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物不僅能顯著提高豬背最長(zhǎng)肌肌肉中氨基酸的總含量(P〈0.05)，并且能顯著提高人體必需氨基酸和風(fēng)味氨基酸的含量(P<0.05)，與對(duì)照組相比背最長(zhǎng)肌中人體必需氨基酸和風(fēng)味氨基酸含量分別提高了17.15%和10.45%。試驗(yàn)組豬半腱肌中氨基酸總量、人體必需氨基酸和風(fēng)味氨基酸的含量雖比對(duì)照組相應(yīng)成分有所提高，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析差異均不顯著(P>0.05)。3.3豬肌肉中無(wú)機(jī)量元素含量的分析結(jié)果結(jié)果見(jiàn)表9表9豬肌肉中無(wú)機(jī)微量元素的含量(mg/kg)試驗(yàn)紹微量元素-鈣(Ca)422.75±8.59a427.41±6.42418.44±7.01431.64±9.69銅(Cu)1.45士(M61.43±0.121.36±0.111.47±0.15鐵(Fe)29.33±1.3931.03±1.9729.84±0.7831.12±0.79鋅(Zn)44.36±0.9245.58±1.2144.19±0.6245.23±1.52硒(Se)0.15±0.030.19±0.050.16±0.060.21±0,05猛(Mn)1.98±0.131.79±0.121.94±0.041.78±0.05注a:與對(duì)照組比較，P<0.05。從表9可以看出蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物能明顯提高豬背最長(zhǎng)肌肌肉中鈣的含量(P<0.05)，不影響商品豬肌肉中其它微量無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)元素的含量(PX).05)。實(shí)施例七蝙蝠峨擬青霉發(fā)酵物不同添加比例對(duì)肉雞生長(zhǎng)的影響1、材料與方法1.1試驗(yàn)動(dòng)物與分組于合肥正旺公司選擇1日齡增壽青腳麻雞3600只，公母比例各半，體重(40.2±1.5g)。經(jīng)觀察6h無(wú)異常，然后將其隨機(jī)分成6組，每組600只。1.2試驗(yàn)動(dòng)物日糧組成與營(yíng)養(yǎng)試驗(yàn)飼料原料玉米、大豆粕、小麥麩、菜籽粕、磷酸氫鈣符合國(guó)家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(GB/13078-2001)的要求。參照國(guó)家肉雞的詞養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)(NY/T33-1986)和NRC(1994)家禽飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計(jì)閂糧，正旺公司自行加工配置，蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物按照0。/。(對(duì)照組)，0.01%，0.05%，0.1%，0.5%和0.75%的比例添加到基礎(chǔ)日14糧(日糧中不添加任何藥物添加劑)中并攪拌混勻，經(jīng)測(cè)定變異系數(shù)小于8%。1.3肉雞飼養(yǎng)試驗(yàn)日期與管理所有試驗(yàn)雞均飼養(yǎng)于同一個(gè)雞舍內(nèi)，用塑料網(wǎng)分割成6個(gè)小區(qū)。由專(zhuān)人負(fù)責(zé)，地面平養(yǎng)，育雛期每平方米30只，育成期(48周齡)每平方米12只。用料桶人工飼喂，自由采食。用飲水器自由飲水。育雛第一周室溫控制在31°C~32°C，以后每周降低2~3°C，四周后保持在23~25°C。第一周24h光照，以后自然光照。定期進(jìn)行疫苗的免疫接種，試驗(yàn)期為56d。1.4免疫10日齡時(shí)，試驗(yàn)雞同時(shí)進(jìn)行新城疫疫苗(批號(hào)0510168)免疫，疫苗由乾元浩南京生物藥廠生產(chǎn)；禽流感疫苗(Hs亞型HI抗原)免疫，批號(hào)20060212，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院哈爾濱獸醫(yī)研究所提供。2、蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物不同添加比例對(duì)仔雞全期增重效果及飼料轉(zhuǎn)化效率的影響具體試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表10:表10蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物不同添加比例對(duì)仔雞生長(zhǎng)影響發(fā)酵物添加比例(％)初重(g/只)末重(g/只)曰增重(g/只)日均耗料(g/只)飼料轉(zhuǎn)化率(o/o)0%40.40±1.43950.91±154.2216.26±0.8450.91±2.953.23±0.170.0140.25±1.40974.33±120.7816.68±0.7250.21±2.563.01±0.150.0540.18±1.451029.70±121.3617.67±0.7450.12±2.132.84±0,150.139.92士1.45l"6.80±90.35a20.23±0.52a49.34±2.072.44±0.13a0.539.81±1.411293.09±89.75b22.38±0.63b48.77±1.902.18±0.12b0.7540.07±1.421310.71±92.81b22,69±0.59b49.12±1.892.16±0.14b注a:與對(duì)照組比較，P<0.05，b:與對(duì)照組比較，P<0.01。從表IO可以看出，基礎(chǔ)詞料中添加0.05-0.5%蝙蝠峨擬青霉發(fā)酵物可以顯著提高仔雞的日增重和飼料轉(zhuǎn)化率，促進(jìn)仔雞的生長(zhǎng)。而添加比例高于0.5%，不能進(jìn)一步提高仔雞的日增重。權(quán)利要求1、一種真菌發(fā)酵物飼料添加劑，其特征在于所述真菌發(fā)酵物是蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的飼料添加劑的制備工藝，其特征在于包括下述步驟(1)菌種制備將自冬蟲(chóng)夏草中分離的蝙蝠蛾擬青霉菌株經(jīng)離子束誘變后得到的高產(chǎn)菌株接種到專(zhuān)用斜面培養(yǎng)基中，24—26'C下培養(yǎng)7天，待產(chǎn)生大量的孢梗束后，得液體搖瓶菌種；所述專(zhuān)用斜面培養(yǎng)基配方為4%葡萄糖，1%馬鈴薯(煮汁后兩層紗布過(guò)濾)、1%蛋白胨，PH6.3;(2)搖瓶培養(yǎng)將所述步驟(1)中得到的液體搖瓶菌種接入裝有加入消泡劑的搖瓶種子培養(yǎng)基的三角瓶，24—26。C下，置于旋轉(zhuǎn)式搖床(170rpm)上振蕩培養(yǎng)72—120h，即得到可作為一級(jí)種子罐的液體種子；所述搖瓶種子培養(yǎng)基配方為4%葡萄糖，1%蛋白胨，PH6.0—7.0;(3)—級(jí)種子罐發(fā)酵種子罐內(nèi)加入液體培養(yǎng)基和消泡劑，滅菌冷卻后將所述步驟(2)中得到的液體種子接入培養(yǎng)，接種量5—10%，罐溫24-26°C，通氣量1:0.5(V/VTiiin)，罐壓4.9—7.5xl04Pa，經(jīng)36—72h通氣培養(yǎng)，菌種大量產(chǎn)孢達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，得到種子培養(yǎng)液；所述液體培養(yǎng)基配方為3.0%白砂糖，2.0%黃豆粉，0.1%KH2PO4;(4)發(fā)酵罐發(fā)酵發(fā)酵罐內(nèi)加入發(fā)酵用培養(yǎng)基和消泡劑，滅菌冷卻后，從一級(jí)種子罐內(nèi)將所述步驟(3)中得到的種子液接入發(fā)酵罐，接種量5—10%，通氣培養(yǎng)，罐溫24—26'C，攪拌轉(zhuǎn)速150r/m，通氣量l:0.4—0.5(V/V'min)，罐壓4.903xl04Pa，培養(yǎng)時(shí)間72-96h，得到用于固體發(fā)酵的發(fā)酵液；所述的發(fā)酵用培養(yǎng)基配方為3.0%白砂糖，2.0%黃豆粉，0.1%KH2PO4，0.1%MgSO4;(5)固體培養(yǎng)發(fā)酵固體發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至室溫，接入所述步驟(4)中得到的發(fā)酵液，保持培養(yǎng)基含水量為60-65%;接種后放置于淺盤(pán)，料厚2-3cm，在人工模擬環(huán)境培養(yǎng)室中，分期管理，0-12h，24-26°C，RH85%,13-72h，24-26°C,RH85%，并進(jìn)行通風(fēng)；73-168h，24-26。C,RH90。/。以上，通風(fēng)；待物料內(nèi)外均長(zhǎng)滿菌絲；所述的固體發(fā)酵培養(yǎng)基配方為60%玉米粉，35%豆粕，PH6.3—6.5;(6)烘干、粉碎、后處理將步驟5所得菌絲和培養(yǎng)基在55X:烘干，在無(wú)菌工作間進(jìn)行粉碎、過(guò)100目篩后進(jìn)行包裝，檢驗(yàn)，合格即得所述蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物飼料添加劑。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備工藝，其特征在于所述步驟(2)中500ml三角瓶裝200ml所述加入消泡劑的搖瓶種子培養(yǎng)基，接入二支試管的所述步驟(1)中得到的液體搖瓶菌種。4、根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備工藝，其特征在于步驟(3)和(4)所述的滅菌過(guò)程是指通入熱蒸汽加熱到12rC，13-15xlO"Pa壓力下，30min;步驟(5)所述的滅菌過(guò)程是指固體發(fā)酵培養(yǎng)基加入滅菌鍋，通入熱蒸汽加熱到12rC，13-15xl(^Pa壓力下，間歇式滅菌二次，每次lh。5、根據(jù)權(quán)利要求l所述的飼料添加劑在制備動(dòng)物飼料中的應(yīng)用，其特征在于所述動(dòng)物詞料中含有0.05~0.5%所述詞料添加劑。專(zhuān)利摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物飼料添加劑。分離自蟲(chóng)草的蝙蝠蛾擬青霉經(jīng)過(guò)離子束誘變得到的高產(chǎn)菌株經(jīng)過(guò)菌種制備、搖瓶培養(yǎng)、一級(jí)種子罐發(fā)酵、發(fā)酵罐發(fā)酵、固體培養(yǎng)發(fā)酵，將菌絲體連同培養(yǎng)基一起干燥、粉碎，即得到蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物。本發(fā)明還公開(kāi)了蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物飼料添加劑在制備動(dòng)物飼料中的應(yīng)用，即0.05~0.5％蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物添加到動(dòng)物飼料中。蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物飼料添加劑能夠提高動(dòng)物日增重，顯著促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，提高飼料轉(zhuǎn)化率，提高動(dòng)物生產(chǎn)性能和抗病能力，同時(shí)還能提升畜禽肉的品質(zhì)。本發(fā)明公開(kāi)的蝙蝠蛾擬青霉發(fā)酵物制備工藝流程簡(jiǎn)單，培養(yǎng)基配方簡(jiǎn)單、原料廉價(jià)易得。文檔編號(hào)A23K1/16GKCN101480226SQ200910114886公開(kāi)日2009年7月15日申請(qǐng)日期2009年1月23日發(fā)明者陳安徽申請(qǐng)人:熊忠輝導(dǎo)出引文BiBTeX,EndNote,RefMan